專利名稱：：清肺消炎丸在治療慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥清肺消炎丸新的醫(yī)藥用途，更具體地說是清肺消炎丸在制備治療慢性阻塞性肺疾病藥物方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種嚴(yán)重的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，患病人數(shù)多，病死率高。由于其緩慢進(jìn)行性發(fā)展，嚴(yán)重影響患者的勞動(dòng)能力和生活質(zhì)量。C0PD患者在急性發(fā)作期過后，臨床癥狀雖有所緩解，但其肺功能仍在繼續(xù)惡化，并且由于自身防御和免疫功能的降低以及外界各種有害因素的影響，經(jīng)常反復(fù)發(fā)作，而逐漸產(chǎn)生各種心肺并發(fā)癥。目前，慢性阻塞性肺疾病居全球死亡原因的第4位，世界銀行/世界衛(wèi)生組織公布，至2020年C0PD將位居世界疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的第5位。近期對(duì)我國7個(gè)地區(qū)20245成年人群進(jìn)行調(diào)查，C0PD患病率占40歲以上人群的8.2X，其患病率之高十分驚人。由于COPD患病人數(shù)多，而且具有緩慢進(jìn)展和進(jìn)行性加重的病理特點(diǎn)，對(duì)患者本人的健康、生存質(zhì)量造成嚴(yán)重威脅，同時(shí)也成為患者和社會(huì)的重要經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此開展慢性阻塞性肺疾病的臨床和基礎(chǔ)研究是目前當(dāng)務(wù)之急。慢性阻塞性肺疾病(COPD)是以慢性炎癥以及炎癥性損傷和修復(fù)造成氣道和血管壁重塑為基本病理特征，進(jìn)而引起慢性氣流受限或受阻的一類疾病。具有氣流受限特征的可以預(yù)防和治療的疾病，氣流受限不完全可逆、呈進(jìn)行性發(fā)展，與肺部對(duì)香煙煙霧等有害氣體或有害顆粒的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)。中醫(yī)學(xué)無COPD病名，但是根據(jù)其"喘、咳、脹、滿"的臨床特點(diǎn)，可以將其歸屬到"肺脹"的范疇。在臨床中我們發(fā)現(xiàn)，在C0PD急性發(fā)作期的患者當(dāng)中，以"痰熱郁肺"之證多見，運(yùn)用"清熱宣肺平喘"法?？墒盏綕M意療效。清肺消炎丸記裁于《傷寒論》中的"麻杏石膏湯"，由麻黃，杏仁，石膏，羚羊角，牛蒡子，牛黃，葶藶子，地龍等組成，其具有清熱、宣肺、平喘之功用。清肺消炎丸是天津中新藥業(yè)達(dá)仁堂制藥廠于80年代和天津著名老中醫(yī)王士福教授、天津中醫(yī)學(xué)院陰斌教授共同研制開發(fā)的品種，現(xiàn)為達(dá)仁堂獨(dú)家生產(chǎn)品種。收載于《中國藥典》05版一部，為國家中藥保護(hù)品種、國家基本藥物、OTC甲類品種、醫(yī)保目錄產(chǎn)3品。清肺消炎丸的制備方法在已授權(quán)專利中公開，該專利授權(quán)號(hào)為ZL200310119372.8?，F(xiàn)代研究表明麻黃、牛黃、地龍、石膏等藥具有明顯的抗菌、抗病毒作用，羚羊角、杏仁、葶藶子也有良好的解熱、抗菌、消炎效果。最新研究表明，牛黃能有效降低細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性，增加細(xì)菌對(duì)抗生素的敏感性，對(duì)病因不明或者對(duì)抗生素已產(chǎn)生耐藥性的及肝、腎功能較差的人群，更安全，可根據(jù)不同年齡選擇適當(dāng)用量。其主要功能是清肺化痰，止咳平喘。用于痰熱陰肺，咳嗽氣喘，胸脅脹痛，吐痰黃稠，上呼吸道感染、急性支氣管炎和慢性支氣管炎的急性發(fā)作，以及肺部感染引起的咳嗽痰稠、喘息氣急等癥屬熱象者。本發(fā)明人進(jìn)一步的藥理實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)清肺消炎丸在治療慢性阻塞性肺疾病，特別是急性發(fā)作期方面具有顯著的治療效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，如何通過現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)，研究清肺消炎丸在治療慢性阻塞性肺疾病藥物方面的應(yīng)用。特別是在制備治療慢性阻塞性肺疾病急性加重期藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明先后完成了清肺消炎丸在治療慢性阻塞性肺疾病方面的藥理實(shí)驗(yàn)，及臨床實(shí)驗(yàn)。