專利名稱：一種表面固定有抗體的藥物血管支架的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種血管支架，尤其涉及一種表面固定有抗體的藥物血管支架及其 制備方法。
背景技術(shù)：
冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)是危害人類健康的重大疾病之一，冠狀 動脈介入術(shù)(PCI)已成為冠心病臨床治療中一種有確切療效的重要手段。但是在冠狀 動脈支架置入治療中存在術(shù)后血管再狹窄的問題，在全球所有的支架放置病例中，約有 15-30%發(fā)生再狹窄，嚴(yán)重限制了治療的遠(yuǎn)期效果，迄今仍是臨床亟待解決的難題。近 年來，藥物洗脫支架的出現(xiàn)成為PCI發(fā)展史上新的里程碑。藥物洗脫支架的廣泛應(yīng)用 大大減少了支架內(nèi)再狹窄的發(fā)生，然而在強(qiáng)烈抑制血管平滑肌細(xì)胞過度增殖的同時，也 不可避免的抑制了支架骨架處功能內(nèi)皮層的生長，從而干擾了血管損傷處自然愈合的進(jìn) 程。目前普遍認(rèn)為內(nèi)皮損傷是再狹窄的始動因素，它激活了再狹窄病理過程的“瀑布反 應(yīng)”。所以在抑制平滑肌細(xì)胞增殖的同時，更重要的是加速內(nèi)皮的修復(fù)。隨著內(nèi)皮祖 細(xì)胞(EPCs)研究進(jìn)展，通過動員外周血中的內(nèi)皮祖細(xì)胞到置入支架血管局部并修復(fù)損 傷內(nèi)皮成為抗再狹窄的新策略之一。內(nèi)皮祖細(xì)胞是一種起源于骨髓的原始細(xì)胞，內(nèi)皮祖 細(xì)胞能募集、歸巢到血管損傷區(qū)并分化為內(nèi)皮細(xì)胞。在該理論的基礎(chǔ)上，Jiro Aoki等設(shè) 計(jì)了具有內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能的支架，包埋在支架上的CDm抗體可以捕獲循環(huán)血液中表 面CD34+的內(nèi)皮祖細(xì)胞，并使其分化為成熟的內(nèi)皮細(xì)胞而加速局部的內(nèi)皮化，防止血栓的 發(fā)生，最終達(dá)到抑制再狹窄的目的。理論上講，如果我們能夠設(shè)計(jì)和制造出同時具有內(nèi) 皮祖細(xì)胞捕獲功能和藥物攜帶功能的支架，那么便可以一方面抑制平滑肌細(xì)胞的增殖， 另一方面促進(jìn)內(nèi)皮的修復(fù)進(jìn)程，這樣既保障了藥物洗脫支架減少再狹窄，又避免了內(nèi)皮 修復(fù)延遲引起的支架內(nèi)血栓，將從根本上改變目前再狹窄的治療現(xiàn)狀。但是由于抗體結(jié) 構(gòu)的特殊性，如何實(shí)現(xiàn)抗體在支架材料表面的有效固定(即如何能負(fù)載更多的抗體靶分 子，同時維持其結(jié)構(gòu)的完整性使負(fù)載后的抗體靶分子保持較好的活性)是首先需要解決 的問題。
申請?zhí)枮?00710111272.9，公開號為CN101327343A，其
公開日為2008年12月24日的中國發(fā)明專利申請公開了一種復(fù)合藥物血管支架及其制備方法，該血管支架包括 支架本體和活性藥物，其支架本體為帶孔洞的具有良好生物相容性的醫(yī)用材料，選用不 銹鋼、鈷基合金、鈦合金、鎳鈦合金或聚乳酸生物高分子材料；活性藥物包括特異捕獲 內(nèi)皮祖細(xì)胞抗體藥物、抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物，所述的帶有孔洞的支架本體內(nèi)表面固定 有特異捕獲內(nèi)皮祖細(xì)胞抗體藥物，外表面涂覆有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物。其制備方法包 括①支架本體表面的預(yù)處理、②制備孔洞、③支架本體表面的后處理、④藥物的配制、 ⑤外表面涂覆、⑥內(nèi)表面固定、⑦低溫干燥工藝步驟。能夠選擇性的吸附內(nèi)皮祖細(xì)胞， 促進(jìn)內(nèi)皮的修復(fù)；并能夠有效抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移，持續(xù)有效降低新生內(nèi)膜 的形成，有效防治支架內(nèi)再狹窄，避免遲發(fā)性血栓的風(fēng)險。該血管支架的不足之處是該支架表面無豐富的抗體結(jié)合活性位點(diǎn)，其內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體的結(jié)合僅限于簡單的物 理吸附方式，同本發(fā)明的化學(xué)偶聯(lián)方式相比抗體結(jié)合量少且結(jié)合穩(wěn)定性差。
申請?zhí)枮?00810064508.2，公開號為CN101279111A，
公開日為2008年10月8 日的中國發(fā)明專利申請公開了一種聚酯類藥物洗脫性涂層血管支架的制備方法，包括血 管支架的清洗；涂層溶液的配制；藥物洗脫性涂層的噴涂；藥物洗脫性涂層的干燥與消 毒等過程。本發(fā)明選擇聚酯類聚合物為聚合物藥物載體，該類聚酯類聚合物在體內(nèi)經(jīng)過 3-6個月最終被降解為二氧化碳和水，并被人所代謝和排出體外。涂覆有該涂層的支架 在保持了降低再狹窄發(fā)生的同時，又有效地降低了支架術(shù)后亞急性血栓形成和血管瘤的 發(fā)生，保證了支架術(shù)后遠(yuǎn)期臨床的安全性和有效性。在支架的外表面涂攜帶抗增生藥物 的聚合物載體，在血管和組織一側(cè)發(fā)揮其減少內(nèi)膜增生的作用。同時，在面向血管腔側(cè) 則攜帶較少藥物，起到了促進(jìn)內(nèi)皮的愈合的作用。該血管支架的不足之處是該支架所 載藥物僅限于抑制平滑肌細(xì)胞增殖的藥物，不能有選擇性的吸附內(nèi)皮祖細(xì)胞促進(jìn)內(nèi)皮修 復(fù)，無法避免由于內(nèi)皮修復(fù)延遲引起的支架內(nèi)血栓的風(fēng)險。發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供一種表面固定有抗體的藥物血管支架及其制備 方法。本發(fā)明藥物血管支架可以解決目前血管支架在治療再狹窄的過程中所帶來的內(nèi)皮 修復(fù)延遲引起的支架內(nèi)血栓這一心血管治療領(lǐng)域的難題。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明一種表面固定有抗體的藥物血管支架予以實(shí)現(xiàn) 的一個技術(shù)方案是支架包括支架本體，所述支架本體上涂覆有載藥聚酯類高分子聚合 物，在涂覆有載藥聚酯類高分子聚合物涂層的支架本體表面固定有抗體，制備所述藥物 血管支架的步驟包括具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制備；載藥聚酯類高分 子聚合物在支架本體表面的涂覆；采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在 支架本體表面；其中
步驟A-1、具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制備
所述聚酯類高分子聚合物是聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一種及由以上聚合 物通過嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；
按質(zhì)量比為1 5-40的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于裝有二氯甲烷的 聚合封管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚酯類高分子聚合物 與馬來酸酐及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 5-40 1-8，用真空泵抽去溶劑，抽真空 氮?dú)庵脫Q2-4次，在真空度為5-80 封管，在100-150°C，反應(yīng)8_48小時，冷至室溫； 將反應(yīng)產(chǎn)物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一種具有羧基官能團(tuán)的聚酯 類高分子聚合物；
