專利名稱：一種補腎養(yǎng)血方的提取方法及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種補腎養(yǎng)血方的提取方法，以及含有該提取物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
補腎養(yǎng)血方來源于《部頒中藥第五冊》標準號為WS3-B-0948-91的補腎養(yǎng)血丸，由 制何首烏、當歸、黑豆、牛膝(鹽制)、茯苓、菟絲子、補骨脂(鹽制)、枸杞子組成。具有補 肝腎，益精血的功效。其中制何首烏補肝益腎，澀精固氣；枸杞子、菟絲子均入肝腎，填精補 腎，固精止遺；當歸補血養(yǎng)肝，牛膝強健筋骨，黑豆具有補肝腎的作用，以上諸藥共同達到滋 補肝腎之陰的效果，藥性較平。補骨脂可溫補腎陽，此取之于“善補陰者，則陽中求陰”，使 陰得陽升而泉源不竭；茯苓淡滲以泄?jié)幔搜a中有瀉，諸藥配伍，共奏補肝益腎，澀精固本之 功，故可廣泛應用于身體虛弱，血氣不足，遺精，須發(fā)早白等癥狀，廣泛用于臨床中肝腎不足 的各種疾患。原劑型為蜜丸及水丸，蜜丸及水丸為全粉入藥，服用量分別為9g、6g，服用量大，且 服用不便，目前尚無針對補腎養(yǎng)血方進行提取方法的研究，因此該藥物劑型陳舊，病人的順 應性差，隨著社會的發(fā)展，人們生活水平的提高，劑型改造勢在必行。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對補腎養(yǎng)血處方，提供一種提取方法，將得到的提取物加入 輔料，制成新劑型。補腎養(yǎng)血方見《部頒中藥第五冊》標準號為WS3-B-0948-91的補腎養(yǎng)血丸，由制何 首烏80g、當歸20g、黑豆40g、牛膝(鹽制)20g、茯苓20g、菟絲子20g、補骨脂(鹽制)10g、 枸杞子20g組成，原制法為以上八味，粉碎成細粉，過蹄，混勻，每100粉末加煉蜜110 120g制成大蜜丸，或加煉蜜40 50g與適量的水泛丸，包衣，干燥，即得。本發(fā)明的提取工藝如下按照補腎養(yǎng)血丸的重量比稱取制何首烏、當歸、黑豆、牛 膝(鹽制)、茯苓、菟絲子、補骨脂(鹽制)、枸杞子，加乙醇提取，合并煎液，濾過，濾液回收 乙醇得清膏；醇提后的藥渣加水煎煮兩次濾過，濾液回收得清膏。合并兩個清膏，濃縮，得提 取物。其中醇提采用5 10倍量40 95%乙醇提取2 3次，每次0. 5 3小時，合并 煎液，濾過，濾液回收乙醇得清膏。醇提優(yōu)選采用加8倍量70%乙醇提取3次，每次1. 5小時，合并煎液，濾過，濾液回
收乙醇得清膏。醇提后的藥渣加5 15倍量水煎煮2次，每次0. 5 2小時，濾過，濾液回收得清 膏。合并兩個清膏，濃縮，得提取物備用。
醇提后的藥渣優(yōu)選加10倍量水煎煮2次，每次1小時，濾液回收得清膏。合并兩 次清膏，濃縮，得提取物。本發(fā)明的另一個目的在于提供含有上述提取物的藥物組合物。該藥物組合物含 有有效量的補腎養(yǎng)血提取物以及藥物學上可以接受的載體和賦形劑，該組合物可以是口服 液、合劑、糖漿劑、膏滋、硬膠囊、軟膠囊、片劑、顆粒劑、微丸。含有補腎養(yǎng)血提取物的軟膠囊由藥液和囊殼兩部分制成。藥液主要由補腎養(yǎng)血提取物、稀釋劑、助懸劑及潤濕劑按重量比為1 0.6 1 0. 01 0. 08 0 0. 06 制成。稀釋劑選自大豆油、聚乙二醇400。稀釋劑優(yōu)選大豆油。助懸劑選自蜂蠟、單硬脂酸甘油酯。助懸劑優(yōu)選蜂蠟。潤濕劑選自卵磷脂。囊殼材料由明膠、甘油、水和防腐劑組成。選擇明膠、甘油、水的重量百分比為明 膠甘油水=1 0. 3 0. 7 0. 8 1。軟膠囊的具體制備方法稀釋劑、助懸劑及潤濕劑加熱，80°C使混溶，放冷，將篩后的補腎養(yǎng)血干粉逐漸加 入混合油中，攪拌混勻，用膠體磨研磨，使其形成均勻的混懸液，壓制成軟膠囊。本發(fā)明提取工藝的優(yōu)點1、制劑的質(zhì)量標準中增加了有效成分二苯乙烯苷的含量控制指標，增加了當歸、 補骨脂、制何首烏三味藥材的薄層鑒別，與原丸劑相比，本品的質(zhì)量更加可控；2、本品進行提取后在不降低藥效的基礎上減少了服用量，使患者服用、攜帶更加 方便。藥效學試驗顯示1、補腎養(yǎng)血提取物能明顯增強其免疫功能；2、補腎養(yǎng)血提取物能加速RBC和Hb的恢復；3、補腎養(yǎng)血提取物能明顯改善其腎功能。
