專(zhuān)利名稱：：金黃色葡萄球菌中的Hfq蛋白在金葡菌感染防治中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及金葡菌Hfq蛋白的應(yīng)用，具體而言，本發(fā)明涉及Hfq蛋白作為RNA伴侶分子，參與調(diào)控金葡菌表面色素的合成，從而影響金葡菌抗宿主免疫的能力。因此，Hfq蛋白在金葡菌感染的防治領(lǐng)域有良好的應(yīng)用前景。
背景技術(shù)：
：金黃色葡萄球菌(金葡菌，Staphylococcusaureus)是人類(lèi)的一種重要病原菌，能夠引起肺炎、心內(nèi)膜炎、燒傷及戰(zhàn)傷感染、敗血癥、中毒性休克等多種嚴(yán)重感染。更為嚴(yán)重的是，抗生素的濫用導(dǎo)致金葡菌耐藥性不斷增強(qiáng)，如1961年發(fā)現(xiàn)的對(duì)13-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)，1997年發(fā)現(xiàn)的耐糖肽類(lèi)抗生素的耐糖肽金葡菌(GISA)，2002年IO月又發(fā)現(xiàn)了耐萬(wàn)古霉素的金葡菌(VRSA)。2007年10月，KlevensRM等報(bào)道了2005年美國(guó)MRSA的感染人數(shù)超過(guò)9萬(wàn)人，感染率為31.8/100，000，死亡率為6.3/100，000，死亡人數(shù)超過(guò)HIV感染的死亡人數(shù)。由于耐藥性的問(wèn)題，金葡菌感染所致膿毒血癥的防治不僅是現(xiàn)代創(chuàng)傷外科和危重病醫(yī)學(xué)面臨的棘手難題，也是微生物學(xué)領(lǐng)域亟待研究解決的熱點(diǎn)課題之一。對(duì)于金葡菌所致感染的防治，傳統(tǒng)的思路是通過(guò)抑菌、殺菌和疫苗接種，但是在已揭示金葡菌基因表達(dá)譜的今天，深入探索金葡菌致病機(jī)理及其調(diào)控因素可能創(chuàng)建一條新的有效抗感染途徑。金葡菌表面的金黃色是分類(lèi)學(xué)的一個(gè)經(jīng)典指標(biāo)，其色素由一系列的類(lèi)胡蘿卜素類(lèi)化合物組成，其中st即hyloxanthin是其主要的組成成分。研究結(jié)果表明，金葡菌表面的色素與細(xì)菌的致病性明顯相關(guān)[ChamberlainNRetal(1991)InfectI匪n59:4332-4337]。金葡菌表面的色素合成主要由CrtM和CrtN兩種蛋白參與[WielandB.C.etal(1994)JBacteriol176:7719-7726]。LiuGY等人構(gòu)建了crtM的突變體菌株，通過(guò)突變體菌株和野生型菌株的比較發(fā)現(xiàn)，金葡菌表面的色素具有明顯的抗氧化能力，而這種抗氧化能力可以使細(xì)菌抵抗中型粒細(xì)胞的殺傷作用，提高細(xì)菌本身的致病性[LiuGYetal(2005)JExpMed202:209-215]。rsbUVWsigB系統(tǒng)能夠金葡菌色素的合成，BischoffM等人的研究結(jié)果表明轉(zhuǎn)錄起始因子SigB能夠上調(diào)crt麗操縱子的表達(dá)，其突變體菌株的色素合成明顯降低[PalmaMetal.(2001)InfectImmun69:7858-7865，BischoffMPetal.(2004)JBacteriol186:4085-4099]。Hfq(ahostfactorforRNAphageQP)蛋白最初被人們發(fā)現(xiàn)存在于大腸桿菌中，是RNA噬菌體QP復(fù)制所必需的宿主因子。同源分析表明，該蛋白廣泛分布于金黃色葡萄球菌等細(xì)菌中，并與真核細(xì)胞以及古細(xì)菌中的Sm蛋白和Sm類(lèi)似蛋白同源。Hfq蛋白具有RNA伴侶分子的活性，能夠結(jié)合富含A/U的RNA序列[MollerTetal.(2002)MolCell9:23-30]。Hfq主要的生物學(xué)功能是通過(guò)結(jié)合RNA來(lái)影響其穩(wěn)定性[MohantyBKetal.(2004)MolMicrobio154:905-920]或者是通過(guò)輔助非編碼小RNA與mRNA結(jié)合來(lái)調(diào)節(jié)耙基因的表達(dá)[AntalMetal.(2005)280:7901-7908]。3ssrA又稱為tmRNA和10saRNA，在細(xì)菌內(nèi)高度保守，其主要的生物學(xué)功能是通過(guò)行使tRNA和mRNA的雙重功能，在合成停滯或者中斷的蛋白質(zhì)末端延伸出一段多肽，完成翻譯，釋放核糖體。該肽段能夠被蛋白酶識(shí)別，從而使修飾的蛋白被迅速降解[KarzaiAetal.