專利名稱：新型標(biāo)準(zhǔn)化組合物、制造方法及其在消除rna病毒感染中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及抗病毒制劑。本發(fā)明的公開內(nèi)容提供了從植物中獲取的抗 病毒制劑，其改善免疫反應(yīng)并發(fā)現(xiàn)可有效對(duì)抗Hiv感染、AIDS以及流感病毒和感染。
背景技術(shù)：
兒茶素是屬于類黃酮(flavonoid)家族的多酚植物代謝產(chǎn)物。兒茶素的分子式 和分子量為C15H14Odn^OgAioL兒茶素和表兒茶素是差向異構(gòu)體，用(-)_表兒茶素和 (+)-兒茶素表示，是自然界中發(fā)現(xiàn)的最常見的旋光異構(gòu)體。原花青素或縮合單寧是類黃酮寡聚物，其結(jié)構(gòu)單元(building block)為(+)_兒 茶素和(-)_表兒茶素。它們是類黃酮生物合成途徑的寡聚終產(chǎn)物，目前在鑒定和識(shí)別它們 對(duì)人類的有益效果。它們大量存在于果實(shí)、樹皮、葉子和種子的植物界中，其中它們提供對(duì) 于光、氧化和捕食者的保護(hù)。在許多植物中發(fā)現(xiàn)原花青素，主要有蘋果、松樹皮、肉桂樹皮、 荔枝果皮、花生、葡萄籽、可可、葡萄皮、山桑子(bilberry)、蔓越莓(cranberry)、黑加侖 (black currant)、綠茶和紅茶?；谶B續(xù)單體單元之間的鍵合(linkage)，原花青素可以分類為A、B或C型多酚。一般地，在原花青素連續(xù)單體單元之間的鍵合在‘上’單元的第4位和‘下’單元 的第8位之間時(shí)，產(chǎn)生B型原花青素?？商鎿Q地，當(dāng)該鍵合存在于‘上’單元的C4和下單元 的C6之間時(shí)，產(chǎn)生C型原花青素。B和C型多酚大量出現(xiàn)在許多植物源中。當(dāng)連續(xù)單體單 元通過(guò)‘上’單元的C2和C4與下單元C7位和C6/C8位(各自)處的氧之間的醚鍵連接時(shí)， 形成A型原花青素。當(dāng)與B和C型多酚相比時(shí)，A型多酚很少出現(xiàn)。對(duì)抗原的免疫反應(yīng)免疫系統(tǒng)是在宿主體內(nèi)通過(guò)鑒定和清除病原體而抵御疾病的一系列機(jī)制的集合。 免疫系統(tǒng)對(duì)病原體的反應(yīng)從鑒定外源蛋白開始到最終破壞這種外源蛋白來(lái)源，從而保護(hù)該 宿主。甚至來(lái)自單細(xì)胞生物的簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)的識(shí)別都涉及一系列復(fù)雜步驟，其導(dǎo)致該生物從 宿主中的最終清除。這整個(gè)過(guò)程是對(duì)外源蛋白的存在或抗原的免疫反應(yīng)。通過(guò)免疫系統(tǒng)消除感染(Resolution of infection)是對(duì)抗原的免疫反應(yīng)，并且 其可以分成3階段激活和動(dòng)員(Mobilization)白細(xì)胞(WBC)在鑒定外源分子或抗原時(shí)被激活。免 疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞釋放可將其它免疫細(xì)胞吸引到鑒定的外源分子部位的物質(zhì)，并 從而動(dòng)員無(wú)數(shù)免疫細(xì)胞除去病原體。調(diào)節(jié)必須控制引發(fā)的免疫反應(yīng)，以便阻止對(duì)宿主造成過(guò)度損害。調(diào)節(jié)性T-淋巴 細(xì)胞通過(guò)分泌用作免疫系統(tǒng)信使的細(xì)胞因子使免疫反應(yīng)容易控制，從而調(diào)節(jié)放大的免疫反應(yīng)。消除感染消除涉及限制病原體和從身體中清除它。在清除病原體之后，大部分 WBC被破壞，殘留的那些被稱為‘記憶細(xì)胞’并通過(guò)引發(fā)對(duì)病原體的早期免疫反應(yīng)保護(hù)宿主將來(lái)不受相同病原體感染。當(dāng)宿主不能產(chǎn)生足以清除病原體的強(qiáng)大防御時(shí)，病原體可成功地引起感染。在此 種情況下，宿主產(chǎn)生的抗體不足以中和現(xiàn)有數(shù)量的抗原。因此，游離的抗原成功地感染宿 主。在此種情況下，可利用如抗生素和抗病毒劑的外部助劑(外援物，external aid)降低 抗原數(shù)目。一旦抗原數(shù)目降低，則免疫反應(yīng)足以清除病原體。HIV 感染和 AIDS:人類免疫缺陷病毒(HIV)是破壞免疫系統(tǒng)的逆轉(zhuǎn)錄病毒。這種感染可以最終導(dǎo) 致獲得性免疫缺陷綜合征(ADIS)，這是一種免疫系統(tǒng)無(wú)法正常工作的嚴(yán)重和危及生命的病 況。HIV主要感染人免疫系統(tǒng)中的特定細(xì)胞“輔助性” T淋巴細(xì)胞(具體為CD4+T細(xì)胞)、 巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞。當(dāng)CD4+T細(xì)胞數(shù)目下降到低于臨界水平時(shí)，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫喪失，身 體逐漸變得對(duì)機(jī)會(huì)性感染更易感。HIV牛侖周期一旦HIV進(jìn)入宿主，則HIV需要特定宿主細(xì)胞以促進(jìn)它的復(fù)制和繁 殖。在HIV情況下，宿主細(xì)胞為T-細(xì)胞或⑶4細(xì)胞。1.宿主識(shí)別和結(jié)合HIV找到⑶4細(xì)胞并通過(guò)該細(xì)胞表面上的共同受體經(jīng)由“鎖 和鑰”系統(tǒng)粘附(連接)到其上。HIV表面上的蛋白質(zhì)粘附到CD4細(xì)胞上的補(bǔ)體蛋白。2.粘附和進(jìn)入宿主在粘附之后，HIV將病毒蛋白質(zhì)注射到T-細(xì)胞的細(xì)胞液(細(xì) 胞質(zhì))中。這引起該細(xì)胞膜融合到HIV外膜中。3.病毒蛋白質(zhì)的分解(disassembly)為了將其遺傳物質(zhì)(RNA)用于繁殖，圍繞 RNA的保護(hù)性包膜必須溶解。沒有這個(gè)步驟，RNA到DNA (新HIV復(fù)制的結(jié)構(gòu)單元)的轉(zhuǎn)化 就不能發(fā)生，并且復(fù)制停止。4.逆轉(zhuǎn)錄一旦在細(xì)胞里，HIV的單鏈RNA就必須轉(zhuǎn)化成雙鏈DNA。這個(gè)步驟由逆 轉(zhuǎn)錄酶引起。逆轉(zhuǎn)錄酶利用來(lái)自T-細(xì)胞的結(jié)構(gòu)單元從而幫助病毒RNA轉(zhuǎn)化成DNA。該DNA 包含HIV復(fù)制所需的遺傳信息。5.復(fù)制和組裝成新病毒粒子為了復(fù)制，新形成的病毒DNA必須整合到宿主細(xì)胞 核中。這個(gè)過(guò)程還沒有完全了解，但據(jù)認(rèn)為是由病毒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白輔助進(jìn)行的。在整合時(shí)，該病 毒逐步形成，同時(shí)宿主細(xì)胞制備它需要完成復(fù)制的蛋白質(zhì)。一旦該材料可利用，則它們就被 病毒基于需要和結(jié)構(gòu)而剪切，并隨后組裝成新HIV。這個(gè)過(guò)程由蛋白酶輔助進(jìn)行。6.從宿主細(xì)胞中出芽病毒復(fù)制周期的最后步驟稱為出芽。在遺傳物質(zhì)被包埋和 宿主CD4細(xì)胞的膜構(gòu)成新外膜的情況下，新形成的HIV夾斷并進(jìn)入循環(huán)，準(zhǔn)備再次開始整個(gè) 過(guò)程。