專利名稱：皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物類皮膚美容保健制劑產(chǎn)品和技術(shù)，特別指可用于延緩皮膚衰老和美容抗 皺的一種皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳及其制備方法。
技術(shù)背景關(guān)于皮膚皺紋的
背景技術(shù)：
皮膚位于人體的表面， 一般由表皮、真皮和皮下脂肪組織所組成，它是人體最大的器官 ，擔(dān)負(fù)著重要的生理學(xué)功能。皮膚不僅具有十分重要的屏障作用和防御功能，而且還具有諸 多的生理作用和代謝功能。然而，隨著歲月的流逝、年齡的增長(zhǎng)，人皮膚與其他組織器官一 樣，也逐漸開(kāi)始出現(xiàn)衰老，皮膚衰老是不可改變的自然規(guī)律。皮膚衰老最直觀、最主要的表 現(xiàn)之一就是皺紋。甚至有學(xué)者認(rèn)為，皺紋是肉眼觀察皮膚老化最重要的標(biāo)志之一。皺紋是內(nèi)因性和外因性皮膚老化最明顯，最重要的特征，也是整體機(jī)能老化最直觀，最易 觀察的外部征象和指標(biāo)。人的皺紋一般從20歲左右開(kāi)始出現(xiàn)，并隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸增多和加深，并進(jìn)行性加重。有人觀察認(rèn)為，人體的皺紋從前額部開(kāi)始出現(xiàn)，與此同時(shí)在外側(cè)眼角部出現(xiàn)扇形展開(kāi)的皺紋，接著圍繞眼瞼周圍出現(xiàn)魚(yú)尾紋和放射紋。由口至腭部皺紋深溝是45 歲以后發(fā)展起來(lái)的，并不斷向口的周圍延伸。以后甚至向耳根部，頸部和全身發(fā)展。也有學(xué)者 認(rèn)為，皺紋主要由皮膚生理性老化或自然老化和光照老化等原因共同產(chǎn)生。自然老化在皮紋 加深的同時(shí)，伴有皮膚變薄和彈性喪失，累及全身皮膚，光老化導(dǎo)致的皺紋是由于紫外線( UV)損害，在光暴露部位的皮膚常伴有皮膚干燥、粗糙、皮溝加深，皮嵴隆起，出現(xiàn)皮革樣 外觀，伴毛細(xì)血管擴(kuò)張，外觀灰暗，無(wú)光澤，色素異常，甚至癌變等。關(guān)于皺紋的分級(jí)，臨床皮膚和醫(yī)學(xué)美容界，曾有人將皮膚皺紋分為輕、中、重、嚴(yán)重四個(gè) 等級(jí)，S卩I級(jí)為輕度皺紋，在面部表情靜止時(shí)不易察覺(jué)，只有在面部作表情運(yùn)動(dòng)時(shí)才能隱約可 見(jiàn)；II級(jí)為中度皺紋，在面部表情靜止時(shí)隱約可見(jiàn)，而在面部作表情運(yùn)動(dòng)明顯可見(jiàn)；III級(jí)為 重度皺紋，在面部表情靜止時(shí)皺紋就明顯可見(jiàn)，但在用力伸展皺紋時(shí)可見(jiàn)皺紋明顯減輕；IV級(jí) 為嚴(yán)重皺紋，即使加力伸展皺紋時(shí)皺紋仍然清晰可見(jiàn)。當(dāng)然，也有人將皺紋分為三個(gè)等級(jí)或按 照皺紋的部位，多少，長(zhǎng)短和深淺進(jìn)行積分分級(jí)。關(guān)于皺紋的分類，目前學(xué)術(shù)界傾向于將面部的皺紋分為三大類，即體位性皺紋、動(dòng)力性 皺紋和重力性皺紋。體位性皺紋大都是頸闊肌長(zhǎng)期伸縮的結(jié)果，主要出現(xiàn)在頸部。