專(zhuān)利名稱(chēng)：用于提高生殖能力的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種用于提高生殖能力的新型藥物組合物及其 制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
通常，懷孕必須具備下列五個(gè)條件1.有成熟的卵子；2.有足量活動(dòng)的、健康的精 子；3.宮頸粘液的粘稠度必須有利于精子的穿透；4.各通道(包括宮頸、輸卵管)必須通 暢；5.子宮內(nèi)膜與受精卵有同步的發(fā)育。只要其中任何一個(gè)環(huán)節(jié)受障，便可發(fā)生不孕。根 據(jù)不孕的原因可分為相對(duì)不孕和絕對(duì)不孕相對(duì)不孕是指夫婦一方因某種原因阻礙受孕或 使生育力降低，導(dǎo)致暫時(shí)性不孕，如該因素得到糾正，仍有可能懷孕。絕對(duì)不孕指夫婦一方 有先天或后天的解剖生理方面的缺陷，無(wú)法糾正而不能懷孕。根據(jù)是否懷孕分為原發(fā)不孕 和繼發(fā)不孕原發(fā)不孕指從未懷孕，繼發(fā)不孕指曾經(jīng)懷孕而后又不孕者。一般，不孕癥的發(fā)生率約占生育年齡婦女的8% 17%，平均為10%左右。因此， 不孕癥并非少見(jiàn)，而是一種比較常見(jiàn)的癥候。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，由于環(huán)境污染等原因?qū)е?不孕癥的發(fā)生率呈上升趨勢(shì)。在美國(guó)，每7對(duì)夫婦中就有一對(duì)在其生殖期的某些時(shí)候有受 孕困難。有的資料顯示，不孕癥在國(guó)外的發(fā)生率約為15% 20%，我國(guó)的發(fā)病率為5%左 右。隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)的進(jìn)展，不孕夫婦的懷孕率可達(dá)30% 50%以上。因此，對(duì)不孕癥應(yīng)有 一個(gè)正確的認(rèn)識(shí)，應(yīng)積極診治，以提高受孕的機(jī)會(huì)。早在50年代，Tietze (1956)曾利用人口統(tǒng)計(jì)學(xué)的資料進(jìn)行估計(jì)，認(rèn)為20 40歲 的婦女不孕的患病率為15%。70年代末到80年代初，各國(guó)學(xué)者開(kāi)始重視不孕癥的問(wèn)題。陸 續(xù)開(kāi)展不孕癥患病率和病因?qū)W的研究工作。Mosher利用人口普查的資料進(jìn)行估計(jì)，認(rèn)為美 國(guó)19 49歲的不孕癥患病率是15%，Borrie也利用人口普查資料中45歲以后未生育的 人數(shù)來(lái)推測(cè)澳大利亞不孕癥的患病率是10% 12% ,Rantala利用婦科防癌普查表進(jìn)行估 計(jì)，芬蘭30 40歲的婦女不孕癥患病率為15. 4%。日本井上正人對(duì)本地區(qū)40歲以后無(wú)孩 子的已婚婦女所占比例計(jì)算出該地區(qū)40 49歲的不孕癥患病率為20%。但由于這些間接 估計(jì)值存在偏差，為了準(zhǔn)確地了解不孕癥患病率和病因分類(lèi)，世界衛(wèi)生組織于80年代末期 在25個(gè)國(guó)家的33個(gè)中心組織了一次采用標(biāo)準(zhǔn)化診斷的不孕癥夫婦調(diào)查。結(jié)果表明發(fā)達(dá)國(guó) 家約有5% 8%的夫婦受到不孕癥的影響，發(fā)展中國(guó)家一些地區(qū)不孕癥的患病率可高達(dá) 30%。全世界的不孕患者人數(shù)約為8000萬(wàn) 1. 1億。造成不孕不育的原因2/3在于女方，1/3在于男方。女性不育癥病因有先天性發(fā)育 異常、內(nèi)分泌功能障礙、生殖器官感染、免疫功能異常和微量元素調(diào)控障礙等。男子不育癥 原因有生殖器官發(fā)育異常、遺傳性疾病、內(nèi)分泌功能障礙、免疫功能障礙、生殖器官感染、輸 精管梗阻、性功能障礙、精子異常和缺鋅等。近年研究顯示，過(guò)氧化損傷是導(dǎo)致不育的又一 重要原因。目前抗細(xì)胞氧化損傷的抗氧化劑，多達(dá)數(shù)十種，而最常用的有維生素A、維生素C、 維生素E、輔酶Q1(l、β-胡蘿卜素、超氧化物歧化酶、過(guò)氧化物酶等。
維生素E (Vitamin Ε, VE)亦稱(chēng)生育酚(Tocopherol)，是一種脂溶性的維生素，是 由α、β、Υ、δ -生育酚及α、β、Υ、δ -三烯生育酚等8種化合物組成的混合物，這些化 合物的生理活性各異。1922年美國(guó)科學(xué)家Evans發(fā)現(xiàn)如果缺少一種脂溶性物質(zhì)，雄性白鼠 生育能力將下降，雌性白鼠易早產(chǎn)。1938瑞典科學(xué)家卡勒成功的進(jìn)行了人工合成。并因其 對(duì)提高生殖能力的顯著效果，命名為生育酚，即維生素E。臨床上常用于治療不孕癥、習(xí)慣性 流產(chǎn)及早產(chǎn)嬰兒的異常情況等。輔酶Q1(1(coneZyme，CoQ10)又名泛醌(ubiquinone)于1948年發(fā)現(xiàn)，是一種廣泛存 在于各類(lèi)細(xì)胞中的醌類(lèi)化合物。在動(dòng)植物、微生物等細(xì)胞內(nèi)CoQltl與線粒體內(nèi)膜結(jié)合，是一 種在呼吸鏈中與蛋白質(zhì)結(jié)合不緊密的輔酶，在黃素蛋白類(lèi)和細(xì)胞色素之間作為特別靈活的 載體而起作用，是電子傳遞鏈中的遞氫體，能清除多種自由基，并且是線粒體合成能量物質(zhì) 三磷酸腺苷(ATP)的必需成分。目前，CoQltl在心血管疾病、癌癥、帕金森病等疾病的輔助治 療，以及在運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)和抗疲勞作用等方面已得到廣泛研究和應(yīng)用。在化妝品、口腔衛(wèi)生制品 以及保健產(chǎn)品中，CoQltl作為重要的保健原料之一也被使用。近年來(lái)，隨著人們對(duì)生殖健康 的關(guān)注與研究，CoQltl在生殖系統(tǒng)中的作用被進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。輔酶Qltl在精漿和精子中的水平 對(duì)男性生殖系統(tǒng)的抗氧化損傷能力具有重要的影響。硒(Selenium)是瑞典化學(xué)家Berzlius (柏采利烏斯)于1817年發(fā)現(xiàn)。硒遍布 于人體各組織器官和體液中，腎中硒濃度最高，肝臟次之，血液中相對(duì)低些。硒在人體中構(gòu) 成含硒蛋白與含硒酶的成分，具有抗氧化、維持正常免疫功能、維持正常生育功能等諸多作 用。硒在男性生殖過(guò)程的作用已經(jīng)越來(lái)越引起人們的重視。據(jù)早期的研究報(bào)告，精液硒濃 度為0. 63 0. 87 μ mol/L時(shí)精子活力最高，精液硒濃度0. 5 0. 8 μ mol/L時(shí)精子受孕率 最高，精液硒濃度低于0.46 μ mol/L即可引起男性不育。目前，采用微量元素制劑治療男性 不育的臨床研究已經(jīng)越來(lái)越多，而且效果明顯。在人類(lèi)精子發(fā)育成熟過(guò)程中，有許多生化物質(zhì)參與調(diào)節(jié)，一些離子(如K+、Na+、 Ca、H+等)通過(guò)細(xì)胞膜內(nèi)外流動(dòng)與酶或輔酶共同作用，在調(diào)節(jié)各級(jí)精母細(xì)胞成熟、精子運(yùn)動(dòng) 和授精功能活動(dòng)中起著重要作用。