專利名稱：白藜蘆醇在制備預(yù)防和治療呼吸道合胞病毒感染的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及白藜蘆醇在制備預(yù)防和治療呼吸道合胞病毒感染 的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
呼吸道合胞病毒(Inspiratory syncytial virus, RSV)是世界范圍內(nèi)引起嬰幼 兒時期下呼吸道感染最常見和最重要的病毒病原，也是年幼兒童因呼吸道感染致病住院的 首要原因。1歲以內(nèi)嬰兒有70%曾經(jīng)感染呼吸道合胞病毒，到2歲時基本上所有嬰幼兒均有 呼吸道合胞病毒感染的病史。嬰幼兒時期呼吸道合胞病毒感染與兒童反復(fù)喘息和氣道高反 應(yīng)性密切相關(guān)，但其機制尚不完全清楚。目前，臨床上仍然沒有能夠預(yù)防呼吸道合胞病毒感 染的藥物，呼吸道合胞病毒感染后也無有效藥物治療。白藜蘆醇是一種多酚類化合物，唯一來源是植物。大約70多種植物都可以產(chǎn) 生這種物質(zhì)，用以抵御真菌和細菌等病原體攻擊。白藜蘆醇除了具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、 免疫調(diào)節(jié)的作用外，還具有抗病毒作用，但迄今為止，尚未見白藜蘆醇能夠抗呼吸道合胞病 毒的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供白藜蘆醇在制備治療呼吸道合胞病毒感染 的藥物中的應(yīng)用。為達到上述目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了白藜蘆醇在制備治療呼吸道合胞 病毒感染的藥物中的應(yīng)用。進一步，所述治療呼吸道合胞病毒感染的藥物為抑制呼吸道合胞病毒的藥物；
進一步，所述治療呼吸道合胞病毒感染的藥物為抗呼吸道合胞病毒感染引起的氣道炎 癥的藥物；
進一步，所述治療呼吸道合胞病毒感染的藥物為抗呼吸道合胞病毒感染引起的氣道高 反應(yīng)的藥物；
進一步，所述治療呼吸道合胞病毒感染的藥物的劑型為注射劑或氣霧劑。本發(fā)明的目的之二在于提供白藜蘆醇在制備預(yù)防呼吸道合胞病毒感染的藥物中 的應(yīng)用。為達到上述目的，在本發(fā)明的第二方面，提供了白藜蘆醇在制備預(yù)防呼吸道合胞 病毒感染的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果為體外實驗表明，白藜蘆醇對上皮樣喉癌細胞(Hep-2細胞) 和人氣道上皮細胞(9HTEo細胞)的毒性小，能使呼吸道合胞病毒的感染滴度明顯降低，還能 使呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的白介素-6 (IL-6)的分泌明顯降低；體內(nèi)實驗表明，白藜蘆醇作用 于呼吸道合胞病毒感染小鼠后，小鼠肺組織中呼吸道合胞病毒滴度降低了 62. 8% ；同時，白藜蘆醇可抑制呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道炎癥細胞產(chǎn)生，一定程度上減輕呼吸道合胞病毒 感染誘導(dǎo)的肺部炎癥；還能降低呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性；白藜蘆醇氣霧劑的 效果更佳；另外，白藜蘆醇對呼吸道合包病毒的預(yù)防作用效果佳，因此，白藜蘆醇制備預(yù)防 和治療呼吸道合胞病毒感染的藥物。


圖1為作用時間與呼吸道合胞病毒在Hep-2細胞中滴度線性分析圖2為9HTEo細胞在顯微鏡放大100倍下的照片；其中A為對照組；B為呼吸道合胞病 毒組；C為白藜蘆醇干預(yù)組；