體位性皺紋的出現(xiàn)并非都是皮膚老化，但隨著增齡，橫紋變得越來(lái)越深，而出現(xiàn)皮膚老化性皺紋；動(dòng) 力性皺紋是表情肌長(zhǎng)期收縮的結(jié)果，主要出現(xiàn)在額肌的抬眉紋、皺眉肌的眉間紋、眼輪匝肌 的魚(yú)尾紋、口輪匝肌的口角紋和唇部豎紋、顴大肌和上唇方肌的頰部斜紋等；重力性皺紋主 要是由于皮下組織脂肪、肌肉和骨骼萎縮、皮膚老化后，加上地球引力及重力的長(zhǎng)期作用逐 漸產(chǎn)生的。不過(guò)，也有人按照皺紋形成的病因分為生理性皺紋、病理性皺紋和光照性皺紋及 老化性皺紋?？傮w上講，皮膚皺紋的產(chǎn)生是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程及該過(guò)程產(chǎn)生在外部的特征性現(xiàn)象 ，與多種因素有關(guān)，包括真表皮連接變薄，層粘連蛋白-5減少，皮膚膠原，氨基葡聚糖及皮下 脂肪的丟失，重力及肌肉、關(guān)節(jié)的運(yùn)動(dòng)也起了重要作用，還與激素、種族、遺傳、氧化、壓力 及系統(tǒng)性疾病、空氣污染、溫度、吸煙、酒精有一定關(guān)系。具體地說(shuō)，皮膚皺紋的產(chǎn)生主要是因?yàn)棰偎謥G失增多隨著增齡，表皮與真皮結(jié)構(gòu)處變 平，表皮變薄，表面積增大，使皮膚水分揮發(fā)加快，丟失增多，導(dǎo)致皮膚組織細(xì)胞皺縮和老化， 出現(xiàn)組織形態(tài)學(xué)改變，而使皮膚出現(xiàn)細(xì)小皺紋;②皮膚角質(zhì)層中水分含量減少隨著年齡的增 長(zhǎng)，天然保濕因子含量減少，使皮膚水合能力下降，由于水合能力降低，皮膚難以保持正常水 分，而使皮膚逐漸出現(xiàn)細(xì)小皺紋，隨著皺紋的進(jìn)一步增多和加深，使皮膚表面積不斷增加，水 分喪失更加嚴(yán)重，此時(shí)皮膚干燥，皺紋加重。特別是皮膚水脂乳化物含量減少，使皮膚角質(zhì)層 中水分含量減少。皮膚水脂乳化物(HE)是由小汗腺分泌的汗液與皮脂腺分泌的皮脂在皮膚表 面所形成的一層乳狀膜，隨著年齡增長(zhǎng)，皮膚組織中的汗腺逐漸萎縮，數(shù)目減少，分泌功能也日 趨下降，皮脂腺數(shù)目也明顯減少，皮脂分泌下降導(dǎo)致皮膚角質(zhì)層的HE含量也不斷減少，其皮 膚的滋潤(rùn)和保水功能降低，使皮膚干燥。隨著HE減少，皮膚表皮相應(yīng)失去其滋潤(rùn)和保水功能， 特別是皮膚中和堿性物質(zhì)的能力大為降低，使皮膚干燥程度增加，皮膚變粗變硬，出現(xiàn)明顯粗 糙;③表皮細(xì)胞更新速度減慢隨年齡的增長(zhǎng)，表皮細(xì)胞的代謝能力減弱，更新速度開(kāi)始減慢， 新生細(xì)胞生成減少，角朊細(xì)胞增大， 一些角朊細(xì)胞出現(xiàn)角化不全，表面輪廊不清，角質(zhì)層屏障功 能減弱，使皮下組織水分儲(chǔ)備不足、皮膚干燥和皺紋增加;④表皮黑素細(xì)胞的改變:活化的黑 素細(xì)胞的數(shù)目隨年齡增加而減少，且其儲(chǔ)備能力也在不斷減少，使其光老化作用加強(qiáng)，真皮彈 性纖維加快變性和破壞，使皺紋增多加深加重；而真皮膠原纖維和彈力纖維改變，決定了皮膚 皺壁，松弛，萎縮，毛細(xì)血管擴(kuò)張等老化外貌的發(fā)生和發(fā)展;⑤真皮膠原纖維的變性和合成減少 是引起皮膚彈性和韌性下降及皺紋形成的重要原因之一，然而皮下組織中的脂肪組織的萎縮 及功能改變?cè)诎櫦y的形成和加重方面也起了重要作用。