專利名稱：一種新型疫苗佐劑及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種疫苗佐劑及其制備方法，特別涉及一種新型的水包油疫苗佐劑及其制備方法，又稱一種SPOl佐劑，用于不同類型抗原的疫苗制備，用于不同年齡人群、動(dòng)物免疫接種所需疫苗佐劑。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的迅速發(fā)展，裂解疫苗、重組亞單位疫苗、抗獨(dú)特型抗體疫苗、 核酸疫苗及合成肽疫苗等得到開發(fā)。這些疫苗抗原純度高，相對(duì)分子量小，疫苗的不良反應(yīng)低，然而這些抗原的免疫原性和免疫保護(hù)性普遍較弱，為了提高抗原的有效性，必須在抗原中添加佐劑以增強(qiáng)它們誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的能力。佐劑與抗原同時(shí)或預(yù)先應(yīng)用，能增強(qiáng)機(jī)體針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力，或改變免疫反應(yīng)類型。其功能主要有使用部位招攬免疫細(xì)胞和免疫分子，增強(qiáng)免疫應(yīng)答；增強(qiáng)疫苗抗原傳遞；增進(jìn)免疫接觸；增強(qiáng)弱抗原的免疫原性和免疫記憶，如高度純化的抗原或重組抗原；減少抗原接種劑量和接種次數(shù)；促進(jìn)疫苗在免疫應(yīng)答能力弱的群體中的免疫效果；加快免疫應(yīng)答的速度和延長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間；改變抗原的構(gòu)型；改變體液抗體的種類、IgG亞類和抗體的親和性，以及細(xì)胞免疫和黏膜免疫效應(yīng)。理想的佐劑不僅沒有免疫原性并能增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答，更能使機(jī)體獲得最佳的保護(hù)性免疫和免疫記憶。鋁佐劑是目前普遍被批準(zhǔn)用于人類疫苗的主要佐劑，自1擬6年Glermy首先應(yīng)用鋁鹽吸附白喉類毒素至今已廣泛應(yīng)用于疫苗，有磷酸鋁和氫氧化鋁兩種鋁鹽佐劑。但是鋁佐劑以體液免疫應(yīng)答為主，不能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和黏膜免疫應(yīng)答效應(yīng)，特別是近幾年發(fā)現(xiàn)多次使用出現(xiàn)免疫抑制和累積中毒而使用受限，并且對(duì)一些疫苗抗原無效，有些出現(xiàn)注射部位偶有嚴(yán)重的局部反應(yīng)出現(xiàn)紅斑皮下結(jié)節(jié)接觸性過敏和肉芽腫性炎癥，因此尋找新的疫苗佐劑成為疫苗學(xué)的重大現(xiàn)實(shí)問題。此后，1997年歐洲國(guó)家批準(zhǔn)水包油MF59、virosomes佐劑上市，其產(chǎn)生的抗體效價(jià)比鋁佐劑安全性高、效果好，而且兼顧產(chǎn)生一定細(xì)胞免疫效應(yīng)， 是鋁鹽被批準(zhǔn)使用70年后第一個(gè)被允許用于人體的疫苗佐劑。隨后2005年在Montanide W/0水包油佐劑中加入維生素E制備的AS03 ；2007年在MPL中加入鋁鹽制備的AS04佐齊IJ， 均在歐洲上市。這類佐劑通過注射接種增強(qiáng)疫苗抗原的免疫原性，誘導(dǎo)特異的抗體反應(yīng)，激發(fā)Thl型細(xì)胞因子(IFN-y、IL-2等)產(chǎn)生較強(qiáng)的CTL反應(yīng)。除此以外，許多其他新型佐劑也層出不窮，比如MPL、PolyI C、免疫刺激復(fù)合物、CPG-OPN疫苗佐劑等，均有各自的優(yōu)勢(shì)和不足。因此發(fā)展尋求新的安全的佐劑已成為迫求需求。特別是既用于注射又能用于黏膜、 透皮免疫佐劑越來越為人們所重視，至今還沒有，并成為今后佐劑發(fā)展的重要領(lǐng)域。