專利名稱：：月桂酰脯氨酰氨基酸甲酯作為新型促透劑的合成方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種新型經(jīng)皮給藥滲透促進劑的制備方法，以及其對親脂性藥物尼莫地平和親水性藥物水楊酸的促進滲透應(yīng)用。屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：近十年來，經(jīng)皮吸收系統(tǒng)一直是醫(yī)藥領(lǐng)域重要的研究和開發(fā)對象。該類制劑為一些長期性疾病及慢性疾病的治療及預(yù)防創(chuàng)造了一種簡單方便，是一類行之有效的給藥方式。其有避免首過效應(yīng)，改善病人的順應(yīng)性，減少給藥次數(shù)，提高安全性等優(yōu)點。由于經(jīng)皮給藥有諸多優(yōu)點，經(jīng)皮給藥滲透促進劑的研究成為藥學工作者研究的熱點，早在1970年，有研究者成功地應(yīng)用二甲基亞礬和二甲基己酞胺促進甾體藥物局部給藥并且獲得了專利；1976年美國Nelson公司從一系列N-烴基氮雜環(huán)酮類化合物中開發(fā)出氮酮(Azone)，并在美國獲得專利，專利號為US3989816，US4301481和US4316893;我國在1987年將其列入中國藥典。有研究發(fā)現(xiàn)用脂肪酸和氨基酸這兩種人體內(nèi)源性物質(zhì)構(gòu)成的N-十二?；?L-氨基酸甲酯具有較好的促透性能，其中，含有脯氨酸的化合物作為促透劑時藥物的積累濃度最高，本專利作者分析由于脯氨酸其剛性五元環(huán)與疏水的脂肪酸結(jié)合，結(jié)構(gòu)與氮酮類似，所以效果優(yōu)于其他化合物。還有研究者合成了兩個系列的化合物，這兩個系列的化合物都含有一個內(nèi)酰胺五元環(huán)和一個內(nèi)酰胺七元環(huán)，并結(jié)合有疏水的尾部，疏水尾部分別通過酯鍵和酰胺鍵結(jié)合，其內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)與疏水尾部結(jié)構(gòu)均與氮酮類似，試驗結(jié)果證實，以酯鍵連接的疏水尾部的系列化合物促透性能良好。目前，常用的透皮促進劑種類越來越多，如亞砜及其類似物、氮酮、脂肪酸、醇類、表面活性劑、尿素、萜類等。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供一種含剛性五元環(huán)的皮膚促透劑及其制備方法；本發(fā)明的目的之二是提供一種含有脂溶性藥物尼莫地平和水溶性藥物水楊酸的油膏劑的制備方法；本發(fā)明的目的之三是提供一種以人工合成膜代替皮膚進行促透劑性能評價的方法。本發(fā)明上述目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種結(jié)構(gòu)如下式的具有兩親性且含有脯氨酸的新型皮膚促透化合物，其中，AA代表十二種不同的氨基酸，選自Ala，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr。將月桂酸與脯氨酸用活潑酯的方法縮合得到中間體C12-Pro-OH，此中間體再與十二種不同氨基酸甲酯進行縮合即制備得到上述系列化合物。本發(fā)明化合物的制備方法，包括以下步驟(1)月桂酸與脯氨酸以活潑酯的方法合成中間體C12-Pro-OH;(2)將中間體d2-Pro-OH分別與Ala-0Me，Phe-0Me,Gly-0Me，11e-0Me，Leu-0Me，Met-0Me，Pro-0Me，Ser-0Me，Thr-0Me，Val-0Me，Trp-0Me或Tyr-OMe縮合，即得相應(yīng)化合物。本發(fā)明包括含有上述化合物的藥物組合物。其中含有藥物，上述化合物以及藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物組合物，其中含有上述的化合物0.01%-99.99%，藥物重量百分含量為0.1%-5%，其余為藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物組合物，選自軟膏劑、眼膏劑、凝膠劑或栓劑。其中藥物選自外用藥物。所述外用藥物選自脂溶性藥物或水溶性藥物。其中脂溶性藥物選自尼莫地平，水溶性藥物選自水楊酸。本發(fā)明還包括本發(fā)明的化合物在制備藥物、保健品、農(nóng)藥及化妝品中的應(yīng)用。目前透皮吸收的研究中主要應(yīng)用動物皮和人工合成皮作為模擬皮膚的介質(zhì)，動物皮雖然應(yīng)用比較廣泛，但由于動物個體差異的原因，對于促透劑的促透性能的評價標準不能很好的統(tǒng)一，且動物皮的通透性與人皮相比有一定差距；目前，人工合成皮已經(jīng)越來越多地得到了研究人員的關(guān)注，本專利所使用的人工合成膜——聚砜膜(Pall，66221)已經(jīng)在Hanson公司和美國FDA的合作項目上對含氫化可的松的軟膏劑進行了研究使用。本發(fā)明的化合物和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點所有化合物均由內(nèi)源性物質(zhì)(氨基酸和脂肪酸)構(gòu)成，幾乎無毒，無刺激性，適合于經(jīng)皮給藥制劑和化妝品中長期使用。:圖l為尼莫地平組Q-t圖圖2為水楊酸組Q-t圖具體實施例方式為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當理解為對本發(fā)明的限制。實施例1C12-Pro-OH的制備冰浴條件下，1.49g(lOmmol)N-羥基琥珀酰亞胺(HOSu)及2.0g(10mmo1)月桂酸在20ml無水四氫呋喃(THF)中攪拌；2.67g(13mmol)二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)的溶于無水四氫呋喃中，滴加入反應(yīng)液中。反應(yīng)6小時后減壓過濾去除二環(huán)己基脲(DCU)后用乙酸乙酯(EA)溶解，減壓過濾DCU后用飽和NaHC03溶液洗3次，飽和NaCl溶液洗3次后加入無水Na2S04干燥，過夜。過濾去除Na2S04后減壓濃縮至干。