專利名稱：β-葡聚糖用于上呼吸道感染癥狀和心理健康的制作方法
后“葡聚糖用于上呼吸道感染癥狀和心理健康
背景技術(shù)：
該申請(qǐng)要求美國(guó)系列60/975，734、名稱為 THE USE OF 3 -GLUCANON UPPER RESPIRATORY TRACT INFECION SYMPTOMS ANDPSYCH0L0GICAL WELL-BEING IN MARATHON ATHLETES (2007年9月27日申請(qǐng))的權(quán)益。本發(fā)明涉及包含0 -葡聚糖的組合物，其用于治療上呼吸道感染癥狀和提高心理 健康(well-being)。肉體和心理狀況可以導(dǎo)致對(duì)于人免疫系統(tǒng)的應(yīng)激反應(yīng)(1)。有明顯的證據(jù)表明， 過(guò)度的肉體活動(dòng)(例如，精英運(yùn)動(dòng)員所承受的活動(dòng))可以導(dǎo)致上呼吸道感染(URTI)的增 加(1，2)。過(guò)度訓(xùn)練(甚至中等程度的繁重鍛煉)也可以導(dǎo)致URTI的增加。然而，已經(jīng)表 明，頻繁的中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可以降低URTI的發(fā)病率(3，4)。研究表明，中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可以降 低URTI的危險(xiǎn)，但繁重的鍛煉或精英訓(xùn)練可以提高這種危險(xiǎn)(5)。Nieman(5)創(chuàng)建了一種 模型，這種模型證明了中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)的益處和繁重鍛煉的負(fù)面URTI影響。與繁重鍛煉有關(guān) 的應(yīng)激反應(yīng)是身體壓力，這可以導(dǎo)致在關(guān)鍵免疫系統(tǒng)組成部分例如嗜中性白細(xì)胞、NK細(xì)胞、 T細(xì)胞和B細(xì)胞中可測(cè)量的免疫刺激的降低(6，7，8)。進(jìn)行免疫刺激的凈效果使免疫系統(tǒng) 弱化，常常導(dǎo)致上呼吸道感染(URTI)。心理壓力可以刺激和弱化免疫系統(tǒng)，其方式幾乎與身體壓力相同(9，10)。心理壓 力可以導(dǎo)致URTI及其它疾病狀態(tài)的增加(11)。許多發(fā)起人已經(jīng)研究了緊張狀況(包括學(xué)術(shù) 壓力)對(duì)健康的影響(12，13，14)、家族成員對(duì)疾病的反應(yīng)(15)和對(duì)社交情況的影響(16)。 人們使用各種方法來(lái)測(cè)定心理壓力對(duì)人體健康的影響。最近研究集中在免疫系統(tǒng)組成部分 對(duì)壓力的反應(yīng)。對(duì)心理壓力的研究已經(jīng)表明，這種壓力可以導(dǎo)致與身體壓力對(duì)免疫系統(tǒng)效 能的指標(biāo)的類似變化。已經(jīng)調(diào)查到由于心理壓力造成的免疫細(xì)胞群的減少、抗體產(chǎn)生降低 和細(xì)胞因子反應(yīng)改變(17，18)。由于壓力是日常生活中常見(jiàn)的并且是組成部分，所以，研究 心理壓力和免疫反應(yīng)的關(guān)鍵目的是增加對(duì)壓力如何影響人體健康的理解。使用各種干預(yù)技術(shù)，可以應(yīng)對(duì)肉體和心理壓力(19)。這種干預(yù)技術(shù)之一是選擇性 地給飲食補(bǔ)充免疫調(diào)節(jié)化合物(19，20)。這種研究報(bào)道了使用免疫提高化合物葡聚糖 對(duì)馬拉松賽跑運(yùn)動(dòng)員(參加2007年Carlsbad馬拉松)的肉體和心理健康的效果，葡 聚糖是免疫健康產(chǎn)品，已經(jīng)對(duì)其進(jìn)行了較好的研究，并且已經(jīng)確定了作用機(jī)理(21)。本文報(bào) 道的研究利用了一系列進(jìn)行自我評(píng)價(jià)問(wèn)卷的受試者，這種問(wèn)卷闡明了身體健康狀況(著重 于整體健康狀態(tài)和URTI癥狀)。除了評(píng)價(jià)受試者的身體健康之外，還進(jìn)行了被稱為心境量 表(P0MS)的心理評(píng)價(jià)，從而評(píng)價(jià)受試者如何對(duì)壓力和用支持免疫健康的葡聚糖干預(yù)作 出反應(yīng)。這些研究的關(guān)鍵目的是探索葡聚糖如何影響與整體健康有關(guān)的各種情緒和感 覺(jué)。心境量表是驗(yàn)證性心理測(cè)驗(yàn)，其使用65個(gè)輔助標(biāo)準(zhǔn)，分為6種主要情緒狀態(tài)。已經(jīng)在 超過(guò)2900個(gè)健康研究中使用了 P0MS剖面法(22，23)。本發(fā)明概述對(duì)中度至高度壓力患者給予葡聚糖，可以導(dǎo)致上呼吸道感染癥狀的減少，并 且可以提高心理健康。這種效果可以在具有身體和心理壓力的受試者中看到。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1是顯示受試者總數(shù)的圖形，這些受試者報(bào)告了 11種預(yù)先選擇的上呼吸道感染 癥狀中的任何一種癥狀。圖2是描述受試者對(duì)于第二周和第四周的補(bǔ)充效果問(wèn)題的反應(yīng)的分?jǐn)?shù)圖。圖3是描述受試者對(duì)于第二周和第四周的健康狀態(tài)問(wèn)題的反應(yīng)分?jǐn)?shù)圖。圖4是描述具體POMS系數(shù)(factors)(由POMS記分表計(jì)算)的分析數(shù)據(jù)圖。圖5是描述整體性情緒狀態(tài)的圖。圖6是描述具體POMS系數(shù)(factors)(由P0MS記分表計(jì)算)的分析數(shù)據(jù)的圖。圖7是描述整體性情緒狀態(tài)的圖。本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明用WELLMUNE WGP (其是酵母衍生的0 (1，3/1，6)-葡聚糖)進(jìn)行這些研究。在第一個(gè)研究中，75個(gè)馬拉松賽跑運(yùn)動(dòng)員參加了該研究。征募年齡在18-53歲(平 均年齡是36士9歲)內(nèi)的健康男性(35個(gè))和女性(40個(gè))進(jìn)行該研究。通過(guò)在賽跑選手 的登記區(qū)域填充表格，在2007年1月20日的Carlsbad馬拉松的登記處進(jìn)行招募。馬拉松 長(zhǎng)跑比賽在2007年1月21日進(jìn)行。所包含的標(biāo)準(zhǔn)包括健康的無(wú)癥狀的成人馬拉松參加 者，并且以許可形式完成通知。排除的標(biāo)準(zhǔn)包括當(dāng)前具有URTI癥狀、創(chuàng)傷、不能完成所有問(wèn) 卷和當(dāng)前使用抗菌或其它“免疫”支持產(chǎn)品的那些人。該研究使用的是安慰劑對(duì)照的雙盲設(shè)計(jì)。用所包括和排除的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)每個(gè)受 試者，并且如果符合合適的標(biāo)準(zhǔn)，可以包括在該研究中。在第1天，在納入該研究中之后立 即將受試者隨機(jī)分配到葡聚糖(250、500mg)或安慰劑組。安慰劑膠囊是250mg米粉，