下面是研究方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一、實(shí)驗(yàn)背景COPD是以慢性炎癥以及炎癥性損傷和修復(fù)造成氣道和血管壁重塑為基本病理特征，進(jìn)而引起慢性氣流受限或受阻的一類疾病。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)氣道和肺部炎癥、氧化/抗氧化、肺組織結(jié)構(gòu)重塑等多個(gè)角度，探討清肺消炎丸對(duì)COPD大鼠的作用機(jī)制。二、實(shí)驗(yàn)總體進(jìn)度(1)天津中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供清潔級(jí)Wistar大鼠60只，并適應(yīng)喂養(yǎng)7天。其中有3只死亡，考慮為不能適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件或由于運(yùn)輸途中不當(dāng)而死。(2)熏香煙加氣管滴入內(nèi)毒素法進(jìn)行造模。7月5、19號(hào)分別進(jìn)行氣管滴入內(nèi)毒素，當(dāng)日不予被動(dòng)吸煙。其余時(shí)間每組大鼠在染毒箱內(nèi)被動(dòng)吸煙，每天0.5h。其中有14只大鼠死亡，其中5只考慮死亡是由于在硬式鼻腔鏡引導(dǎo)下進(jìn)行氣管內(nèi)滴入內(nèi)毒素時(shí)，通過聲門時(shí)，操作不當(dāng)，窒息而死；其中4只是因?yàn)樵谝颐崖樽磉^量而致死；其中5只在熏香煙過程中，由于煙霧濃度過大，結(jié)合大鼠自身個(gè)體差異，缺氧窒息而死。(3)除對(duì)照組外，其余各組以上述方法造成COPD模型；清肺消炎丸組藥物用量為L56g/kg;氨茶堿組藥物用量為31.25mg/kg;模型組和對(duì)照組分別灌服0.9%生理鹽水。各實(shí)驗(yàn)組給藥體積均為lml/100g體重，每天給藥一次，連續(xù)給藥1周。在灌胃過程中，由于大鼠在造模成功后，體質(zhì)下降，接受外界強(qiáng)刺激能力減弱或由于操作不當(dāng)，死亡3只。(4)在造模成功并連續(xù)灌藥7天后，進(jìn)行取材。用1096水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，制備血清。在腹主動(dòng)脈取血后，大鼠放血致死，暴露出氣管，迅速打開胸腔，向兩側(cè)肺緩慢注入4%多聚甲醛溶液5ml左右，分別結(jié)扎左、右主支氣管,灌注固定完畢后迅速將肺組織離體。三、材料與方法1.材料天津中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供清潔級(jí)Wistar大鼠60只，并適應(yīng)喂養(yǎng)7天。其中有3只死亡，考慮為不能適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件或由于運(yùn)輸途中不當(dāng)而死。內(nèi)毒素(美國Sigma公司)；大前門牌過濾嘴香煙(上海巻煙廠生產(chǎn))；清肺消炎丸(天津市達(dá)仁堂制藥廠提供)抗顧P-9、MMP-2和TIMP-1單克隆抗體及SP試劑盒，兔抗鼠TNF-a、兔抗鼠LN、SABC試劑盒、DAB顯色試劑盒(棕黃色)，均為武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)。OLYMPUSCX—31顯微鏡為日本OLYMPUS光學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。JVC數(shù)碼相機(jī)為日本JVC公司生產(chǎn)。HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)由武漢千屏影像技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。S0D、GHS、MDA試劑盒由天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。2.動(dòng)物分組將清潔級(jí)Wistar雄性大鼠(250g-300g)40只隨機(jī)分為空白組、模型組、清肺消炎丸組和氨茶堿組，每組各IO只。3.COPD大鼠動(dòng)物模型的建立及取材采用熏香煙加氣管注內(nèi)毒素法制造COPD大鼠模型。除正常對(duì)照組呼吸正?？諝馔猓渌鹘M大鼠每天上午在自制的54L密閉箱內(nèi)熏體積分?jǐn)?shù)為0.05的大前門牌香煙霧50.5h。在實(shí)驗(yàn)開始第1天和第14天時(shí)，各組大鼠均用乙醚麻醉，除正常對(duì)照組在硬式鼻腔鏡引導(dǎo)下經(jīng)聲門緩慢滴入200u1生理鹽水外，其它各組大鼠均經(jīng)上方式氣道內(nèi)緩慢注入200y1內(nèi)毒素水溶液(lmg/ml)，當(dāng)日不予被動(dòng)吸煙。