具體實施例方式本發(fā)明由下列實施例來說明，但不應當構(gòu)成對本發(fā)明的限制。補腎養(yǎng)血方見部頒中藥第五冊標準號為WS3-B-0948-91的補腎養(yǎng)血丸，即由制何 首烏80g、當歸20g、黑豆40g、牛膝(鹽制)20g、茯苓20g、菟絲子20g、補骨脂(鹽制)10g、 枸杞子20g組成。實施例一補腎養(yǎng)血提取工藝稱取補腎養(yǎng)血組方，加8倍量70%乙醇提取3次，每次1. 5小時，合并煎液，濾過， 濾液回收乙醇得清膏；藥渣加10倍量水煎煮兩次，每次1小時，濾過，濾液回收得清膏。合 并兩個清膏，濃縮，得提取物。實施例二 補腎養(yǎng)血提取工藝稱取補腎養(yǎng)血組方，加8倍量80%乙醇提取3次，每次1小時，合并煎液，濾過，濾 液回收乙醇得清膏；藥渣加8倍量水煎煮兩次，每次0.5小時，濾過，濾液回收得清膏。合并兩個清膏，濃縮，得提取物。實施例三補腎養(yǎng)血提取工藝稱取補腎養(yǎng)血組方，加6倍量75%乙醇提取2次，每次1. 5小時，合并煎液，濾過， 濾液回收乙醇得清膏；藥渣加5倍量水煎煮兩次，每次1小時，濾過，濾液回收得清膏。合并 兩個清膏，濃縮，得提取物。實施例四補腎養(yǎng)血提取工藝稱取補腎養(yǎng)血組方，加6倍量70%乙醇提取2次，每次1小時，合并煎液，濾過，濾 液回收乙醇得清膏；藥渣加10倍量水煎煮兩次，每次1小時，濾過，濾液回收得清膏。合并 兩個清膏，濃縮，得提取物。實施例五補腎養(yǎng)血軟膠囊采用實施例一制備補腎養(yǎng)血提取物(按出膏率25 % )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血
軟膠囊組方如下組方重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉100大豆油60卵磷脂2蜂蠟2總重量1641、制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，每天服用2 3 次，每次3粒。2、含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙 腈-水(18 82)為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4 ‘-四羥基二苯乙 烯-2-0- β -D-葡萄糖苷峰計算應不低于3000。(2)對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2_0_β -D-葡萄 糖苷對照品約15mg，置50ml量瓶中，加50%乙醇適量，超聲使溶解，加50%乙醇稀釋至刻 度，搖勻；精密量取5ml至50ml量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得(每Iml 中含2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-3-D-葡萄糖苷約30 μ g)。(3)供試品溶液的制備取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取約0. 15g，精密稱 定，置50ml量瓶中，加50%乙醇適量，超聲處理15min，放冷至室溫，加50%乙醇稀釋至刻 度，搖勻，濾過，即得。6、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測 定，按外標法以峰面積計算，即得。7、本品含制何首烏以2，3，5，4 ‘-四羥基二苯乙烯-2_0_ β-D-葡萄糖苷 (CltlH12N5O4,簡稱為二苯乙烯苷)計，每粒或者每片不得少于2. Img0檢測結(jié)果每粒軟膠囊中含二苯乙烯苷4. Img0實施例六補腎養(yǎng)血軟膠囊采用實施例一制備補腎養(yǎng)血提取物(出膏率為25% )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血 軟膠囊組方如下
組方重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉100大豆油100卵磷脂6蜂蠟6總重量212制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用實施例五的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 3mgo實施例七補腎養(yǎng)血軟膠囊采用實施例一制備補腎養(yǎng)血提取物(出膏率為25% )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血