葡聚糖膠囊是從發(fā)酵釀酒酵母分離的250mg的0 1，3/1，6葡聚糖。在研究的第一天，參 加者需要完成基線P0MS和健康記錄問(wèn)卷。每天給予安慰劑、25Omg0 -葡聚糖，或每天給予 5OOmg0-葡聚糖，給予四周。指示受試者每天早晨在早餐之前至少1/2小時(shí)自我給予規(guī)定 劑量一次，給予四周時(shí)間。在兩和四周給藥療程之后，使受試者填寫心理測(cè)驗(yàn)的P0MS測(cè)試 和問(wèn)卷格式的健康記錄。使用心境狀態(tài)問(wèn)卷總體結(jié)果(profile)來(lái)測(cè)定六個(gè)主要心理系數(shù)(factors)。 POMS總體結(jié)果使用65個(gè)基于形容詞的強(qiáng)度量表，其測(cè)定緊張、憂郁、憤怒、疲勞、活力和紊 亂的六個(gè)情緒系數(shù)(factors) (23)。以0_4個(gè)等級(jí)記錄形容詞反應(yīng)和分?jǐn)?shù)(0 =完全沒(méi)有， 4 =極其強(qiáng)烈)。將65個(gè)反應(yīng)按情緒系數(shù)(factors)分類、列表、評(píng)分和分析。P0MS問(wèn)卷的 結(jié)果是每個(gè)受試者在研究的開始、2周和4周間隔的積極和消極情緒的評(píng)價(jià)。將所有的六個(gè) 情緒狀態(tài)系數(shù)(factors)的分?jǐn)?shù)組合，形成整體性情緒狀態(tài)。報(bào)告每個(gè)情緒狀態(tài)和整體性 情緒狀態(tài)的數(shù)據(jù)。在開始、2周和4周的評(píng)價(jià)時(shí)間，受試者完成身體健康問(wèn)卷。健康記錄包括與整體 健康狀態(tài)、每天健康記錄和具體URTI癥狀相關(guān)的問(wèn)題。所測(cè)定的URTI相關(guān)癥狀包括鼻充 血、流鼻涕、咽喉痛、打噴嚏、咳、疲勞、頭痛、全身倦怠和身體覺(jué)得疼痛。在補(bǔ)充物質(zhì)期間，使 用典型的快樂(lè)等級(jí)(1 =更壞，10 =更好)，要求受試者給他們的健康情況評(píng)分，使用類似的 等級(jí)評(píng)價(jià)他們的整體健康狀態(tài)。將所有問(wèn)卷寄往中心地點(diǎn)，并轉(zhuǎn)錄至中心數(shù)據(jù)庫(kù)。通過(guò)受試者編號(hào)鑒別數(shù)據(jù)。檢 查數(shù)據(jù)的精確性和完整性。使用標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)(成對(duì)t檢驗(yàn))來(lái)分析表列數(shù)據(jù)。用設(shè)置在0. 05的雙尾a水平來(lái)評(píng)價(jià)顯著性。馬拉松長(zhǎng)跑比賽引起身體壓力(其挑戰(zhàn)受試者的免疫系統(tǒng))，并且該研究設(shè)計(jì) 的結(jié)果，作為現(xiàn)實(shí)案例研究(其使用問(wèn)卷設(shè)計(jì)進(jìn)行量化)，是對(duì)這種健康挑戰(zhàn)形式的成功 評(píng)價(jià)。在該研究的四周報(bào)告周期期間，基于POMS調(diào)查，治療組中的受試者(每天250和 500mg^-葡聚糖)報(bào)告了更少的URTI癥狀、更好的總體健康狀況和更積極的心理評(píng)價(jià)。該研究總共具有75個(gè)受試者(35個(gè)男性，40個(gè)女性；平均年齡36歲，范圍在18_53 歲)，他們完成和回復(fù)了所有的問(wèn)卷。在兩個(gè)治療組中，在身體健康(包括報(bào)告的URTI癥 狀和整體健康狀態(tài))的度量方面，馬拉松賽跑運(yùn)動(dòng)員具有統(tǒng)計(jì)上顯著的(P < 0. 05)改善。 圖1顯示了在兩和四周報(bào)告URTI癥狀的受試者的數(shù)據(jù)。在葡聚糖治療組中，URT1癥狀 顯著地(p<0.05)減少。經(jīng)過(guò)兩周時(shí)間，在安慰劑組中，68%的受試者報(bào)告了與URTI有關(guān) 的癥狀，但在25Omg0 -葡聚糖治療組中，只有32%的受試者報(bào)告了類似的URTI癥狀，和在 500mg^-葡聚糖組中，只有24%的受試者報(bào)告了類似的URTI癥狀。經(jīng)過(guò)4周，相對(duì)于安慰 劑受試者中的24%，在兩個(gè)治療組中，都只有8%的受試者報(bào)告了上呼吸道感染。使用檢驗(yàn) 盒格式(check box format)(帶有頻率評(píng)價(jià)(范圍從每天沒(méi)有癥狀至多種癥狀))評(píng)價(jià)了 十一種URTI癥狀。受試者報(bào)告的最普遍的URTI癥狀是咽喉痛、窒悶或流鼻涕和咳嗽。報(bào) 告的其它癥狀不頻繁，或根本沒(méi)有報(bào)告。除了檢驗(yàn)盒癥狀形式之外，要求受試者在日志中記 錄各種健康編碼，使用從沒(méi)有健康問(wèn)題至具體癥狀的范圍的編號(hào)系統(tǒng)，并且對(duì)癥狀嚴(yán)重程 度進(jìn)行評(píng)級(jí)(A=輕微，B=中度，C=嚴(yán)重)。通常，受試者可以完成URTI癥狀的檢驗(yàn)盒表 格，但完成每天健康記錄的依從性較差。由此，分析整體URTI癥狀的數(shù)據(jù)，而不是分析個(gè)體 的癥狀評(píng)分。在補(bǔ)充方案期間，要求受試者完成健康感覺(jué)記錄。要求受試者評(píng)價(jià)他們的健康如 何受到補(bǔ)充物(0-葡聚糖或安慰劑)的影響，并且要求將他們的當(dāng)前健康狀態(tài)與他們的典 型健康歷史進(jìn)行比較。當(dāng)詢問(wèn)補(bǔ)充方案是如何影響他們的健康時(shí)，在健康評(píng)價(jià)調(diào)查中，相對(duì) 于安慰劑，攝取250mg 3 -葡聚糖的受試者報(bào)告了 38 %的更高健康評(píng)分；給予500mg 3 -葡 聚糖的受試者報(bào)告了 58%的更高的健康評(píng)分。在每?jī)芍軙r(shí)間(分別是2和4周)的最后， 研究受試者評(píng)價(jià)了他們的整體健康情況(與他們的歷史健康狀態(tài)相比)。攝取25Omg0-葡 聚糖的參加者評(píng)定他們的健康情況提高15% (相對(duì)于安慰劑)；每天攝取5OOmg0-葡聚糖 的受試者評(píng)定他們的健康情況提高44% (與正常情況相比較)。除了標(biāo)度的問(wèn)題之外，還 有評(píng)價(jià)每年的疾病發(fā)作數(shù)量問(wèn)題(例如，與去年的這時(shí)候相比，你覺(jué)得你常常具有普通感 冒或流感的發(fā)作嗎？選擇是更少、幾乎相同或更多次)，但這些問(wèn)題的依從性較差，獲得 的數(shù)據(jù)沒(méi)有意義。心理健康情況的POMS評(píng)價(jià)強(qiáng)烈地支持和反映了身體健康評(píng)價(jià)。數(shù)據(jù)分析包括基線(第0天)時(shí)的情緒狀態(tài)評(píng)價(jià)，受試者開始自我給予研究產(chǎn)品 (安慰劑250mg和5OOmg0 -葡聚糖)之后2周的情緒狀態(tài)評(píng)價(jià)，給予研究產(chǎn)品四周之后的 情緒狀態(tài)評(píng)價(jià)。正如所描述的那樣，POMS調(diào)查由許多基于形容詞的標(biāo)度組成。使用具體形 容詞標(biāo)度評(píng)價(jià)個(gè)體的情緒狀態(tài)系數(shù)(factors)。例如，與所規(guī)定的分析相結(jié)合，使用對(duì)形容 詞標(biāo)度2、10、16、20、22、26、27、34和41的反應(yīng)，組成緊張系數(shù)(factors)。其它情緒狀態(tài)系 數(shù)(factors)使用了對(duì)其它形容詞的反應(yīng)，包括憂郁(15個(gè)形容詞)，憤怒(12個(gè)形容詞)， 活力(8個(gè)形容詞)，疲勞(7個(gè)形容詞)和紊亂(7個(gè)形容詞)。觀察到了紊亂(降低)、疲勞(降低)、活力(提高)和緊張(降低)的顯著的情緒狀態(tài)反應(yīng)(圖4)。與身體健康無(wú)關(guān) 的情緒狀態(tài)系數(shù)(factors)(憂郁和憤怒)常常不是統(tǒng)計(jì)上相關(guān)的系數(shù)(factors)。然而， 還有一段憤怒系數(shù)(factors)的時(shí)間周期(給予5OOmg0-葡聚糖兩周之后)，其引起在憤 怒方面的統(tǒng)計(jì)上的顯著減少。在治療組中，六個(gè)中的四個(gè)個(gè)體的情緒狀態(tài)的統(tǒng)計(jì)上顯著性反應(yīng)被認(rèn)為與馬拉松 賽跑運(yùn)動(dòng)員有關(guān)。