專利名稱：治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明關于一種治療或減緩發(fā)炎性腸病(IBD)的醫(yī)藥組合物，特別是關于以柴胡 (Bupleurum)作為有效成分治療或減緩發(fā)炎性腸病(IBD)的醫(yī)藥組合物。
背景技術：
目前醫(yī)界對于發(fā)炎性腸病(inflammatory bowel disease ;IBD)的治療藥物可分為四大類(1)免疫抑制劑，例如azathioprine、cyclosporine、類固醇等；(2)疾病治療藥物，例如 sulfsalazine 及 5-氨基水楊酸(5-aminosalicylic acid ；5-ASA) ； (3)生物制劑(biological agent)，以抑制體內特異性的發(fā)炎反應物質而達到治療效果，例如 infliximab及remicade;及(4)抗腹瀉用藥。然而，這些藥物對于發(fā)炎性腸病的治療效果皆不優(yōu)良，而且有產生其他副作用的風險。目前亦有抑制腫瘤壞死因子(TNF-α)的新一代類風濕性關節(jié)炎藥物，用于治療發(fā)炎性腸病，例如etanerc印t、adalimumab等。新一代的類風濕性關節(jié)炎藥物雖具有藥效快、療效顯著、免疫耐受性佳的優(yōu)點，但是價格昂貴、需要靜脈注射、可能引起免疫反應、及有效病人的比例低等的因素，在臨床使用上受相當限制。本發(fā)明人基于上述課題，從常用的中草藥中，積極尋求副作用小、可治療或減緩發(fā)炎性腸病的藥物。柴胡(Bupleurum)自古即列為「神農本草經」上品藥用植物，為「傷寒論」少陽病之主藥，能解熱、鎮(zhèn)痛、解毒、消炎，主治胸脅苦滿、口苦咽干、往來寒熱、黃疸、與肝炎等。已知柴胡的利用主要在根部，可分離出含有皂苷(saikosaponin)、龍吉甙元 (longispinogenin)、固醇、脂肪油、類黃醇及糖類，其中以皂苷為主要成份。柴胡目前是肝炎治療生藥中積極開發(fā)的對象，然而，尚未有柴胡應用于治療發(fā)炎性腸病的研究或文獻問世。本發(fā)明人等研究特定的柴胡萃取方式，進一步確認柴胡萃取物與發(fā)炎性腸病的關系，研發(fā)出新穎治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物及方法。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供一種治療或減緩發(fā)炎性腸病(IBD)的醫(yī)藥組合物，包括-柴胡 (Bupleurum)作為有效成分。本發(fā)明還提供柴胡在制備治療或減緩發(fā)炎性腸病之藥物的用途。


圖1顯示小鼠腸浸出液中TNF- α的含量，(A)顯示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注射小鼠大腸的控制組；(B)顯示以TNBS誘發(fā)小鼠腸炎的載體處理組；(C)顯示經誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服100mg/kg實施例1萃取的阿爾泰柴胡萃取物之實驗組；及(D)顯示經誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正對照組。圖2顯示小鼠腸浸出液中IL-6的含量，㈧顯示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注射小鼠大腸的控制組；(B)顯示溶于50%乙醇的TNBS誘發(fā)小鼠腸炎的載體處理組；(C) 顯示經誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服100mg/kg實施例1萃取的阿爾泰柴胡萃取物之實驗組；及 ⑶顯示經誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正對照組。圖3顯示小鼠腸浸出液中G-CSF的含量，㈧顯示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注射小鼠大腸的控制組；(B)顯示溶于50%乙醇的TNBS誘發(fā)小鼠腸炎的載體處理組；(C) 顯示經誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服100mg/kg實施例1萃取的阿爾泰柴胡萃取物之實驗組；及 ⑶顯示經誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正對照組。