專(zhuān)利名稱(chēng)：蒼術(shù)酮脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及蒼術(shù)酮脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
白術(shù)為菊科植物白術(shù)(Atractylodes macroc印hala koidz)的干燥根莖，是臨床 應(yīng)用最廣泛的藥材之一，中醫(yī)認(rèn)為其性溫，味辛、苦，具有補(bǔ)脾、益胃、燥濕、和中的功效。白 術(shù)主要含有揮發(fā)油，其中蒼術(shù)酮是揮發(fā)油中含量最高的化合物。中醫(yī)認(rèn)為白術(shù)對(duì)慢性肝 炎、肝腹水、肝癌等脾胃虛弱，脾腎陽(yáng)虛或氣血虛弱之證有較好療效。現(xiàn)代藥理研究表明， 蒼術(shù)酮具有細(xì)胞毒性，能抑制肝毒細(xì)胞對(duì)肝組織的破壞作用，修復(fù)肝損傷。在對(duì)358種植 物中藥單方和復(fù)方進(jìn)行篩選時(shí)，白術(shù)揮發(fā)油對(duì)小鼠肉瘤180的抑制作用最強(qiáng)(抑制率為 31-49%)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)酮對(duì)小鼠肉瘤S180、艾氏腹水癌及淋巴肉瘤腹水型均有抑 制作用，給藥10微克/毫升，24小時(shí)內(nèi)使癌細(xì)胞全部脫落；5微克/毫升時(shí)，可使大部分癌 細(xì)胞脫落。最新研究表明，蒼術(shù)酮是鈉泵抑制因子，具有抑制Na+， KtATP酶的作用，其鈉泵 抑制途徑是與E2酶結(jié)合，阻斷了 E2-P向K. E2的傳遞途徑，揭示了蒼術(shù)酮的鈉泵抑制作用 與修復(fù)肝損傷、促使腫瘤細(xì)胞凋亡之間的關(guān)聯(lián)關(guān)系。 蒼術(shù)酮是脂溶性物質(zhì)，在體內(nèi)溶出差，生物利用度低，造成給藥時(shí)間短、面積小，影 響了給藥效果。因此，將其制成一種水溶性好、吸收快，并且具有肝靶向作用，長(zhǎng)效、控制釋 放的新劑型是十分必要的。脂質(zhì)體是由磷脂、膽固醇等為膜材，將藥物包封于類(lèi)脂質(zhì)雙分子 層而制得的超細(xì)粒子藥物載體制劑。脂質(zhì)體具有靶向定位作用，進(jìn)入體內(nèi)優(yōu)先被富含網(wǎng)狀 內(nèi)皮細(xì)胞的組織如肝、脾、骨髓等所攝取。根據(jù)肝器官給藥的特點(diǎn)，將蒼術(shù)酮制備為脂質(zhì)體， 增加蒼術(shù)酮在水中溶出度與生物利用度，使藥物在肝組織中緩慢釋放，提高蒼術(shù)酮對(duì)局部 給藥效果，有利于制劑更好地發(fā)揮胃部給藥的藥效。更為關(guān)鍵的是，蒼術(shù)酮脂質(zhì)體增強(qiáng)滲透 與滯留，通過(guò)毛細(xì)血管上皮細(xì)胞間隙進(jìn)入腫瘤組織，在肝部腫瘤治療中有很好的被動(dòng)靶向 作用，特別適合開(kāi)發(fā)為抑制肝腫瘤的天然藥物。 脂質(zhì)體采用的制備方法有薄膜分散法、薄膜-超聲波分散法、熔融法、凍融法、注 入法、逆相蒸發(fā)法、復(fù)乳法等。由于這些方法需要使用大量的有機(jī)溶劑，需要進(jìn)行復(fù)雜的后 處理，加之蒼術(shù)酮本身的化學(xué)性質(zhì)不夠穩(wěn)定，在長(zhǎng)時(shí)間的熱處理過(guò)程中容易發(fā)生氧化與降 解反應(yīng)。更為關(guān)鍵的是，按傳統(tǒng)方法制備的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體存在穩(wěn)定性差、包埋率低小、易于 聚集、靶向性不強(qiáng)等問(wèn)題。因此，經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)，已有一些文獻(xiàn)與專(zhuān)利對(duì)藥 物的脂質(zhì)體進(jìn)行了報(bào)道，但尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的報(bào)道。 基于國(guó)內(nèi)外研究與技術(shù)進(jìn)展現(xiàn)狀，采用適合蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的新方法、新工藝， 保證蒼術(shù)酮在脂質(zhì)體包封過(guò)程中的穩(wěn)定性，解決脂質(zhì)體團(tuán)聚問(wèn)題，提高脂質(zhì)體的包封率，是 蒼術(shù)酮脂質(zhì)體新劑型研究需解決的關(guān)鍵問(wèn)題。超臨界流體技術(shù)是一種新型超細(xì)粒子制備與 包覆技術(shù)，近年來(lái)已拓展至微膠囊、微球等靶向藥物制備領(lǐng)域。將超臨界流體用于蒼術(shù)酮等 熱敏性成分的包封，使用化學(xué)惰性的C02作為溶劑，不需進(jìn)行溶劑后處理，過(guò)程條件溫和易 控，有利于保證被包封物質(zhì)的穩(wěn)定性，符合"回歸自然，崇尚綠色"的要求。
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超臨界流體快速膨脹法(RESS)是一種重要的超臨界流體技術(shù)，其過(guò)程是先將藥 物溶解在sc-co2中，再通過(guò)噴嘴霧化噴出，經(jīng)快速膨脹減壓后，溶質(zhì)因過(guò)飽和而析出固體微 粒。由于磷脂必須分散在水溶液中才能自發(fā)形成脂質(zhì)體，常規(guī)RESS過(guò)程不適用脂質(zhì)體形 成，限制了其在脂質(zhì)體形成的應(yīng)用。中國(guó)專(zhuān)利"藥物靶向脂質(zhì)體的制備方法"(CN 1218746C) 先將SOD藥物形成W/0的乳濁液后，再利用超臨界流體溶脹沉析藥物。中國(guó)專(zhuān)利"化妝 品脂質(zhì)體制備方法"(CN1254550A)、"脂溶性藥物脂質(zhì)體生產(chǎn)工藝及欖香烯脂質(zhì)體注射 液"(CN1221607A)、"脂質(zhì)體的生產(chǎn)工藝及設(shè)備"(CN148596A)都是將磷脂等原料等溶解在超 臨界0)2中后，釋放壓力之形成微粒后，在常壓下加入分散液中以形成脂質(zhì)體。上述專(zhuān)利盡 管使用到了超臨界(A，但是脂質(zhì)體膜材的溶解與分散是獨(dú)立的兩個(gè)步驟，未能充分利用超 臨界(A高流動(dòng)性的優(yōu)勢(shì)，反而使脂質(zhì)體的制備過(guò)程更為復(fù)雜，過(guò)程因子更加難以控制。