觀察到的改善包括對(duì)于250mg劑量的葡聚糖，疲勞降低48% (相 對(duì)于安慰劑)，對(duì)于每天500mg劑量的葡聚糖，疲勞降低59% (相對(duì)于安慰劑)。經(jīng)過(guò) 四周研究時(shí)間，觀察到活力增加22% (250mg，相對(duì)于安慰劑)和30% (500mg，相對(duì)于安慰 劑)。受試者報(bào)告經(jīng)過(guò)四周研究時(shí)間，觀察到緊張降低38% (250mg，相對(duì)于安慰劑)和 47% (500mg，相對(duì)于安慰劑)。最后，受試者報(bào)告經(jīng)過(guò)四周研究時(shí)間，與壓力相關(guān)的紊亂降 低38% (250mg，相對(duì)于安慰劑)和45% (500mg，相對(duì)于安慰劑)。通過(guò)補(bǔ)充0 -葡聚糖， 在POMS評(píng)價(jià)(憂郁和憤怒)中使用的情緒變化的普通量度沒(méi)有改變。相對(duì)于安慰劑，250 和500mg/天治療組的整體情緒狀態(tài)(六個(gè)主要系數(shù)(factors)的組合)得到改善(圖5)。 每天攝取250mg劑量的受試者的整體情緒狀態(tài)改善11 % (相對(duì)于安慰劑)，每天攝取500mg 劑量的受試者改善13% (相對(duì)于安慰劑)。已經(jīng)證明，體育活動(dòng)導(dǎo)致顯著呼吸壓力的馬拉松賽跑運(yùn)動(dòng)員及其它運(yùn)動(dòng)員對(duì)上呼 吸道感染更敏感(2，4，24)。營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充是可以調(diào)節(jié)這些高性能運(yùn)動(dòng)員的健康狀態(tài)的干預(yù)技術(shù) (19)。這種研究表明，補(bǔ)充葡聚糖(可商購(gòu)的營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑成分)可以降低URTI癥狀的 發(fā)生，并且具有受試者的心境狀態(tài)評(píng)價(jià)總體結(jié)果所定義的積極心理影響(23)。在這種研究 中使用自我評(píng)價(jià)問(wèn)卷，使得受試者可以有效地報(bào)告健康相關(guān)的情況。治療組的受試者報(bào)告 了更少的URTI癥狀和更好的整體健康狀態(tài)。受試者報(bào)告的URTI癥狀是典型的感冒和流感 癥狀和類似于其它研究中報(bào)告的癥狀(4，9，24)。在當(dāng)前的研究中，使受試者將全部URTI癥 狀進(jìn)行合計(jì)，并且不試圖進(jìn)行對(duì)照癥狀評(píng)分。使用URTI癥狀是一種可以由受試者報(bào)告的客觀測(cè)定。健康狀態(tài)問(wèn)題使用0-10的 快樂(lè)等級(jí)，其中0 =更糟，10 =更好，以便使受試者評(píng)價(jià)他們的健康狀態(tài)。使用客觀URTI數(shù) 據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)研究的結(jié)果，并且將該結(jié)果與更主觀的健康狀態(tài)問(wèn)題進(jìn)行比較。有效數(shù)據(jù)的分析 和解讀取決于所使用方法的有效性。在這種研究期間，使用牢固建立起來(lái)的和臨床上有效 的技術(shù)(P0MS調(diào)查，URTI癥狀)，同時(shí)探索更主觀的技術(shù)，例如健康狀態(tài)問(wèn)題。疾病和壓力都以肉體和心理方式影響免疫系統(tǒng)(24)。肉體評(píng)價(jià)是常見(jiàn)的，并且容 易測(cè)定和證實(shí)(3，4，6，24)。由于很難客觀地測(cè)定情緒和感覺(jué)，所以必須使用測(cè)量工具，例 如考慮了各種心理系數(shù)(factors)的P0MS。已經(jīng)在超過(guò)2，900個(gè)研究中使用了 P0MS方法 (22)；由此，它的有效性是非常確實(shí)的。測(cè)量工具使用65個(gè)基于形容詞的標(biāo)度，其可以由受 試者評(píng)價(jià)，受試者可以沒(méi)有關(guān)于如何分析標(biāo)度得分的知識(shí)。P0MS測(cè)量工具評(píng)價(jià)受試者的整 體情緒狀態(tài)，并且對(duì)具體情緒和感覺(jué)提供反饋，例如緊張、憂郁、疲勞、活力、紊亂和憤怒。在 這種研究中，評(píng)價(jià)了遭受緊張狀況(已經(jīng)報(bào)道其可以導(dǎo)致更高的URTI發(fā)生率(4，24，25)) 的受試者的肉體和心理系數(shù)(factors)。在所有情況中，與安慰劑組中的那些受試者相比， 給予3-葡聚糖的受試者感受到更好的身體健康狀態(tài)和顯著改善的心理狀態(tài)，包括更積極 的感覺(jué)。P0MS調(diào)查的結(jié)果說(shuō)明，自我給予治療劑量的0 -葡聚糖(每天250和500mg)的受試者，經(jīng)過(guò)2和4周的時(shí)間，每天500mg劑量的受試者的疲勞降低；而每天250mg劑量的 受試者經(jīng)過(guò)4周時(shí)間顯示了統(tǒng)計(jì)上顯著的反應(yīng)。對(duì)于緊張系數(shù)(factors)也觀察到了類似 結(jié)果。這表明，更高劑量的免疫調(diào)節(jié)劑能夠快速地提高免疫健康狀態(tài)。然而，活力和紊亂 POMS系數(shù)(factors)沒(méi)有遵循這種趨勢(shì)。對(duì)于兩個(gè)治療組，經(jīng)過(guò)四周時(shí)間，活力得到提高。 經(jīng)過(guò)2和4周時(shí)間，兩個(gè)治療組的紊亂系數(shù)(factors)是顯著的。與此相反，在四周報(bào)告周 期，憤怒和憂郁系數(shù)(factors)沒(méi)有顯示出統(tǒng)計(jì)顯著性(在2周和500mg劑量時(shí)，憤怒系數(shù) (factors)具有顯著性)。當(dāng)將其與身體健康評(píng)價(jià)進(jìn)行比較時(shí)，該數(shù)據(jù)的解釋并不復(fù)雜。邏 輯推測(cè)是，感受URTI癥狀的受試者“感到”比處于健康狀態(tài)的受試者更糟。反之，使用肉體 和心理評(píng)價(jià)技術(shù)，攝取3 _葡聚糖的受試者報(bào)告他們“感覺(jué)”更好。許多公開和未公開的研究支持口服給予0 _葡聚糖的免疫刺激性能。Vetvicka等 人的研究(26)表明，在感染上武器化的炭疽桿菌的小鼠中，葡聚糖有助于防止炭疽感 染和死亡。額外的研究支持進(jìn)一步抗細(xì)菌的(27)和抗腫瘤(28)性能。在這種研究中，當(dāng) 與安慰劑相比時(shí)，葡聚糖顯示可顯著地改善受試者的身體健康以及情緒和感覺(jué)。可能 的保健含義有多種，并且建議應(yīng)該定期地補(bǔ)充葡聚糖。在美國(guó)的所有統(tǒng)計(jì)人口中，肉體 和心理壓力和緊張狀況日益常見(jiàn)；因此，消極的身心健康環(huán)境每天都在向人們挑戰(zhàn)。通過(guò) 3 -葡聚糖來(lái)加強(qiáng)免疫系統(tǒng)，可以對(duì)保持健康狀態(tài)和強(qiáng)勁的積極精神狀態(tài)具有顯著的效果。 在本文報(bào)道的研究中，每天補(bǔ)充葡聚糖可以降低參加者的與上呼吸道感染有關(guān)的癥狀 的發(fā)生率，并且可以改善其心理健康。另外，正在研究用于衍生0 -葡聚糖的原始酵母菌株的突變形式。這種新菌株整 體具有更高的葡聚糖含量(更低的油脂和蛋白)。原始的酵母菌株被稱為#5菌株，新菌 株被稱為#7菌株。初步研究表明，給予純化的葡聚糖(源于新菌株)可以具有提高的 效果。例如，與給予源于老菌株的葡聚糖的受試者相比，對(duì)于給予源于新菌株的葡 聚糖的受試者，UTI癥狀的嚴(yán)重程度可以降低得更多。參考文獻(xiàn)1. 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Immunol. 