專利名稱：海濱錦葵皂甙的制備工藝及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生化分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及海濱錦葵皂甙的制備工藝及用途
二.
背景技術(shù)：
海濱錦葵(kostelezkya virginica)是錦葵科錦葵屬多年生宿根鹽生植物,天 然分布于美國(guó)東部沿海鹽沼海岸帶。1992年由南京大學(xué)引種至中國(guó)。有文獻(xiàn)報(bào) 道，海濱錦葵的花、葉、根部可食用。尤其是根部可生食、可烹炸、可作茶飲， 焙干碾碎可用作糖果和口香糖原料，以增加膠粘度。根部浸出液可濃縮至蛋清狀 替代蛋清使用。皂甙(Saponins)又名皂苷或者皂素，是固醇或三萜類化合物的 低聚配糖體總稱，因其水溶液能形成持久泡沫，像肥皂樣而得名。它們是糖的衍 生物，主要是由糖的半縮醛羥基與非糖物質(zhì)結(jié)合的化合物，非糖部分稱為甙元， 又稱為配糖體。甙元根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為甾體和三萜類。皂甙可以抑制血清中 脂類氧化，抑制過(guò)氧化脂質(zhì)對(duì)肝臟的損傷，防止動(dòng)脈硬化，因而它具有免疫調(diào)節(jié) 的作用。它可提高NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)肌體免疫力。皂甙對(duì)核酸 和蛋白質(zhì)合成有促進(jìn)作用，可增加肝、肌肉組織中蛋白質(zhì)與DNA的含量，提高 機(jī)體的耐力，因而具有抗疲勞作用。皂甙還可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),具有消腫 抗炎癥的作用。皂甙因其重要的生物學(xué)作用，受到很多研究者重視，尤其對(duì)人參 皂甙、大豆皂甙以及其他類植物皂甙的研究有大量論文和專利。但從海濱錦葵中 提取錦葵皂甙以及對(duì)錦葵皂甙的研究論文很少見(jiàn)到，專利至今未有。
根據(jù)我們的研究結(jié)果證明錦葵皂甙是一種三萜類皂甙，在錦葵根部含量較 高。從生物學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，錦葵皂甙具有免疫調(diào)節(jié)的生物學(xué)功能?？勺鳛槿梭w非特 異性免疫增強(qiáng)劑，促進(jìn)體液免疫及細(xì)胞免疫，加強(qiáng)抗體或補(bǔ)體生成。該皂甙可制 成片劑、口服液、膠囊等作為保健食品給免疫低下者使用，促進(jìn)他們的健康。也 可進(jìn)一步制成藥品，供免疫低下或腫瘤病人輔助治療使用。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問(wèn)題是從海濱錦葵的根中提取出錦葵皂甙，并利用錦葵皂 甙的生物學(xué)功能將其制成片劑、膠囊、口服液等保健食品，供免疫力低下者使用。 也可制成藥品供病患者使用。
本發(fā)明技術(shù)方案
l.海濱錦葵皂甙提取工藝採(cǎi)集海濱錦葵新鮮根，洗凈、曬干或烘干，粉碎。
取干粉，按比例1: 15加入蒸餾水，用超聲儀加溫超聲提取。超聲條件功率
200瓦，溫度6(TC，時(shí)間1小時(shí)。超聲后用紗布過(guò)濾。同樣條件再重復(fù)一次；兩次濾液合并。將濾液蒸發(fā)部分后，得濃縮液。加入乙醇使最終濃度為70%。攪拌 幾次后低溫靜置10-12小時(shí)，虹吸取上清，將上清(70%乙醇提取液)減壓濃縮 去乙醇，得錦葵皂甙粗提液。用大孔吸附樹(shù)脂再進(jìn)行分離。按常規(guī)方法將大孔吸 附樹(shù)脂進(jìn)行處理，裝柱；然后將錦葵皂甙粗提液上柱，上樣結(jié)束后，先用蒸餾水 洗滌去雜質(zhì)，然后用40%乙醇洗滌其他物質(zhì)，最后使用80%乙醇洗脫，得到含有 錦葵皂甙的醇洗脫液，將此溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去乙醇，得到精制的含錦葵皂甙的濃縮 液。該溶液可根據(jù)需要處理，可直接用原液作原料使用，也可將原液做成凍干粉 存放備用。
