專利名稱：包含燕麥蒽酰胺的組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于治療動物的皮膚疾病或狀況(condition)或變態(tài)反應(allergy) 的藥物組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及用于治療動物的皮膚疾病或狀況的包含治療有效 量的一種或多種燕麥蒽酰胺(avenanthramide)的藥物組合物，以及使用這些組合物的方法。本發(fā)明涉及具有可用于個人護理、化妝品、營養(yǎng)品(nutraceutical)和制藥工業(yè) 的用途的配方的溶解的液體燕麥提取物或膠質(zhì)燕麥片(colloidal oatmeal)的制備。更 具體地說，本發(fā)明的燕麥提取物組合物或膠質(zhì)燕麥片可用作施用于皮膚的或食用的抗刺激 劑、抗氧化劑和皮膚保護劑。
背景技術：
燕麥(Avena sativa)尤其是膠質(zhì)燕麥片懸浮物歷史上已被用作治療特應性皮炎 的輔劑。為了便于該谷物在醫(yī)學和化妝品應用中的使用，理想的是從燕麥提取有效成分。燕麥衍生品，如膠質(zhì)燕麥片、水解的燕麥蛋白、燕麥淀粉和葡聚糖作為在使用 后提供光滑的感覺的皮膚保護劑已用于化妝品和制藥工業(yè)中。具體來說，燕麥衍生品中的 碳水化合物和蛋白質(zhì)已知作為保護劑發(fā)揮幫助增強皮膚的屏障性能從而舒緩皮膚的功能。 燕麥葡聚糖和脂質(zhì)也已知作為潤膚劑發(fā)揮潤滑和舒緩皮膚的功能。例如，膠質(zhì)燕麥片 已用于條皂、痱子粉(bath powder)、洗劑和敷劑，以治療由各種原因受到損傷、刺激或遭受 痛苦的皮膚。然而，一些燕麥衍生品(例如，膠質(zhì)燕麥片)不完全溶于水溶液中，因而在皮 膚和其它表面上遺留下不需要的殘留物。美國專利5，219，340描述了一種設計用于保留膠 質(zhì)燕麥片不溶性組分的布質(zhì)涂敷器。此外，酸水解的燕麥蛋白已知具有可能會不利地影響一些消費者對產(chǎn)品的接受性 的強烈氣味。用乙醇、乙二醇、醚、酯、混合物及其水性混合物進行提取制備的液體燕麥提取物 通常是不穩(wěn)定的材料，其如果不進行乳化，很容易分離成油相和水相，其可進一步分離為可 溶性相和不溶性相。醇溶性谷物蛋白與天然存在于谷物中的各種酚類化合物相互作用，形 成冷藏混濁或蛋白質(zhì)混濁。這些混濁將導致提取物變得混濁。隨著時間的推移，混濁會凝 結而產(chǎn)生不溶性沉淀物。Paton(1995)Cosmetics and Toiletries 110 :63描述了燕麥提取物的美容用途， 并提供了化妝品配方的信息。所描述的燕麥提取物0STARARRTVEEN 是通過獲得燕麥麩的 粗碎(pearling)方法由燕麥產(chǎn)生，其然后用溶劑萃取。木炭用于該方法以澄清該制備物。 產(chǎn)物通常是暗褐色、非均質(zhì)的、雙相提取物。該產(chǎn)物的用途由于其不穩(wěn)定性導致性能變化而 受到限制。該產(chǎn)品不能進行消毒，從而由于非烘干的、不穩(wěn)定的燕麥麩而導致高的微生物負 荷。據(jù)說該燕麥提取物具有抗紅斑性能，但是，并沒有確定其活性成分。Collins等人(美國專利5，169，660)描述了使用含水酒精(83% w/w)提取方法 從谷物制備麩皮和通過離子交換色譜法從廢物回收粗制的副產(chǎn)物。所述方法不使用PH預 處理或膜過濾，因而導致從廢物只回收少量的副產(chǎn)物。其中沒有描述在美容應用中的效用，
5且不能實現(xiàn)所主張的制藥用途。此外，Collins等人所描述的離子交換色譜法可能使一些 燕麥蒽酰胺降解，從而降低這些化合物的整體回收百分率。Collins在Oats :Chemistry and technology (1986)Ed. Webster MCCSt. Paul,MN 的第227-286頁中描述了燕麥酚類化合物的結構、存在和植物學功能。但沒有公開這些化 合物的提取方法和在化妝品和醫(yī)療領域中的潛在用途。Onitsuka等人(美國專利5，716，605)描述燕麥的乙二醇提取物在頭發(fā)和頭皮的 治療和護理中的用途。所述的提取方法與本發(fā)明所述的方法不同。Cioca等人(美國專利5，552，135)描述了改進的包含谷物植物提取物的防曬組合 物。用氯仿或乙醇進行初步提取，并進一步在蒸發(fā)濃縮后在乙醇中加工。Hammonds等人(PCT/US97/10724)描述了含有燕麥提取物的纖維性片狀材料，以 向使用者的皮膚提供舒緩的效果。所述的燕麥提取物通過本領域的技術人員已知的方法用 提取劑處理而制備。其中沒有公開燕麥提取物的制備方法；在優(yōu)選模式中，所述的產(chǎn)品使用 特定濃度的0STAR ARRIVEEN 。Zimmerman (美國專利5，888，521)描述了局部使用的由羥基羧酸和燕麥提取物組 成的組合物，也涉及提高皮膚脫落率(rate of skindesquamation)的方法。但其中沒有公 開燕麥提取物的制備方法；在優(yōu)選模式中，所述的產(chǎn)品使用特定濃度的0STAR ARRIVEEN 。Roger等人(美國專利5，026，548)描述了用作巧克力中的降粘劑或者食品和其它 行業(yè)中的乳化劑、表面活性劑或泡末穩(wěn)定劑的磷脂表面活性劑，其通過使用醇(諸如乙醇 或丙醇)提取燕麥，用甲醇提取上述醇提取物并蒸發(fā)甲醇來制備。Targan (美國專利5，468，491)描述一種制備水性的燕麥漿的方法，包括酶消化、 蒸煮(cooking)、通過燕麥床過濾和濃縮以產(chǎn)生由80%糖和20%水組成的提取物。其用途 表示為香料、顏料、甜味劑和/或質(zhì)地增強劑(texture enhancer)。該組合物不同于本申請 所述的液體燕麥提取物。Rouanet等人(PCT/FR98/00826)描述了一種制造白色膠質(zhì)燕麥固體制劑的方法， 包括以下步驟使用培育的燕麥種子；通過至少一種操作使其穩(wěn)定，從而將干燥蒸氣注入， 接著突然冷卻，優(yōu)選在大約室溫的溫度下；固定并干燥；破碎并除去麩皮；微粒的尺寸選 擇。Vallet Mas等人(EP 0661047)描述了組合局部抗組胺劑與固體燕麥粉的模組合 以形成用于治療瘙癢(itching)、減輕炎癥及便于在作用區(qū)域涂敷的乳劑。其中沒有提及燕 麥提取物的抗刺激能力。Kovacs(EP 0282002)描述了蕁麻(蕁麻屬)和燕麥提取物的組合作為食品添加 劑或藥物制劑的用途。制備燕麥提取物的方法描述為“經(jīng)典方法”，且沒有提供可實現(xiàn)的細 節(jié)。Lawrence (美國專利5，573，785)描述了通過在水中分散由大約4重量％至6重 量％的0 -葡聚糖、大約1重量％至5重量％的脂肪、大約80重量％至94重量％的碳水化 合物和小于8重量％的蛋白質(zhì)組成的水溶性纖維產(chǎn)生的源自燕麥的皮膚調(diào)理化妝品成分。 其中沒有提供有關抗刺激性和減少發(fā)紅的數(shù)據(jù)。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于治療動物的皮膚疾病或狀況或變態(tài)反應的藥物組合物。更具體地
6說，本發(fā)明涉及用于治療動物的皮膚疾病或狀況的包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰 胺的藥物組合物，以及使用這些組合物的方法。第一方面，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防與例如動物的外寄生生物感染 (infection)或侵染(infestation)相關的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺 激或變態(tài)反應的方法，包括向動物的皮膚施用包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺和 藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥物組合物。第二方面，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防與例如動物的外寄生生物感染或侵 染相關的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺激或變態(tài)反應的方法，包括向動 物的皮膚施用包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺、治療有效量的外寄生生物殺滅劑 (如殺蟲劑)和藥學上可接受的稀釋劑或載體的治療/殺寄生生物的藥物組合物。第三方面，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防與例如動物的外寄生生物感染或侵 染和動物的內(nèi)寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺 激或變態(tài)反應的方法，包括向動物的皮膚施用包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺、 治療有效量的外寄生生物殺滅劑(如殺蟲劑)、治療有效量的內(nèi)寄生生物殺滅劑(如驅蠕蟲 劑)和藥學上可接受的稀釋劑或載體的治療/殺寄生生物的藥物組合物。第四方面，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防與例如動物的外寄生生物感染或侵 染相關的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺激或變態(tài)反應的治療藥物組合物， 包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺和藥學上可接受的稀釋劑或載體。第五方面，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防與例如動物的外寄生生物感染或侵 染相關的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺激或變態(tài)反應的治療/殺寄生生 物的藥物組合物，包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺、治療有效量的外寄生生物殺 滅劑(如殺蟲劑)和藥學上可接受的稀釋劑或載體。第六個方面，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防與例如動物的外寄生生物感染或 侵染和動物的內(nèi)寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、 刺激或變態(tài)反應的治療/殺寄生生物的藥物組合物，包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽 酰胺、治療有效量的外寄生生物殺滅劑(如殺蟲劑)、治療有效量的內(nèi)寄生生物殺滅劑(如 驅蠕蟲劑)和藥學上可接受的稀釋劑或載體。在上述定義的方法和藥物組合物的一個實施例中，與外寄生生物感染或侵染相關 的變態(tài)反應是跳蚤過敏性皮炎。在另一個實施例中，本發(fā)明的藥物組合物可進一步包含治療有效量的谷物葡 聚糖和/或一種或多種其它抗炎劑。上述定義的藥物組合物中的一種或多種燕麥蒽酰胺可以由包括以下步驟的方法 制備a.磨碎(milling)完整的燕麥，b.用溶劑提取獲得的燕麥片或磨碎的燕麥部分，c.調(diào)節(jié)獲得的燕麥提取物的pH值到< 4. 0，d. pH < 4. 0的燕麥提取物通過< 104MWC0的膜進行膜過濾。在進一步的實施例中，一種或多種燕麥蒽酰胺可以按以下濃度存在于本發(fā)明的藥 物組合物中大約0. 0001至大約375ppm或其間的任何值或子范圍、0. 001至大約375ppm