精子膜含豐富的多聚不飽和脂肪酸和多種蛋白成分，精 子膜功能的完整性與精子獲能、頂體反應(yīng)及精卵融合密切相關(guān)。近幾年來(lái)，人們認(rèn)識(shí)到活 性氧(ROS)與精子和DNA的關(guān)系十分密切，人類(lèi)精子對(duì)ROS很敏感?；钚匝?ROS)是指具 有比氧更為活潑的化學(xué)反應(yīng)性的氧的代謝產(chǎn)物及其衍生的含O2物質(zhì)，主要包括超氧陰離子 (O2)、過(guò)氧化氫(H2O2)、輕基自由基(OH)、和單線態(tài)氧(IO2)以及一氧化氮(NO)等。Sikka 等研究表明，精子和卵子中存在微量的ROS可輔助其代謝及受精過(guò)程，但若ROS過(guò)量時(shí)則會(huì) 對(duì)生殖細(xì)胞產(chǎn)生不同程度的損傷。過(guò)量的ROS會(huì)損害人體，嚴(yán)重削弱精子活動(dòng)力(SaidT M, Sharm R K, Agarwal A,etal,2004 ；Sharm R K, Agarwal AJ，1998)，使受精力下降導(dǎo)致不孕 不育。因精子中含有非常高的多聚不飽和脂肪酸，且在細(xì)胞質(zhì)中抗氧化劑濃度非常低，所以 精子對(duì)氧化應(yīng)激敏感，但是精子膜功能的完整性與精子獲能、頂體反應(yīng)及精卵融合密切相 關(guān)。在正常條件下，精子和精漿中含有的抗氧化物質(zhì)可以防止ROS的過(guò)量產(chǎn)生，保護(hù)精子免 受損傷。然而，在病理?xiàng)l件下，生殖系統(tǒng)中ROS的增加超出了這些抗氧化物質(zhì)的清除能力， 或因抗氧化物質(zhì)產(chǎn)生的減少而使其清除能力降低，都會(huì)導(dǎo)致過(guò)氧化脂質(zhì)水平升高，損傷精 子結(jié)構(gòu)和功能。因此過(guò)氧化損傷是導(dǎo)致精子結(jié)構(gòu)和功能的損傷，是導(dǎo)致男性不育除身體缺 陷外的重要原因。
內(nèi)分泌失調(diào)性疾病會(huì)影響女性的正常排卵，促黃體生成激素(LH)和促卵胞成熟 激素(FSH)的水平過(guò)低提示丘腦-垂體功能障礙。兩者都高提示卵巢功能障礙。LH高值、 FSH正常時(shí)高度懷疑多囊卵巢。男性?xún)?nèi)分泌失調(diào)同樣會(huì)影響性欲、影響精子的發(fā)育和成熟。內(nèi)分泌失調(diào)性疾病都會(huì)影響性功能，生殖器感染性疾病又與免疫功能有關(guān)，人的 生育功能與各種疾病有關(guān)，各種疾病與自由基氧化應(yīng)激和過(guò)氧化損傷有關(guān)，自由基在人體 內(nèi)調(diào)控失調(diào)就會(huì)造成性功能紊亂，也就患不孕癥，用清除自由基調(diào)節(jié)生育功能，是治療不孕 癥的一條有效途徑。如果有種藥物同時(shí)具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)、增強(qiáng)免疫能力又可以作為抗 氧劑清除多余的自由基，這樣治療不孕不育癥的功效一定可以大大的提高。本發(fā)明的目的 正是如此?，F(xiàn)今社會(huì)，壓力的增大與環(huán)境因素的影響，導(dǎo)致性功能障礙的比率增加，這不僅僅 表現(xiàn)在女性不孕，同時(shí)因精子質(zhì)量的下降，造成越來(lái)越多的男性不育。申請(qǐng)?zhí)枮镃N200580023193. 1 該發(fā)明涉及靶向線粒體的抗氧化劑例如維生素E衍 生物、輔酶Qltl或谷胱甘肽過(guò)氧化物酶模擬物在治療和預(yù)防肝病和/或上皮癌中的用途。該 組合物是抗氧化劑通過(guò)共價(jià)鍵與親脂性陽(yáng)離子耦合的模擬物，且在其權(quán)利要求中只應(yīng)用于 治療和預(yù)防肝病和/或上皮癌中的用途，同時(shí)該專(zhuān)利也只對(duì)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶有限定， 沒(méi)有對(duì)微量元素硒的限定。申請(qǐng)?zhí)枮镃N02818722.9:該專(zhuān)利公開(kāi)了一種口服或者腸胃外給藥的組合物，其含 有下列成分(a)L-肉堿內(nèi)鹽或其可藥用鹽；(b)乙酰L-肉堿內(nèi)鹽或其可藥用鹽；(c) α -硫 辛酸；⑷輔酶Qltl ； (e)維生素E ；與(f)硒代蛋氨酸。并且規(guī)定了該組合物各個(gè)成分的含量 20 IlOmgL-肉堿內(nèi)鹽或其可藥用鹽；20 IlOmg乙酰L-肉堿內(nèi)鹽或其可藥用鹽；70 130mg α -硫辛酸；90 IlOmg輔酶Qltl ;5 15mg維生素E與40 60 μ g硒代蛋氨酸。該 專(zhuān)利的組合物在制備藥物中的用途，主要用于預(yù)防、抵消和/或治療由氧化應(yīng)力、伴隨氧化 應(yīng)力而來(lái)的過(guò)早生理性細(xì)胞程序死亡現(xiàn)象和/或環(huán)境因素誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡引起的病 癥和/或疾病，且該專(zhuān)利權(quán)利要求中該組合物必須包括所要求的六種成分，同時(shí)還明確規(guī) 定了各成分的用量。而本專(zhuān)利是綜合應(yīng)用抗氧化應(yīng)激理論，同時(shí)還結(jié)合了在增強(qiáng)免疫力和 調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)以及營(yíng)養(yǎng)學(xué)方面的協(xié)同作用，來(lái)提高生殖能力。申請(qǐng)?zhí)枮镃N200410022994.3 該專(zhuān)利申請(qǐng)的發(fā)明由維生素C、維生素E、褪黑素三 種抗氧化劑組成，此組成構(gòu)成了一種新型抗生物細(xì)胞自由基氧化損傷合劑，將其作為一種 新型高效抗生物細(xì)胞自由基氧化損傷物質(zhì)應(yīng)用于與生物細(xì)胞自由基氧化損傷有關(guān)的各領(lǐng) 域。克服了單獨(dú)使用某一抗氧化劑引起的過(guò)氧化現(xiàn)象等缺陷。申請(qǐng)?zhí)枮镃N200710074140. 3 該發(fā)明公開(kāi)了一種治療心腦血管類(lèi)疾病的藥物。其 主要由以下原料制成輔酶Qltl (CoQltl)、維生素E (VE)、大豆卵磷脂(PC)。該專(zhuān)利利用維生素 E可促使輔酶Qltl的生物合成和激活CoQltl的活力，使其在電子傳遞中更具能力，大豆卵磷脂 (PC)能幫助CoQltl清除殘余的低密度蛋白質(zhì)，這樣VE和PC促進(jìn)CoQltl的生物合成且提高功 效。申請(qǐng)?zhí)枮镃N00102763.8 該專(zhuān)利公開(kāi)的是一種復(fù)合輔酶Qltl藥物，其中記述了在輔 酶Qltl制劑中加入一定量的活性氧自由基清除劑以減少輔酶Qltl藥物的副作用。其中活性氧 自由基清除劑包括維生素E、維生素C、維生素Α、β-胡蘿卜素和細(xì)胞色素C。使用活性氧 自由基清除劑的目的是解決輔酶Qltl漏電子生產(chǎn)超氧自由基和活性氧的旁路反應(yīng)，減少輔酶Qltl具有的副作用。因此該專(zhuān)利只是改善輔酶Qltl在體內(nèi)吸收時(shí)產(chǎn)生的副作用，從而提高 了其藥效作用。申請(qǐng)?zhí)枮镃N200610159628. 