專利名稱：一種生物酶制備菌絲體多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，具體的說是一種利用生物酶降解藥用真菌發(fā)酵菌絲體 的細(xì)胞壁制備抗腫瘤菌絲體多糖的方法。
背景技術(shù)：
國內(nèi)外的研究證明藥用真菌子實體和菌絲體多糖具有顯著的抗腫瘤、抗氧化、降 血糖、降血壓和免疫調(diào)節(jié)活性，傳統(tǒng)的多糖提取方法多采用熱水提取法，但該方法提取多糖 的產(chǎn)量較低，致使多糖產(chǎn)品的價格高居不下，不利于對多糖產(chǎn)品的深入開發(fā)和造福廣大普 通民眾。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種工藝簡單，操 作方便，生產(chǎn)效率高，利用生物酶法制備抗腫瘤菌絲體多糖的方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題采用的技術(shù)方案是一種生物酶制備菌絲體多糖的方 法，其包括如下步驟(1)選出的生物酶為溶壁酶；(2)按重量比0. 5-2%的比例向菌絲體干粉中加入溶壁酶；(3)以重量比1 10的比例加入蒸餾水，勻漿；(4)在20-35 °C和pH5_7下進(jìn)行酶解0. 5-2小時；(5)酶解結(jié)束后，將酶解混合液直接放入90-100°C水浴中提取1-2小時；(6)將酶解混合液于5000轉(zhuǎn)/分鐘下離心20分鐘，收集上清液；(7)向上清液中加3倍體積的酒精后于4°C下沉淀10-24小時；(8) 5000轉(zhuǎn)/分鐘下離心20分鐘，收集沉淀，經(jīng)95%乙醇洗滌2次，即得到菌絲體 多糖。本發(fā)明方法與傳統(tǒng)熱水提取法的顯著不同在于首先利用溶壁酶在適宜條件下， 酶解菌絲體細(xì)胞壁，促使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的降解和破壞，然后，再在90-100°C的溫度下，高溫 進(jìn)一步破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，從而將束縛于菌絲體細(xì)胞內(nèi)的多糖盡可能釋放出來，最終顯著提 高了提取菌絲體多糖的產(chǎn)量，經(jīng)本發(fā)明可使不同種類的藥用真菌的菌絲體多糖產(chǎn)量提高 1. 2-4. 6倍；其次是操作時間大大縮短。本發(fā)明方法與其他酶法制備真菌多糖的顯著不同 在于首先將酶與菌絲體水溶液進(jìn)行勻漿，從而使酶與底物菌絲體充分接觸，顯著提高降解 效率；其次是酶解所需溫度低，僅為20-35°C，而其他方法需要40-55°C，從而減少了能量消 耗。本發(fā)明方法不僅可以用于真菌菌絲體胞內(nèi)多糖的提取，還可以用于真菌子實體多糖的 提取，以及植物性多糖的提取，真菌子實體多糖的提取可參考利用上述步驟。本發(fā)明是一種 簡便、高產(chǎn)、低耗、高效制備真菌多糖的方法。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實施例1一種生物酶制備真姬菇菌絲體多糖的方法，其首先選出溶壁酶為生物酶；而后， 向1000克真姬菇發(fā)酵菌絲體干粉中，按重量比的比例加入溶壁酶10克，并以重量比 1 10的比例加入蒸餾水后，勻漿，在30°C溫度和PH6.0下進(jìn)行酶解Ih;利用溶壁酶酶解 菌絲體細(xì)胞壁，促使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的降解和破壞；酶解結(jié)束后，將酶解混合液直接放入90°C 水浴中提取lh，在90°C的溫度下，進(jìn)一步破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，從而將束縛于菌絲體細(xì)胞內(nèi)的 多糖盡可能釋放出來，5000rpm離心20min，收集上清液，向上清液中加3倍體積的酒精后于 4°C下沉淀10小時，5000rpm離心20min，收集沉淀，即得到真姬菇菌絲體多糖。本發(fā)明真姬 菇菌絲體多糖沉淀經(jīng)蒸餾水溶解后，用苯酚硫酸法測定沉淀中的真姬菇菌絲體多糖產(chǎn)量為 14. 8克，比對照水提法產(chǎn)量提高1. 6倍。實施例2一種生物酶制備真姬菇菌絲體多糖的方法，其首先選出溶壁酶為生物酶；而后， 向1000克真姬菇發(fā)酵菌絲體干粉中，按重量比0. 7%的比例加入溶壁酶7克，并以重量比 1 10的比例加入蒸餾水后，勻漿，在20°C溫度和PH5.0下進(jìn)行酶解0.5h;利用溶壁酶酶解 菌絲體細(xì)胞壁，促使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的降解和破壞；酶解結(jié)束后，將酶解混合液直接放入90°C 水浴中提取2h，在90°C的溫度下，進(jìn)一步破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，從而將束縛于菌絲體細(xì)胞內(nèi)的 多糖盡可能釋放出來，5000rpm離心20min，收集上清液，向上清液中加3倍體積的酒精后于 4°C下沉淀10小時，5000rpm離心20min，收集沉淀，即得到真姬菇菌絲體多糖。