非注射免疫疫苗在抵御氣溶膠感染多種重大傳染病病預(yù)防方面發(fā)揮了重要作用， 具有巨大的發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景，這已是不爭(zhēng)的事實(shí)。然而，在發(fā)展黏膜、透皮非注射免疫疫苗過程中最大的障礙是尋找安全、高效的疫苗佐劑系統(tǒng)。佐劑是疫苗產(chǎn)品的主要成分，在新型疫苗設(shè)計(jì)中具有重要作用，它通過與抗原同時(shí)或預(yù)先應(yīng)用，能夠增強(qiáng)機(jī)體針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力，或改變免疫反應(yīng)類型。佐劑作用的確切機(jī)制未明，據(jù)報(bào)道與下列因素有關(guān)，延長(zhǎng)抗原滯留時(shí)間；減少抗原接種劑量和接種次數(shù)；促進(jìn)疫苗在免疫應(yīng)答能力弱的群體中的免疫效果；加快免疫應(yīng)答的速度和延長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間；增強(qiáng)免疫細(xì)胞激活所需要的協(xié)同刺激信號(hào)；誘生肉芽腫(富含巨噬細(xì)胞)的形成促進(jìn)T細(xì)胞激活；刺激淋巴細(xì)胞非日特異性增殖等。因此，針對(duì)新發(fā)、突發(fā)重大傳染病黏膜疫苗及疫苗通用技術(shù)平臺(tái)急需開發(fā)新型的通用型黏膜免疫佐劑，以增強(qiáng)黏膜疫苗的免疫應(yīng)答和免疫保護(hù)效果，同時(shí)減少疫苗的接種劑量和接種次數(shù)。非注射免疫疫苗在抵御氣溶膠感染多種重大傳染病病預(yù)防方面發(fā)揮了重要作用。 鼻免疫系統(tǒng)廣泛而復(fù)雜，它是呼吸道的開始，處于中耳、眼、口腔抵抗抗原物質(zhì)的樞紐位置， 有保護(hù)下呼吸道的作用；它可對(duì)遠(yuǎn)處黏膜如泌尿生殖道、胃腸道免疫反應(yīng)也能起到免疫應(yīng)答保護(hù)。黏膜免疫系統(tǒng)區(qū)別于全身系統(tǒng)免疫的特征是天然防護(hù)的形成機(jī)制，一定數(shù)量獨(dú)特淋巴細(xì)胞集群的存在，起源于黏膜組織的細(xì)胞對(duì)黏膜和外分泌腺的聚集以及對(duì)非危險(xiǎn)抗原反應(yīng)抑制的優(yōu)先誘導(dǎo)。同樣皮膚是疫苗免疫的一個(gè)理想部位，表皮中富含郎格罕斯細(xì)胞及皮下、肌肉中富含樹突狀抗原提呈細(xì)胞，形成獨(dú)特強(qiáng)有力的免疫識(shí)別、應(yīng)答和效應(yīng)網(wǎng)絡(luò)。 通過皮膚機(jī)體能有效接觸外來抗原產(chǎn)生系統(tǒng)免疫應(yīng)答和粘膜免疫應(yīng)答的雙重效應(yīng)，從而達(dá)到全面免疫保護(hù)效果，并且抗原與提呈細(xì)胞直接接觸大大降低抗原用量，以及微針矩陣 (microneedle arrays)、透皮(pacth)貼劑非注射免疫使得抗原大面積散布在黏膜、皮膚免疫組織中有更多機(jī)會(huì)被抗原細(xì)胞利用，誘發(fā)產(chǎn)生系統(tǒng)免疫與黏膜免疫及細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而提高免疫保護(hù)效果的優(yōu)勢(shì)，這是有針注射免疫不能并寐的。因此需要提高疫苗的安全性、耐受性、免疫原性和免疫保護(hù)性就要在靶向局部和系統(tǒng)同時(shí)提高全面免疫應(yīng)答和效應(yīng)反應(yīng)。目前，越來越多的純化的具有良好特性的疫苗與佐劑結(jié)合，并試圖提高成人、兒童及老年人特殊人群，以及動(dòng)物的免疫原性。所以，篩選制備具有體液免疫與細(xì)胞免疫、黏膜免疫與系統(tǒng)免疫以及天然免疫與獲得性免疫應(yīng)答的疫苗佐劑是很有必要
發(fā)明內(nèi)容

用。
本發(fā)明的目的在于提供一種新型疫苗佐劑，另一個(gè)目的在于提供其制備方法及應(yīng)
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn) 本發(fā)明疫苗佐劑的原料組成為 角鯊烯