有報(bào)道認(rèn)為，老年人的皮下脂肪組織 減少，很大程度上是由于皮下脂肪組織萎縮的緣故。另外，由于老年人真皮纖維母細(xì)胞壽命縮短，分裂能力下降，致使老年期彈性蛋白的基因表達(dá)驟降，彈性蛋白基因表達(dá)下降，使功能性彈 性纖維合成減少，加上真皮網(wǎng)狀彈力纖維發(fā)生結(jié)構(gòu)性變化，分裂能力下降，使功能性的彈性纖維合成減少，這些是形成皺紋的重要因素;⑥機(jī)體代謝廢產(chǎn)物及毒素不斷長(zhǎng)期刺激積累，不僅 加快了組織和細(xì)胞的損傷，而且導(dǎo)致真皮結(jié)構(gòu)蛋白，結(jié)締組織和酸性粘多糖的降解，促使皮膚 進(jìn)一步老化，皺紋加重;⑦紫外線輻射損害的慢性積累，造成暴露部位的皮膚老化。皺紋是皮 膚光老化最明顯的外在表現(xiàn)，是紫外線(UV)對(duì)皮膚直接或間接損傷的累積效應(yīng)，在UV慢性輻射 下，表皮首先受損，皮膚光滑度降低，皮膚紋理發(fā)生改變，繼而膠原破壞，含量減少，皮膚失去正 常支撐結(jié)構(gòu)；同時(shí)，彈性纖維扭曲變性，功能喪失，皮膚失去彈性回縮力而松弛無(wú)彈性.皺紋不 斷加深;⑧主動(dòng)或被動(dòng)吸煙，低雌激素，生活壓力，睡眠不足，皮膚不清潔，表情肌運(yùn)動(dòng)，地球引 力也是皺紋形成的其中原因。有學(xué)者認(rèn)為，主動(dòng)或被動(dòng)吸煙可引起維生素A水平及面部角質(zhì)層 水分減少，真皮中部及網(wǎng)狀層彈性組織變性以及使外周血管收縮而致真皮局部缺血等，可能 是香煙中的毒性成分參與了皮膚的老化及皺紋形成過(guò)程;女性比男性更明顯，吸煙的數(shù)量(支 /年)與皺紋和皮膚灰暗的程度直接相關(guān)。低雌激素因參與皮膚膠原減少過(guò)程從而促使皺紋產(chǎn) 生。關(guān)于皮膚皺紋防治的
背景技術(shù)：
皺紋是皮膚在生命過(guò)程逐步形成和加重的，從某種意義上講，皮膚的皺紋對(duì)人體健康和 長(zhǎng)壽并無(wú)大礙。然而，對(duì)于美容和人體外部形象卻有著直接影響，因此，人們?nèi)匀幌Ｍ私?皺紋的成因，以幫助解決皺紋出現(xiàn)的煩惱和問(wèn)題。目前關(guān)于皮膚皺紋的防治主要從幾個(gè)方面 進(jìn)行:第一是預(yù)防性措施；第二是合理化調(diào)理；第三是針對(duì)性治療。在皮膚皺紋預(yù)防性措施方面，目前主要通過(guò):①平衡膳食為保持肌膚的健美，延緩肌膚的 衰老和皺紋產(chǎn)生，應(yīng)堅(jiān)持合理營(yíng)養(yǎng)，平衡膳食，限制總熱量和動(dòng)物性脂肪及膽固醇和食鹽的攝 入，保持多樣飲食，注意多食奶類、豆類、魚(yú)類、蔬菜、水果及富含維生素A、 B、 C、 E的食 物。維生素A、 E有抗氧化，抗輻射，抗角化功能，是抗皮膚衰老的良劑；B族維生素有抗氧 化、積蓄骨膠原的作用；維生素C能幫助人體骨膠原的合成，修復(fù)創(chuàng)傷，防止老化，淡化色 素等。②適量運(yùn)動(dòng)科學(xué)鍛煉，可使人體生命旺盛，促進(jìn)人類健康長(zhǎng)壽。長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)，可 使線粒體產(chǎn)生適應(yīng)變化，提高氧化磷酸化功能，從而延緩衰老過(guò)程中線粒體功能的退行性變 化，還能降低膽固醇(TC)、高甘油三酯(TG)和血漿低密度脂蛋白膽固醇，增高血漿高密 度脂蛋白膽固醇(HDL-G)。