連續(xù)熏煙四周后，造成慢性阻塞性肺疾病模型。3.1給藥方法及劑量各組動(dòng)物以灌胃方法給藥。清肺消炎丸組藥物用量為1.56g/kg;氨茶堿組藥物用量為31.25mg/kg;模型組和對(duì)照組分別灌服0.9%生理鹽水。各實(shí)驗(yàn)組給藥體積均為lml/100g體重，每天給藥一次，連續(xù)給藥1周動(dòng)物給藥劑量參照動(dòng)物與人體的每公斤體重劑量折算系數(shù)表已知A種動(dòng)物每kg體重用藥量，欲估算B種動(dòng)物每kg體重用藥劑量時(shí)，找出折算系數(shù)(W)，再按下式計(jì)算-B種動(dòng)物的劑量(mg/kg)-WXA種動(dòng)物的劑量(mg/kg)3.2取材方法第36天以1(^水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，制備血清待測。在腹主動(dòng)脈取血后，暴露出氣管，迅速打開胸腔，向兩側(cè)肺緩慢注入4%多聚甲醛溶液5ml左右，分別結(jié)扎左、右主支氣管,灌注固定完畢后迅速將肺組織離體，中性福爾馬林固定48h。四、檢測指標(biāo)1.記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況2.肺組織病理學(xué)觀察(HE染色，光鏡觀察)3.肺部炎癥的指標(biāo):大鼠肺組織TNF-a(免疫組化方法)；4.肺組織重塑指標(biāo)大鼠肺組織MMP-9、TIMP-1、MMP-2、LN、TGF-Pl(免疫組化方法)；5.大鼠血清中氧化/抗氧化指標(biāo)血清中SOD、GSH。五、結(jié)果1.一般情況正常組大鼠體肥，反映敏捷，好活動(dòng)，皮毛有光澤。造模各組大鼠神情倦怠，喜蜷縮，皮毛無光澤且活動(dòng)能力下降。造模各組大鼠于第三天的時(shí)候開始有咳嗽，口鼻潮濕等。在造模過程中，大鼠出現(xiàn)咳嗽，呼吸困難、喉間哮鳴音，喜靜少動(dòng)，強(qiáng)剌激活動(dòng)后可見上述喘咳癥狀加重。喂藥后，清肺消炎丸組可見氣喘、咳嗽減輕，以及口鼻分泌物減少。氨茶堿組亦可見喘咳癥狀減輕。實(shí)驗(yàn)前四組體重?zé)o明顯差異(空白組(303土14)g、模型組(300±9)g、清肺消炎丸組(395土8)g,氨茶堿組(298±9)g,組間兩輛比較P〉0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)，造模后模型組(320±12)g、清肺消炎丸組(306±16)g、氨茶堿組(307±23)g組體重明顯低于正常對(duì)照組(349±32),模型組、清肺消炎丸組、氨茶堿組分別與空白組兩兩比較，P〈0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；模型組、清肺消炎丸組、氨茶堿組三組之間兩兩比較，P〉0.05,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.肺組織學(xué)觀察正常對(duì)照組(圖2)呼吸道及肺泡結(jié)構(gòu)正常，支氣管纖毛排列整齊，肺泡結(jié)構(gòu)完整，無氣腫及少許炎癥。COPD模型組(圖1)可見肺泡腔明顯擴(kuò)大、間隔變窄、肺泡壁斷裂、擴(kuò)張的肺泡融合成較大的囊腔，呈明顯的肺氣腫改變；血管腔充血，肺間質(zhì)及氣道管壁炎性細(xì)胞浸潤;肺間質(zhì)及血管旁均可見大量吞噬了煙塵顆粒的AM,部分AM崩解破壞；成纖維細(xì)胞明顯增加，可見小氣道平滑肌增殖、管腔狹窄以及血管壁增厚等結(jié)構(gòu)重塑。氨茶堿組(圖3)仍見有大量炎癥細(xì)胞的浸潤；清肺消炎丸組(圖4)用藥后可見明肺部炎癥較模型組有明顯的改善。3.肺部炎癥的指標(biāo)大鼠肺組織TNF-a。HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)分析顯示TNF-a蛋白在正常對(duì)照組肺組織中僅見微量的表達(dá)，在模型組的肺組織中可見到強(qiáng)陽性表達(dá)。模型組肺組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常對(duì)照組，但清肺消炎丸組明顯弱于模型組；氨茶堿組大鼠肺組織中表達(dá)可見強(qiáng)陽性。表l.大鼠肺組織TNF-a陽性細(xì)胞的平均吸光度值<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與空白組比*P〈0.05;與模型組比，AP〈0.054.肺組織重塑指標(biāo)4.1大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶-9(醒P-9)的檢測結(jié)果HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)分析顯示MMP-9在正常對(duì)照組肺組織中僅見微量的表達(dá)，在模型組的肺組織中可見到強(qiáng)陽性表達(dá)。