專利名稱：巧玲花中的皂苷類化合物及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效成分提取分離及應(yīng)用技術(shù)，特別涉及一種巧玲花中的皂苷類
化合物及其制備方法和應(yīng)用。
(二)
背景技術(shù)：
巧玲花(Syringa pubescens Turca)為木犀科丁香屬植物，灌木，又名毛(葉)丁 香，小葉丁香，產(chǎn)自河南、河北、陜西等省地。經(jīng)前期研究表明，巧玲花中含有三萜類、黃酮類 和皂苷類化合物。目前的提取方法為采用乙醇提取，然后用有機溶劑石油醚，石油醚_乙酸 乙酯，正丁醇分別萃取，取正丁醇作為有效部位。此法最大的缺點是采用正丁醇作為提取溶 劑，毒性較大，對操作人員的健康構(gòu)成了威脅；另外正丁醇沸點較高，回收需要消耗大量的 能量，且提取出的有效部位不完整含有較多的非皂苷類成分，活性成分的含量較低。
(三)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種巧玲花中的皂苷類化合物及其制備方法和應(yīng)用，通過 簡單便捷的方法對巧玲花中的皂苷類化合物進(jìn)行提取和研究，獲得具有藥用價值的提純 物。 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下 巧玲花中的皂苷類化合物，由下法制得將干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取， 提取液減壓蒸餾得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附樹脂分離，用 乙醇_水溶液體系梯度洗脫，純化后得到巧玲花皂苷類化合物。
較好的，將干燥的巧玲花粉碎至40-60目。 回流提取時加入的乙醇溶液質(zhì)量為干燥巧玲花藥材質(zhì)量的10-15倍，乙醇溶液體
積濃度為50-90%。 回流提取3-5小時為宜。 重復(fù)回流提取過程1-2次，合并提取液減壓蒸餾得到浸膏。
進(jìn)一步，將浸膏用體積濃度為10-30%的乙醇溶解。 用大孔吸附樹脂分離時，依次用體積濃度為10 % 、20 % 、30 % 、40 % 、50 % 、60 % 、 80 %和95 %的乙醇-水體系洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇體積濃度為40-50 %的洗脫餾 分，減壓濃縮得到膏狀物。 大孔吸附樹脂優(yōu)選如AB-8、 D-lOl、 D-201、 HPD-100等大孔吸附樹脂。 梯度洗脫時，每個梯度的乙醇水溶液即每個濃度的洗脫液洗脫體積為2. 0-3. OBV，
洗脫流速為1. 0-2. OBV/h。 將所述的膏狀物在50-6(TC真空減壓干燥，純化即得巧玲花總皂苷類化合物。
純化可采用硅膠柱色譜(填料300-400目)、凝膠柱色譜分離、高效液相色譜等方 法。 以橄欖苦苷作為標(biāo)準(zhǔn)品，用HPLC 測得到的皂苷類化合物中各物質(zhì)的含量。得到的皂苷類化合物的主要成分為橄欖苦苷(oleuropein) (20-30 %) 、10-羥基 橄欖苦苷(10-hydroxyoleuropein) (5-10% )、 (8Z)-ligstroside (5-10 % )、松果菊苷 (echinacoside) (30-50% )，通式如下
<formula>formula see original document page 4</formula>
式I 式II
式I中，R1為H，R2為0H時，為橄欖苦苷；
Rl、 R2都為OH時，為10-羥基橄欖苦苷；
R1、R2都為H時，為(8Z)-ligstroside ;
式II為松果菊苷的結(jié)構(gòu)式。 采用本法提取出的所述巧玲花中的皂苷類化合物在制備治療肝病的藥物中有很 好的應(yīng)用，可以單獨或與適宜的賦形劑等結(jié)合，按照常規(guī)方法制成口服或非口服劑型用于 制備治療肝病的藥物。具體的，所述的皂苷類化合物的有效用量為10-20mg/Kg/d。
本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，有以下優(yōu)點 本發(fā)明使用的大孔吸附樹脂可以反復(fù)再生利用，用水和乙醇作為溶劑污染少，方 法經(jīng)濟(jì)簡便，易于工業(yè)化；所得到的總皂苷化學(xué)成分明確，質(zhì)量可控。