目前干預(yù)目前干擾HIV復(fù)制和繁殖的方法包括病毒進(jìn)入抑制劑、膜融合抑制劑，和逆轉(zhuǎn)錄 酶抑制劑、整合酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、成熟抑制劑等。FDA已批準(zhǔn)許多藥物用于治療HIV 感染。這些藥物中的大部分通過(guò)它們的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒(ARV)的作用機(jī)制起作用。人類免疫缺陷病毒(HIV)感染對(duì)全世界各國(guó)政治、經(jīng)濟(jì)、公共健康、社會(huì)和科學(xué)提 出了挑戰(zhàn)。在2007年結(jié)束時(shí)，全世界估計(jì)有3320萬(wàn)人帶有HIV/AIDS。因此，迫切需要用更 安全和更有效的藥物控制和/或治療這種疾病。這種病毒呈現(xiàn)的另外的挑戰(zhàn)是其對(duì)突變的 易感性。HIV的病毒蛋白質(zhì)容易發(fā)生突變，因此耐藥株造成另外的威脅，其致使需要更新的 藥物。
流感病毒流感是由正粘病毒科(流感病毒)的RNA病毒引起的傳染性疾病，其影響鳥類和 哺乳動(dòng)物。通過(guò)這種病毒的感染主要影響鼻、喉、支氣管，偶爾影響肺。流感病毒的結(jié)構(gòu)流感病毒分為3類流感病毒A、B和Cf。流感病毒的3種亞 型整體結(jié)構(gòu)非常相似。該病毒由病毒外膜構(gòu)成，該病毒外膜包含兩種主要類型的環(huán)繞中心 核的糖蛋白。該中心核包含病毒RNA基因組以及包裝和保護(hù)這種RNA的其它病毒蛋白。血 凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)是病毒粒子外的兩種大的糖蛋白。A型流感病毒A型病毒是三種流感類型中毒力最強(qiáng)的人類病原體，并引起最嚴(yán)重 的疾病。A型流感病毒可以基于抗體對(duì)這些病毒的反應(yīng)再分類成不同血清型。已在人類中 證實(shí)、按照已知人類流行病死亡人數(shù)排序的血清型為H1N1、H2N2、H3N2、H5NUH7N7, H1N2、 H9N2、H7N2、H7N3、H10N7。A型流感病毒在上世紀(jì)引起了數(shù)次流行，并繼續(xù)引起每年的流 行。新的流感毒株的出現(xiàn)繼續(xù)對(duì)公眾健康和科學(xué)界提出挑戰(zhàn)。Hmi病毒是A型流感病毒的 血清型，并為已知影響人類的毒力最強(qiáng)的毒株之一。Hmi血清型在1918年(西班牙流感 (Spanish Flu))致使數(shù)百萬(wàn)人死亡，并且最近引起豬流感全球流行。流感病毒的牛侖周期流感病毒復(fù)制和繁殖過(guò)稈概沭如下1.宿主識(shí)別和結(jié)合靶向宿主細(xì)胞的病毒利用HA蛋白結(jié)合在唾液酸上，該唾液酸 結(jié)合在上皮細(xì)胞表面上的糖上。上皮細(xì)胞典型地存在于哺乳動(dòng)物的鼻、喉和肺以及鳥的腸 中。2.粘附和進(jìn)入宿主在結(jié)合之后，HA蛋白被剪切并且病毒通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì) 胞。3.病毒蛋白質(zhì)的分解病毒一旦進(jìn)入細(xì)胞，內(nèi)體的pH和環(huán)境條件導(dǎo)致a. 一部分HA將病毒包膜融合到液泡膜(vacuole membrane)。b.M2離子通道允許質(zhì)子進(jìn)入病毒核心，質(zhì)子酸化了病毒核心，導(dǎo)致它的分解和病 毒RNA的隨后釋放以及核心蛋白質(zhì)進(jìn)入宿主細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中。4.逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA和核心蛋白此時(shí)被運(yùn)送到細(xì)胞核中，其中RNA被轉(zhuǎn)錄并進(jìn)一 步被翻譯成病毒蛋白。5.從宿主細(xì)胞中出芽HA和NA蛋白在細(xì)胞膜附近形成簇，其隨后也將病毒RNA和 核心蛋白包在其中，然后導(dǎo)致病毒‘出芽’和用于隨后感染的繁殖。從上面詳述的感染和繁殖步驟可以看出，HA和NA在感染中發(fā)揮重要作用。在釋 放病毒粒子之前，NA也剪切唾液酸以便阻止HA結(jié)合到唾液酸上。A型流感病毒的目前干預(yù)美國(guó)FDA批準(zhǔn)了兩類對(duì)抗A型流感病毒的藥物離子 通道抑制劑如金剛烷(金剛烷鹽酸鹽和金剛烷乙胺)，和神經(jīng)氨酸酶抑制劑，如奧塞米韋 (TAMIFLU)和扎那米韋(RELENZA)。A型流感病毒易于突變。這些突變主要為病毒蛋白質(zhì)的，如NA、HA和M2離子通道 蛋白質(zhì)，因而這些蛋白質(zhì)的抑制劑將對(duì)突變株無(wú)效。該突變潛力和2009年A型流感全球流 行表明迫切需要提供對(duì)抗這種病毒的治療和預(yù)防的選擇方案。現(xiàn)有技術(shù)Richard Anderson 等人，“Isolation and characterization ofpolyphenols Type A polymers from cinnamon with insulin-likebiological activity，，in theJournal of ARricultural and FoodChemistry, 2004, pp 52,65-70.這篇論文描述了商業(yè)肉桂的水性提取物，并且已經(jīng)鑒定了在體外細(xì)胞系中增加葡 萄糖代謝約20倍的多酚聚合物。他們已使用樟屬桂皮(Cirmamomum cassia) (Korintji桂 皮)用于制備這種提取物。這種品種具有較高含量的香蘭素和肉桂醛。這篇論文進(jìn)一步描述了用于制備和表征這種水性提取物的制備型HPLC方法。該出版物描述了兒茶素的A型雙鍵結(jié)合(doubly linked)的原花青素。這篇論文 已鑒定出從肉桂中分離的兒茶素的三聚體(分子量864)、四聚體(分子量115 和寡聚體。Kilkuskie 等人，“HIV and reverse transcriptase inhibition bytannins，，in the Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,1992, Vol 2，pp 1529—1534.該出版物評(píng)價(jià)了單寧和縮合單寧的抗HIV活性以及它們抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的潛力。盡 管這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)了一些具有抗HIV活性的單寧，但它們具有關(guān)聯(lián)毒性。該出版物描述了 3 種兒茶素縮合形式的化合物。分子40、44和45是兒茶素的二聚體、三聚體和四聚體。這篇 論文總結(jié)出RT酶的抑制作用與這些單寧的抗HIV活性之間沒有關(guān)系。另外，分子44和45 分別表現(xiàn)出90%和73%的抗HIV活性，但沒有表現(xiàn)出對(duì)RT酶的顯著抑制。Michael Ovadia 等人，專利申請(qǐng) US 2006 275515A13 Ira IS § "Anti-viral preparations obtained from a natural cinnamon extract"的專利已描述了從肉桂中獲得的天然水性提取物，其具有抗病毒特性。