為充分發(fā)揮超臨界流體制備脂質(zhì)體的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)超臨界C02介質(zhì)中脂質(zhì)體膜材、被 包封藥物的膨脹與分散一體化完成是十分必要的。而現(xiàn)階段存在的問(wèn)題是，由于(A與水極 性相差很大，兩者分子間的作用力很小，直接在超臨界C02介質(zhì)中將脂質(zhì)體膜材分散在水中 是很困難的，獲得的脂質(zhì)體粒徑較大，容易團(tuán)聚。基于此，在申請(qǐng)人前期有關(guān)超臨界流體快 速膨脹法(RESS)制作脂質(zhì)體的工作基礎(chǔ)上(文震等，過(guò)程工程學(xué)報(bào)，2009，9(2) :350-353)， 利用表面活性劑為穩(wěn)定劑，采用超臨界強(qiáng)制分散沉析這一新技術(shù)，將脂質(zhì)體膜材與蒼術(shù)酮 溶解于超臨界C02/乙醇中，溶液經(jīng)膨脹后分散在含有表面活性劑作為穩(wěn)定劑的溶液中，形 成脂質(zhì)體混懸液，為超臨界C02介質(zhì)中的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的自組裝和穩(wěn)定化提供了一條新途 徑。 利用超臨界流體技術(shù)制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體，相比于傳統(tǒng)方法具有優(yōu)勢(shì)在于(l)使 用化學(xué)惰性的C02為溶劑，包封條件溫和，可以防止蒼術(shù)酮的氧化降解；(2)超臨界流體的 快速質(zhì)量傳遞性(如高擴(kuò)散度和低粘度)，有利于超細(xì)、直至納米級(jí)，粒度均勻的脂質(zhì)體的 形成。(3)脂質(zhì)體的載藥性能與粒徑分布可調(diào)節(jié)超臨界參數(shù)來(lái)控制，表面活性劑對(duì)脂質(zhì)體 包封過(guò)程起到穩(wěn)定化作用，能有效避免脂質(zhì)體的團(tuán)聚現(xiàn)象。該技術(shù)不使用氯仿等有毒有機(jī) 溶劑，所制備的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體無(wú)溶劑殘留，穩(wěn)定性好，增加蒼術(shù)酮在水中溶出度與生物利用 度，提高蒼術(shù)酮對(duì)肝臟病變部位的給藥效果，保了脂質(zhì)體的安全性，具有技術(shù)與應(yīng)用的新穎 性和創(chuàng)造性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生物利用度好、穩(wěn)定性高的蒼 術(shù)酮脂質(zhì)體。 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的方法，利用超臨界流體強(qiáng)
制分散沉析技術(shù)實(shí)現(xiàn)超臨界co2介質(zhì)中蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的自組裝與穩(wěn)定化過(guò)程，制備得到穩(wěn)
定性好、包封率高并且粒度均勻的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體產(chǎn)物。 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，所述蒼術(shù)酮脂質(zhì)體包括蒼術(shù)酮和脂質(zhì)體膜材，所述蒼術(shù) 酮是菊科植物白術(shù)(Atractylodes macroc印hala koedz)的提取物，所述脂質(zhì)體膜材為磷 脂酰膽堿、或者磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物。 根據(jù)本發(fā)明的另一方面，一種制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的方法，該方法采用超臨界(A強(qiáng) 制分散沉析技術(shù)制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體，具體地說(shuō)將超臨界C02快速膨脹分散至含有表面活性劑作為穩(wěn)定劑的溶液中，制備得到穩(wěn)定的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體，以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的脂質(zhì)體容 易團(tuán)聚、包封率低以及穩(wěn)定性低等不足之處。
本發(fā)明所述制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的方法，包括以下步驟 1)將蒼術(shù)酮和脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界C02/乙醇溶劑，得到超臨界溶液；
2)將表面活性劑作為穩(wěn)定劑溶于水相介質(zhì)，得到穩(wěn)定劑溶液； 3)將所述超臨界溶液在設(shè)定的預(yù)膨脹壓力、預(yù)膨脹溫度下快速?lài)娚渲了龇€(wěn)定劑 溶液，經(jīng)分散并沉析，獲得蒼術(shù)酮脂質(zhì)體混懸液； 4)收集上述蒼術(shù)酮脂質(zhì)體混懸液，即本發(fā)明所述的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體。 所述蒼術(shù)酮是菊科植物白術(shù)(Atractylodes macroc印hala koedz)的提取物。 所述脂質(zhì)體膜材是磷脂酰膽堿、或者磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物，其中磷脂酰
膽堿與膽固醇的質(zhì)量比為i : o i : 1，優(yōu)選5 : 1 3 : i。
所述蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的質(zhì)量比為i : i i : 30，優(yōu)選i : io i : 20。 所述表面活性劑作為穩(wěn)定劑，選自非離子表面活性劑泊洛沙姆(Poloxamer)，非 離子表面活性劑吐溫(Tween)，陰離子表面活性劑烷基聯(lián)苯醚磺酸鹽(Deoxyehoic acid sodi咖，DAS)中的一種或多種。 所述穩(wěn)定劑為泊洛沙姆188，泊洛沙姆188與吐溫80的混合物，DAS與吐溫80的 混合物，或者泊洛沙姆188與DAS的混合物。優(yōu)選為泊洛沙姆188188，或泊洛沙姆188與 DAS的混合物。 所述混合物中各組分的質(zhì)量比為1 : 1 5 : 1，即泊洛沙姆188與吐溫80、 DAS 與吐溫80、泊洛沙姆188與DAS的混合物中，泊洛沙姆188 :吐溫80 = 1 : 1 5 : 1 ;DAS :
吐溫80 = i : i 5 : i ;泊洛沙姆188 :das =1 : i 5 : i。優(yōu)選的質(zhì)量比為3 : i