163 :3045_3052.按照Helsinki Declaration (1983年修訂)涉及人的臨床研究，進(jìn)行這種第二個(gè) 研究。將研究細(xì)節(jié)正確地通知所有受試者，并且簽訂告知同意文件。150個(gè)受試者參加該 研究。用于選擇受試者的關(guān)鍵包含標(biāo)準(zhǔn)是壓力篩選調(diào)查，其用于選擇報(bào)告“中度”至“高度” 被察覺(jué)壓力水平的受試者。使用在過(guò)去的壓力/P0MS研究(用于鑒別具有高水平的所察覺(jué) 壓力的個(gè)體)中已經(jīng)使用的篩選調(diào)查。雖然這種篩選調(diào)查沒(méi)有在大量的人群中進(jìn)行臨床驗(yàn) 證，但它已經(jīng)成功地用于運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練的兩項(xiàng)研究和體重減輕的四項(xiàng)研究中，在察覺(jué)壓力的水 平方面對(duì)患者進(jìn)行分類。在每個(gè)研究中，這種簡(jiǎn)單的15個(gè)問(wèn)題的壓力調(diào)查與P0MS強(qiáng)烈地相 關(guān)，并且充當(dāng)招募受試者的可靠的篩選工具。在這種篩選調(diào)查中，得分為6或更高的受試者 適合于注冊(cè)到補(bǔ)充研究中。6-10的分?jǐn)?shù)表明中度壓力。分?jǐn)?shù)> 10表明高壓力?；赑0MS 的完成和對(duì)于所包括和排除標(biāo)準(zhǔn)的依從性，150個(gè)年齡在18-65歲(平均年齡是39士 11歲) 的健康受試者(45個(gè)男性，105個(gè)女性)加入該研究。所包含的標(biāo)準(zhǔn)包括健康的無(wú)癥狀的 成人，以中度至高壓力水平加以篩選，并且完成告知同意形式。排除的標(biāo)準(zhǔn)包括當(dāng)前具有 URTI癥狀、創(chuàng)傷、不能完成所有問(wèn)卷、低壓力水平的跡象和當(dāng)前使用抗菌或其它“免疫”支持產(chǎn)品的那些人。該研究使用的是安慰劑對(duì)照的雙盲設(shè)計(jì)。用所包括和排除的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)每個(gè)受試 者，并且如果符合合適的標(biāo)準(zhǔn)，就包括在該研究中。在第1天，加入該研究中之后立即將受 試者隨機(jī)分配到1，3/1，6-0_葡聚糖(250、500mg)或安慰劑組。安慰劑膠囊是250mg的米 粉。0 -葡聚糖膠囊是從發(fā)酵釀酒酵母分離的250mg的1，3/1，6- 0 -葡聚糖，形式為完整葡 聚糖顆粒(WGP)。在研究的第一天，參加者完成了基線POMS和健康記錄問(wèn)卷。每天給予安 慰劑、250mg WGP，或每天給予500mg WGP，給予四周。指示受試者每天早晨在早餐之前至少 1/2小時(shí)自我給予規(guī)定劑量一次，給予四周時(shí)間。在兩和四周給藥療程之后，使受試者填寫 心理測(cè)驗(yàn)的POMS測(cè)試和問(wèn)卷格式的健康記錄。使用心境狀態(tài)問(wèn)卷總體結(jié)果來(lái)測(cè)定六個(gè)主要心理系數(shù)(factors)。POMS總體結(jié)果 使用65個(gè)基于形容詞的強(qiáng)度標(biāo)度，其測(cè)定緊張、憂郁、憤怒、疲勞、活力和紊亂的六個(gè)情緒 系數(shù)(factors)。以0-4標(biāo)度評(píng)價(jià)形容詞反應(yīng)和分?jǐn)?shù)(0 =完全沒(méi)有，4 =極其強(qiáng)烈)。將 65個(gè)反應(yīng)通過(guò)情緒系數(shù)(factors)分類、列表、評(píng)分和分析。P0MS問(wèn)卷的結(jié)果是每個(gè)受試 者在研究的開始、2周和4周間隔的積極和消極情緒的評(píng)價(jià)。將所有的六個(gè)情緒狀態(tài)系數(shù) (factors)的分?jǐn)?shù)組合，形成整體性情緒狀態(tài)。報(bào)告每個(gè)情緒狀態(tài)和整體性情緒狀態(tài)的數(shù) 據(jù)。在開始、2周和4周的評(píng)價(jià)時(shí)間，受試者完成身體健康問(wèn)卷。健康記錄包括與整體 健康狀態(tài)、每天健康記錄和具體URTI癥狀相關(guān)的問(wèn)題。所測(cè)定的URTI相關(guān)癥狀包括鼻充 血、流鼻涕、咽喉痛、打噴嚏、咳、疲勞、頭痛、全身倦怠和身體覺(jué)得疼痛。在補(bǔ)充物質(zhì)期間，使 用典型的快樂(lè)等級(jí)(1 =更壞，10 =更好)，要求受試者評(píng)價(jià)他們的健康情況，使用類似的標(biāo) 度評(píng)價(jià)他們的整體健康狀態(tài)。將所有問(wèn)卷寄往中心地點(diǎn)，并轉(zhuǎn)錄至中心數(shù)據(jù)庫(kù)。通過(guò)受試者編號(hào)鑒別反應(yīng)數(shù)據(jù)。 檢查數(shù)據(jù)的精確性和完整性。使用標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)(成對(duì)t檢驗(yàn))來(lái)分析表列數(shù)據(jù)。用 設(shè)置在0.05的雙尾a水平來(lái)評(píng)價(jià)顯著性。在研究的受試者中，生活方式壓力(局限于在所包括標(biāo)準(zhǔn)中定義的中度至高度壓 力)引起身體健康挑戰(zhàn)。使用肉體和心理健康問(wèn)卷，所包括標(biāo)準(zhǔn)的一種結(jié)果是成功地評(píng)價(jià) 壓力。問(wèn)卷格式是沒(méi)有身體攻擊的有用機(jī)理，但必須使研究人員獲得有效的臨床信息。在 四周評(píng)價(jià)期間，基于P0MS調(diào)查，與接受安慰劑的受試者相比，在250和500mg WGP治療組中 的受試者報(bào)告了更少的URTI癥狀、更好的整體健康情況和更積極的心理評(píng)價(jià)。所有150個(gè)研究受試者完成并回復(fù)了每個(gè)問(wèn)卷。如表1所示，在兩周和四周時(shí)，在 兩個(gè)治療組中，健康的、有壓力的受試者在身體健康(包括報(bào)告的URTI癥狀和整體健康狀 態(tài))的測(cè)量方面具有統(tǒng)計(jì)上顯著的(P < 0. 05)改善。表1 *p < 0. 05相對(duì)于安慰劑相對(duì)于安慰劑組，在兩個(gè)WGP治療組中，URTI癥狀顯著地(p < 0. 05)減少。經(jīng)過(guò)兩 周時(shí)間，在安慰劑組中，32 %的受試者報(bào)告了與URTI有關(guān)的癥狀，而在兩個(gè)250mg和500mg l，3/l，6-0-葡聚糖干預(yù)組中，分別只有10%和8%的受試者報(bào)告了類似的URTI癥狀。經(jīng) 過(guò)4周，相對(duì)于安慰劑受試者中的28%，在兩個(gè)試驗(yàn)組中，只有8%的受試者報(bào)告了上呼吸 道感染。使用檢驗(yàn)盒格式(帶有頻率評(píng)價(jià)(范圍從每天沒(méi)有癥狀至多種癥狀))評(píng)價(jià)了 十一種URTI癥狀。受試者報(bào)告的最普遍的URTI癥狀是咽喉痛、窒悶或流鼻涕和咳嗽。報(bào) 告的其它癥狀不頻繁，或根本沒(méi)有報(bào)告。除了檢驗(yàn)盒癥狀形式之外，要求受試者在日志中評(píng)價(jià)各種健康編碼，使用從沒(méi)有 健康問(wèn)題至具體癥狀的范圍的編號(hào)系統(tǒng)，并且對(duì)癥狀嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)級(jí)(A =輕微，B =中 度，C=嚴(yán)重)。通常，受試者需要完成了 URTI癥狀檢驗(yàn)盒表格。然而，完成每天健康記錄 的依從性較差。由此，分析了整體URTI癥狀的數(shù)據(jù)，而沒(méi)有分析個(gè)體的癥狀評(píng)分。