這篇文獻(xiàn) 描述了肉桂的水提取物，在有鹽的情況下，該水提取物經(jīng)歷鹽析析出沉淀。將這種沉淀物再 溶解在水或緩沖液中，并利用瓊脂糖凝膠色譜純化，隨后用另外的緩沖液和半乳糖洗脫。常用的鹽析過(guò)程涉及高分子量分子(通常為肽)的選擇。因此，這個(gè)過(guò)程很顯而 易見的是，這篇文獻(xiàn)中描述的過(guò)程旨在回收高分子量分子(約IOKda)。按照權(quán)利要求，該組合物的活性成分具有大于IOKDA的分子量，并且它對(duì)應(yīng)于 在280nm處約15至200D之間的吸光度。這種化合物最終利用磷酸鹽緩沖液和半乳糖從 sepharon柱中洗脫。因此，最終的化合物具有高濃度的磷酸鹽和半乳糖。此申請(qǐng)中描述的這種高分子量化合物已經(jīng)在流感A PR 8病毒、副流感(仙臺(tái))病 毒、到紅細(xì)胞中的預(yù)吸收，和用流感或仙臺(tái)病毒感染的小鼠體重增加和HIV合胞體研究進(jìn) 行了檢測(cè)。此專利申請(qǐng)的實(shí)施例13描述了在MT2細(xì)胞中利用這個(gè)提取物完成的試驗(yàn)，從 而檢查對(duì)合胞體形成的影響。按照此申請(qǐng)的圖15，在濃度為60 100微克時(shí)它抑制 了合胞體形成。合胞體形成不是抗病毒活性的證實(shí)試驗(yàn)。這在下面出版物中用證據(jù)闡 明。[Gueseppe pantaleo 等人，Eur Jimmunology 1991,21,1771 :1774 ‘dissociation between syncytiaformation and HIV spreading. Suppressing Syncytia formation does notnecessarily reflect inhibition of HIV infection.]盡管所公開的提取物表現(xiàn)出抑制合胞體形成的潛力，但應(yīng)當(dāng)注意，僅一些HIV株導(dǎo) 致合胞體形成。另外，合胞體形成不能與HIV感染或AIDS的存在或進(jìn)展相聯(lián)系。合胞體形成 僅為可被一些株表達(dá)的表型。合胞體形成的缺乏不能與HIV的缺乏或感染的控制相聯(lián)系。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開的目的
本發(fā)明的公開內(nèi)容的第一個(gè)目的在于提供一種組合物，該組合物包含植物來(lái)源的 五聚原花青素類黃酮、三聚體和四聚體。本公開內(nèi)容的第二個(gè)目的在于提供一種制備組合物的方法，該組合物包含植物來(lái) 源，例如樟屬(Cirmamomum)、荔枝(Litchi)和花生屬(Arachis)的五聚原花青素類黃酮、三 聚體和四聚體。本公開內(nèi)容的第三個(gè)目的在于提供一種組合物，該組合物可改善受治療者中的免 疫反應(yīng)并且也可有效對(duì)抗HIV感染、AIDS和流感病毒和感染。本發(fā)明公開的陳述因此，本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及一種組合物，該組合物包含濃度范圍為約55% w/ w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚 體和四聚體、以及可選地連同藥用賦形劑；本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及一種用于制備組合物 的方法，該組合物包含濃度范圍為約55% w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度 范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四聚體，所述方法包含以下步驟利用有 機(jī)溶劑提取粉碎的植物塊從而除去有毒物質(zhì)、干燥該塊從而除去有機(jī)溶劑、利用水性溶劑 再次提取該干燥的塊從而獲得提取物、通過(guò)色譜柱純化該提取物并接著濃縮、純化、標(biāo)準(zhǔn)化 和干燥，從而獲得該組合物；本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及一種改善對(duì)其有需要的受治療者中 的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括向受治療者給予藥物有效量的組合物的步驟，該組合物 包含濃度范圍為約55% w/w約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/ w 約35% w/w的三聚體和四聚體、以及和可選地連同藥用賦形劑；本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉 及一種治療、預(yù)防和控制對(duì)其有需要的受治療者中的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的方法，所述方法包 括向受治療者給予藥物有效量的組合物的步驟，該組合物包含濃度范圍為約55% w/w 約 99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四 聚體、以及可選地連同藥用賦形劑。


圖1示出了類黃酮五聚體的分子結(jié)構(gòu)。圖2示出了類黃酮五聚體的EI-MS。圖3示出了類黃酮五聚體的13C NMR。圖4示出了組合物的快速色譜從而鑒定類黃酮五聚體。圖5示出了黃酮五聚體的HPLC。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及一種組合物，該組合物包含濃度范圍為約55% w/w 約 99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四 聚體、以及可選地連同藥用賦形劑。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物從植物來(lái)源獲得，該植物來(lái)源 選自包括樟屬、荔枝和花生屬的組。在本公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，五聚原花青素類黃酮的優(yōu)選濃度范圍為 約80% w/w約99% w/w，三聚體和四聚體的濃度范圍均為約0. 5% w/w 約20% w/w。
在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述五聚原花青素類黃酮具有約 1440的分子量。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述五聚體為A型原花青素五聚 體。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述賦形劑選自包括樹膠(gum)、 造粒劑、粘結(jié)劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑(矯味劑)、包衣劑、增塑劑、防腐 劑、懸浮劑、乳化劑、防靜電劑、和滾圓劑(spheronization agent)的組。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述組合物被配制成各種劑型， 該劑型選自包括片劑、錠劑(troche)、口含片(lozenge)、水性或油性懸浮劑、分散粉劑或 顆粒劑、硬或軟凝膠膠囊中的乳劑、糖漿和酏劑的組。