5 ! 1。 所述表面活性劑在穩(wěn)定劑溶液中的濃度以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)為1 10%，優(yōu)選為2% 5%。 所述水相介質(zhì)可以是磷酸鹽(PBS)緩沖液。 所述預(yù)膨脹壓力為15MPa 30MPa，優(yōu)選為20MPa 30MPa。所述預(yù)膨脹溫度為323K 343K，優(yōu)選為328K 338K。 所述共溶劑乙醇的用量以在C02中的摩爾分?jǐn)?shù)計(jì)(x(CH3CH20H)])為5% 20%， 優(yōu)選摩爾分?jǐn)?shù)為5% 15%。 所述超臨界溶液是以1 5L/min的流速?lài)娚渲了龇€(wěn)定劑溶液，優(yōu)選流速為2 5L/min。 所述蒼術(shù)酮脂質(zhì)體中，蒼術(shù)酮的含量范圍為0. 11% 0. 41%，脂質(zhì)體包封率通常 可達(dá)到80%以上或更高，脂質(zhì)體粒徑通常為60 220nm，平均粒徑約為100nm左右，粒度分 布窄而均勻。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)在于 1)利用表面活性劑為穩(wěn)定劑，采用超臨界C02強(qiáng)制分散沉析的新過(guò)程(RESS)制 備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體。在此過(guò)程中，表面活性劑的作用一是可以降低收集器內(nèi)混合液的表面 張力和黏性，強(qiáng)化了霧滴與水溶液的混合傳質(zhì)作用，改善了通過(guò)噴嘴進(jìn)行膨脹減壓時(shí)的霧 化效果；二是吸附在磷脂分子表面，起到穩(wěn)定磷脂分子的作用，減小了脂質(zhì)體之間的相互碰撞，促進(jìn)磷脂分子在水溶液中自組裝形成脂質(zhì)體，解決了脂質(zhì)膜材在緩沖液中不易擴(kuò)散的 問(wèn)題，并顯著改善脂質(zhì)體團(tuán)聚現(xiàn)象，獲得了包封性能優(yōu)越，粒度小且分布均勻的脂質(zhì)體。
2)保證蒼術(shù)酮的穩(wěn)定性采用超臨界C02流體技術(shù)制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體，蒼術(shù)酮在 化學(xué)惰性的C02介質(zhì)中完成脂質(zhì)體包封過(guò)程，不使用氯仿等有毒有機(jī)溶劑，包封條件溫和， 能避免蒼術(shù)酮的氧化，保持蒼術(shù)酮的穩(wěn)定性與生物活性。 3)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備過(guò)程中的穩(wěn)定化作用采用超臨界C02膨脹并分散至表面活 性劑溶液的新過(guò)程制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體，在表面活性劑的穩(wěn)定作用下，利用超臨界流體的快 速質(zhì)量傳遞性(如高擴(kuò)散度和低粘度)，有利于形成超細(xì)、直至納米級(jí)的粒度均勻的脂質(zhì) 體，克服了傳統(tǒng)方法制備過(guò)程中脂質(zhì)體容易團(tuán)聚的缺陷，為利用蒼術(shù)酮脂質(zhì)體作為注射劑 中間體創(chuàng)造了條件。 4)提高蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的理化性質(zhì)所制備的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的包封率高于80%，粒 徑為100nm左右，粒度分布窄而均勻，均高于國(guó)家藥典對(duì)藥物粒子的質(zhì)量要求。對(duì)于充分保 證發(fā)揮蒼術(shù)酮的生理功效，擴(kuò)大蒼術(shù)酮的臨床與應(yīng)用價(jià)值具有重要意義。


圖1顯示本發(fā)明制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的方法的一種實(shí)施方式的流程圖，其中1C02鋼
瓶；2熱交換器；3冷機(jī)；4高壓泵；5反應(yīng)釜；6噴嘴；7收集器；8量筒；9儲(chǔ)罐；10轉(zhuǎn)子流量
計(jì)； 圖2顯示壓力對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響； 圖3顯示溫度對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響； 圖4顯示共溶劑乙醇對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響； 圖5顯示脂質(zhì)體膜材比例對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響； 圖6顯示藥脂比對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響； 圖7顯示根據(jù)本發(fā)明方法制備的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的微觀(guān)結(jié)構(gòu)的透射電鏡(TEM)圖； 圖8顯示根據(jù)薄膜分散法制備的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的微觀(guān)結(jié)構(gòu)的透射電鏡(TEM)圖； 圖9顯示根據(jù)本發(fā)明方法制備的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的粒度分布圖； 圖10顯示根據(jù)薄膜分散法制備的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的粒度分布具體實(shí)施例方式
為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，以下實(shí)施例用于詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，但
不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。 實(shí)施例1蒼術(shù)酮fl旨質(zhì)體的制備與測(cè)l定 1.蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的制備 材料與裝置蒼術(shù)酮，菊科植物白術(shù)(Atractylodes macroc印hala koedz)的提取 物，由海王生物股份公司提供，質(zhì)量分?jǐn)?shù)^ 95%，批號(hào)080115 ;藥材產(chǎn)自浙江磐安，浙江磐 安藥材公司提供，批號(hào)BZ07061501 ;磷脂酰膽堿和膽固醇，上海伯奧生物工程公司提供，分 析純，批號(hào)BA20071206, BA20071125 ;超臨界流體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)裝置，由華南理工大學(xué)現(xiàn)代化技 術(shù)中心設(shè)計(jì)制造。 制備方法在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的方法可以在超臨界C02