1 該專(zhuān)利申請(qǐng)發(fā)明的是一種含硒、維生素E的木糖醇 片。其活性成分硒和維生素E作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，用以滿(mǎn)足機(jī)體生理生化需要，通過(guò)含食本 品，對(duì)適宜人群提供身體必需的硒和維生素E以補(bǔ)充從食物攝取的不足，維持機(jī)體的正常 代謝過(guò)程和機(jī)能完整性。而本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用傳統(tǒng)治療不孕不育藥物——維生素E和新型治療藥物輔酶Qltl 和微量元素硒在不孕不育癥上的獨(dú)特療效，應(yīng)用不同的治療不孕不育的機(jī)理，提高精子的 運(yùn)動(dòng)和活力、增加性激素的分泌、保護(hù)卵巢功能、提高免疫力以提高受孕的幾率和保證胎兒 的營(yíng)養(yǎng)，在治療不孕不育癥更有效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能有效提高生殖能力的藥物組合物，不僅僅針對(duì)女性患 者，對(duì)男性患者也是同樣有效的。女性患者通過(guò)調(diào)節(jié)性激素分泌和增強(qiáng)免疫能力來(lái)降低著 床前的胚胎毒性和著床后的習(xí)慣性流產(chǎn)及死胎等；男性患者通過(guò)增加精漿和精子中的抗氧 化應(yīng)激的能力，來(lái)提高抵抗精子的脂質(zhì)過(guò)氧化造成的精子無(wú)力、精子畸形甚至無(wú)精現(xiàn)象，從 而提高受精能力。雖然目前維生素E、輔酶Qltl和/或硒在臨床上也有不同的應(yīng)用，但至今 為止其沒(méi)有在有效提高生殖能力的藥物臨床上的應(yīng)用、也沒(méi)有把維生素E、輔酶Qltl結(jié)合或 把三者組合起來(lái)作為一個(gè)有效提高生殖能力的藥物組合物的應(yīng)用。本發(fā)明的主要目的在于提供了一種提高生殖能力的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的一方面，所述藥物組合物包括維生素E、輔酶Qltl和/或硒。其中，所述維生素E、輔酶Qltl和/或硒的單位劑量范圍為維生素E 5mg 150mg ； 輔Bl Qi05mg 50mg ；石西 0 μ g 100 μ g。優(yōu)選地，所述維生素E、輔酶Qltl和/或硒的單位劑量范圍為維生素E 5mg IOOmg ；輔Sl Q105mg 50mg ；石西 15 μ g ~ 100 μ g。其中，所述維生素E為D-α-生育酚、DL-α-生育酚、DL-α-生育酚醋酸酯、 D-Ci-生育酚醋酸酯、或D-α -生育酚琥珀酸酯。其中，所述的硒為硒化卡拉膠、富硒啤酒酵母、半胱氨酸硒、亞硒酸鈉、或硒代蛋氨酸。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提供了一種制備上述藥物組合物的方法，包括以 下步驟(1)將維生素E和輔酶Qltl加入玉米油中50 60°C水浴溶解，同時(shí)將硒溶于明膠制 成囊材；或者維生素E、輔酶Qltl、卵磷脂和/或硒加入玉米油中攪拌均勻；或者將維生素E、 輔酶Q1(l、硒與微晶纖維素直接混合均勻；或者將維生素E、輔酶Qltl、硒與微晶纖維素和十二 烷基硫酸鈉直接混合均勻；或者將在60°C水浴鍋中溶解后的維生素E、輔酶Qltl和卵磷脂加 入泊洛沙姆和硒的水溶液中，和(2)按照常規(guī)工藝制備成軟膠囊、片劑、硬膠囊或口服液。根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明提供了一種提高生殖能力的藥物組合物在制備提 高生殖能力的藥物中的應(yīng)用，其中，所述藥物組合物用于預(yù)防和治療由氧化應(yīng)激、內(nèi)分泌失調(diào)或環(huán)境因素誘導(dǎo)而造成生殖障礙的藥品和保健品。維生素E對(duì)不孕癥的應(yīng)用在營(yíng)養(yǎng)學(xué)、免疫學(xué)以及自由基理論等方面的研究發(fā)現(xiàn)，VE對(duì)機(jī)體的免疫和生殖功 能具有顯著的保護(hù)作用。在VE發(fā)現(xiàn)的初期，已證實(shí)其對(duì)動(dòng)物的生殖和發(fā)育均有明顯的影 響。VE與哺乳動(dòng)物的繁殖性能密切相關(guān)。近一個(gè)世紀(jì)以來(lái)，人們從不同的學(xué)科領(lǐng)域?qū)E進(jìn) 行了多個(gè)角度深入的研究。VE在治療不孕癥、習(xí)慣性流產(chǎn)及早產(chǎn)嬰兒的異常情況的機(jī)理， 主要以下四種一、VE直接作用于下丘腦、垂體，改善垂體毛細(xì)血管血流，增強(qiáng)下丘腦、垂體 功能活性，可促垂體前葉促性腺分泌細(xì)胞亢進(jìn)，分泌增多，促進(jìn)精子的生成與活動(dòng)，完善與 提高性功能，亦能增強(qiáng)卵巢的生理功能，使卵泡增加和黃體細(xì)胞增大并使孕酮的作用增強(qiáng)， 降低了不孕癥的發(fā)生率。二、自由基理論，VE是一種脂溶性維生素，結(jié)合在細(xì)胞膜上使細(xì)胞 免受自由基進(jìn)攻和過(guò)氧化損傷。其抗氧化功能依賴(lài)其自身結(jié)構(gòu)，它可以插入到細(xì)胞膜的脂 質(zhì)雙分子層之間，與多價(jià)不飽和脂肪酸形成膜結(jié)構(gòu)的一部分，并與結(jié)合在膜上的能生氧自 由基的酶(如混合功能氧化酶)精密相鄰，在氧自由基攻擊多聚不飽和脂肪酸前將其捕獲 和清除，阻斷其氧化過(guò)程，防止和抑制了膜上磷脂形成脂質(zhì)過(guò)氧化。將自由基阻擋在細(xì)胞質(zhì) 以外，并有效減少自由基的濃度，保護(hù)細(xì)胞膜大分子物質(zhì)免受自由基的攻擊和過(guò)氧化損傷。 另外，因其形成了細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的一部分，故具有固定細(xì)胞膜，增加其穩(wěn)定性的作用。因此， VE能對(duì)抗生殖系統(tǒng)的氧化應(yīng)激損害，逆轉(zhuǎn)由活性氧誘導(dǎo)的小鼠胚胎發(fā)育毒性，提高胚囊的 發(fā)育率。活性氧(ROS)的產(chǎn)生和精子膜的過(guò)氧化均可損傷精子的運(yùn)動(dòng)能力，導(dǎo)致精子中段 畸形和精卵融合障礙，而VE能保護(hù)精子免受損傷，并緩解黃曲霉菌所誘導(dǎo)的小鼠睪丸生物 化學(xué)變化，及甲氧氯誘導(dǎo)的附睪和附睪精子氧化應(yīng)激反應(yīng)，防止睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)異常、精子數(shù) 量和活動(dòng)度的變化。三、VE可促進(jìn)細(xì)胞核RNA更新和蛋白質(zhì)合成，促進(jìn)某些酶蛋白的合成。 四、VE可以有效地緩解某些毒物對(duì)生殖系統(tǒng)發(fā)育的毒性作用，如甲醛、鎘以及放射線等物理 和化學(xué)因素造成的生殖系統(tǒng)氧化損傷。輔酶Qltl對(duì)不孕癥的應(yīng)用臨床常用于心血管疾病及病毒性肝炎的輔助治療的脂溶性輔酶Qltl在細(xì)胞膜生化 代謝呼吸鏈中起重要作用，它具有促進(jìn)氧化磷酸化反應(yīng)，保護(hù)和恢復(fù)生物膜結(jié)構(gòu)完整性及 增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用。