③良好心態(tài)不良精神狀態(tài)，也是引發(fā)皺紋的一方面，如憂慮 ，精神壓力等不正常的生活環(huán)境，有的人心靈上的創(chuàng)傷， 一夜間顯得蒼老許多，如皺紋的增 加及白發(fā)等，因此要保持良好的心態(tài)，學(xué)會(huì)放松自己。④注意防曬紫外線(UV)介導(dǎo)的光老化過(guò)程中，表皮損傷的發(fā)生先于真皮，表皮的角化過(guò)程受損，是早期皺紋形成的重要因素.外 出時(shí)應(yīng)避免日曬，如帶草帽或遮陽(yáng)傘，也可使用全波段防曬霜，既防UVB，又防UVA，防曬指數(shù) (SPE) 15-30即可。在皮膚皺紋的合理化調(diào)理方面，目前主要通過(guò)①采用中醫(yī)中藥療法抗皺中醫(yī)理論認(rèn)為，皮膚衰老以及整個(gè)機(jī)體衰老的直接原因是 五臟虛損，氣血失調(diào)。研究發(fā)現(xiàn)，許多中藥含有各種氨基酸，維生素，微量元素，果酸，脂類多糖 ，生物堿，皂苷等，具有清除體內(nèi)自由基，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，改善皮膚微循環(huán)，提高皮膚膠原 纖維及膠原蛋白的含量，調(diào)節(jié)免疫功能等。應(yīng)用中醫(yī)臨床辨證施治為基礎(chǔ)，運(yùn)用健脾補(bǔ)氣血， 溫補(bǔ)腎陽(yáng)，滋補(bǔ)腎陰，活血化瘀等法則治療虛衰癥，如補(bǔ)腎益精方(仙靈脾，何首烏，肉蓯蓉，骨 碎補(bǔ)等)；補(bǔ)腎復(fù)方(附子，肉桂，熟地，山茱萸，懷山藥，仙靈脾，茯苓，炙甘草)等。自由基是衰 老的重要啟動(dòng)因素，具有極強(qiáng)的氧化能力，可使生物膜中不飽和脂類發(fā)生過(guò)氧化，形成脂質(zhì)過(guò) 氧化物(LPO)，實(shí)驗(yàn)證明，多種中藥具有一定的抗氧化能力，如黃芪多糖，阿魏酸，甘草次酸等， 對(duì)羥自由基(.OH)以及超氧離子自由基均有較強(qiáng)的清除作用；紅景天，人參能增強(qiáng)組織SOD活性 ，降低LPO，還有三七，丹參，肉蓯蓉，枸杞，刺五加，菟絲子，巴戟天，淫陽(yáng)藿等等，均具有養(yǎng)顏抗 衰，除皺增白作用，中藥延緩皮膚老化的作用是多方面的，相應(yīng)的治療措施也應(yīng)是多樣的。② 采用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)療法抗皺:合理補(bǔ)充抗氧化劑，清除自由基，可預(yù)防和減緩皮膚衰老的發(fā) 生或改善已發(fā)生的癥狀?？寡趸瘎┑钠贩N很多，如維生素A， C， E，胡蘿卜素，番茄紅素，茶多酚 ，谷胱甘肽，輔酶QIO， N-三丁基菜詡苯基硝酮，褪黑素，二巰基乙醇，微量元素硒，鋅等。③ 外用保濕類護(hù)膚品皮膚中的含水量是皮膚滋潤(rùn)，豐滿，亮麗的關(guān)鍵，角質(zhì)層中水分含量 約為10%-15%，而其水分含量的減少在皺紋產(chǎn)生中具有重要意義。隨著年齡的增長(zhǎng)，角質(zhì)層中 的天然保濕因子含量減少，使皮膚水含性能下降，導(dǎo)致皮膚組織萎縮和老化，出現(xiàn)組織學(xué)的改 變，表現(xiàn)為皮膚細(xì)小皺紋的產(chǎn)生。合理應(yīng)用保濕劑，對(duì)保持皮膚的水分和恢復(fù)皮膚屏障功能 有著重要作用。