聚氧乙烯蓖麻油聚醚緩沖液
本發(fā)明疫苗佐劑的原料組成優(yōu)選為 角鯊烯2. 5%-10%
聚氧乙烯蓖麻油0.1^-5%
聚醚0.1%-5%
緩沖液加至100%
本發(fā)明疫苗佐劑的原料組成優(yōu)選為
2. 0% -12. 5% 0. 05% -10% 0. 05% -10% 加至100%
角鯊烯聚氧乙烯蓖麻油
5. 0%
0. 25% -0. 5% 0. 25% -0. 5% 加至100%聚醚緩沖液其中所述的原料百分比是w/v的關(guān)系；其中所述的緩沖液是去離子水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鈉緩沖液中的一種。其中所述的角鯊烯(Squalene)屬開鏈三萜，又稱魚肝油萜，其中文的化學(xué)名稱是角鯊烯或(全E)-2，6，10，15，19，23-六甲基_2，6，10，14，18，22-二十四碳己烯，其英文名稱是 Squalene 或 6,10,14,18, 22-Tetracosahexaene, 2,6,10,15,19, 23-hexamethyl-, (all-Ε)-2 或(e, e, e, e)-squalene 或 14, 18, 22-tetracosahexaene,2,6,10,15,19, 23-hexamethyl-(all-e)-10 或 spinacen。其 CAS :111-02-4,分子式=C30H50,分子質(zhì)量 410. 72，沸點(diǎn)285°C，熔點(diǎn)-75_286°C，來源于動(dòng)物、植物提取或化學(xué)合成。其中所述的聚氧乙烯蓖麻油(polyoxyethylenated castor oil)是非離子型表面活性劑，主要起乳化作用。HLB值13，濁點(diǎn)85°C，商品名稱是乳化劑EL。其中所述的聚醚(poly ethylene glycol block-poly propylene glycol block-polyethylene glycol)又稱聚乙二醇醚，關(guān)于聚醚的配方是以環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷、環(huán)氧丁烷和四氫呋喃等為原料，在催化劑作用下開環(huán)均聚或共聚制得的線型聚合物。本發(fā)明疫苗佐劑簡(jiǎn)稱為SPOl佐劑。取上述原料，按照常規(guī)工藝制成疫苗佐劑。本發(fā)明疫苗佐劑的制備方法為取原料使用勻漿機(jī)制備初乳，勻漿條件為轉(zhuǎn)速5000rpm-15000rpm，時(shí)間 I-IOmin ；或者使用超聲波來制備初乳，超聲5-10次，45s/次，初乳的粒徑為x1(1 = 1612. 39 士 10nm，x5(l = 1969. 24 士 10nm，x9(l = 2401. 49 士 10nm，SMD = 1946. 88 士 10nm，VMD = 1992. 92士 IOnm(見圖1)；均質(zhì)初乳均質(zhì)條件為壓力5000-8000psi，5_8個(gè)循環(huán)，測(cè)量其粒徑為 Xltl = 197. 10 士 10nm，X50 = 240. 37 士 10nm，X90 = 292. 69 士 10nm，SMD = 237. 53 士 IOnm, VMD = 243. 16士 10nm，(見圖2)，再次均質(zhì)，均質(zhì)條件壓力8000_15000psi，5-8個(gè)循環(huán)， 測(cè)量其粒徑為 Xltl = 125. 12 士 10nm，X50 = 155. M±10nm，X90 = 193. 14 士 10nm，SMD = 153. 30士 lOnm，VMD = 157. 78士 IOnm(見圖3)，制備成乳白色的疫苗佐劑制劑后，緩沖液選擇去離子水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鈉緩沖液中的一種，采用0. 22μπι濾器過濾除菌，即得。佐劑電鏡圖片(見圖4、圖5)。其中所述的勻漿條件優(yōu)選為轉(zhuǎn)速6000rpm，時(shí)間2-5min，或者用超聲波來制備初乳時(shí)優(yōu)選超聲6-8次。