模型組肺組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常對(duì)照組，但清肺消炎丸組明顯弱于模型組；氨茶堿組大鼠肺組織中表達(dá)可見強(qiáng)陽性。4.2大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)的檢測結(jié)果HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)分析顯示TIMP-1在正常對(duì)照組肺組織中僅見微量的表達(dá)，在模型組的肺組織中可見到強(qiáng)陽性表達(dá)。模型組肺組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常對(duì)照組，但清肺消炎丸組明顯弱于模型組；氨茶堿組大鼠肺組織中表達(dá)可見弱陽性。表2.大鼠肺組織應(yīng)P-9、TIMP-l陽性細(xì)胞的平均吸光度值<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白組比*P<0.05;與模型組比，△P<0.05;ti即-1中清肺消炎組與氨茶堿組相比P=0.052:無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4.3大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的檢測結(jié)果HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)分析顯示MMP-2在正常對(duì)照組肺組織中僅見微量的表達(dá)，在模型組的肺組織中可見到強(qiáng)陽性表達(dá)。模型組肺組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常對(duì)照組，但清肺消炎丸組明顯弱于模型組；氨茶堿組大鼠肺組織中表達(dá)可見強(qiáng)陽性。表3.大鼠肺組織MMP-2陽性細(xì)胞的平均吸光度值分組平均吸光度值MMP-2LN正常對(duì)照組.模型組清肺消炎組氨茶堿組0.0949±0.00740.IOII土O.0144*0.0950±0.0119厶0.0987±0.01960.1061±0.04340.1568±0.0022*0.0876±0.0232A0.0965±0.0402A注與空白組比*P〈0.05;與模型組比，AP〈0.05;4.4大鼠肺組織層粘連蛋白(LN)的檢測結(jié)果-HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)分析顯示LN蛋白在正常對(duì)照組肺組織中僅見微量的表達(dá)，在模型組的肺組織中可見到強(qiáng)陽性表達(dá)。模型組肺組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常對(duì)照組，但清肺消炎丸組明顯弱于模型組，氨茶堿組大鼠肺組織中表達(dá)可見弱陽性。4.5大鼠血清中的TGF-P1檢測結(jié)果表4.各組大鼠血清中TGF-Pl的檢測值分組放免法檢測值TGF-P1正常對(duì)照組18.5073±8.8695模型組U.4884土3.1480A清肺消炎組15.9936±1.6207氨茶堿組16.3882±3.1636與空白組比，厶P〈0.05:清肺消炎組與模型組比P〉0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.大鼠血清中氧化/抗氧化指標(biāo)血清中S0D、GSH。表5.各組大鼠血清中SODGSH的檢測值分組放免法檢測值SODGSH正常對(duì)照組模型組清肺消炎組氨茶堿組1.5370±0.10931.3908±0.21641.5026±0.17641.4790±0.16578,3539±2.30548.9435±0.98259.4201±1.15037.8142±1.5759S0D模型與空白組P〉0.05，清肺與模型組P〉0.05;GSH模型與空白組P〉0.05，清肺與模型組P>0.05;六、討論1.TNF-a在COPD氣道慢性炎癥的發(fā)生和發(fā)展中的重要地位已獲得公認(rèn)。其在整個(gè)9下呼吸道炎癥過程中扮演一個(gè)十分重要的角色。C0PD大鼠模型肺組織中TNF-ci水平明顯高于正常對(duì)照組(P〈0.05),提示該細(xì)胞因子與COPD氣道炎癥及其病理改變密切相關(guān)。清肺消炎丸組可降低肺組織中TNF-a水平，表明該藥具有一定的抑制COPD氣道及肺部炎癥的作用。2.基質(zhì)金屬蛋白酶-9(醒P-9)及組織型抑制因子(TIMP-1)的動(dòng)態(tài)平衡，目前被認(rèn)為是反映氣道組織破壞與修復(fù)動(dòng)態(tài)平衡的標(biāo)志。