7或其間的任何值或子范圍、大約0. 0001至大約150ppm其間的任何值或子范圍、大約0. 001 至大約150ppm或其間的任何值或子范圍、大約0. 01至大約150ppm或其間的任何值或子范 圍、大約0. 01至大約50ppm或其間的任何值或子范圍、大約0. 3至大約15ppm或其間的任 何值或子范圍、或大約1. 5至大約4. 5ppm或任其間的任何值或子范圍。本發(fā)明的藥物組合物可以包含大約0. 1重量％至大約25重量％或其間的任何值 或子范圍、或大約1重量％至大約10重量％或其間的任何值或子范圍的燕麥提取物，該燕 麥提取物含有基于燕麥提取物的大約1至大約1500ppm或其間的任何值或子范圍、或大約 3至大約450ppm或其間的任何值或子范圍的濃度的一種或多種燕麥蒽酰胺。本發(fā)明的藥物組合物中的谷物葡聚糖可以是大約0.001重量％至大約1重 量％或其間的任何值或子范圍、大約0. 01重量％至大約0. 8重量％或其間的任何值或子范 圍、或大約0. 1重量％至大約0. 5重量％或其間的任何值或子范圍。此外，本發(fā)明的治療/殺寄生生物的組合物中存在的外和/或內(nèi)寄生生物殺滅劑 的量可以是大約0. 001重量％至大約20重量％或其間的任何值或子范圍、大約2重量％至 大約15重量％或其間的任何值或子范圍、或大約5重量％至大約10重量％或其間的任何 值或子范圍。本發(fā)明的治療/殺寄生生物劑的優(yōu)勢在于它們可以同時治療動物皮膚的外寄生 生物感染或侵染的癥狀和殺死或控制造成這些癥狀的外寄生生物。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及用于治療動物的皮膚疾病或狀況或變態(tài)反應的藥物組合物。更具體地 說，本發(fā)明涉及用于治療動物的皮膚疾病或狀況的包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰 胺的藥物組合物，以及使用這些組合物的方法。除非另有說明，本發(fā)明的實施采用本領域技術人員能力范圍內(nèi)的化學、谷物化學、 化妝品化學、藥學和生物化學的常規(guī)方法。本文在上下文中引證的所有出版物、專利和專利申請通過引用完整引入本文中。如在本說明書和附加的權利要求中使用的單數(shù)形式“一”(“a")、“一 個”(”an")和“該”(“the")包括復數(shù)指代，除非有內(nèi)容明確表明并非如此。因此，術 語“燕麥蒽酰胺”可以包含燕麥蒽酰胺組中的多個成員。定義描述本發(fā)明時，采用下列術語，并如下定義。單數(shù)或復數(shù)形式的“燕麥蒽酰胺”指燕麥(Collins. J.Agric.Food Chem. 37 60-66 (1989))、康乃馨和蝴蝶卵中發(fā)現(xiàn)的超過40種天然鄰氨基苯甲酸衍生物組的成員且 是谷物特有的，或如美國專利申請公布2006/0089413所述的合成的燕麥蒽酰胺，或如在 例如W02006/087393中描述的合成的燕麥蒽酰胺衍生物，通過引用將該文獻的公開內(nèi)容 結合入本文。燕麥蒽酰胺的合成方法如美國專利6，096，770和6，127，392以及日本專利 J60019-754-A和匈牙利專利HU 200996B中所述，通過引用將該文獻的公開內(nèi)容結合入本 文。命名遵循 Oats :Chemistry and technology (1986) Ed. Webster AACC St.Paul.MN 第 227-286頁所述的規(guī)則，具體燕麥蒽酰胺化合物由前綴“AF”加數(shù)字表示，例如AF_1、AF_2和 AF-6，如下面所示。
“燕麥片”指碾碎或磨碎的全裸露(無殼的)燕麥或去殼燕麥粒的產(chǎn)物?！把帑滬煛敝改ニ槿ぱ帑溋；蚰雺旱难帑?，并通過篩分、篩選和/或其它適當方式 將產(chǎn)生的燕麥片分離成多個部分的產(chǎn)物，燕麥麩部分不超過起始材料的50%，并具有至少 5.5% (基于干重)的總葡聚糖含量和至少16.0%的總膳食纖維含量。“燕麥粉”指磨碎去殼燕麥?；蚰雺旱难帑湶⑼ㄟ^篩分、篩選和/或其它適當方式 將產(chǎn)生的燕麥片分離成為面粉部分的產(chǎn)物，其完全通過100目的篩?！俺瑸V(UF) ”指切向過濾的過程，其中溶質(zhì)被膜保留，膜的參數(shù)是基于分子量?！胺礉B透(R0) ”指切向過濾的過程，其中水和/或低分子量溶劑(例如乙醇)流過 膜從而濃縮滲余物(Retentate)。“膜過濾(MF)”指過濾過程，其中溶質(zhì)被膜保留，膜的參數(shù)是基于分子量。超濾和 反滲透是膜過濾的實例。
數(shù)物質(zhì)。
/平方米
‘截留分子量(MWC0) ”是指在指定的MWC0之上，該膜將截留具有該分子量的大多
‘滲透物(Permeate) ”指通過超濾/反滲透膜的含有溶質(zhì)的流體。 ‘滲余物”指超濾/反滲透膜截留的含有溶質(zhì)的流體。
“流量(Flow)”指單位時間通過指定膜面積的體積過濾率(流速)。單位通常是升 小時(LMH)。
‘滲濾”指通過以等于超濾速率的速度加入新鮮溶劑從溶液回收低濃度的溶質(zhì)
(< MWC0)的有效方法。以恒定體積，從滲余物除去滲透溶質(zhì)?；厥章?rate of recovery)
9是超濾速率(UF rate)的函數(shù)，且與滲透溶質(zhì)的濃度無關。“膜污染(Membrane fouling) ”或“濃差極化”指截留或吸附的材料積聚在膜的表面上。“濃縮”指被截的滲透溶質(zhì)積聚在膜的表面上。“回收百分比”指以進料流中存在量的百分比表示的所想要的溶質(zhì)的量。“谷物”指幾種谷物(例如但不限于大麥、燕麥、小麥、黑麥、高粱、小米和玉米的栽 培品種)中的任一種?！捌暇厶恰敝竷H由葡萄糖組成的同聚多糖?！肮任锲暇厶恰敝笍墓任飦碓吹玫降木哂? (1-3)_連接的吡喃葡萄糖骨架或 3 (1-4)-連接的吡喃葡萄糖骨架或混合的0 (1-3) 0 (1-4)-連接的吡喃葡萄糖骨架的葡聚糖?！皠游铩敝敢资芡饧纳锘騼?nèi)寄生生物感染或侵染的動物，例如，如貓、狗、綿羊、 山羊、?；蛉说膭游?，或者鳥?！巴饧纳锔腥净蚯秩尽敝赣缮钤趧游锏钠つw上或皮膚內(nèi)的生物體導致 的感染或侵染，如來自吸虱(Anoplura)亞目的生物，例如，血虱屬的種(Haematopinus spp.)、長顎風屬的種(Linognathus spp.)、管風屬的種(Solenopotes spp.)、風屬的 種(Pediculus spp.)、陰虱屬的種(Pthirus spp.)；來自食毛目(Mallophaga)的生物， 例如，Trimenoponspp.、禽風屬的禾中(Menopon spp.)、Eomenacanthus spp 、朿lj風屬的禾中 (Menacanthus spp. )、口爵HM的禾中(Trichodectes spp.)、咨苗習習HM的禾中(Felicola spp.)、 畜虱屬的種(Damalinea spp.)、牛羽虱屬的種(Bovicolaspp)；來自雙翅目(Diptera) 的生物，例如，斑虻屬的種(Chrysops spp.)、牛虻屬的種(Tabanus spp.)、家蠅屬的種 (Musca spp.)、齒股蠅屬的種(Hydrotaea spp.)、腐蠅屬的種(Muscina spp.)、血喙蠅屬 的種(Haematobosca spp.)、黑角蠅屬的種(Haematobia spp.)、刺蠅屬的種(Stomoxys spp.)、廁蠅屬的種(Fannia spp.)、舌蠅屬的種(Glossina spp.)、綠蠅屬的種(Lucilia spp.)、麗蠅屬的種(Cal 1 iphora spp.)、燥蠅屬的種(Auchmeromyia spp.)、瘤蠅屬的 禾中(Cordylobia spp. )、H M 白勺禾中(Cochliomyia spp. )、 t M 白勺禾中(Chrysomyia spp.)、麻蠅屬的種(Sarcophaga spp.)、污蠅屬的種(ffohlfartia spp.)、胃蠅屬的種 (Gasterophilus spp. ) > Oesteromyia spp.、月中妮屬的禾中(Oedemagena spp.)、牛皮妮屬 的禾中(Hypoderma spp. )、Oestuus spp. 、鼻狂蠅屬的種(Rhinoestrusspp.)、蜱蠅屬的種 (Melophagus spp.)、風蜆屬的禾中(Hippobosca spp.)；或來自圣目(Siphonaptera)的 生物，例如，櫛頭蚤屬的種(Ctenoc印halidesspp.)、冠蚤屬的種(Echidnophaga spp.)、 角葉蚤屬的種(Ceratophyllusspp.)。特別的例子包括跳蚤(貓蚤(Ctenoc印halides felis)、犬圣(Ctenocephalides canis)、t節(jié)頭圣屬(Ctenocephalides sp.)等)，蝶(扇 頭蝶屬(Rhipic 印 halus sp.)、硬蝶屬(Ixodes sp.)、革蝶屬(Dermacentorsp.)、鈍目艮 蝶屬(Amblyoma sp.)、長角血蝶(Haemaphysalis longiconis)禾口微小牛蝶(Boophilus microplus)等)、螨蟲(月旨螨屬(Demodex sp.)、擠螨屬(Sarcoptes sp.)