此產(chǎn)物用無水THF溶解，加入Pro，用N-甲基嗎啉(NMM)調(diào)節(jié)pH值到8-9，反應(yīng)6小時。將反應(yīng)液減壓濃縮后，用飽和KHS04溶液溶解，并用EA萃取兩次，合并EA層后，用飽和NaCl溶液萃取l次。EA層用無水Na2S04干燥過夜，過濾去除NaS04，溶液減壓濃縮至干，得到中間體Cu-Pro-OH，放入干燥器備用。實施例2d2-Pro-Gly-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，力口入1.35gt(10mmo1)l-羥基苯并三唑(HOBt),2,67g(13mmol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU，加入1.25g(10mmol)Gly-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水5Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物C12-Pro-Gly-OMe粗品。用石油醚溶解后靜置析晶，得到白色粉末固體。ESI-MS(m/z)369[M+H]+,737[2M+H]十,759[2M+Na]+["]『=-49.8333mp.45.4-45,6。C實施例3Cu-Pro-Phe-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU,加入2.15(10mmol)Phe-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Phe-OMe粗品。柱層析分離得到白色粉末狀標題化合物。ESI墨MS(m/z)459[M+H]+,481[M+Na]+，940[2M+Na]+L"Jd=-34,1667mp.44.4-45-0。C實施例4C12-Pro-Ile-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU,加入1.81g(10mmol)Ile-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Ile-OMe粗品。柱層析分離得到無色透明油狀標題化合物。ESI-MS(m/z)425[M+H]+,447[M+Na]+[°^°=-50.7333實施例5C12-Pro-Leu-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC,反應(yīng)6小時后，過濾DCU，加入1.81g(10mmol)Leu-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物C!2-Pro-Leu-OMe粗品。柱層析分離得到白色蠟狀標題化合物。ESI-MS(m/z)425[M+H]+，849[2M+H]+,869[2M+Na]+6L"」d=-57.8788mp.41.8-42.2。C實施例6d2-Pro-Pro-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU，加入1.61g(10mmol)Pro-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Pro-OMe粗品。柱層析分離得到白色蠟狀標題化合物。ESI-MS(m/z)409[M+H]+,431[M+Na]+[°^°=71,1111mp.26.1-26.6.。C實施例7C12-Pro-Met-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU，加入1.99g(10mmol)Met-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Met-OMe粗品。柱層析分離得到白色蠟狀標題化合物。ESI-MS(m/z)443[M+H]+,465[M+Na]+,907[2M+Na]++,421[M+Na]r，20十,820[2M+Na]剩d=-20.7576mp.30-31°C實施例9C12-Pro-Thr-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g(10mmol)中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入U5g(10mmol)HOB,t，2.67g(13mmol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU，加入1.69g(10mmol)Thr-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2SCU干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Thr-OMe粗品。柱層析分離得到白色粉末狀標題化合物。ESI-MS(m/z)413[M+H]+,435[M+Na]+,848[2M+Na]=-52.5926mp.83.4-84.3。C實施例10Cl2-Pro-Tyr-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g(10mmol)中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2,67g(13mmol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU，加入2.31g(10mmol)Tyr-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物C12-Pro-Tyr-OMe粗品。柱層析分離得到白色粉末狀標題化合物。