MMP_9即明膠酶B，其主要作用為降解彈力纖維、明膠、及IV、V型膠原。其參與COPD的發(fā)病機(jī)制主要是通過破壞肺泡基質(zhì)成分,使肺泡結(jié)構(gòu)破壞,形成肺氣腫及參與氣道重塑而導(dǎo)致氣流阻塞。MMP-2即明膠酶A主要降解彈力纖維、纖維連接素及I、IV、V、VD型膠原等，麗P-2的增多使氣道結(jié)構(gòu)細(xì)胞失去正常的支撐作用。LN是基底膜透明層特異的結(jié)合蛋白，是細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的主要組成部分之一，其作用是固定上皮、內(nèi)皮和肌肉并支持其生長。LN顯著增高,表明有過多的LN生成并沉積于肺組織，同時(shí)釋放入血和支氣管上皮襯液,參與上皮和內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)和過度增生。細(xì)胞外基質(zhì)破壞和修復(fù)常常維持平衡，一旦平衡打破即出現(xiàn)病理狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)本研究結(jié)果表明，COPD大鼠模型肺組織中畫P-9、應(yīng)P-2、TIMP-1及LN的水平明顯高于正常對(duì)照組(陽性細(xì)胞平均值P〈0.05)，提示蛋白酶/抗蛋白酶系統(tǒng)及細(xì)胞外基質(zhì)與了COPD病理改變密切相關(guān)，且模型組MMP-9/TIMP-1比例明顯低于正常對(duì)照組。清肺消炎丸組可降低肺組織中MMP-9、MMP-2、TIMP-1及LN水平，改善MMP-9/TIMP-1比例失衡，表明該藥具有調(diào)節(jié)蛋白酶/抗蛋白酶，抑制細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積，改善氣道重塑的作用。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在C0PD模型大鼠血清中TGF-P1，較空白對(duì)照組略有下降的趨勢，可能是由于COPD急性發(fā)作期細(xì)胞外基質(zhì)降解作用加強(qiáng)，作為機(jī)體的應(yīng)激反饋導(dǎo)致TGF-P1消耗過多，而出現(xiàn)模型組TGF-ei出現(xiàn)下降，但在清肺消炎丸組可以發(fā)現(xiàn)TGF-Pl較模型組有增長趨勢，但未超過正常對(duì)照組，該結(jié)果可能提示清肺消炎丸在調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子水平，促進(jìn)成纖維細(xì)胞合成和分泌膠原,抑制膠原的降解方面有一定的作用。3.氧化/抗氧化失衡是造成COPD慢性肺部損傷的重要原因之一。煙霧中的氧自由基及炎癥細(xì)胞所釋放的活性氧(ROS)等氧化物可刺激氣道上皮細(xì)胞分泌高分子量的復(fù)合糖,減弱黏膜功能；增強(qiáng)內(nèi)皮滲通性,減弱內(nèi)皮細(xì)胞的黏附性，并對(duì)肺泡II型細(xì)胞具有一定的溶解作用，同時(shí)減弱上皮細(xì)胞參與損傷后修復(fù)的能力，抑制成纖維細(xì)胞募集、增殖，減弱彈性蛋白合成與修復(fù)，影響細(xì)胞外基質(zhì)重建，最終導(dǎo)致肺氣腫的發(fā)生、發(fā)展及惡化。超氧化物歧化酶(SOD)是機(jī)體清除02-的唯一抗氧化酶，在一定程度上代表了機(jī)體的抗氧化能力，阻止COPD的發(fā)生發(fā)展。MAD為體內(nèi)不飽和脂肪酸在自由基作用下產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，它能使蛋白質(zhì)(酶類)、核酸和脂類發(fā)生交聯(lián)，使生物膜變性，細(xì)胞衰老死亡。測定MDA可反映脂質(zhì)過氧化水平，并間接反映細(xì)胞受損壞的程度。GSH是肺細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的三肽抗氧化劑，維護(hù)肺上皮細(xì)胞完整和正常功能，抵御氧化損害中發(fā)揮關(guān)鍵作用，對(duì)抗氧化應(yīng)激、維持前體等細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)穩(wěn)定有重要意義。轉(zhuǎn)化生長因子是一種具有廣泛調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化功能的細(xì)胞生長因子，具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、纖維蛋白原合成及免疫抑制作用并能促進(jìn)成纖維細(xì)胞合成和分泌膠原，抑制膠原的降解，從而在慢阻肺氣道重塑中扮演重要角色。