專利名稱：白介素-22在預防和/或治療多器官功能障礙綜合癥(mods)中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及白介素-22(IL-22)的醫(yī)學用途。
背景技術(shù)：
多器官功能障礙綜合癥(MODS)，曾被稱為多器官衰竭(MOF)，是急性病患者的器官功能發(fā)生改變使得沒有醫(yī)療介入體內(nèi)平衡就無法維持。目前已經(jīng)充分證實，全身炎癥反應綜合癥6 會導致敗血癥或重度敗血癥并最終導致MODS。MODS通常起因于不受控制的炎癥反應，該炎癥反應是因注射、損傷(事故或者外科手術(shù))、灌注不足和/或代謝亢進而引發(fā)。不受控制的炎癥反應會導致SIRS或敗血癥。SIRS是一種影響全身的炎癥狀態(tài)。它是與全身炎癥、器官功能障礙、以及器官衰竭相關(guān)聯(lián)的若干狀況之一。SIRS是細胞因子風暴的一個亞類，在該細胞因子風暴(中)存在對各種細胞因子的非正常調(diào)控。SIRS的成因可以被分為感染性的和非感染性的。SIRS也與敗血癥密切相關(guān)。當SIRS起因于感染時，它被認為是敗血癥。SIRS的非感染性成因包括外傷、燒傷、胰腺炎、局部缺血以及出血。敗血癥是一種以全身感染狀態(tài)為特征的嚴重的醫(yī)學狀況。敗血癥可導致敗血性休克，多器官功能障礙綜合癥和死亡。SIRS和敗血癥都可以最終發(fā)展為MODS。MODS的內(nèi)在機制尚未被完全了解。目前沒有藥劑可以逆轉(zhuǎn)已經(jīng)確定的器官衰竭。 因此，治療局限于支持性護理。M0DS、M0F或敗血癥的預防和治療對于處理因車禍導致的傷害、燒傷、心臟病以及嚴重感染疾病的急救醫(yī)療服務是相當重要的。因此，對于患者來說，迫切需要對有效藥物的開發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種MODS、MOF或敗血癥的治療組合物及方法。因此，本發(fā)明一方面提供了白介素-22 (IL-2》在制備預防和/或治療M0DS、M0F、 敗血癥、或肝臟衰竭的組合物中的用途。另一方面，本發(fā)明提供了一種預防或治療個體的M0DS、M0F、敗血癥、或肝功能衰竭的方法，該方法包括施用藥學有效劑量的IL-22。另一方面，本發(fā)明涉及IL-22在制備預防和治療MODS、MOF、敗血癥、或肝臟衰竭的藥劑中的用途。MODS、MOF或敗血癥可由以下原因所導致，其中包括外傷(如交通事故)、燒傷、心臟病、以及嚴重感染性疾病。在各方面，本發(fā)明的IL-22包括但不限于哺乳動物IL-22和重組的哺乳動物 IL-22。在一優(yōu)選例中，IL-22為人IL-22。


圖1顯示了鼠白介素-22的cDNA序列。圖2顯示了人白介素-22的cDNA序列。
圖3顯示了鼠白介素-22的氨基酸序列。圖4顯示了人白介素-22的氨基酸序列。圖5顯示了 IL-22提高了 LPS誘導敗血性休克的小鼠的動物存活率。圖6顯示了 IL-22保護大鼠因LPS誘導的惡病質(zhì)引起的多器官衰竭。圖7顯示了小鼠中IL-22保護動物免于因LPS/feilN誘導的急性肝衰竭而死亡。優(yōu)選實施例的具體描述實施例1人和鼠IL-22基因的克隆人IL-22基因的克隆人外周血液單核細胞用抗人⑶3mAb刺激，并培養(yǎng)Mh。用超離心法提取總RNA，使用dT引物合成cDNA。人IL-22基因使用有義引物(5’_GCA GAA TCT TCA GAA CAG GTT C-3，)和反義引物(5，-GGC ATC TAA TTG TTATTT CTA G-3，)進行 PCR 擴增。擴增的DNA被克隆入大腸桿菌(E.coli)表達載體中。小鼠IL-22基因的克隆對C57BL/6雌性小鼠注射脂多糖(LPS) (5mg/kg, sc)，20h 后獲取脾臟，提取總RNA，使用dT引物合成cDNA。使用有義引物(5，-CTCTCA CTT ATC AAC TGT TGA C-3，)和反義引物(5，-GAT GAT GGA CGT TAG CTT CTCAC-3，)對鼠 IL-22 基因進行PCR擴增。擴增的DNA被克隆入大腸桿菌(E.coli)表達載體pET21(+)中。通過DNA測序?qū)θ薎L-22和鼠IL-22進行確證，如圖1和圖2所示。實施例2人IL-22和鼠IL-22的基因表達使用大腸桿菌菌株BL21(+)來表達重組蛋白。大腸桿菌細胞在高壓下勻漿破碎。離心得到IL-22包涵體，包涵體用緩沖液(Tris-HCl 5OmM，NaCl IOOmM, EDTA ImM, DTT ImM，和脫氧膽酸鈉0. 5% )充分洗滌。包涵體溶解在8M尿素，50mM Mes, IOmM EDTA 和 0. ImM DTT (pH6. 5)中。包涵體在 IOOmM Tris-HCl, 2mM EDTA，0. 5M L-精氨酸，ImM 還原型谷胱甘肽和0. ImM氧化型谷胱甘肽(pH 8)中復性4次，20h。將混合物進行濃縮并使用 Superdex75 (Amersham)柱層析法純化混合物。蛋白質(zhì)用 20mM Tris-HCl, 50mM NaCl (pH 7) 進行洗脫。IL-22的純度用SDS-PAGE測定(> 95% )，如圖3和圖4所示。IL-22蛋白分裝后保存于-80°C。實施例3IL-22對小鼠內(nèi)毒素誘導的敗血癥的保護作用6-8周齡的雌性Balb/c小鼠用生理鹽水配制成1. Omg/mL的脂多糖(LPS，來源于馬流產(chǎn)沙氏桿菌，L-5886，Sigma)處理，每只小鼠腹腔注射(i. p. )0. 2mLLPS溶液(10mg/kg 劑量)。動物分為不同處理的組，并持續(xù)七天監(jiān)測生存情況。LPS的單次劑量> 12.0mg/kg 時，可導致100%動物在48-72小時死亡。LPS單次劑量為10mg/kg時，導致第七天20-30% 動物存活。對小鼠的處理從每日皮下注射劑量為100ug/kg和500ug/kg的重組鼠IL-22開始。對照小鼠用溶劑(0.5% BSA/生理鹽水)處理。結(jié)果如圖5所示。對照小鼠(溶劑組， η = 10)在第七天時存活率為20%。