其中制備初乳、均質(zhì)初乳以及再次均質(zhì)時(shí)粒徑的測(cè)量方法為常規(guī)測(cè)量方法。本發(fā)明疫苗佐劑可以是溶液所形成膠體或微球，顆粒大小均勻，粒徑在 90nm-200nm之間，平均粒徑150nm左右；本發(fā)明水包油疫苗佐劑，可與各種抗原如滅活全病原體、裂解病原提取組分、細(xì)菌囊泡、莢膜多糖或多糖結(jié)合蛋白、重組蛋白、重組VLP、DNA或 RNA核酸等混勻，制備不同類型的疫苗，其中所述疫苗按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的注射劑、微針矩陣劑、噴鼻劑、透皮貼劑等各種劑型，其中所述疫苗適用于不同年齡人群、不同動(dòng)物的免疫接種。本發(fā)明是一種安全有效且穩(wěn)定的SPOl疫苗佐劑，能夠招攬抗原注射部位或黏膜部位免疫細(xì)胞和免疫分子聚集，增強(qiáng)特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答效應(yīng)，可調(diào)節(jié)抗體對(duì)抗原的親和性與專一性；同時(shí)可以通過注射或黏膜等途徑免疫，且黏膜途徑免疫與注射疫苗免疫相比，黏膜接種疫苗具有成本低，給藥方便，避免交叉感染，安全性高的特點(diǎn)；本發(fā)明的SPOl疫苗佐劑可適用于兒童、老年人、孕婦等特殊群體，以及各種動(dòng)物的免疫接種；并且沒有復(fù)雜結(jié)構(gòu)，工藝簡(jiǎn)單，適宜大批量生產(chǎn)產(chǎn)業(yè)化。


圖 1 制備初乳的粒徑:x10 = 1612. 39nm, X50 = 1969. 24nm, X90 = 2401. 49nm, SMD =1946. 88nm, VMD = 1992. 92nmm ；圖 2 均質(zhì)初乳的粒徑:χ10 = 197. IOnm, X50 = 240. 37nm, X90 = 292. 69nm, SMD = 237. 53nm, VMD = 243. 16nm ；圖3 :再次均質(zhì)初乳的粒徑:x10 = 125. 12nm,x50 = 155. 54nm，x90 = 193. 14nm, SMD =153. 30nm, VMD = 157. 78nm ；圖4、圖5:佐劑電鏡圖片下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步證明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例1 SPOl佐劑的安全性實(shí)驗(yàn)1、無菌、支原體試驗(yàn)將實(shí)施例1制備的SPOl佐劑接種硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基培養(yǎng)14d，并以無菌生理鹽水做陰性對(duì)照，培養(yǎng)溫度為25°C、35°C。結(jié)果顯示， SPOl疫苗佐劑未見細(xì)菌生長(zhǎng)。將SPOl佐劑分別用半流體和肉湯培養(yǎng)基，37°C初代培養(yǎng)21 天，次代培養(yǎng)21天，無菌生理鹽水做陰性對(duì)照，結(jié)果顯示SPOl佐劑無支原體生長(zhǎng)；用DNA染色法將毒種接種Vero細(xì)胞后培養(yǎng)3天，傳代一次，用二苯甲酰胺熒光染料染色，結(jié)果顯示疫苗佐劑無支原體生長(zhǎng)。2、溶血性試驗(yàn)選取體重為350g左右的豚鼠，采集新鮮豚鼠血1ml，用PBS洗滌3次，再將血細(xì)胞體積恢復(fù)并稀釋10倍。PBS稀釋SPOl佐劑(SP01佐劑由實(shí)施例1制備)，分別為2倍、4 倍、8倍，將豚鼠血細(xì)胞加入到稀釋的待檢佐劑中，8小時(shí)后，評(píng)價(jià)血球溶解以目測(cè)或者上清濃度檢測(cè)為準(zhǔn)，并在570nm處檢測(cè)吸光度。結(jié)果顯示，沒有發(fā)生血球破裂，無溶血現(xiàn)象。說明SPOl佐劑中的成分不能使紅細(xì)胞裂解。因此，SPOl疫苗佐劑無溶血反應(yīng)。3、急性毒性試驗(yàn)取實(shí)施例1制備的SPOl佐劑0. 