、耳螨屬 (Otodectes sp.)等)、虱子(嚙毛虱屬(Trichodectes sp.)、姬螯螨屬(Cheyletiella 8口.)、毛風屬(Lignonathussp.)等)，岐子(伊蚊屬(Aedes sp.)、庫岐屬(Culux sp.)、尖 音庫蚊(Culex pipiens)、按蚊屬(Anopheles sp.)等)和蒼蠅(角蠅屬(Hematobiasp.)、擾血蠅(Haematobia irritans)、家蠅屬(Musca sp.)、家蠅(Muscadomestica)、黑邊家蠅 (Musca hervei)、北棲家蠅(Musca bezzi)、刺蠅屬(Stomoxys sp.)、錐蠅屬(Coclyomia sp.)等)?！皟?nèi)寄生生物感染或侵染”指由生存于動物的組織或血流中的生物導致的感染或 侵染，如蛔蟲(例如，犬弓蛔蟲(Toxocara canis)、獅弓蛔蟲(Toxascaris leonine))、絳 蟲(例如，犬復孔絳蟲(Dipylidiumcaninum)、豆狀帶絳蟲(Taenia pisiformis)、細粒棘球 絳蟲(Echinococcusgranulosus)、多房棘球絳蟲(E. multilocularis))、鞭蟲(whipworms) (例如，狐毛首線蟲(Trichuris vulpis)、風鈴草毛首線蟲(T. campanula)、有齒毛首線蟲 (T. serrata))、鉤蟲(例如，犬鉤蟲(Ancylostoma caninum)、貓鉤蟲(A. braziliense) > 管形鉤口線蟲(A. tubaeforme)、窄頭鉤蟲(Uncinaria stenoc印hala))、惡絲蟲 (heartworms)(例如，犬惡絲蟲(Difilaria immitis))、捻轉血矛線蟲(stomach worms) (例如，泡翼線蟲屬的種(Physaloptera spp.))和微觀寄生蟲(例如，球蟲屬(Coccidia), 賈第蟲屬(Giardia)和類圓線蟲屬的種(Strongloides spp.))。本發(fā)明提供了用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況、 炎癥、刺激或變態(tài)反應的治療和治療/殺寄生生物的組合物。特別地，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關 的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺激或變態(tài)反應的治療藥物組合物，包含治 療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺、治療有效量的任選的外寄生生物殺滅劑和藥學上可接 受的稀釋劑或載體。此外，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染和動物 的內(nèi)寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺激或變態(tài) 反應的治療/殺寄生生物的藥物組合物，包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺、治療 有效量的外寄生生物殺滅劑、治療有效量的內(nèi)寄生生物殺滅劑(如驅蠕蟲劑)和藥學上可 接受的稀釋劑或載體。本發(fā)明的藥物組合物，可以以以下形式施用于動物泡沫洗發(fā)劑、浸漬液(dip)、 氣溶膠噴霧劑、泵噴霧劑、洗劑、濃縮液(用于例如點滴處理(spot-on treatment))、稀溶 液(用于例如噴霧處理)、凝膠、洗液、軟膏劑、乳劑、水包油或油包水型乳液、懸浮液、粉末 或任何其它適于向動物施用的局部組合物。此外，可以逐滴地或涂刷、傾倒、點滴、擦抹、噴 霧、潑濺該組合物于動物或通過浸浴或沐浴向動物施用。在特定的實施例中，可以通過傾倒、滴加或點滴藥物于動物皮膚或毛皮的小區(qū)域 (例如，在頭的底部、頸部、肩胛骨之間或動物的背部)而施用本發(fā)明的藥物組合物。施用 后，組合物的成分隨后可以在動物的毛皮或皮膚上轉移或擴展，以在動物皮膚的廣泛表面 上提供覆蓋，并向動物皮膚上的患處(affected site)遞送存在于組合物中的燕麥蒽酰胺、 任何殺寄生生物劑和谷物葡聚糖?？梢栽诓焕钠つw狀況開始前或這種狀況變得明顯 后施用該組合物。如果通過傾倒或點滴向動物毛皮或皮膚的限定區(qū)域施用組合物，組合物可以包 含載體(例如擴散油)以利于組合物中存在的燕麥蒽酰胺和任何其它活性成分在動物的 皮膚表面上的分布。合適的載體的例子包括，但不限于生理上可以接受的植物油或合成 油(例如，橄欖油、花生油、芝麻油、松油、亞麻子油或蓖麻油)、雙丙二醇壬酸酯、石蠟油、硅
11油、油性溶液；醇和異丙醇溶液，例如，2-辛基月桂醇或油醇的溶液；一元羧酸酯的溶液，如 肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、月桂酸乙二酸酯、油酸油酯、油酸癸酯、月桂酸己酯、具有 C12-C18鏈長度的飽和脂肪醇的癸酸酯；二元羧酸酯的溶液，如鄰苯二甲酸二丁酯、間苯二 甲酸二異丙酯、己二酸二異丙酯或己二酸二(正丁基)酯，或脂肪酸酯的溶液，例如，二醇 類，甘油三酯的溶液。己 iiE 日月(Internal study “ A double blind Clinical Evaluation of theEfficacy of Two Oat-protein Shampoos" by Pukay,B. P. ,Baker,B. ,Hannigan,M.禾口 Purcell, T.)向動物的皮膚應用5_13. 3ng/cm2的燕麥蒽酰胺導致如搔癢癥的皮膚狀況和 其它皮膚問題的緩解。下表列出了應該應用于狗的皮膚上以達到皮膚表面5ng燕麥蒽酰胺(AV)/cm2或 13. 3ng AV/cm2的覆蓋率(coverage)的包含5、10或20ppm的AV的治療或治療/殺寄生生
物藥物組合物的體積。 如上所述，施用的液體組合物的體積可以很容易地通過調(diào)整組合物中的燕麥蒽酰 胺的濃度而改變。列出的5ppm AV液體組合物的體積類似于市售的局部殺蟲組合物用于類 似體重的狗的推薦的施用體積。對于噴霧應用，本發(fā)明的治療或治療/殺寄生生物的藥物組合物中的燕麥蒽酰胺 的濃度應降低以使得適量的組合物可以從噴霧器(例如，泵或噴霧劑)向動物皮膚的患處 應用。例如，如果5千克體重的犬的皮膚患處面積為10x10cm2，應該應用的治療或治療/殺 寄生生物的藥物組合物的體積是0. lmL的5ppm AV溶液，以提供0. 0005mg的AV。這一體 積(0. lmL)對于通過噴霧有效地應用是過小的體積。因此，這一體積應該稀釋成更大的體 積，例如5mL，以產(chǎn)生具有0. lppm燕麥蒽酰胺濃度的組合物，使得組合物能夠更容易地應用 于動物皮膚的整個患處面積。對于局部應用(例如，點滴處理)，藥物組合物中應該存在較 高濃度的燕麥蒽酰胺(例如，10-20ppm)?？梢酝ㄟ^用藥學上可接受的稀釋劑和/或載體稀釋含有一種或多種燕麥蒽酰胺 的燕麥提取物或膠質(zhì)燕麥片，例如，本申請中所描述的燕麥提取物或膠質(zhì)燕麥片或市售的 燕麥提取物或膠質(zhì)燕麥片(例如，Ceaprolnc.的lOOpprn燕麥蒽酰胺提取物)，或一種或多種分離的天然或合成的燕麥蒽酰胺以形成溶液、懸浮液或乳劑而制備本發(fā)明的治療組合 物。一般可以通過向包含一種或多種外寄生生物殺滅劑和/或一種或多種內(nèi)寄生生 物殺滅劑的市售殺寄生生物的組合物中添加包含一種或多種燕麥蒽酰胺的組合物、燕麥提 取物、燕麥提取物濃縮物或膠質(zhì)燕麥片(如本申請所描述的治療組合物、燕麥提取物或膠 質(zhì)燕麥片)制備本發(fā)明的治療/殺寄生生物的藥物組合物。如果包含燕麥蒽酰胺的組合 物、或含有一種或多種燕麥蒽酰胺的燕麥提取物、燕麥提取濃縮物或膠質(zhì)燕麥片是水基的， 則可能需要將其縮減為殘留物或將其凍干成粉末，以使得它所包含的一種或多種燕麥蒽酰 胺完全溶解于市售的殺寄生生物組合物中?？蛇x擇地，可以通過將一種或多種燕麥蒽酰胺(分離的產(chǎn)物的形式，或作為燕麥 提取物、濃縮的燕麥提取物、膠質(zhì)燕麥片或其干燥的、凍干的或體積縮減形式)與一種或多 種外寄生生物殺滅劑和/或一種或多種內(nèi)寄生生物殺滅劑及合適的稀釋劑(如溶劑)和/ 或載體結合以形成溶液、懸浮液或乳劑而制備治療/殺寄生生物的組合物。如果包含燕麥 蒽酰胺的組合物、或含有一種或多種燕麥蒽酰胺的燕麥提取物、燕麥提取濃縮物或膠質(zhì)燕 麥片是水基的，則可能需要將其縮減為殘留物或將其凍干成粉末，以使得一種或多種燕麥 蒽酰胺完全溶解于用于溶解一種或多種外寄生生物殺滅劑和/或一種或多種內(nèi)寄生生物 殺滅劑的溶劑中。可以向本發(fā)明的治療或治療/殺寄生生物的藥物組合物中添加其它成分，包括 但不限于，增溶劑，例如，聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯蓖麻油或聚氧乙烯失水山梨醇酯；酸； 堿；緩沖鹽；抗氧化劑；防腐劑，如苯甲醇、三氯丁醇、對羥基苯甲酸酯、正丁醇；香料；著色 劑；表面活性劑；潤濕劑；光穩(wěn)定劑和增粘劑，如纖維素衍生物、淀粉衍生物、聚丙烯酸酯或 天然聚合物如藻酸鹽或明膠?？梢酝ㄟ^向以上文所述的方式制備的溶液中加入增稠劑，將本發(fā)明的治療/殺寄 生生物的組合物制備成凝膠的形式。合適的增稠劑的例子包括但不限于，無機增稠劑，如膨 潤土、硅膠或單硬脂酸鋁；或有機增稠劑，如纖維素衍生物、聚乙烯醇類及其共聚物，丙烯酸 酯和甲基丙烯酸酯?？梢酝ㄟ^在疏水相和親水相之一中溶解一種或多種燕麥蒽酰胺及一種或多種外 寄生生物殺滅劑和/或一種或多種內(nèi)寄生生物殺滅劑，并在合適的乳化劑和任選的其它輔 劑，如著色劑、吸收促進劑、防腐劑、抗氧化劑(如焦亞硫酸鉀、抗壞血酸、丁基羥甲苯、丁基 羥基茴香醚(butylhydroxyanisole)或維生素E)、光穩(wěn)定劑(如二苯甲酮或2_苯基苯并咪 唑-5-磺酸(novantisolic acid))及增加粘度的物質(zhì)和穩(wěn)定乳液的物質(zhì)，例如羧甲基纖維 素、甲基纖維素和其它纖維素和淀粉衍生物、聚丙烯酸酯、藻酸鹽、明膠、阿拉伯樹膠、聚乙 烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、甲基乙烯基醚和馬來酸酐的共聚物、聚乙二醇、蠟、硅膠體二氧化或 上面提及物質(zhì)的混合物，的存在下，使該相與疏水相和親水相中另一種的溶劑進行均勻化 處理，而將本發(fā)明的治療/殺寄生生物的組合物制備成乳液的形式?？梢杂糜诒景l(fā)明的治療/殺寄生生物的組合物中的外寄生生物殺滅劑的非限 制性的例子包括氟蟲腈(fipronil)、吡蟲啉(imidacloprid)、芐氯菊酯(permethrin) (只用于犬)、苯醚菊酯(phenothrin)、呋蟲胺(dinotefuran)、啶蟲脈(acetamiprid)和 氰氟蟲腙(metaflumizone)。還可以包括保幼激素模擬物(如烯蟲丙酯(methoprene)
