專利名稱：一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥品，是一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物。
背景技術(shù)：
申請(qǐng)人:近幾年致力于采用中藥提取體外殺滅精子的藥物研究，以解決現(xiàn)有宮內(nèi)節(jié) 能器、輸卵管結(jié)扎、輸精管結(jié)扎、避孕套、口服避孕藥等避孕措施及用西藥避孕產(chǎn)生的副作 用。申請(qǐng)人2006年研究的成果之一是采用遠(yuǎn)志中含有的萜類皂甙對(duì)于體外殺精子的藥物 作用。在進(jìn)一步的研究中發(fā)現(xiàn)，遠(yuǎn)志提取物雖然有較好的體外殺精子的作用，但是這種提取 物是一種復(fù)合物質(zhì)，在使用時(shí)要達(dá)到較好效果時(shí)，則需要使用較大的劑量，對(duì)于用緩釋膠囊 置入節(jié)育器內(nèi)攜帶時(shí)，帶來較多不便。另外，進(jìn)一步的研究表明，體外殺精子的同時(shí)配以抗 菌藥物時(shí)，對(duì)人體健康具有較大益處，雖然，現(xiàn)有的體外殺精子藥物中有抗菌組份，但是，這 些藥物均為西藥，對(duì)陰道粘膜具有較強(qiáng)的刺激作用，同時(shí)經(jīng)人體吸收后將對(duì)肝臟產(chǎn)生較大 的損害，長(zhǎng)期使用，嚴(yán)重影響人體健康。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，提供一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物，它全部采用中藥原料制 成，在具有體外殺滅精子效果好、速度快的前提下，抗菌效果顯著，沒有任何毒副作用。本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥 物，包括下述重量比的原料遠(yuǎn)志酸3-7毫克，補(bǔ)骨脂提取物2-4毫克，覆盆子提取物3-5毫 克，防風(fēng)提取物2-4毫克和0. 9%的生理鹽水130-170毫升。所述的一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物，由下述重量比的原料組成遠(yuǎn)志酸5毫 克，補(bǔ)骨脂提取物3毫克，覆盆子提取物4毫克，防風(fēng)提取物3毫克和0. 9%的生理鹽水150毫升。所述的一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物劑型是乳劑、栓劑或緩釋膠囊。所述的一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物的制備方法，按重量比取遠(yuǎn)志酸3-7毫克 備用，用0. 9 %的生理鹽水提取補(bǔ)骨脂，得到補(bǔ)骨脂提取物2-4毫克備用，用0. 9 %的生理鹽 水提取覆盆子，得到覆盆子提取物3-5毫克備用，用0. 9%的生理鹽水提取防風(fēng)，得到防風(fēng) 提取物2-4毫克備用，然后將遠(yuǎn)志酸、補(bǔ)骨脂提取物、覆盆子提取物及防風(fēng)提取物置入容器 內(nèi)混合均勻，再加入130-170毫升0. 9%的生理鹽水，搖勻，制成藥劑。本發(fā)明組份中的遠(yuǎn)志酸是中藥原料遠(yuǎn)志的提取物，遠(yuǎn)志中的其它提取物遠(yuǎn)志皂 甙A、B、E、F、G、遠(yuǎn)志堿、遠(yuǎn)志糖醇、N-乙酰-D-氨基葡萄糖、氧雜蒽酮和桂皮酸的衍生物等對(duì) 殺滅精子的作用均甚微，并且殺滅精子速度較慢。研究表明，遠(yuǎn)志酸殺滅精子的速度比遠(yuǎn)志 的其它提取物速度快3倍以上，效果極好，對(duì)人體無(wú)任何刺激，對(duì)肝臟無(wú)損害，無(wú)毒副作用。本發(fā)明藥物中的遠(yuǎn)志酸用于殺滅精子，防風(fēng)提取物用于抗菌、抗炎及抗病原微生 物，覆盆子提取物用于防止陽(yáng)痿早泄、遺精滑精，補(bǔ)骨脂提取物用于抗炎、抗菌，上述各組份 組合后的功效為能夠快速實(shí)現(xiàn)體外殺滅精子的目的，并具有較好的抑菌殺菌作用，可使本發(fā)明藥物制成乳劑、栓劑等劑型，用于陰道外用避孕的目的，也可制成緩釋膠囊，放置在節(jié) 育器內(nèi)被攜帶進(jìn)入人體，增加節(jié)育器的避孕效果。