輔酶Qltl在體內(nèi)有氧化性輔酶Qltl(CoQici)和還原型輔酶Qltl(CoQiciH2) 兩種存在狀態(tài)。ROS所導(dǎo)致的脂質(zhì)過(guò)氧化是細(xì)胞結(jié)構(gòu)解體、功能喪失的一個(gè)重要原因。由于 精子膜上抗氧化酶的水平相對(duì)較低，因此，精子膜上多聚不飽和脂肪酸在有ROS或自由基 條件下極不穩(wěn)定，易發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，生成過(guò)氧化脂質(zhì)而使精子膜損傷，甚至發(fā)生細(xì)胞 死亡。此外，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)過(guò)程產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化物及其代謝產(chǎn)物本身也具有細(xì)胞毒性， 會(huì)對(duì)精子造成直接損傷，成為男性不育的病因之一。還原型輔酶Qltl (CoQltlH2)能有效清除精 液中的R0S，防止精子膜表面磷脂發(fā)生過(guò)氧化作用，維持磷脂蛋白還原型基團(tuán)的活性。此外， 輔酶Qltl還可以刺激機(jī)體提高其他抗氧化劑(如SOD)的水平，使生殖系統(tǒng)具備一定抗氧化 損傷的緩沖能力。體內(nèi)輔酶Qltl濃度雖然比維生素E水平低，但作為磷脂與脂蛋白分子氧化 的強(qiáng)抑制劑，其對(duì)精子正常形態(tài)及活力的維持具有著重要作用。并且輔酶Qltl在體內(nèi)以絡(luò)氨 酸為原料可以自動(dòng)合成，同時(shí)輔酶Qltl的兩種狀態(tài)在肝臟內(nèi)可以自動(dòng)轉(zhuǎn)化，是唯一的一種天 然存在的在人體內(nèi)能再生(轉(zhuǎn)換為活性形式)的脂溶性抗氧劑。精漿和精子中輔酶Qltl水平 的高低對(duì)精子功能的正常發(fā)揮顯得非常重要，人們期待通過(guò)外源性補(bǔ)充CoQltl以增強(qiáng)精子抗氧化損傷的能力，提高某些因氧化損傷導(dǎo)致精子質(zhì)量下降的不育患者的生育能力。2004 年來(lái)有報(bào)告應(yīng)用CoQltl對(duì)特發(fā)性弱精子癥患者的潛在治療作用治療。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充CoQltl 治療后，精漿和精子中的CoQltl水平均明顯升高，精子活力也顯著增強(qiáng)(BalerciaG，Arnaldi G，F(xiàn)azioli F，et al，2002 ；譚育紅，張敏建，孫云華.特發(fā)性男性不育癥的約物治療進(jìn)展； 施云飛，湯文葳，宋洪程.輔酶Qltl結(jié)合金施爾康治療弱精子癥)。Carlo等報(bào)告22例補(bǔ)充 CoQltl 口服劑的患者，3個(gè)月后精液和精細(xì)胞內(nèi)CoQltl濃度顯著升高，精子活力改善，無(wú)不良反 應(yīng)，治療后自然妊娠率為13.6%。70年代中期，Mitchell化學(xué)滲透假說(shuō)理論，揭示了生物體內(nèi)能量的轉(zhuǎn)換以及輔酶 Qltl在線粒體能量轉(zhuǎn)換體系中的重要作用。輔酶Qltl至少是3種線粒體酶(多酶復(fù)合體I、II 和III)的輔酶，輔酶Qltl的生物活性主要來(lái)自于其醌環(huán)的氧化還原特性和其側(cè)鏈的理化性 質(zhì)。其醌環(huán)在氧化呼吸鏈中起傳遞電子和質(zhì)子的作用，這種作用不僅是所有生命形式必不 可少的，而且還是形成三磷酸腺苷(ATP)的關(guān)鍵。而ATP是機(jī)體能量的主要儲(chǔ)存形式，也是 所有細(xì)胞功能賴(lài)以正常發(fā)揮的重要基礎(chǔ)，顯示出極好抗疲勞作用。輔酶Qltl能使細(xì)胞保持良 好健康的狀態(tài)，因而機(jī)體充滿(mǎn)活力，精力旺盛，腦力充沛。這有助于提高精子的運(yùn)動(dòng)和活力， 對(duì)孕婦也有助于安胎、減少流產(chǎn)。輔酶Qltl作為特異性和非特異性免疫增強(qiáng)劑，能顯著提高人體免疫力，能提高吞噬 細(xì)胞的吞噬率，增加抗體的產(chǎn)生，改善T-細(xì)胞功能。對(duì)因機(jī)體免疫力低下的不孕癥患者，有 很好的改善作用，能提高受孕率。硒對(duì)不孕癥的應(yīng)用硒是動(dòng)物和人類(lèi)必需的微量元素之一。硒在生物體內(nèi)以有機(jī)化合物的形式存在于 硒蛋白質(zhì)內(nèi)，硒的生物學(xué)功能通過(guò)硒蛋白表達(dá)。作為硒蛋白的組份，硒又是谷胱甘肽氧化物 酶的組成成分，具有結(jié)構(gòu)和酶的功能，而該酶主要作為抗氧化劑。硒蛋白質(zhì)對(duì)硒的吸收排 泄，保留及平衡等起著非常重要的作用。缺硒首先影響了硒蛋白質(zhì)的合成，然后出現(xiàn)抗氧化 體系的改變和組織細(xì)胞的損傷。組織細(xì)胞的損傷，是自由基所致?，F(xiàn)已明確硒是精子成熟的必需元索，在精子中間部位的線粒體是硒蛋白，對(duì)精子 的生存環(huán)境和生物學(xué)功能有著重要影響。研究表明，氧化應(yīng)激是男性不育的一個(gè)主要誘發(fā) 因素。睪丸精小管內(nèi)高比率的有絲分裂和不同階段的減數(shù)分裂，暴露生殖細(xì)胞染色體于局 部環(huán)境自由基的潛在損傷下。精子中含有非常高的多不飽和脂肪酸，且在細(xì)胞質(zhì)中抗氧化 劑濃度非常低，因而精子對(duì)氧化應(yīng)激敏感。硒缺乏時(shí)，動(dòng)物的附睪內(nèi)精子活力會(huì)降低或消 失，精子中段鞭毛會(huì)出現(xiàn)缺損。精子生物化學(xué)分析也表明，大量的硒結(jié)合到精子鞭毛多肽 中。自由基含量過(guò)高時(shí)，其通過(guò)進(jìn)攻膜脂形成的脂質(zhì)過(guò)氧化物，進(jìn)而導(dǎo)致睪丸細(xì)胞的脂質(zhì)降 解、斷裂、損傷。缺硒時(shí)，性機(jī)能低下、性欲減低、陽(yáng)萎、睪丸縮小變軟、甚至不育等。硒具有直接清除自由基的作用，是與自由基結(jié)合的強(qiáng)力抗氧化劑。另外，它又是谷 胱甘肽氧化物酶(GSH-Px)活性中心的必需組成成分，體內(nèi)SOD、GSH-Px可直接拮抗自由基 的毒性作用，清除脂質(zhì)過(guò)氧自由基和羥自由基，羥自由基是脂質(zhì)過(guò)氧化的起動(dòng)劑。GSH-Px能 催化脂質(zhì)過(guò)氧化物轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性較小的醇類(lèi)，硒通過(guò)增加GSH-Px活性，促進(jìn)脂質(zhì)過(guò)氧化 物分解而起抗氧化作用。所以，硒可以改善由自由基引起的組織細(xì)胞的損傷，降低精子的畸 形率，提高受孕率。硒提高生殖功能的另一機(jī)理為硒有利于合成褪黑素，褪黑素能調(diào)節(jié)各種 性激素的分泌，以維持正常的性能力。褪黑素是機(jī)體激素的總指揮，它能調(diào)節(jié)各種性激素的分泌，使各種激素都不發(fā)生過(guò)量和不足的現(xiàn)象，而維特性功能和性欲的正常。性激素包括雄 激素睪酮和二氫睪酮(DHT)，雌激素黃體酮、促黃體生成激素(LH)、促卵胞成熟激素(FSH)、 催乳激素、縮宮激素。男性的性欲及性器官的勃起是由睪酮及二氫睪酮來(lái)支配的；女性的 性欲是由雌激素黃體酮等來(lái)支配的，尚有黃體酮生成激素、促卵胞成熟激素、催乳激素和縮 宮激素的參與。