步驟A-2、載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂覆
制備載藥聚酯類高分子聚合物配制混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分 子聚合物溶液按照重量百分比為-30%的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于有 機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物，使所述聚酯類高分子聚合物 與所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為100 1-40 ；
將上述配制的混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分子聚合物溶液均勻的噴涂或涂覆于所述支架本體表面，再將帶有上述載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真 空干燥箱中，在20-80°C干燥0.5-72小時固化；
步驟A-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表
支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)0.5-8小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是 將碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 4.5-6.5的醋酸鹽緩沖液中；
將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 5-8的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體 溶液；
偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.001-lg/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體 溶液中，反應(yīng)6-36小時。
本發(fā)明一種表面固定有抗體的藥物血管支架予以實(shí)現(xiàn)的另一個技術(shù)方案是支 架包括支架本體，所述支架本體上涂覆有載藥高分子聚合物，在涂覆有載藥高分子聚合 物涂層的支架表面固定有抗體，制備所述藥物血管支架的步驟包括載藥聚酯類高分子 聚合物在支架本體表面的涂覆；支架本體上載藥聚酯類高分子聚合物涂層表面的羧基 化；采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表面；其中
步驟B-I、載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂覆
所述聚酯類高分子聚合物包括聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一種及由以上聚 合物通過嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；
制備載藥聚酯類高分子聚合物配制混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分 子聚合物溶液按照重量百分比為-30%的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于有 機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物，使所述聚酯類高分子聚合物 與所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為100 1-40 ；
將上述配制的混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分子聚合物溶液均勻的噴 涂或涂覆于所述支架本體表面，再將帶有上述載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真 空干燥箱中，在20-80°C干燥0.5-72小時固化；
步驟B-2、支架本體上載藥聚酯類高分子聚合物涂層表面的羧基化
將上述步驟B-I處理過的支架本體浸入0.001-10g/L的氫氧化鈉溶液中浸泡 0.5- 小時后，用蒸餾水清洗2-5次后，將支架本體放入真空干燥箱中，在20-80°C干燥 0.5-72 小時；
步驟B-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表
支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟B-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)0.5-8小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是 將碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于PH4.5-6.5的醋酸鹽緩沖液中；
將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 5-8的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體 溶液；
偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.001-lg/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體 溶液中，反應(yīng)6-36小時。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本 發(fā)明的有益效果是本發(fā)明藥物血管支架是利用具有羧基功能界面的高分子聚合物藥物涂層作為支 架界面，并與具有內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能的抗體共價結(jié)合，構(gòu)建同時具有藥物攜帶功能和 內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能的支架，本發(fā)明藥物血管支架可以解決目前血管支架在治療再狹窄 的過程中所帶來的內(nèi)皮修復(fù)延遲引起的支架內(nèi)血栓這一心血管治療領(lǐng)域的難題。本發(fā)明的一種表面固定有抗體的藥物血管支架，以具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高 分子聚合物作為支架載藥涂層，獲得表面羧基化的藥物支架，使支架表面兼具生物相容 性和生物活性，其羧基功能化表面為下一步負(fù)載有效劑量的抗體提供了豐富的結(jié)合位 點(diǎn)。該支架同時具有藥物攜功能和內(nèi)皮細(xì)胞捕獲功能，從而使該支架具有優(yōu)良的治療再 狹窄和促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)的功能。