圖3為作用時間與呼吸道合胞病毒在9HTEo細胞中滴度線性分析圖； 圖4為對照組、呼吸道合胞病毒組和白藜蘆醇干預(yù)組對呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)IL-6分泌 影響的柱狀分析圖5為呼吸道合胞病毒組和白藜蘆醇干預(yù)組的肺組織病毒滴度柱狀比較圖； 圖6為肺部病例組織切片圖；其中A和B為對照組；C和D為呼吸道合胞病毒組；E和 F為白藜蘆醇干預(yù)組；A、C和E的顯微鏡放大倍數(shù)為200倍，B、D和F的顯微鏡放大倍數(shù)為 400 倍；
圖7為肺組織炎癥病理評分分析圖8為對照組、呼吸道合胞病毒組和白藜蘆醇干預(yù)組在不同濃度乙酰甲膽堿的影響下 氣道阻力的線性比較圖9為白藜蘆醇霧化對RSV復(fù)制滴度影響，呼吸道合胞病毒組肺組織平均病毒滴度 3. 845X 104PFU/g ；白藜蘆醇干預(yù)組肺組織平均病毒滴度為0 . 68 7 5 X 104PFU/g,兩組間差異 具有顯著性；
圖10為白藜蘆醇霧化對RSV復(fù)制滴度影響(n=6，P=O. 0095)，呼吸道合胞病毒 組肺組織平均病毒滴度3 . 84 5X 104PFU/g;白藜蘆醇預(yù)防組肺組織平均病毒滴度為 1. 695X 104PFU/g，兩組間差異具有顯著性；
圖11為白藜蘆醇霧化對肺泡灌洗液細胞計數(shù)的影響(n=6，P<0. 001)，白藜蘆醇霧化呼 吸道合胞病毒感染的小鼠后，肺泡灌洗液細胞計數(shù)較呼吸道合胞病毒組明顯減少，兩組相 比有統(tǒng)計學(xué)差異；
圖12為白藜蘆醇預(yù)防用藥對肺泡灌洗液細胞計數(shù)的影響(n=6，P<0. 001)白藜蘆醇預(yù) 防組肺泡灌洗液細胞計數(shù)較呼吸道合胞病毒組明顯減少，兩組相比有顯著性差異；
圖13為白藜蘆醇霧化對氣道高反應(yīng)性影響(n=6，P<0. 05)，呼吸道合胞病毒感染后第5 天，小鼠氣道阻力明顯增高；白藜蘆醇霧化5天后，能降低呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道高反 應(yīng)性，氣道阻力值用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示；
圖14白藜蘆醇預(yù)防用藥對氣道高反應(yīng)性影響(ri=6，P<0. 05)，白藜蘆醇預(yù)防組較呼吸 道合胞病毒組氣道高反應(yīng)性明顯降低，氣道阻力值用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示。
具體實施例方式
以下將參照附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。
一、細胞實驗1實驗方法
1. 1常規(guī)培養(yǎng)H印-2和9HTEO細胞株。上述細胞的培養(yǎng)按現(xiàn)有技術(shù)的常規(guī)方法進行。1. 2 MTT法檢測H印-2細胞和9HTEo細胞的白藜蘆醇耐受濃度
96孔板培養(yǎng)單層ifep-2細胞和9HTEo細胞，1 X IO4/孔，吸棄培養(yǎng)基，用PBS液洗細胞 1次，用含有體積分數(shù)為10%的胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基將白藜蘆醇儲存液分別稀釋 成含有白藜蘆醇0、30、50、70、100、120 umol的工作液加入孔中，置溫度37°C、CO2氣體體積 分數(shù)為5%的孵箱中培養(yǎng)72小時，吸棄工作液，用PBS液洗細胞1次，每孔加入MTT工作液 20μ 1，繼續(xù)孵育4小時，吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔再加入二甲基亞砜150μ 1，振蕩10分鐘 使結(jié)晶物充分融解，用酶標(biāo)儀于波長570nm處檢測各孔吸光度值。1.3呼吸道合胞病毒感染H印-2細胞后，檢測適宜濃度白藜蘆醇對呼吸道合胞病 毒滴度的影響
