專利名稱：預(yù)防或治療中風(fēng)之醫(yī)藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明關(guān)于預(yù)防或治療中風(fēng)的醫(yī)藥組合物，特別是關(guān)于以樟芝 (Antrodiacamphorata)作為活性成分的醫(yī)藥組合物。
背景技術(shù)：
中風(fēng)為腦部血液供應(yīng)異常所導(dǎo)致的腦部功能快速發(fā)展喪失。醫(yī)學(xué)上又稱為腦血管意外(cerebrovascular accident ；CVA)，起因于腦部的血液供應(yīng)受到破壞，使得腦局部細(xì)胞無法獲得足夠的養(yǎng)分和氧氣，造成神經(jīng)的機(jī)能受損。中風(fēng)可分為出血性中風(fēng)(hemorrhage stroke)及缺血性中風(fēng)(ischemia stroke)。出血性中風(fēng)來自于腦內(nèi)出血，通常死亡率較高。缺血性中風(fēng)起因于腦血栓及腦栓塞造成的腦局部缺血，死亡率通常較低，但容易導(dǎo)致神經(jīng)行為能力方面的損害。中風(fēng)的危險(xiǎn)因子包括年齡、高血壓、中風(fēng)病史、短暫性缺血心臟病、糖尿病、高膽固醇、抽煙及心房纖維顫動(dòng)等，其中以高血壓為高危險(xiǎn)因子。因此，目前預(yù)防再發(fā)性中風(fēng)及治療的藥劑，通常為血栓溶解劑(thrombolysis)、抗血小板劑(例如aspirine, dipyridamole)、抗凝集劑(anticoagulants)、降血壓藥物、斯達(dá)汀類(statins)等。本發(fā)明人有鑒于上述之藥物所具有的副作用，積極尋找生物毒性低、副作用少、且具有保護(hù)中風(fēng)后腦部神經(jīng)損傷的潛力之替代藥物，進(jìn)而完成本案發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種預(yù)防或治療中風(fēng)之醫(yī)藥組合物，包括以樟芝 (Antrodiacamphorata)作為活性成分。本發(fā)明再提供一種樟芝(Antrodia camphorata)在制備預(yù)防或治療中風(fēng)之藥物的用途。本發(fā)明之具體實(shí)施詳細(xì)說明如下，然而以下的實(shí)施例僅用于進(jìn)一步揭露本發(fā)明之技術(shù)內(nèi)容，不應(yīng)藉以限制本案的發(fā)明范疇。


圖1顯示本案一實(shí)施例中在引發(fā)缺血性中風(fēng)(MCA0手術(shù))前1小時(shí)施用樟芝材料的預(yù)防模式，并在該手術(shù)后1、2及M小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)行為評(píng)估分析。圖2顯示本案一實(shí)施例中在引發(fā)缺血性中風(fēng)(MCA0手術(shù))后0. 5小時(shí)施用樟芝材料的治療模式，并在該手術(shù)后1、2及M小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)行為評(píng)估分析。圖3顯示本案一實(shí)施例之預(yù)防模式中，各對(duì)照組及試驗(yàn)組在該手術(shù)后1、2及M小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)行為評(píng)估分析。圖4顯示本案一實(shí)施例之治療模式中，各對(duì)照組及試驗(yàn)組在該手術(shù)后1、2及M小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)行為評(píng)估分析。圖5A顯示本案一實(shí)施例之預(yù)防模式中，各對(duì)照組及試驗(yàn)組的腦部梗塞部位及梗塞體積之百分率，腦部梗塞分析區(qū)域?yàn)榇竽X自前端起至15mm的范圍。圖5B顯示本案一實(shí)施例之預(yù)防模式中，各對(duì)照組及試驗(yàn)組的腦部總梗塞體積 (% )，腦部梗塞分析區(qū)域?yàn)榇竽X自前端起至15mm的范圍。圖6A顯示本案之一實(shí)施例之治療模式中，各對(duì)照組及試驗(yàn)組的腦部梗塞部位及梗塞體積之百分率，腦部梗塞分析區(qū)域?yàn)榇竽X自前端起至15mm的范圍。圖6B顯示本案之一實(shí)施例之治療模式中，各對(duì)照組及試驗(yàn)組的腦部總梗塞體積 (%)，腦部梗塞分析區(qū)域?yàn)榇竽X自前端起至15mm的范圍。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明之活性成分，樟芝(Antrodia camphorata)，包括子實(shí)體、菌絲體、或其組合，可事先經(jīng)過干燥、研磨等步驟，使該子實(shí)體及/或菌絲體形成適合作為醫(yī)藥品之劑型。樟芝的來源沒有特別限定，可使用此領(lǐng)域中公知的栽培法或培養(yǎng)法所獲得。例如， 野生型的樟芝子實(shí)體、人工栽培的樟芝子實(shí)體、或以培養(yǎng)液酸酵的菌絲體。野生型的樟芝子實(shí)體來自以其唯一宿主-牛樟樹(CinnamomumKanehirai Hay(Lauraceae)),在自然環(huán)境中生成。但由于牛樟樹屬于保育類植物，數(shù)量稀少，因此野生型的樟芝子實(shí)體相對(duì)地難以取得。以人工栽培的樟芝子實(shí)體包括椴木栽培法、太空包栽培法及固態(tài)深層栽培法。