軟膠囊處方如下組方重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉100大豆油80卵磷脂2蜂蠟3總重量185制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用實施例五的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 2mgo實施例八補腎養(yǎng)血軟膠囊采用實施例一制備補腎養(yǎng)血提取物(出膏率為25% )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血
軟膠囊組方如下組方重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉100大豆油80卵磷脂3蜂蠟4總重量187制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用實施例5的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷3. Smg0實施例九補腎養(yǎng)血軟膠囊采用實施例一制備補腎養(yǎng)血提取物(出膏率為25% )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血
軟膠囊組方如下組方重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉100聚乙二醇80
總重量185制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用實施例五的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 3mgo實施例十補腎養(yǎng)血軟膠囊采用實施例一制備補腎養(yǎng)血提取物(出膏率為25% )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血
軟膠囊組方如下組方重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉100大豆油80單硬脂酸甘油酯1. 8總重量181制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用實施例五的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 2mgo實施例十一補腎養(yǎng)血軟膠囊采用實施例二制備補腎養(yǎng)血提取物(出膏率為25% )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血
軟膠囊組方如下組方重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉100大豆油90單硬脂酸甘油酯4總重量194制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用實施例五的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 2mgo實施例十二 補腎養(yǎng)血軟膠囊采用實施例二制備補腎養(yǎng)血提取物(出膏率為25% )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血
軟膠囊組方如下組方重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉100大豆油100單硬脂酸甘油酯12總重量212制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用實施例五的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. Img0實施例十三補腎養(yǎng)血膠囊采用實施例三制備補腎養(yǎng)血提取物(出膏率為25% )，干燥得干粉備用，補腎養(yǎng)血軟膠囊組方如下
組方
重量(g)補腎養(yǎng)血提取物干粉大豆油單硬脂酸甘油酯總重量