6快速膨脹裝置中完成，詳細(xì)流程圖如圖1所示。 將表面活性劑Poloxamer188作為穩(wěn)定劑溶于pH = 7. 2的磷酸鹽(PBS)緩沖液 中，配成濃度為5%的穩(wěn)定劑溶液100mL，將配好的溶液倒入C02流體收集釜7中，封蓋。脂 質(zhì)體膜材由磷脂、膽固醇組成，總質(zhì)量為5g，其中磷脂、膽固醇的質(zhì)量比為3 : 1。將蒼術(shù)酮 與脂質(zhì)體膜材按藥脂比(質(zhì)量比)l : 20混合，溶解于13mL乙醇(乙醇在SC-(A中的摩爾 分?jǐn)?shù)x(CH3CH^H) = 15%)中，將蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材乙醇溶液置入C(V流體反應(yīng)釜5中， 封蓋。打開(kāi)C02鋼瓶，C02氣體經(jīng)冷機(jī)冷卻成液體后，由高壓計(jì)量泵加壓后進(jìn)入反應(yīng)釜5，反 應(yīng)釜的溫度由換熱器2控制，在預(yù)膨脹壓力30MPa、預(yù)膨脹溫度338K下，脂質(zhì)體膜材與蒼術(shù) 酮溶解在超臨界C02/乙醇混合溶劑中，待體系達(dá)到平衡后，控制超臨界C02沉析條件，快速 釋放壓力，脂質(zhì)材料溶液經(jīng)噴嘴6以2L/min的流速?lài)娚溥M(jìn)收集器7，使脂質(zhì)體均勻分散在穩(wěn) 定劑溶液中，C02經(jīng)轉(zhuǎn)子流量計(jì)9排空，收集制成的脂質(zhì)體混懸液。
2.蒼術(shù)酮含量的測(cè)定 儀器與條件氣相色譜儀，Angient 6890GC，美國(guó)Angient公司；色譜柱HP-5MS， 石英毛細(xì)管柱(30mX250iimX0. 25iim);進(jìn)樣口溫度25(TC ;FID檢測(cè)器溫度28(TC ;柱溫 (程序升溫)80。C (lmin) — (12°C /min) — 250°C (5min);分流比1 : 50 ;載氣^，流量 1. 5ml/min。測(cè)定方法取lmL上述蒼術(shù)酮脂質(zhì)體混懸液置于50mL量瓶中，加入10mL 20% TritonX-lOO的乙醇溶液破乳，并用無(wú)水乙醇定容至刻度，用GC法測(cè)定蒼術(shù)酮質(zhì)量，得到混 懸液中蒼術(shù)酮的總含量為0. 24%。
3.包封率的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)儀器葡聚糖凝膠G-50柱(2X80cm):瑞典Pharmacia,進(jìn)口分裝； 測(cè)定方法用空白脂質(zhì)體預(yù)先飽和葡聚糖凝膠G-50柱，取lmL上述脂質(zhì)體混懸
液上柱，以PBS緩沖液為洗脫液，流速控制在lmL/min，棄去脂質(zhì)體的流出液約15mL(以在
白背景下溶液澄清無(wú)色為準(zhǔn))，收集游離蒼術(shù)酮的濾液約40mL，用正己烷萃取，測(cè)得游離
蒼術(shù)酮的質(zhì)量，根據(jù)脂質(zhì)體中蒼術(shù)酮的質(zhì)量，按式(1)計(jì)算得到蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的包封率為
87. 65%。
脂質(zhì)體爐輛=(1-,汰fS，兩旦)x讓 (1)
脂質(zhì)體混懸液中倉(cāng)術(shù)酮總質(zhì)量 4.形態(tài)觀(guān)察與粒徑測(cè)定 實(shí)驗(yàn)儀器透射電鏡JEM-1230TEM，日本電子公司；動(dòng)態(tài)激光納米粒度分布儀 Malvern nanometer,英國(guó)Malvern儀器公司。 測(cè)定方法取蒼術(shù)酮脂質(zhì)體適量，稀釋后滴在銅網(wǎng)上，利用透射電鏡對(duì)脂質(zhì)體微觀(guān) 形態(tài)進(jìn)行觀(guān)察并拍照。將脂質(zhì)體混懸液稀釋至適當(dāng)倍數(shù)，動(dòng)態(tài)激光納米粒度分布儀測(cè)定脂 質(zhì)體的粒徑，經(jīng)測(cè)定，脂質(zhì)體的平均粒徑為124nm。
棚列2鶴隨加格細(xì)月旨制本先麵駒向 本實(shí)施例考察預(yù)膨脹壓力對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響。采用與實(shí)施例1相同的方 法，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材按實(shí)施例1的比例溶解于超臨界流體后，在溫度為333K，共溶劑乙 醇在C02中摩爾分?jǐn)?shù)x (CH3CH2OH) = 15% ，在15 30MPa條件預(yù)膨脹，噴射進(jìn)不含穩(wěn)定劑的緩沖溶液中，測(cè)定不同壓力下制備脂質(zhì)體的包封率，結(jié)果如圖2所示。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在較低壓力下，脂質(zhì)體膜材磷脂、膽固醇在SC-C02溶解度小，不易
形成均一的脂質(zhì)體膜，制得的脂質(zhì)體混懸液中有大量磷脂塊，包封率很低。當(dāng)壓力增加到
20MPa時(shí)，SC-(A對(duì)磷脂、膽固醇溶解度顯著增大，改善了膽固醇分子在磷脂上的定向排布，
使蒼術(shù)酮更易以分子狀態(tài)存在于載體中，隨著壓力的進(jìn)一步增大，磷脂雙分子膜排列更趨
于整齊，包埋藥物的有效空間較大，使得蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的包封率均隨著壓力的升高而增大。
優(yōu)選預(yù)膨脹壓力為20 30MPa，蒼術(shù)酮的包封率達(dá)到70%以上。 棚列3鶴鵬,格細(xì)月旨i1H本先麵駒向 本實(shí)施例考察預(yù)膨脹溫度對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響。采用與實(shí)施例1相同 的方法，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材按實(shí)施例1的比例溶解于超臨界流體后，在壓力為30MPa， x(CH3CH2OH) = 15X條件下，313K 343K下預(yù)膨脹，噴射進(jìn)不含穩(wěn)定劑的緩沖溶液中，測(cè)定 不同溫度范圍內(nèi)制備脂質(zhì)體的包封率，結(jié)果如圖3所示。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，脂質(zhì)體的物理性質(zhì)與制備溫度有密切關(guān)系。當(dāng)溫度低于323K，即低 于磷脂的相變溫度Tm時(shí)，SC-C02中形成的磷脂雙分子層排列比較緊密，蒼術(shù)酮不易于包封 于脂質(zhì)體中，包封率都比較低。當(dāng)溫度高于328K，脂質(zhì)體雙分子層中疏水鏈由有序排列變 為無(wú)序排列，引起一系列變化，如膜的厚度減小，流動(dòng)性增加等，脂質(zhì)體包封藥物的空間增 大，使得蒼術(shù)酮的包封率隨溫度增加而增大。但當(dāng)溫度高于338K，SC-C02的密度減小，脂質(zhì) 膜的溶解度降低，不溶的磷脂在脂質(zhì)體混懸液中形成塊狀沉淀，反而使包封率下降。因此， SC-C02制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體存在一個(gè)溫度區(qū)間，當(dāng)預(yù)膨脹溫度為328K 338K時(shí)，蒼術(shù)酮的包 封率較高。 