專利名稱：具有免疫增強(qiáng)作用的獸用復(fù)方刺五加顆粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種具有免疫增強(qiáng)作用的獸用復(fù)方刺五加 顆粒，同時涉及一種該顆粒的制備方法。
背景技術(shù)：
養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，很大程度上得益于科技的進(jìn)步，但同時也帶來了隱患。 科技的進(jìn)步使養(yǎng)殖業(yè)向集約化和工廠化發(fā)展，畜禽對病原微生物的易感性增加， 病害頻繁發(fā)生，并造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。為了防治疾病，傳統(tǒng)的做法就是大量 使用藥物，譬如抗生素作為藥物添加劑使用的結(jié)果使耐藥菌株不斷增多，疾病 難以控制，畜禽免疫功能急劇下降。使畜禽生長受阻，特別是淋巴細(xì)胞、巨噬 細(xì)胞等免疫細(xì)胞長期處于低迷或抑制狀態(tài)，增加了病毒、細(xì)菌性疾病、霉形體、 寄生蟲病的易感性，可使低致病性的病原體引起多種疾病綜合癥的發(fā)生，甚至 達(dá)到難以控制的程度，還導(dǎo)致疫苗接種反應(yīng)增強(qiáng)，副作用加大或使免疫接種失 敗。商業(yè)雞群中免疫抑制性病毒共同感染的現(xiàn)象也比較普遍，馬立克氏病和雞
傳染性貧血病(分別占總檢測病例的10.02%)混感時有發(fā)生，二重、三重、四重 混合感染的陽性率分別合計達(dá)21.71%、 7.79%、 2.23%,總計為31. 73%。因此， 提高動物免疫細(xì)胞的活性，增強(qiáng)機(jī)體對各種病原體的抵抗能力顯得至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有免疫增強(qiáng)作用的獸用復(fù)方剌五加顆粒。 本發(fā)明的另一 目的是提供一種獸用復(fù)方刺五加顆粒的制備方法。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案 一種具有免疫增強(qiáng)作用的獸 用復(fù)方刺五加顆粒，由以下重量百分比的中藥原料制成70 60%的刺五加和余量的黃芪，每100g顆粒劑含原生藥100g。
由以下重量百分比的中藥原料制成70%的刺五加和30%的黃芪。 一種獸用復(fù)方刺五加顆粒的制備方法，包括以下步驟
(1)按比例取刺五加和黃芪，除去雜質(zhì)，混合后置于多功能提取濃縮機(jī)組
中，進(jìn)行兩次提取，第一次以兩種藥材7 10倍量水進(jìn)行《70'C低溫真空動態(tài) 提取濃縮，煎煮2 4小時，收集濃縮液；第二次以兩種藥材5 8倍量水進(jìn)行 《7(TC低溫真空動態(tài)提取濃縮，煎煮1.5 3小時，將兩次濃縮液混合，混合藥 液濃縮至7(TC熱測相對密度為1.15 1.20的清膏，清膏經(jīng)醇沉，過濾至澄清， 過濾液回收乙醇后備用；
(2 )向過濾液中加入顆粒劑常規(guī)輔料進(jìn)行制粒即可。 所述顆粒劑常規(guī)輔料為蔗糖和糊精。
本發(fā)明中，刺五加固本為主，黃芪益氣為輔。刺五加為扶正固本之良藥， 擅長益氣健脾，補(bǔ)腎安神，為補(bǔ)藥中之良品。黃芪為升陽補(bǔ)氣之良藥，擅長于 補(bǔ)益中土，溫養(yǎng)脾胃，強(qiáng)壯營衛(wèi)，利水消腫。兩藥相伍，相須為用，共收健脾 胃，利水濕，益氣血，強(qiáng)營衛(wèi)之功，協(xié)同增效，可增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗應(yīng)激的 功效。本發(fā)明具有如下積極效果本發(fā)明所產(chǎn)生的復(fù)方刺五加顆粒劑穩(wěn)定性和 安全性都很好，臨床主要用于增強(qiáng)疫苗免疫效果、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗應(yīng)激的 功效，用于治療雞及其他畜禽的各種免疫抑制性疾病，增強(qiáng)疫苗的免疫效果； 治療由運(yùn)輸、轉(zhuǎn)群、氣候突變等引起的免疫力低下，食欲下降等癥。臨床試驗(yàn) 結(jié)果表明，給雞自由飲水復(fù)方刺五加顆粒，與雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián) 滅活疫苗聯(lián)用，連用5-7天，能夠提高雞及其他畜禽的免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體抗