具體實施例方式
以下以具體實施例來說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此
實施例1 取干燥、粉碎成40目的豫西伏牛山巧玲花lKg，加入12Kg 50%乙醇浸泡過夜后， 加熱回流提取4小時，殘渣再加70 %乙醇回流提取2次，每次4小時，合并提取液，減壓回收 乙醇得浸膏153g。將乙醇浸膏用10%乙醇溶解，過濾，用500克大孔吸附樹脂進(jìn)行色譜分 離，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脫，每個梯度體積 為2. 5BV，洗脫流速為1. 5BV/h，收集40-50%乙醇洗脫餾分，5(TC減壓濃縮，得干燥總皂苷 粉末18克。高效液相色譜測得其中橄欖苦苷、10-羥基橄欖苦苷、(8Z)-ligstroside、松果 菊苷的含量分別為24. 1 % ， 7. 2% ， 6. 5% ， 45. 2% ，總皂苷含量大于95% 。
實施例2 取干燥、粉碎成50目的豫西伏牛山巧玲花2. 5Kg，加入33Kg 70%乙醇浸泡過夜 后，加熱回流提取4小時，殘渣再加70%乙醇回流提取2次，每次4小時，合并提取液，減壓 回收乙醇得浸膏364g。將乙醇浸膏用20%乙醇溶解，過濾，用1200克大孔吸附樹脂進(jìn)行色 譜分離，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脫，每個梯度體積為2. 5BV，洗脫流速為1. 5BV/h，收集40-50%乙醇洗脫餾分，55。C減壓濃縮，得干燥總 皂苷粉末42克。高效液相色譜測得其中橄欖苦苷、10-羥基橄欖苦苷、(8Z)-ligstroside、 松果菊苷的含量分別為22. 1 % ， 7. 2% ， 5. 5% ， 42. 2% ，總皂苷含量大于90% 。
實施例3 取干燥、粉碎成60目的豫西伏牛山巧玲花5.0Kg，加入60Kg 60%乙醇浸泡過夜 后，加熱回流提取4小時，殘渣再加90%乙醇回流提取2次，每次4小時，合并提取液，減壓 回收乙醇得浸膏705g。將乙醇浸膏用30%乙醇溶解，過濾，用2500克大孔吸附樹脂進(jìn)行色 譜分離，用乙醇-水(10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95% )梯度洗脫，每個梯度 體積為2. 5BV，洗脫流速為1. 5BV/h，收集40-50^乙醇洗脫餾分，6(TC減壓濃縮，得干燥總 皂苷粉末85克。高效液相色譜測得其中橄欖苦苷、10-羥基橄欖苦苷、(8Z)-ligstroside、 松果菊苷的含量分別為20. 1 % ， 6. 2% ， 5. 8% ， 43. 2% ，總皂苷含量大于90% 。
藥理實驗
1.試驗材料 實施例1產(chǎn)品，四氯化碳(分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠)，SPF級Wi star大鼠 48，雄性，河南科技大學(xué)實驗動物中心提供，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒、血清冬 氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒、血清白蛋白(ALB)試劑盒和血清球蛋白(GLB)試劑盒(中 生北控生物科技股份有限公司)。
1.方法 將36只大鼠隨機分為3組。分為(l)正常組12只，以皮下注射花生油，2次/ 周，并以蒸餾水灌胃，1次/天，持續(xù)6周；(2)對照組12只，皮下注射CCL4與花生油體積比
為l : 1混合物，2次/周；10%酒精+蒸餾水(體積比l : 1)灌胃，l次/天，持續(xù)6周；
(3)劑量組12只，皮下注射CC1^與花生油1 : 1混合物，2次/周，10%酒精灌胃，同時分 別給予總皂苷，100mg/kg/天(人的用量為此用量的1/10)，持續(xù)6周。
3.結(jié)果
組別 n ALT AST ALB GLB
正常組 12 42. 10 ±3. 72
對照組 12 185. 28 ±61. 57
劑量組 12 81. 42 ± 32. 8" 與正常組比較"<0. 01 ;，<0. 01 ;與對照組比較AP〈0. 01 ;**P<0. 05 —J