圖4顯示小鼠腸浸出液中ILl-β的含量，㈧顯示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注射BABL/c小鼠大腸的控制組；(B)顯示溶于50%乙醇的TNBS誘發(fā)小鼠腸炎的載體處理組；(C)顯示經誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服100mg/kg實施例1萃取的阿爾泰柴胡萃取物之實驗組；及(D)顯示經誘發(fā)為腸炎的小鼠，口服200mg/kg的5-ASA之正對照組。圖5顯示以不含TNBS的50%乙醇水溶液注射小鼠大腸的大腸型態(tài)，大腸直徑約 1mm，糞便呈顆粒狀。圖6顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，但不施用任何柴胡萃取物的大腸型態(tài)， 大腸腫大直徑達約3-5mm，糞便呈水糜狀。圖7顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg阿爾泰柴胡萃取物之大腸型態(tài)。圖8顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用1000mg/kg阿爾泰柴胡萃取物之大腸型態(tài)。圖9顯示以TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg北柴胡萃取物之大腸型態(tài)。圖10顯示以TNBS刺激/J 物之大腸型態(tài)。圖11顯示以TNBS刺激/J 大腸型態(tài)。圖12顯示以TNBS刺激/J 大腸型態(tài)。 圖13顯示以TNBS刺激/J 大腸型態(tài)。圖14顯示以TNBS刺激/J 大腸型態(tài)。圖15顯示以TNBS刺激/J 態(tài)。
具體實施例方式本發(fā)明之柴胡可選用具有苦平、微寒之性味的柴胡品種。具體而言，可選自下列所構成的群組阿爾泰柴胡(Bupleurum krylovianum)、北柴胡(Bupleurum chinense)、黃花甲鳥恥柴古月(Bupleurum commelynoideum)、狹葉柴古月(Bupleurum scorzonerifolium)、三福
古月(Bupleurum triradiatum)、三島^!古月(Bupleurum falcatum)、及高氏^!古月(Bupleurum
、鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg黃花鴨跖柴胡萃取 、鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg狹葉柴胡萃取物之 、鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg三輻柴胡萃取物之 、鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg三島柴胡萃取物之 、鼠大腸形成腸炎，口服施用100mg/kg高氏柴胡萃取物之 、鼠大腸形成腸炎，口服施用200mg/kg的5-ASA之大腸型kaoi)。上述柴胡可選取整棵植株，或較佳采用根部。本發(fā)明之柴胡可進一步經由溶劑萃取。例如將柴胡植株研磨成粉末后，室溫下浸泡于乙醇溶液中，經過一段時間，在室溫下干燥、濃縮，獲得柴胡萃取物。本發(fā)明之較佳實施例中，乙醇溶液較佳為乙醇水溶液，而且，乙醇的濃度可為20% 95%體積百分比，較佳為 50 95%體積百分比。萃取的時間通常為2小時以上，較佳為2小時 M小時，更佳為4 5小時。萃取的溫度通常為室溫，較佳為室溫至乙醇水溶液沸騰回流的溫度。上述萃取方法可再包括一濃縮干燥過程，將上述經過加熱回流后的萃取液濃縮、 干燥成固體或結晶體。上述萃取方法可反復操作數次，以獲得純度較高的萃取物。在腸炎的動物模式中，腸型態(tài)呈現腫脹、糞便型態(tài)不能呈正常顆粒形，甚至呈糜狀到水樣的型態(tài)。本發(fā)明一實施例中，腸炎的動物模式經施用柴胡之后，腸腫脹的現象明顯受到抑制，而且腸炎部位形成軟便的現象，顯示柴胡具有抑制及減緩發(fā)炎性腸病的效果。在一實施例中，腸炎的動物模式經施用柴胡之后，亦明顯降低發(fā)炎部位的腸浸出液中TNF-α、 IL-6、G-CSF、及ILl-β的表現量，推測這些因子與發(fā)炎性腸病有關。根據本發(fā)明，柴胡可用以治療或抑制個體的發(fā)炎性腸病，包括克羅恩病(Crohn' s disease)、腸炎、或具有類似發(fā)炎癥狀的腸疾病。上述個體包括哺乳類動物，例如鼠、狗、貓、馬、羊、豬、猴、猿，特別是人。柴胡的有效使用量可由熟知此技術領域之人士，依個體的年齡、生理狀況、發(fā)炎程度等條件予以判斷，沒有特別限制，但較佳可為50 1000mg/kg的劑量，更佳為100mg/kg 的劑量。