在補(bǔ)充方案期間，要求受試者完成健康感覺(jué)記錄。要求受試者評(píng)價(jià)他們的健康如 何受到補(bǔ)充物(0-葡聚糖或安慰劑)的影響，并且要求將他們的當(dāng)前健康狀態(tài)與他們的 典型健康歷史進(jìn)行比較。當(dāng)詢問(wèn)補(bǔ)充方案是如何影響他們的健康時(shí)，在健康評(píng)價(jià)調(diào)查中， 相對(duì)于安慰劑，攝取25Omgl，3/l，6-0-葡聚糖的受試者報(bào)告了 41%的更高的分?jǐn)?shù)；給予 500!^1，3/1，6-3-葡聚糖的受試者報(bào)告了57%的更高的的分?jǐn)?shù)。在每個(gè)兩周時(shí)間(分別 為2和4周)的最后，使研究的受試者評(píng)價(jià)他們的整體健康狀態(tài)(與他們的歷史健康狀態(tài) 相比)。相對(duì)于安慰劑，攝取25Omg0 -葡聚糖的參加者評(píng)定他們的健康狀態(tài)提高了 34% ； 與正常情況相比較，每天攝取5OOmg0 -葡聚糖的受試者評(píng)定他們的健康狀態(tài)提高了 49%。 除了標(biāo)度問(wèn)題之外，還有評(píng)價(jià)每年疾病發(fā)作數(shù)量的問(wèn)題(例如，與去年的這時(shí)候相比，你覺(jué) 得你總體上患有普通感冒或流感發(fā)作嗎？選擇是更少、幾乎相同或更多)。這些問(wèn)題的依 從性也很差。心理健康狀態(tài)的POMS評(píng)價(jià)強(qiáng)烈地支持和反映了身體健康評(píng)價(jià)。數(shù)據(jù)分析包括 基線(第0天)、受試者開始自我給予研究產(chǎn)品(安慰劑，250mg和500mg l，3/l，6-0-葡聚糖)之后兩周、和給予研究產(chǎn)品四周之后時(shí)的情緒狀態(tài)的評(píng)價(jià)。正如所描述的那樣， POMS調(diào)查由許多基于形容詞的標(biāo)度組成。使用具體形容詞標(biāo)度，評(píng)價(jià)個(gè)體情緒狀態(tài)系數(shù) (factors)。例如，緊張系數(shù)(factors)是使用對(duì)于形容詞標(biāo)度2、10、16、20、22、26、27、34 和41的反應(yīng)并結(jié)合具體分析來(lái)評(píng)價(jià)的。其它情緒狀態(tài)系數(shù)(factors)使用對(duì)于其它形容 詞的反應(yīng)，包括憂郁(15個(gè)形容詞)，憤怒(12個(gè)形容詞)，活力(8個(gè)形容詞)，疲勞(7個(gè) 形容詞)和紊亂(7個(gè)形容詞)。觀察到了紊亂(降低)、疲勞(降低)、活力(提高)和緊 張(降低)的顯著的情緒狀態(tài)反應(yīng)(圖6)。與身體健康不相關(guān)的情緒狀態(tài)系數(shù)(factors) (憂郁和憤怒)常常不是統(tǒng)計(jì)上相關(guān)的系數(shù)(factors)。然而，還有一段時(shí)間周期的憤怒系 數(shù)(factors)(給予500mg 1，3/1，6-0 -葡聚糖兩周之后)，其造成在憤怒方面統(tǒng)計(jì)上顯著 的降低。在治療組中，認(rèn)為六個(gè)單一情緒狀態(tài)中的四個(gè)的統(tǒng)計(jì)上顯著的反應(yīng)與過(guò)度壓力受 試者有關(guān)。觀察的改善包括對(duì)于250mg劑量的1，3/1，6-0_葡聚糖，疲勞降低38% (相對(duì) 于安慰劑)，對(duì)于每天500mg劑量的1，3/1，6- 3 -葡聚糖，疲勞降低42 % (相對(duì)于安慰劑)。 經(jīng)過(guò)四周研究時(shí)間，觀察到活力增加42% (250mg，相對(duì)于安慰劑)和47% (500mg，相對(duì)于 安慰劑)。受試者報(bào)告，經(jīng)過(guò)四周研究時(shí)間，觀察到緊張降低19% (250mg，相對(duì)于安慰劑) 和24% (500mg，相對(duì)于安慰劑)。最后，受試者報(bào)告，經(jīng)過(guò)四周研究時(shí)間，觀察到壓力相關(guān)的 紊亂降低15% (250mg，相對(duì)于安慰劑)和17% (500mg，相對(duì)于安慰劑)。通過(guò)補(bǔ)充1，3/1， 6-3-葡聚糖，用于P0MS評(píng)價(jià)的情緒變化的常規(guī)測(cè)定(憂郁和憤怒)沒(méi)有改變。相對(duì)于安 慰劑，250和500mg/天的治療組的整體情緒狀態(tài)(六個(gè)主要系數(shù)(factors)的組合)得到 改善(圖7)。對(duì)于每天攝取250mg劑量的1，3/1，6-0_葡聚糖的受試者，整體情緒狀態(tài)改 善18% (相對(duì)于安慰劑)，對(duì)于每天攝取500mg劑量的1，3/1，6- 0 -葡聚糖的受試者，整體 情緒狀態(tài)改善19% (相對(duì)于安慰劑)。先前已經(jīng)報(bào)道，心理壓力對(duì)人體健康具有有害效果。營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充是可以調(diào)節(jié)這些中 度至高度壓力人們的健康狀態(tài)的干預(yù)技術(shù)。這種研究表明，補(bǔ)充1，3/1，6-0_葡聚糖(可 商購(gòu)的飲食增補(bǔ)劑)能夠降低URTI癥狀的發(fā)生率，并且具有積極的心理影響(如受試者的 心境狀態(tài)評(píng)價(jià)的總體結(jié)果所定義)。另外，自我評(píng)價(jià)問(wèn)卷表明，治療組感受到更少的URTI癥 狀和更好的整體健康狀態(tài)。受試者報(bào)告的URTI癥狀典型的是感冒和流感癥狀和類似于先 前研究中所報(bào)道的癥狀。在當(dāng)前研究中，由受試者補(bǔ)充全部URTI癥狀，并且不試圖對(duì)照癥 狀分?jǐn)?shù)。URTI癥狀的用途是可以由受試者報(bào)告的客觀測(cè)度。健康狀態(tài)問(wèn)題使用0-10的李 克特標(biāo)度，其中o =更糟，10 =更好，以便使受試者評(píng)價(jià)他們的健康狀態(tài)。使用客觀URTI數(shù) 據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)研究的結(jié)果，并將該結(jié)果與更主觀的健康狀態(tài)問(wèn)題進(jìn)行比較。有效數(shù)據(jù)的分析和 解釋取決于所使用方法的有效性。在該研究期間，使用牢固建立起來(lái)的和臨床上有效的技 術(shù)(P0MS調(diào)查，URTI癥狀)，同時(shí)探索更主觀的技術(shù)，例如健康狀態(tài)問(wèn)題。疾病和壓力兩者都會(huì)以肉體和心理方式影響免疫系統(tǒng)。肉體評(píng)價(jià)是常規(guī)的，并且 容易測(cè)定和證實(shí)。由于很難客觀地測(cè)定情緒和感覺(jué)，所以必須使用調(diào)查工具，例如，考慮了 各種心理因素的POMS。POMS方法(其包括65個(gè)基于形容詞的標(biāo)度)已經(jīng)廣泛地用于評(píng)價(jià) 情緒。P0MS調(diào)查可以評(píng)價(jià)受試者總的整體情緒狀態(tài)，并且對(duì)六個(gè)具體情緒和感覺(jué)提供反饋， 例如，緊張_焦慮，憂郁_沮喪，疲勞_惰性，活力_活動(dòng)，紊亂_困惑，和憤怒_敵意。在這種研究中，評(píng)價(jià)了遭受緊張狀況(已經(jīng)報(bào)道其可以導(dǎo)致更高的URTI發(fā)生率(4，24，25))的 受試者的肉體和心理因素。在所有情況中，與安慰劑組的那些受試者相比，給予葡聚糖 的受試者感受到更好的身體健康狀態(tài)和顯著改善的心理狀態(tài)，包括更積極的感覺(jué)。