實(shí)施例4共溶劑乙醇對(duì)蒼術(shù)酮fl旨質(zhì)體制備的影響 本實(shí)施例考察共溶劑乙醇用量對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響。采用與實(shí)施例1 相同的方法，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材按實(shí)施例1的比例溶解于超臨界流體后，分別加入 x(CH3CH2OH) = 0% 20%的乙醇，在壓力為30MPa，溫度為338K時(shí)下預(yù)膨脹，噴射進(jìn)不含穩(wěn) 定劑的緩沖溶液中，測(cè)定所制備脂質(zhì)體的包封率，結(jié)果如圖4所示。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在沒(méi)有共溶劑乙醇存在時(shí)，磷脂、膽固醇在SC-C02溶解度很小，形 成的脂質(zhì)體包封率較小。加入乙醇后，增大了磷脂與sc-co2的分子間的相互作用力，磷脂 雙分子層的溶解度顯著增大，脂質(zhì)體對(duì)蒼術(shù)酮的包封效果大大提高，藥物包封率均隨乙醇 共溶劑濃度增大而增大。但當(dāng)x(CH3CH^H)高于20%時(shí)，過(guò)多的乙醇會(huì)破壞脂質(zhì)體的穩(wěn)定 結(jié)構(gòu)，造成脂質(zhì)體膜流動(dòng)性以及通透性增加，導(dǎo)致脂質(zhì)體包封率的下降。因此，優(yōu)選共溶劑 乙醇的用量為5 15%。實(shí)施例5 fl旨質(zhì)體膜材比例對(duì)蒼術(shù)酮fl旨質(zhì)體制備的影響 本實(shí)施例考察脂質(zhì)體膜材比例對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響。蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜 材的用量與實(shí)施例l相同，其中脂質(zhì)體膜材中磷脂酰膽堿與膽固醇的比例分別為1 : 0、
8 : i、5 : i、3 : i、i : 1，即膽固醇在脂質(zhì)體膜材中所占的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0、0. ii、o. 17、
0. 25、0. 50。蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界流體后，按實(shí)施例2 實(shí)施例4的優(yōu)選預(yù)膨 脹參數(shù)，即脂質(zhì)體膜材與蒼術(shù)酮在30MPa，338K溫度下，在超臨界C02/乙醇[x(CH3CH2OH)= 15% ]中預(yù)膨脹后，噴射進(jìn)不含穩(wěn)定劑的緩沖溶液中，測(cè)定所制備脂質(zhì)體的包封率，結(jié)果如 圖5所示。
結(jié)果表明，在磷脂酰膽堿與膽固醇的比例在8 : 1 3 : l范圍內(nèi)，膽固醇比例越 大，包封率越高，因?yàn)槟懝檀急砻婊钚詣┳饔檬怪|(zhì)體乳液能穩(wěn)定形成；但膽固醇比例過(guò)大 時(shí)，組成脂質(zhì)體的磷脂量變少，脂質(zhì)體膜形成困難，而且不牢固，且由此形成的脂質(zhì)體膜親
水性太強(qiáng)，膜也容易破壞。因此，優(yōu)選脂質(zhì)體膜材中磷脂酰膽堿與膽固醇的比例為5 : l
3 ! 1。 棚列6柳旨比遙細(xì)薩本先麵駒向 本實(shí)施例考察藥脂比種類(lèi)對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響。脂質(zhì)體膜材的用量、脂質(zhì)
體膜材比例與實(shí)施例i相同，設(shè)定蒼術(shù)酮投藥質(zhì)量與脂質(zhì)體膜材的比例為i : i、i : 3、 i : 5、i : io、i : 15、i : 20、1 : 30，即藥物占藥物/脂質(zhì)體膜材混合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
0. 5、0. 25、0. 17、0. 09、0. 06、0. 05、0. 03。蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界流體后，按實(shí)施 例2 實(shí)施例4的優(yōu)選預(yù)膨脹參數(shù)，即脂質(zhì)體膜材與蒼術(shù)酮在30MPa，338K溫度下，在超臨 界CO"乙醇[x(CH3CH2OH) = 15% ]中預(yù)膨脹后，噴射進(jìn)不含穩(wěn)定劑的緩沖溶液中，測(cè)定所 制備脂質(zhì)體的包封率，結(jié)果如圖6所示。 結(jié)果表明，脂質(zhì)體制備中加藥量少，即藥脂比低，所獲得的脂質(zhì)體包封率高，但加 藥量太少會(huì)導(dǎo)致所得脂質(zhì)體的藥物濃度過(guò)低，對(duì)于發(fā)揮臨床效果不明顯；但是加藥量過(guò)大 就會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體包封率低，導(dǎo)致藥物的浪費(fèi)，甚至影響脂質(zhì)體的形成。因此，優(yōu)選藥脂比 1 : 10 1 : 20，蒼術(shù)酮獲得較好的包封效率與藥物濃度，保證了生產(chǎn)與臨床所需。
棚列7穩(wěn)^齊l腳粉格細(xì)薩本先麵駒向 本實(shí)施例考察穩(wěn)定劑種類(lèi)對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響。采用與實(shí)施例1相同的 方法，脂質(zhì)體膜材的用量、脂質(zhì)體膜材比例、蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的質(zhì)量比均與實(shí)施例1相 同，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界流體后，按實(shí)施例2 實(shí)施例4的優(yōu)選預(yù)膨脹參數(shù)， 即脂質(zhì)體膜材與蒼術(shù)酮在30MPa，338K溫度下，在超臨界C02/乙醇[x(CH3CH2OH) = 15% ] 中預(yù)膨脹后，噴射進(jìn)含有不同穩(wěn)定劑的溶液中，測(cè)定脂質(zhì)體中蒼術(shù)酮的包封率、平均粒徑與 粒度分布，結(jié)果如表l所示。 表1穩(wěn)定劑種類(lèi)對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響
穩(wěn)定劑濃溶液流速平均粒 粒度分布 包封率
序號(hào) 穩(wěn)定劑
度(％)(L/min) 徑(nm) (nm) (%)*
24,4~37.8(0.6%),
1 - 0 2 210 50.7~396(57.8%)， 72.55
459~4800(41.5%)
21~531(98.5%), 135 78.92 3580~4800(1.5%)
126 11.7~15.7(0.3%), 82,55
2 Tween 80 2