本發(fā)明之醫(yī)藥組合物可進一步包括此技術領域中熟知的藥學上可接受載劑及/ 或添加劑，根據劑型、保存方式、施用方式等因素，以適當比例添加。本發(fā)明之醫(yī)藥組合物可經由例如靜脈內、肌肉內、口服或皮下施用，較佳為口服施用。本發(fā)明之醫(yī)藥組合物也可在適當期間內對患者進行多重劑量給藥，該給藥療程依據藥學上例行方法加以測定。本發(fā)明之具體實施詳細說明如下，然而以下的實施例僅用于進一步揭露本發(fā)明之技術內容，不應藉以限制本案的發(fā)明范疇。[實施例1]柴胡萃取物的制造分別選取阿爾泰柴胡(Bupleurum krylovianum)、北柴胡(Bupleurum chinense)、 黃花甲鳥恥柴古月(Bupleurum commelynoideum)、狹葉柴古月(Bupleurum scorzonerifolium)、 H fg ^ ( (Bupleurum triradiatum)> H ^ (Bupleurum falcatum)、 1 氏古月 (Bupleurum kaoi)的植物根部，研磨成植物粉末。分別取上述植物粉末0. 5g，各自以25ml濃度為25%、50%、75%及95%體積百分比的乙醇水溶液在室溫下振蕩過夜后，經過干燥濃縮后，獲得各柴胡萃取物。[實施例2]柴胡萃取物對腸炎的腸浸出液中TNF-α、IL_6、G_CSF及ILl-β含量的抑制作用本發(fā)明之柴胡萃取物對腸炎的腸浸出液中TNF-α、IL_6、G-CSF及ILl-β含量的抑制作用可以參考下列文獻進行實驗探討
1. Current Protocols in Immunology (2001) 15. 19. 1-15. 19. 14.2. Lahat G, Halperin D, Fabian I, et al. Immunomodulatory Effects of Ciprofloxacin in TNBS-Induced Colitis in Mice. Inflamm Bowel Dis2007 ； 13 557-565.3. ten Hove T, van den Blink B, Pronk I, et al. Dichotomal role of inhibition of p38 MAPK with SB 203580 in experimental colitis. Gut2002 ；50 507-512.4. Bouma G,Strober W. The Immunological and Genetic Basis of Inflammatory Bowel Disease. Nature Review Immunology 2003 ；3 :521-533.取6只小鼠為一組、共四組小鼠，其中三組從每只BABL/c小鼠肛門深入大腸內4 公分注射 1. 75mg 三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid ；TNBS) (Sigma)，經過 48 小時后，該部位誘發(fā)形成腸炎。另外一組以不含TNBS的50%乙醇水溶液注射BABL/c小鼠肛門深入大腸內4公分處，作為控制組(A)。經50%乙醇水溶液注射的部位維持正常的腸型態(tài)，未誘發(fā)成腸炎。上述誘發(fā)為腸炎的部位，取自肛門起6公分大腸，浸泡于PBS2小時，為(B)載體處理組。另外，上述誘發(fā)為腸炎的小鼠組，分別以(C) 口服實施例1以50%乙醇水溶液萃取的阿爾泰柴胡萃取物100mg/kg，作為實驗組；以及(D) 口服200mg/kg的5-氨基水楊酸 (5-aminosalicylic acid ；5-ASA) (Sigma)，作為正對照組。分別取自肛門起6公分大腸，浸泡于PBS 2小時。上述(A)、(B)、(C)、⑶組的小鼠腸浸出液分別以酵素免疫分析法(ELISA) (R&D Systems )，定量分析TNF-α、IL-6、G-CSF及ILl-β的含量，結果分別如圖1 4 所示。[實施例3]柴胡萃取物改善腸炎的腸腫大及糞便水糜樣現象如實施例2，誘發(fā)小鼠形成腸炎。分別對形成腸炎的小鼠，口服施用實施例1中以 50%乙醇水溶液萃取的阿爾泰柴胡萃取物100mg/kg及1000mg/kg、北柴胡萃取物IOOmg/ kg、黃花鴨跖柴胡萃取物100mg/kg、狹葉柴胡萃取物100mg/kg、三輻柴胡萃取物100mg/kg、 三島柴胡萃取物100mg/kg、及高氏柴胡萃取物100mg/kg。之后，分別取小鼠肛門起6公分大腸，觀察腸腫大及糞便型態(tài)(如圖7 14)。