本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及一種用于制備組合物的方法，該組合物包含濃度范圍為約 55% w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w 的三聚體和四聚體，所述方法包括以下步驟利用有機(jī)溶劑提取粉碎的植物塊從而除去有 毒物質(zhì)、干燥該塊從而除去有機(jī)溶劑、利用水性溶劑再次提取該干燥的塊從而獲得提取物、 以及通過(guò)色譜柱純化該提取物，接著濃縮、純化、標(biāo)準(zhǔn)化和干燥，從而獲得該組合物。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方式中，該粉碎的植物塊選自包括樟屬、荔枝和 花生屬的植物的組。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該有機(jī)溶劑選自包括乙酸乙酯、 乙酸丁酯、乙酸戊酯、乙酸2-乙基己酯以及它們的任何組合的組。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述提取進(jìn)行從約8小時(shí)到約12 小時(shí)范圍的時(shí)間段，優(yōu)選約10小時(shí)。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述有毒物質(zhì)包括香豆素和醛。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述提取物通過(guò)二階段(兩段， two stage)色譜柱過(guò)濾。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述色譜柱選自包括XAD-1180、 XAD-7HP 和 XAD-1140 樹脂的組。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述用水性溶劑再提取在約 3. 8 約5. 8的pH范圍內(nèi)進(jìn)行，優(yōu)選pH為約4. 0。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述再提取在約30°C 90°C的 范圍內(nèi)的溫度下，優(yōu)選在31°C 40°C之間的范圍內(nèi)，進(jìn)行約8小時(shí) 約12小時(shí)范圍內(nèi)的時(shí) 間段，優(yōu)選約10小時(shí)。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述水溶劑是酸化的去離子水。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述組合物進(jìn)一步包含賦形劑， 該賦形劑選自包括樹膠、造粒劑、粘結(jié)劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、包衣劑、 增塑劑、防腐劑、懸浮劑、乳化劑、防靜電劑、和滾圓劑的組。本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及一種改善對(duì)其有需要的受治療者中的免疫反應(yīng)的方法，所 述方法包括向受治療者給予藥物有效量的組合物的步驟，該組合物包含濃度范圍為約陽(yáng)％ w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三 聚體和四聚體、以及可選地連同藥用賦形劑。
在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該免疫反應(yīng)在選自但不局限于流 感、HIV感染和AIDS的組中的疾病中被改善。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該免疫反應(yīng)在對(duì)其有需要的受治 療者中被改善。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該藥物有效量的組合物在約Img/ kg 約100mg/kg受治療者體重的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述方法用于治療、預(yù)防和控制 由受治療者中的病原體引起的感染。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述病原體包括A型流感病毒和 HIV病毒。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述病毒類型為H1N1、H3N2、X4 和R5熱帶(tropic)病毒。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該受治療者為動(dòng)物或人類。本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及一種治療、預(yù)防和控制對(duì)其有需要的受治療者中的病毒感 染的方法，其中所述方法包括給予受治療者藥物有效量的組合物作為抗病毒制劑的步驟， 該組合物包含濃度范圍為約55% w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為 約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四聚體、以及和可選地連同藥用賦形劑。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，所述組合物抑制A型流感病毒、 HIV的X4熱帶病毒和HIV的R5熱帶病毒。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該藥物有效量的組合物在約Img/ kg 約100mg/kg受治療者體重的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該受治療者是動(dòng)物或人類。本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及一種治療、預(yù)防和控制對(duì)其有需要的受治療者中的逆轉(zhuǎn)錄 病毒感染的方法，所述方法包括給予受治療者藥物有效量的組合物的步驟，該組合物包含 濃度范圍為約55% w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/ w 約35% w/w的三聚體和四聚體、以及可選地連同藥用賦形劑。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方式中，所述逆轉(zhuǎn)錄病毒感染包括A型流感感染 和HIV感染和AIDS。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該藥物有效量的組合物在約Img/ kg 約100mg/kg受治療者體重的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)另外的實(shí)施方式中，該受治療者為動(dòng)物或人類。本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及一種源自植物來(lái)源、標(biāo)準(zhǔn)化至如圖1所示A型原花青素黃 酮(flavanoid)五聚體的50% 99%的新型標(biāo)準(zhǔn)化組合物。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及一 種獲得源自植物來(lái)源、標(biāo)準(zhǔn)化至A型原花青素黃酮五聚體的50% 99%的新型標(biāo)準(zhǔn)化組合 物的方法。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及源自植物來(lái)源、標(biāo)準(zhǔn)化至50% 99%的A型原花青素 黃酮五聚體的新型標(biāo)準(zhǔn)化組合物在預(yù)防、治療和控制HIV和流感感染方面的用途。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及源自植物來(lái)源、標(biāo)準(zhǔn)化至50 % 99 %的A型原花青素黃 酮五聚體的新型標(biāo)準(zhǔn)化組合物在對(duì)其有需要的受治療者中導(dǎo)致改善的對(duì)抗原的免疫反應(yīng) 的用途。