圖1是本發(fā)明表面固定有抗體的藥物血管支架的一種制備過程的簡圖；圖2是本發(fā)明表面固定有抗體的藥物血管支架的另一種制備過程的簡具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)地描述。本發(fā)明表面固定有抗體的藥物血管支架的制備方法，其中，支架包括支架本 體，所述支架本體上涂覆有載藥聚酯類高分子聚合物，在涂覆有載藥聚酯類高分子聚合 物涂層的支架表面固定有抗體，如圖1和圖2所示所述藥物血管支架的制備過程可以是 其中的一種方法。按照圖1所示的一種制備過程是具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制備；載藥聚酯類高分子聚合物在支 架本體表面的涂覆；采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表 面；其中，具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制備采用的合成方式。上述各步驟具體描述如下步驟A-1、具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制備所述聚酯類高分子聚合物是聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一種及由以上聚合 物通過嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；按質(zhì)量比為1 5-40的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于裝有二氯甲烷的 聚合封管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚酯類高分子聚合物 與馬來酸酐及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 5-40 1-8，用真空泵抽去溶劑，抽真空 氮?dú)庵脫Q2-4次，在真空度為5-80Pa封管，在100-150°C，反應(yīng)8_48小時，冷至室溫； 將反應(yīng)產(chǎn)物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一種具有羧基官能團(tuán)的聚酯 類高分子聚合物；步驟A-2、載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂覆制備載藥聚酯類高分子聚合物配制混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分 子聚合物溶液按照重量百分比為-30%的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于有 機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物，使所述聚酯類高分子聚合物與所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的 質(zhì)量比為100 1-40 ；將上述配制的混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分子聚合物溶液均勻的噴 涂或涂覆于所述支架本體表面，再將帶有上述載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真 空干燥箱中，在20-80°C干燥0.5-72小時固化；步驟A-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表 面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)0.5-8小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是 將碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 4.5-6.5的醋酸鹽緩沖液中；將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 5-8的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體 溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.001-lg/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體 溶液中，反應(yīng)6-36小時。在上述制備過程，具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制備和采用化學(xué)偶 聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表面是本技術(shù)方案的特點(diǎn)。按照圖2所示的一種制備過程是載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂覆；支架本體上載藥聚酯類高分 子聚合物涂層表面的羧基化；采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架 本體表面；其中通過支架本體上載藥聚酯類高分子聚合物涂層表面的羧基化(即水解 方式)制備具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物。上述各步驟具體描述如下步驟B-I、載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂覆所述聚酯類高分子聚合物包括聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一種及由以上聚 合物通過嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；制備載藥聚酯類高分子聚合物配制混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分 子聚合物溶液按照重量百分比為-30%的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于有 機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物，使所述聚酯類高分子聚合物 與所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為100 1-40 ；將上述配制的混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分子聚合物溶液均勻的噴 涂或涂覆于所述支架本體表面，再將帶有上述載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真 空干燥箱中，在20-80°C干燥0.5-72小時固化；步驟B-2、支架本體上載藥聚酯類高分子聚合物涂層表面的羧基化將上述步驟B-I處理過的支架本體浸入0.001-10g/L的氫氧化鈉溶液中浸泡 0.5-24小時后，用蒸餾水清洗2-5次后，將支架本體放入真空干燥箱中，在20-80°C干燥 0.5-72 小時；步驟B-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表 面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟B-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)0.5-8小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于4.5-6.5的醋酸鹽緩沖液中；將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 5-8的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體 溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.001-lg/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體 溶液中，反應(yīng)6-36小時。在上述制備過程，支架本體上載藥聚酯類高分子聚合物涂層表面的羧基化和采 用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表面是本技術(shù)方案的特點(diǎn)。本發(fā)明中的所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物包括紫杉醇及其衍生物、雷帕霉素、地 塞米松、長春新堿及其衍生物及他汀類藥物中的一種。本發(fā)明中的所述內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體包括CD34抗體、CD133抗體、CD31抗 體和CD45抗體及血管內(nèi)皮生長因子中的一種。在制備過程中，至于其中支架本體的材料、聚酯類高分子聚合物、抗平滑肌細(xì) 胞增殖藥物和內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體的選取不受限制。可以有多種不同的具體的聚酯類高 分子聚合物、抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物和內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體的選取方案。下面是幾個示 意性的實(shí)施例，本發(fā)明并不局限于這些具體實(shí)施方式