將H印-2細胞用含有體積分數(shù)為10%的胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基以1 X IO5/孔接 種于M孔板，細胞貼壁后，用PBS液洗1次，將呼吸道合胞病毒以MOI=O. 1接種細胞，置溫 度37°C、0)2氣體體積分數(shù)為5%的孵箱中吸附2小時，每30分鐘輕輕晃動一次以使吸附均 勻，吸附結(jié)束后棄病毒液，另加病毒維持液0. 6ml/孔，置溫度37°C、CO2氣體體積分數(shù)為5% 的孵箱中培養(yǎng)4小時；分別設(shè)呼吸道合胞病毒組(不加入白藜蘆醇)和白藜蘆醇干預(yù)組(加 入白藜蘆醇100 umol)，培養(yǎng)至M小時，收集上清液0.細1/孔，_80°C凍存，補充新的病毒 維持液0. 4ml/孔，繼續(xù)培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)至48、72、96、120小時，重復(fù)上述操作，即收集上清 液并補充新的病毒維持液；最后用Quantum’ s Adeasy TCID50法檢測不同時間收集的上清 液中的病毒滴度。1.4呼吸道合胞病毒感染9HTEo細胞后，檢測適宜濃度白藜蘆醇對呼吸道合胞病 毒滴度的影響
將9HTEo細胞用含有體積分數(shù)為10%的胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基以1 X IO5/孔接 種于M孔板，細胞貼壁后，用PBS液洗1次，將呼吸道合胞病毒以MOI=O. 1接種細胞，置溫 度37°C、0)2氣體體積分數(shù)為5%的孵箱中吸附2小時，每30分鐘輕輕晃動一次以使吸附均 勻，吸附結(jié)束后棄病毒液，另加病毒維持液0. 6ml/孔，置溫度37°C、CO2氣體體積分數(shù)為5% 的孵箱中培養(yǎng)4小時；分別設(shè)呼吸道合胞病毒組(不加入白藜蘆醇)和白藜蘆醇干預(yù)組(加 入白藜蘆醇50 umol )，培養(yǎng)至M小時，收集上清液0. 4ml/孔，_80°C凍存，補充新的病毒維 持液0. 4ml/孔，繼續(xù)培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)至48、72、96、120小時，重復(fù)上述操作，即收集上清液 并補充新的病毒維持液；最后用Quantum’ s Adeasy TCID50法檢測不同時間收集的上清液 中的病毒滴度。1.5呼吸道合胞病毒感染9HTEo細胞后，檢測白藜蘆醇對上皮細胞炎癥因子分泌 的影響
將9HTEo細胞用含有體積分數(shù)為10%的胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基以1 X IO5/孔接 種于M孔板，12小時細胞貼壁后改用無血清RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)至M小時，以MOI=IO 接種呼吸道合胞病毒和MOCK細胞至每孔，置溫度37°C、0)2氣體體積分數(shù)為5%的孵箱中吸 附2小時，每30分鐘輕輕晃動一次以使吸附均勻，吸附結(jié)束后棄病毒液，加入無血清無抗生 素的RPMI 1640培養(yǎng)基0. 6ml/孔，置溫度37°C、0)2氣體體積分數(shù)為5%的孵箱中培養(yǎng)4小時；分別設(shè)呼吸道合胞病毒組(不加入白藜蘆醇)和白藜蘆醇干預(yù)組(加入白藜蘆醇至濃度 為50 μ g/ml )，置溫度37°C、0)2氣體體積分數(shù)為5%的孵箱中培養(yǎng)至呼吸道合胞病毒感染48 小時，收集上清液于離心管中，14，OOOrmp離心10分鐘，收集上清液，_80°C凍存，采用ELISA 法檢測白介素-8 (IL-8)和IL-6的水平。實驗結(jié)果