病力，增強(qiáng)其抗應(yīng)激能力。
以下為本發(fā)明復(fù)方刺五加顆粒的試驗(yàn)研究情況
一、主要研究結(jié)果綜述 1、藥學(xué)研究按本發(fā)明的工藝以標(biāo)準(zhǔn)處方10倍量中試生產(chǎn)出的樣品成品質(zhì)量與小試生產(chǎn)
的"復(fù)方刺五加顆粒"在收率上無明顯差別，在成品質(zhì)量指標(biāo)上無明顯差別，均符 合該顆粒劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定，說明復(fù)方刺五加顆粒適合大工業(yè)生 產(chǎn)。
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)下根據(jù)《中華人民共和國獸藥典》以紫丁香酚苷和黃芪甲
苷為指標(biāo)成分進(jìn)行定性鑒別；同時嚴(yán)格控制并檢測制劑的粒度、水分、溶化性 等項(xiàng)目。
穩(wěn)定性試驗(yàn)中加速試驗(yàn)6個月各項(xiàng)指標(biāo)仍符合規(guī)定。經(jīng)本品的穩(wěn)定性試驗(yàn) 結(jié)果顯示鋁箔袋能保證藥品不被外界污染并且不與藥品發(fā)生作用。
2、 藥理毒理研究結(jié)果
以免疫增強(qiáng)的藥效學(xué)和抗應(yīng)激指標(biāo)為評判指標(biāo)，對方劑進(jìn)行拆方研究，篩 選黃芪和刺五加的最佳配比。復(fù)方剌五加顆粒劑各個組方(70%、 65%、 60%的刺 五加和余量的黃芪)對小鼠的免疫功能和抗應(yīng)激功能均有增強(qiáng)作用，且以7:3比 例最佳。
復(fù)方刺五加顆粒劑的安全藥理研究結(jié)果表明復(fù)方刺五加顆粒0.2 0.8g生 藥/kg"bw體重時，對小鼠的一般行為、協(xié)調(diào)運(yùn)動及自主活動亦無明顯作用，表 明本品常規(guī)劑量對心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)均無明顯影響。在臨床上 應(yīng)用是安全的。
急性毒理試驗(yàn)結(jié)果表明小鼠灌胃給藥復(fù)方刺五加顆粒的LD5()>160g生藥 /kg，根據(jù)毒物毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，本品對小鼠實(shí)際無毒。
3、 臨床研究結(jié)果
河南新正好生物工程有限公司委托河南省獸藥工程技術(shù)研究中心進(jìn)行復(fù)方 刺五加顆粒劑的靶動物安全性試驗(yàn)，結(jié)果，在臨床用藥的3倍量和5倍量，試 驗(yàn)動物生理狀態(tài)、精神狀態(tài)及病理剖檢與對照組相比均無異常情況發(fā)生。 二、評價
5藥學(xué)試驗(yàn)、藥理毒理試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方刺五加顆粒具有安全、 有效、質(zhì)量可控的特點(diǎn)，分述如下
1、 安全性 1.1毒性試驗(yàn)
河南新正好生物工程有限公司委托河南省獸藥工程技術(shù)研究中心對本發(fā)明 復(fù)方刺五加顆粒的安全性進(jìn)行研究。急性毒性試驗(yàn)研究中，以本發(fā)明復(fù)方刺五 加顆粒劑給小鼠灌胃，預(yù)試驗(yàn)中每鼠80g (生藥)/kg給藥劑量組均未見異常， 一日最大耐受量為160 (生藥)g/kg。相當(dāng)于臨床使用量的85倍。 1.2臨床安全性試驗(yàn)
河南新正好生物工程有限公司委托河南省獸藥工程技術(shù)研究中心進(jìn)行本發(fā) 明復(fù)方刺五加顆粒劑的臨床安全性試驗(yàn)，結(jié)果，在臨床用藥的3倍量和5倍量 口服，試驗(yàn)動物飲食體重均正常沒有明顯的刺激反應(yīng)。
2、 有效性
為探討本發(fā)明復(fù)方刺五加顆粒的臨床作用，河南新正好生物工程有限公司 與河南獸藥工程技術(shù)研究中心共同進(jìn)行了復(fù)方刺五加顆粒的臨床研究。結(jié)果表 明能提高雞傳染性支氣管炎血清抗體效價，增強(qiáng)其免疫保護(hù)作用，增強(qiáng)其抗應(yīng) 激能力。其效果優(yōu)于黃芪多糖口服液。