2.錦葵皂甙的生物學(xué)功能
錦葵皂甙的抗腫瘤試驗(yàn)
表l錦葵皂甙對(duì)HEP-S細(xì)胞增殖的影響
劑量(嗎/ml)培養(yǎng)24hA值培養(yǎng)48hA值
對(duì)照0.917460±0.0674610.857181±0.026006
1000.547080±0.214944*0.279967±0.196189*
800.716560±0.083248*0.665800±0.134633*
600,815967±0細(xì)111*0.738567±0.117778*
400.894183±0.0232890.804150±0.023700*
200.937133±0.0570670.835433±0.029978
P*〈0.05
3.錦葵皂甙的測(cè)定高氯酸-香草醛法
經(jīng)研究分析，錦葵皂甙為三萜類皂甙，依據(jù)三萜類皂甙在高氯酸作用下能與
香草醛產(chǎn)生顏色反應(yīng)，在546nm處有最大吸收。錦葵皂甙含量可通過(guò)參比皂甙標(biāo) 準(zhǔn)品曲線，計(jì)算含量和純度。
香草醛試劑:4%; 4.0克香草醛，加入100ml冰乙酸溶解即可。 準(zhǔn)確吸取1.0mg/ml皂甙標(biāo)準(zhǔn)液O.O， 0.025， 0.035,0.050， 0.075， 0. 10ml 于具塞試管內(nèi)，加甲醇補(bǔ)足0. 10ml，分別加4%香草醛試劑0.4ml,再加高氯酸 0.8ml，混勻，密塞，置于6(TC水浴中加熱15分鐘，取出，立即用冷水冷卻5分 鐘，再各管加入冰乙酸5.0ml，搖勻，靜置10分鐘。546nm處測(cè)定光吸收值。以 濃度對(duì)光吸收值作標(biāo)準(zhǔn)曲線。錦葵皂甙樣品同法配制1.0mg/ml濃度的樣品液， 取O.Ol， 0.02， 0.05ml,補(bǔ)加甲醇至0. 10ml,其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線。將測(cè)定出的 光吸收值對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的錦葵皂甙含量。
本發(fā)明有益效果是使用超聲技術(shù)，第一次從海濱錦葵中提取出了錦葵皂甙， 經(jīng)過(guò)檢測(cè)分析，確定為三萜類皂甙。將錦葵皂甙用于動(dòng)物細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用，該產(chǎn)品可作為治療抗腫瘤的藥品。 四.具體實(shí)施方案
l.採(cǎi)集海濱錦葵鮮根，洗凈，烘千，粉碎。取干粉50克按比例1: 15的加 入蒸餾水，用超聲儀超聲提取，超聲條件溫度60'C，功率200W，時(shí)間1小時(shí)。
超聲結(jié)束后，用兩層紗布過(guò)濾。濾液存放，濾渣再用上述條件重復(fù)一次。兩次濾
液合并，得濾液1200ml，減壓蒸發(fā)，得濃縮液260ml。加入乙醇使最終濃度為70%。 攪拌幾次后低溫靜置10小時(shí)，虹吸取上清，將上清(70%乙醇提取液)減壓濃縮 去掉乙醇，得錦葵皂甙粗抽提液250ml。
將錦葵皂甙粗抽提液250ml，加蒸餾水250ml，用大孔吸附樹(shù)脂再進(jìn)行分離。 按常規(guī)方法將大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行處理，裝柱；然后將錦葵皂甙粗提液上柱，上樣 結(jié)束后，先用蒸餾水洗去雜質(zhì)，然后用40y。乙醇500ml洗滌其他物質(zhì)，最后使用 80%乙醇500ml洗脫，得到含有錦葵皂甙的乙醇洗脫液510ml，將此溶液旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)去乙醇，得到精制的含錦葵皂甙的濃縮液73inl,經(jīng)檢測(cè)濃度為0.61mg/ffll。 2.錦葵皂甙的測(cè)定高氯酸-香草醛法
