專利名稱：一種復(fù)合酶類化痰藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及酶類化痰藥的處方、制劑及其臨床應(yīng)用，尤其是由蛋白酶和脫氧核糖核酸酶(DNase)組成的復(fù)合酶化痰藥的處方、制劑及制備方法。

背景技術(shù)：
正常生理狀態(tài)下的痰液是呼吸道自我清潔的主要實現(xiàn)形式，然而在病理狀態(tài)，如肺炎、支氣管炎、肺癌等情況下，痰液由于其粘稠性和刺激性會引發(fā)多種生理反應(yīng)，咳嗽、呼吸不順暢等，嚴重情況下甚至?xí)斐蓺夤茏枞麖亩{到患者的生命。因此呼吸道疾病治療中的一個重要組成部分就在于化痰。
痰液的粘稠性主要來自于其組成之一-粘蛋白，目前市面上以此為依據(jù)設(shè)計的化痰藥物已有數(shù)種，例如乙酰半胱氨酸氣霧劑、木瓜蛋白酶含片等等(均已為中國藥典2005版收錄)。但是痰液的粘稠性并不僅僅來自于粘蛋白，在呼吸道炎癥反應(yīng)中，死亡的病菌、受損的呼吸道細胞、死亡的白細胞均會釋放出大量的脫氧核糖核酸(DNA)進入痰液，DNA分子的高聚合度和復(fù)雜空間結(jié)構(gòu)會進一步加強痰液的粘稠性從而形成濃痰，而且當(dāng)DNA分子和粘蛋白分子交織在一起的時候，空間位阻加大增加了痰液中蛋白質(zhì)的降解難度。因此，在化痰藥處方中引入對DNA作用的藥物成分例如脫氧核糖核酸酶(DNase)可能會大大提高對濃痰的化解能力。對此，國內(nèi)外大量的實驗室研究表明，一定劑量的DNase如人重組人脫氧核糖核酸酶I或溶血性鏈球菌來源的鏈道酶在體外對于炎性膿痰的降解作用可以在約5-10分鐘內(nèi)完成，是一種快速、高效的化痰藥物資源。但到目前為止，以脫氧核糖核酸酶為主藥成分或主藥成分之一的上市化痰藥尚未出現(xiàn)。
需要指出的是，與蛋白酶相類似的是，脫氧核糖核酸酶也已成功地應(yīng)用于多種疾病的治療，例如鏈道酶注射劑應(yīng)用于血栓消除(中國藥典2005版收錄之注射劑型)，重組人脫氧核糖核酸酶I應(yīng)用于肺囊性纖維化疾病的治療(美國上市藥物)。近年來，人們也發(fā)現(xiàn)脫氧核糖核酸酶I對于支氣管擴張病人有顯著的肺功能改善作用，這表明脫氧核糖核酸酶會越來越多地應(yīng)用于呼吸道疾病的治療，其呼吸道用藥的安全性毋庸置疑。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服已有技術(shù)的不足之處，提出一種復(fù)合酶類化痰藥，能有效化解口腔、喉部和氣管的痰液，特別是濃痰，以克服痰液對呼吸的阻塞。
本發(fā)明提出的一種復(fù)合酶類化痰藥，該化痰藥由一種或一種以上脫氧核糖核酸酶和一種或一種以上蛋白酶組合及藥用輔料制成的固體制劑或液體制劑；在固體制劑處方中脫氧核糖核酸酶、蛋白酶、輔料的質(zhì)量比例范圍(W/W)為1∶(0.1-1)∶(50-2000)；在液體制劑處方中中脫氧核糖核酸酶、蛋白酶、輔料的質(zhì)量比例范圍(W/W，不包括水、拋射劑及其它共溶劑)為1∶(0.1-1)∶(0.01-100)。
本發(fā)明所涉及的復(fù)合酶類化痰藥，其中的脫氧核糖核酸酶可包括重組人脫氧核糖核酸酶I，牛胰腺脫氧核糖核酸酶I，豬脾臟脫氧核糖核酸酶II，蚯蚓脫氧核糖核酸酶EWD1，溶血性鏈球菌鏈道酶；處方中的蛋白酶包括胰蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、沙雷氏菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、灰色鏈球菌蛋白酶、蠶蛹蛋白酶。
由于脫氧核糖核酸酶為一種蛋白質(zhì)物質(zhì)，易被蛋白酶水解從而失去應(yīng)用價值，因此本發(fā)明所涉及的復(fù)合酶類化痰藥其制劑形式相當(dāng)重要，采用合適的工藝制備成不同的制劑形式不僅僅是臨床應(yīng)用的需要，也是保護和維持復(fù)合酶類化痰藥的生物活性的需要。具體來說 首先是可以通過凍干制劑、片劑、粉霧劑等制劑形式的固態(tài)特點保證蛋白酶和脫氧核糖核酸酶在充分混合的情況下而不會發(fā)生降解作用，從而可以長期保存。其中凍干制劑可現(xiàn)用現(xiàn)配成水溶液或霧化制劑，用于臨時填裝的氣霧劑或噴霧劑，也可在臨床上采用器官滴入的方式用于重癥病人的化痰治療；片劑可以以含片形式服用，用于化解口腔和喉部的痰液；而粉霧劑則可以配合特定的干粉吸入裝置使用，可使藥物微粒進入呼吸道，有效地化解氣管的痰液。