3 Poloxamer 188 2
921~615(99.7%) 18.2-37.8(1.5%)，
4 DAS 2 2 132 43.8~531(96.7%), 76.46
2670~5560(1.8%) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)溶有蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的超臨界溶液直接噴射于緩沖溶液 中，形成的脂質(zhì)體粒徑較大，脂質(zhì)體粒徑分布也不均勻，分別有24. 4 37. 8(0. 6 % )， 50. 7 396(57. 8% ) ， 459 4800 (41. 5 % )三個(gè)粒度分布峰。當(dāng)超臨界溶液噴射入2% 的表面活性劑溶液時(shí)，粒徑明顯減小，包封率也有所提高。三種表面活性劑對(duì)脂質(zhì)體形成 過(guò)程均有穩(wěn)定作用，其穩(wěn)定效應(yīng)主要是兩方面的原因。 一方面，表面活性劑溶液的表面張 力比純水小，增強(qiáng)了水和非極性的C02的相互作用，強(qiáng)化了超臨界霧滴與水溶液的混合傳 質(zhì)作用。更為重要的是，表面活性劑吸附在脂質(zhì)體的表面，產(chǎn)生空間位阻效應(yīng)，避免了由于 粒子之間因相互碰撞的脂質(zhì)體聚集現(xiàn)象。由于磷脂酰膽堿具有天然兩性結(jié)構(gòu)，Tween 80， DAS與Poloxamer 188三種表面活性劑中，Poloxamer 188的非極性尾與磷脂碳鏈的疏 水結(jié)構(gòu)相似，與磷脂酰膽堿親和性更好，容易被脂質(zhì)體膜表面所吸附，進(jìn)一步產(chǎn)生締合效 應(yīng)，使脂質(zhì)體膜的流動(dòng)性更好，包封蒼術(shù)酮的空間更大，對(duì)脂質(zhì)體穩(wěn)定的作用最強(qiáng)。此時(shí) 蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的包封率達(dá)到80%以上，粒徑為126nm，粒度分布較為均勻，分別為11. 7 15. 7 (0. 3% ) ， 21 615 (99. 7% )兩個(gè)分布峰，未出現(xiàn)1000nm以上的脂質(zhì)體聚集現(xiàn)象，因此 優(yōu)選Poloxamer 188作為穩(wěn)定劑。 實(shí)施例8穩(wěn)定劑濃度對(duì)蒼術(shù)酮fl旨質(zhì)體制備的影響 本實(shí)施例考察穩(wěn)定劑濃度對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響。采用與實(shí)施例1相同的 方法，脂質(zhì)體膜材的用量、脂質(zhì)體膜材比例、蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的質(zhì)量比均與實(shí)施例1相 同，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界流體后，按實(shí)施例2 實(shí)施例4的優(yōu)選預(yù)膨脹參數(shù)， 即30MPa，338K溫度下，在超臨界C(V乙醇[x(CH3CH20H) = 15% ]中預(yù)膨脹后，以2L/min 恒定速度噴射進(jìn)1% 10% (質(zhì)量百分?jǐn)?shù))的Poloxamer 188溶液中，測(cè)定脂質(zhì)體中蒼術(shù) 酮的包封率、平均粒徑與粒度分布，結(jié)果如表2所示。
表2穩(wěn)定劑濃度對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響
10序號(hào)穩(wěn)定劑穩(wěn)定劑濃 度(％)溶液流速 (L/min)平均粒徑 —)粒度分布(nm)包封率 (%) *
1Poloxamer 1881212618.5~615(97.9%)， 3580~7460(2.1%)77,64
2Poloxamer 1882212611,7~15.7(0.3%)， 21~615(99.7%)82.55
3Poloxamer 1885212432.7~615(100%) 21~32.7(1.1%)，87.65
4Poloxamer 18810213237.8~531(96.4%)， 3090~5560(2.5%)81.56 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)Poloxamer 188的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1 2%這一較低濃度范圍時(shí)，表面活性劑的穩(wěn)定作用有限。當(dāng)Poloxamer 188的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)達(dá)到5%時(shí)，可以抑制泡沫的形成，有效地避免超臨界溶液噴射過(guò)程中過(guò)飽和現(xiàn)象。此時(shí)脂質(zhì)體粒徑為124nm，只有32. 7 615(100% ) —個(gè)分布峰，粒徑小而粒度分布較為均勻。表面活性劑的修飾作用使磷脂酰膽堿層的雙分子層排列疏松，脂質(zhì)體的包封率達(dá)到87.65%。而當(dāng)Poloxamer 188的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)增加到10%以上，過(guò)多的表面活性劑不僅吸附在脂質(zhì)體膜材表面，Poloxamer188的碳鏈插入磷脂酰膽堿雙分子膜中，使膜的通透性增加，包封率反而下降，部分脂質(zhì)體由于膜破損而相互融合，造成脂質(zhì)體的聚集現(xiàn)象，使得粒徑變大，粒度分布不均勻。因此，優(yōu)選Poloxamer 188質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2 5%，粒子之間分散性能較好。
實(shí)施例9超臨界溶液噴射諫度對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體先ll備的影響 本實(shí)施例考察超臨界溶液噴射速度對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響。采用與實(shí)施例1相同的方法，脂質(zhì)體膜材的用量、脂質(zhì)體膜材比例、蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的質(zhì)量比均與實(shí)施例1相同，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界流體后，按實(shí)施例2 實(shí)施例4的優(yōu)選預(yù)膨脹參數(shù)，即30MPa，338K溫度下，在超臨界C0"乙醇[x(CH3CH20H) = 15% ]中預(yù)膨脹后，以1L/min 5L/min的速度噴射進(jìn)Poloxamer 188溶液中，測(cè)定脂質(zhì)體中蒼術(shù)酮的包封率、平均粒徑與粒度分布，結(jié)果如表3所示。 表3超臨界溶液噴射速度對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響