。實(shí)施例1 本實(shí)施例1中，支架本體的材料為不銹鋼材料；所選取的聚酯類高分子聚合 物為聚丙交酯乙交酯，所選取的抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物為紫杉醇，選取的內(nèi)皮祖細(xì)胞 捕獲抗體為CD133抗體；一種支架本體表面固定有CD133抗體及紫杉醇的藥物血管支架 的制備過程如下步驟A-1、具有羧基官能團(tuán)的聚丙交酯乙交酯的制備按質(zhì)量比為1 15的比例，將所述聚丙交酯乙交酯溶于裝有二氯甲烷的聚合封 管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚丙交酯乙交酯與馬來酸酐 及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 30 5，用真空泵抽去溶劑，抽真空氮?dú)庵脫Q3次， 在真空度為60Pa封管，在120°C，反應(yīng)24小時，冷至室溫；將反應(yīng)產(chǎn)物充分溶于三氯甲 烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一種具有羧基官能團(tuán)的聚丙交酯乙交酯；步驟A-2、載藥聚丙交酯乙交酯在支架本體表面的涂覆制備載藥聚丙交酯乙交酯配制混有紫杉醇的聚丙交酯乙交酯溶液按照重量 百分比為15%的比例，將所述聚丙交酯乙交酯溶于有機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述 紫杉醇，使所述聚丙交酯乙交酯與所述紫杉醇的質(zhì)量比為100 20 ；將上述配制的混有紫杉醇的聚丙交酯乙交酯溶液均勻的噴涂或涂覆于所述支架 本體表面，再將帶有上述載藥聚丙交酯乙交酯涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在 60°C干燥48小時固化；步驟A-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將CD133抗體固定在支架本體表面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟A-2處理 后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)2小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將 碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 5.5的醋酸鹽緩沖液中；將CD133抗體溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中制得CD133抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.2g/L的CD133抗體溶液中，反應(yīng)18小時。至此，得到一種支架本體表面固定有CD133抗體及紫杉醇的藥物血管支架。實(shí)施例2 本實(shí)施例2中，支架本體的材料為不銹鋼材料；所選取的聚酯類高分子聚合 物為聚丙交酯，所選取的抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物為雷帕霉素，選取的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲 抗體為CD34抗體；一種支架本體表面固定有CD34抗體及雷帕霉素的藥物血管支架的制 備過程如下步驟A-1、具 有羧基官能團(tuán)的聚丙交酯的制備按質(zhì)量比為1 40的比例，將所述聚丙交酯溶于裝有二氯甲烷的聚合封管中， 向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚丙交酯與馬來酸酐及過氧化二苯 甲酰的質(zhì)量比為100 40 8，用真空泵抽去溶劑，抽真空氮?dú)庵脫Q4次，在真空度為 SOPa封管，在100°C，反應(yīng)48小時，冷至室溫；將反應(yīng)產(chǎn)物充分溶于三氯甲烷中，加入 乙醚沉淀，即可得到一種具有羧基官能團(tuán)的聚丙交酯；步驟A-2、載藥聚丙交酯在支架本體表面的涂覆制備載藥聚丙交酯配制混有雷帕霉素的聚丙交酯溶液按照重量百分比為 30%的比例，將所述聚丙交酯溶于有機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述雷帕霉素，使所 述聚丙交酯與所述雷帕霉素的質(zhì)量比為100 40 ；將上述配制的混有雷帕霉素的聚丙交酯溶液均勻的噴涂或涂覆于所述支架本體 表面，再將帶有上述載藥聚丙交酯涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在20°C干燥72小 時固化；步驟A-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將CD34抗體固定在支架本體表面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)8小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將 碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH6.5的醋酸鹽緩沖液中；將CD34抗體溶于pH 8的磷酸鹽緩沖液中制得CD34抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入lg/L的CD34抗體溶液中，反應(yīng)6 小時。至此，得到一種支架本體表面固定有CD34抗體及雷帕霉素的藥物血管支架。實(shí)施例3 本實(shí)施例3中，支架本體的材料為不銹鋼材料；所選取的聚酯類高分子聚合 物為聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物，所選取的抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物為地塞米松，選 取的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體為CD31抗體；一種支架本體表面固定有CD31抗體及地塞米松 的藥物血管支架的制備過程如下步驟A-1、具有羧基官能團(tuán)的聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物的制備按質(zhì)量比為1 5-40的比例，將所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物溶于裝有二 氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚乙二醇聚 丙交酯嵌段聚合物與馬來酸酐及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 5 1，用真空泵抽去 溶劑，抽真空氮?dú)庵脫Q2次，在真空度為5Pa封管，在150°C，反應(yīng)8小時，冷至室溫； 將反應(yīng)產(chǎn)物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一種具有羧基官能團(tuán)的聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物； 步驟A-2、載藥聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物在支架本體表面的涂覆制備載藥聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物配制混有地塞米松的聚乙二醇聚丙交 