本實(shí)驗(yàn)本研究結(jié)果表明，C0PD大鼠模型血清中S0D水平低于正常對(duì)照組(P〉0.05)，但其具有降低趨勢。提示在C0PD急性發(fā)作期存在著抗氧化物參與疾病發(fā)生及發(fā)展過程。清肺消炎丸組血清中S0D水平較模型組有增高趨勢;血清中GSH作為體內(nèi)重要的抗氧化劑，COPD模型組較空白對(duì)照組(P>0.05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但從柱狀圖中可以發(fā)現(xiàn)有模型組中有增加趨勢，可能是機(jī)體在氧化應(yīng)激環(huán)境下做出的反饋性應(yīng)答，而且在清肺消炎丸的治療組中，增加趨勢更顯明顯，說明清肺消炎丸在增加S0D、GSH抗氧化方面有一定的潛力性作用。圖1為COPD模型組；圖2為正常對(duì)照組；圖3為氨茶堿組；圖4為清肺消炎丸組。具體實(shí)施例方式為了簡單和清楚的目的，下文恰當(dāng)?shù)氖÷粤斯夹g(shù)的描述，以免那些不必要的細(xì)節(jié)影響對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的描述。其中清肺消炎丸的制備方法參見ZL200310119372.8。實(shí)施例l下面是清肺消炎丸用于臨床上治療C0PD急性發(fā)作期患者30例的作用機(jī)制、方法與臨床結(jié)果(一)試驗(yàn)設(shè)計(jì)本試驗(yàn)采用隨機(jī)、雙盲、復(fù)合對(duì)照的臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，開展多中心臨床研究。試驗(yàn)中注意隨機(jī)方法的隱藏，用SAS統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)PROCPLAN過程語句，給定種子數(shù)，生成隨機(jī)數(shù)字表，由與本試驗(yàn)無關(guān)的專人控制分配方案，按隨機(jī)數(shù)字表將對(duì)應(yīng)的分組代碼裝入信封，臨床醫(yī)生按順序號(hào)依次納入受試者時(shí)拆開信封，按里面的分組代碼，受試者分別進(jìn)入不同的處理組。(二)病例選擇1診斷標(biāo)準(zhǔn)1.1西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組制定的《慢性阻塞性肺疾病診治指南(2007年修訂版)》制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)和病情判定標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。1.1.l.診斷COPD的診斷應(yīng)根據(jù)臨床表現(xiàn)、危險(xiǎn)因素接觸史、體征及實(shí)驗(yàn)室檢査等資料綜合分析確定?？紤]COPD的主要癥狀為慢性咳嗽、咳痰和(或)呼吸困難及危險(xiǎn)因素接觸史；存在不完全可逆性氣流受限是診斷COPD的必備條件。肺功能測定指標(biāo)是診斷COPD的金標(biāo)準(zhǔn)。用支氣管舒張劑后FEV1/FVC〈70X可確定為不完全可逆性氣流受限。凡具有吸煙史及(或)環(huán)境職業(yè)污染接觸史及(或)咳嗽、咳痰或呼吸困難史者均應(yīng)進(jìn)行肺功能檢査。COPD早期輕度氣流受限時(shí)可有或無臨床癥狀。胸部X線檢査有助于確定肺過度充氣的程度及與其他肺部疾病鑒別。1.1.2病情判定標(biāo)準(zhǔn)表6COPD嚴(yán)重程度與嚴(yán)重程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>COPD分期:(l)急性發(fā)作期患者出現(xiàn)短期內(nèi)咳嗽、咳痰、氣短或喘息加重，痰量增多呈膿性或貓液膿性，可伴發(fā)熱等炎癥明顯加重的表現(xiàn)。(2)穩(wěn)定期患者咳嗽、咳痰、氣短等癥狀穩(wěn)定或癥狀輕微。1.2中醫(yī)痰熱壅肺證辨證標(biāo)準(zhǔn)參考《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》和《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》制定。主癥①咳嗽氣粗②痰多質(zhì)粘或稠黃次癥①或有身熱②口干欲飲③咳痰不爽④便秘⑤溲黃舌脈舌紅苔黃，脈滑數(shù)。具備以上主癥及次癥2項(xiàng)(含2項(xiàng))以上者，結(jié)合舌脈可診斷。2.納入標(biāo)準(zhǔn)①符合COPD急性發(fā)作期診斷標(biāo)準(zhǔn)，由感染因素誘發(fā)，病情屬于I、II級(jí)；②中醫(yī)辨證屬痰熱壅肺型；(D年齡在1875歲；④病程小于7天；⑤簽署知情同意書。3.