13或吡丙醚(pyriproxyfen))以殺滅跳蚤卵。可以與本發(fā)明的包含一種或多種燕麥蒽酰 胺的治療組合物結合或組合使用的殺寄生生物的組合物的具體例子包括但不限于美國 專利 7，271，184,7, 132，448,6, 998，131,6, 962，713,6, 933，318,6, 896，891,6, 759，407、 6，716，442,6，685，954,6，613，783,6，538，013,6，495，573,6，482，425,6，429，206, 6，426，333,6, 329，374,6, 232，328,6, 001，858,6, 096，329,5, 612，047 和 4，395，407 中所描 述的那些，通過引用將該文獻的公開內(nèi)容結合入本文。內(nèi)寄生生物殺滅劑的非限制性的例子包括莫西菌素(moxidectin)、吡喹 If (praziquantel)、_ U密 F (pyrantel pamoate)、^: $ P坐(fenbendazole) > # |ll ^； (febantel)、米爾倍霉素月虧(milbemycin oxime)、emodepside、伊維菌素(ivermectin) 拉克丁(selamectin)和多拉克汀(doramectin)(最后四個屬于大環(huán)內(nèi)酯類)。美國專利申請公布2006/0062817 (通過引用將該文獻的公開內(nèi)容結合入本文)描 述了外和內(nèi)寄生生物殺滅劑的組成和組合，其可以用作本發(fā)明的治療組合物的部分或與本 發(fā)明的治療組合物結合。或者，上述的燕麥蒽酰胺、外寄生生物殺滅劑和外寄生生物殺滅劑可以作為單獨 地、順序地或同時施用的單獨組合物的組合提供。因此，本發(fā)明還提供了一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關 的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺激或變態(tài)反應的治療/殺寄生生物的藥 物組合，包括含有治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺和藥學上可接受的稀釋劑或載體的 第一藥物組合物和含有治療有效量的外寄生生物殺滅劑和藥學上可接受的稀釋劑或載體 的第二藥物組合物，其中，所述第一和第二藥物組合物單獨地、順序地或同時施用。本發(fā)明還提供了一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染和動物的 內(nèi)寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況(如紅斑或瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺激或變態(tài)反 應的治療/殺寄生生物的藥物組合，包括含有治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺和藥學 上可接受的稀釋劑或載體的第一藥物組合物、含有治療有效量的外寄生生物殺滅劑和藥學 上可接受的稀釋劑或載體的第二藥物組合物和含有治療有效量的內(nèi)寄生生物殺滅劑(如 驅蠕蟲劑)和藥學上可接受的稀釋劑或載體的第三藥物組合物，其中，所述第一、第二和第 三藥物組合物單獨地、順序地或同時施用。在引入的美國專利申請公布2006/0062817中描述的用于容納不同活性成分的組 合物的包裝也可以用于容納本發(fā)明的組合的單獨的藥物組合物。可以用于本發(fā)明的組合物中的溶劑的例子包括但不限于水、鏈烷醇類、二醇類 (如丙二醇)、聚乙二醇、聚丙二醇、甘油、脂肪醇(如乙醇和丁醇)、芳香醇(如苯甲醇、苯 乙醇、苯氧乙醇)、酯(如乙酸乙酯、乳酸乙酯、乙酸丁酯、苯甲酸芐酯)、醚(如亞烷基二醇 烷基醚(alkylene glycol alkyl ethers)，如二乙二醇單乙醚、二丙二醇單甲醚和二乙二 醇單丁基醚)、酮(如丙酮或甲基乙基酮)、芳香烴和/或脂肪族烴、植物油或合成油、DMF、 二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮或2- 二甲基-4-氧-亞甲基-1，3- 二氧戊環(huán)及其混合物。 能夠提供良好的易位作用的用于本發(fā)明的含殺蟲劑和/或滅蟲劑的組合物的典型溶劑系 統(tǒng)包括乳酸乙酯、苯甲醇、乙醇、二乙二醇單乙醚、碳酸丙烯及其混合物。用于制備乳液的疏水相的例子包括但不限于石蠟油、硅油、天然植物油(如芝麻 油、杏仁油、蓖麻油)、合成的甘油三酯(如辛酸/癸酸二甘油酯)、C8_12鏈長的植物脂肪酸
14或其它專門選擇的天然脂肪酸的甘油三酯混合物、也可能包含羥基的飽和或不飽和脂肪酸 的部分甘油酯混合物及C8/C1(l脂肪酸的單-和/ 二-甘油酯、脂肪酸酯(如硬脂酸乙酯、二 正丁酰己二酸酯(di-n-butyryl adipate)、月桂酸己酯、二丙二醇壬酸酯)、中等鏈長的支 鏈脂肪酸與C16_C18鏈長的飽和脂肪醇的酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、C12-C18鏈長的 飽和脂肪醇的辛酸/癸酸酯、硬脂酸異丙酯、油酸油酯、油酸癸酯、油酸乙酯、乳酸乙酯、蠟 狀脂肪酸酯(如鄰苯二甲酸二丁酯、己二酸二異丙酯)、與后者相關的酯混合物和其它脂肪 醇(如異十三烷基醇、2-辛基月桂醇、鯨蠟/硬脂醇和油醇)和脂肪酸(如油酸及其混合 物)?？梢杂糜谥苽淙橐旱挠H水相的例子包括但不限于水和醇類，如丙二醇、甘油、山梨 醇及其混合物?？梢杂糜谥苽淙橐旱娜榛瘎┑睦影ǚ请x子表面活性劑(例如，聚氧乙 烯蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯、失水山梨醇單硬脂酸酯、甘油單硬脂酸、聚氧乙 基硬脂酸、烷基酚聚二醇醚)、兩性表面活性劑(如N-十二烷基-亞氨基二丙酸二鈉或 卵磷脂)、陰離子表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉、脂肪醇醚硫酸鹽(fatty alcohol ether sulphates)、單/ 二烷基聚二醇醚正磷酸酯的單乙醇胺鹽)和陽離子表面活性劑(如氯化 十六烷基三甲基銨)。本發(fā)明的藥物組合物可以包括治療有效量的一種或多種留體抗炎藥(如氫化可 的松)和/或一種或多種非留體抗炎藥，此外，本申請的藥物組合物可以包括用于麻醉動物 皮膚的有效量的局部麻醉劑?？梢杂糜诒景l(fā)明的組合物中的局部麻醉劑的非限制性的例子 包括苯佐卡因、氨苯丁酯、狄布卡因(dibucaine)、利多卡因、奧布卡因(oxybuprocaine)、 普莫卡因(pramoxine)、丙氧苯卡因(proparacaine)、丙對卡因(proxymetacaine)禾口丁卡 因。本發(fā)明的藥物組合物還可以包含治療有效量的谷物葡聚糖，這可以幫助密 封、保護和濕潤動物皮膚，刺激成纖維細胞生長和有利于促進皮膚的愈合和修復。本發(fā)明的藥物組合物中的谷物0 -葡聚糖的量可以是大約0. 001重量％至大約1 重量％或其間的任何值或子范圍、大約0. 01重量％至大約0. 8重量％或其間的任何值或子 范圍或者大約0. 1重量％至大約0. 5重量％或其間的任何值或子范圍?？梢允褂冒蠹s0.01重量％至大約1.2重量％、大約0. 1重量％至大約1. 1重 量％或大約0.5重量％至大約1重量％的谷物葡聚糖的谷物葡聚糖溶液制備本 發(fā)明的藥物組合物。這些葡聚糖可以由具有大約65%至大約100%、大約75%至大約 100%或大約85%至大約100%的純度且包含少于20%、少于15%、少于10%或少于5%的 雜質(zhì)(如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、碳水化合物和顆粒雜質(zhì))的葡聚糖制備。在進一步的實施例中，一種或多種燕麥蒽酰胺可以按以下濃度存在于本發(fā)明的藥 物組合物中大約0. 0001至大約375ppm或其間的任何值或子范圍、0. 001至大約375ppm或 其間的任何值或子范圍、大約0. 0001至大約150ppm或其間的任何值或子范圍、大約0. 001 至大約150ppm或其間的任何值或子范圍、大約0. 01至大約150ppm或其間的任何值或子范 圍、大約0. 01至大約50ppm或其間的任何值或子范圍、大約0. 3至大約15ppm或其間的任 何值或子范圍或大約1. 5至大約4. 5ppm或任其間的任何值或子范圍。在另一個實施例中，本發(fā)明的藥物組合物可以包含大約0. 1重量％至大約25重 量％或其間的任何值或子范圍、或大約1重量％至大約10重量％或其間的任何值或子范圍