保濕劑種類很多，如丙二醇，1-3-丁二醇，尿素，吡咯烷酮羧酸鈉，透明質(zhì)酸，甲 殼素及其衍生物，氨基酸類，蘆薈，膠原蛋白，泛醇，霍霍巴油，礦物油，凡士林油脂類等。甘油 也稱丙三醇，是化妝品中最早且最常使用的保濕劑，具有特定的功效，是化妝品優(yōu)質(zhì)保濕劑，它 通過(guò)促進(jìn)糜蛋白酶樣蛋白酶的活性固定角質(zhì)細(xì)胞的橋粒結(jié)構(gòu)，促進(jìn)干性皮膚角質(zhì)層橋粒降解，促進(jìn)脫屑，還可防止角質(zhì)層脂質(zhì)在濕度低的情況下結(jié)晶保持層狀結(jié)構(gòu)，起到皮膚保濕作用； 而丙二醇，1-3-丁二醇也是常用保濕劑，可作為助添劑也是一種促滲劑，有類似甘油的角質(zhì)松 解作用。丙二醇最大用量不要超過(guò)15%，否則會(huì)引起刺激反應(yīng)。還有尿素，它是一種無(wú)色梭柱 狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，水溶液顯中性反應(yīng)，具有抗菌，止癢，增加蛋白質(zhì)的水合作用，提高角質(zhì)層含水量，使皮膚柔軟，潤(rùn)澤，其皮膚保濕推薦用10%左右。膠原蛋白亦稱膠蛋白，是人體 內(nèi)含量最多的蛋白質(zhì)，主要存在于皮膚，骨骼，軟骨，牙齒，肌腱，韌帶和血管中，是結(jié)締組織重 要的蛋白質(zhì)，起著支撐器官、保護(hù)肌體的功能。它是由3個(gè)a螺旋肽鏈絞合而成的大分子( 分子量約30萬(wàn))在每個(gè)肽鏈上約含1200個(gè)氨基酸。由于其水解物多肽鏈中含有氨基、羧基和 羥基等親水基，對(duì)皮膚有較大的親和力并具有很好的保濕作用，其性質(zhì)溫和，補(bǔ)充人體流失的 膠原蛋白，氨基酸，保持皮膚水分，刺激皮膚微循環(huán)，促進(jìn)其新陳代謝，使皮膚光滑，亮澤，減少 皺紋等。透明質(zhì)酸(HA)也稱玻璃糖醛酸或玻尿酸，廣泛存在于機(jī)體各組織中，在機(jī)體內(nèi)通過(guò)粘 彈性(大分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu))及高度水合性等物理學(xué)功能以及與受體作用的生理學(xué)功能來(lái)發(fā)揮其重 要作用，是一種理想的天然保濕因子。將含HA的護(hù)膚品涂于皮膚時(shí)，可形成一層黏彈性水化膜 ，能潤(rùn)濕角質(zhì)層，維持和加強(qiáng)角質(zhì)層自身的吸水能力和屏障功能，促進(jìn)皮膚對(duì)護(hù)膚品養(yǎng)份的吸 收，防止皮膚干燥，使皮膚嫩滑，延緩和防止皮膚老化。氨基酸類中的三甲基甘氨酸(NMF-50)， 是自然界中存在的天然分子，存在于水生貝類動(dòng)物和植物的甜菜根，菠菜中。由于NMF-50具有 很強(qiáng)結(jié)合氫原子的極性端分子，所以，它能與水和類似水的分子強(qiáng)烈結(jié)合，從而使它具有獨(dú)特 的理化性質(zhì)。NMF-50是白色結(jié)晶狀粉末或微球形，物理?xiàng)l件改變時(shí)，它很容易把水分子釋放， 讓水分子可以被活細(xì)胞作用，涂擦于皮膚有良好的滋潤(rùn)清爽膚感(如絲綢般滑爽)和抗皺效果， 還具有酸性緩沖功能和抗表面活性劑刺激等?