在本發(fā)明的公開內(nèi)容的另外的實(shí)施方式中，該免疫反應(yīng)在性質(zhì)上可以是治療、控 制或預(yù)防性的。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方式中，用于獲得組合物的植物來(lái)源為樟屬、荔 枝和花生屬。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方式中，該源自植物來(lái)源的新型標(biāo)準(zhǔn)化組合物標(biāo) 準(zhǔn)化為A型原花青素黃酮五聚體。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的另一個(gè)實(shí)施方式中，如圖1所示，五聚體具有1440的分子量。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的另一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物包含在50 % 99 %范圍內(nèi) 的五聚體。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的另一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物包含在 35%范圍內(nèi)的 三聚體和四聚體。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的另一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物為如圖5中色譜圖所表征 的。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的另一個(gè)實(shí)施方式中，該新型組合物的單體單元選自兒茶素 的組，優(yōu)選兒茶素或表兒茶素。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及一種通過(guò)本文中示出的方法制造新型組合物的方法。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方式中，該標(biāo)準(zhǔn)化組合物可選地還包含藥用賦形 劑。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的另外的實(shí)施方式中，該賦形劑選自包括添加劑、樹膠、甜味 劑、包衣、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、懸浮劑、溶劑、著色劑、助流劑、防粘劑、防靜電 齊U、表面活性劑、增塑劑、乳化劑、調(diào)味劑、粘度增強(qiáng)劑和抗氧化劑的組。在本發(fā)明的公開內(nèi)容的又一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物被配制成這種劑型，如液體、 粉齊 、膠囊劑、片齊 、可注射齊 、貼片、軟膏、凝膠劑、乳劑、乳膏齊 、乳液、潔牙齊 、噴霧劑和滴 劑。在本公開內(nèi)容的又一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物是粉劑或液體。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及一種獲得源自植物來(lái)源、標(biāo)準(zhǔn)化至50 % 99 %的A型原 花青素黃酮五聚體的新型標(biāo)準(zhǔn)化組合物的方法，其中該方法包括以下步驟1.將該植物原材料研磨成預(yù)定尺寸2.用有機(jī)溶劑提取從而除去不需要的有毒物質(zhì)3.用去離子水對(duì)植物粉末進(jìn)行水性提取4.利用二階段(兩段)色譜純化裝置進(jìn)行提取物純化5.干燥、混合和過(guò)濾從而獲得包含如圖1所示純度為50% 99%的黃酮五聚體的 組合物。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及本新型組合物可選地連同賦形劑在制造用于治療和控 制HIV以及預(yù)防、治療和控制流感病毒感染的藥劑方面的用途。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及 本組合物可選地連同賦形劑在制造治療和控制HIV感染以及預(yù)防、治療和控制對(duì)其有需要 的受治療者中流感感染的藥劑方面的用途。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及本組合物可選地連同賦形劑在制造改善對(duì)其有需要的 受治療者中的免疫反應(yīng)的藥劑方面的用途。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及本組合物在對(duì)其有需
11要的受治療者中引起免疫反應(yīng)改善方面的用途。 在本發(fā)明的公開內(nèi)容的又一個(gè)實(shí)施方式中，該受治療者是動(dòng)物和人類。本發(fā)明的公開內(nèi)容還涉及一種制造源自植物來(lái)源、標(biāo)準(zhǔn)化至50 % 99 %的A型原 花青素黃酮五聚體新型標(biāo)準(zhǔn)化組合物的方法，該方法包括以下步驟1.研磨植物肉桂或荔枝果皮，或者帶有紅色種皮的花生殼(groimdnutshell)2.利用主要由乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯或乙酸2-乙基己酯組成的有機(jī)(優(yōu) 選酯)溶劑作為單種溶劑或上述溶劑的混合物，提取該材料從而除去脂肪和毒素以及其它 芳香化合物。這個(gè)步驟對(duì)于肉桂是可選的3.干燥所提取的植物材料從而不含該溶劑4.用pH為4或pH在3.8 5.8之間，優(yōu)選pH為4.0的去離子水提取。利用二 階段(兩段)色譜分離法進(jìn)行提取物純化，一階段(一段)用于極性分子而另一階段(一 段)用于非極性分子5.利用醇溶劑洗脫所吸附的材料6.將所洗脫的溶劑濃縮為細(xì)粉末7.用水稀釋該濃縮物，并可選地噴霧干燥從而清除殘余的溶劑。通過(guò)上述方法獲得的新型組合物包含50% -99%五聚體、-35%三聚體和 1% -35%四聚體，并如圖5中所示表征的。本發(fā)明的公開內(nèi)容利用下面實(shí)施例進(jìn)一步地詳細(xì)描述。然而，這些實(shí)施例不應(yīng)當(dāng) 理解為限制本發(fā)明公開內(nèi)容的范圍。實(shí)施例1將平均尺寸從16網(wǎng)目尺寸(mesh size)起的IOOOg粉碎的肉桂粉末浸泡在 3000ml乙酸乙酯中，并倒入具有200網(wǎng)目篩的多孔底篩(perforatedbottom sieve)的提 取器中。