15的含有基于燕麥提取物的大約1至大約1500ppm或其間的任何值或子范圍、或大約3至大 約450ppm或其間的任何值或子范圍的濃度的一種或多種燕麥蒽酰胺的燕麥提取物。本發(fā)明的治療/殺寄生生物的組合物中存在的外和/或內(nèi)寄生生物殺滅劑的量可 以是大約0. 001重量％至大約20重量％或其間的任何值或子范圍、大約2重量％至大約15 重量％或其間的任何值或子范圍、或大約5重量％至大約10重量％或其間的任何值或子范 圍。實施例12證明根據(jù)美國專利申請10/554，288和10/554，290 (通過引用將該文獻 的公開內(nèi)容結合入本文)所描述的方法制備的并以局部組合物的形式向皮膚切片表面應 用的0 (1-3) 0 (1-4)葡聚糖可明顯進入皮膚的角質(zhì)層、表皮層、真皮層和皮下組織層。這 些結果表明，由根據(jù)該方法分離的0 (1-3) 0 (1-4)葡聚糖包裹的殺寄生生物劑也可有效 地轉移到受試者皮膚的真皮和皮下組織層。因此，本發(fā)明的包括0 (1-3) 0 (1-4)葡聚糖的 治療/殺寄生生物的藥物組合物優(yōu)勢在于它們可以容易地將外和/或內(nèi)寄生生物殺滅劑轉 運到動物皮膚的真皮和皮下組織層。本發(fā)明的藥物組合物還可包含各種已知和常規(guī)的治療和/或美容成分，只要它們 不會不利地影響所需的減少皮膚刺激的作用。例如，可以包括化妝品成分，如醇、脂肪和油、 表面活性劑、脂肪酸、硅酮、保濕劑、潤濕劑(moisturiser)、粘度調(diào)節(jié)劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、著 色劑、香料和芳香劑。適用于制備本發(fā)明的組合物的谷物葡聚糖可以粉狀形式從一些商業(yè)供應商 購得，如 Sigma Chemical Co. (St. Louis,Mo.)禾口 Ceapro Inc. (Edmonton,AB，Canada)?？?以以美國專利6，284，886或美國專利申請公布2006/0122149中描述的方式制備0 -葡聚 糖溶液。可以使用本領域的技術人員已知的多種方法測定本申請的組合物中的谷物 3 “葡聚糖含量。例如，可以通過比色分析法和/或通過標準分析技術如分子排阻色譜法和 高效液相色譜法確定葡聚糖含量(參見，Wood等人，Cereal Chem. (1977)54 524 ；Wood 等人，Cereal Chem. (1991) 68 :31_39 ；和 Wood 等人，Cereal Chem. (1991)68:530-536)。還 可以使用市售的試劑盒通過酶學方法分析0 -葡聚糖，如采用McCleary和Glermie-Holmes J. List. Brew. (1985)91 285 的技術的 Megazyme (freland)?？梢允褂眯D剪切型粘度計如Brookfield Syncro-Lectric 或 HaakeRotovisco 測量粘度。使用儀器的方法是本領域的技術人員已知的。常規(guī)地，在25°C的恒溫下，以4個 盤速度進行測量。可以根據(jù)本發(fā)明的方法制備可用于制備本發(fā)明的治療或治療/殺寄生生物的組 合物的燕麥提取物。因此，根據(jù)本發(fā)明的進一步的方面，公開了一種包括以下步驟的用于制 備燕麥提取物的方法a.磨碎完整的燕麥，b.用溶劑提取產(chǎn)生的燕麥片或磨碎的燕麥部分，c.調(diào)整產(chǎn)生的燕麥提取物的pH值到<4.0 (有利地為<3. 5)，d.燕麥提取物通過< 104MWC0的膜進行膜過濾(例如，超濾)。本發(fā)明的另一個方面，提供了含有最低lOppm燕麥蒽酰胺的燕麥提取物，其中，燕 麥提取物可以通過包括上述步驟a-d和下面的額外步驟的方法制備
16
e.調(diào)整膜過濾后的滲透物中的燕麥蒽酰胺的濃度至> lOppm。根據(jù)本發(fā)明，可以通過磨碎完整的燕麥，與溶劑混合提取燕麥片，將獲得的中間提 取物與用過的顆粒分離和調(diào)節(jié)中間提取物的PH值至< 4. 0(優(yōu)選< 3. 5)制備中間燕麥提 取物。PH值調(diào)節(jié)導致提取物中的高燕麥蒽酰胺產(chǎn)率，同時為提取物提供良好的穩(wěn)定性。一旦完成提取和酸化，中間燕麥提取穩(wěn)定超過12個月的時間。中間提取物進行膜過濾，優(yōu)選超濾，從而收集< 10，000，更優(yōu)選< 5，000分子量的 濾液。最終產(chǎn)生的燕麥提取物可以通過例如，反滲透(R0)進一步濃縮以提高燕麥蒽酰胺的 濃度到例如> 0. 1% (d.w.b.)。最終產(chǎn)生的燕麥提取物可以直接在醇中用于治療或美容目的。可選擇地，它可以 進行溶劑交換，且提取物配制在選擇的溶劑中，所述溶劑包括但不限于，例如，丁二醇、戊二 醇、丙二醇、丙三醇、這些溶劑的混合物及這些溶劑或溶劑混合物與水的組合。最終產(chǎn)生的燕麥提取物很容易配制成溶液、凝膠、洗劑、軟膏劑、乳劑、粉末或其它 藥學上可接受的形式。使用本領域的技術人員已知的方法制成制劑。對于紅斑的減少，組 合物應包含大約1-3%的液體燕麥提取物(作為標準的15ppm燕麥蒽酰胺溶液提供)。主要地，本發(fā)明提供了一種制備燕麥提取物的方法，其提供了相比已知的提取方 法的幾個優(yōu)勢，并增強了提取物的性能。完整燕麥粒的組織學染色表明，酚類化合物主要位于燕麥粒的糊粉層中。這意味 著該功能化合物的富集制劑最好由通過傳統(tǒng)的磨碎或脫皮工藝獲得的麩皮制得。令人驚訝 的是已經(jīng)確定，燕麥蒽酰胺的最高產(chǎn)率來自于全燕麥，而不是麩皮部分。本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)(a)來自燕麥的有效成分的提取可以在產(chǎn)量和效率方面得 到增強；和進一步地(b)產(chǎn)生的提取物在延長的保存期內(nèi)是穩(wěn)定，并可以方便地濃縮。因此，本發(fā)明提供了一種用于制備燕麥提取物的方法，包括以下步驟a.磨碎完整的燕麥，b.用溶劑提取產(chǎn)生的燕麥片或磨碎的燕麥部分，c.調(diào)節(jié)產(chǎn)生的燕麥提取物的pH值到< 4. 0(有利地為< 3. 5)，d. pH < 4. 0的燕麥提取物通過< 104MWC0的膜進行膜過濾。根據(jù)本發(fā)明的方法制備的燕麥提取物的活性是可以計量的，且可以給予認證的產(chǎn) 品質(zhì)量保證。根據(jù)本發(fā)明，全燕麥或去殼燕麥粒的水性醇提取物進行精制以提供用于化妝 品和藥物組合物(如乳劑、凝膠、粉末、洗劑等)的材料。本發(fā)明的燕麥提取物可以包含1至1500ppm的燕麥蒽酰胺、3至450ppm的燕麥 蒽酰胺和/或15至150ppm的燕麥蒽酰胺的濃度的燕麥蒽酰胺。其它化合物，例如酚、苯 甲酸和肉桂酸、黃酮類、黃酮醇、查爾酮、黃烷酮、原花色青素、aminoplienolics、母育酚 (tocols)和皂甙類，也可以在燕麥提取物中發(fā)現(xiàn)。這些化合物可以具有作為例如，抗氧化 劑、抗微生物劑、抗真菌劑、防曬劑和表面活性劑的效用。本發(fā)明的燕麥提取物不含有或含有很少量的葡聚糖(例如小于大約0.01%) 和含有小于0. 01%的分子量大于10，OOODa的蛋白質(zhì)。燕麥提取物中的蛋白質(zhì)和淀粉的殘 留濃度隨提取物中的燕麥蒽酰胺的濃度變化。 在本發(fā)明的制備燕麥蒽酰胺方法的步驟d中，膜過濾是超濾。此外，反滲透可以用 于進一步濃縮和純化步驟d所獲得的燕麥提取物。
在步驟b中，用于提取燕麥片的溶劑可以包含水和醇。醇可以選自乙醇、甲醇、丙 醇(正_、異_)、丁醇(正_、異_、叔_)或其混合物(例如，醇水)。燕麥提取物可以加入溶劑中以便于操作。例如，燕麥提取物可以加入1，3_ 丁二 醇、丙二醇或甘油與水的1 lw/w混合物中。根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的燕麥提取物可以很容易地通過加熱、微濾或輻射(在步 驟c或d之后)進行消毒。提供下面的實施例以舉例說明本發(fā)明。這些實施例的變化和改變對于本領域的技 術人員是顯而易見的。
實施例實施例1燕麥提取物制備方法對于每種方法，進行2次或3次重復并進行分析。方法通過Willey Mill研磨去殼燕麥粒(Hinoat品種)以通過10目篩。向40°C 的攪拌的50% (v/v)乙醇水溶液加入1 4(重量/體積)的燕麥片溶劑混合比例的燕 麥片。產(chǎn)生的混合物攪拌30分鐘，然后冷卻到室溫。然后以2830g離心該混合物7分鐘， 并吸取上清液。沉淀再懸浮于新鮮溶劑中并再離心。吸取上清液，且沉淀第三次再懸浮于 新鮮溶劑中。合并所有上清液，并通過粗燒結玻璃濾器過濾。為了顯示根據(jù)本發(fā)明制備燕麥提取物的方法(過程)(其包括調(diào)節(jié)提取物的pH至 <4.0的步驟)與沒有pH值調(diào)節(jié)的方法之間的差異，進行了一系列對比試驗。測試樣品分 別命名為 UF-B1、UF-B3、UF-C1、UF-C2 和 UF-C3。對于編號系列UF-B1的樣品(對比樣品)，與本發(fā)明的方法相反，燕麥提取物直接 應用于超濾模塊。對UF-B3、UF-C1、UF-C2和UF-C3系列的樣品，根據(jù)本發(fā)明，用鹽酸(IN)將提取物 的PH值調(diào)節(jié)到2. 5，并加入 1 %的乙醇以澄清溶液。將淡黃色的提取物通過0. 45 y m的 過濾器(Gelman ；Supor DCF)，然后超濾。Millipore Corporation MINI-PLATE T a n g e n t i a 1 - F 1 o w Bioconcentrator(10, 000MWC0)用于超濾。該單元包含具有108cm2表面積的低蛋白結合YM 膜。泵的速率為1000ml/分鐘，通量(流量)通常為14L/m2/小時(LMH)。對樣品ID系列UF-B，通過凍干72小時進行重量分布(Weightprof ile)。分析使用具有配套軟件的熱分離產(chǎn)物(TSP)光譜P4000泵、Varian柱溫箱和 Waters 991光電二極管陣列(PDA)檢測器進行高效液相色譜(HPLC)分析。所用的柱是在 25°C 的 CSC-Hypersil (51 u m, 120A，0. 46X 25cm-序列 #039775)。使用 330nm 的紫外線檢 測。流速設定為1.0ml/分鐘。在乙醇/水(1 1)中制備所有的樣品和標準品。
「 n AF-1標準品(0.1//g///Z) 5廠1注射保留時間23.68分
AF-2標準品(0.1 m^MD 5//1注射保留時間26.95分在50%的乙醇/水(5ml)中制備燕麥蒽酰胺部分，并注射5 yl。
表1描述了用于分析燕麥蒽酰胺的HPLC溶劑程序。表 1 如表2中提供的結果，計算總燕麥蒽酰胺并以AF-I當量(equivalents)表示，且 表示為來自滲透物的燕麥蒽酰胺的回收百分比的回收效率基于總燕麥蒽酰胺。表2 注釋1.基于AF-1當量的值2.作為來自UF-C1、C2和C3值的范圍給出C系列的滲透物部分的燕麥蒽酰胺回 收百分比。燕麥提取物的質(zhì)量1.到此刻為止，在產(chǎn)生的任何燕麥滲透提取物中沒有觀察到渾濁的形成。2.燕麥蒽酰胺的提取效率為> 75%，更典型地為85-100%。3.燕麥提取物可以濃縮到最高50倍而沒有沉淀出現(xiàn)。