；艋舭陀偷闹饕煞质遣伙柡透呒?jí)醇和脂肪酸 ，類似人類皮膚自身所產(chǎn)生的天然油分，有良好的穩(wěn)定性，極易與皮膚融合，將其涂擦在皮膚 上時(shí)，在皮膚上形成一層非常薄的無(wú)油膜，具有皮膚保濕和修復(fù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，霍霍巴 油可以將面部表層干紋在使用lh，4h和8h后有效減少到26。/。、 18%、 11%。外用含有霍霍巴油護(hù) 膚品可以保持皮膚潤(rùn)滑8h以上，具有保濕和潤(rùn)滑皮膚的雙重作用，給人以柔軟而又不油膩的清 爽感覺(jué)。④外用抗氧化劑護(hù)膚品隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體各器官保護(hù)機(jī)制下降，機(jī)體生理性損傷，引 起的脂質(zhì)過(guò)氧反應(yīng)，即這些過(guò)多增強(qiáng)自由基能與多不飽和脂肪酸作用，形成過(guò)氧化脂質(zhì) (LPO)及其衍生物丙二醛(MDA)，這些強(qiáng)氧化性物質(zhì)又與磷脂、核酸及蛋白質(zhì)反應(yīng)，生成淀粉樣 不溶性化合物一脂褐素即老年斑(脂溢性角化病)，成為細(xì)胞老化的標(biāo)志，因此抗氧化一直是 防治皮膚老化的手段和方法。目前，常用的抗氧化劑包括酶類和非酶類，如超氧化物歧化酶 (SOD)，木瓜巰基酶，輔酶QIO，金屬硫蛋白(MT)，維生素E， C， A，谷胱甘肽，半胱氨酸，P -胡蘿卜 素，綠茶(茶多酚)等。超氧化物歧化酶(SOD)是一種重要的抗氧化酶，其皮膚抗衰老的重要作 用已經(jīng)得到廣泛證實(shí)，它能夠特異性清除超氧陰離子自由基。從人或哺乳動(dòng)物血液或臟器、 植物(刺梨和小白菜等)和微生物細(xì)胞中分離和純化出，SOD注射10-30單位/克 體重，可降低紫外線對(duì)皮膚的光老化損傷，局部外用SOD能夠降低皮膚中過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)的含量。因此， 能有效的防止自由基損傷，延緩皮膚衰老。S0D是帶負(fù)電荷的可溶性酶，涂在皮膚表面很難使 它較長(zhǎng)時(shí)間保留在皮膚上，因此也難于在皮膚表面發(fā)揮良好的抗老化作用。利用基因工程技 術(shù)中的基因連接、拼接、重組等技術(shù)重新合成或復(fù)制了一些SOD基因產(chǎn)品，如SOD復(fù)合酶及修 飾SOD及其衍生物，這類高科技產(chǎn)品，含有高度生物活性的大分子和小分子氧自由基清除劑， 在延緩皮膚老化和皺紋產(chǎn)生或加重方面有著更實(shí)際應(yīng)用的價(jià)值和廣闊前景。金屬硫蛋白(MT )是一類低分子量，富含半胱氨酸及非金屬離子的非酶蛋白質(zhì)，分子量為6000-7000，富含活 性巰基(-SH)，含60-63個(gè)氨基酸殘基。MT在人體內(nèi)參與各種代謝活動(dòng)，它具有奇妙的生物學(xué)性 性質(zhì)，對(duì)有害的羥自由基有很強(qiáng)的清除作用，保護(hù)自由基引起的過(guò)氧化損傷，使丙二醛的生成 明顯減少，對(duì)成年人來(lái)說(shuō)，外源性補(bǔ)充MT，能夠清除體內(nèi)自由基，防止脂質(zhì)過(guò)氧化使細(xì)胞尤其 是細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸得以保護(hù)，從而起到保護(hù)細(xì)胞膜的流動(dòng)性，防止細(xì)胞衰老的作用， 也能使丙二醛的產(chǎn)生減少，不僅可以使老化色素沉著減少，同時(shí)可以和人體內(nèi)重金屬絡(luò)合，達(dá) 到解毒、排毒作用，MT對(duì)各種不同金屬的結(jié)合力不同，其結(jié)合力由強(qiáng)到弱的順序?yàn)殂y(Ag)， 汞(Hg)，鎘(Ca)，鉛(Pb)。