5ml腹腔注射體重為12 18g Balb/C小鼠，每組 10只，同時(shí)設(shè)PBS陰性對(duì)照組，連續(xù)2周觀察小鼠的活動(dòng)狀態(tài)、體重變化和存活率。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)小鼠全部存活，沒有出現(xiàn)豎毛、精神萎靡、行動(dòng)遲緩等不良癥狀，而體重呈現(xiàn)增加， 由此證明新型佐劑在試驗(yàn)的濃度下對(duì)動(dòng)物是安全的，且14天后處死進(jìn)行大體解剖檢查，未見臟器有病理改變。在體重為8 IOkg的Beagle狗體內(nèi)的急性毒性結(jié)果取實(shí)施例1制備的SPOl佐劑肌肉或腹腔注射15ML，每組10只，同時(shí)設(shè)PBS陰性對(duì)照組，連續(xù)2周觀察行為、體重和存活率變化。結(jié)果可見，Beagle狗未見毒性反應(yīng)，行為正常，沒有死亡，與對(duì)照組狗比較無差異，各狗體重有所增加，并處死大體解剖未見臟器有明顯的病理改變。根據(jù)此結(jié)果換算成人用劑量，例一個(gè)50公斤的成年人，可使用SPOl的最大安全劑量是50ml-100ml。因此，SPOl疫苗佐劑在動(dòng)物、人體體內(nèi)無急性毒性反應(yīng)，使用是安全的。4、最大致死量試驗(yàn)分別取實(shí)施例1制備的SPOl佐劑200ul、500ul、1000ul、1500ul腹腔注射體重為12 18g Balb/C小鼠，每劑量組5只，連續(xù)2周觀察小鼠的死亡情況。由試驗(yàn)可得出 200ul、500ul組小鼠沒有出現(xiàn)任何異常狀態(tài)，飲食睡眠行動(dòng)均很正常，體重增加；IOOOul組小鼠在注射后兩天內(nèi)體重平均下降l_2g左右，5天后體重開始上升，沒有其它異?，F(xiàn)象。 取小鼠肺、脾、腎、肝等內(nèi)臟制備病理切片，發(fā)現(xiàn)IOOOuI組小鼠肺部和肝部有散在出血點(diǎn)。 1500ul組小鼠在腹腔注射M小時(shí)內(nèi)陸續(xù)死亡。結(jié)果1500ul佐劑是小鼠的最大致死劑量。5、過敏試驗(yàn)研究取實(shí)施例1制備的SPOl佐劑皮下接種體重為250 350g Hartley豚鼠，每個(gè)樣品接種豚鼠5只，每只接種0. 5ml，隔日一次，共3次。第3次注射后21天，耳靜脈給予相同 SPOl佐劑0. 5ml，并用人血白蛋白和生理鹽水以同樣的方法分別接種3只豚鼠作為陽(yáng)性、陰性對(duì)照。注射后30分鐘及3天觀察動(dòng)物，陽(yáng)性、陰性對(duì)照均成立，SPOl佐劑組豚鼠無死亡， 且無鼻癢、噴嚏、煩躁不安、呼吸困難、休克、痙攣等過敏癥狀。因此，SPOl疫苗佐劑在動(dòng)物體內(nèi)無過敏反應(yīng)。6、兔熱源質(zhì)試驗(yàn)取預(yù)檢合格的體重為2 3kg家兔3只固定，30分鐘后測(cè)量體溫，共測(cè)2次，間隔30分鐘，要求2次溫差不大于0. 2°C，各家兔2次平均溫度在38. 6-39. 5°C。將實(shí)施例1 制備的SPOl疫苗佐劑預(yù)熱至38°C，于第2次測(cè)溫后15分鐘內(nèi)，自家兔耳邊靜脈緩緩注入 0.5ml/只。注射后每隔30分鐘測(cè)量體溫1次，連測(cè)6次。結(jié)果顯示SPOl佐劑給予家兔個(gè)體升溫未超過0. 2°C，3只家兔升溫總和未超過0. 4°C，沒有引起家兔的發(fā)熱反應(yīng)。因此，制備的SPOl佐劑無熱源質(zhì)。7、血管刺激性研究取實(shí)施例1制備的SPOl佐劑通過肌肉注射或噴鼻給體重為18g Balb/C小鼠、2 3. 5kg恒河猴、50Kg人體，每次500ul，每日2次，連續(xù)5日，結(jié)果鼻腔或肌肉注射Balb/C小鼠、恒河猴、人體表現(xiàn)正常，沒有不適等反應(yīng)，與給生理鹽水組無明顯變化；Balb/C小鼠、恒河猴鼻腔、氣管和肺臟，以及注射部位病理切片顯微鏡檢未見有炎性浸潤(rùn)、血管周圍組織出血及壞死等刺激現(xiàn)象。因此，制備的SPOl佐劑無明顯血管刺激性、黏膜刺激性。8、長(zhǎng)期毒性研究分別將低(0. 