序號(hào)穩(wěn)定劑穩(wěn)定劑濃 度(％)溶液流速 (L/min)平均粒徑 (nm)粒度分布(nm)包封率o:T
1Poloxamer 188117150.7~531(100%)89.20
2Poloxamer 188212432.7~615(100%)87.65
3Poloxamer 18813621~37.8(1.2%), 43.8~531(98.8%)75.25 本例說(shuō)明，相比較于較小的流速，超臨界溶液保持較高的流速?lài)娚溥M(jìn)液相介質(zhì)，有
利于兩相之間的傳遞，脂質(zhì)體的分散性更好，但過(guò)高的流速又會(huì)在噴射過(guò)程中產(chǎn)生大量的
泡沫，泡沫的溢出將導(dǎo)致脂質(zhì)體粒子之間的碰撞與包封率下降。根據(jù)脂質(zhì)體的粒徑分布與
包封率，超臨界溶液噴射速度優(yōu)選2 5L/min。 輔你l 10始穩(wěn)^齊l隨細(xì)月旨制本燃白條卩向 本實(shí)施例考察復(fù)合穩(wěn)定劑對(duì)蒼術(shù)酮制備的穩(wěn)定作用。采用與實(shí)施例1相同的方法，脂質(zhì)體膜材的用量、脂質(zhì)體膜材比例、蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的質(zhì)量比均與實(shí)施例1相同，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界流體后，按實(shí)施例2 實(shí)施例4的優(yōu)選預(yù)膨脹參數(shù)，即30MPa，338K溫度下，在超臨界C(V乙醇[x(CH3CH20H) = 15% ]中預(yù)膨脹后，Poloxamer188與DAS、 Poloxamer 188與Tween80、 DAS與Tween 80以1 : 1 5 : 1不同質(zhì)量比混合的復(fù)合表面活性劑為穩(wěn)定劑，以2L/min的速度噴射進(jìn)5%的復(fù)合穩(wěn)定劑的溶液中，測(cè)定脂質(zhì)體中蒼術(shù)酮的包封率、平均粒徑與粒度分布，結(jié)果如表4所示。
表4復(fù)合穩(wěn)定劑對(duì)蒼術(shù)酮脂質(zhì)體制備的影響
序號(hào)
穩(wěn)定劑 穩(wěn)定劑濃穩(wěn)定劑質(zhì)平均粒
度(％) 量比 徑(nm)
粒度分布(nm)
包封率(%)*
2
DAS/ Tween 80Poloxamer 188/
Tween 80Poloxamer 188/
DASPoloxamer 188/
DASPoloxamer 188/
DAS
1:1
1:1
3:1
136
126
18.2~50.7(2.5%)，58.8~615(97.5%)50.7~612(100%)
141
116
103
78.8 615 (100%)
50.7 342 (100%)
50.7 220(100%)
81.66
84.25
85.72
87.24
89.15
12
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Poloxamer 188與Tween 80、DAS與Tween 80的兩種表面活性劑復(fù)合后，相對(duì)于單一的表面活性劑對(duì)脂質(zhì)體的穩(wěn)定化作用差異不大，表明非離子表面活性劑Tween 80基本無(wú)協(xié)同增效作用。Poloxamer 188與DAS組成的陰離子-非離子復(fù)合表面活性劑，表現(xiàn)出良好的協(xié)同增效作用，其活性大于單一表面活性劑。以Poloxamer 188為主體的復(fù)合表面活性劑，非極性碳鏈長(zhǎng)，內(nèi)聚能低，易于舒展在SC-C02中，同時(shí)少量DAS分子在Poloxamer 188間定向排布，有規(guī)律地插入Poloxamer表面活性劑的柵狀層，使空間位阻增大，增大了脂質(zhì)體粒子之間的排斥作用，有效地防止了脂質(zhì)體團(tuán)聚現(xiàn)象。但如果Poloxamer188的質(zhì)量分?jǐn)?shù)過(guò)小，其中DAS離子型表面活性劑的端電荷被不能被非離子表面活性劑Poloxamer 188所屏蔽，混合膠束界面的電荷密度增大，與C02的親和力下降，不利于蒼術(shù)酮的包封過(guò)程。因此，優(yōu)選Poloxamer 188與DAS復(fù)合穩(wěn)定劑的質(zhì)量比為3 : 1 5 : l，此時(shí)脂質(zhì)體的粒徑最小，粒度分布最窄。 棚列11掛醇扁冗粘麵備去燃薩本白徹》 本實(shí)施例考察本發(fā)明的超臨界分散沉析法與傳統(tǒng)經(jīng)典的薄膜分散法兩種不同方法制備脂質(zhì)體的比較。 本發(fā)明的超臨界分散沉析法制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體按實(shí)施例1 IO優(yōu)選的預(yù)膨脹與穩(wěn)定化條件，脂質(zhì)體膜材的用量、脂質(zhì)體膜材比例、蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的質(zhì)量比均與實(shí)施例1相同，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界流體后，按實(shí)施例2 實(shí)施例4的優(yōu)選預(yù)膨脹參數(shù)，即于壓力30MPa，溫度338K下，在超臨界C02/乙醇[x(CH3CH20H) = 15% ]中預(yù)膨脹后，以2L/min的速度噴射進(jìn)5%的Poloxamer 188/DAS(質(zhì)量比為5 : 1)復(fù)合穩(wěn)定劑的磷酸鹽緩沖溶液(PH = 7. 2)中，制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體。 傳統(tǒng)制備脂質(zhì)體方法采用薄膜分散法制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體，具體流程如下脂質(zhì)體膜材的用量、脂質(zhì)體膜材比例、蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的質(zhì)量比均與實(shí)施例1相同，蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材混合后加入乙醚溶解，置于圓底燒瓶中，置于25 3(TC水浴中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)，反應(yīng)30min后，抽真空除去乙醚，使磷脂混合液在壁上成膜。取預(yù)先配好的pH二7. 2的磷酸鹽(PBS)緩沖液，加至含有磷脂和膽固醇脂質(zhì)膜的燒瓶中，在60 65t:水浴中轉(zhuǎn)動(dòng)燒瓶直至壁上的膜完全脫落。將脂質(zhì)體水化物置于磁力攪拌器上攪拌60min，再置于數(shù)控超聲波清洗器里進(jìn)行超聲振蕩處理30min，即得乳白色的脂質(zhì)體混懸液。測(cè)定兩種方法制備的脂質(zhì)體中蒼術(shù)酮的包封率、平均粒徑與粒度分布，結(jié)果如表5所示。兩種方法制備的脂質(zhì)體的微觀(guān)結(jié)構(gòu)分別見(jiàn)圖7、圖8，粒度分布圖分別見(jiàn)圖9、圖10。