其次，作為呼吸道或口腔后部給藥，也可以采用氣霧劑或噴霧劑兩種液體制劑形式。由于液體制劑可能存在的蛋白酶降解脫氧核糖核酸酶的作用，因此上述兩種液體制劑可以采用兩種主要成分分別制備，使用前再行混合的組合；也可以在液體制劑中引入酶穩(wěn)定劑，同時調(diào)節(jié)水溶液體系pH＝2-5，從而有效地避免蛋白酶降解作用。
本發(fā)明還提出了一種采用上述復(fù)合酶類化痰藥的可長期穩(wěn)定的復(fù)合酶水溶液制備方法 A)將脫氧核糖核酸酶和酶穩(wěn)定劑溶解在一定量的水中得溶液I B)用稀鹽酸將溶液I調(diào)節(jié)至pH＝3-5，得溶液II； C)將蛋白酶溶解在溶液II中得到能夠長期穩(wěn)定保存的復(fù)合酶水溶液。
這其中選擇金屬離子(Mg2+、Ca2+)、氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、半胱氨酸)、多羥基化合物(葡萄糖、甘露醇、甲殼素、山梨糖醇)的組合作為酶穩(wěn)定劑，一方面可以穩(wěn)定兩種酶的構(gòu)象，另一方面結(jié)合pH的調(diào)解可以有效抑制蛋白酶對脫氧核糖核酸酶的降解作用。
除上述處方設(shè)計、組合設(shè)計和相應(yīng)的制備技術(shù)外，本發(fā)明所涉及的制劑具體制備技術(shù)均為常規(guī)技術(shù)，所選用的相關(guān)輔料均為《中國藥典》收錄的相應(yīng)制劑輔料，不在本發(fā)明專利的保護范圍之內(nèi)，故不贅述。
本發(fā)明通過以上設(shè)計和步驟制備脫氧核糖核酸酶/蛋白酶類化痰藥，具有以下優(yōu)勢 本發(fā)明提出的組合脫氧核糖核酸酶和蛋白酶的復(fù)合酶類化痰藥，可以顯著提高藥物化解痰液的能力，尤其是能有效化解阻塞呼吸道、嚴重干擾呼吸功能的濃痰； 本發(fā)明提出的復(fù)合酶水溶液制備方法，很好的保護了脫氧核糖核酸酶在蛋白酶存在下的生物活性，使得這一復(fù)合酶類藥物的穩(wěn)定性可以實現(xiàn)； 本發(fā)明可以滿足多種臨床應(yīng)用的需要。

具體實施例方式 實施例1 凍干制劑取10mg溶血性鏈球菌鏈道酶粉末、5mg牛胰腺脫氧核糖核酸酶I粉末和15mg枯草桿菌蛋白酶粉末溶解于10mL生理鹽水中，加入5mg乳酸鈣和5g乳糖，充分溶解后用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為7.2，置-16℃冰凍干燥機中過夜冰凍干燥后分裝。使用時用2-10mL生理鹽水溶解此凍干制劑為一次劑量(氣管滴入、吸入或口腔噴霧)。
實施例2 片劑將1g豬胰腺脫氧核糖核酸酶I粉末、1g蚯蚓脫氧核糖核酸酶EWD1、500mg木瓜蛋白酶粉末、100mg蠶蛹蛋白酶、200mg胃蛋白酶、10g碳酸鈣和35g亮氨酸加入150g山梨醇糖中，攪拌混勻后壓片制備可得組合酶化痰含片(每片含有10000單位木瓜蛋白酶、2000單位蠶蛹蛋白酶、4000單位胃蛋白酶、4000單位牛胰腺脫氧核糖核酸酶I和4000單位蚯蚓脫氧核糖核酸酶EWD1，每次含服1-2片)。
實施例3 粉霧劑取1g檸檬酸溶解于1000mL生理鹽水中，加入200mg重組人脫氧核糖核酸酶I、10mg沙雷氏菌蛋白酶、10mg灰色鏈球菌蛋白酶攪拌溶解，再加入15克甘露醇、2克蘇氨酸，充分溶解后噴霧干燥得復(fù)合酶制劑粉末，分裝于硬膠囊中用于粉霧劑吸入，每膠囊的吸入量中含2000單位沙雷氏菌蛋白酶、1000單位灰色鏈球菌蛋白酶和2000單位重組人脫氧核糖核酸酶I。