4.燕麥提取物具有低的或沒有細菌計數(shù)，因為滲透物的進料流在濃縮前經(jīng)消毒。5.透明的燕麥滲透提取物在超過12個月的儲存期內(nèi)呈淡黃色。6.燕麥提取物具有令人愉快的燕麥氣味。7.該滲透部分在中性pH易溶于35-70%乙醇/水中。實施例2燕麥提取方法的放大試驗方法通過Willey Mill研磨去殼燕麥粒(AC Ernie品種)，以通過10目網(wǎng)篩。 將燕麥片(1.5kg)加入40°C的攪拌的50% (v/v)乙醇水溶液(6000ml)中。產(chǎn)生的混合物 攪拌30分鐘，然后冷卻到室溫。然后以2830g離心混合物7分鐘，并吸取上清液。沉淀物 再懸浮于新鮮溶劑(3000ml)中，并再離心。吸取上清液，沉淀物第三次再懸浮于新鮮溶劑 中。合并所有上清液，并通過粗燒結玻璃過濾器過濾。用鹽酸(1M)將提取物的pH值調(diào)整到 3. 5，并加入乙醇( 1%)以澄清溶液。使淡黃色的提取物通過0.45 ym過濾器(Gelman ； Supor DCF)，并補充到12000ml，然后超濾。使用Pall Corporation CENTRASETTE 單元在室溫下通過改良的 PES (Omega) T-篩膜(0. 09m2 ;5000MWC0，Pall Filtron)對提取物進行超濾。通量率(流速)為 20-25LMH。用氫氧化鉀水溶液(SM)調(diào)節(jié)所產(chǎn)生的滲透物的pH值到6. 5。減壓蒸發(fā)200mL的等分試樣至干，并以1 1 (v/v)的乙醇水溶液補充至10ml。將 該溶液施加于包含100ml的以乙醇水醋酸(40 59 1)預平衡的LH-20色譜凝膠 (AP Biotech, Sweden)的標準開口柱。用2Vb溶劑清洗柱，并丟棄獲得的部分。用2柱體 積(bed volume)的80%丙酮水溶液從柱洗脫燕麥蒽酰胺。減壓蒸發(fā)樣品至干，并溶解在 1 1的乙醇水溶液中。將該樣品通過0.45 iim過濾器過濾到帶螺旋帽的(screw-capped) 小瓶中用于HPLC分析。分析使用熱分離產(chǎn)物(TSP)溶劑遞送系統(tǒng)和Hewlett Packard (HP)數(shù)據(jù)收集軟 件在 C 18CSC HYPERSILTM 柱(250 X 4. 6mm，120 a, 3 u m)上進行 HPLC 分析。在 190_400nm，
特別340nm進行監(jiān)測的HP光電二極管陣列(PDA)用于檢測所有燕麥蒽酰胺。使用相對于 認證的 AF-1 標準品(從 Agriculture and Agri-Food Canada, EC0RC, Ottawa, Canada 獲 得)的保留時間對所有的峰積分。溶劑系統(tǒng)由乙腈、水和5%的醋酸水溶液組成，如表3所不。
為了完成產(chǎn)品制劑，減壓濃縮3382ml的滲透進樣流至干，并補充至2000ml (90% 的1，3_ 丁二醇水溶液)，并加入0.3% (w/w)苯氧乙醇。將該溶液通過0.45 iim過濾器
20(Whatman)過濾，接著包裝。完成的燕麥提取物含有l(wèi)Oppm的總燕麥蒽酰胺。實施例3人類受試者中的抗紅斑試驗在健康男性和女性志愿者中進行皮膚試驗a. 18 至 60 歲；b.具有皮膚類型I-III的白皙皮膚，通過以下原則確定I.總是容易曬傷；從不曬黑(敏感)II.總是容易曬傷；最少曬黑(敏感)III.輕度曬傷；逐漸曬黑(正常)IV.最低程度地曬傷；總是良好地曬黑(正常)V.很少曬傷；充分曬黑(不敏感)VI.從不曬傷，深度著色(不敏感)遵循下列排除標準a.對于陽光具有異常反應史的受試者；b.當前顯示出可能與來自測試材料的反應相混淆或可能干擾測試結果的評價的 曬傷、曬黑或甚至皮膚色調(diào)的受試者；c.懷孕或哺乳的女性；d.服用可能產(chǎn)生對陽光的異常反應或干擾測試結果的藥物的受試者；e.經(jīng)常使用UVA日光浴浴床的受試者；或f.顯示出任何可被視為影響研究目的或完整性的可見的皮膚疾病的受試者。選擇9個符合入組標準的受試者參與測試。氙弧光太陽模擬器(Solar Light Source, Philadelphia, Pa.)用作紫外線光源。 在這個測試程序的過程中利用紫外線范圍(290-400納米)的連續(xù)發(fā)射光譜。用具有附加 的合適檢測器的紫外線強度計(PMA 2100型)測量燈的輸出。Minolta CHROMA METER CR-300(Minolta Corporation Ltd. ， Osaka, Japan) M 來測量紅斑水平。LW色彩標記系統(tǒng)的a*值表示紅綠色軸中的顏色變化。該值越高，待 評估的目標的紅色越強烈。因此，a*值用作皮膚表面的發(fā)紅(紅斑)的量度。f值的增加 被認為是表明紅斑增加。第1天，通過定時紫外線照射的漸進序列測定各個受試者的最小紅斑劑量(MED)， 各照射量在前一個位點的照射量上逐級遞增25%。MED被定義為足以在未經(jīng)處理的皮膚上 產(chǎn)生最小可感知的紅斑的紫外線照射的時間長度或劑量。第2天，受試者在確定其MED的照射后大約24小時返回實驗室。按照下列視覺評 分標準評價這些位點的紅斑0=陰性，無可視反應0.5=最小紅斑1.0=明確的紅斑2.0=中度紅斑3. 0 =嚴重紅斑技術人員用外科標記筆在各個受試者背上，肩胛骨和腰圍之間，橫向到中線畫出7個1"乘以1.5"的試驗位點區(qū)域。指定6個測試位點用于測試材料，1個用于未處理的照 射對照。該位點隨后暴露于1. 5倍預定MED值的紫外線。在第3天，照射后大約24小時，由經(jīng)過訓練的技術人員使用上述標準目視地評價 紅斑并打分。也用Minolta CHROMA METER 采集基線a*值讀數(shù)。采集三個連續(xù)的色度計 的讀數(shù)并平均。將大約0. 2ml的測試產(chǎn)品應用到適當?shù)臏y試位點。在產(chǎn)品應用后大約4小時，對 測試位點目視打分，并采集Minolta色度計的讀數(shù)。第4天，受試者在產(chǎn)品應用大約24小時后返回診所。使用視覺分級系統(tǒng)和Minolta CHR0MAMETER 再次評估7個位點的紅斑。使用t_檢驗(相依樣本的)對結果進行統(tǒng)計分析，以確定對于各個測試位點，從 基線(照射24小時后)至處理后4小時和處理后24小時在平均色度計f值讀數(shù)中是否 觀察到顯著差異。如果P< 0.05，觀察到顯著性。產(chǎn)品測試溶液由調(diào)整到所需的燕麥蒽酰胺濃度(ppm)的1 lw/w的丁二醇水 中的燕麥提取物組成。人類志愿者中的燕麥提取物測試結果如表4所示。表4 注釋*表示與基線讀數(shù)存在統(tǒng)計顯著性差異試驗表明，燕麥提取物有效地減少紅斑。劑量反應動力學表明，在0.03和0.3ppm 之間，劑量和反應之間的關系是線性的。在燕麥蒽酰胺> 0. 3ppm時獲得最大反應。實施例4燕麥蒽酰胺部分的分離和純化在實施例2之后，減壓蒸發(fā)滲透物(270ml)，并以1 1 (v/v)的乙醇水溶液補充
22至10ml。將該溶液施加于以乙醇水醋酸(40 59 1)預平衡的LH-20柱(100ml) 上。用2Vb溶劑清洗柱，并丟棄產(chǎn)生的部分。用2柱體積的80%丙酮水溶液從柱洗脫燕麥 蒽酰胺。減壓蒸發(fā)樣品至干，然后再溶解于100ml的90%丁二醇水溶液中。將該溶液通過 0. 45 ym過濾器過濾，接著包裝。完成的分離的燕麥蒽酰胺部分含有15ppm的總燕麥蒽酰胺。分離的燕麥蒽酰胺部分、燕麥提取物和未處理的對照的測試結果如表5所示。表 5 注釋*表示與基線讀數(shù)存在統(tǒng)計顯著性差異實施例5燕麥蒽酰胺的快速分析方法使用Beckman 二元溶劑遞送系統(tǒng)、用于Microsoft WINDOWS匪 的32KARAT 分 析軟件(Beckman Coulter Inc.)進行 HPLC 分析。在 22°C使用 C 18 保護柱(Supelco Sigma-Aldrich Corporation)在 CSC 0DSHYPERSIL 柱(250X4. 6mm, 120 A, 3 u m)上分 離燕麥蒽酰胺。檢測210-400nm，特別330nm進行監(jiān)測的Beckman光電二極管陣列(PDA)用 于檢測所有燕麥蒽酰胺。使用保留時間和相對于由Symrise AG合成的認證的標準品的光 譜數(shù)據(jù)對三種主要燕麥蒽酰胺AF-1、AF-2和AF-6的峰進行積分。用蒸餾水將提取物稀釋為等量的部分，并在分析前在4°C保存于琥珀色的樣品瓶 中。一式三份注射20(20 yl等分試樣)。由乙腈和0.01M磷酸水溶液組成的HPLC溶劑系 統(tǒng)如表6所示。表6 燕麥提取物的大規(guī)模(商業(yè))生產(chǎn)方法將500千克裸燕麥(品種N141-1)在-18C冷凍過夜。通過配備有1/8英寸 篩的 FITZMILL COMMINUTOR (The FitzpatrickCompany :Elmhurst, 111.) 研磨冷凍的顆粒以產(chǎn)生粗燕麥片(100%通過10目且< 10%通過100目的分離篩)。在20°C將粗粉劇烈分散于1500千克的50% (w/w)乙醇中，并混合0. 5-16小時。 通過沉降式離心機(Westphalia分離器)離心產(chǎn)生的漿料。用鹽酸溶液(17. 5% w/w)將上 清液的PH值調(diào)整到pH 2. 5-4. 5，并攪拌30-60分鐘。然后使用5，000MWC0 的螺旋膜(21. 4m2 Synder Filtration, Vacaville, Calif) 對提取物進行超濾。接著使用反滲透(R0)膜過濾(15m2FilmTec Corporation, Minneapolis, Minn.) 濃縮無菌滲透物。反滲透濃縮前，調(diào)整pH值至pH6士0.5。濃縮后，產(chǎn)生的燕麥提取物具有 200至1500ppm的燕麥蒽酰胺濃度。據(jù)發(fā)現(xiàn)該提取物穩(wěn)定存在4個月以上而沒有活性、透明 度或產(chǎn)品質(zhì)量的其它可測量參數(shù)的損失。高燕麥蒽酰胺提取物用作直接用于治療或化妝品制劑的原液，或可選擇地，用替 代溶劑(例如丁二醇水或甘油水)替換乙醇水。實施例7燕麥提取濃縮物配制成丁二醇水的制劑通過量取所需最終體積的> 90%的丁二醇水(50% w/w)來制備稀釋溶液，向其 中加入計算體積的燕麥提取濃縮物。濃縮物的所需體積很容易從濃縮的燕麥蒽酰胺濃度及 最終需要的濃度和體積來計算。燕麥提取物已按15-200ppm范圍內(nèi)的燕麥蒽酰胺濃度配制 到丁二醇水中。該產(chǎn)品完全混合，然后加熱到70°C。然后將該產(chǎn)品通過蒸發(fā)器(Pfaudlenlnc.刮 膜式蒸發(fā)器)以除去乙醇。使用標準氣相色譜(GC)技術檢測殘留乙醇。在通過蒸發(fā)器后， 檢查丁二醇水的比例，并作出調(diào)整以解決蒸發(fā)器中水的任何損失。對于美容和治療的用 途，調(diào)整產(chǎn)品的pH值至6. 0-7. 5。最后，向產(chǎn)品加入防腐劑2-苯氧基乙醇(0. 3% w/w)。通過膜過濾對該產(chǎn)品消毒。 然后分析產(chǎn)品的燕麥蒽酰胺含量，并確認符合所需的產(chǎn)品規(guī)格。實施例8
24