經(jīng)研究分析，錦葵皂甙為三萜類皂甙，依據(jù)三萜類皂甙在高氯酸作用下能與 香草醛產(chǎn)生顏色反應(yīng)，在546nm處有最大吸收。錦葵皂甙含量可通過(guò)參比阜武標(biāo) 準(zhǔn)品曲線，計(jì)算含量和純度。
香草醛試劑4%; 4.0克香草醛，加入100ml冰乙酸溶解即可。準(zhǔn)確吸取 1.0mg/ml皂甙標(biāo)準(zhǔn)液O.O， 0.025, 0.035,0.050， 0.075, 0. l(kl于具塞試管內(nèi)， 加甲醇補(bǔ)足0. 10ml,分別加4%香草醛試劑0. 4ml，再加高氯酸0. 8ml，混勻，密塞， 置于6(TC水浴中加熱15分鐘，取出，立即用冷水冷卻5分鐘，再各管加入冰乙 酸5. Oml，搖勻，靜置10分鐘。546nm處測(cè)定光吸收值。以濃度對(duì)光吸收值作標(biāo) 準(zhǔn)曲線。錦葵皂甙樣品同法配制1. Omg/ml濃度的樣品液，取0. 01, 0. 02， 0. 05ml, 補(bǔ)加甲醇至O. 10ml,其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線。將測(cè)定出的光吸收值對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì) 算樣品的錦葵皂甙含量。
權(quán)利要求
1.一種從海濱錦葵中分離制備錦葵皂甙的工藝，其特征是採(cǎi)集海濱錦葵鮮根，洗凈，烘干，粉碎，干粉中加入1∶15的蒸餾水，用超聲儀超聲提取，超聲條件溫度60℃，功率200W，時(shí)間1小時(shí)，超聲結(jié)束后，用兩層紗布過(guò)濾，濾液存放，濾渣再用上述條件重復(fù)一次，兩次濾液合并，減壓蒸發(fā)，得濃縮液，加入乙醇使最終濃度為70％。攪拌后低溫靜置10-12小時(shí)，虹吸取上清，將上清(70％乙醇提取液)減壓濃縮去乙醇，得無(wú)乙醇錦葵皂甙粗提液。
2. 根據(jù)權(quán)利1所述從海濱錦葵中分離制備錦葵皂甙的工藝，其特征是錦葵皂 甙粗提液，用大孔吸附樹(shù)脂再進(jìn)行分離，按常規(guī)方法將大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行處理， 裝柱；然后將錦葵皂甙粗提液上柱，上樣結(jié)束后，先用蒸餾水洗去雜質(zhì)，然后用 40%乙醇洗滌其他物質(zhì)，最后使用80%乙醇洗脫，得到含有錦葵皂甙的乙醇洗脫 液，將此溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去乙醇，得到精制的含錦葵皂甙的濃縮液，該溶液可根據(jù) 需要處理，直接用原液作原料使用，或?qū)⒃鹤龀蓛龈煞鄞娣艂溆谩?br> 3. 根據(jù)權(quán)利1所述從海濱錦葵中分離制備錦葵皂甙的工藝生產(chǎn)的錦葵皂甙 在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于生化分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及海濱錦葵皂甙的制備工藝及用途，本發(fā)明從海濱錦葵中分離、純化錦葵皂甙工藝，從新鮮海濱錦葵根、得干粉，超聲，70％乙醇抽提，去乙醇、濃縮，得皂甙粗提液。用大孔樹(shù)脂分離，水洗、40％乙醇去雜質(zhì)，80％乙醇洗脫，濃縮、干燥。該產(chǎn)品可制成片劑、口服液、膠囊作為保健品給免疫低下者使用。也可進(jìn)一步制成治療腫瘤的藥品。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101601699SQ200910032019
公開(kāi)日2009年12月16日 申請(qǐng)日期2009年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月7日
發(fā)明者張?zhí)? 張鶴云, 佩 欽 申請(qǐng)人:南京大學(xué)