另一方面，將上述施用各柴胡萃取物的腸型態(tài)，與上述實施例2之(1)以不含有 TNBS的50%乙醇水溶液注射小鼠大腸之腸型態(tài)(控制組)(如圖5) ； (2)以溶于50%乙醇的TNBS刺激小鼠大腸形成腸炎、但不施用柴胡萃取物之腸型態(tài)(載體處理組)(如圖6)； 以及(3)對于誘發(fā)腸炎的小鼠口服施用200mg/kg的5-ASA(Sigma)之腸型態(tài)(正對照組) (如圖15)，相互比較。未施用柴胡萃取物之腸炎模式，腸型態(tài)呈現腫大及糞便水糜樣的現象(如圖6)。 然而，在施用上述柴胡萃取物的腸型態(tài)中，腸腫脹的現象減少，而且出現軟便甚至正常顆粒狀的狀態(tài)，顯示發(fā)炎的腸部位出現好轉的現象(圖7 14)。5-ASA為目前治療發(fā)炎性腸病的常用藥物，然而在施用腸炎模式中，腸腫狀的現象并未減緩或消失(如圖15)。雖然本發(fā)明已以較佳實施例揭露如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此項技藝者，在不脫離本發(fā)明之精神和范圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發(fā)明之保護范圍當視后附之申請專利范圍所界定者為準。
權利要求
1.一種治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物，包括柴胡(Bupleurum)作為有效成分。
2.根據權利要求1所述之治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物，其中該柴胡系選自具有苦平、微寒之性味的柴胡品種。
3.根據權利要求1所述之治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物，其中該柴胡系選自由下列所構成的群組阿爾泰柴胡(Bupleurum krylovianum)、北柴胡(Bupleurum chinense)、黃花甲鳥恥柴古月(Bupleurum comme1ynoideum)、狹葉柴古月(Bupleurum scorzonerifolium)> 三 $高柴古月(Bupleurum triradiatum)> 三島柴古月(Bupleurum falcatum)、及高氏柴胡(Bupleurum kaoi)或其組合。
4.根據權利要求1所述之治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物，其中該柴胡來自柴胡根部。
5.根據權利要求1-4中任一項所述之治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物，其中該柴胡還經過一溶劑萃取。
6.根據權利要求5所述之治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物，其中該溶劑為濃度 20% 95%體積百分比之乙醇水溶液。
7.根據權利要求1-4中任一項所述之治療或減緩發(fā)炎性腸病的醫(yī)藥組合物，其中該發(fā)炎性腸病包括克羅恩病(Crohn' s disease)、腸炎、或具有類似發(fā)炎癥狀的腸疾病。
8.一種柴胡在制備治療或減緩發(fā)炎性腸病之藥物的用途。
9.根據權利要求8所述之用途，其中該柴胡系選自具有苦平、微寒之性味的柴胡品種。
10.根據權利要求8所述之用途，其中該柴胡系選自由下列所構成的群組阿爾泰柴古月(Bupleurum krylovianum)、北柴古月(Bupleurum chinense)、黃花甲鳥 1 柴古月(Bupleurum comme 1 ynoideum)、狹葉柴古月(Bupleurum scorzonerifolium)、三福柴古月(Bupleurum triradiatum)、三島柴古月(Bupleurum falcatum)、及高氏柴古月(Bupleurum kaoi)或其組合。
11.根據權利要求8所述之用途，其中該柴胡來自柴胡根部。
12.根據權利要求8-11中任一項所述之用途，其中該柴胡根經由一溶劑萃取。
13.根據權利要求12所述之用途，其中該溶劑為濃度20% 95%體積百分比之乙醇水溶液。
14.根據權利要求8-11中任一項所述之用途，其中該發(fā)炎性腸病包括克羅恩病 (Crohn' s disease)、腸炎、或具有類似發(fā)炎癥狀的腸疾病。
15.根據權利要求8-11中任一項所述之用途，其中該藥物為口服施用。
全文摘要
一種治療或減緩發(fā)炎性腸病(IBD)的醫(yī)藥組合物，包括柴胡(Bupleurum)作為有效成分。
文檔編號A61P1/00GK102309530SQ20101061203
公開日2012年1月11日 申請日期2010年12月29日 優(yōu)先權日2010年6月30日
發(fā)明者李連滋, 石英珠, 童天送, 胡乃韻 申請人:財團法人工業(yè)技術研究院