將底部洗脫劑在填裝塊上反復(fù)循環(huán)從而在約8小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)實(shí)現(xiàn)有效提取。棄 去洗脫劑，從提取器中取出該塊并在30°C下的強(qiáng)制通風(fēng)爐(forced draft oven)中進(jìn)行干 燥。在通過(guò)干燥除去溶劑之后，將該塊再次填裝在提取器中。將該填裝塊用5000ml pH為 4. 0的酸性去離子水提取，將該提取物在35°C下在床層(bed)上循環(huán)約8小時(shí)從而實(shí)現(xiàn)有 效提取。將該提取物通過(guò)二階段色譜柱過(guò)濾，從而獲得具有80%的分子量為1440的A型 原花青素黃酮五聚體的組合物。將該提取物通過(guò)第一柱從而提取組合物的相對(duì)較小極性的 分子，并且色譜分離的第二階段用于組合物的相對(duì)較高極性的分子。所使用的樹脂分別為 XAD-1180和XAD-7HP樹脂的等效物。該柱用不含附著物(adhering substance)的D. Μ.水 徹底清洗，并且洗脫劑是中性的。將該柱進(jìn)一步用175ml純異丙醇洗脫，并且所收集的洗脫 劑在低于40°C的真空下濃縮，用水稀釋并在下面條件下噴霧干燥。噴霧干燥器并流(同向流)氣流(Co current airflow)進(jìn)口溫度140°C出口溫度60°C霧化器(Atomizer)RPM14000最終重量為5g。實(shí)施例2
將平均尺寸從16網(wǎng)目尺寸起的IOOOg粉碎的肉桂粉末浸泡在3000ml乙酸乙酯 中，并倒入具有200網(wǎng)目篩的多孔底篩的提取器中。將底部洗脫劑在填裝塊上反復(fù)循環(huán)從 而在約10小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)實(shí)現(xiàn)有效提取。棄去洗脫劑，從提取器中取出該塊并在30°C下的 強(qiáng)制通風(fēng)爐中進(jìn)行干燥。在通過(guò)干燥除去溶劑之后，將該塊再次填裝在提取器中。將該填 裝塊用5升pH為4. 0的酸性去離子水提取，將該提取物在35°C下在該床層上循環(huán)約8小時(shí) 從而實(shí)現(xiàn)有效提取。將該提取物通過(guò)二階段色譜柱過(guò)濾，從而獲得75 %的分子量為1440的A型原花青 素黃酮五聚體的組合物。首先將該提取物通過(guò)第一柱從而提取組合物的相對(duì)較小極性的分 子，并且色譜分離的第二階段用于提取組合物的相對(duì)較高極性的分子。所使用的樹脂分別 為XAD-1180和XAD-7HP樹脂的等效物。將該柱用不含附著物的D. M.水徹底清洗，并且洗 脫劑是中性的。將該柱進(jìn)一步用250ml純甲醇洗脫，并且所收集的洗脫劑在低于40°C的真 空下濃縮，用水稀釋并在下面條件下噴霧干燥。噴霧干燥器并流(同向流)氣流進(jìn)口溫度145 °C出口溫度60°C霧化器RPM14000最終重量為4. 5g。實(shí)施例3將平均尺寸從16網(wǎng)目尺寸起的IOOOg粉碎的肉桂粉末浸泡在2500ml乙酸丁酯 中，并倒入具有200網(wǎng)目篩的多孔底篩的提取器中。將底部洗脫劑在填裝塊上反復(fù)循環(huán)從 而在10小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)實(shí)現(xiàn)有效提取。棄去洗脫劑，從提取器中取出該塊并在30°C下的強(qiáng) 制通風(fēng)爐中進(jìn)行干燥。在通過(guò)蒸發(fā)除去溶劑之后，將該塊再次填裝在提取器中。該填裝塊 用酸性脫礦質(zhì)水(demineralised water)提取，將該提取物在30°C下在該床層上循環(huán)約12 小時(shí)從而實(shí)現(xiàn)有效提取。將該提取物通過(guò)二階段色譜柱過(guò)濾，從而獲得89%的分子量為1440的A型原花 青素黃酮五聚體的組合物。將該提取物首先通過(guò)第一柱從而提取組合物的相對(duì)較小極性的 分子，并且色譜分離的第二階段用于組合物的相對(duì)較高極性的分子。所使用的樹脂分別為 XAD-1180和XAD-7HP樹脂的等效物。將該柱用不含附著物的D. M.水徹底清洗，并且洗脫劑 是中性的。將該柱進(jìn)一步用200ml純乙醇洗脫，并且所收集的洗脫劑在低于40°C的真空下 濃縮，用水稀釋并在下面條件下噴霧干燥。噴霧干燥器并流(同向流)氣流進(jìn)口溫度145 °C出口溫度60°C霧化器RPM14000最終重量為4. 8g。實(shí)施例4將平均尺寸從16網(wǎng)目尺寸起的IOOOg粉碎的肉桂粉末浸泡在2500ml乙酸丁酯 中，并倒入具有200網(wǎng)目篩的多孔底篩的提取器中。將底部洗脫劑在填裝塊上反復(fù)循環(huán)從 而在10小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)實(shí)現(xiàn)有效提取。棄去洗脫劑，從提取器中取出該塊并在30°C下的強(qiáng)制通風(fēng)爐中進(jìn)行干燥。在通過(guò)蒸發(fā)除去溶劑之后，將該塊再次填裝在提取器中。將該填裝 塊用5升酸性去離子水提取，將該提取物在30°C下在該床層上循環(huán)約12小時(shí)從而實(shí)現(xiàn)有效 提取。將該提取物通過(guò)二階段色譜柱過(guò)濾，從而獲得99%的分子量為1440的A型原花 青素黃酮五聚體的組合物。首先將該提取物通過(guò)第一柱從而提取組合物的相對(duì)較小極性的 分子，并且色譜分離的第二階段用于組合物的相對(duì)較高極性的分子。所使用的樹脂分別為 XAD-1180和XAD-7HP樹脂的等效物。將該柱用不含附著物的D. M.水徹底清洗，并且洗脫 劑是中性的。將該柱進(jìn)一步用純異丙醇洗脫，并且所收集的洗脫劑在低于40°C的真空下濃 縮，用水稀釋并在下面條件下噴霧干燥。噴霧干燥器并流(同向流)氣流進(jìn)口溫度145 °C出口溫度60 0C霧化器RPM14000最終重量為5g。實(shí)施例5將平均尺寸從16網(wǎng)目尺寸起的IOOOg粉碎的肉桂皮(cirmamoncassia)粉末浸泡 在3000ml乙酸乙酯中，并倒入具有200網(wǎng)目篩的多孔底篩的提取器中。將底部洗脫劑在填 裝塊上反復(fù)循環(huán)從而在約8小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)實(shí)現(xiàn)有效提取。棄去洗脫劑，從提取器中取出 該塊并在30°C下的強(qiáng)制通風(fēng)爐中進(jìn)行干燥。在通過(guò)干燥除去溶劑之后，將該塊再次填裝在 提取器中。將該填裝塊用5000ml pH為4.0的酸性去離子水提取，并且將該提取物在35°C 下在該床層上循環(huán)約8小時(shí)從而實(shí)現(xiàn)有效提取。將該提取物通過(guò)二階段色譜柱過(guò)濾，從而獲得具有55%的分子量為1440的A型 原花青素黃酮五聚體的組合物。將該提取物通過(guò)第一柱從而提取組合物的相對(duì)較小極性的 分子，并且色譜分離的第二階段用于組合物的相對(duì)較高極性的分子。所使用的樹脂分別為 XAD-1180和XAD-7HP樹脂的等效物。將該柱用不含附著物的D. M.水徹底清洗，并且洗脫劑 是中性的。將該柱進(jìn)一步用175ml純異丙醇洗脫，并且所收集的洗脫劑在低于40°C的真空 下濃縮，用水稀釋并在下面條件下噴霧干燥。噴霧干燥器并流(同向流)氣流進(jìn)口溫度140°C出口溫度60°C霧化器RPM14000最終重量為2. 5g。實(shí)施例6 荔枝干果皮中的提取物將IOOOg粉碎的干荔枝果皮浸泡在5000ml體積的酸化水中12小時(shí)時(shí)間并過(guò)濾澄 清。將該澄清的濾液通過(guò)含有等效于XAD-1140和XAD-7HP的吸附樹脂的柱從而捕獲極性 和相對(duì)非極性化合物。用乙醇洗脫為非極性柱的第一柱，并且濃縮洗脫液從而獲得易流動(dòng) 粉末，產(chǎn)率500mg。用乙醇分開洗脫含有所有極性物質(zhì)的第二柱，并濃縮從而獲得Ig粉末。 在HPLC分析中，這個(gè)餾分表示85%的分子量為1440的A型原花青素黃酮五聚體。實(shí)施例7 磨碎的花生殼連同該磨碎的花生殼的紅皮中的提取物