排除標(biāo)準(zhǔn)①合并有肺炎、肺癌、活動(dòng)性肺結(jié)核，或其他肺部疾病者；②合并嚴(yán)重糖尿病、消化性潰瘍、肝腎及造血系統(tǒng)原發(fā)性疾??；③妊娠、準(zhǔn)備妊娠或哺乳期婦女；④對(duì)本藥過敏者。2.主要癥狀體征分級(jí)記分標(biāo)準(zhǔn)及病情程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)2.1主要癥狀體征分級(jí)記分標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《慢性阻塞性肺疾病診治指南》及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》及《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》制定。主癥(l)咳嗽輕度(2分)白天間斷咳嗽，不影響正常生活和工作。中度(4分)晝夜時(shí)有咳嗽，有時(shí)影響向生活和睡眠。重度(6分)晝夜頻繁咳嗽或陣咳，影響生活和睡眠。(2)咯痰(統(tǒng)一發(fā)放量器，痰色按照美國Heredilab公司生產(chǎn)的九級(jí)比色卡(Bronkotest)，比測患者痰的顏色，分0-8級(jí))輕度(2分)晝夜咯痰10-50ml或夜間及凌晨咯痰5-25ml,色白質(zhì)稀薄或粘。中度(4分)晝夜咯痰51-100ml或夜間及凌晨咯痰26-50ml，色白或黃質(zhì)粘。重度(6分)晝夜咯痰100ml以上或夜間及凌晨咯痰50ml以上，色黃質(zhì)粘。(3)喘促輕度(2分)偶有發(fā)生，程度輕，不影響睡眠和活動(dòng)。中度(4分)發(fā)作較頻繁，一般活動(dòng)(如穿衣、洗臉)后喘促。重度(6分)明顯動(dòng)則喘促，生活難以自理，影響睡眠和活動(dòng)。次癥(1)身熱輕度(l分)體溫《37.5'C中度(2分)體溫《38.5'C重度(3分)體溫〉38.5'C(2)口干欲飲有(0分)無(l分)(3)咳痰不爽有(0分)無(l分)(4)便秘有(0分)無(l分)(5)溲黃有(0分)無(l分)體征肺部羅音輕度(l分)雙肺偶聞及羅音。14中度(2分)雙肺散在羅音。重度(3分)雙肺聞及明顯羅音。舌脈不計(jì)分。(三)分組和治療方法納入患者30例，隨機(jī)分為2組，治療組15例、對(duì)照組15例。遵循COPD指南用藥建議制定治療方案對(duì)照組選用l種抗菌素；l種支氣管擴(kuò)張劑(e2受體激動(dòng)劑、抗膽堿藥及甲基黃嘌呤類任選l種)，沐舒坦；口服清肺消炎丸模擬劑8g，療程為7天。治療組選用l種抗菌素；l種支氣管擴(kuò)張劑(P2受體激動(dòng)劑、抗膽堿藥及甲基黃嘌呤類任選l種)，沐舒坦；口服清肺消炎丸8g,每日三次，治療療程為7天。(四)觀測指標(biāo)1.臨床證候(癥狀及體證)的觀測觀察并記錄以下證候咳嗽(頻率、時(shí)間、程度、起效時(shí)間)、咯痰(色、質(zhì)、量、起效時(shí)間)、喘息或呼吸困難(起效時(shí)間)，時(shí)間點(diǎn)為第l、4、7天。2.客觀指標(biāo)的觀測(1)一般體檢項(xiàng)目治療前后體溫，血、尿常規(guī)化驗(yàn)；治療前心電圖、胸片。(2)肺功能檢査。(4)炎性介質(zhì)測定治療前后晨起空腹取肘正中靜脈血5ml，放入常規(guī)試管中，立即離心取血清放置一20。C以下保存，應(yīng)用ELIAS法測定血液中白介素一8(IL—8)、腫瘤壞死因子一a(TNF—a)、C反應(yīng)蛋白(CRP)醫(yī)院生化室標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行測定。(五)結(jié)果1.一般資料納入COPD患者30例，其中男性18例，女性1例。年齡4075歲。兩組患者性別、年齡分別經(jīng)卡方檢驗(yàn)和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，p〉0.05,無顯著性差異。證明兩組患者一般資料具有可比性。表7兩組患者性別、年齡比較表<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>對(duì)照組1510561.93±9.42p〉0.052.治療前兩組患者咳嗽、痰量、痰色、喘促、身熱、口干欲飲、咳痰不爽、便秘、溲黃、肺部羅音積分比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p>0.05,無顯著性差異，證明兩組患者治療前癥狀、體征(病情嚴(yán)重程度)無明顯差異，具有可比性。3.兩組患者中間訪視點(diǎn)(4天)癥狀、體征比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)無明顯差異，數(shù)據(jù)表格略。4.兩組患者終點(diǎn)訪視點(diǎn)(7天)癥狀、體征比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)無明顯差異，數(shù)據(jù)表格略。