(2000)NatStructBiol7:449-455]。SmpB(smallproteinB)是ssrA發(fā)揮其生物學(xué)功能的關(guān)鍵蛋白質(zhì)[KarzaiAWetal.(1999)EMBOJ18:3793-3799.]。申請(qǐng)人:實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，雖然由于金葡菌8325-4中的rsbU基因突變，導(dǎo)致其表面色素受阻，但是AssrA突變體菌株顏色明顯的加深，而AsmpB突變體菌株顏色與野生型相同。提示ssrA參與調(diào)控金葡菌色素的合成，而這一功能不需要SmpB蛋白的參與。同時(shí)，Hfq蛋白的突變體Ahfq菌株顏色也明顯的加深，表明Hfq蛋白參與調(diào)控色素合成。而細(xì)菌色素光譜分析結(jié)果顯示AssrA和Ahfq兩株突變體表型相同。相對(duì)于野生型菌株，突變體AssrA和Ahfq抗氧化能力明顯增強(qiáng)，并且其抗人中性粒細(xì)胞殺傷的能力明顯增強(qiáng)。通過(guò)序列分析，發(fā)現(xiàn)ssrA132-147這一區(qū)段與crt的SD序列互補(bǔ)，而凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)證實(shí)ssrA132-147和crtMN的5—UTR之間的存在相互作用。說(shuō)明ssrA可能影響CrtM和CrtN兩種蛋白的翻譯，而Hfq蛋白可能是作為RNA伴侶分子參與這一過(guò)程。有報(bào)道表明，SigB蛋白參與調(diào)控色素合成的作用[KullikLetal(1998)JBacteriol180:4814-4820]。申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，AssrA和Ahfq兩株突變體中sigB表達(dá)水平均升高，提示ssrA和Hfq蛋白可能調(diào)控sigB表達(dá)。序列分析結(jié)果顯示，ssrA138—154這一區(qū)段與sigB的SD序列互補(bǔ)，而凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)證實(shí)ssrA138—154和sigB的5—UTR之間的存在相互作用，而ssrA132—147則無(wú)這種作用，說(shuō)明ssrA可能影響SigB蛋白的翻譯，從而影響crtMN的轉(zhuǎn)錄。免疫共沉淀結(jié)果表明，ssrA與crtMN的5—UTR、ssrA與sigB的5—UTR之間的相互作用必需Hfq蛋白參與。至此，申請(qǐng)人不僅驗(yàn)證了金葡菌Hfq蛋白具有調(diào)控菌體表面色素合成的功能，而且還闡明了其中的生物學(xué)機(jī)制，即Hfq蛋白作為RNA伴侶分子，輔助ssrA影響crtMN的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而影響色素合成，由此完成了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容具體地，本發(fā)明提供了1.金葡菌中Hfq蛋白在金葡菌感染的防治中的應(yīng)用。其特征在于Hfq蛋白具有SEQIDNO7的氨基酸序列。2.權(quán)利要求1中的Hfq蛋白，包括天然Hfq蛋白，重組Hfq蛋白，含Hfq蛋白的融合蛋白，Hfq蛋白的活性片段等形式。3.核苷酸序列，編碼權(quán)利要求1中的氨基酸序列SEQIDNO7的核苷酸序列。4.核苷酸序列，編碼權(quán)利要求2中的氨基酸序列的核苷酸序列。5.權(quán)利要求1、2中的氨基酸序列在制備抗金葡菌感染的疫苗中的用途。6.權(quán)利要求1、2中的氨基酸序列在制備治療金葡菌感染的藥物中的用途。7.權(quán)利要求3、4中的核苷酸序列在制備抗金葡菌感染的疫苗中的用途。8.權(quán)利要求3、4中的核苷酸序列在制備治療金葡菌感染的藥物中的用途。圖1:表示野生型、突變體AssrA和As,B菌株顏色。圖2:表示野生型、突變體AssrA和Ahfq的單氧敏感實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖3:表示野生型、突變體AssrA和Ahfq的雙氧敏感實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖4:表示野生型、突變體AssrA和Ahfq的人中性粒細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)。圖5:表示ssrA132—147與crt5—UTR序列分析結(jié)果。