燕麥提取濃縮物的甘油水制劑通過量取所需最終體積的> 90%的甘油水(> 30% w/w)來制備稀釋溶液，向 其中加入計算量的燕麥提取濃縮物。濃縮物的所需體積很容易從濃縮的燕麥蒽酰胺濃度值 及最終的需要濃度和體積進行計算。燕麥提取物已按照15-200ppm燕麥蒽酰胺范圍內(nèi)的燕 麥蒽酰胺濃度配制到甘油水中。該產(chǎn)物完全混合，然后加熱到70C。然后使該產(chǎn)物通過蒸發(fā)器(Pfaudler刮膜式蒸 發(fā)器)以除去乙醇。使用標準氣相色譜技術檢測殘留乙醇。在通過蒸發(fā)器后，檢查甘油 水的比例，并進行調(diào)整以解決在蒸發(fā)器中水的任何損失。對于美容和治療應用，調(diào)整產(chǎn)物的 pH值至6. 0-7. 5。對于功能食品/保健品的用途，調(diào)整產(chǎn)品的pH值為pH 4. 0。最后，向產(chǎn)物中加入由山梨酸鉀(0. 1% w/w)和苯甲酸鈉(0. l%w/w)組成的防腐 劑系統(tǒng)。然后分析產(chǎn)物的燕麥蒽酰胺含量，并確認滿足所需的產(chǎn)品規(guī)格。實施例9使用的低變應原性洗發(fā)劑表7列出了一種具有以重量百分比表示的量的落入本發(fā)明范圍的治療洗發(fā)劑配 方的實施例。表 7 室溫下伴隨介質(zhì)攪拌，--次加入A相中的一種成分。確保各種成分在加入下一種
成分之前溶解。溶液在進入階段B之前應該是澄清的。，伴隨混合，向A相中一次加入B相 中的一種成分。向AB混合相中一次加入C相中的一種成分。用50%的檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH 值直至pH為6. 5。 使用時，該產(chǎn)品可以直接應用于動物，或可選擇地，在合適的容器中與水混合并通過海綿浴應用于動物。該產(chǎn)品容易沖洗，從而確保所有表面活性劑在沐浴后除去。完成的洗發(fā)劑有效地減少了哺乳動物的瘙癢。此外，洗發(fā)劑減少脫毛和脫皮。實施例10用于治療耳炎的舒緩配方表8提出了一種具有表示為重量百分比的量的落入本發(fā)明范圍的藥用清洗配方 的實施例。表8 伴隨攪拌，向混合容器中一次加入一種成分。確保每種成分在加入下一種成分之 前溶解。用50%的蘋果酸調(diào)節(jié)最終產(chǎn)物的pH值至4.0。該產(chǎn)品用于清潔狗、小狗、貓和小貓的耳朵。為了清潔耳朵，用清潔劑填充耳道，翻轉耳廓并按摩。取出棉球，徹底清除分泌物 并干燥耳道的可接近部分。每天重復，直到耳朵達到清潔，之后每周處理或根據(jù)獸醫(yī)指示進 行處理。臨床試驗的結果證明該產(chǎn)品在減少與耳炎相關的發(fā)紅方面是優(yōu)良的，并有效地減 少刺激性，促進哺乳動物的痊愈。實施例11 純化源自燕麥麩的谷物0 -葡聚糖的方法用pH值大約為9. 5的堿性反滲透(R0)水漿化燕麥麩(The Quaker Oats Company) 至最終4-10%的固體濃度。溫度維持在45°C 士5°C。從燕麥麩提取谷物葡聚糖超過 30分鐘的時間。這段時間之后，通過沉降式離心機離心除去固體。將離心濾液(centrate) 冷卻到室溫，按0. 2%的濃度加入陽離子絮凝劑SURFLOC 34030 (Jes-Chem Ltd.)。 經(jīng)過20分鐘的孵育期后，通過使用盤棧離心機(disk-stack centrifuge)離心除去凝 結的顆粒物質(zhì)。將離心濾液的PH值調(diào)節(jié)至大約中性，加熱到> 72°C以使淀粉凝膠化，并 用TERMAMYL LC(N0V0ZymeS A/S)(—種用于在低鈣濃度下的淀粉液化的熱穩(wěn)定 a -淀粉酶)處理。當溶液在碘測試中不再產(chǎn)生陽性反應時，降低pH值至大約4. 0以滅活 酶，并加熱混合物至85°C 30分鐘以使存在的蛋白質(zhì)變性。冷卻溶液至4°C一小時，然后加 熱至大約72°C的溫度。向溶液加入相當重量的CELPURE C300(具有0.300DarCy滲 透性的硅藻土，World Minerals)，然后使用含有25 y m濾紙和并用CELPURE C65 (具 有0. 065Darcy滲透性的硅藻土，WorldMinerals)預涂至大約4mm的厚度的壓濾機過濾混 合物。將壓濾機預熱至大約65°C的溫度，在過濾3 -葡聚糖溶液前，調(diào)整壓濾機的進料流的
成分
%配方
去離子水 丁二醇 燕麥提取物 乳酸 蘋果酸
對羥基苯甲酸曱酯
46.0 48.85 4.0 0.8 0.2 0.15
26 11值至4.5。在葡聚糖溶液通過過濾器后，用反滲透水沖洗壓濾機，從而產(chǎn)生澄清的、 淡黃色葡聚糖溶液。葡聚糖液冷卻至5°C，并在攪拌下加入_20°C溫度的95%乙醇 至大約15% (w/w)的終體積。形成葡聚糖懸浮液，立即通過盤棧離心機離心以與溶液 分離。在45°C向R0水中加入分離的固體葡聚糖，使其分散，然后加熱至60-70°C以產(chǎn) 生含有大約的葡聚糖的澄清的無色溶液。分離的葡聚糖是無色的，具有大于 75%的純度、> 500cP的粘度和使用濁度計測量的< 50NTU的異常澄清度。實施例12.作為水性組合物應用于腹部皮膚切片的純化0 -葡聚糖分布的定量在知情同意的情況下，接受來自5個已經(jīng)進行整形手術的健康供體的人腹部皮 膚。將來自每個病人的皮膚除去皮下脂肪，并切成三個切片。在液氮中冷凍皮膚切片，并用 25kGy的伽瑪射線的劑量照射過夜消毒。將照射后的樣品各自安置于20mL體積的包含受體 介質(zhì)的 FRANZ-CELL 樣灌注室(PHACOCELL ，PhaCos GmbH, D-82131-Gauting， Germany ；參見 Artmann, C. ff. In vitro percutaneousabsorption into human skin, Fundam. Appl. Toxicol.，28，1-5 (1996))中。使用微量涂敷器，以5mg/cm2的劑量涂布組合物 1455、組合物1450或對照組合物涂敷照射的皮膚樣品。組合物1455和1450是分別含有5% 和50%的根據(jù)本發(fā)明的分離方法制備的0 (1-3) 0 (1-4)葡聚糖的水性組合物(參見實施 例11)。對照組合物是不含有任何0 (1-3) 0 (1-4)葡聚糖的水性組合物。在填充時保持灌 注室不含空氣氣泡以確保皮膚組織的完整和均勻的漂洗。通過通風提供灌注室內(nèi)外的壓力 補償和空氣的恒定濕度。用溫度傳感器監(jiān)測皮膚溫度，并用皮膚水分測量儀(corneometer) 監(jiān)測皮膚切片的水分含量。調(diào)節(jié)介質(zhì)為36°C，并持續(xù)循環(huán)。保持皮膚濕度為65皮膚水分測 量儀單位，并通過通風管道保持皮膚表面的溫度為32°C。通過使用灌注室基部的加熱板和 風管通過調(diào)節(jié)介質(zhì)溫度和通過調(diào)節(jié)灌注室中的空氣流動維持上述條件。向皮膚切片供應均 勻循環(huán)的營養(yǎng)介質(zhì)，所述營養(yǎng)介質(zhì)沖洗其下表面。所有樣品的涂布面積固定為10cm2。在非 閉塞(開放)條件下，皮膚樣品孵育8小時。在孵育期結束時，用干棉紗拭子和以0. 2mL的70%乙醇/水潤濕的棉紗拭子采集 皮膚切片的拭子樣品。皮膚切片從PHACOCELL 灌注室移除，并立即在液氮中冷凍。然 后將皮膚切片從角質(zhì)層到更深的真皮層切成15 ym的薄片。將皮膚切片在清潔的玻片上風 干，不用任何流體固定。然后用BACTIDR0P Calcofluor White對這些薄片染色30秒，再 用去離子水洗去過量的染色劑。重復染色和洗滌步驟兩次。用清潔的玻璃蓋玻片覆蓋染色 的樣品，并用具有400-500nm范圍和440nm峰值的激發(fā)濾光片、500-520nm的阻擋濾片和氙 氣弧光(燃燒器)燈的LEIKA 熒光顯微鏡通過熒光進行檢測。BACTIDR0P Calcofluor White是一種結合纖維的非特異性熒光染料，且在用長波長紫外光激發(fā)時，繪畫出含有纖維 素的生物體的細胞壁。使用明亮的熒光監(jiān)測和定量葡聚糖分子的沉積，在樣品的細胞 壁上和細胞間縫隙中看到反白為白色斑點(3-5i!m)的焦點。通過上述熒光染色法測定的平均沉積百分比如表9所示。在用組合物1455和組 合物1450處理的皮膚樣品的角質(zhì)層和表皮中觀察到明顯的熒光染色值(> 5% )。在用組 合物1450和組合物1455處理的皮膚樣品的真皮和皮下組織層中觀察到相對較低的值。在 用對照組合物處理的皮膚切片中觀察到< 的熒光染色值。表9.腹部皮膚的不同層中0 (1-3) 0 (1-4)葡聚糖的平均百分比沉積 通過照片(未顯示)發(fā)現(xiàn)的記錄也表明皮膚樣品的表皮層明顯攝入0 -葡聚糖。根據(jù)質(zhì)量控制程序和記錄進行熒光測量。使用公認的質(zhì)量對照生物體測 試BACTIDROP Calcofluor White的控制數(shù)，并發(fā)現(xiàn)是可以接受的(Microbiology M. Pettenkofer Institute, Munchen)。通過統(tǒng)計軟件包SAS/STATISTICA 進行統(tǒng)計 學評價。所使用的硬件和軟件都經(jīng)過驗證。實施例13.用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況、炎 癥、刺激或過敏反應的藥物組合物組合物A 攪拌下，向 100ml CEAPR0 Certified Organic (tm)(經(jīng)過驗證的 50ppm 的有機燕麥蒽酰胺提取物)(50ppm的燕麥蒽酰胺在水(40% )和1-3丙二醇(60% )中) 加入150ml的乙醇，以提供20ppm的燕麥蒽酰胺溶液。組合物B 攪拌下，向10000克包含乳酸乙酯(5000克)和苯甲醇(5000克)的溶 劑中的吡蟲啉(1000克)加入267mL的750ppm燕麥蒽酰胺的50%乙醇溶液。組合物C :2升Ceapro Inc.的lOOpprn的燕麥蒽酰胺提取物真空下濃縮成殘渣或 凍干成粉末。然后，在攪拌下，向10000克包含乳酸乙酯(5000克)和苯甲醇(5000克)的 混合溶劑中的吡蟲啉(1000克)加入產(chǎn)生的殘渣或粉末。所有這三種組合物都可以作為局部點/滴應用于伴侶動物，用于治療或防止與 動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況、炎癥、刺激或過敏反應(如跳蚤過敏性皮 炎)。包括吡蟲啉的第三種組合物可以殺死成蟲跳蚤。通過舉例已描述了一種或多種目前優(yōu)選的實施方式。以下對于本領域的技術人 員是顯而易見的可以在不背離權利要求所規(guī)定的本發(fā)明范圍的情況下進行許多變化和修改。
權利要求