5.治療組基線與中間訪視點(diǎn)咳嗽、身熱、咳痰不爽、便秘、總積分比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p〈0.05，具有顯著性差異。痰量、痰色、喘促、口干欲飲、溲黃、肺部羅音比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p〉0.05，無顯著性差異。6.對(duì)照組基線與中間訪視點(diǎn)咳嗽、痰色比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p<0.05，具有顯著性差異。痰量、喘促、身熱、口干欲飲、咳痰不爽、便秘、溲黃、肺部羅音積分比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p>0.05，無顯著性差異。7.治療組基線與終點(diǎn)訪視點(diǎn)咳嗽、痰量、痰色、喘促、身熱、口干欲飲、咳痰不爽、肺部羅音、總積分比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p<0.05，具有顯著性差異。便秘、溲黃積分比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p>0.05，無顯著性差異。8.對(duì)照組基線與終點(diǎn)訪視點(diǎn)咳嗽、痰量、痰色、口干欲飲、肺部羅音、總積分比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p〈0.05,具有顯著性差異。喘促、身熱、咳痰不爽、便秘、溲黃積分比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)，p〉0.05,無顯著性差異。(六)小結(jié)1.經(jīng)過3天治療，使用清肺消炎丸的治療組患者咳嗽、身熱、咳痰不爽、便秘及證候總積分明顯優(yōu)于治療前；而未使用清肺消炎丸的對(duì)照組只有咳嗽、痰色優(yōu)于治療前。此結(jié)果表明，清肺消炎丸在COPD早期應(yīng)用以改善咳嗽、痰粘難出、發(fā)熱及便秘等癥狀上具有明顯優(yōu)勢，同時(shí)上述癥狀的改善恰恰符合COPD急性發(fā)作期患者對(duì)緩解癥狀、提高生活質(zhì)量的心理預(yù)期。2.經(jīng)過7天治療，兩組患者大多數(shù)癥狀、體征得到有效緩解，但使用清肺消炎丸的治療組在喘促、身熱等COPD發(fā)作期關(guān)鍵癥狀的緩解上具有顯著性差異，而未使用清肺16消炎丸的對(duì)照組上述關(guān)鍵癥狀緩解不明顯，表明在AECOPD的治療中，加用清肺消炎丸可以更快、更好的緩解臨床關(guān)鍵癥狀。在詳細(xì)說明的較佳實(shí)施例之后，熟悉該項(xiàng)技術(shù)人士可清楚地了解，在不脫離上述申請(qǐng)專利范圍與精神下可進(jìn)行各種變化與修改，凡依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍。且本發(fā)明亦不受說明書中所舉實(shí)例實(shí)施方式的限制。權(quán)利要求1、清肺消炎丸在制備治療慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用。2、清肺消炎丸在制備治療慢性阻塞性肺疾病急性加重期藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了中藥清肺消炎丸在治療慢性阻塞性肺疾病急性加重期藥物中的應(yīng)用。通過現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明，清肺消炎丸可用于慢性阻塞性肺疾病的治療。臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明使用清肺消炎丸的治療組患者咳嗽、身熱、咳痰不爽、便秘及證候總積分明顯優(yōu)于治療前；而未使用清肺消炎丸的對(duì)照組只有咳嗽、痰色優(yōu)于治療前。結(jié)果表明，清肺消炎丸在COPD早期應(yīng)用以改善咳嗽、痰粘難出、發(fā)熱及便秘等癥狀上具有明顯優(yōu)勢，同時(shí)上述癥狀的改善恰恰符合COPD急性發(fā)作期患者對(duì)緩解癥狀、提高生活質(zhì)量的心理預(yù)期。文檔編號(hào)A61K33/06GK101524424SQ200910068559公開日2009年9月9日申請(qǐng)日期2009年4月22日優(yōu)先權(quán)日2009年4月22日發(fā)明者彤劉,劉恩順,孫增濤,孫寶珍,榮子丹,晨趙,風(fēng)邵,歆鄭,金兆祥,魏葆林申請(qǐng)人:天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