用100ug/kg和500ug/kg的IL-22處理，導致存活率顯著提高。這些結(jié)果顯示，在LPS誘導的敗血癥休克模型中，IL-22有效地保護了小鼠免于死亡。實施例4IL-22對大鼠內(nèi)毒素誘導的多器官衰竭的保護作用多器官衰竭的動物模型，通過給6周齡的雄性Wister大鼠每日注射內(nèi)毒素 (LPS-E-coli ； 10mg/kg/天，Difco)建立。動物分為不同處理的組(n = 8)。重組小鼠IL-22以每日100、300和1000ug/kg/天的劑量皮下給藥，持續(xù)7天。對照動物僅用溶劑(0.5% BSA PBS, pH7. 0)注射。7天處理結(jié)束時，測定血清蛋白和白蛋白水平。結(jié)果如圖6所示。對照組中，總蛋白的血清水平和白蛋白下降了，表明這些大鼠患有惡病質(zhì)。用rmIL-22處理的動物，血液化學參數(shù)明顯改善。這些數(shù)據(jù)顯示，IL-22在防護由內(nèi)毒素誘導的惡病質(zhì)引起的大鼠多器官衰竭中是有效的。實施例5IL-22對小鼠中LPS/feilN誘導的急性肝臟衰竭的防護作用脂多糖(LPS,100ng/mL，Sigma，貨號L2630)和 D-氨基半乳糖(D-GalN, 130mg/ mL，Sigma，貨號G1639)配制于無熱源的鹽水溶液中。6_8周齡、雌性BALB/c小鼠腹腔內(nèi)注射0. 2mL含有0. ImL LPS和0. ImL D-GalN的溶液。將LPS/feilN注射入小鼠導致急性肝臟衰竭，證據(jù)為8小時時血清中肝臟酶的迅速上升(與對照組相比，>20倍)，包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高大于20倍和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)升高大于40倍。受到LPS/felN的攻擊后的 24小時時，少于20%的小鼠可存活。對小鼠的處理從每日皮下注射劑量為100ug/kg和300ug/kg的重組鼠IL-22開始。對照組用溶劑(0.5% BSA/生理鹽水)處理。結(jié)果如圖7所示。對照組小鼠(溶劑， η = 10) 16小時存活率為12.5%. 100ug/kg、300ug/kg的IL-22處理，結(jié)果存活率分別為 37. 5%,62. 5% (η = 10)。這些結(jié)果顯示，IL-22有效地保護了小鼠免于LPS/feilN誘導的主要由急性肝臟衰竭所導致的死亡。
權(quán)利要求
1.一種預防或治療個體的多器官功能障礙綜合癥的方法，其特征在于，包括施用藥學有效劑量的IL-22。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述IL-22提高所述的患多器官功能障礙綜合癥個體的血清總蛋白質(zhì)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述IL-22提高所述患多器官功能障礙綜合癥個體的血清白蛋白。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述IL-22是哺乳動物IL-22。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述IL-22是重組的哺乳動物IL-22。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述IL-22的藥學有效劑量是每天在 100-1000微克/千克體重。
7.一種預防或治療個體全身炎癥反應綜合癥的方法，其特征在于，包括施用藥學有效劑量的IL-22。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述IL-22提高所述個體的存活率。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述IL-22是哺乳動物的IL-22。
10.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述IL-22是重組的哺乳動物IL-22。
11.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述IL-22的藥學有效劑量是每天在 100-500微克/千克體重。
12.一種預防或治療個體肝臟衰竭的方法，其特征在于，包括施用藥學有效劑量的 IL-22。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述IL-22降低所述個體血清的AST和 ALT水平。
14.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述IL-22是哺乳動物IL-22。
15.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述IL-22是重組的哺乳動物IL-22。
16.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述IL-22的藥學有效劑量是每天在 100-300微克/千克體重。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用一種包括白介素-22(IL-22)作為有效成分的藥劑，用于預防和/或治療多器官功能障礙綜合癥(MODS)或多器官衰竭(MOF)。該發(fā)明可適用于預防或治療從敗血癥、敗血性休克、肝臟衰竭，到多器官功能障礙綜合癥的疾病。本發(fā)明尤其對緊急醫(yī)療服務有用，用于治療由車禍、燒傷、熱擊(heat attacks)、超高細胞因子血癥或嚴重傳染性疾病所導致的損傷。
文檔編號A61K38/20GK102348463SQ201080010768
公開日2012年2月8日 申請日期2010年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月12日
發(fā)明者孫琪, 黃予良, 黃智華 申請人:健能隆醫(yī)藥技術(shù)(上海)有限公司