本發(fā)明藥物的動(dòng)物試驗(yàn)表明，對(duì)常見致病菌有非常明顯的抑制作用。本發(fā)明藥物的抗菌試驗(yàn)菌液的制備取形態(tài)相同的菌落(標(biāo)準(zhǔn)菌株為金黃色葡萄球菌，大腸埃希菌，銅 綠假單胞菌，肺炎克雷伯菌)5 10個(gè)接種于培養(yǎng)管內(nèi)，36°C，4 6小時(shí)后糾正濃度，使其 混濁度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷峁?，約為1.5X108菌落形成單位(CFU)/ml，立即用于實(shí)驗(yàn)。最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定方法參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》關(guān)于最低抑菌濃度 的檢測(cè)方法用胨水或瓊脂將藥物配成所需濃度。瓊脂平皿稀釋法選用直徑為IOcm的玻璃平皿，將本發(fā)明的藥物按比例添加到培 養(yǎng)基。用微量加樣器接種，每個(gè)平皿接種7種菌，每個(gè)接種點(diǎn)接種20微升(μ 1)稀釋好的 菌液，形成一個(gè)直徑為8 10微米的小液滴，最終接種菌量約每個(gè)接種點(diǎn)含IO7個(gè)菌。放置 10分鐘(min)，待菌液稍干后倒置放入37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。以培養(yǎng)皿上菌 落生長(zhǎng)完全被抑制的最低藥物濃度為本發(fā)明藥物對(duì)該菌的MIC。試管法每組排列無(wú)菌試管13只，于第2 12號(hào)管內(nèi)放相應(yīng)培養(yǎng)基2ml，取制備 好的藥液分別加入2mll號(hào)2號(hào)管，第2管混勻后取2ml加入第3號(hào)管，如此依次對(duì)倍稀釋 至第10號(hào)管，吸出2ml棄去。這樣第1 10號(hào)管內(nèi)含藥液濃度倍量稀釋，濃度分別為每毫 升含藥64，32，16,8,6,4,2,1,0. 5,0. 25mg，第11和第12號(hào)管內(nèi)為無(wú)菌培養(yǎng)基，第13號(hào)管內(nèi) 加入1 25的84消毒液2ml，作為陽(yáng)性對(duì)照。除第11號(hào)管外，每管內(nèi)接種菌液100微升， 37°C恒溫?fù)u床震蕩24h觀察結(jié)果。肉眼未見細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為本發(fā)明藥物對(duì)該菌 的 MIC。本發(fā)明藥物對(duì)常見致病菌的最低抑制濃度如下表所示。表中可看出對(duì)金黃色葡萄 球菌，大腸埃希菌，銅綠假單胞菌，肺炎克雷伯菌有很好的抑制作用。本發(fā)明藥物對(duì)常見致病菌的最低抑制濃度
菌種_瓊脂平板(mg.mr1) 試管法(mg.mr1)
標(biāo)準(zhǔn)菌株
金黃色葡萄球菌2. 11.0
大腸埃希菌2. 11.2
銅綠假單胞菌1.01.0
肺炎克雷伯菌2. 11.5
臨床分離菌株
金黃色葡萄球菌2. 11.0
大腸埃希菌4. 12.2
銅綠假單胞菌_LO_1.0 試驗(yàn)小鼠為8 10周齡性成熟昆明小鼠(購(gòu)自北京試驗(yàn)動(dòng)物中心)。雌鼠體重 29.32g。60只清潔級(jí)小鼠腹腔注射標(biāo)準(zhǔn)菌株2X107CFU/ml 2ml，7天(d)后感染發(fā)生，試驗(yàn) 組30只開始注射本發(fā)明藥物20mg/kg，每天1次，連續(xù)3d，另30只注射生理鹽水(無(wú)藥物) 作為對(duì)照。治療后第7d,實(shí)驗(yàn)組30只小鼠均存活，其精神狀態(tài)佳、活撥、毛發(fā)光澤、能自主進(jìn)食、無(wú)畏光流淚等現(xiàn)象。本發(fā)明藥物解脲脲原體抑制實(shí)驗(yàn)解脲脲原體液體培養(yǎng)基按照Roberson等(Roberson JA, Stcmke Gff. Expandedserotyping scheme for Ureaplasma urealytleum strains i solated from humansf. JClin Mierobiol，1982 ;15 :812.)