圖6:表示ssrA132—147和crtMN的5—UTR作用的凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖7:表示野生型、突變體AssrA和Ahfq菌株顏色。圖8:表示野生型、突變體AssrA和Ahfq的細(xì)菌色素光譜分析結(jié)果圖9:表示突變體AssrA和Ahfq中sigB表達(dá)水平的實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果圖10:表示ssrA138—154與sigB5—UTR序列分析結(jié)果。圖11:表示ssrA132—147、ssrA138—154和sigB的5—UTR作用的凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖12:表示ssrA、crtMN的5—UTR與Hfq蛋白三者作用的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖13:表示ssrA、sigB的5—UTR與Hfq蛋白三者作用的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖14:表示Hfq蛋白輔助ssrA調(diào)控色素合成的機(jī)制示意圖。具體實(shí)施例方式為了更清楚地闡述本發(fā)明，具體提供了下述闡述性的實(shí)施方案，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解，本發(fā)明并不僅僅限定于下述實(shí)施例，任何與本發(fā)明的實(shí)施例等同的變體也包括在本發(fā)明中。實(shí)施例1、金葡菌突變體菌株的構(gòu)建根據(jù)擬突變基因上下游各長(zhǎng)500800bp序列分別設(shè)計(jì)引物(見(jiàn)表l)，再通過(guò)PCR的方法擴(kuò)增得到這兩段序列；經(jīng)過(guò)重疊PCR將這兩段序列擴(kuò)增為1，OOObp的序列并引入酶切位點(diǎn)KpnI。將經(jīng)KpnI酶切的卡那基因插入到上述序列中，再將此序列通過(guò)EcoRI和SalI連入穿梭載體pAUL-A中，產(chǎn)生質(zhì)粒pAUL-A-A。將pAUL-A-A電轉(zhuǎn)化S.aureusRN4220,先置于30。C培養(yǎng)，再42。C培養(yǎng)，通過(guò)卡那抗性篩選，得到基因組發(fā)生同組的RN4220-ARN4220。利用噬菌體(p11裂解ARN4220培養(yǎng)物，將裂解上清加入S.aureus8325-4培養(yǎng)物中，37t:孵育lh，再進(jìn)一步通過(guò)42。C溫度和卡那抗性篩選，獲得S.aureus8325-4基因組發(fā)生雙交換的重組菌。進(jìn)一步通過(guò)突變體的基因組PCR、PT-PCR、WesternBlot等方法驗(yàn)證是否該基因發(fā)生了突變。利用此方法獲得了突變體AssrA、AsmpB和Ahfq，其中AssrA和Ahfq菌體顏色較野生型明顯變深(見(jiàn)圖1，7)。培養(yǎng)S.aureus8325-4、AssrA和Ahfq至靜止期，離心，收集菌體，甲醇萃取，取上清進(jìn)行連續(xù)可波長(zhǎng)掃描，測(cè)定其光吸收值。結(jié)果顯示，野生型無(wú)明顯吸收峰，AssrA和Ahfq的最大吸收波長(zhǎng)相同，峰值也接近(見(jiàn)圖8)，表明它們表面為數(shù)量相近的同一色素。2、氧敏感實(shí)驗(yàn)單氧敏感實(shí)驗(yàn)是將金葡菌以PBS稀釋為0.5X108/ml，加入24孔板，每孔2ml，再加入終濃度0.1iig/ml的亞甲基藍(lán)，放置于距100瓦光源10cm處，37t:孵育1.5h，涂板測(cè)定細(xì)菌存活數(shù)。雙氧敏感實(shí)驗(yàn)是將將金葡菌以PBS稀釋?zhuān)訮BS稀釋為1X107ml，加入24孔板，每孔2ml，再加入終濃度1.5%的H^，37t:孵育lh，加入濃度為1，000U/ml的過(guò)氧化氫酶(購(gòu)自Sigma公司)以清除剩余的11202，涂板測(cè)定細(xì)菌存活數(shù)。與野生型菌株相比，突變體AssrA和Ahfq細(xì)菌存活數(shù)明顯增加，即其抗氧能力明顯增強(qiáng)(見(jiàn)圖2，3)。3、中性粒細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)利用Histop叫ue分離液(Sigma公司)從健康成人全血中分離出中性粒細(xì)胞。細(xì)菌培養(yǎng)物離心，收集沉淀，PBS洗滌兩次，用RPMI1640(含10%FCS)稀釋菌體至4.5X107/ml。