數(shù)據(jù)用χ 士s (均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差)表示，采用SPSS16. 0統(tǒng)計軟件，兩組間均數(shù)比較采用t
檢驗；多個樣本均數(shù)比較采用ANOVA分析，以SNK-q檢驗進行均數(shù)間多重比較；多個樣本率 的比較采用X2檢驗，以P<0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2. 1 Hep-2細胞和9HTEo細胞對不同濃度白藜蘆醇耐受情況
Hep-2細胞可耐受白藜蘆醇的最大劑量是100 mmol,9HTEo細胞可耐受白藜蘆醇的最 大劑量是50 mmolo2. 2呼吸道合胞病毒感染Hep-2細胞后，白藜蘆醇對呼吸道合胞病毒滴度的影響 5天呼吸道合胞病毒滴度變化結(jié)果為白藜蘆醇100 mmol組在呼吸道合胞病毒感染的
第2天和第3天，呼吸道合胞病毒感染滴度明顯低于呼吸道合胞病毒組(P<0. 05)，詳見圖 1。2. 3呼吸道合胞病毒感染9HTEo細胞后，白藜蘆醇對細胞病變和呼吸道合胞病毒 滴度的影響
呼吸道合胞病毒感染9HTEo細胞后，白藜蘆醇對細胞病變的影響，詳見圖2，白藜蘆醇 干預(yù)組無明顯合胞病變，而呼吸道合胞病毒組可見明顯病變。5天呼吸道合胞病毒滴度變化結(jié)果為白藜蘆醇50 mmol組在呼吸道合胞病毒感 染的第1、2、3天，呼吸道合胞病毒感染滴度明顯低于呼吸道合胞病毒組(P<0. 05)，詳見圖 3。2. 4呼吸道合胞病毒感染9HTEo細胞后，白藜蘆醇對呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)IL_6和 IL-8分泌的影響
呼吸道合胞病毒感染9HTEo細胞后，白藜蘆醇干預(yù)組的IL-6水平明顯低于呼吸道合胞 病毒組(P<0. 05)，詳見圖4。白藜蘆醇干預(yù)組的IL-8水平與呼吸道合胞病毒組無明顯差異。
二、動物實驗
1實驗方法
1.1實驗動物和處理
取6-8周齡的SPF級雌性BALB/c小鼠(購于重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心)，給予環(huán)磷 酰胺100mg/kg腹腔注射后，隨機分為對照組、呼吸道合胞病毒組和白藜蘆醇干預(yù)組；然后， 對照組正常飼養(yǎng)；呼吸道合胞病毒組和白藜蘆醇干預(yù)組在環(huán)磷酰胺注射后第5天，用體積 分數(shù)為10%的水合氯醛麻醉，呼吸道合胞病毒105PFU/ml滴鼻；白藜蘆醇干預(yù)組在呼吸道 合胞病毒滴鼻1小時后，給予白藜蘆醇30mg/kg腹腔注射，連續(xù)注射5天。1. 2肺組織呼吸道合胞病毒病毒滴度測定
取三組小鼠肺組織，按10ml/g加入組織平衡液，勻漿，離心，收集上清液，-80°C凍存， 空斑實驗檢測病毒滴度。
1.3肺泡灌洗液白細胞計數(shù)及分類
將三組小鼠脫頸處死，將預(yù)冷至4°C的PBS液注入肺，再通過氣管吸出，獲得肺泡灌洗 液1. 5ml ；將所得肺泡灌洗液離心，收集上清，-80°C凍存；同時，向細胞沉淀中加入PBS液 lml，行細胞計數(shù)，并做細胞涂片，瑞氏染色，進行細胞分類。1. 4肺病理組織檢測
取三組小鼠肺組織，用體積分數(shù)為10%的中性甲醛溶液固定M小時，脫水，石蠟包 埋，切片 5um，HE 染色，參照 Myou 的方法(Myou S, et al. Blockade of inflammation and airway hyperresponsiveness in immune-sensitized mice by dominant-negative phosphoinositide 3-kinase-TAT. J Exp Med. 2003，198: 1573- 1582)進行組織形態(tài)學(xué) 評分，用組織形態(tài)學(xué)評分表示肺部炎癥程度。1. 5全身體積描述記法檢測肺功能