椴木栽培法以牛樟樹或其他樹種椴木為營(yíng)養(yǎng)來源，太空包栽培法使用木屑培養(yǎng)，而固態(tài)深層栽培法使用木粉加洋菜膠作為營(yíng)養(yǎng)來源。人工栽培系將人工菌種或菌絲體植入后，經(jīng)適當(dāng)?shù)臏囟?、濕度調(diào)控，栽培出樟芝子實(shí)體?；蛘?，也可使用液態(tài)培養(yǎng)基，例如US 6，355，475B1記載使用酵母菌萃取物、亞磷酸鉀、硫酸鎂水合物及果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖或玉米淀粉作為碳源，培養(yǎng)產(chǎn)生樟芝的菌絲體。本發(fā)明之一實(shí)施例中，將干燥后的樟芝子實(shí)體或菌絲體經(jīng)研磨后，溶于極性溶劑中。從細(xì)胞毒性及簡(jiǎn)化制程的觀點(diǎn)，本發(fā)明之一實(shí)施例系將樟芝子實(shí)體或菌絲體粉末溶于水中。已知樟芝子實(shí)體可藉由不同的溶劑分離出脂肪酸、木質(zhì)素類、苯衍生物、倍半蔽類(sesquiterpenes)、三蔽類(triterpenoids)、固酉享類等成分(Chen C. C. , etal., Neuroprotective diterpenes from the fruiting body of Antrodia camphorate,J. Nat. Prod. 2006,69,p. 689-691.)。而且已有多篇研究指出，樟芝的菌絲體對(duì)LLC腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性(Nakamura N. et al. ,Five New Maleic and SuccinicAcid Derivatives from the Mycelium of Antrodia camphorata and TheirCytotoxic Effects on LLC Tumor Cell Line. J. Nat. Prod. (2004)67，p. 46-48.)，以及樟芝的子實(shí)體具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化劑、保護(hù)月干臟等功效(Chen C. C. , et al. , Neuroprotective diterpenes from the fruiting body of Antrodia camphorate, J. Nat. Prod. 2006,69, p. 689-691.) 野生及固態(tài)培養(yǎng)樟芝，透過水及甲醇萃取產(chǎn)物，推測(cè)主要含有的三萜類化合物具有抑制血管收縮素轉(zhuǎn)化酶 (angiotensinconverting enzyme)的活性，但其抑制50%所需濃度極高，分別為0. 312mg/ ml、0. 176mg/kg ；其萃取物經(jīng)口服大鼠可降低天生高血壓大鼠的血壓，但不影響一般大鼠的 iflji (Der-Zen Liu et al. ,Antihypertensive activities of a solid-stateculture of Taiwanofungus camphoratus(Chang-chih)in spontaneouslyhypertensive rats. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2007, 71, p. M-30)。但是至今未有關(guān)于樟芝與中風(fēng)的預(yù)防及治療之研究問世。再者，本發(fā)明以樟芝子實(shí)體及/或菌絲體整體作為活性成分，不局限于樟芝中的單一化合物，以達(dá)到抑制中風(fēng)后的神經(jīng)行為損傷及腦部梗塞體積。本案所述之“中風(fēng)”，包括出血性中風(fēng)及缺血性中風(fēng)。本發(fā)明之較佳實(shí)施例中，對(duì)于缺血性中風(fēng)所引起的神經(jīng)行為損傷及腦梗塞體積，具有良好的減緩效果。特別是，在缺血性中風(fēng)發(fā)病之前(預(yù)防)及發(fā)病之后(治療)，施用本發(fā)明之醫(yī)藥組合物，對(duì)于神經(jīng)行為能力的損傷及腦梗塞體積，皆能獲得明顯的減緩。本發(fā)明之活性成分的使用劑量，可根據(jù)患者體重、年齡、生理狀況、劑型、給藥方式、給藥流程(regimen)等條件，依據(jù)此領(lǐng)域中通常之知識(shí)適當(dāng)調(diào)配。由于樟芝(Antrodia camphorata)為習(xí)知的中藥藥材及保健食品，目前雖無正式的劑量規(guī)范，但在健康食品的動(dòng)物安全性試驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)中，均無顯示口服毒性及致畸胎性。本案之較佳實(shí)施例施用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每公斤IOOOmg lOOmg，更佳為500mg。又本案之醫(yī)藥組合物的施用方式，較佳為口服施用，但不限于此。本案之醫(yī)藥組合物可進(jìn)一步包括醫(yī)藥容許載體，例如生理食鹽水、植物油、藥學(xué)上使用之乳化劑、懸浮劑、界面活性劑、安定劑、香味劑、賦形劑、載體、或防腐劑等，根據(jù)一般例行的制藥實(shí)施所要求的單位用量及型態(tài)進(jìn)行混和，進(jìn)行制劑化。以下將進(jìn)一步以實(shí)施例具體說明本案發(fā)明，然本案不限于下列實(shí)施例所實(shí)施之范圍。