表5不同方法制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的比較
序號(hào)制備方法s平均粒徑(nm)粒徑分布(nm)包封率(％)
1超臨界分散沉析10158.8 220(100%)90.76
78~342(3.2%)，
2薄膜分散702396~1720(93.4%),80.90
4150~6440(3.4%)
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，薄膜分散法作為經(jīng)典的脂質(zhì)體制備方法，制備的脂質(zhì)體的包封 率能達(dá)到80%以上，但是受成膜條件的局限，很難使脂質(zhì)體膜材形成均一的薄膜，導(dǎo)致薄 膜分散在水中時(shí)，由于厚度不均，脂質(zhì)體的相互聚集，形成脂質(zhì)體的團(tuán)聚體，分別有78 342(3.2% )，396 1720(93.4% ) ， 4150 6440 (3. 4% )三個(gè)粒度分布峰，平均粒徑大而 分布不均。而采用超臨界分散沉析制備的脂質(zhì)體，TEM照片顯示是具有雙層膜結(jié)構(gòu)的圓球 與橢球，粒徑分布為58. 8 220nm(100% ) —個(gè)分布峰，粒徑分布窄而均勻。脂質(zhì)體包封率 達(dá)到90%以上，平均粒徑為100nm左右，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)于中國(guó)藥典關(guān)于納米藥物的標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)施例1 11表明，超臨界C02分散沉析技術(shù)提供了一條熱敏性成分的脂質(zhì)體包 封新方法，有效克服了傳統(tǒng)方法制備脂質(zhì)體不夠穩(wěn)定，易于團(tuán)聚的缺陷，對(duì)于提高脂質(zhì)體理 化性質(zhì)，促進(jìn)中藥脂質(zhì)體制劑的應(yīng)用具有重要的創(chuàng)新意義。
權(quán)利要求
一種制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的方法，包括以下步驟1)將蒼術(shù)酮和脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界CO2/乙醇溶劑，得到超臨界溶液；2)將表面活性劑作為穩(wěn)定劑溶于水相介質(zhì)，得到穩(wěn)定劑溶液；3)將所述超臨界溶液在設(shè)定的預(yù)膨脹壓力、預(yù)膨脹溫度下噴射至所述穩(wěn)定劑溶液，經(jīng)分散并沉析，獲得蒼術(shù)酮脂質(zhì)體混懸液；4)收集上述蒼術(shù)酮脂質(zhì)體混懸液，獲得所述蒼術(shù)酮脂質(zhì)體；其中所述蒼術(shù)酮為植物白術(shù)(Atractylodes macrocephala koedz)的提取物，所述脂質(zhì)體膜材為磷脂酰膽堿、或者磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述蒼術(shù)酮與脂質(zhì)體膜材的質(zhì)量比為1 : 1 i : 30，所述磷脂酰膽堿與膽固醇的質(zhì)量比為i : o i : i。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水相介質(zhì)為磷酸鹽緩沖液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟3)中所述預(yù)膨脹壓力為15 30MPa;預(yù)膨脹溫度為323 343K ;所述超臨界溶液是以1 5L/min的噴射速度噴射至所述穩(wěn)定劑溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中步驟l)中所述超臨界溶液中乙醇的量以在0)2中的摩爾分?jǐn)?shù)計(jì)為5 20%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中所述穩(wěn)定劑為泊洛沙姆188，泊洛沙姆188與吐溫80的混合物，DAS與吐溫80的混合物，或者泊洛沙姆188與DAS的混合物，所述穩(wěn)定劑溶液的濃度以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)為1 10%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述泊洛沙姆188與吐溫80、 DAS與吐溫80、泊洛沙姆188與DAS的混合物中，各組分的質(zhì)量比分別為泊洛沙姆188 :吐溫80=1 : l 5 : i ;das :吐溫80 = i : i 5 : i ;泊洛沙姆188 : das = i : i 5 : i。
8. 根據(jù)權(quán)利要求i所述的方法制備的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的蒼術(shù)酮脂質(zhì)體，其中所述蒼術(shù)酮脂質(zhì)體中蒼術(shù)酮的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)為0. 11 0. 41%。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種蒼術(shù)酮脂質(zhì)體，包含蒼術(shù)酮和脂質(zhì)體膜材，蒼術(shù)酮為白術(shù)提取物，脂質(zhì)體膜材為磷脂酰膽堿和膽固醇。采用超臨界流體分散沉析技術(shù)制備蒼術(shù)酮脂質(zhì)體的方法，包括步驟1)將蒼術(shù)酮和脂質(zhì)體膜材溶解于超臨界CO2/乙醇混合溶劑，得到超臨界溶液；2)將表面活性劑作為穩(wěn)定劑溶于水相介質(zhì)，得到穩(wěn)定劑溶液；3)將所述超臨界溶液在一定的預(yù)膨脹壓力、預(yù)膨脹溫度下快速?lài)娚渲了龇€(wěn)定劑溶液，經(jīng)強(qiáng)制分散并沉析，獲得蒼術(shù)酮脂質(zhì)體混懸液。本發(fā)明脂質(zhì)體的制備過(guò)程均在化學(xué)惰性的CO2介質(zhì)中完成，不使用有毒的有機(jī)溶劑，并提高脂質(zhì)體的包封率，有效避免了脂質(zhì)體顆粒間碰撞造成的團(tuán)聚現(xiàn)象，從而保證蒼術(shù)酮脂質(zhì)體在制備過(guò)程中的穩(wěn)定性。
文檔編號(hào)A61P31/20GK101703549SQ20091018872
公開(kāi)日2010年5月12日 申請(qǐng)日期2009年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月8日
發(fā)明者劉波, 文震, 游新奎, 米宏偉, 蒲一濤, 鄭宗坤 申請(qǐng)人:深圳大學(xué)