酯嵌段聚合物溶液按照重量百分比為的比例，將所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合 物溶于有機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述地塞米松，使所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚 合物與地塞米松的質(zhì)量比為100 1 ；將上述配制的混有地塞米松的聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物溶液均勻的噴涂或 涂覆于所述支架本體表面，再將帶有上述載藥聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合物涂層的支架 本體放入真空干燥箱中，在80°C干燥0.5小時固化；步驟A-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將C31抗體固定在支架本體表面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)0.5小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將 碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 4.5的醋酸鹽緩沖液中；將CD31抗體溶于pH 5的磷酸鹽緩沖液中制得CD31抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.001g/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶 液中，反應(yīng)36小時。至此，得到一種支架本體表面固定有CD31抗體及地塞米松的藥物血管支架。實(shí)施例4:本實(shí)施例4中，支架本體的材料為不銹鋼材料；所選取的聚酯類高分子聚合 物為聚丙交酯乙交酯，所選取的抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物為長春新堿，選取的內(nèi)皮祖細(xì) 胞捕獲抗體為CD45抗體；一種支架本體表面固定有CD45抗體及長春新堿的藥物血管支 架的制備過程如下步驟A-1、具有羧基官能團(tuán)的聚丙交酯乙交酯的制備按質(zhì)量比為1 10的比例，將所述聚丙交酯乙交酯溶于裝有二氯甲烷的聚合封 管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚乙二醇聚丙交酯嵌段聚合 物與馬來酸酐及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 20 6，用真空泵抽去溶劑，抽真空氮 氣置換2次，在真空度為40Pa封管，在110°C，反應(yīng)36小時，冷至室溫；將反應(yīng)產(chǎn)物充 分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一種具有羧基官能團(tuán)的聚丙交酯乙交酯；步驟A-2、載藥聚丙交酯乙交酯在支架本體表面的涂覆制備載藥聚丙交酯乙交酯配制混有長春新堿的聚丙交酯乙交酯溶液按照重 量百分比為10%的比例，將所述聚丙交酯乙交酯溶于有機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所 述長春新堿，使所述聚丙交酯乙交酯與長春新堿的質(zhì)量比為100 10 ；將上述配制的混有長春新堿的聚丙交酯乙交酯溶液均勻的噴涂或涂覆于所述支 架本體表面，再將帶有上述載藥聚丙交酯乙交酯涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在 30°C干燥56小時固化；步驟A-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將C45抗體固定在支架本體表面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)1小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將 碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 5的醋酸鹽緩沖液中；
將CD45抗體溶于pH 6的磷酸鹽緩沖液中制得CD45抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.05g/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液 中，反應(yīng)24小時。至此，得到一種支架本體表面固定有CD45抗體及長春新堿的藥物血管支架。實(shí)施例5:本實(shí)施例5中，支架本體的材料為不銹鋼材料；所選取的聚酯類高分子聚合 物為聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物，所選取的抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物為洛伐他 汀，選取的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體為血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子；一種支架本體表面固定有血 管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子及洛伐他汀的藥物血管支架的制備過程如下步驟A-1、具有羧基官能團(tuán)的聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物的制備按質(zhì)量比為1 20的比例，將所述聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物溶于裝 有二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚乙二 醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物與馬來酸酐及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 35 6， 用真空泵抽去溶劑，抽真空氮?dú)庵脫Q4次，在真空度為70Pa封管，在130°C，反應(yīng)12小 時，冷至室溫；將反應(yīng)產(chǎn)物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一種具有羧 基官能團(tuán)的聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物；步驟A-2、載藥聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物在支架本體表面的涂覆制備載藥聚乙二醇聚丙交酯嵌段乙交酯聚合物配制混有洛伐他汀的聚乙二醇 聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物溶液按照重量百分比為20%的比例，將所述聚乙二醇聚丙 交酯乙交酯嵌段聚合物溶于有機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述洛伐他汀，使所述聚乙 二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物與洛伐他汀的質(zhì)量比為100 30 ；將上述配制的混有洛伐他汀的聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合物溶液均勻的 噴涂或涂覆于所述支架本體表面，再將帶有上述載藥聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段聚合 物涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在65°C干燥18小時固化；步驟A-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子固定在支架本體表面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)4小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將 碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 6的醋酸鹽緩沖液中；將血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子溶于pH 7.5的磷酸鹽緩沖液中制得血管內(nèi)皮細(xì)胞生長 因子溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.5g/L的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子溶 液中，反應(yīng)12小時。