三組小鼠于清醒狀態(tài)下，用全身體積描述器(emfoi，F(xiàn)rance)檢測氣道高反應(yīng)性，即小 鼠暴露于不同濃度(分別為0、3. 125、6. 25、12. 5、25、50 mg/ml)的乙酰甲膽堿溶液3分鐘， 休息2分鐘，放入體描箱進行檢測，用氣道阻力(Penh)代表氣道高反應(yīng)性。白藜蘆醇霧化劑的影響
SPF級雌性BALB/c小鼠，飼養(yǎng)2天后，給予環(huán)磷酰胺100mg/kg腹腔注射后的小鼠隨機 分為對照組、呼吸道合胞病毒組和白藜蘆醇干預(yù)組。呼吸道合胞病毒組在環(huán)磷酰胺注射后 第5天，10%水合氯醛麻醉，RSV105PFU/ml滴鼻；白藜蘆醇干預(yù)組在RSV滴鼻1小時后，給 予白藜蘆醇30mg/kg，霧化發(fā)生器霧化，每次30分鐘，連續(xù)霧化5天，取標(biāo)本檢測。分別檢測 肺泡灌洗液細胞計數(shù)，肺組織勻漿病毒滴度及氣道高反應(yīng)性。1.7白藜蘆醇注射液的預(yù)防作用
SPF級雌性BALB/c小鼠，飼養(yǎng)2天后，給予環(huán)磷酰胺100mg/kg腹腔注射后的小鼠 隨機分為對照組、呼吸道合胞病毒組和白藜蘆醇預(yù)防組。白藜蘆醇預(yù)防組在環(huán)磷酰胺注 射2小時后，給予白藜蘆醇腹腔注射30mg/kg，連續(xù)注射5天，5天后，10%水合氯醛麻醉， RSV105PFU/ml滴鼻，RSV感染后第5天取標(biāo)本檢測。分別檢測肺泡灌洗液細胞計數(shù)，肺組織 勻漿病毒滴度及氣道高反應(yīng)性。實驗結(jié)果
數(shù)據(jù)用χ 士s (均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差)表示，采用SPSS16. 0統(tǒng)計軟件，兩組間均數(shù)比較采用t
檢驗；多個樣本均數(shù)比較采用ANOVA分析，以SNK-q檢驗進行均數(shù)間多重比較；多個樣本率 的比較采用X2檢驗，以P<0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2.1白藜蘆醇對肺部病毒滴度的影響
白藜蘆醇干預(yù)組小鼠肺組織中呼吸道合胞病毒滴度與呼吸道合胞病毒組相比降低了 62. 8%，差異有顯著性，詳見圖5，提示白藜蘆醇能夠抑制呼吸道合胞病毒在肺組織的復(fù)制。2.2白藜蘆醇對肺泡灌洗液白細胞計數(shù)及分類的影響
呼吸道合胞病毒感染后引起大量淋巴細胞浸潤，呼吸道合胞病毒組的白細胞總數(shù)較對 照組明顯增多(P<0. 05)，淋巴細胞百分比較對照組增大(P<0. 01);白藜蘆醇干預(yù)后，白細胞 總數(shù)較對照組增多，但較呼吸道合胞病毒組明顯減少(P<0. 05)，淋巴細胞百分比較呼吸道 合胞病毒組降低了 37. 8% (P<0. 05 )，詳見表1，提示白藜蘆醇可抑制呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道炎癥細胞產(chǎn)生。 表1肺泡灌洗液白細胞計數(shù)(X106)及分類百分比(％)
a*表示對照組與呼吸道合胞病毒組間白細胞總數(shù)差異具有顯著性(n=8，P<0. 05) b*表示呼吸道合胞病毒組與白藜蘆醇干預(yù)組間白細胞總數(shù)差異具有顯著性(n=8， Ρ<0· 05)
c*表示白藜蘆醇干預(yù)組與對照組間白細胞總數(shù)差異具有顯著性(η=8，Ρ<0. 05) d**表示三組間白細胞分類百分比差異具有顯著性(n=8，P<0. 01) 2.3白藜蘆醇對肺組織炎癥變化影響
呼吸道合胞病毒感染后第5天，小鼠肺泡組織出現(xiàn)明顯充血、水腫、大量淋巴細胞浸 潤，毛細支氣管管壁增厚，管壁及管周可見大量淋巴細胞；白藜蘆醇干預(yù)5天后，小鼠肺部 炎癥明顯減輕，肺泡壁毛細支氣管壁變薄、充血減弱、炎癥細胞減少，詳見圖6。肺部組織評 分中，白藜蘆醇干預(yù)組與呼吸道合胞病毒組病理評分有顯著性差異，呼吸道合胞病毒組評 分為2. 208士0. 238，白藜蘆醇干預(yù)組評分為1. 09士0. 074，降低了 50. 6%，詳見圖7。上述結(jié) 果顯示，白藜蘆醇一定程度上能夠減輕呼吸道合胞病毒感染誘導(dǎo)的肺部炎癥。2.4白藜蘆醇對小鼠氣道高反應(yīng)性影響