取100ii1菌液與3X105中性粒細(xì)胞混合，700g離心5min，置于37°C(5%C02)溫箱培養(yǎng)10min，加入終濃度400iig/ml的慶大霉素以殺死細(xì)胞外的細(xì)菌。再繼續(xù)培養(yǎng)45min，離心沉淀中性粒細(xì)胞，PBS洗滌兩次，O.02%TritonX裂解，涂板測(cè)定細(xì)菌存活數(shù)。結(jié)果顯示，與野生型相比，突變體AssrA和Ahfq細(xì)菌存活數(shù)明顯增多，即其抗人中性粒細(xì)胞殺傷的能力明顯增強(qiáng)(圖4)。4、實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)sigB的表達(dá)水平細(xì)菌總RNA利用Triazol試劑(Invitrogen公司)提取，取80ii1加入10U無(wú)RNA酶的DNaseI(Promega公司)、10ii1DNaseI緩沖液，在100ii1體系中37"C反應(yīng)30min。取2iilRNA進(jìn)行1.2X甲醛變性膠電泳，以檢測(cè)RNA的完整性。反轉(zhuǎn)錄體系為25y1，其中總RNA1iig，六聚寡核苷酸隨機(jī)引物(TaKaRa公司)500ng，5y1of5X第一鏈緩沖液，2y15mMdNTP，20URNasin(TaKaRa公司)，1ii1反轉(zhuǎn)錄酶M-MLV(Promega)，65°C反應(yīng)10min。實(shí)時(shí)定量PCR體系為25iil，其中12.5ii12XSYBR染料(GenePharma公司)，0.3iiM基因特異的上下游引物(見(jiàn)表1)，1Pl模板。其中樣品管的模板為cDNA，陰性對(duì)照的模板為去離子水，標(biāo)準(zhǔn)管的模板是以100500ng基因組DNA為模板、利用基因特異的引物擴(kuò)增目的基因的PCR產(chǎn)物。循環(huán)參數(shù)為95°C10min，94°C30s變性，58t:30s退火，72。C40s延伸。每個(gè)擴(kuò)增的基因均測(cè)定其溶解曲線，以確定PCR產(chǎn)物的特異性。與野生型相比，突變體AssrA和Ahfq中sigB表達(dá)水平明顯提高(圖10)，表明ssrA、Hfq蛋白可能參與sigB的表達(dá)調(diào)控。5、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)通過(guò)序列分析，發(fā)現(xiàn)ssrA132—147與crtMN的5—UTR、ssrA138—154與sigB的5—UTR分別互補(bǔ)(見(jiàn)圖5，11)。crtMN和sigB的5—UTR通過(guò)將體外轉(zhuǎn)錄的方法制備。設(shè)計(jì)合成引物(見(jiàn)表1)，擴(kuò)增編碼crtMN和sigB的5—UTR基因序列，將其連接入pMD20T(TaKaRa公司)，BamHI酶切，成為線性化質(zhì)粒。以其為模板，利用SP6RNA聚合酶(TaKaRa公司)進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄。獲得的RNA片段利用6%聚丙烯酰胺變性膠純化，溶于T麗緩沖液(20mMTris-acetatepH7.5，2mMMgC12，100mMNaCl)中，95。C孵育2min，冰浴2min，37。C孵育30min使其正確折疊。ssrA132—147(具體序列為ACAGCAUUUCCUAUG，SEQIDNO:1)禾PssrA138—154(具體序歹lj為AUUUCCUAUGUGCUGUU，SEQIDNO:2)為化學(xué)合成(Takara公司)，5'端進(jìn)行了生物素標(biāo)記。上述RNA分子溶于TMN緩沖液，通過(guò)90。C2min，再4。Clmin，20。C15min，使其完全變性。生物素標(biāo)記的ssrA132—147、ssrA138—154分別與crtMN和sigB的5—UTR37°ClOmin孵育。樣品中加入上樣緩沖液，8%聚丙烯酰胺天然膠100V電泳，4t:2h。將膠轉(zhuǎn)移至尼龍膜上，LightShiftChemiluminescentEMSAKit(Pierce公司)顯影。結(jié)果顯示，ssrA132—147與crtMN的5—UTR、ssrA138—154與sigB的5—UTR能夠特異結(jié)合(見(jiàn)圖6，12)。6、免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)SsrA(SEQIDNO:3)、crtMN的5—UTR(SEQIDNO:4)、sigB的5—UTR(SEQIDNO:5)通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄制備，方法同上。