方法進(jìn)行，方法配制1 1 牛心消化液、10% 新鮮酵母液、20%新生小牛血清、0. 002%酚紅、青霉素20000單位/升。解脲脲原體培養(yǎng)基 加0.1%尿素，？!1調(diào)至6.0。人型支原體培養(yǎng)基加0. 精氨酸，pH調(diào)至6. 5。支原體株30 株。解脲脲原體(UU)和30株人型支原體(MH)臨床株為泌尿生殖道感染患者 標(biāo)本中分離 獲得，經(jīng)菌落形態(tài)、底物分解、PH值、生長(zhǎng)速度初步鑒定為，液體傳代3次后，-70°C短期保存 備用。實(shí)驗(yàn)菌液保存的備用菌液，室溫下融化，用解脲脲原體液體培養(yǎng)基或人型支原體液 體培養(yǎng)基按1 100稀釋，37°C培養(yǎng)24 48h后達(dá)IO6顏色變化單位/0.1ml作為接種物。 實(shí)驗(yàn)方法采用液體培養(yǎng)基稀釋法。加培養(yǎng)基在96孔(8X12)聚苯乙烯板上，用微量加樣器 向每一孔內(nèi)均加入100微升培養(yǎng)基。往第一孔內(nèi)加入配制好的本發(fā)明藥物100微升，充分混 勻后取100微升加入第二孔，再吹打混勻吸出100微升加入第三孔，依次類推，直至第十一 孔，充分混勻后，棄去100微升。由此將藥液倍比稀釋至10 20微克/ml。第十二孔不加 藥物作為對(duì)照。加菌液用支原體培養(yǎng)基按1 100稀釋UU與MH培養(yǎng)物，混勻取100微升 加入每一個(gè)孔內(nèi)。將加好的96孔板蓋上板蓋，輕搖混勻，置于濕盒內(nèi)，37°C培養(yǎng)箱孵育。根 據(jù)培養(yǎng)基顏色變化判斷結(jié)果培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色表明有支原體生長(zhǎng)。24h內(nèi)觀察UU生 長(zhǎng)變化，如加藥孔出現(xiàn)與對(duì)照孔相同的顏色變化，表示所加藥物的對(duì)應(yīng)濃度對(duì)UU無(wú)抑制作 用，24h仍不出現(xiàn)顏色變化為有效抑制UU生長(zhǎng)的藥物濃度；24 48h內(nèi)觀察MH生長(zhǎng)變化， 如加藥孔出現(xiàn)與對(duì)照孔相同的顏色變化，表示所加藥物的對(duì)應(yīng)濃度對(duì)MH無(wú)抑制作用，48h 仍不出現(xiàn)顏色變化為有效抑制MH生長(zhǎng)的藥物濃度。加藥組以不出現(xiàn)顏色變化的最小濃度 為最小有效抑制支原體生長(zhǎng)的藥物濃度(MIC)。實(shí)驗(yàn)采用UUl，UU2，UU3，UU4和MH標(biāo)準(zhǔn)株 作參照?？怪гw效位實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)解脲脲原體的MIC50分別為1.024mg/ ml，0. 512mg/ml,0. 512mg/ml 和 0. 256mg/ml ；對(duì)人型支原體的 MIC50 分別為 1. 024mg/ml, 0. 512mg/ml,0. 512mg/ml 及 0. 256mg/ml。本發(fā)明藥物急性毒性和致突變實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法采用霍恩氏法研究灌胃給予小鼠本發(fā)明藥物的半數(shù)致死量(LD50)。選 用健康昆明種小鼠40只，雌雄各半，體重17 22g，隨機(jī)分為4個(gè)受試藥物劑量組1. 00， 2. 15,4. 64，10. 00克/公斤體重，灌胃給藥，觀察7天，記錄中毒和死亡情況，計(jì)算得出 LD50。采用鼠傷寒沙門菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn))研究其致突變性，小鼠精子畸變?cè)囼?yàn) 和小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)研究其致畸變性。結(jié)果小鼠口服本發(fā)明藥物的LD50大于10. 0 克/公斤體重；各劑量組小鼠灌胃后未見明顯中毒癥狀，亦無(wú)死亡。