P<0. 01; 與正常組相比較，對照組ALT及AST活性明顯升高(P < 0. 01)，血清白蛋白含量明 顯降低；與對照組比較，劑量組可以明顯減少ALT釋放(P〈0.01)，并可以升高血清白蛋白 比例。說明巧玲花總皂苷具有防治肝病作用。
1M. 16±10. 68 45. "±1." 21. M± 1.24 415. 21±95.61A 29. 62 ±3. 32』 21. 32 ± 1. 21 176. 47 ±48. 81" 36. 02 ± 5. 24" 20. 85 ± 1. 54
權(quán)利要求
巧玲花中的皂苷類化合物，其特征在于，由下法制得將干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取，提取液減壓蒸餾得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附樹脂分離，用乙醇-水體系為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，純化后得到巧玲花皂苷類化合物。
2. 權(quán)利要求1所述巧玲花中的皂苷類化合物的提取方法，其特征在于，將干燥的巧玲 花粉碎，用乙醇回流提取，提取液減壓蒸餾得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后， 采用大孔吸附樹脂分離，用乙醇-水體系進(jìn)行梯度洗脫，純化后得到巧玲花皂苷類化合物。
3. 如權(quán)利要求2所述的巧玲花中的皂苷類化合物的提取方法，其特征在于，回流提取 時加入的乙醇溶液質(zhì)量為干燥巧玲花藥材質(zhì)量的10-15倍，乙醇溶液體積濃度為50-90%。
4. 如權(quán)利要求3所述的巧玲花中的皂苷類化合物的提取方法，其特征在于，回流提取 3-5小時。
5. 如權(quán)利要求4所述的巧玲花中的皂苷類化合物的提取方法，其特征在于，重復(fù)回流 提取過程1-2次，合并提取液減壓蒸餾得到浸膏。
6. 如權(quán)利要求2所述的巧玲花中的皂苷類化合物的提取方法，其特征在于，將浸膏用 體積濃度為10-30 %的乙醇溶解。
7. 如權(quán)利要求2所述的巧玲花中的皂苷類化合物的提取方法，其特征在于，用大孔 吸附樹脂分離時，依次用體積濃度為10 % 、20 % 、30 % 、40 % 、50 % 、60 % 、80 %和95 %的乙 醇_水體系洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇體積濃度為40-50%的洗脫餾分，減壓濃縮得到 膏狀物。
8. 如權(quán)利要求7所述的巧玲花中的皂苷類化合物的提取方法，其特征在于，梯度洗脫 時，每個梯度的乙醇水溶液洗脫體積為2. 0-3. 0BV，洗脫流速為1. 0-2. 0BV/h。
9. 權(quán)利要求1所述巧玲花中的皂苷類化合物在制備治療肝病的藥物中的應(yīng)用。
10. 如權(quán)利要求9所述巧玲花中的皂苷類化合物在制備治療肝病的藥物中的應(yīng)用，其 特征在于，所述的皂苷類化合物的有效用量為10-20mg/Kg/d。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥有效成分提取分離及應(yīng)用技術(shù)，特別涉及一種巧玲花中的皂苷類化合物及其制備方法和應(yīng)用。所述巧玲花中的皂苷類化合物由下法制得將干燥的巧玲花粉碎，用乙醇回流提取，提取液減壓蒸餾得到浸膏并回收乙醇，浸膏用乙醇溶液溶解后，采用大孔吸附樹脂分離，用乙醇-水體系為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，純化后得到巧玲花皂苷類化合物。本發(fā)明使用的大孔吸附樹脂可以反復(fù)再生利用，用水和乙醇作為溶劑污染少，方法經(jīng)濟(jì)簡便，易于工業(yè)化；所得到的總皂苷化學(xué)成分明確，質(zhì)量可控。
文檔編號A61K133/00GK101780126SQ201010126938
公開日2010年7月21日 申請日期2010年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月18日
發(fā)明者劉普, 尹衛(wèi)平, 梁菊, 段文錄, 鄧瑞雪 申請人:河南科技大學(xué)