至此，得到一種支架本體表面固定有血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子及洛伐他汀的藥物 血管支架。實(shí)施例6:本實(shí)施例6中選取的聚酯類高分子聚合物為聚丙交酯，選取的抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物為雷帕霉素，選取的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體為CD31抗體，一種支架本體表面固定有 CD31抗體及雷帕霉素的藥物血管支架的制備過程如下步驟B-I、載藥聚丙交酯在支架本體表面的涂覆
制備 載藥聚丙交酯配制混有雷帕霉素的聚丙交酯溶液按照重量百分比為 20%的比例，將所述聚丙交酯溶于有機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述雷帕霉素，使所 述聚丙交酯與所述雷帕霉素的質(zhì)量比為100 20 ；將上述配制的混有雷帕霉素的聚丙交酯溶液均勻的噴涂或涂覆于所述支架本體 表面，再將帶有上述載藥聚丙交酯涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在60°C干燥48小 時固化；步驟B-2、支架本體上載藥聚丙交酯涂層表面的羧基化將上述步驟B-I處理過的支架本體浸入0.4g/L的氫氧化鈉溶液中浸泡8小時 后，用蒸餾水清洗3次后，將支架本體放入真空干燥箱中，在60°C干燥48小時；步驟B-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將CD31抗體固定在支架本體表面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟B-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)2小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將 碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 5.5的醋酸鹽緩沖液中；將CD31抗體溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中制得CD31抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.2g/L的CD31抗體溶液中，反應(yīng) 18小時。至此，得到一種支架本體表面固定有CD31抗體及雷帕霉素的藥物血管支架。實(shí)施例7:本實(shí)施例7中選取的聚酯類高分子聚合物為聚丙交酯乙交酯，選取的抗平滑肌 細(xì)胞增殖藥物為紫杉醇，選取的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體為CD34抗體，一種支架本體表面固 定有CD34抗體及紫杉醇的藥物血管支架的制備過程如下步驟B-1、載藥聚丙交酯乙交酯在支架本體表面的涂覆制備載藥聚丙交酯乙交酯配制混有紫杉醇的聚丙交酯乙交酯溶液按照重量 百分比為30%的比例，將所述聚丙交酯乙交酯溶于有機(jī)溶劑中，向上述溶液中加入所述 紫杉醇，使所述聚丙交酯乙交酯與所述紫杉醇的質(zhì)量比為100 40 ；將上述配制的混有紫杉醇的聚丙交酯乙交酯溶液均勻的噴涂或涂覆于所述支架 本體表面，再將帶有上述載藥聚丙交酯乙交酯涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在 80°C干燥0.5小時固化；步驟B-2、支架本體上載藥聚丙交酯乙交酯涂層表面的羧基化將上述步驟B-I處理過的支架本體浸入10g/L的氫氧化鈉溶液中浸泡0.5小時 后，用蒸餾水清洗5次后，將支架本體放入真空干燥箱中，在80°C干燥0.5小時；步驟B-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將CD34抗體固定在支架本體表面支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟B-2處理后的支架本體放入含碳化二亞 胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)8小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將 碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 6.5的醋酸鹽緩沖液中；將CD34抗體溶于pH 8的磷酸鹽緩沖液中制得CD34抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入lg/L的CD34抗體溶液中，反應(yīng)36 小時。至此，得到一種支架本體表面固定有CD34抗體及紫杉醇的藥物血管支架。
由上述制備方法得到的每一種藥物血管支架兼具抗平滑肌細(xì)胞增殖功能和內(nèi)皮 祖細(xì)胞捕獲功能藥物攜帶功能界面由載藥聚酯類高分子聚合物涂層構(gòu)成；利用載藥聚 酯類高分子聚合物涂層界面的羧基官能團(tuán)，可以有效的將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體偶聯(lián)到支 架載藥涂層界面。通過在支架載藥涂層上攜帶內(nèi)皮細(xì)胞捕獲功能界面，將改善傳統(tǒng)藥物 洗脫支架引起的內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)延遲。該支架可以一方面抑制平滑肌細(xì)胞的增殖，另一方 面促進(jìn)內(nèi)皮的修復(fù)進(jìn)程，這樣既保障了藥物洗脫支架減少再狹窄，又避免了內(nèi)皮修復(fù)延 遲引起的支架內(nèi)血栓，將從根本上改變目前再狹窄的治療現(xiàn)狀。盡管上面結(jié)合圖對本發(fā)明進(jìn) 行了描述，但是本發(fā)明并不局限于上述的具體實(shí)施 方式，上述的具體實(shí)施方式
僅僅是示意性的，而不是限制性的，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 在本發(fā)明的啟示下，在不脫離本發(fā)明宗旨的情況下，還可以作出很多變形，這些均屬于 本發(fā)明的保護(hù)之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種表面固定有抗體的藥物血管支架的制備方法，其中，支架包括支架本體，所 述支架本體上涂覆有載藥聚酯類高分子聚合物，在涂覆有載藥聚酯類高分子聚合物涂層 的支架本體表面固定有抗體，其特征在于制備所述藥物血管支架的步驟包括具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制 備；載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂覆；采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞 捕獲功能抗體固定在支架本體表面；其中步驟A-1、具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制備所述聚酯類高分子聚合物是聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一種及由以上聚合物通 過嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；按質(zhì)量比為1 5-40的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于裝有二氯甲烷的聚合 封管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚酯類高分子聚合物與馬 來酸酐及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 5-40 1-8，用真空泵抽去溶劑，抽真空氮?dú)?