促黃體生成激素(LH)與促卵胞成熟激素(FSH)協(xié)同作用，促進(jìn)卵泡生長(zhǎng) 成熟和卵泡膜增生，促進(jìn)排卵和形成黃體，參與內(nèi)膜細(xì)胞合成分泌雌激素；促卵胞成熟激素 (FSH)還可以刺激卵巢生長(zhǎng)和使生長(zhǎng)至出現(xiàn)空腔的卵泡繼續(xù)發(fā)育增大并接近成熟。在雄性 動(dòng)物中，LH亦稱(chēng)促間質(zhì)細(xì)胞激素，為睪丸分泌和合成睪酮所必需的，促進(jìn)成年男子曲細(xì)精管 發(fā)育、生精細(xì)胞的分裂、精子的發(fā)育和成熟。硒對(duì)重金屬拮抗機(jī)制可能是硒通過(guò)抗脂質(zhì)過(guò)氧化拮抗重金屬毒性；或者硒與金屬 有很強(qiáng)的親和力，在體內(nèi)可能與金屬結(jié)合，形成一種絡(luò)合物并使之排出體外。因此，硒可以 降低胚胎毒性，減少著床前的丟失率。Kumar KS等發(fā)現(xiàn)多次流產(chǎn)者紅細(xì)胞硒水平顯著低于 正常者。對(duì)不明原因自然流產(chǎn)者的血硒含量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)流產(chǎn)孕婦的血硒含量普遍低于 正常者。于燕等報(bào)道缺硒會(huì)使孕鼠體重增長(zhǎng)緩慢，首先，硒缺乏會(huì)影響母體自身體重。硒的 缺乏則會(huì)引起脫碘酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性降低，進(jìn)一步使得與代謝相關(guān)酶(如Na、 K、ATP酶、呼吸鏈中的輔酶A、輔酶CoQltl、酮戊二氧化酶系統(tǒng))的催化反應(yīng)能力下降，使能量 生成障礙。其次，硒缺乏也會(huì)直接影響其仔代胎仔體重。有研究表明，妊娠末期胎仔體重與 母體孕期體重增長(zhǎng)呈正相關(guān)，且孕鼠是為胚胎提供必要的營(yíng)養(yǎng)的唯一來(lái)源，在其本身能量 儲(chǔ)備不足的同時(shí)還要為胎仔供能，不僅加重了孕鼠的能量消耗，也會(huì)導(dǎo)致仔鼠營(yíng)養(yǎng)不良，從 而導(dǎo)致胎仔體重降低，甚至造成死胎。因?yàn)槲鼙Ｗo(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整和功能正常，并且能顯 著促進(jìn)日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收與代謝，另一方面硒能促進(jìn)乳腺細(xì)胞數(shù)增加，乳腺組織發(fā) 達(dá)，分娩后產(chǎn)奶量增加，從而改善乳質(zhì)，為幼仔提供營(yíng)養(yǎng)和能量，降低因能量供應(yīng)不足造成 的流產(chǎn)或胎兒營(yíng)養(yǎng)不良或者死胎的發(fā)生率。與維生素E具有很好的協(xié)同作用。已證實(shí)，有正常生育能力的男性精液中硒含量比無(wú)生育能力者高，而且精子數(shù)量 多，活力也強(qiáng)。因此，缺硒會(huì)影響生殖系統(tǒng)的正常發(fā)育及其功能，使生育力降低或消失。艾 滋病患者血硒水平及GSH-Px活性均顯著低于正常人。這就說(shuō)明，硒是維持正常生育力的必 需元素，與生命體戚相關(guān)。本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)維生素E在阻斷自由基與多聚不飽和脂肪酸的反應(yīng)、保護(hù)生物膜的過(guò)程中產(chǎn)生了 相對(duì)穩(wěn)定的生育酚自由基，若生育酚自由基長(zhǎng)時(shí)間不能被清除，在體內(nèi)積聚，這種自由基就 會(huì)引起脂肪過(guò)氧化反應(yīng)或蛋白質(zhì)氧化，最終將導(dǎo)致低密度脂蛋白(LDL)微粒被氧化。此時(shí)， 若有還原型輔酶Qici(COQICIH2)存在的情況下，輔酶Qltl可以還原維生素E在清除自由基時(shí)產(chǎn) 生的生育酚酰基自由基，使維生素E恢復(fù)了原本的抗氧化功能，起到抗氧化的作用。輔酶Qltl 是唯一的一種天然存在的，在人體內(nèi)能再生(轉(zhuǎn)換為活性形式)的脂溶性抗氧劑。同時(shí)，維 生素E可以清除輔酶Qltl與自由基反應(yīng)產(chǎn)生的超氧自由基。因此，維生素E和輔酶Qltl作為 體內(nèi)抗氧劑有協(xié)同作用。同時(shí)，硒作為谷胱甘肽過(guò)氧化物(GSH-Px)的重要成分，在保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷 方面，對(duì)VE起補(bǔ)償和協(xié)調(diào)作用。VE位于細(xì)胞膜上，可清除細(xì)胞膜上的自由基，而谷胱甘肽過(guò)氧化物酶存在于細(xì)胞液中，能中和穿過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞液的自由基，防止有害自由基對(duì)不 飽和脂肪酸的氧化攻擊。故維生素E是防止脂質(zhì)過(guò)氧化的第一道防線，含硒的GSH-Px起著 第二道防線的作用，二者在防止細(xì)胞膜脂質(zhì)的過(guò)氧化反應(yīng)、保護(hù)細(xì)胞膜、肝線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 膜的穩(wěn)定性方面具有互補(bǔ)作用。此外，硒還是細(xì)胞膜內(nèi)面存在的一種特殊的磷脂酰谷胱甘 肽過(guò)氧化物酶的活性成分，對(duì)防止細(xì)胞膜磷脂的氧化起重要作用(Manahan，1996)。硒還可 通過(guò)谷胱甘肽過(guò)氧化物的不同功能，防御缺乏維生素E對(duì)肝臟的損害。維生素E和硒在防 止過(guò)氧化損害方面具有互補(bǔ)作用，共同保護(hù)細(xì)胞膜的質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的完整性。所以，維生素E、輔酶Qltl和/或硒在抗氧化應(yīng)激反應(yīng)清除自由基反面有相互協(xié)同 作用，不僅增強(qiáng)了各自在抗氧化作用的功能，還減輕了各自的不良作用。維生素E和硒通過(guò)改善垂體毛細(xì)血管血流，增強(qiáng)下丘腦、垂體功能活性，有利于褪 黑素的合成，促進(jìn)性激素的分泌。完善與提高性功能，促進(jìn)精子的生成與活動(dòng)，增強(qiáng)卵巢的 生理功能，使卵泡增加和黃體細(xì)胞增大并使孕酮的作用增強(qiáng)，降低了不孕癥的發(fā)生率。免疫代謝的協(xié)同作用，免疫反應(yīng)的基礎(chǔ)是淋巴細(xì)胞的形成，依據(jù)功能可將淋巴細(xì) 胞分為B-淋巴細(xì)胞和T-淋巴細(xì)胞B-淋巴細(xì)胞產(chǎn)生于法氏囊，通過(guò)與特定抗原反應(yīng)而產(chǎn) 生抗體，從而發(fā)揮體液免疫作用；T-淋巴細(xì)胞則產(chǎn)生于胸腺，主要在細(xì)胞免疫中發(fā)揮作用， 也可以通過(guò)控制B-淋巴細(xì)胞的活性而在一定程度上調(diào)節(jié)體液免疫。維生素E增強(qiáng)機(jī)體免 疫力的機(jī)理研究比較深入和取得認(rèn)可的是前列腺素(PG)學(xué)說(shuō)。