POMS調(diào)查的結(jié)果說(shuō)明，自我給予治療劑量的葡聚糖(每天250和500mg)的受 試者，在2和4周時(shí)間時(shí)，每天給予500mg劑量的受試者感到疲勞降低；而每天給予250mg 劑量的受試者在4周時(shí)間時(shí)顯示了統(tǒng)計(jì)上顯著的反應(yīng)。對(duì)于緊張因素也觀察到類似的結(jié) 果。這可以表明，免疫調(diào)節(jié)劑的更高劑量能夠快速地提高免疫健康狀態(tài)。然而，活力和紊亂 POMS因素沒(méi)有遵循這種趨勢(shì)。對(duì)于兩個(gè)治療組，在四周時(shí)間時(shí)，活力得到提高。對(duì)于兩個(gè) 治療組，在2和4周時(shí)間時(shí)，紊亂因素是顯著的。與此相反，在兩或四周報(bào)告周期的任何一 個(gè)的時(shí)候，憤怒和憂郁因素沒(méi)有顯示統(tǒng)計(jì)顯著性。當(dāng)將該數(shù)據(jù)與身體健康評(píng)價(jià)進(jìn)行比較時(shí)， 該數(shù)據(jù)的解釋并不復(fù)雜。邏輯推測(cè)是，感受URTI癥狀的受試者“感到”比處于健康狀態(tài)的 受試者更糟。反之，使用肉體和心理評(píng)價(jià)兩種技術(shù)，攝取葡聚糖的受試者報(bào)告他們“感 覺(jué)”更好。許多公開和未公開的研究支持口服給予0 -葡聚糖的免疫刺激性能。Vetvicka 等人的研究(26)表明，在感染上武器化的炭疽桿菌的小鼠中，葡聚糖有助于防止炭疽 感染和死亡。額外的研究支持葡聚糖的進(jìn)一步抗細(xì)菌(27)和抗腫瘤(28)性能。在這 種研究中，當(dāng)與安慰劑相比時(shí)，0 -葡聚糖顯示可顯著地改善受試者的身體健康和情緒和感 覺(jué)?？赡艿谋＝『x有許多種，建議應(yīng)該定期地補(bǔ)充葡聚糖。在美國(guó)，在所有的統(tǒng)計(jì) 人口中，肉體和心理壓力和緊張狀況日益常見(jiàn)；因此，消極身心健康環(huán)境每天都在向人們挑 戰(zhàn)。通過(guò)葡聚糖來(lái)加強(qiáng)免疫系統(tǒng)可以對(duì)保持健康狀態(tài)和強(qiáng)勁的積極精神狀態(tài)具有顯著 效果。在本文報(bào)道的研究中，每天給治療組的參加者補(bǔ)充葡聚糖，能夠降低與上呼吸道 感染有關(guān)的癥狀的發(fā)生率，并且能夠改善心理健康狀態(tài)。1. 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IM NaOH和大約0. 5%至0. 6% Triton X-100中，并加熱到 900C，保持大約120分鐘。第三次提取與第二次提取相似，只不過(guò)Triton X-100的濃度大約 為0. 05%，時(shí)間縮短至大約60分鐘。在第四次提取中，將不溶性物質(zhì)再懸浮在大約0. 05% Triton-X 100中，并加熱到75°C，保持大約60分鐘。堿和/或表面活性劑提取可以溶解并除去一些無(wú)關(guān)的酵母細(xì)胞物質(zhì)。堿溶液將蛋 白、核苷酸、甘露聚糖和脂質(zhì)水解。表面活性劑可以使脂質(zhì)的除去增加，這提供了額外的益 處得到改進(jìn)的葡聚糖產(chǎn)品。在純化過(guò)程中的下一步是酸提取，其可以除去糖原。一或多次酸提取是通過(guò)下列 方式實(shí)現(xiàn)的將堿/表面活性劑所提取物質(zhì)的PH值調(diào)節(jié)至大約5和9之間，并在大約70°C 和100°C之間的溫度下，將物質(zhì)在大約0. 05M至大約1. OM乙酸中混合，保持大約30分鐘至 大約12小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將堿/表面活性劑提取物離心之后所剩余的不溶性物質(zhì)再懸 浮在水中，用濃HCl將溶液的pH值調(diào)節(jié)至大約7。將物質(zhì)與足夠的冰醋酸混合，產(chǎn)生0. IM 醋酸溶液，將其加熱至90°C，保持大約5小時(shí)。接下來(lái)，洗滌不溶性物質(zhì)。在典型的洗滌步驟中，在大約室溫下，將物質(zhì)在凈化水 中混合至少大約20分鐘。進(jìn)行兩次水洗。然后收集純化的β-葡聚糖產(chǎn)品。典型地通過(guò) 離心或連續(xù)流動(dòng)離心，進(jìn)行再次收集。此時(shí)，形成純化的顆粒葡聚糖產(chǎn)品。根據(jù)起始原料，產(chǎn)品可以是完整的葡聚糖 顆?；蚱淙魏尾糠值男问健Ａ硗?，可以將大顆粒破碎為較小的顆粒。產(chǎn)品大小的范圍包括 基本上保持體內(nèi)形態(tài)(完整的葡聚糖顆粒)的葡聚糖顆粒至亞微細(xì)粒大小的顆粒。制備完整葡聚糖顆粒的第二種代表性方法包括從酵母或真菌細(xì)胞壁中提取和純 化不溶于堿的完整葡聚糖顆粒。該方法得到的產(chǎn)品保持了 葡聚糖的形態(tài)和結(jié)構(gòu)性能(與體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一樣)。完整葡聚糖的來(lái)源可以是酵母或其它真菌，或包含具有本文所描述性能的葡聚糖 的任何其它來(lái)源。在某些實(shí)施方案中，酵母細(xì)胞是優(yōu)選的葡聚糖來(lái)源。在本方法中使用的 酵母菌株可以是酵母的任何菌株。
通常，上述方法可用于可以用其它母體菌株作為起始原料制備和分離其它變種酵 母菌株。另外，可以使用誘變劑，以便引起突變，例如，化學(xué)誘變劑、照射或其它DNA和重組 操作。可以類似地使用其它選擇或篩選技術(shù)。可以利用本領(lǐng)域已知的方法來(lái)制備酵母細(xì)胞。典型的生長(zhǎng)培養(yǎng)基包括，例如，葡萄 糖、蛋白胨和酵母提取物。通過(guò)典型應(yīng)用于分離生物質(zhì)與液體介質(zhì)的方法，可以采集酵母細(xì) 胞，并且可以將其與生長(zhǎng)培養(yǎng)基分離。這種方法典型地使用固液分離方法，例如過(guò)濾或離 心。在本方法中，可以在中至晚的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期采集細(xì)胞，以便將酵母細(xì)胞中的糖原和殼多糖 的量減到最小。糖原、殼多糖和蛋白可以影響完整葡聚糖顆粒的生物和流體動(dòng)力學(xué)性能。完整葡聚糖顆粒的制備包括用合適濃度的堿水溶液處理酵母，以便將一部分酵 母溶解，并形成堿性氫氧化物不能溶解的、具有主要連接基的完整葡聚糖顆粒。通常使用的 堿是堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉或氫氧化鉀，或同等物。起始原料可以包括從生長(zhǎng)培養(yǎng) 基中分離的酵母。當(dāng)從更小濃度的酵母組合物起始時(shí)，很難在優(yōu)選范圍內(nèi)控制氫氧化物反 應(yīng)物水溶液的使用量和反應(yīng)物的濃度。可以在氫氧化物水溶液中處理酵母細(xì)胞。將酵母細(xì) 胞的胞內(nèi)組成部分和甘露糖蛋白部分溶解在氫氧化物水溶液中，剩下不能溶解的細(xì)胞壁物 質(zhì)，其基本上不含蛋白，并且具有耦合葡聚糖的基本上不變的三維矩陣結(jié)構(gòu)。進(jìn)行該步驟的 優(yōu)選條件導(dǎo)致細(xì)胞壁的甘露聚糖部分溶于氫氧化物水溶液中。胞內(nèi)組成部分水解，并釋放 到可溶解相中。消化的條件是至少使細(xì)胞的主要部分、細(xì)胞壁的三維矩陣結(jié)構(gòu)不遭到破 壞。在具體情況下，基本上所有的細(xì)胞壁葡聚糖保持不變和完整性。在某些實(shí)施方案中，在具有大約0. 1至大約10. 0的初始當(dāng)量濃度的氫氧化物溶液 中，進(jìn)行氫氧化物水溶液消化步驟。典型的氫氧化物溶液包括元素周期表的堿金屬族和堿 土金屬的氫氧化物。合適的氫氧化物水溶液是氫氧化鈉和氫氧化鉀的水溶液。消化可以在 大約20°C至大約121°C的溫度下進(jìn)行，較低溫度時(shí)需要更長(zhǎng)的消化時(shí)間。當(dāng)氫氧化鈉用作 氫氧化物水溶液時(shí)，溫度可以是大約80°C至大約100°C，并且溶液具有從大約0. 75至大約 1.5的當(dāng)量濃度。