具體實(shí)驗(yàn)方法如下
選擇14日齡健康SPF雞300只，試驗(yàn)隨機(jī)分為6組，l組為疫苗對照組，2 組為本發(fā)明復(fù)方刺五加顆粒低劑量組，3組為本發(fā)明復(fù)方刺五加顆粒中劑量組， 4組為本發(fā)明復(fù)方刺五加顆粒高劑量組，5組藥物對照組，6組為攻毒對照組。 試驗(yàn)分組如下 2.1試驗(yàn)分組
低劑量供試藥品組1L水0.5g顆?；祜?雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián) 滅活疫苗(La Sota株-M41株)；中劑量供試藥品組1L水lg顆?；祜?雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅 活疫苗(La Sota株-M41株);
高劑量供試藥品組1L水2g顆粒混飲+雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅 活疫苗(La Sota株-M41株)；
藥物對照組黃甚多糖口服液1. 5L水lml混飲+雞新城疫、傳染性支氣管 炎二聯(lián)滅活疫苗(La Sota株-M41株)；
疫苗對照組雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫苗(La Sota株-M41
株)；
攻毒試驗(yàn)對照組不用藥，不接種雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫 苗(La Sota株-M41株)。
自由飲水，連續(xù)7天。除攻毒試驗(yàn)對照組外，對照組和試驗(yàn)組于用藥第ld 進(jìn)行雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫苗(La Sota株-M41株)接種，每 羽皮下注射0. 3ml雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫苗(La Sota株-M41 株)接種，接種16天后，分別隨機(jī)選取試驗(yàn)組、免疫對照組、攻毒試驗(yàn)對照組 雞各50只，進(jìn)行雞傳染性支氣管炎病毒攻擊保護(hù)試驗(yàn)。攻毒后連續(xù)觀察16天， 觀察各組試驗(yàn)雞的精神、采食、飲水、糞便、呼吸等臨床情況。對病死雞立即 進(jìn)行病理剖檢。并于疫苗接種前l(fā)d和接種后第5、 15、 30d采集血樣，測定抗 體效價。 2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2.2.1攻毒對照組
雞接種雞傳染性支氣管炎病毒72h后，攻毒對照組病雞出現(xiàn)雞傳染性支氣管 炎病毒臨床癥狀。病雞出現(xiàn)出現(xiàn)明顯的咳嗽，部分雞出現(xiàn)羅音、呼吸困難等癥 狀，病雞精祌沉郁，食欲減少，對死亡雞只進(jìn)行剖檢，出現(xiàn)雞傳染性支氣管炎 典型病理變化。
病雞剖檢可見氣管下段和支氣管中有黃色干酪樣滲出物，有的氣管下段和支氣管處有環(huán)狀出血，氣囊增厚。
22.2試驗(yàn)性治療組
1 5組在給藥和接種疫苗后，與攻毒對照組比較，出現(xiàn)癥狀減輕或消失， 結(jié)果見表l。復(fù)方刺五加顆粒高、中、低及疫苗對照組對人工感染雞傳染性支氣 管炎病毒的有效率顯著高于攻毒對照組(P〈0.01);復(fù)方刺五加顆粒高、中劑量
組有效率顯著高于黃芪多糖口服液組和復(fù)方刺五加顆粒低劑量組(P〈0. 01);復(fù)
方刺五加顆粒劑高、中劑量組的有效率無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0. 05)。
表1雞傳染性支氣管炎強(qiáng)毒攻擊保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果組另lj治愈率％顯效率％有效率％無效率％
130306040
230407030
360401000
470301000
530508020
6000100
2.2.3復(fù)方刺五加顆粒劑對雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫苗(La Sota 株-M41株)抗體水平的影響
雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫苗(La Sota株-M41株)抗體水平 檢測結(jié)果見表2。由表2可知，在免疫接種前測得的各試驗(yàn)組以及空白對照組抗 體水平相當(dāng)，從免疫5d開始，試驗(yàn)2、 3組IHA抗體效價水平均顯著高于對照 組(P〈0.05)，而且試驗(yàn)組的抗體產(chǎn)生速度快，持續(xù)時間長。試驗(yàn)1組和對照組 差異不顯著(P〉0.05)，試驗(yàn)1、 2、 3組和黃芪多糖口服液組之間兩兩差異顯著 (P〈0. 05)，說明混飲1L水lg和2g復(fù)方刺五加顆粒劑對雞傳染性支氣管炎病毒 抗體產(chǎn)生、免疫抗病能力的提高具有明顯的促進(jìn)作用。但低劑量混飲效果增加 不明顯。
8表2復(fù)方刺五加顆粒劑對雞傳染性支氣管炎病毒抗體水平的影響
組別
IHA效價(log2)
免前
5d
15d
30d
14. 30±0. 125. 13±0. 236. 91±0. 257.20±0. 33
24. 27±0. 135.29±0. 42#7. 09±0. 31#7.43±0. 14#
34. 35±0. 186. 83±0.21*ft8, 40±0. 68*#8. 82±0. 56*
44. 20±0. 217. 60±0. 40*tt9. 00±0. 75*#9. 65土0.81*#
54. 02 ±0. 246. 63±0. 58*7. 32±0. 45*8. 75±0. 46*
注各試驗(yàn)組與對照比較，用*表示，*表示差異顯著(P〈0.05)，黃芪多糖口服 液組和試驗(yàn)組間比較，用#表示，tt表示差異顯著(P〈0.05)。 2.3結(jié)論
以治愈、顯效、有效、無效作為療效判定標(biāo)準(zhǔn)，觀察攻毒后病雞的臨床癥 狀變化，對病死雞進(jìn)行剖檢和病毒分離鑒定，并計算有效率和治愈率。結(jié)果表 明本發(fā)明復(fù)方刺五加顆粒每lL水lg混飲，每lL水2g混飲，對雞新城疫、 傳染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫苗(La Sota株-M41株)有良好的免疫增強(qiáng)作用， 與其它用藥組相比，能顯著提高雞傳染性支氣管炎病毒病血清的抗體水平 (p〈0.0D，增強(qiáng)其免疫保護(hù)作用，可以提高雞傳染性支氣管病毒病血清抗體效 價，提高動物機(jī)體抗應(yīng)激能力。
以上臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，給雞自由飲水復(fù)方刺五加顆粒，與雞新城疫、傳 染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫苗聯(lián)用，連用5-7天，能夠提高雞的免疫功能，增強(qiáng) 機(jī)體抗病力，增強(qiáng)其抗應(yīng)激能力。
因此臨床推薦復(fù)方刺五加顆粒按每1L水lg混飲，與疫苗聯(lián)用，連用7天， 可以提高動物機(jī)體的免疫力，增強(qiáng)其抗應(yīng)激能力，提高疫苗的免疫保護(hù)力。 3、質(zhì)量可控性 3.1質(zhì)量研究按照《中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的技術(shù)要求》對復(fù)方刺五加顆粒進(jìn)行了外觀 性狀的鑒別，并按《中華人民共和國獸藥典》附錄對性狀、鑒另U、粒度、水分、 溶化性進(jìn)行考察。
3.2穩(wěn)定性試驗(yàn)
按照《獸用中藥、天然產(chǎn)物穩(wěn)定性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》和《獸藥穩(wěn)定性試 驗(yàn)技術(shù)規(guī)范(試行)》。加速試驗(yàn)6個月和長期穩(wěn)定性試驗(yàn)2年各項(xiàng)指標(biāo)仍符合 規(guī)定，長期穩(wěn)定試驗(yàn)還在繼續(xù)進(jìn)行。穩(wěn)定性試驗(yàn)表明本品具有良好的穩(wěn)定性。
上述研究結(jié)果表明復(fù)方刺五加顆粒劑的質(zhì)量是可控的。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:所用中藥原料70kg刺五加和30kg黃貧，制備成品顆粒劑100kg。 制備方法，包括以下步驟