呼吸道合胞病毒感染后第5天，檢測小鼠氣道高反應(yīng)。呼吸道合胞病毒組的氣道阻力 在乙酰甲膽堿濃度為3. 125 50mg/ml時均高于對照組(P<0. 05)，白藜蘆醇干預(yù)5天后，白 藜蘆醇干預(yù)組的氣道阻力與呼吸道合胞病毒組相比明顯降低(P<0. 05)，提示白藜蘆醇干預(yù) 后能夠降低呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性，詳見圖8。2.5白藜蘆醇霧化劑的影響
白藜蘆醇霧化呼吸道合胞病毒感染小鼠后，肺組織中呼吸道合胞病毒滴度明顯降低， 與呼吸道合胞病毒感染組相比其差異具有顯著性(圖9)，降低了 82. 1%。提示白藜蘆醇霧化 能夠抑制呼吸道合胞病毒在肺組織的復(fù)制。呼吸道合胞病毒感染后引起大量淋巴細胞浸潤，白細胞總數(shù)3. 475士0.231 X IO6 較對照組0. 720士0. 105X 106明顯增多；白藜蘆醇霧化后，白細胞總數(shù)0. 795士0. ^X IO6與 呼吸道合胞病毒感染組相比明顯減少(P<0. 001)(圖11)，減少了 77. 1%。結(jié)果提示，白藜蘆 醇霧化可抑制呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道炎癥細胞產(chǎn)生。呼吸道合胞病毒感染后第5天，檢測小鼠氣道高反應(yīng)。呼吸道合胞病毒感染組的 氣道阻力在乙酰甲膽堿(3. 125mg/ml-50mg/ml)濃度均高于對照組(n=6，P<0. 05)，白藜蘆 醇霧化5天后，在乙酰甲膽堿(12. 5mg/m廣50mg/ml)白藜蘆醇霧化組氣道阻力與呼吸道合 胞病毒感染組相比明顯降低(n=6，P<0.05)(圖13)。實驗結(jié)果提示白藜蘆醇霧化能夠降低 呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性。2. 6白藜蘆醇注射液的預(yù)防作用
呼吸道合胞病毒感染小鼠前給予白藜蘆醇后，肺組織中呼吸道合胞病毒滴度明顯降 低，與呼吸道合胞病毒感染組相比其差異具有顯著性(圖10)，降低了 55. 9%。提示白藜蘆醇
8預(yù)防用藥能夠抑制呼吸道合胞病毒在肺組織的復(fù)制。呼吸道合胞病毒感染后引起大量淋巴細胞浸潤，白細胞總數(shù)3. 475士0.231 X IO6 較對照組0. 720士0. 105X IO6明顯增多；白藜蘆醇預(yù)防組，白細胞總數(shù)1.96士0. 0.31 X IO6 與呼吸道合胞病毒感染組相比明顯減少(P<0. 001)(圖12)，減少了 43.6%。結(jié)果提示，白藜 蘆醇預(yù)防用藥可減少呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道炎癥細胞產(chǎn)生。呼吸道合胞病毒感染后第5天，檢測小鼠氣道高反應(yīng)。呼吸道合胞病毒感染組的 氣道阻力在乙酰甲膽堿(3. 125mg/m廣50mg/ml)濃度均高于對照組(n=6，P<0. 05)，白藜蘆 醇預(yù)防用藥5天后，在乙酰甲膽堿(12. 5mg/m廣50mg/ml)白藜蘆醇預(yù)防組氣道阻力與呼吸 道合胞病毒感染組相比明顯降低(n=6，P<0.05)(圖14)。實驗結(jié)果提示白藜蘆醇預(yù)防用藥 能夠降低呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性。