Ames試驗(yàn)陰性、未發(fā)現(xiàn) 對(duì)小鼠精子產(chǎn)生畸變作用、對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞染色體未見損傷。在急性毒性、小鼠精子畸變和 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)中，從試驗(yàn)開始到結(jié)束，小鼠體重增重情況良好，說明本發(fā)明藥物無(wú) 明顯急性毒性作用和致突變作用。本發(fā)明藥物比西藥壬苯醇醚殺精子速度快。試驗(yàn)如下實(shí)驗(yàn)用精液標(biāo)本選自25-35歲健康男性38例，禁欲3_5d，手法取精液于干凈滅菌 的25ml小燒杯內(nèi)，精液量2-4ml, pH 7. 0-8. 0，液化時(shí)間< 30min，精子活動(dòng)率70-92%，活動(dòng)力a+b級(jí)50% -80%，精子密度> 60 X 106/ml，畸形精子率< 20%。 取對(duì)照品壬苯醇醚(0.9%生理鹽水稀釋，壬苯醇醚濃度為分別配制成0. 1%、 0. 01 %及0. 001 %三種不同濃度)及生理鹽水各0. 5ml，加入同樣0. 5毫升精液(同一份精 液)，即刻混勻，迅速取1小滴于載玻片上，倒置顯微鏡(37°C恒溫)下觀察精子活動(dòng)情況， 連續(xù)觀察10個(gè)高倍視野，以精子全部失去活動(dòng)能力為終點(diǎn)。從精子接觸藥物時(shí)起至全部失 活的時(shí)間為殺精子時(shí)間。每次實(shí)驗(yàn)反復(fù)進(jìn)行2-3次。配制0. 1 %濃度的本發(fā)明藥物為稀釋液1，配制0. 01 %濃度的本發(fā)明藥物為稀釋 液2，配制0. 001%濃度的本發(fā)明藥物稀釋液3，實(shí)驗(yàn)方法同上。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，稀釋液1對(duì) 人精子體外殺滅使用最短時(shí)間為3秒鐘，最長(zhǎng)時(shí)間為5秒鐘；稀釋液2對(duì)人精子體外殺滅作 用最短時(shí)間為3秒鐘，最長(zhǎng)時(shí)間為7秒鐘；稀釋液3對(duì)人精子體外殺滅作用最短時(shí)間為42 秒鐘，最長(zhǎng)時(shí)間為90秒鐘。壬苯醇醚1毫克/毫升對(duì)人精子體外殺滅作用最短時(shí)間為5秒 鐘，最長(zhǎng)時(shí)間為12秒鐘；0. 1毫克/毫升對(duì)人精子體外殺滅作用最短時(shí)間為38秒鐘，最長(zhǎng) 時(shí)間為426秒鐘；0. 01毫克/毫升對(duì)人精子體外殺滅作用最短時(shí)間為19分鐘，最長(zhǎng)時(shí)間為 35分鐘。上述稀釋液1是指1毫升本發(fā)明藥物，加0. 9%生理鹽水1毫升，混合均勻后配制 成0. 濃度的本發(fā)明藥物，稀釋液2是指1毫升本發(fā)明藥物，加0. 9%生理鹽水10毫升， 混合均勻后配制成0. 01%濃度的本發(fā)明藥物，稀釋液3是指1毫升本發(fā)明藥物，加0. 9%生 理鹽水100毫升，混合均勻后配制成0. 001%濃度的本發(fā)明藥物。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物，包括下述重量比的原料遠(yuǎn)志酸3-7 毫克，補(bǔ)骨脂提取物2-4毫克，覆盆子提取物3-5毫克，防風(fēng)提取物2-4毫克和0. 9%的生理 鹽水130-170毫升，其中遠(yuǎn)志酸的分子式為C29H44O6,為白色粉末。本發(fā)明藥物中的各原料重量比可有下述多種組合1、遠(yuǎn)志酸5毫克，補(bǔ)骨脂提取物3毫克，覆盆子提取物4毫克，防風(fēng)提取物3毫克 和0. 9%的生理鹽水150毫升。2、遠(yuǎn)志酸3毫克，補(bǔ)骨脂提取物2毫克，覆盆子提取物3毫克，防風(fēng)提取物2毫克 和0. 9%的生理鹽水130毫升。3、遠(yuǎn)志酸7毫克，補(bǔ)骨脂提取物4毫克，覆盆子提取物5毫克，防風(fēng)提取物4毫克 和0. 9%的生理鹽水170毫升。本發(fā)明所述的一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物的制備方法，按重量比取遠(yuǎn)志酸 3-7毫克備用，用0. 