一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況、炎癥、刺激或變態(tài)反應的方法，包括向動物的皮膚施用包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺和藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥物組合物。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述藥物組合物進一步包含治療有效量的外寄 生生物殺滅劑。
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其中，所述外寄生生物殺滅劑是殺蟲劑。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述方法用于治療或預防動物的跳蚤過敏性皮炎。
5.根據(jù)權利要求2所述的方法，其中，所述藥物組合物進一步包含用于治療或預防動 物的內(nèi)寄生生物感染或侵染的治療有效量的內(nèi)寄生生物殺滅劑。
6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其中，所述內(nèi)寄生生物殺滅劑是驅蠕蟲劑。
7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述藥物組合物進一步包含治療有效量的谷物 β-葡聚糖和/或一種或多種抗炎劑。
8.根據(jù)權利要求2所述的方法，其中，所述藥物組合物進一步包含治療有效量的谷物 β-葡聚糖和/或一種或多種抗炎劑。
9.根據(jù)權利要求5所述的方法，其中，所述藥物組合物進一步包含治療有效量的谷物 β-葡聚糖和/或一種或多種抗炎劑。
10.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述一種或多種燕麥蒽酰胺以大約0.0001至大 約375ppm或其間的任何值或子范圍的濃度存在。
11.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述一種或多種燕麥蒽酰胺以大約0.3至大約 15ppm或其間的任何值或子范圍的濃度存在。
12.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述一種或多種燕麥蒽酰胺以大約1.5至大約 4. 5ppm或其間的任何值或子范圍的濃度存在。
13.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述藥物組合物包含0.1重量％至25重量％的 含有基于燕麥提取物的大約1至大約1500ppm或其間的任何值或子范圍的濃度的一種或多 種燕麥蒽酰胺的燕麥提取物。
14.根據(jù)權利要求13所述的方法，其中，所述燕麥提取物包含基于燕麥提取物的大約3 至大約45ppm或其間的任何值或子范圍的濃度的一種或多種燕麥蒽酰胺。
15.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述藥物組合物是溶液、凝膠、洗劑、乳劑、軟膏 劑或粉末的形式。
16.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述藥物組合物是以噴霧或點滴形式施用于動 物的溶液形式。
17.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述組合物中的一種或多種燕麥蒽酰胺由包括 以下步驟的方法制備a.磨碎完整的燕麥，b.用溶劑提取得到的燕麥片或磨碎的燕麥部分，c.調(diào)整得到的燕麥提取物的pH值到<4. 0，d.pH < 4. 0的燕麥提取物通過< IO4MWCO的膜進行膜過濾。
18.一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況、炎癥、刺激或變態(tài)反應的藥物組合物，包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺和藥學上可接受的稀 釋劑或載體的治療。
19.根據(jù)權利要求18所述的藥物組合物，進一步包含治療有效量的谷物葡聚糖和 /或一種或多種抗炎劑。
20.一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況、炎癥、刺 激或變態(tài)反應的治療/殺寄生生物的藥物組合物，包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰 胺、治療有效量的外寄生生物殺滅劑和藥學上可接受的稀釋劑或載體。
21.根據(jù)權利要求20所述的藥物組合物，進一步包含治療有效量的谷物葡聚糖和 /或一種或多種抗炎劑。
22.一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染和動物的內(nèi)寄生生物感染或 侵染相關的皮膚狀況、炎癥、刺激或變態(tài)反應的治療/殺寄生生物的藥物組合物，包含治療 有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺、治療有效量的外寄生生物殺滅劑、治療有效量的內(nèi)寄生 生物殺滅劑和藥學上可接受的稀釋劑或載體。
23.根據(jù)權利要求22所述的藥物組合物，進一步包含治療有效量的谷物葡聚糖和 /或一種或多種抗炎劑。
24.一種用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況(如紅斑或 瘙癢)、炎癥(如耳炎)、刺激或變態(tài)反應的治療/殺寄生生物的藥物組合，包含含有治療 有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺和藥學上可接受的稀釋劑或載體的第一藥物組合物與含 有治療有效量的外寄生生物殺滅劑和藥學上可接受的稀釋劑或載體的第二藥物組合物，其 中，所述第一和第二藥物組合物用于單獨地、順序地或同時施用。
25.根據(jù)權利要求24所述的藥物組合，進一步包括用于治療或預防動物的內(nèi)寄生生物 感染或侵染的第三藥物組合物，所述第三藥物組合物包含治療有效量的內(nèi)寄生生物殺滅劑 和藥學上可接受的稀釋劑或載體，其中，所述第三藥物組合物用于與第一和第二組合物單 獨地、順序地或同時施用。
26.包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺和藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥物 組合物用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況、炎癥、刺激或變 態(tài)反應的用途。
27.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述藥物組合物進一步包含治療有效量的外 寄生生物殺滅劑。
28.根據(jù)權利要求27所述的用途，其中，所述外寄生生物殺滅劑是殺蟲劑。
29.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述藥物組合物用于治療或預防動物的跳蚤 過敏性皮炎。
30.根據(jù)權利要求27所述的用途，其中，所述藥物組合物進一步包括治療有效量的用 于治療或預防動物的內(nèi)寄生生物感染或侵染的內(nèi)寄生生物殺滅劑。
31.根據(jù)權利要求30所述的用途，其中，所述內(nèi)寄生生物殺滅劑是驅蠕蟲劑。
32.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述藥物組合物進一步包含治療有效量的谷 物日-葡聚糖和/或一種或多種抗炎劑。
33.根據(jù)權利要求27所述的用途，其中，所述藥物組合物進一步包含治療有效量的谷 物日-葡聚糖和/或一種或多種抗炎劑。
34.根據(jù)權利要求30所述的用途，其中，所述藥物組合物進一步包含治療有效量的谷 物日-葡聚糖和/或一種或多種抗炎劑。
35.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述一種或多種燕麥蒽酰胺以大約0.0001至 大約375ppm或其間的任何值或子范圍的濃度存在。
36.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述一種或多種燕麥蒽酰胺以大約0.3至大約 15ppm或其間的任何值或子范圍的濃度存在。
37.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述一種或多種燕麥蒽酰胺以大約1.5至大約 4. 5ppm或其間的任何值或子范圍的濃度存在。
38.根據(jù)權利要求1所述的用途，其中，所述藥物組合物包含0.1重量％至25重量％的 含有基于燕麥提取物的大約1至大約1500ppm或其間的任何值或子范圍的濃度的一種或多 種燕麥蒽酰胺的燕麥提取物。
39.根據(jù)權利要求38所述的用途，其中，所述燕麥提取物包含基于燕麥提取物大約3至 大約45ppm或其間的任何值或子范圍的濃度的一種或多種燕麥蒽酰胺。
40.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述藥物組合物是溶液、凝膠、洗劑、乳劑、軟 膏劑或粉末的形式。
41.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述藥物組合物是以噴霧或點滴形式施用于 動物的溶液形式。
42.根據(jù)權利要求26所述的用途，其中，所述組合物中的一種或多種燕麥蒽酰胺由包 括以下步驟的方法制備a.磨碎完整的燕麥，b.用溶劑提取獲得的燕麥片或磨碎的燕麥部分，c.調(diào)整獲得的燕麥提取物的pH值到<4. 0，d.pH < 4. 0的燕麥提取物通過< 104MWC0的膜進行膜過濾。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療或預防與動物的外寄生生物感染或侵染相關的皮膚狀況、炎癥、刺激或變態(tài)反應的方法和組合物。該方法包括向動物皮膚施用包含治療有效量的一種或多種燕麥蒽酰胺、任選的外和/或內(nèi)寄生生物殺滅劑和藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥物組合物。
文檔編號A61K36/899GK101854928SQ200880115107
公開日2010年10月6日 申請日期2008年11月6日 優(yōu)先權日2007年11月8日
發(fā)明者D·A·費爾德, I·W·科特雷爾, M·J·雷德蒙德 申請人:希普洛有限公司