對(duì)免疫反應(yīng)有抑制作用的 PG尤其是PGE2，其作用主要抑制T-淋巴細(xì)胞的功能和B-淋巴細(xì)胞的功能，而B(niǎo)-淋巴細(xì)胞 和T-淋巴細(xì)胞是免疫反應(yīng)的基礎(chǔ)。此外，PG還能直接抑制淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性和抗體的 產(chǎn)生，抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生，而降低機(jī)體的免疫力?；ㄉ南┧崾呛铣汕傲邢偎氐闹苯忧?提，維生素E和硒可抗花生四烯酸過(guò)氧化，從而改變動(dòng)物體內(nèi)花生四烯酸的代謝(Aziz等， 1996 ；Bry ant等，1980)。這樣維生素E和硒可影響PG前體的合成，最終可降低具有免疫活 力抑制作用的PG合成，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。輔酶Qltl能增強(qiáng)人體免疫力主要表現(xiàn)為輔酶Qltl 能增加白細(xì)胞的數(shù)量，增加胸腺活力，激發(fā)免疫球蛋白和抗體數(shù)量增加，能提高吞噬細(xì)胞的 吞噬率，改善T-細(xì)胞功能。CoQltl與線粒體內(nèi)膜結(jié)合，是一種在呼吸鏈中與蛋白質(zhì)結(jié)合不緊密的輔酶，在黃素 蛋白類(lèi)和細(xì)胞色素之間作為特別靈活的載體而起作用，是電子傳遞鏈中的遞氫體，為線粒 體合成能量物質(zhì)三磷酸腺苷(ATP)的必需成分，提供人體95%左右的能量。硒的缺乏則會(huì) 引起脫碘酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性降低，進(jìn)一步使得與代謝相關(guān)酶(如Na、K、ATP酶、 呼吸鏈中的輔酶A、輔酶CoQltl、酮戊二氧化酶系統(tǒng))的催化反應(yīng)能力下降，使能量生成障礙， 并且硒可以促進(jìn)日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收與代謝，可以通過(guò)母體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝入，保證 胎兒的營(yíng)養(yǎng)需求。維生素E對(duì)生殖器官的保護(hù)作用也在甲醛、鎘以及放射線等物理和化學(xué)因素造成 的生殖系統(tǒng)氧化損傷中得到證實(shí)；硒對(duì)重金屬拮抗機(jī)制可能是硒通過(guò)抗脂質(zhì)過(guò)氧化拮抗重 金屬毒性；或者硒與金屬有很強(qiáng)的親和力，在體內(nèi)可能與金屬結(jié)合，形成一種絡(luò)合物并使之 排出體外。因此，采用維生素E、輔酶Qltl和/或硒三種藥物聯(lián)合應(yīng)用治療男性不育(male infertility, MIF)主要表現(xiàn)在以下方面(1)能明顯提高與ROS有關(guān)的MIF患者精子的 體外功能；(2)提高精子形態(tài)正?；颊叩木邮芫剩?3)顯著提高精子活動(dòng)力弱患者的精子運(yùn)動(dòng)能力；(4)對(duì)于合并少精、弱精和精子畸形的患者，從三方面進(jìn)行改善提高精子 活動(dòng)力；提高活精和正常精子的百分率；體外條件下提高精子DNA的整合性。對(duì)女性不孕 (female infertility, FIF)的治療主要表現(xiàn)在以下方面(1)促進(jìn)性激素的分泌，增強(qiáng)卵 巢的生理功能，使卵泡增加和黃體細(xì)胞增大并使孕酮的作用增強(qiáng)；(2)增強(qiáng)母體免疫力，促 進(jìn)日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和代謝。本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用傳統(tǒng)治療不孕不育藥物——維生素E和新型治療藥物輔酶Qltl和 /或微量元素硒在不孕不育癥上的獨(dú)特療效，應(yīng)用不同的治療不孕不育的機(jī)理，提高精子的 運(yùn)動(dòng)和活力、增加性激素的分泌、保護(hù)卵巢功能、提高免疫力以提高受孕的幾率和保證胎兒 的營(yíng)養(yǎng)，在治療不孕不育癥更有效。本發(fā)明針對(duì)維生素E與其他抗氧劑的協(xié)同作用，在抗氧化過(guò)程中構(gòu)成一個(gè)往復(fù)循 環(huán)的氧化還原鏈，增強(qiáng)各自抗氧化功能，并且還可以避免各自抗氧化劑清除自由基時(shí)產(chǎn)生 的一些不良反應(yīng)，擴(kuò)大使用范圍以，形成一種高效無(wú)毒的自由基清除劑。本發(fā)明新型的提高生殖能力的組合物的各個(gè)成分各自在提高生殖能力研究和臨 床上都有應(yīng)用，所以，這種組合物能安全高效的應(yīng)用于生殖障礙，而其效果比單獨(dú)使用組合 物中的任意成分都高的多，同時(shí)又可以克服了單獨(dú)使用某一成分的缺陷。
具體實(shí)施例方式為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它 們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1稱(chēng)取D- α -生育酚150g、輔酶Q1(15g加入到295g玉米油中，于50 60°C水浴鍋中 加熱溶解，目測(cè)完全溶解。硒代蛋氨酸0. 14g(含硒50mg)溶于明膠中，可在明膠中可添加 一定比例的著色劑和遮光劑，制成有色囊材，在滾模式壓制機(jī)上，灌封為軟膠囊，制成1000 粒。再經(jīng)定型、干燥、檢丸等工序。制得每粒含維生素E150mg、輔酶Q1(15mg、硒50 μ g。實(shí)施例2稱(chēng)取D-α-生育酚醋酸酯IOOg (以α -生育酚當(dāng)量計(jì))、輔酶QltlIOg加入到285g玉 米油中，與50 60°C水浴鍋中加熱溶解，目測(cè)完全溶解。硒化卡拉膠0. 27g (含硒15mg)溶 于明膠中，可在明膠中可添加一定比例的著色劑和遮光劑制成有色囊材，在滾模式壓制機(jī) 上，灌封為軟膠囊，制成1000粒。再經(jīng)定型、干燥、檢丸等工序。制得每粒含維生素ElOOmg、 輔Bl Q10IOmg、石西 15μ g。實(shí)施例3稱(chēng)取DL-α -生育酚100g、輔酶Q1(15g、卵磷脂8g加入到287g玉米油中，攪拌均勻。 在膠液中可添加一定比例的著色劑和遮光劑制成有色囊材，在滾模式壓制機(jī)上，灌封為軟 膠囊，再經(jīng)定型、干燥、檢丸等工序。制得每粒含維生素ElOOmg、輔酶Q1(l5mg。實(shí)施例4稱(chēng)取DL-α-生育酚醋酸酯(以α -生育酚當(dāng)量計(jì))100g、輔酶Q1(15g、亞硒酸鈉 1. Ig(含硒50mg)、卵磷脂8g加入到287g玉米油中，攪拌均勻。在膠液中可添加一定比例 的著色劑和遮光劑制成有色囊材，在滾模式壓制機(jī)上，灌封為軟膠囊，再經(jīng)定型、干燥、檢丸 等工序。制得每粒含維生素ElOOmg、輔酶Q1(15mg、硒50 μ g。