9%的生理鹽水提取補(bǔ)骨脂，得到補(bǔ)骨脂提取物2-4毫克備用，用0. 9% 的生理鹽水提取覆盆子，得到覆盆子提取物3-5毫克備用，用0. 9%的生理鹽水提取防風(fēng)， 得到防風(fēng)提取物2-4毫克備用，然后將遠(yuǎn)志酸、補(bǔ)骨脂提取物、覆盆子提取物及防風(fēng)提取物 置入容器內(nèi)混合均勻，再加入130-170毫升0. 9 %的生理鹽水，搖勻，制成藥劑。本發(fā)明所述藥物的劑型是乳劑、栓劑或緩釋膠囊。本發(fā)明藥物所述的中藥原料防風(fēng)、覆盆子及補(bǔ)骨脂的提取方法均采用0. 9%生理 鹽水提取方法，例如防風(fēng)提取物的提取方法是，取5克防風(fēng)中藥原料，加0. 9%生理鹽水50 毫升，在100°C加熱60分鐘，過濾紙過濾得到防風(fēng)提取液，低溫冷凍干燥離心，得防風(fēng)干燥粉末1.12克，即為防風(fēng)提取物。補(bǔ)骨脂提取物的提取方法是取5克補(bǔ)骨脂中藥原料，加0. 9%生理鹽水50毫升，在iocrc加熱60分鐘，過濾紙過濾得到補(bǔ)骨脂提取液，低溫冷凍干燥離心，得補(bǔ)骨脂干燥粉 末1.18克，即為補(bǔ)骨脂提取物。覆盆子提取物的提取方法是取5克覆盆子中藥原料，加0. 9%生理鹽水50毫升， 在iocrc加熱60分鐘，過濾紙過濾得到覆盆子提取液，低溫冷凍干燥離心，得覆盆子干燥粉 末1. 20克，即為覆盆子提取物。
權(quán)利要求
一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物，其特征在于包括下述重量比的原料遠(yuǎn)志酸3-7毫克，補(bǔ)骨脂提取物2-4毫克，覆盆子提取物3-5毫克，防風(fēng)提取物2-4毫克和0.9％的生理鹽水130-170毫升。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物，其特征在于由下述重量 比的原料組成遠(yuǎn)志酸5毫克，補(bǔ)骨脂提取物3毫克，覆盆子提取物4毫克，防風(fēng)提取物3毫 克和0. 9%的生理鹽水150毫升。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物，其特征在于所述劑型是 乳劑、栓劑或緩釋膠囊。
4.權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物的制備方法，其特征在于按重 量比取遠(yuǎn)志酸3-7毫克備用，用0. 9%的生理鹽水提取補(bǔ)骨脂，得到補(bǔ)骨脂提取物2-4毫克 備用，用0. 9 %的生理鹽水提取覆盆子，得到覆盆子提取物3-5毫克備用，用0. 9 %的生理鹽 水提取防風(fēng)，得到防風(fēng)提取物2-4毫克備用，然后將遠(yuǎn)志酸、補(bǔ)骨脂提取物、覆盆子提取物 及防風(fēng)提取物置入容器內(nèi)混合均勻，再加入130-170毫升0.9%的生理鹽水，搖勻，制成藥 劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復(fù)方遠(yuǎn)志酸體外殺精子藥物，包括下述重量比的原料遠(yuǎn)志酸3-7毫克，補(bǔ)骨脂提取物2-4毫克，覆盆子提取物3-5毫克，防風(fēng)提取物2-4毫克和0.9％的生理鹽水130-170毫升，將遠(yuǎn)志酸、補(bǔ)骨脂提取物、覆盆子提取物及防風(fēng)提取物混合均勻，再加入130-170毫升0.9％的生理鹽水，搖勻，制成藥劑。本發(fā)明全部采用中藥原料制成，能夠快速實(shí)現(xiàn)體外殺滅精子的目的，并具有較好的抑菌殺菌作用，可使本發(fā)明藥物制成乳劑、栓劑等劑型，用于陰道外用避孕的目的，也可制成緩釋膠囊，放置在節(jié)育器內(nèi)被攜帶進(jìn)入人體，增加節(jié)育器的避孕效果，沒有任何毒副作用。
文檔編號(hào)A61K31/58GK101804109SQ20101012792
公開日2010年8月18日 申請(qǐng)日期2010年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月19日
發(fā)明者王磊光, 邱毅 申請(qǐng)人:山東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所