ESI-MS(m/z)475[M+H]+,497[M+Na]+,972[2M+Na]+L"Jd=-40.4016mp.131.3-132.2°C實施例11C12-Pro-Trp-OMe的制備冰浴條件下，將2.97g(10mmol)中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶角牟，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13纖ol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU，加入2.54g(10mmol)Trp-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Trp-OMe粗品。粗品用丙酮溶解后靜置，析出的白色針狀晶體，為標題化合物。ESI-MS(m/z)520+L"JD=7.2727mp.44.6-45.4。C實施例12C12-Pro-Val-OMe的制備8冰浴條件下，將2.97g(10mmol)中間體月桂酰脯氨酸(C12-Pro-OH)用無水THF溶解，加入1.35g(10mmol)HOBt，2.67g(13mmol)DCC，反應(yīng)6小時后，過濾DCU，加入1.67g(10mmol)Val-OMe，用NMM調(diào)節(jié)pH值到9，反應(yīng)10小時，減壓濃縮至干。用EA溶解，過濾去除DCU，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液、飽和NaCl溶液、飽和KHS04溶液和飽和NaCl溶液各洗3次。EA層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得目標化合物d2-Pro-Va1-OMe粗品。柱層析分離得到白色標題化合物。ESI-MS(m/z)410[M+Na]+,797[2M+Na]+[《=—28.3951mp.47.3-47.7。C實施例14含尼莫地平油膏劑的的制備精確稱取尼莫地平粉末200mg，加入白凡士林10g,加熱至60。C,凡士林溶解，攪拌均勻，得到尼莫地平空白油膏。稱取尼莫地平空白油膏3g，加入0.1067mmo1本專利公開的透皮促進劑，攪拌均勻，得到含有促透劑的尼莫地平油膏。實施例15含水楊酸油膏劑的制備精確稱取水楊酸粉末200mg，加入白凡士林10g，加熱至60。C，凡士林溶解，攪拌均勻，得到水楊酸空白油膏。稱取水楊酸空白油膏3g，加入0.1067mmo1本專利公開的透皮促進劑，攪拌均勻，得到含有促透劑的水楊酸油膏。實施例16含不同促透劑的尼莫地平油膏劑促透性能評價透皮促進劑效果的應(yīng)用選擇經(jīng)典的Franz擴散池實驗。首先，將聚砜膜(Pall公司，66221)，浸泡在無水乙醇中15小時，進行預(yù)處理。將此聚砜膜至于Franz擴散池的接收池和供給池之間，接收液為30%乙醇，供給池為含有促透劑的尼莫地平油膏或空白尼莫地平油膏。水浴溫度為32±0.5°C，攪拌速度為600rpm，取樣間隔為lh，2h,3h，4h，5h，6h，10h，16h，24h。取樣時沖洗管路1.5ml,取樣體積lml。將所得到的樣品溶液用HPLC檢測定量，用公式算出得到累計滲透濃度及Q-T曲線。如表1，圖1。實施例17含不同促透劑的水楊酸油膏劑的促透性能評價透皮促進劑效果的應(yīng)用選擇經(jīng)典的Franz擴散池實驗。首先，將聚砜膜(Pall公司，66221)，浸泡在無水乙醇中15小時，進行預(yù)處理。將此聚砜膜至于Franz擴散池的接收池和供給池之間，接收液為蒸餾水，供給池為含有促透劑的水楊酸油膏或空白水楊酸油膏。水浴溫度為32±0.5°C，攪拌速度為600rpm,取樣間隔為lh，2h，3h，4h，5h，6h，10h，16h，24h。取樣時沖洗管路1.5ml，取樣體積lml。將所得到的樣品溶液用HPLC檢測定量，用公式算出得到累計滲透濃度及Q-T曲線。如表2，圖2。表1尼莫地平組累計滲透濃度及與空白組比率<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>11C12-Pro-Trp-Ome17.98±5.760.612C12-Pro-Tyr-OMe14.34±4.570.48*表示對比空白組(0組)有顯著性差異PO.05**表示對比空白組(0組)有極顯著性差異P<0.0權(quán)利要求1、一種結(jié)構(gòu)如下式的具有兩親性且含有脯氨酸的新型皮膚促透化合物，其中，AA代表十二種不同的氨基酸，選自Ala，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr。2、權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，包括以下步驟(1)月桂酸與脯氨酸以活潑酯的方法合成中間體C12-Pro-OH;(2)將中間體Ci2-Pro-OH分別與Ala-0Me，Phe-0Me，Gly-0Me，lie-0Me，Leu-0Me，Met-0Me，Pro-0Me，Ser-0Me，Thr-0Me，Val-0Me，Trp-OMe或Tyr-OMe縮合，即得相應(yīng)化合物。3、含有權(quán)利要求l化合物的藥物組合物。4、權(quán)利要求3的藥物組合物，其中含有藥物，權(quán)利要求l所述的化合物以及藥物可接受的載體。5、權(quán)利要求3的藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1所述的化合物重量百分含量為1%-10%，藥物重量百分含量為0.1%-5%，其余為藥物可接受的載體。6、權(quán)利要求5的藥物組合物，選自軟膏劑、眼膏劑、凝膠劑或栓劑。7、權(quán)利要求3的藥物組合物，其中藥物選自外用藥物。8、權(quán)利要求6的藥物組合物，其中外用藥物選自脂溶性藥物或水溶性藥物。9、權(quán)利要求7的藥物組合物，其中脂溶性藥物選自尼莫地平，水溶性藥物選自水楊酸。10、權(quán)利要求1的化合物在制備藥物、保健品、農(nóng)藥及化妝品中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及月桂酰脯氨酰氨基酸甲酯作為新型促透劑的合成方法及其應(yīng)用，所述新型皮膚促透化合物如右式。文檔編號A61K47/22GK101538236SQ200910136620公開日2009年9月23日申請日期2009年5月8日優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日發(fā)明者崔國輝,崔純瑩,盈范申請人:首都醫(yī)科大學