實施例4 粉霧劑將200mg胰蛋白酶溶解于1000mL生理鹽水中，加入10克乳糖，充分溶解后噴霧干燥得含胰蛋白酶的粉末A；將500mg重組人脫氧核糖核酸酶I溶解于1000mL生理鹽水中，加入10克乳糖，充分溶解后噴霧干燥得含重組人脫氧核糖核酸酶I的粉末B；將粉末A和粉末B充分攪拌混合均勻后分裝于硬膠囊中用于粉霧吸入，每膠囊的吸入量中含2000單位胰蛋白酶和1000單位重組人脫氧核糖核酸酶I。
實施例5 噴霧劑(臨時填充)將5mg豬脾臟脫氧核糖核酸酶II、0.5mg冰片、1mg甲殼素溶解在10mL生理鹽水中制備得藥液，使用時將1mg菠蘿蛋白酶粉末加入該藥液中充分溶解后，將藥液與乙醇按照9∶1(W/W)的比例混合均勻后裝入口腔噴霧器中用于口腔噴霧。
實施例6 氣霧劑(臨時填充)將10mg牛胰腺脫氧核糖核酸酶I、0.1mg木糖醇、0.1mg蜂膠溶解在5mL生理鹽水中制備得藥液A；將2mg糜蛋白酶、0.1mg木糖醇、0.1mg蜂膠溶解在5mL生理鹽水中制備得藥液B。使用前將藥液A、藥液 B、異丙醇、1，1，1，2-四氟乙烷按照1∶1∶0.1∶98(W/W)的比例填充入氣霧劑吸入裝置中使用。
實施例7 氣霧劑(長期保存) 第一步 A)將100mg重組人脫氧核糖核酸酶I溶解在5mL生理鹽水中，加入1mg乳酸鈣，充分溶解得溶液I； B)用稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液I至pH＝3，得溶液II； C)再在溶液II中加入25mg糜蛋白酶得到長期穩(wěn)定的復(fù)合酶水溶液； 第二步將該溶液和乙醇、1，1，1，2-四氟乙烷按照1∶0.1∶95(W/W)的比例填充入氣霧劑吸入裝置中則制備成可以長期保存的吸入式氣霧劑。
實施例8 噴霧劑(長期保存) 第一步 A)將100mg鏈道酶溶解在5mL生理鹽水中，加入0.2mg氯化鎂、1mg異亮氨酸、1mg甲殼素，充分溶解得溶液I； B)用稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液I至pH＝4.5，得溶液II； C)再在溶液II中加入5mg胰蛋白酶得到長期穩(wěn)定的復(fù)合酶水溶液； 第二步將該溶液和乙醇按照9∶1(W/W)的比例裝入壓力噴霧器中則制備成可以長期保存的口腔噴霧劑。
實施例9 氣霧劑(長期保存) 第一步 A)將50mg牛胰腺脫氧核糖核酸酶I和50mg豬脾臟脫氧核糖核酸酶II溶解在5mL葡萄糖水溶液(5％)中，加入2mg亮氨酸、1.5mg山梨糖醇，充分溶解得溶液I； B)用稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液I至pH＝3，得溶液II； C)再在溶液II中加入15mg胰蛋白酶得到長期穩(wěn)定的復(fù)合酶水溶液； 第二步將該溶液和乙醇、正丁烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷按照1∶0.1∶5∶90(W/W)的比例填充入氣霧劑吸入裝置中則制備成可以長期保存的吸入式氣霧劑。
實施例10 噴霧劑(長期保存) 第一步 A)將100mg重組人脫氧核糖核酸酶I溶解在5mL生理鹽水中，加入0.1mg氯化鎂、1mg半胱氨酸、2mg甘露醇，充分溶解得溶液I； B)用稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液I至pH＝4，得溶液II； C)再在溶液II中加入5mg木瓜蛋白酶和5mg菠蘿蛋白酶得到長期穩(wěn)定的復(fù)合酶水溶液； 第二步將該溶液和乙醇按照9∶1(W/W)的比例裝入壓力噴霧器中則制備成可以長期保存的口腔噴霧劑。
蛋白酶對痰液的化解作用已為臨床所證明，本發(fā)明所涉及的復(fù)合酶化痰藥物可以在其藥理基礎(chǔ)上進強藥效作用，體外化痰作用試驗如表1所示 表1 表1中；痰液樣本為臨床呼吸道疾病患者咳出膿痰液； 各實驗藥物中各種酶的添加總量為痰液重量的1％； 化痰試驗時添加適量的生理鹽水并置37℃溫浴輕微振蕩，以痰液完全分散為化痰指標(biāo)。
上述實驗表明，在化痰藥物處方中添加適量的脫氧核糖核酸酶確實可以大大加快痰液尤其是膿痰的化解速度。
另如上所述，本發(fā)明提出的復(fù)合酶水溶液制備方法，旨在保護脫氧核糖核酸酶在蛋白酶存在下的生物活性，結(jié)果如表2所示 表2