將IOOOg干磨碎的花生殼連同該種子上的紅皮浸泡在5000ml體積pH為3. 8的 酸化水中48小時(shí)，然后過(guò)濾得到澄清液體。使該澄清的濾液通過(guò)含有等效于XAD-1140和 XAD-7HP的吸附樹脂的柱從而捕獲極性和相對(duì)非極性化合物。用乙醇洗脫非極性柱的第一 柱，并濃縮洗脫劑從而獲得易流動(dòng)粉末，產(chǎn)率20g。用乙醇分開洗脫含有所有極性物質(zhì)的第 二柱，并濃縮得500mg粉末。在HPLC分析中，這個(gè)餾分表示如圖5中所示的82%的分子量 為1440的A型原花青素黃酮五聚體。實(shí)施例8 純化從而獲得黃酮五聚體將通過(guò)實(shí)施例1-6中詳述的方法分離出的粉末溶解在200體積的水中，并過(guò)濾澄 清。將該澄清的濾液在60°C下用活性炭處理從而脫去該溶液的顏色，并在濾紙上過(guò)濾澄清 從而除去所有不溶性顆粒。將由此獲得的過(guò)濾的溶液用乙酸乙酯提取兩次從而除去所有可 溶性溶劑，并濃縮從而得到粉末。使用下面參數(shù)以快速色譜利用0. 含水甲酸和0. 甲 醇甲酸以梯度方式，在反向C-18硅膠上對(duì)該粉末進(jìn)行柱色譜分析。設(shè)備帶有可變UV檢測(cè)器的Combiflash Companionft =Redisep 12gms(反相硅膠)檢測(cè)波長(zhǎng)254nm和 ^Onm、流速18ml/min峰管體積18ml峰寬Imin閾值0. 20AU溶劑A :0. 含水甲酸溶劑B :0. 的甲酸在乙腈中的溶液棄去1 19號(hào)的餾分。收集20 22號(hào)的餾分并濃縮從而得到256g淡棕色粉末。 在TLC篩選的0. IM乙酸鈉乙腈=7 3比率的溶劑體系中，所得粉末在0. 75Rt處出現(xiàn) UV吸收點(diǎn)，在用茴香醛/硫酸試劑噴霧時(shí)，出現(xiàn)被認(rèn)為是原花青素特征的橙色斑點(diǎn)。在m/z 1439. 9處的EI-MS(M-H)(如圖2中示出的)離子峰對(duì)應(yīng)于相當(dāng)于總共5 個(gè)單元的兒茶素組分088倍)中的多個(gè)部分(multicompartment)。分離的化合物的分子 量為1440.9。兒茶素單元的結(jié)構(gòu)與通過(guò)偶聯(lián)模式(coupling pattern)證實(shí)的表兒茶素結(jié) 構(gòu)一致。在S 4. 84 4. 91之間有兩個(gè)信號(hào)，在黃烷-3-醇單元中2，3-順式立體化學(xué)單峰 (由于高分子量寡聚體引起的峰加寬)有四個(gè)信號(hào)。由于高分子量寡聚性質(zhì)，所以在觀察的 δ 2. 6 2. 9m加寬的峰之間觀察到在末端單元終環(huán)-CH2-亞甲基質(zhì)子的4位置處的F-環(huán) 信號(hào)。芳香族區(qū)域信號(hào)在S 6. 6 7. 6之間，如相對(duì)于環(huán)B和E的兩個(gè)體系。在δ 100. 9 處看到的符合C2碳和C4碳頂環(huán)C的δ 27. 9的13C碳信號(hào)，證實(shí)與中間體系環(huán)的雙鍵合， 如圖3中所示出的。包含濃度范圍為約55% w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為 約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四聚體、以及可選地包括藥用賦形劑的組合物，通過(guò) 按照如上所述的實(shí)施例1 8獲得。另外，該組合物用于在下面實(shí)施例9 14中所述的體 外和體內(nèi)活性。實(shí)施例9 在用環(huán)磷酰胺處理的受治療者中(受損的(compromised)免疫系統(tǒng))測(cè) 試組合物對(duì)體液抗體滴度的影響
基于所接受的治療，將兩種性別的瑞士小白鼠分成5組，每組6只動(dòng)物。在0天時(shí)，所有五組均用生理鹽水中的含IxlO8個(gè)細(xì)胞的綿羊紅細(xì)胞(SRBC)敏化。 2-5組用標(biāo)準(zhǔn)藥物和測(cè)試組合物組合處理8天(0天 7天)。在7天時(shí)，通過(guò)眼球后穿刺 (retro orbital puncture)從五組中的每只小鼠中采集血液樣品，用于確定初次抗體滴 度。隨后在7天時(shí)，在抽血之后，用0.1ml SRBC到足墊(foot pad)中來(lái)激發(fā)(challenge) 小鼠。在14天時(shí)，通過(guò)眼球后穿刺從每只小鼠中采集血液樣品，用于確定二次抗體滴度。此測(cè)試的結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.一種組合物，包含濃度范圍為約55% w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃 度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四聚體、以及可選地連同藥用賦形劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物從植物來(lái)源獲得，所述植物來(lái)源選 自包括樟屬(Cinnamomum)、荔枝(Litchi)和花生屬(Arachis)的組。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述五聚原花青素類黃酮的優(yōu)選濃度范圍為 約80% w/w 約98% w/w，三聚體和四聚體的濃度范圍均為約0. 5% w/w 約20% w/w。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述五聚原花青素類黃酮具有約1440的分子量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述五聚體為A型原花青素五聚體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述賦形劑選自包括樹膠、造粒劑、粘結(jié)劑、潤(rùn) 滑劑、崩解劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、包衣劑、增塑劑、防腐劑、懸浮劑、乳化劑、防靜電齊U、 和滾圓劑的組。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物被配制成各種劑型，所述劑型選 自包括片劑、錠劑、口含片、水性或油性懸浮劑、分散粉劑或顆粒劑、硬或軟凝膠膠囊中的乳 劑、糖漿和酏劑的組。
