專利名稱：：胸腺5肽的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種胸腺肽，尤其是涉及一種胸腺5肽的新用途。
背景技術(shù)：
：胸腺肽的臨床應(yīng)用始于20世紀(jì)70年代中期，其最主要的貢獻(xiàn)是對胸腺依賴性疾病的治療，它對于維持原發(fā)性免疫缺陷病，自身免疫疾病和癌癥患者的免疫反應(yīng)性，剌激其特異性淋巴細(xì)胞的活性起著主要作用，因此廣泛應(yīng)用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白塞氏綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、重癥感染、支氣管哮喘、急慢性肝炎和腫瘤等疾病。另外，由于人類的老化明顯地反映胸腺組織的萎縮和功能的衰竭，胸腺肽可以推遲一些老年性疾病的出現(xiàn)，因此應(yīng)用胸腺肽抗衰老也有著極其廣闊的前景([l]GoldsteinAL，GaraciE.CombinationTher即iess[M].NewYork:springer,1993:39-48;[2]劉治軍，呂俊玲，田國濤，等.胸腺肽研究進(jìn)展及臨床應(yīng)用[J].首都醫(yī)藥，2003，10(10):40;[3]BelaB，BelaBJ，StuartE，etal.Reviewofthymichormonesincancerdiagnosisandtreament[J].IntJI匪nopharma，2000，22(4):261)。隨著研究的深入，人們已經(jīng)將研究重點(diǎn)轉(zhuǎn)向胸腺素中的單一肽，以期發(fā)現(xiàn)更有效的臨床治療藥物。"胸腺5肽"(TP-5)是由精氨酸、賴氨酸、天門冬氨酸、纈氨酸及酪氨酸5種氨基酸組成，其結(jié)構(gòu)如下H2N-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH，化學(xué)名稱N-[N-[Na-[Na-L_精氨酰-L-賴氨酰]-L-a-天門冬氨酰]-L-纈氨酰]-L-酪氨酰。結(jié)構(gòu)式Arg-Lys-Asp-Val-Tyr，分子式C30H49N909。TP-5具有免疫雙向調(diào)節(jié)功能，具有誘導(dǎo)和促進(jìn)T淋巴細(xì)胞及其亞群分化、成熟和活化的功能，調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的比例，使CD4+/CD8+趨于正常；調(diào)節(jié)和增強(qiáng)人體細(xì)胞免疫功能的作用，能促使有絲分裂原激活后的外周血中的T淋巴細(xì)胞成熟，增加T細(xì)胞在各種抗原或致有絲分裂原激活后各種淋巴因子(如a、Y干擾素、白介素2和白介素3)的分泌，增加T細(xì)胞上淋巴因子受體的水平。它同時通過對T輔助細(xì)胞的激活作用來增強(qiáng)淋巴細(xì)胞反應(yīng)。此外可能影響NK前體細(xì)胞的趨化，該前體細(xì)胞在暴露于干擾素后變得更有細(xì)胞毒性，有利于發(fā)揮其治療作用。目前已經(jīng)有人應(yīng)用胸腺5肽治療伴免疫功能低下的II型糖尿病患者。I型糖尿病的重要原因與自身免疫疾病密切相關(guān)，其中主要是因為胰島13細(xì)胞受到自身免疫細(xì)胞的攻擊，造成抗原暴露，引起免疫系統(tǒng)進(jìn)一步的反應(yīng)，使得胰島P細(xì)胞大量損失，正常胰島素的分泌受到影響，血糖升高，形成糖尿病癥狀。STZ(鏈脲佐菌素)在I型糖尿病模型制備中已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，大鼠在50mg/kg—次性注射情況下并可以造模成功，而小鼠則在相同劑量經(jīng)過5次連續(xù)注射后基本達(dá)到造模目的，目前認(rèn)為STZ的作用機(jī)理是通過使機(jī)體產(chǎn)生過量的NO，攻擊破壞胰島13細(xì)胞，引起胰島細(xì)胞抗原暴露，激活機(jī)體免疫機(jī)制，大量巨噬細(xì)胞進(jìn)入胰島細(xì)胞從而加劇胰島細(xì)胞的損傷，最后造成胰島素分泌減少，引起血糖增高，誘發(fā)糖尿病。