置換2-4次，在真空度為5-80Pa封管，在100_150°C，反應(yīng)8_48小時，冷至室溫；將反 應(yīng)產(chǎn)物充分溶于三氯甲烷中，加入乙醚沉淀，即可得到一種具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高 分子聚合物；步驟A-2、載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂覆 制備載藥聚酯類高分子聚合物配制混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分子聚 合物溶液按照重量百分比為-30%的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于有機(jī)溶 劑中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物，使所述聚酯類高分子聚合物與所 述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為100 1-40 ；將上述配制的混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分子聚合物溶液均勻的噴涂或 涂覆于所述支架本體表面，再將帶有上述載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真空干 燥箱中，在20-80°C干燥0.5-72小時固化；步驟A-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表面 支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放入含碳化二亞胺類 交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)0.5-8小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將碳 化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 4.5-6.5的醋酸鹽緩沖液中；將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 5-8的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.001-lg/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液 中，反應(yīng)6-36小時。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述藥物血管支架的制備方法，其中，所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物 包括紫杉醇及其衍生物、雷帕霉素、地塞米松、長春新堿及其衍生物及他汀類藥物中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述藥物血管支架的制備方法，其中，所述內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體包 括CD34抗體、CD133抗體、CD31抗體、CD45抗體及血管內(nèi)皮生長因子中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述藥物血管支架的制備方法，其中步驟A-I中按質(zhì)量比為1 10-20的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于裝有 二氯甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚酯類高分子聚合物與馬來酸酐及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 20-35 3-6，用真空泵抽去 溶劑，抽真空氮?dú)庵脫Q2-4次，在真空度為40-70Pa封管，在110_130°C，反應(yīng)12-36小 時，冷至室溫；步驟A-2中所述聚酯類高分子聚合物與所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為 100 10-30 ；帶有載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在30-65°C干燥18-56小 時固化；步驟A-3的支架本體表面的活化過程中將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放 入含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)1-4小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交 聯(lián)劑的溶液是將碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 5-6的醋酸鹽緩沖液中；將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 6-7.5的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.05-0.5g/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液 中，反應(yīng)12-24小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述藥物血管支架的制備方法，其中步驟A-I中按質(zhì)量比為1 15的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于裝有二氯 甲烷的聚合封管中，向上述溶液中加入馬來酸酐和過氧化二苯甲酰，所述聚酯類高分子 聚合物與馬來酸酐及過氧化二苯甲酰的質(zhì)量比為100 30 5，用真空泵抽去溶劑，抽真 空氮?dú)庵脫Q3次，在真空度為60Pa封管，在120°C，反應(yīng)24小時，冷至室溫；步驟A-2中所述聚酯類高分子聚合物與所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為 100 20 ；帶有載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在60°C干燥48小時固化；步驟A-3的支架本體表面的活化過程中將經(jīng)過上述步驟A-2處理后的支架本體放 入含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)2小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián) 劑的溶液是將碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 5.5的醋酸鹽緩沖液中；將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.2g/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液中， 反應(yīng)18小時。