[實(shí)施例1]試驗(yàn)材料樟芝材料的選取，包括(1)以太空包栽培的子實(shí)體(銾春生物科技)(以下以“AI-01”表示)；(2)以固態(tài)發(fā)酵的菌絲體(柏榮實(shí)業(yè)有限公司)(以下以“AI-02”表示)；(3)以液態(tài)發(fā)酵的菌絲體(善笙生物科技)(以下以“AI-03”表示)；及(4)以椴木栽培之子實(shí)體(亞新生物科技)(以下以“AI-05”表示)。上述材料皆經(jīng)過核糖體基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS;Internal TranscribedSpacer) 定序、分析，確認(rèn)皆為樟芝(Antrodia camphorata)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為7周齡的雄性SD大鼠，購自樂斯科生物科技公司，此試驗(yàn)使用的大鼠經(jīng)過馴化、檢疫1周。本品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物已有豐富的基礎(chǔ)參考資料與數(shù)據(jù)，可適用于缺血性中風(fēng)評(píng)估試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼育管理飼育環(huán)境實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于工業(yè)研究院生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物站，飼養(yǎng)區(qū)之光照時(shí)間自動(dòng)控制為12小時(shí)亮、12小時(shí)暗，室溫23 士 2°C、相對(duì)濕度40-70%。動(dòng)物可自由取得充分之食物及飲水。在檢疫及試驗(yàn)期間分別由本院獸醫(yī)師及試驗(yàn)人員每日進(jìn)行臨床癥狀觀察并紀(jì)錄，以確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康狀況。動(dòng)物觀察試驗(yàn)期間每日進(jìn)行臨床觀察，并記錄動(dòng)物是否有其他臨床癥狀或死亡。 例假日亦照常進(jìn)行臨床癥狀觀察。發(fā)現(xiàn)死亡及所有異常癥狀與程度分別記錄在動(dòng)物臨床癥狀觀察紀(jì)錄表。死亡動(dòng)物亦得進(jìn)行剖檢，并找出可能致死原因。
動(dòng)物分組及個(gè)體識(shí)別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物馴化1周后經(jīng)由該院獸醫(yī)師判斷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康狀況良好后，稱重后以S 型分組。3只為1個(gè)飼育籠飼養(yǎng)，以耳標(biāo)號(hào)碼區(qū)分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體，貼上Cage卡標(biāo)示籠號(hào)、品系、周齡、動(dòng)物編號(hào)、試驗(yàn)編號(hào)、試驗(yàn)組別、入室日期及試驗(yàn)期間。缺血性中風(fēng)動(dòng)物模式(MCAO)試驗(yàn)缺血性中風(fēng)的動(dòng)物模式根據(jù) Dittmar，MS.，et al.，The Role of ECAtransection in the development of masticatory lesions in the MCAO filamentmodel, Experimental Neurology, (2005) 195,p. 372-38.記載之方法實(shí)施。具體地說，受試動(dòng)物以 5%的化0打111^1^在乂0/02(70% /30% )中的氣體麻醉，沿頭皮中線切開，將單絲尼龍線 (前端覆蓋硅膠)，經(jīng)由右外頸動(dòng)脈(external carotidartery ；ECA)插入，沿著右內(nèi)頸動(dòng)脈 (internal carotid artery ；ICA) 一直穿至腦部威利氏環(huán)(the circle of Willis)部分， 造成右中大腦動(dòng)脈阻塞，經(jīng)過一個(gè)小時(shí)的缺血后，再將單絲尼龍線移除，使右側(cè)腦部缺血部位達(dá)到血液的再灌流(!^perfusion)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組將受試動(dòng)物以6只為一組，每組分別進(jìn)行如下列的實(shí)驗(yàn)步驟(i)預(yù)防模式使每組受試動(dòng)物于實(shí)施缺血性中風(fēng)動(dòng)物模式(MCAO)之前1小時(shí)， 分別施用上列樟芝材料AI-01、AI-02、AI-03、AI-05各500mg/kg(圖1)。(ii)治療模式使每組受試動(dòng)物于實(shí)施缺血性中風(fēng)動(dòng)物模式(MCAO)之后0. 5小時(shí)，分別施用上列樟芝材料AI-02、AI-03各500mg/kg(圖2)。上述預(yù)防模式及治療模式中，另包括不進(jìn)行MCAO手術(shù)、不施用樟芝材料的空白對(duì)照組(sham)，及進(jìn)行MCAO手術(shù)、以水代替樟芝材料施用受試動(dòng)物的溶劑對(duì)照組。