本發(fā)明真姬 菇菌絲體多糖沉淀經(jīng)蒸餾水溶解后，用苯酚硫酸法測定沉淀中的真姬菇菌絲體多糖產(chǎn)量為 12. 8克，比對照水提法產(chǎn)量提高1. 5倍。實施例3一種生物酶制備乳牛肝菌菌絲體多糖的方法，其首先選出溶壁酶為生物酶；而 后，向1000克乳牛肝菌菌絲體干粉中，按重量比2%的比例加入溶壁酶20克，并以重量比 1 10的比例加入蒸餾水后，勻漿，在35°C溫度和PH7下進(jìn)行酶解2小時；利用溶壁酶酶解 菌絲體細(xì)胞壁，促使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的降解和破壞；酶解結(jié)束后，將酶解混合液直接放入100°C 水浴中提取1小時，在100°c的溫度下，進(jìn)一步破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，從而將束縛于菌絲體細(xì)胞 內(nèi)的多糖盡可能釋放出來，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，收集上清液，向上清液中加3倍體積 的酒精后于4°C下沉淀24小時，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，收集沉淀，即得到菌絲體多糖。 本發(fā)明菌絲體多糖沉淀經(jīng)蒸餾水溶解后，用苯酚硫酸法測定沉淀中的多糖產(chǎn)量為37. 5克， 比對照水提法產(chǎn)量提高3. 4倍。實施例4一種生物酶制備荷葉離褶傘菌絲體多糖的方法，其首先選出溶壁酶為生物酶；而 后，向1000克荷葉離褶傘發(fā)酵菌絲體干粉中，按重量比的比例加入溶壁酶10克，并以 重量比1 10的比例加入蒸餾水后，勻漿，在25°C溫度和PH6. 5下進(jìn)行酶解2小時；利用 溶壁酶酶解菌絲體細(xì)胞壁，促使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的降解和破壞；酶解結(jié)束后，將酶解混合液直接 放入95°C水浴中提取2小時，在95°C的溫度下，進(jìn)一步破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，從而將束縛于菌絲 體細(xì)胞內(nèi)的多糖盡可能釋放出來，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，收集上清液，向上清液中加3
4倍體積的酒精后于4°C下沉淀20小時，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，收集沉淀，即得到菌絲 體多糖。本發(fā)明菌絲體多糖沉淀經(jīng)蒸餾水溶解后，用苯酚硫酸法測定沉淀中的多糖產(chǎn)量為 6. 32克，比對照水提法產(chǎn)量提高4. 6倍。
權(quán)利要求
一種生物酶制備菌絲體多糖的方法，其特征在于包括如下步驟(1)選出的生物酶為溶壁酶；(2)按重量比0.5 2％的比例向菌絲體干粉中加入溶壁酶；(3)以重量比1∶10的比例加入蒸餾水，勻漿；(4)在20 35℃和pH5 7下進(jìn)行酶解0.5 2h；(5)酶解結(jié)束后，將酶解混合液直接放入90 100℃水浴中提取1 2小時；(6)將酶解混合液于5000轉(zhuǎn)/分鐘下離心20分鐘，收集上清液；(7)向上清液中加3倍體積的酒精后于4℃下沉淀10 24小時；(8)5000轉(zhuǎn)/分鐘下離心20分鐘，收集沉淀，經(jīng)95％乙醇洗滌2次，即得到菌絲體多糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物酶制備菌絲體多糖的方法，其選出溶壁酶為生物酶；按重量比0.5-2％的比例向菌絲體干粉中加入溶壁酶，并以重量比1∶10的比例加入蒸餾水后，勻漿，在20-35℃溫度和pH5-7下進(jìn)行酶解0.5-2小時；酶解結(jié)束后，將酶解混合液直接放入90-100℃水浴中提取1-2h，5000轉(zhuǎn)/分鐘下離心20分鐘，收集上清液，向上清液中加3倍體積的酒精后于4℃下沉淀10-24小時，5000轉(zhuǎn)/分鐘下離心20分鐘，收集沉淀，即得到菌絲體多糖。本發(fā)明工藝簡單，操作方便，能量消耗少，利用生物酶法高產(chǎn)、高效制備真菌多糖。其不僅可以用于真菌菌絲體胞內(nèi)多糖的提取，還可以用于真菌子實體多糖的提取。
文檔編號A61P35/00GK101906173SQ20101024550
公開日2010年12月8日 申請日期2010年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月2日
發(fā)明者曹立新, 閆培生, 馬麗雅 申請人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)(威海)