根據(jù)S.aureus8325-4中hfq基因設(shè)計(jì)、合成引物(見(jiàn)表1)，以S.aureus8325-4基因組為模板，PCR擴(kuò)增該序列，同時(shí)在5'端和3'端分別引入酶切位點(diǎn)NdeI和HindIII。經(jīng)NdeI和HindIII雙酶切，與表達(dá)載體pET28a連接，轉(zhuǎn)化E.coliBL21(DE3)。重組菌的序列測(cè)定結(jié)果表明，hfq基因序列(SEQIDNO:6)按閱讀框架正確插入載體pET28a中，故重組表達(dá)的蛋白氨基酸序列也應(yīng)與Hfq蛋白一致(SEQIDNO:7)。重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)Hfq蛋白，Ni-NTA螯合樹(shù)脂(QIEGEN公司)純化，獲得了純度約為95%的Hfq蛋白。50ii1TMN緩沖液中加入ssrA10iig、Hfq蛋白2iig混合，37。C孵育15min，再與15ii1Ni2+螯合樹(shù)脂(Novagen公司)室溫孵育15min?？俁NA(O.1iig/ii1，50ii1)或crtMN/sigB的5—UTR(0.01iig/ii1，50ii1)加入上述混合物，室溫孵育5min。TMN緩沖液洗滌樹(shù)脂三次，樹(shù)脂結(jié)合的RNA在25ii1體系中反轉(zhuǎn)錄，42t:lh;PCR擴(kuò)增反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中的ssrA、crtMN/sigB的5—UTR。結(jié)果表明，ssrA與crtMN/sigB的5—UTR結(jié)合需要Hfq蛋白的參與。綜上可知，本申請(qǐng)通過(guò)一系列生物學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了金葡菌中的ssrA具有調(diào)控菌體表面色素合成的功能，而且還闡明了其中的生物學(xué)機(jī)制，由此完成了本發(fā)明。表l:引物序列Primer/sequenceOligo皿cleotidesequence(5'to3')HfqNdelGGGAATTCCATATGATTGCAAACGAAAACAT(SEQIDN0:8)HfqXhoICCGCTCGAGTTATTCTTCACTTTCAGTAGATG(SEQIDN0:9)16SFGCCTAATACATGCAAGT(SEQIDN0:10)16SRCATGTTATCCGGCATTAG(SEQIDN0:11)CrtUTRFTACTTGAGCTATACTACACA(SEQIDN0:12)CrtUTRRACTAGTCCTCCTATATTGAA(SEQIDN0:13)CrtMFGACTTGGTGAATCGTTGC(SEQIDN0:14)Cr僅CTATGATTGGTGATGCTTC(SEQIDN0:15)CrtNFTTATGTGCTAATGCCGACGC(SEQIDN0:16)Cr價(jià)AACCGAATGCCGAACCAA(SEQIDNO:17)Up-HfqF-EcoRICATCCGGAATTCCCAATCATAGCAGGTGGAAC(SEQIDNO:18)Up-HfqR-KpnlTCACTTGGTACCCTGTCGGACTCCTTTTACT(SEQIDNO:19)7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>序列表〈110〉軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)所〈120〉金黃色葡萄球菌中的Hfq蛋白在金葡菌感染防治中的應(yīng)用〈160>25〈210>1〈211〉15〈212>RNA〈213>金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〈400〉1acagca皿uccimug15〈210>2〈211〉17〈212>RNA〈213>金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〈400>2au皿ccimugugcug皿17〈210>3〈211>315〈212>RNA〈213>金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〈400>3ttcgacaggggtcccccgagctcatteagcgtgtcggagggttgtcttcgtcatcaacac60acacagttteteateactggcaaatcaaacaateatttcgcagtegctgccteatcgcac120tctgcatcgccteacagcatttcctetgtgctgtteacgcgattcaacctteateggate180GlyPheGin0116]250117]ValValSer0118]400119]LysHisAla0120]550121]AlaSerThr0122]700123]〈210〉80124]〈211〉310125]〈212>DNA0126]〈213〉引物0127]〈400>80128]gggaattcca:0129]〈210〉9:0130]〈211>31:0131]<212>DNA:0132]〈213〉引物:0133]〈400〉9:0134]ggg肪ttcca:0135]〈210>10:0136]<211>17:0137]〈212>DNA:0138]〈213〉引物:0139]〈400〉10:0140]gcctaataca:0141]<210>11:0142]〈211>18:0143]〈212〉DNA〈213〉引物〈400>11catgttatcc〈210>12〈211〉20〈212〉DNA〈213〉引物<400>12tacttgagct1620LysGlyVallieGluGit3035AsnSerGinGlyLysGlr4550SerThrTyrThrValGit6065SerGluGlu7531311718200153]〈210>130154]〈211>200155]〈212>DNA0156]<213>引物0157]〈400>130158]actagtcctcctatattgaa0159]〈210>140160]<211>180161]〈212>DNA0162]〈213〉引物:0163]〈400>14:0164]gacttggtgaatcgttgc:0165]〈210>15:0166]〈211>19:0167]〈212>DNA:0168]<213>引物:0169]〈400>15:0170]ctatgattggtgatgcttc:0171]〈210>16:0172]〈211>20:0173]〈212>DNA:0174]〈213>引物〈400>16ttatgtgctaatgccgacgc〈210>17〈211>18〈212>DNA〈213〉引物〈400>17aaccg朋tgccgaacc朋〈210>18〈211>32〈212>DNA〈213〉引物〈400>18catccggaattccc朋tcat3gcaggtgga〈210>19〈211>31〈212>DNA18192018ac3211〈213〉引物〈400>19tcacttggta〈210〉20〈211〉32〈212>DNA〈213〉引物<400〉20cgacagggta<210〉21〈211>32〈212>DNA〈213〉引物〈400〉21acacgcgtcg〈210>22〈211〉28〈212〉DNA〈213〉引物〈400>22catccggaat〈210〉23〈211〉31〈212〉DNA〈213〉引物〈400〉23cgtccggtac〈210〉24〈211>31〈212>DNA〈213〉引物〈400〉24atggaggtec〈210>25〈211>28〈212〉DNA[0228:〈213〉引物[0229:<400>25[0230:acacgcgtcg說(shuō)明書(shū)10/10頁(yè)313232283131281權(quán)利要求金葡菌中Hfq蛋白在金葡菌感染的防治中的應(yīng)用。其特征在于Hfq蛋白具有SEQIDNO7的氨基酸序列。2.權(quán)利要求1中的Hfq蛋白，包括天然Hfq蛋白，重組Hfq蛋白，含Hfq蛋白的融合蛋白，Hfq蛋白的活性片段等形式。3.核苷酸序列，編碼權(quán)利要求1中的氨基酸序列SEQIDNO7的核苷酸序列。4.核苷酸序列，編碼權(quán)利要求2中的氨基酸序列的核苷酸序列。5.權(quán)利要求1、2中的氨基酸序列在制備抗金葡菌感染的疫苗中的用途。6.權(quán)利要求1、2中的氨基酸序列在制備治療金葡菌感染的藥物中的用途。7.權(quán)利要求3、4中的核苷酸序列在制備抗金葡菌感染的疫苗中的用途。8.權(quán)利要求3、4中的核苷酸序列在制備治療金葡菌感染的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及金葡菌Hfq蛋白的應(yīng)用。Hfq蛋白作為金葡菌中一種tmRNA-ssrA的伴侶分子，參與調(diào)控金葡菌表面色素的合成，從而影響金葡菌抗宿主免疫的能力。因此，Hfq蛋白在金葡菌感染的防治領(lǐng)域有良好的應(yīng)用前景。文檔編號(hào)A61K39/085GK101711859SQ20091008079公開(kāi)日2010年5月26日申請(qǐng)日期2009年3月30日優(yōu)先權(quán)日2009年3月30日發(fā)明者劉玉,吳娜,楊光,董潔,邵寧生,高亞萍申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所