實(shí)施例5將D- α _生育酚琥珀酸酯5g (以α _生育酚當(dāng)量計(jì))、輔酶Q1(150g、富硒啤酒酵母 40g(含硒IOOmg)和適量微晶纖維素放入混合器中混合均勻；將上述混勻后的藥物，用適量 淀粉漿制得軟材，經(jīng)50°C干燥、整粒；整理后，加入適量潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、微粉硅膠或羧 甲基淀粉鈉，混勻，壓片，制成1000片。制得每片含維生素E5mg、輔酶Q1Q50mg、硒IOOygo實(shí)施例6將D-α _生育酚琥珀酸酯50g(以α _生育酚當(dāng)量計(jì))、輔酶Q1(150g、半胱氨酸硒 0. 26g(含硒IOOmg)和適量微晶纖維素、十二烷基硫酸鈉混合均勻后直接灌裝成硬膠囊，制 成1000粒。制得每粒含維生素E50mg、輔酶Q1(150mg、硒100 μ g。實(shí)施例7將泊洛沙姆F-682. 5g和亞硒酸鈉2. 2g(含硒IOOmg)溶解于預(yù)熱過(guò)的適量蒸餾 水，將IOOg D-CI-生育酚醋酸酯IOOg(以α-生育酚當(dāng)量計(jì))、輔酶QltlIOg和卵磷脂IOOg 于60°C水浴鍋中溶解后，再緩慢加入到泊洛沙姆溶液中，補(bǔ)蒸餾水至5L并置磁力攪拌器上 城初乳溶液。將上述初乳溶液經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)成穩(wěn)定的乳液，灌裝于容器中，密封，制成 1000支，每支口服液含維生素ElOOmg、輔酶QltlIOmg和硒100 μ g。動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)與結(jié)果1、實(shí)驗(yàn)大鼠對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)素缺乏極敏感，是研究營(yíng)養(yǎng)學(xué)的適用動(dòng)物，所以現(xiàn)有的動(dòng)物模型 以大鼠最為多見(jiàn)。根據(jù)Burk于1987年提出得制作硒缺乏大鼠動(dòng)物模型的方法，我們制作 硒缺乏與維生素E缺乏模型，飼料配方見(jiàn)表1，飲蒸餾水。表1低硒低VE飼料的配方 a.混合無(wú)機(jī)鹽的配方(g/kg)碳酸鈣543、磷酸二氫鉀225. 2、氯化鈉59. 69、氯 化鉀104. 8、碳酸鎂25、硫酸鎂16、枸櫞酸鐵銨20. 5、硫酸錳3. 44、氟化鈉1、硫酸銅 0. 9、氯化鉻0. 1、碘化鉀0. 08。b.混合維生素配方(/IOOg)乳糖88. 68g、維生素Bl :40mg、維生素B2 :25mg、維 生素B6 :20mg、泛酸鈣200mg、氯化膽堿10g，煙堿酸lg、維生素K 10mg、葉酸20mg、生物素10mg，維生素B12 :lmg、維生素A :lmg、維生素D :0. Olmg。選用體重約50g的健康斷乳后封閉群SD大鼠(由浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物中心供)喂養(yǎng)，喂養(yǎng)4周。由于肝對(duì)硒水平的改變非常敏感，所以肝臟谷胱甘肽過(guò)氧化物 酶(GPX)被作為監(jiān)測(cè)機(jī)體硒缺乏狀態(tài)的指標(biāo)。我們選取肝GPX活力約為對(duì)照組5% 20%， 即輕中度和硒缺乏為成功動(dòng)物模型。1. 1 分組選用上述成功動(dòng)物模型160只，隨機(jī)分成8組，每組20只(雌、雄各半)。分別為 ①低硒低VE飼料組，即對(duì)照組；②低硒低VE飼料加維生素E組(維生素E400mg/kg)，即維 生素E組；③低硒低VE飼料加輔酶Qltl組(輔酶Q1Q10mg/kg)，即輔酶Qltl組；④低硒低VE飼 料加硒組(硒2mg/kg)，即硒組；⑤低硒低VE飼料加維生素E和輔酶Qltl組(維生素E400mg/ kg,輔酶Q1(110mg/kg)，即維生素E和輔酶Qltl組合組；⑥低硒低VE飼料加維生素E和硒組 (維生素E400mg/kg，硒2mg/kg)，即維生素E和硒組合組；⑦低硒低VE飼料加輔酶Qltl和硒 組(輔酶Q1(110mg/kg，硒2mg/kg)，即輔酶Qltl和硒組合組；⑧低硒低VE飼料加維生素E加輔 酶Qltl加硒組(維生素E400mg/kg，輔酶Q1(110mg/kg硒2mg/kg)，即維生素E和輔酶Qltl加硒 組合組。其中，維生素E以天然維生素E (D-α-生育酚醋酸酯)形式，硒以亞硒酸鈉形式。1. 2飼養(yǎng)條件實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按設(shè)計(jì)要求分別喂以含不同維生素Ε、輔酶Qltl和硒濃度的飼料，大鼠自 由進(jìn)食，飲用蒸餾水，室溫18 25°C相對(duì)濕度50% 65%。喂養(yǎng)4周后，按雌雄=2 1 進(jìn)行交配，每天早晚各觀察一次陰栓，發(fā)現(xiàn)陰栓為孕期O天，于妊娠19天時(shí)分籠標(biāo)記待產(chǎn)每 天清早檢查母鼠生產(chǎn)情況并記錄分娩仔鼠數(shù)、雌雄個(gè)數(shù)、分娩死亡數(shù)和4天存活數(shù)。1. 3測(cè)定指標(biāo)(1)大鼠附睪中精子活動(dòng)和組織病理形態(tài)學(xué)變化；(2)孕鼠生育指標(biāo)計(jì)數(shù)黃體 數(shù)、胚胎的著床數(shù)、活胎數(shù)、吸收胎及晚期死胎數(shù)。1. 4實(shí)驗(yàn)方法參考徐叔云.卞如濂.陳修主編《藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法》第三版上——對(duì)附睪中精子 活動(dòng)和形態(tài)影響的實(shí)驗(yàn)。精子畸形取1滴濾液滴片，晾干，甲醇固定，伊紅染色，蒸餾水沖洗，晾干后鏡檢。 每只小鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)精子，記錄畸形精子數(shù)并計(jì)算精子畸形率。按下列公式計(jì)算精原細(xì) 胞染色體的畸變率畸變率(％)=含染色體結(jié)構(gòu)畸變精原細(xì)胞數(shù)/分析的精原細(xì)胞總數(shù) *100%。活精率及精子活動(dòng)度將濾液置于37°C水浴中孵育20min后，滴片，光鏡下計(jì)數(shù) 1000個(gè)精子中活精子數(shù)和各級(jí)活動(dòng)精子數(shù)，并計(jì)算精子活動(dòng)度(％) = (1+11)*100/1000。精子數(shù)濾液經(jīng)60°C水浴殺死精子，用血球計(jì)數(shù)板以紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)精子，再 折算成精子數(shù)(個(gè))/附睪尾(ml)。1.5數(shù)據(jù)處理使用SPSS13. O統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，樣本均數(shù)之間的顯著性采用單因素方差分析 法(ANOVA)和t檢驗(yàn)，多重比較采用最小顯著差法(LSD)。2、結(jié)果精子密度除組8外格實(shí)驗(yàn)組精子密度檢查與對(duì)照組先比差異沒(méi)有顯著(P>0.05)。結(jié)果可參見(jiàn)表2。總畸形精子百分率除組3、組4外其他實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比有顯著差異(P < 0. 01或P < 0. 05)，其中組8即維生素E加輔酶QlO加硒組試驗(yàn)組與其他試驗(yàn)組相比有 顯著差異(P < 0. 05)。結(jié)果可參見(jiàn)表2。附睪電鏡結(jié)果附睪管壁的上皮細(xì)胞組1對(duì)照組呈立方形，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量空 泡，細(xì)胞間連接增寬。