誘導(dǎo)的小鼠胸腺萎縮，腎臟明顯腫大，并且血清抗氧化能力顯著下降([4]劉長青，宋立江，蔣東升，等-鏈脲佐菌素穩(wěn)定性對小鼠糖尿病模型的影響.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，15(3):896-897;[5]吳清洪，顧為望，袁進(jìn).鏈脲佐菌素誘導(dǎo)建立I型糖尿病大鼠模型.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，27(8):114-116)。近年來，糖尿病的病因和發(fā)病機(jī)理研究表明氧化應(yīng)激與糖尿病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)([6]曹文彬等.抗氧化微量營養(yǎng)素防治糖尿病的研究進(jìn)展.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2006，22(2):73-74)，為了防止糖尿病的發(fā)生發(fā)展，人們對一些具有防治糖尿病作用的天然抗氧化物進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)它們通過表達(dá)不同的機(jī)制與作用環(huán)節(jié)打斷氧化侵襲引致胰島P細(xì)胞損害的惡性循環(huán)，從而為天然抗氧化治療糖尿病提供了一個新的策略。至今未見有關(guān)胸腺5肽在調(diào)節(jié)血糖和保護(hù)胰島的功能的相關(guān)報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種胸腺5肽的新用途。通過動物實(shí)驗證實(shí)，胸腺5肽能夠明顯增強(qiáng)小鼠的糖耐量作用，并且能夠明顯抵抗STZ誘導(dǎo)小鼠糖尿病的發(fā)生。組織切片發(fā)現(xiàn)，TP-5對于保護(hù)胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)有重要作用，因此胸腺5肽可用于維持正常糖代謝，保護(hù)胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，可用于制備預(yù)防糖尿病藥物。通過動物體內(nèi)實(shí)驗證明，TP-5具有很好的抵抗STZ誘導(dǎo)的糖尿病的發(fā)生，表現(xiàn)出很好的抵抗糖尿病誘發(fā)因素的影響，并且具備增強(qiáng)糖耐量作用的功能，電鏡超微結(jié)構(gòu)結(jié)果證明，TP-5在保護(hù)胸腺結(jié)構(gòu)和胰島結(jié)構(gòu)方面效果明顯，并且在胰島分泌方面也有促進(jìn)作用，具體表現(xiàn)為胸腺細(xì)胞結(jié)構(gòu)緊密，線粒體結(jié)構(gòu)清晰，嵴狀結(jié)構(gòu)明顯，而對照組胸腺結(jié)構(gòu)出現(xiàn)排列不整齊，細(xì)胞凋亡現(xiàn)象明顯，線粒體結(jié)構(gòu)模糊，嵴狀結(jié)構(gòu)出現(xiàn)脫落，胰島結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)對照組圓形分泌顆粒致密顆粒出現(xiàn)空泡，而用藥組致密顆粒多，空泡現(xiàn)象不明顯。結(jié)果證明，TP-5在抵抗糖尿病的發(fā)生中具有重要保護(hù)作用，為今后開發(fā)糖尿病基因工程潛在藥物奠定基礎(chǔ)。圖1為皮下注射TP-5對小鼠抵抗STZ誘導(dǎo)糖尿病的作用(TP-5與STZ同時注射)。圖2為皮下注射TP-5對AUC的效果。圖3為皮下注射TP-5對糖耐量的影響。圖4為TP-5處理組胸腺電鏡圖。圖5為TP-5處理組胸腺電鏡圖。圖6為對照組胸腺電鏡圖。圖7為對照組胸腺電鏡圖。圖8為對照組胰島電鏡圖。圖9為TP-5處理組胰島電鏡圖。