6.—種表面固定有抗體的藥物血管支架的制備方法，其中，支架包括支架本體，所 述支架本體上涂覆有載藥高分子聚合物，在涂覆有載藥高分子聚合物涂層的支架表面固 定有抗體，其特征在于制備所述藥物血管支架的步驟包括載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂 覆；支架本體上載藥聚酯類高分子聚合物涂層表面的羧基化；采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮 祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表面；其中步驟B-1、載藥聚酯類高分子聚合物在支架本體表面的涂覆 所述聚酯類高分子聚合物包括聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯中的一種及由以上聚合物 通過嵌段、接枝、共混方式所得到的聚合物；制備載藥聚酯類高分子聚合物配制混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分子聚 合物溶液按照重量百分比為-30%的比例，將所述聚酯類高分子聚合物溶于有機(jī)溶 劑中，向上述溶液中加入所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物，使所述聚酯類高分子聚合物與所 述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為100 1-40 ；將上述配制的混有抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的聚酯類高分子聚合物溶液均勻的噴涂或 涂覆于所述支架本體表面，再將帶有上述載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真空干 燥箱中，在20-80°C干燥0.5-72小時固化；步驟B-2、支架本體上載藥聚酯類高分子聚合物涂層表面的羧基化 將上述步驟B-I處理過的支架本體浸入0.001-10g/L的氫氧化鈉溶液中浸泡0.5-24小 時后，用蒸餾水清洗2-5次后，將支架本體放入真空干燥箱中，在20-80°C干燥0.5-72小 時；步驟B-3、采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表面 支架本體表面的活化將經(jīng)過上述步驟B-2處理后的支架本體放入含碳化二亞胺類 交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)0.5-8小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液是將碳 化二亞胺類交聯(lián)劑溶于PH4.5-6.5的醋酸鹽緩沖液中；將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 5-8的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.001-lg/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液 中，反應(yīng)6-36小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述藥物血管支架的制備方法，其中，所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物 包括紫杉醇及其衍生物、雷帕霉素、地塞米松、長春新堿及其衍生物及他汀類藥物中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述藥物血管支架的制備方法，其中，所述內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體包 括CD34抗體、CD133抗體、CD31抗體和CD45抗體及血管內(nèi)皮生長因子中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述藥物血管支架的制備方法，其中步驟B-I中所述聚酯類高分子聚合物與所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為 100 10-30 ；帶有載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在30-65°C干燥18-56小 時固化；步驟B-2中將上述步驟B-I處理過的支架本體浸入0.1-lg/L的氫氧化鈉溶液中浸 泡6-12小時后，用蒸餾水清洗2-5次后，將支架本體放入真空干燥箱中，30-65°C干燥 18-56小時；步驟B-3的支架本體表面的活化過程中將經(jīng)過上述步驟B-2處理后的支架本體放 入含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)1-4小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交 聯(lián)劑的溶液是將碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 5-6的醋酸鹽緩沖液中；將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 6-7.5的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.05-0.5g/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液 中，反應(yīng)12-24小時。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述藥物血管支架的制備方法，其中步驟B-I中所述聚酯類高分子聚合物與所述抗平滑肌細(xì)胞增殖藥物的質(zhì)量比為 100 20 ；帶有載藥高分子聚合物涂層的支架本體放入真空干燥箱中，在60°C干燥48小時固化；步驟B-2中將上述步驟B-I處理過的支架本體浸入0.4g/L的氫氧化鈉溶液中浸泡 8小時后，用蒸餾水清洗3次后，將支架本體放入真空干燥箱中，60°C干燥48小時；步驟B-3的支架本體表面的活化過程中將經(jīng)過上述步驟B-2處理后的支架本體放 入含碳化二亞胺類交聯(lián)劑的溶液中反應(yīng)2小時進(jìn)行表面活化，所述含碳化二亞胺類交聯(lián) 劑的溶液是將碳化二亞胺類交聯(lián)劑溶于pH 5.5的醋酸鹽緩沖液中；將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中制得內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液；偶聯(lián)抗體將上述表面活化的支架本體放入0.2g/L的內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲抗體溶液中， 反應(yīng)18小時。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種表面固定有抗體的藥物血管支架的制備方法，制備步驟為1)具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物的制備，采用合成或水解方式；2)載藥聚酯類高分子聚合物在支架表面的涂覆；3)采用化學(xué)偶聯(lián)方式將內(nèi)皮祖細(xì)胞捕獲功能抗體固定在支架本體表面。本發(fā)明的一種表面固定有抗體的藥物血管支架，以具有羧基官能團(tuán)的聚酯類高分子聚合物作為支架載藥涂層，獲得表面羧基化的藥物支架，使支架表面兼具生物相容性和生物活性，其羧基功能化表面為下一步負(fù)載有效劑量的抗體提供了豐富的結(jié)合位點(diǎn)。該支架同時具有藥物攜功能和內(nèi)皮細(xì)胞捕獲功能，從而使該支架具有優(yōu)良的治療再狹窄和促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)的功能。
文檔編號A61L31/10GK102018996SQ20101058724
公開日2011年4月20日 申請日期2010年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月14日
發(fā)明者孫洪范, 宋存先, 馬桂蕾 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所