基于上述實驗結(jié)果白藜蘆醇在體外可以明顯降低呼吸道合胞病毒感染滴度和呼 吸道合胞病毒誘導(dǎo)的IL-6的分泌；在體內(nèi)可以顯著降低呼吸道合胞病毒感染小鼠的肺組 織中呼吸道合胞病毒的滴度即能夠抑制呼吸道合胞病毒的復(fù)制，可以減輕呼吸道合胞病毒 感染誘導(dǎo)的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性；得出如下結(jié)論白藜蘆醇具有抗呼吸道合胞病毒的 作用，可以用于制備治療呼吸道合胞病毒感染的藥物。上述實施例中的動物實驗是以腹腔注射形式給藥，提示以白藜蘆醇為活性成分的 治療呼吸道合胞病毒感染的藥物可以制成注射劑，通過注射途徑給藥。同時，根據(jù)治療呼吸 系統(tǒng)疾病藥物的常規(guī)制藥技術(shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉，以白藜蘆醇為活性成分的治療呼吸 道合胞病毒感染的藥物也可以制成其他制劑。上述實施例中的動物實驗是以小鼠為實驗對象，白藜蘆醇的給藥劑量為每日每公 斤體重30mg，根據(jù)實驗結(jié)果并結(jié)合理論分析，推測白藜蘆醇的給藥劑量在每日每公斤體重 廣50mg內(nèi)對呼吸道合胞病毒感染均有效。最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過參 照本發(fā)明的優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了描述，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可 以在形式上和細節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明 的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.白藜蘆醇在制備治療呼吸道合胞病毒感染的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述白藜蘆醇的應(yīng)用，其特征在于所述治療呼吸道合胞病毒感染 的藥物為抑制呼吸道合胞病毒的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述白藜蘆醇的應(yīng)用，其特征在于所述治療呼吸道合胞病毒感染 的藥物為抗呼吸道合胞病毒感染引起的氣道炎癥的藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述白藜蘆醇的應(yīng)用，其特征在于所述治療呼吸道合胞病毒感染 的藥物為抗呼吸道合胞病毒感染引起的氣道高反應(yīng)的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的白藜蘆醇的應(yīng)用，其特征在于所述治療呼吸道合 胞病毒感染的藥物的劑型為注射劑或氣霧劑。
6.白藜蘆醇在制備預(yù)防呼吸道合胞病毒感染的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及白藜蘆醇在制備預(yù)防和治療呼吸道合胞病毒感染藥物中的應(yīng)用，白藜蘆醇在體外可以明顯降低呼吸道合胞病毒的感染滴度和呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的IL-6的分泌；在體內(nèi)可以顯著降低呼吸道合胞病毒感染小鼠的肺組織中呼吸道合胞病毒的滴度，并對呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)有較好的治療作用。
文檔編號A61P11/00GK102133210SQ20111003107
公開日2011年7月27日 申請日期2011年1月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月28日
發(fā)明者劉恩梅, 符州, 臧娜, 謝曉虹, 鄧昱 申請人:重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院