神經(jīng)行為評(píng)估分析神經(jīng)性行為評(píng)估分別于各組受試動(dòng)物施行MCAO手術(shù)后的1、2及M小時(shí)對(duì)大鼠進(jìn)行測(cè)試，并根據(jù)下述狀態(tài)進(jìn)行分級(jí)(score)。此評(píng)估分析的目的是用來評(píng)估大鼠大腦神經(jīng)缺損的嚴(yán)重程度。將大鼠從尾巴提起使其懸空距地面約20至30公分，觀察大鼠前肢伸展的情形，并依據(jù)大鼠行為表現(xiàn)進(jìn)行大腦神經(jīng)缺損的嚴(yán)重程度評(píng)分，共分為四級(jí)第0級(jí)大鼠前肢能夠均衡伸展向地面，沒有其他神經(jīng)缺損的情形出現(xiàn)，為正常的大鼠。第1級(jí)大鼠前肢往大腦受損區(qū)域的對(duì)側(cè)收縮。第2級(jí)將大鼠置于地上并施以側(cè)向推力，大鼠對(duì)大腦受損區(qū)域同側(cè)推力的抵抗力下降。第3級(jí)使大鼠自由活動(dòng)，大鼠持續(xù)向受損大腦區(qū)域?qū)?cè)繞圈，無法直行。第4級(jí)大鼠因?yàn)閲?yán)重的神經(jīng)損傷，四肢呈現(xiàn)無力癱瘓狀或有癲癇現(xiàn)象。預(yù)防模式及治療模式之結(jié)果分別如下表1、表2、圖3、圖4所示。表1、表2、圖3、 圖4所示之?dāng)?shù)據(jù)，以平均值士標(biāo)準(zhǔn)差(S.E.)表示，采用t-test比較各組與溶劑對(duì)照組之間，是否存在差異性。ρ < 0. 05表示該試驗(yàn)組與溶劑對(duì)照組之間具有統(tǒng)計(jì)上的顯著差異。[表1]預(yù)防模式中受試動(dòng)物在MCAO手術(shù)之后的1、2及M小時(shí)的神經(jīng)行為評(píng)估平均值±標(biāo)>]I 差(S.E.)組名MCAO 后 1 hrMCAO 后 2 hrMCAO 后 24 hr
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防或治療中風(fēng)之醫(yī)藥組合物，包括以樟芝(Antrodia camphorata)作為活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中該樟芝包括子實(shí)體、菌絲體、或其組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中該樟芝包括野生型及人工栽培的樟芝。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的醫(yī)藥組合物，其中該人工栽培包括椴木栽培、太空包栽培、固態(tài)培養(yǎng)、或液態(tài)培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4項(xiàng)任一所述的醫(yī)藥組合物，還包括一醫(yī)藥容許載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4項(xiàng)任一所述的醫(yī)藥組合物，其中該中風(fēng)包括缺血性中風(fēng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4項(xiàng)任一所述的醫(yī)藥組合物，其中該樟芝的有效量為施用個(gè)體每公斤體重IOOOmg lOOmg。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4項(xiàng)任一所述的醫(yī)藥組合物，其為口服施用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的醫(yī)藥組合物，其中該施用為發(fā)生中風(fēng)前的預(yù)防性施用。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的醫(yī)藥組合物，其中該施用為發(fā)生中風(fēng)后的治療性施用。
11.一種樟芝(Antrodia camphorata)在制備預(yù)防或治療中風(fēng)之藥物的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其中該樟芝包括野生型及人工栽培的樟芝。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其中該人工栽培包括椴木栽培、太空包栽培、固態(tài)培養(yǎng)、或液態(tài)培養(yǎng)。
14.根據(jù)權(quán)利要求11-13項(xiàng)任一所述的用途，其中該中風(fēng)包括缺血性中風(fēng)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種預(yù)防或治療中風(fēng)之醫(yī)藥組合物，包括以樟芝(Antrodiacamphorata)作為活性成分，以及一種樟芝(Antrodia camphorata)在制備預(yù)防或治療中風(fēng)之藥物的用途。
文檔編號(hào)A61K36/07GK102552336SQ201110003749
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月21日
發(fā)明者林孟男, 石英珠 申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人工業(yè)技術(shù)研究院