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例將結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例所采用的材料與方法說明如下。實(shí)驗取材和主要生物試劑如下試驗動物為C57BL/6小鼠，(20±2)g，6-7周齡，雄性，SPF級，小鼠60只，由上海斯萊克實(shí)驗動物有限責(zé)任公司提供，合格證號SCXK(滬)200320003。昆明鼠，雄性SPF級，由廈門大學(xué)動物研究中心提供。單籠喂養(yǎng)，室溫1825t:，相對溫度50%80%，每日光照12h，自由攝食、飲水。鏈脲佐菌素(str印tozotocinSTZ，SIGMA.USA)，批號053K1569;擰檬酸(成都鴻鶴化工試劑廠)，批號20040821。血糖檢測儀為強(qiáng)生公司Llifscan產(chǎn)品及配套檢測試紙。以下給出2個實(shí)施例。實(shí)施例1將20只C57BL/6小鼠平均分為2組，每組10只，1組皮下途徑給TP_5，一組以相同體積檸檬酸緩沖液作為對照組。給藥的同時腹腔注射STZ，每天一次，按50mg/kg劑量，連續(xù)4天，自注射STZ后，第5，20和30天尾靜脈測血糖。結(jié)果見表1以及圖1、49。表1皮下注射TP-5對小鼠抵抗STZ誘導(dǎo)糖尿病的作用(TP_5與STZ同時注射)(C57BL/6小鼠)項目注射STZ后各個時間段血糖值mmol/L5d20d30dcontrol9.36±2.2520.52±5.2816息3.56TP-5(10ng/只)8.42±0.879.38±0.87**11.06±2.57**:與對照組相比，P<0.05，差異顯著；**:與對照組相比，P<0.01差異極顯著。實(shí)施例2將20只昆明小鼠平均分為2組，每組10只，1組皮下途徑給TP-5，一組以相同體積檸檬酸緩沖液作為對照組。連續(xù)14天，第14天進(jìn)行糖耐量實(shí)驗。結(jié)果見表2以及圖2和3。表2皮下注射TP-5對增強(qiáng)小鼠糖耐量作用的效果(昆明小鼠)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*:與對照組相比，P<0.05，差異顯著；**與對照組相比，差異極顯著。糖耐量實(shí)驗按以下公式計算AUC=0.25X(BSvalueat0hour+4XBSvalueat0.5hours+3XBSvalueat2hours)。本實(shí)驗所有數(shù)據(jù)通過SPSS(version13.0，SPSSInc.)軟件進(jìn)行分析處理。胸腺5肽由海南中和藥業(yè)股份有限公司提供，lmg/瓶，選擇昆明小鼠和C57BL/6小鼠為實(shí)驗動物，皮下注射途徑給藥，驗證該藥的生理功能。TP-5的一種新功能的實(shí)驗方法包括以下步驟1)通過皮下注射途徑將胸腺5肽按10iig/只劑量給藥；2)每隔5天稱小鼠體重；3)14天后測小鼠空腹血糖及進(jìn)行糖耐量實(shí)驗；4)TP-5皮下注射的同時，小鼠經(jīng)腹腔注射STZ，每天一次，按50mg/kg劑量，連續(xù)4天，自注射STZ后，在第5天，20天和30天測血糖。權(quán)利要求胸腺5肽用于制備預(yù)防糖尿病藥物。全文摘要胸腺5肽的新用途，涉及一種胸腺肽。提供一種胸腺5肽的新用途。通過動物實(shí)驗證實(shí)，胸腺5肽能夠明顯增強(qiáng)小鼠的糖耐量作用，并且能夠明顯抵抗STZ誘導(dǎo)小鼠糖尿病的發(fā)生。組織切片發(fā)現(xiàn)，TP-5對于保護(hù)胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)有重要作用，因此胸腺5肽可用于維持正常糖代謝，保護(hù)胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，可用于制備預(yù)防糖尿病藥物。文檔編號A61K38/08GK101693104SQ20091011261公開日2010年4月14日申請日期2009年10月1日優(yōu)先權(quán)日2009年10月1日發(fā)明者周克夫,王世媛,韓偉申請人:廈門大學(xué);廈門伯賽基因轉(zhuǎn)錄技術(shù)有限公司;