100 80制備方法按上述組方混合均勻，壓制成軟膠囊。制成300粒，服用方法同實施例五。采用實施例五的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 5。實施例十四補腎養(yǎng)血膠囊采用實施例一制備的提取物(出膏率為25% )，干燥取100g，灌裝膠囊，每粒膠囊 裝量為0. 33g。采用實施例五的含量測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷3. 6mg。實施例十五補腎養(yǎng)血片采用實施例一制備的提取物(出膏率為25% )，干燥，得干粉備用。補腎養(yǎng)血干粉IOOg淀粉20g制備方法按上述組方混合均勻，用95%的乙醇制軟材，制粒，干燥，壓制成片，規(guī) 格0. 3g/片，每次服用四粒。采用實施例五的含量測定方法，本品每片含二苯乙烯苷4. 5mg。實施例十六補腎養(yǎng)血顆粒劑采用實施例一制備的提取物，干燥，得干燥粉備用。補腎養(yǎng)血干粉IOOg蔗糖150g糊精50g混合均勻，用75%的乙醇制軟材，制粒，干燥，分裝成2g/袋，每天服用2 3次，每
次服用一袋。采用實施例五的測定方法，本品每粒含二苯乙烯苷12. 9mg。以實施例一的提取物為基本藥物，與陽性藥物補腎養(yǎng)血丸相比較，用多種動物模 型對補腎養(yǎng)血軟膠囊的增強免疫、益精血、增強腎功能等作用進行藥效試驗，具體方法及其 結(jié)果如下實施例十七對正常小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響試驗藥物實施例一提取的提取物干燥得到的干粉，每Ig干粉相當于4g生藥(簡 稱補腎養(yǎng)血)。陽性藥物補腎養(yǎng)血丸，每Ig丸重相當于0.69g生藥。洛陽君山制藥有限 公司生產(chǎn)。上述藥物臨用前以0.5% CMC(羧甲基纖維素)配制成所需濃度的藥液，供動物 灌胃給藥用。試驗動物ICR小鼠，體重19. 2士0. 9(18 21) g，雌雄各半，北京維通利華實驗動 物技術(shù)有限公司提供。試驗方法ICR小鼠50只，按性別、體重隨機分為5組，每組10只。對照組灌胃給予0. 5% CMC，受試藥組灌胃給予補腎養(yǎng)血，劑量分別為2. 5、5、10g生藥/kg，陽性藥組灌胃 給予補腎養(yǎng)血丸，劑量為5g生藥/kg，給藥體積均為20ml/kg，每日一次，連續(xù)14天。末次給藥后24h剪尾取血涂片，瑞氏染色，油鏡下計數(shù)100個淋巴細胞中淋巴母細 胞和過度態(tài)細胞數(shù)，計算淋巴細胞轉(zhuǎn)換率，觀察藥物對免疫細胞的影響。試驗結(jié)果與對照組比較，給予補腎養(yǎng)血后2. 5、5、IOg生藥/kgl4天后，小鼠的淋 巴母細胞分別增加了 17. 0% (P > 0. 05),45.9% (P < 0.01),55.9% (P < 0.01)；過渡態(tài) 細胞分別增加了 5. 5% (P>0. 05),18.8% (P < 0. 05),24.3% (P < 0. 01)。補腎養(yǎng)血丸陽 性藥組，其淋巴母細胞和過渡態(tài)細胞分別增加了 40. 6% (P < 0. 01)和16. 3% (P < 0. 05)。 等劑量的補腎養(yǎng)血與丸劑作用相當。結(jié)果見表1。表1 補腎養(yǎng)血對正常小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響(X±s，n = 10)
組別劑量(g/kg)淋巴母細胞(％)過渡態(tài)細胞(％)對照一22.9±6.6132.5±5·54補腎養(yǎng)血2.526.8±6·1834.3±6.18補腎養(yǎng)血533.4 士 7.09Μ38.6±5.48終補腎養(yǎng)血1035.7±7.2嚴40·4±5·44@補腎養(yǎng)血丸532.2±6.46狄37.8±5.55χ注與對照組比較※P < 0. 05，※吁< 0. 01 ；等劑量補腎養(yǎng)血與丸劑比較P > 0. 05。試驗結(jié)果表明補腎養(yǎng)血可增強小鼠細胞免疫功能。實施例十八對小鼠溶血素(IgM)的影響試驗藥物同實施例十七。試驗動物ICR小鼠，體重19. 5士 1. 1(18 22) g，雌雄各半，北京維通利華實驗動 物技術(shù)有限公司提供。試驗方法ICR小鼠60只，按性別、體重隨機分為6組，每組10只。正常對照組及 免疫對照組灌胃給予0. 5% CMC,受試藥組灌胃給予補腎養(yǎng)血，劑量分別為2. 