組8呈柱狀，細(xì)胞質(zhì)均勻，細(xì)胞間連接緊密，基底膜結(jié)構(gòu)清晰。腔面精 子頭、尾組1對(duì)照組可見(jiàn)到結(jié)構(gòu)異常的精子，其頭部形狀不規(guī)則，膜結(jié)構(gòu)不完整，染色質(zhì)不 均勻，精子尾部的2+9結(jié)構(gòu)減少，出現(xiàn)0+9、2+8或2+7結(jié)構(gòu)，且排列紊亂。組8可見(jiàn)到大量的 精子尾部，其橫斷面上2+9結(jié)構(gòu)清晰，精子頭部為橢圓形，膜結(jié)構(gòu)完整，染色質(zhì)均勻、致密?？偩踊顒?dòng)百分率各試驗(yàn)組與對(duì)照組相比均有顯著差異(P < 0.05或P <0.01)。結(jié)果可參見(jiàn)表2。胚胎毒性比較各試驗(yàn)組受孕率均顯著高于對(duì)照組(P < 0. 05)，活胎數(shù)、著床前丟失率、著床后丟 失率均顯著低于對(duì)照組(P < 0. 05或P < 0. 01)。結(jié)果可參見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)證明，維生素E、輔酶QlO和硒三種物質(zhì)的組合能顯著提高生殖能力，并且三 者之間發(fā)生了協(xié)同作用，使其效果更加優(yōu)于單一成分和它們?nèi)咧g的兩兩組合物。值得 說(shuō)明的是輔酶QlO和維生素E的組合物在提高生殖能力上優(yōu)于其他兩兩組合物形式。本發(fā)明的一種提高生殖能力的組合物，可開(kāi)發(fā)成藥品和保健品用于口服，口服制 劑包括軟膠囊、硬膠囊、片劑、口服液等多種方法。
表中數(shù)據(jù)為平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤；*為與組1即對(duì)照組比P < 0. 05，有顯著差異廣為 與組1即對(duì)照組比P < 0. 01，有非常顯著差異 ’#為與試驗(yàn)組比P < 0. 05，有顯著差異;## 為試驗(yàn)組比P < 0. 01，有非常顯著差異。需要聲明的是，上述發(fā)明內(nèi)容及具體實(shí)施方式
意在證明本發(fā)明所提供技術(shù)方案的 實(shí)際應(yīng)用，不應(yīng)解釋為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。本領(lǐng)域技術(shù)人員在本發(fā)明的精神和原理 內(nèi)，當(dāng)可作各種修改、等同替換、或改進(jìn)。本發(fā)明的保護(hù)范圍以所附權(quán)利要求書(shū)為準(zhǔn)。
組①組②組③組④組⑤組⑥組⑦組⑧
60 11.6±1.9 7.4±2.0 5.9±2.6
60
90
2.5±1.7
11.3±2.2 11.2±2.0 8.6±2.1* 2.3 士 1.3
70 11.5±2.3 11.0±1.
8.3士2.0
70 11.4±1.8 11.1±2.1 8.6±1.9*
2.2±1.5
2.0±1.8
70 11.1 士 2.0 10.9±2.1 9.5 土 2.3*
80 11.6 士 1.9 11.3±2.4 10.1士1.8*
1.9±1.1
28.25
17.44
17.21
14.95
11.8±2.1 11.3±2.3 10.3 士 2.2* 1.5±0.9* 9.71*
12.03
.4 士 0.9* 8.66*
100 11.5 士 2.7 11.1±1.7 11.0±1.9** 0.05 士3.64**
權(quán)利要求
一種提高生殖能力的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括維生素E、輔酶Q10、和/或硒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述維生素E、輔酶Qltl、和/或硒 的單位劑量范圍為維生素E 5mg 150mg ； 輔酶 Q10 5mg 50mg ； 石西0 μ g ~ 100 μ g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述維生素E、輔酶Qltl和/或硒的 單位劑量范圍為維生素E 5mg IOOmg ； 輔酶 Q10 5mg 50mg ； 石西15 μ g ~ 100 μ g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3任一所述的藥物組合物，其特征在于，所述維生素E為D-α -生 育酚、DL- α -生育酚、DL- α -生育酚醋酸酯、D- α -生育酚醋酸酯、或D- α -生育酚琥珀酸
5.根據(jù)權(quán)利要求1 3任一所述的藥物組合物，其特征在于，所述的硒為硒化卡拉膠、 富硒啤酒酵母、半胱氨酸硒、亞硒酸鈉、或硒代蛋氨酸。
6.一種制備如權(quán)利要求1 5任一所述的藥物組合物的方法，其特征在于，所述方法包 括以下步驟(1)將維生素E和輔酶Qltl加入玉米油中50 60°C水浴溶解，同時(shí)將硒溶于明膠制成 囊材；或者維生素E、輔酶Qltl、卵磷脂和/或硒加入玉米油中攪拌均勻；或者將維生素E、輔 酶Q1(l、硒與微晶纖維素直接混合均勻；或者將維生素E、輔酶Qltl、硒與微晶纖維素和十二烷 基硫酸鈉直接混合均勻；或者將在60°C水浴鍋中溶解后的維生素E、輔酶Qltl和卵磷脂加入 泊洛沙姆和硒的水溶液中；和(2)按照常規(guī)工藝制備成軟膠囊、片劑、硬膠囊或口服液。
7.—種如權(quán)利要求1 5任一所述的藥物組合物在制備提高生殖能力的藥物中的應(yīng) 用，其特征在于，所述藥物組合物用于預(yù)防和治療由氧化應(yīng)激、內(nèi)分泌失調(diào)或環(huán)境因素誘導(dǎo) 而造成生殖障礙的藥品和保健品。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，提供了一種能提高生殖能力的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，所述藥物組合物包括維生素E、輔酶Q10和/或硒。所述藥物組合物作為一種新型高效抗氧化劑可用于預(yù)防和治療由氧化應(yīng)激、內(nèi)分泌失調(diào)或環(huán)境因素誘導(dǎo)而造成生殖障礙的藥品和保健品。本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用傳統(tǒng)治療不孕不育藥物維生素E和新型治療藥物輔酶Q10和/或硒，應(yīng)用不同的治療不孕不育的機(jī)理，提高精子的運(yùn)動(dòng)和活力、增加性激素的分泌、保護(hù)卵巢功能、提高免疫力以提高受孕的幾率和保證胎兒的營(yíng)養(yǎng)，治療不孕不育癥更有效。與單獨(dú)使用本發(fā)明藥物組合物中的任何一種成分相比，本發(fā)明的藥物組合物不僅能有效地提高療效，同時(shí)又克服了單獨(dú)使用引起的缺陷。
文檔編號(hào)A61K31/731GK101879184SQ20091014399
公開(kāi)日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2009年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月7日
發(fā)明者候國(guó)枝, 易德平, 林愛(ài)弟, 王奎, 田治科, 繆丹丹 申請(qǐng)人:浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