5ml)、中(Iml)、高(2ml)劑量的SPOl佐劑肌肉注射體重為250 300g的成年大鼠和8 IOkg的Beagle犬，每天注射一次，連續(xù)給藥1個(gè)月，觀察其體重和體表變化、精神狀態(tài)、食欲、睡眠情況及血液中細(xì)胞變化情況，連續(xù)觀察三個(gè)月。結(jié)果顯示是反復(fù)給藥后高劑量組的大鼠體重在停藥給藥21天兩周內(nèi)出現(xiàn)下降，精神不振，食欲不佳， 體重下降，并停止注射SPOl佐劑后很快恢復(fù)正常；其余低中劑量?jī)山M連續(xù)注射30天體重沒有出現(xiàn)明顯的波動(dòng)，精神狀態(tài)良好，食欲和睡眠情況沒有明顯變化。由此，SPOl佐劑中、低
7劑量給與Beagle犬沒有長(zhǎng)期毒性。9、代謝降解性研究采用放射性131I-標(biāo)記結(jié)合分子排阻高效液相(SHPLC)和TCA酸沉淀放射性測(cè)定研究I-標(biāo)記物在體重為3. 5 5kg獼猴血清中濃度、代謝降解變化及時(shí)間過程；及總放射性在尿、糞排泄物中的排泄量和時(shí)間過程，研究SPOl佐劑在體外與血漿蛋白結(jié)合的情況。其中SPOl佐劑由實(shí)施例1方法制備；(1)選取健康獼猴3只，皮下注射125I-SPOl佐劑0. 2ml,收集給藥前以及給藥后 0. 5、l、2、4、8、12、M、48、72、96、120h靜脈血，血清加入等量20% TCA沉淀蛋白，測(cè)定總γ 放射性，結(jié)果見表1。(2)選取健康獼猴3只，皮下注射125I-SPOl佐劑0. &ι1，喂其標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水， 注射后12、48、72、120、168和19 分別收集尿和糞，測(cè)定γ放射性，計(jì)算排出放射性占注入放射性量的百分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表2。表1給藥后不同時(shí)間檢測(cè)靜脈血中總Y放射性
[006權(quán)利要求
1.一種新型疫苗佐劑，其特征在于該疫苗佐劑的原料組成為角鯊烯 2%-12. 5% 聚氧乙烯蓖麻油0.05%-10%聚醚 0.05%-10% 緩沖液加至100%。
2.如權(quán)利要求1所述的疫苗佐劑，其特征在于該疫苗佐劑的原料組成為角鯊烯 2. 5%-10%聚氧乙烯蓖麻油0.1%-5%聚醚 0.1^-5% 緩沖液加至100%。
3.如權(quán)利要求1所述的疫苗佐劑，其特征在于該疫苗佐劑的原料組成為角鯊烯5%聚氧乙烯蓖麻油0. 25%-0. 5%聚醚 0.25%-0.5%緩沖液加至100%。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述的疫苗佐劑，其特征在于其中所述的緩沖液是去離子水、 生理鹽水、磷酸鹽緩沖液或檸檬酸鈉緩沖液中的一種。
5.如權(quán)利要求1-3任一所述的疫苗佐劑的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟取原料使用勻漿機(jī)制備初乳，勻漿條件為轉(zhuǎn)速5000rpm-15000rpm，時(shí)間I-IOmin ；或者使用超聲波來制備初乳，超聲5-10次，45s/次，初乳的粒徑為X10 = 1612. 39士 lOnm，X50 =1969. 24 士 10nm，X90 = 2401. 49 士 10nm，SMD = 1946. 88 士 10nm，VMD = 1992. 92 士 IOnm ； 均質(zhì)初乳均質(zhì)條件為壓力5000-8000psi，5-8個(gè)循環(huán)，測(cè)量其粒徑為x1(1 = 197. 10士 10nm， X50 = 240. 37 士 10nm，X90 = 292. 69 士 10nm，SMD = 237. 53 士 10nm，VMD = 243. 16 士 10nm，再次均質(zhì)，均質(zhì)條件壓力8000-15000psi，5-8個(gè)循環(huán)，測(cè)量其粒徑為x1(1 = 125. 12士 10nm，X50 =155. 54 士 10nm，x9。= 193. 14 士 10nm，SMD = 153. 30 士 10nm，VMD = 157. 78 士 10nm，制備成乳白色的疫苗佐劑制劑后，緩沖液選擇去離子水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液或檸檬酸鈉緩沖液中的一種，采用0. 22 μ m濾器過濾除菌，即得。