加入的氫氧化物超過(guò)需要的數(shù)量，因此，不需要隨后加入氫氧化物。通常，每升氫氧化物溶液使用大約10至大約500克干酵母。在某些實(shí)施方案中，氫 氧化物水溶液消化步驟是通過(guò)一系列接觸步驟進(jìn)行的，從而使剩余污染物例如蛋白的量比 只使用一次接觸步驟時(shí)的更少。在某些實(shí)施方案中，合乎需要的是，從細(xì)胞中基本上除去所 有蛋白物質(zhì)。進(jìn)行這種除去過(guò)程應(yīng)該使保留在不能溶解的細(xì)胞壁葡聚糖顆粒中的蛋白達(dá)到 小于百分之一的程度。優(yōu)選，在具有大約2.0至大約6.0的pH值的弱酸溶液中進(jìn)行額外的 提取步驟。典型的弱酸溶液包括鹽酸、用鹽酸調(diào)節(jié)至所需PH值的氯化鈉和乙酸鹽緩沖液。 其它典型的弱酸溶液是在合適緩沖液中的硫酸和醋酸。這種提取步驟優(yōu)選在大約20°C至大 約100°C的溫度下進(jìn)行。如果必要或需要的話，可以進(jìn)一步洗滌和提取葡聚糖顆粒，以便降 低蛋白和污染物水平。處理產(chǎn)品之后，可以將PH值調(diào)節(jié)至大約6. 0至大約7. 8的范圍。依照要求，可以將完整的葡聚糖顆粒進(jìn)一步處理和/或進(jìn)一步純化。例如，可以將 葡聚糖干燥成細(xì)粉末(例如，在烘箱中干燥)；或可以用有機(jī)溶劑(例如，醇、醚、丙酮、甲基乙基酮、氯仿)處理，以便除去任何痕量或有機(jī)可溶物質(zhì)，或用氫氧化物溶液再處理，以便 除去可能存在的額外蛋白或其它雜質(zhì)。 可以利用化學(xué)處理方法將上面制備的完整葡聚糖顆粒進(jìn)行修飾，以便減少 β (1-6)連接基的數(shù)目，并因此改變葡聚糖的性能。按照第一種化學(xué)處理方法，可以用 酸處理完整的葡聚糖顆粒，以便降低所述葡聚糖的流體動(dòng)力學(xué)性能的數(shù)值，這可以由這些 修飾的葡聚糖水溶液的粘度增加而得到證明。對(duì)于可以使用通過(guò)用酸處理葡聚糖顆粒合適 的時(shí)間，從而改變?chǔ)?(1-6)連接基，來(lái)制備改變的完整葡聚糖顆粒的方法。優(yōu)選醋酸，這是 由于它的輕微酸性、容易操作、低毒、價(jià)格低廉和易于獲得，但可以使用其它酸。通常，這些 酸應(yīng)該足夠弱，以便限制β (1-3)連接基的水解。處理是在基本上只影響β (1-6)連接的 葡聚糖的條件下進(jìn)行的。在某些實(shí)施方案中，酸處理是用主要由醋酸或其任何稀釋物(典 型的稀釋劑可以是有機(jī)溶劑或無(wú)機(jī)酸溶液)組成的液體進(jìn)行的。處理是在大約20°C至大 約100°C的溫度下進(jìn)行的，以便除去大約3至大約20%重量的酸溶性物質(zhì)(基于處理之前 的完整葡聚糖顆粒的總重量)。在其它實(shí)施方案中，除去的程度是大約3至大約4%重量。 處理后，形成的某些組合物顯示了改變的流體動(dòng)力學(xué)性能和粘度的提高。按照第二種化學(xué)處理方法，用酶或酸處理完整的葡聚糖顆粒，從而改變?chǔ)?(1-3) 連接基的數(shù)量。根據(jù)酵母菌株，酶處理會(huì)導(dǎo)致粘度降低或粘度提高，但通常改變所得到的葡 聚糖的化學(xué)和流體動(dòng)力學(xué)性能。為了改變?chǔ)?(1-3)連接基和完整葡聚糖顆粒在水懸浮液中 的流體動(dòng)力學(xué)性能，用β (1-3)葡聚糖酶(例如昆布糖酶)處理。酶處理可以在水溶液中 進(jìn)行，該水溶液具有每升大約0. 1至大約10. 0克葡聚糖的濃度?？梢允褂萌魏嗡庑缘钠?聚糖酶，例如昆布糖酶，其是有效和容易得到的。培養(yǎng)時(shí)間可以根據(jù)完整葡聚糖顆粒的濃度 和葡聚糖酶而改變。β (1-3)連接基是抗弱酸例如醋酸的。用強(qiáng)酸或濃酸例如鹽酸(HCl)、 硫酸(HSO)或甲酸處理，可以使β (1-3)連接基水解。酸處理可以在水溶液中進(jìn)行，該水溶 液具有每升大約0. 1至大約10. 0克葡聚糖的濃度。酸處理的時(shí)間可以根據(jù)完整葡聚糖顆 粒的濃度和酸而改變。酸水解可以在大約20°C至大約100°C的溫度下進(jìn)行。通過(guò)控制培養(yǎng)時(shí)間，可以控制得到的產(chǎn)品的化學(xué)和流體動(dòng)力學(xué)性能。例如，對(duì)于具 體用途，例如，用于各種食品，可以精確控制產(chǎn)品粘度。具有改變的連接基的最終處理產(chǎn)品的流體動(dòng)力學(xué)參數(shù)(K)取決于處理時(shí)間，按照 下式K1 =-0. 0021(時(shí)間)+0· 26其中時(shí)間是分鐘；其中時(shí)間小于一小時(shí)。參數(shù)K1直接與相對(duì)粘度相關(guān)(按比例相關(guān))。在水懸浮液的情況下，當(dāng)真實(shí)粘度 按厘泊計(jì)量時(shí)，相對(duì)粘度等于真實(shí)粘度。還提供了制備具有預(yù)定期望粘度的葡聚糖漿液的方法。漿液包括葡聚糖，葡聚糖 濃度是按照下列近似公式的預(yù)定期望粘度的函數(shù)1/濃度=KlX(l/log (相對(duì)粘度))+K2其中，K1=(形狀因數(shù))x(流體動(dòng)力學(xué)體積)；和K2 =(流體動(dòng)力學(xué)體積)/ (最大緊束分?jǐn)?shù))。形狀因子是經(jīng)驗(yàn)測(cè)定值，其描述葡聚糖矩陣在其水相環(huán)境中的形狀。形狀因子是顆粒的長(zhǎng)度寬度比例的函數(shù)，并且可以顯微測(cè)定。流體動(dòng)力學(xué)體積是測(cè)量顆粒懸浮時(shí)所占 據(jù)體積的尺度。這是葡聚糖懸浮液的重要參數(shù)，這在于，其表示葡聚糖矩陣的高含水量。可 以將最大緊束分?jǐn)?shù)描述為可以被填充到單位體積懸浮液中的葡聚糖的最高可得到的體積 分?jǐn)?shù)。還可以使用微粒葡聚糖，并且可以利用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的常規(guī)方 法，從酵母細(xì)胞壁中分離起始原料。用酵母制備葡聚糖的一般方法包括用堿提取，而后用
(Hassid^A, Journal of the AmericanChemical Society，63 :295_298，1941)。 分離凈化的、水不能溶解的β _葡聚糖提取物的改進(jìn)方法公開在美國(guó)專利5，223，491中。制 備完整葡聚糖顆粒的另一種方法公開在美國(guó)專利4，992，540中，將其全部結(jié)合到本文中作 為參考。制備微細(xì)顆粒β-葡聚糖的方法公開在專利5，702，719中，以其全部將其公開內(nèi) 容結(jié)合到本文中作為參考?？梢垣@得平均粒度大約為1. 0微米或更小或大約0. 20微米或 更小的微細(xì)顆粒β-葡聚糖產(chǎn)品。可以通過(guò)機(jī)械法(例如，利用攪拌器、微流控器或球磨機(jī))來(lái)減小微細(xì)顆粒β-葡 聚糖顆粒的大小。例如，使用攪拌器(帶有鈍式葉片)可以減小粒徑，在攪拌器中，將葡聚 糖混合物攪和足夠的時(shí)間，優(yōu)選幾分鐘，以便將顆粒完全研磨至期望的大小，同時(shí)不會(huì)使混 合物過(guò)熱。另一種研磨法包括在具有IOmm不銹鋼研磨球的球磨機(jī)中碾磨葡聚糖混合物。 當(dāng)期望大約0. 20微米或更小的粒徑時(shí)，尤其優(yōu)選后面的研磨法。在研磨之前，優(yōu)選，使葡聚糖混合物通過(guò)一系列篩子，每個(gè)順序的篩子具有比前 一個(gè)篩子更小的網(wǎng)目大小，最后的網(wǎng)目大小大約為80。篩分混合物的目的是從較小顆粒 中分離出更大和更流動(dòng)(course)的葡聚糖顆粒(80網(wǎng)目篩的孔徑大約為0. 007英寸或 0.178mm)。然后按照上述方法將分離的較大顆粒碾碎，并重新篩分為最終80目大小的粒 度。重復(fù)篩分和碾磨過(guò)程，直到獲得最終80目大小的粒度為止。將篩分的顆粒合并，并進(jìn) 一步碾碎，優(yōu)選進(jìn)行至少一小時(shí)，直到獲得期望的粒徑為止，優(yōu)選大約1.0微米或更小，更 優(yōu)選大約0.20微米或更小。