表2中的實施例5為在溶液中溶解相應(yīng)量蛋白酶后的復(fù)合酶水溶液。
上述實驗表明本發(fā)明提出的復(fù)合酶水溶液制備方法相對于簡單配制溶解，可以極大提高脫氧核糖核酸酶在蛋白酶存在條件下的穩(wěn)定性；當(dāng)然該類制劑仍建議冷藏保存，隨身攜帶藥物應(yīng)在1周內(nèi)用完，這是由蛋白類藥物的特性所決定的。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合酶類化痰藥，其特征在于，該化痰藥由一種或一種以上脫氧核糖核酸酶和一種或一種以上蛋白酶組合及藥用輔料制成的固體制劑或液體制劑；在固體制劑處方中脫氧核糖核酸酶、蛋白酶、輔料的質(zhì)量比例范圍(W/W)為1∶(0.1-1)∶(50-2000)；在液體制劑處方中中脫氧核糖核酸酶、蛋白酶、輔料的質(zhì)量比例范圍(W/W)，為1∶(0.1-1)∶(0.01-100)。
2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶類化痰藥，其特征在于，所述的脫氧核糖核酸酶包括重組人脫氧核糖核酸酶I，牛胰腺脫氧核糖核酸酶I，豬胰腺脫氧核糖核酸酶I，豬脾臟脫氧核糖核酸酶II，蚯蚓脫氧核糖核酸酶EWD1，溶血性鏈球菌鏈道酶。
3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶類化痰藥，特征在于，所述的蛋白酶包括胰蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、沙雷氏菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、灰色鏈球菌蛋白酶、蠶蛹蛋白酶。
4.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶類化痰藥，特征在于，所述固體制劑為凍干制劑、片劑或吸入式粉霧劑之中的任一種；所述液體制劑為用于吸入式氣霧劑或口腔噴霧劑的復(fù)合酶水溶液。
5.一種制備如權(quán)利要求4所述的復(fù)合酶水溶液的方法，其特征在于，包括以下步驟
A)將相應(yīng)比例脫氧核糖核酸酶和酶穩(wěn)定劑在水中充分溶解，得溶液I
B)用稀鹽酸將溶液I調(diào)節(jié)至pH＝2-5，得溶液II；
C)將相應(yīng)比例的蛋白酶溶解在溶液II中得到能夠長期穩(wěn)定保存的復(fù)合酶水溶液。
6.如權(quán)利要求5所述方法，其特征在于，所述酶穩(wěn)定劑采用金屬離子、氨基酸、多羥基化合物中的一種或多種組合。
7.如權(quán)利要求6所述方法，其特征在于，所述金屬離子為Mg2+或Ca2+；所述氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸或半胱氨酸之中任一種；所述多羥基化合物為葡萄糖、木糖醇、甘露醇、甲殼素或山梨糖醇之中任一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)合酶類化痰藥，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。該化痰藥由一種或一種以上脫氧核糖核酸酶和一種或一種以上蛋白酶組合及藥用輔料制成固體制劑或液體制劑；在固體制劑處方中脫氧核糖核酸酶、蛋白酶、輔料的質(zhì)量比例范圍(W/W)為1∶(0.1-1)∶(50-2000)；在液體制劑處方中脫氧核糖核酸酶、蛋白酶、輔料的質(zhì)量比例范圍(W/W，不包括水、拋射劑及其它共溶劑)為1∶(0.1-1)∶(0.01-100)。本發(fā)明能有效化解口腔、喉部和氣管的痰液，特別是濃痰，以克服痰液對呼吸的阻塞。
文檔編號A61K9/08GK101816782SQ20101014587
公開日2010年9月1日 申請日期2010年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月9日
發(fā)明者鄭昌學(xué), 劉征, 張洪碧 申請人:鄭昌學(xué)