6.如權(quán)利要求5所述的疫苗佐劑的制備方法，其特征在于其中所述的勻漿條件為轉(zhuǎn)速6000rpm，時(shí)間2-5min，或者用超聲波來制備初乳時(shí)超聲6_8次。
7.如權(quán)利要求1-3任一所述的疫苗佐劑在制備疫苗中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求4所述的疫苗佐劑在制備疫苗中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求1-3任一所述的疫苗佐劑在與各種抗原制備不同類型的疫苗中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求4所述的疫苗佐劑在與各種抗原制備不同類型疫苗中的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述各種抗原為滅活全病原體、裂解病原提取組分、細(xì)菌囊泡、莢膜多糖或多糖結(jié)合蛋白、重組蛋白、重組VLP、DNA或RNA核酸。
12.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于所述各種抗原為滅活全病原體、裂解病原提取組分、細(xì)菌囊泡、莢膜多糖或多糖結(jié)合蛋白、重組蛋白、重組VLP、DNA或RNA核酸。
13.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的疫苗，按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的注射劑、微針矩陣劑、噴鼻劑、透皮貼劑各種劑型。
14.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的疫苗，按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的注射劑、微針矩陣劑、噴鼻劑、透皮貼劑各種劑型。
15.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的佐劑疫苗適用于不同年齡人群、 不同動(dòng)物的免疫接種。
16.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的佐劑疫苗適用于不同年齡人群、不同動(dòng)物的免疫接種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新型疫苗佐劑(又稱SPO1疫苗佐劑)及其制備方法，本發(fā)明疫苗佐劑主要由角鯊烯、聚氧乙烯蓖麻油和聚醚組成，可以通過注射或噴鼻、透皮非注射等途徑免疫，且非注射接種疫苗具有成本低，給藥方便，避免交叉感染，安全性高的特點(diǎn)；本發(fā)明SPO1疫苗佐劑可與滅活全病原體、裂解病原提取組分、細(xì)菌囊泡、莢膜多糖或多糖結(jié)合蛋白、重組蛋白、重組VLP、DNA或RNA核酸等不同類型抗原制備疫苗，可適用于不同年齡段人群、不同動(dòng)物疫苗制備及免疫接種；并且沒有復(fù)雜結(jié)構(gòu)，工藝簡(jiǎn)單，便于制備和除菌，成本低，適宜大批量生產(chǎn)產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號(hào)A61K9/107GK102370977SQ20101024797
公開日2012年3月14日 申請(qǐng)日期2010年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月6日
發(fā)明者劉春環(huán), 劉永祥, 唐沖, 楊鵬輝, 王希良, 王鋮, 羅德炎, 趙忠鵬, 邢麗 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所, 赤峰博恩藥業(yè)有限公司