8.一種用于制備組合物的方法，所述組合物包含濃度范圍為約55% w/w 約99% w/ w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四聚體，所 述方法包括以下步驟a)利用有機(jī)溶劑提取粉碎的植物塊從而除去有毒物質(zhì)；b)干燥所述塊從而除去所述有機(jī)溶劑；c)利用水性溶劑再次提取干燥的所述塊從而獲得提取物；以及d)通過(guò)色譜柱純化所述提取物，接著濃縮、純化、標(biāo)準(zhǔn)化和干燥從而獲得所述組合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述粉碎的植物塊選自包括樟屬、荔枝和花生屬 的植物的組。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述有機(jī)溶劑選自包括乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙 酸戊酯、乙酸2-乙基己酯以及它們的任何組合的組。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述提取進(jìn)行了從約8小時(shí)到約12小時(shí)范圍的 時(shí)間段，優(yōu)選約10小時(shí)。
12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述有毒物質(zhì)包括香豆素和醛。
13.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述提取物通過(guò)二階段色譜柱過(guò)濾。
14.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述色譜柱選自包括XAD-1180、XAD-7HP和 XAD-1140樹脂的組。
15.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述用水性溶劑再提取在約3.8 約5. 8的pH 范圍內(nèi)進(jìn)行，優(yōu)選pH為約4.0。
16.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述再提取在約30°C 90°C的范圍的溫度下， 優(yōu)選在31°C 40°C之間的范圍，進(jìn)行約8小時(shí) 約12小時(shí)范圍的時(shí)間段，優(yōu)選約10小時(shí)。
17.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述水性溶劑是酸化的去離子水。
18.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含賦形劑，所述賦形劑選自 包括樹膠、造粒劑、粘結(jié)劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、包衣劑、增塑劑、防腐劑、懸浮劑、乳化劑、防靜電劑、和滾圓劑的組。
19.一種改善對(duì)其有需要的受治療者中的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括給予所述受 治療者藥物有效量的組合物的步驟，所述組合物包含濃度范圍為約55% w/w 約99% w/w 的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四聚體、以及 可選地連同藥用賦形劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，在選自但不局限于流感、HIV感染和AIDS的組 中的疾病中，所述免疫反應(yīng)被改善。
21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述免疫反應(yīng)在對(duì)其有需要的受治療者中被 改善。
22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述藥物有效量的組合物在約lmg/kg 約 100mg/kg受治療者體重的范圍內(nèi)。
23.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述方法用于治療、預(yù)防和控制由受治療者中 的病原體引起的感染。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述病原體包括A型流感病毒和HIV病毒。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中，所述病毒類型為流感病毒Hmi和H3N2。
26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中，所述病毒類型為HIVX4熱帶病毒和HIV R5熱 帶病毒。
27.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述受治療者為動(dòng)物或人類。
28.一種治療、預(yù)防和控制對(duì)其有需要的受治療者中的病毒感染的方法，其中，所述方 法包括給予所述受治療者藥物有效量的組合物作為抗病毒制劑的步驟，所述組合物包含濃 度范圍為約55% w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三聚體和四聚體、以及可選地連同藥用賦形劑。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的應(yīng)用，其中，所述組合物抑制A型流感病毒、HIV的X4熱帶 病毒和HIV的R5熱帶病毒。
30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述藥物有效量的組合物在約lmg/kg 約 100mg/kg受治療者體重的范圍內(nèi)。
31.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述受治療者為動(dòng)物或人類。
32.—種治療、預(yù)防和控制對(duì)其有需要的受治療者中的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的方法，所述方 法包括給予所述受治療者藥物有效量的組合物的步驟，所述組合物包含濃度范圍為約55% w/w 約99% w/w的五聚原花青素類黃酮、濃度范圍均為約0. 5% w/w 約35% w/w的三 聚體和四聚體、以及可選地連同藥用賦形劑。
33.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中，所述逆轉(zhuǎn)錄病毒感染包括A型流感感染、HIV 感染和AIDS。
34.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中，所述藥物有效量的組合物在約lmg/kg 約 100mg/kg受治療者體重的范圍內(nèi)。
35.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中，所述受治療者為動(dòng)物或人類。
全文摘要
本發(fā)明的公開內(nèi)容涉及從植物來(lái)源，即樟屬、荔枝和花生屬中獲得的抗病毒制劑。本發(fā)明的公開內(nèi)容提供了包含五聚原花青素類黃酮、三聚體和四聚體的組合物以及制備該組合物的方法。該組合物可改善免疫反應(yīng)，并發(fā)現(xiàn)該組合物可用于治療和控制HIV感染和AIDS以及用于預(yù)防、治療和控制流感病毒和感染。
文檔編號(hào)A61K31/353GK102099028SQ200980127864
公開日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2009年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月11日
發(fā)明者蘇尼爾·布哈斯卡拉恩, 莫漢·維什瓦拉曼 申請(qǐng)人:梧桐生物技術(shù)私人有限公司