5、5、10g生藥 /kg,陽性藥組灌胃給予補腎養(yǎng)血丸，劑量為5g生藥/kg ；給藥體積均為20ml/kg，每日一次， 連續(xù)給藥14天。試驗的第8天，除正常對照組外，其它各組小鼠分別腹腔注射5%雞血紅細 胞生理鹽水混懸液0. 2ml/只，進行致免。免疫后第7天，末次給藥后lh，所有各組均摘眼球取血約0. 5ml，離心，取血清用生 理鹽水稀釋100倍，取上述稀釋血清Iml與5%雞紅細胞懸液0. 5ml混勻，冰浴)中加 入10%補體0. 5ml，370°C恒溫水浴箱中保溫30min后，冰水浴中終止反應，離心，取上清液 于722分光光度計540nm處比色(以不加血清的空白管調(diào)零)，測吸光度(OD)，觀察藥物對 體液免疫的影響。試驗結(jié)果給予腹腔注射5%雞血紅細胞生理鹽水混懸液0. 2ml后，第七天，免疫 對照組的OD值明顯增加。給予補腎養(yǎng)血2.5、5、10g生藥/kg，與免疫對照組相比，OD值分 別增加了 9. 7% (P>0. 05),17.4% (P < 0.01),20. 1% (P < 0. 01)。補腎養(yǎng)血丸組，其 OD 值增加了 15. 3% (P <0.05)。等劑量的補腎養(yǎng)血與丸劑作用相當。結(jié)果見表2。表2 補腎養(yǎng)血對小鼠溶血素生成的影響(I±s，n = 10)
權(quán)利要求
1.一種補腎養(yǎng)血方的提取方法，按照《部頒中藥第五冊》標準號為WS3-B-0948-91的 補腎養(yǎng)血丸處方量的重量比稱取制何首烏、當歸、黑豆、牛膝(鹽制)、茯苓、菟絲子、補骨脂 (鹽制)、枸杞子，其特征在于加乙醇提取，合并煎液，濾過，濾液回收乙醇，得清膏；醇提后 的藥渣加水煎煮兩次濾過，濾液回收得清膏，合并兩個清膏，濃縮，得提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的補腎養(yǎng)血方的提取方法，其特征在于醇提采用5 10倍量 40 95%乙醇提取2 3次，每次0. 5 3小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的補腎養(yǎng)血方的提取方法，其特征在醇提采用加8倍量70%乙 醇提取3次，每次1.5小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的補腎養(yǎng)血方的提取方法，其特征在于醇提后的藥渣加5 15 倍量水煎煮2次，每次0. 5 2小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的補腎養(yǎng)血方的提取方法，其特征在于醇提后的藥渣加10倍量 水煎煮2次，每次1小時。
6.一種含有權(quán)利要求1所述的補腎養(yǎng)血方提取物的藥物組合物，其特征是含有有效量 的補腎養(yǎng)血提取物以及藥物學上可以接受的載體和賦形劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的含有補腎養(yǎng)血方提取物的藥物組合物，其特征是口服液、合 劑、糖漿劑、膏滋、硬膠囊、軟膠囊、片劑、顆粒劑、微丸。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的含有補腎養(yǎng)血方提取物的藥物組合物，其特征是軟膠囊， 由藥液和囊殼兩部分構(gòu)成，藥液由補腎養(yǎng)血提取物、稀釋劑、助懸劑及潤濕劑按重量比為 1 0.6 1.0 0.01 0.08 0 0.06 制成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種補腎養(yǎng)血方的提取方法，以及含有該提取物的藥物組合物。該藥物組合物含有有效量的補腎養(yǎng)血提取物以及藥物學上可以接受的載體和賦形劑，該組合物可以是口服液、合劑、糖漿劑、膏滋、硬膠囊、軟膠囊、片劑、顆粒劑、微丸。
文檔編號A61K36/815GK102085273SQ20111002302
公開日2011年6月8日 申請日期2006年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月30日
發(fā)明者劉海麗, 劉翠艷, 張宏武, 梁敏, 湛福春, 申東民 申請人:石藥集團中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司