(1) 稱取70kg刺五加和30kg黃芪，除去雜質(zhì)，混合后置于多功能提取濃 縮機(jī)組中，進(jìn)行兩次提取，第一次以兩種藥材10倍量水進(jìn)行7(TC低溫真空動態(tài) 提取濃縮，煎煮4小時，收集濃縮液；第二次以兩種藥材8倍量水進(jìn)行7(TC低 溫真空動態(tài)提取濃縮，煎煮3小時，將兩次濃縮液混合，混合藥液濃縮至7(TC 熱測相對密度為1.15的清膏，清膏經(jīng)醇沉，過濾至澄清，過濾液回收乙醇后備 用；
(2) 向過濾液中加入95kg蔗糖和lkg糊精進(jìn)行制粒，最終制得100kg顆粒。
實(shí)施例2:所用中藥原料60kg刺五加和40kg黃茛，制備成品顆粒劑100kg。
制備方法，包括以下步驟 (1)稱取60kg刺五加和40kg黃芪，除去雜質(zhì)，混合后置于多功能提取濃 縮機(jī)組中，進(jìn)行兩次提取，第一次以兩種藥材7倍量水進(jìn)行7(TC低溫真空動態(tài) 提取濃縮，煎煮2小時，收集濃縮液;第二次以兩種藥材5倍量水進(jìn)行7(TC低 溫真空動態(tài)提取濃縮，煎煮1.5小時，將兩次濃縮液混合，混合藥液濃縮至70。C熱測相對密度為1.20的清膏，清膏經(jīng)醇沉，過濾至澄清，過濾液回收乙醇后 備用；
(2)向過濾液中加入90kg蔗糖和2kg糊精進(jìn)行制粒，最終制得100kg顆粒。
實(shí)施例3:所用中藥原料65kg刺五加和35kg黃芪，制備成品顆粒劑100kg。 制備方法，包括以下步驟-
(1) 稱取65kg刺五加和35kg黃芪，除去雜質(zhì)，混合后置于多功能提取濃 縮機(jī)組中，進(jìn)行兩次提取，第一次以兩種藥材8倍量水進(jìn)行7(TC低溫真空動態(tài) 提取濃縮，煎煮3小時，收集濃縮液；第二次以兩種藥材6倍量水進(jìn)行7(TC低 溫真空動態(tài)提取濃縮，煎煮2小時，將兩次濃縮液混合，混合藥液濃縮至7(TC 熱測相對密度為1.18的清膏，清膏經(jīng)醇沉，過濾至澄清，過濾液回收乙醇后備 用；
(2) 向過濾液中加入93kg蔗糖和1.5kg糊精進(jìn)行制粒，最終制得100kg顆粒。
ii
權(quán)利要求
1、一種具有免疫增強(qiáng)作用的獸用復(fù)方刺五加顆粒，其特征在于由以下重量百分比的中藥原料制成70～60％的刺五加和余量的黃芪，每100g顆粒劑含原生藥100g。
2、 如權(quán)利要求1所述的獸用復(fù)方刺五加顆粒，其特征在于由以下重量百分 比的中藥原料制成70%的刺五加和30%的黃芪。
3、 一種如權(quán)利要求1或2所述的具有免疫增強(qiáng)作用的獸用復(fù)方刺五加顆粒 的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1) 按比例取刺五加和黃芪，除去雜質(zhì)，混合后置于多功能提取濃縮機(jī)組 中，進(jìn)行兩次提取，第一次以兩種藥材7 10倍量水進(jìn)行《70'C低溫真空動態(tài) 提取濃縮，煎煮2 4小時，收集濃縮液；第二次以兩種藥材5 8倍量水進(jìn)行 《7(TC低溫真空動態(tài)提取濃縮，煎煮1.5 3小時，將兩次濃縮液混合，混合藥 液濃縮至70'C熱測相對密度為1.15 1.20的清膏，清膏經(jīng)醇沉，過濾至澄清， 過濾液回收乙醇后備用；(2) 向過濾液中加入顆粒劑常規(guī)輔料進(jìn)行制粒即可。
4、 如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述顆粒劑常規(guī)輔料為蔗 糖和糊精。
全文摘要
本發(fā)明提供一種具有免疫增強(qiáng)作用的獸用復(fù)方刺五加顆粒，由以下重量百分比的中藥原料制成70～60％的刺五加和余量的黃芪，每100g顆粒劑含原生藥100g。本發(fā)明所產(chǎn)生的復(fù)方刺五加顆粒劑穩(wěn)定性和安全性都很好，臨床主要用于增強(qiáng)疫苗免疫效果、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗應(yīng)激的功效，用于治療雞及其他畜禽的各種免疫抑制性疾病，增強(qiáng)疫苗的免疫效果；治療由運(yùn)輸、轉(zhuǎn)群、氣候突變等引起的免疫力低下，食欲下降等癥。
文檔編號A61K36/185GK101559095SQ20091006509
公開日2009年10月21日 申請日期2009年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月2日
發(fā)明者黎 焦, 王祝義, 趙曉峰 申請人:河南新正好生物工程有限公司