在碾磨過(guò)程期間，進(jìn)行細(xì)磨過(guò)的葡聚糖的周期性取樣，并在顯 微鏡上使用測(cè)微計(jì)進(jìn)行測(cè)定。可以用于本發(fā)明的β-葡聚糖的另一種進(jìn)一步處理形式是可溶性β-葡聚糖。 可溶性β-葡聚糖是通過(guò)一系列酸、堿和中性處理步驟、由顆粒β-葡聚糖制備的，得到 三螺旋可溶性葡聚糖制品。制備PGG的方法在本領(lǐng)域是已知的，并且公開在美國(guó)專利 5，322，841,5, 811，542,5, 663，324,5, 633，369 和 5，817，643 和美國(guó)專利申請(qǐng) 12/151，666 和 11/818, 741中。通過(guò)這種方法制備的可溶性葡聚糖是葡萄糖的支化聚合物，以可變比例包 含β (1-3)和β (1-6)連接基，這取決于使用的原始有機(jī)體和確切的工藝條件。PGG-葡聚 糖分子的平均重量通常大約為5，000至500，000道爾頓。適合用于本發(fā)明實(shí)踐的口服制劑包括膠囊，凝膠劑，扁囊劑，片劑，泡騰或非泡騰 粉劑或片劑，粉劑或顆粒劑；在水中或非水液體中的溶液劑或混懸劑；或水包油型液體乳 劑或油包水型乳劑。另外的制劑用于鼻內(nèi)遞送。本發(fā)明的化合物也可以以丸劑、藥糖劑或 糊劑方式提供。通常，制劑是如下制備的使活性組分與液體載體或細(xì)分散的固體載體或兩者均 勻地混合，而后，如果需要的話，使產(chǎn)品成型。基于所選擇的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥物實(shí)踐來(lái)選 擇藥物載體。每種載體必須是“可接受的”，意思是其與制劑的其它組分相容，并且對(duì)受試者無(wú)害。這種載體可以是固體或液體載體，并且通?；谒褂玫慕o藥類型來(lái)選擇載體類 型。合適固體載體的例子包括乳糖、蔗糖、凝膠、瓊脂和松散粉末。合適液體載體的例子包 括水，可藥用脂肪和油，醇或其它有機(jī)溶劑，包括酯，乳劑，糖漿劑或酏劑，混懸劑，溶液劑和 /或混懸劑，和由非泡騰的顆粒劑重組的溶液劑和/或混懸劑，和由泡騰的顆粒劑重組的泡 騰制劑。這種液體載體可以包含，例如，合適的溶劑，防腐劑，乳化劑，懸浮劑，稀釋劑，甜味 齊IJ，增稠劑和熔化劑。優(yōu)選的載體是食用油，例如玉米或菜籽油。聚乙二醇類，例如PEG，也是優(yōu)選的載體。用于口服的制劑可以包含無(wú)毒的可藥用惰性載體，例如乳糖，淀粉，蔗糖，葡萄糖，甲基 纖維素，硬脂酸鎂，磷酸二鈣，硫酸鈣，甘露糖醇，山梨糖醇，環(huán)糊精，環(huán)糊精衍生物，等等。如果需要的話，組合物還可以包含微量的濕潤(rùn)或乳化劑，或PH值緩沖劑。組合物 可以是液體溶液，混懸劑，乳劑，片劑，丸劑，膠囊，持續(xù)釋放制劑或粉劑?？梢耘c傳統(tǒng)粘合劑和載體例如甘油三酯一起將組合物配制為栓劑?？诜?劑可以包含標(biāo)準(zhǔn)載體，例如，藥物等級(jí)的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸鎂，聚乙烯吡 咯烷酮，糖精鈉，纖維素，碳酸鎂，等等。用于吸入的霧化制劑可以包含氯化鈉、糖精 鈉或去水山梨糖醇三油酸酯(sorbitani trioleas)，而在脹罐中通過(guò)壓縮充碳酸氣 制劑的吸入劑可以包含1，1，1，2-四氟乙烷(tetrafluoroethanum)，單氟三氯甲烷 (monofluorotrichloromethanum), 0 M-M Zi^t (tetrafluorodichloroaethanum)或二 氟二氯甲燒(diflurodichloromethanum) ο膠囊或片劑可以容易地配制，并且可以使之便于吞入或咀嚼。片劑可以包含合適 載體、粘合劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、引起流動(dòng)劑或熔化劑。片劑可以通 過(guò)任選與一或多種額外的組份進(jìn)行壓縮或模制來(lái)制備。壓制的片劑可以通過(guò)壓縮自由流動(dòng) 形式的活性組分(例如，粉末，顆粒)來(lái)制備，任選與下列混合粘合劑(例如，凝膠，羥丙基 甲基纖維素)，潤(rùn)滑劑，惰性稀釋劑，防腐劑，崩解劑(例如，羥基乙酸淀粉鈉，交聯(lián)羧甲基纖 維素)，表面活性劑或分散劑。合適的粘合劑包括淀粉，凝膠，天然糖例如葡萄糖或乳 糖，玉米甜味劑，天然和合成膠例如阿拉伯膠、黃芪膠或海藻酸鈉，羧甲纖維素，聚乙二醇， 石蠟，等等.用于這些劑型中的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯 化鈉等等。崩解劑包括，例如，淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等等。模制片可以如 下制備在合適的機(jī)械中，將用惰性液體稀釋劑濕潤(rùn)的粉末活性組分的混合物進(jìn)行模壓。可以任選將片劑包衣或刻痕，并且可以進(jìn)行配制，以便提供活性組分的緩慢或控 制釋放。片劑也可以任選具有腸溶衣，以便在不同于胃的腸管部分中釋放。可以用于配制本發(fā)明口服劑型的示范性的可藥用載體和賦形劑描述在美國(guó) 專利3，903，297 (Robert, 1975年9月2日頒布)中，以其全部結(jié)合到本文中作為參 考。用于制備本發(fā)明中所使用劑型的技術(shù)和組合物描述在下面的參考文獻(xiàn)中7M0dem Pharmaceutics，Chapters 9 andlO (Banker & Rhodes，Editors，1979) ；Lieberman 等 人，PharmaceuticalDosage Forms !Tablets(1981)； 禾口 Ansel， Introduction to PharmaceuticalDosage Forms 2nd Edition (1976)。適于腸胃外給藥的制劑包括與預(yù)定接受者的血液等滲的水和非水制劑；和水與非 水的無(wú)菌混懸劑，其可以包括設(shè)計(jì)的懸浮系統(tǒng)，以便使化合物靶向血液組分或一個(gè)或多個(gè)器官。制劑可以提供在單位劑量或多劑量密封容器中，例如，安瓿瓶或管瓶。臨時(shí)的注射溶液和混懸劑可以用先前描述種類的無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。腸胃外和靜脈內(nèi)形式也可 以包含礦物質(zhì)及其它物質(zhì)，使它們與所選擇的注射或遞送系統(tǒng)的類型相容。
盡管參考具體實(shí)施方案說(shuō)明和描述了本發(fā)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，在不 背離由附加權(quán)利要求所涵蓋的本發(fā)明的精神和范圍的條件下，可以對(duì)其進(jìn)行形式和細(xì)節(jié)上 的各種改變。
權(quán)利要求
在有壓力的患者中減輕上呼吸道感染癥狀的方法，該方法包括給予患者有效量的β-葡聚糖；其中患者報(bào)告了與上呼吸道感染有關(guān)的癥狀得到減輕。
2.提高有壓力患者心理健康的方法，該方法包括 給予患者有效量的β“葡聚糖；其中患者報(bào)告了心理健康得到提高。
全文摘要
本發(fā)明進(jìn)行了涉及安慰劑對(duì)照的雙盲設(shè)計(jì)的研究，以便評(píng)價(jià)β-葡聚糖組合物對(duì)上呼吸道感染和心理健康的效果。在這些研究的報(bào)道周期期間，基于POMS調(diào)查，治療組中的受試者具有更少的URTI癥狀、更好的整體健康狀況和更積極的心理評(píng)價(jià)。
文檔編號(hào)A61K31/716GK101873860SQ200880117733
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2008年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日
發(fā)明者D·科克斯, S·塔爾波特 申請(qǐng)人:生物高聚物工程公司Dba生物治療公司