有毒重金屬與MT結(jié)合后，其毒性不能發(fā)揮。重金屬毒性越強(qiáng)，MT的解 毒作用也愈強(qiáng)。MT是一重要的抗氧化和清除自由基蛋白質(zhì)，有減少皺紋產(chǎn)生或皺紋加重的作 用。茶多酚為黃酮類化合物，它是茶葉的提取物，能清除活性氧自由基，對(duì)超氧陰離子與過(guò)氧 化氫自由基清除率可達(dá)98。/。以上，其效果優(yōu)于經(jīng)典的天然抗氧化劑維生素E、 C;用0.05%和 0. 1%濃度的茶多酚喂養(yǎng)家蠅，可使家蠅大腦的SOD活性升高，脂質(zhì)過(guò)氧化降低，還能提高老大鼠 體內(nèi)谷胱甘過(guò)氧化酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力，有抗過(guò)氧化質(zhì)脂及延緩脂褐素 生成作用。而在皮膚皺紋的針對(duì)性治療方面，目前主要通過(guò)①化學(xué)剝脫法，即用一定種類和劑量皮膚角質(zhì)溶解劑或剝脫劑進(jìn)行表皮或真皮淺層 剝脫從而使皮膚皺紋消除或減輕?；蚶酶鞣N酸或堿性化學(xué)物質(zhì)使表皮腐蝕后再生的抗皺美 容方法。化學(xué)剝脫法可根據(jù)其作用和治療目的進(jìn)行深淺不同的化學(xué)剝脫，維生素A酸(維甲酸 )，a -羥基酸(AHA)使用較多。維生素A酸(RA)是一組化合物總稱，包括與維生素A作用相似的 所有天然和人工合成的化合物，維生素A酸分為三代，第一代為非芳香類(視黃醇，全反式維A酸 );第二代為單芳香類(阿維A酯，阿維A);第三代為多芳香類(他扎羅汀，阿達(dá)帕林，芳維A胺乙酯 )。維生素A酸(維甲酸)對(duì)皮膚老化的表皮粗糙和色素沉著及皺紋的形成均有明確作用。外用 全反式維A酸能明顯改善皮膚光老化的現(xiàn)象，消除或減少皺紋形成，減少或淡化色素沉著等，且 組織學(xué)的改變也和臨床的改善相對(duì)應(yīng)，增加膠原的合成并減少紫外線誘導(dǎo)的膠原降解是其重要的作用機(jī)制，因此，外用全反式維A酸對(duì)皮膚光老化的形成還有預(yù)防作用，其外用濃度應(yīng)從 低濃度(如O. 015%)開(kāi)始，以后逐步過(guò)度到高濃度(O. 05%-0. 1%)，多采用霜?jiǎng)┬?，可減少刺激，凝 膠劑型適合于油性皮膚和潮濕環(huán)境，由于維A酸具有光敏性，最好在晚上使用，開(kāi)始每天晚涂擦 一次，等癥狀減輕后，改為每周2-3次，維持療效；不良反應(yīng)主要有皮膚干燥，脫屑、瘙癢，多 于使用頭一個(gè)月發(fā)生，以后逐漸耐受。它的不良反應(yīng)發(fā)生主要看RA的種類、濃度、基質(zhì)的性 質(zhì)等。a-羥基酸(AHA)，包括甘醇酸、檸檬酸、乳酸等，即我們通常說(shuō)的果酸，使用后可使角 質(zhì)層變薄，通過(guò)抑制轉(zhuǎn)移酶與激酶干擾離子鍵，細(xì)胞橋粒形成，減弱角質(zhì)細(xì)胞間黏附且誘導(dǎo)細(xì) 胞脫落，促進(jìn)細(xì)胞更新；在真皮，其增加粘多糖在基低層的沉積，促進(jìn)新的膠原合成，來(lái)替代 膠原與彈性纖維的降解。故認(rèn)為a-羥基酸可以改善皺紋及恢復(fù)真皮彈性。水楊酸(BHA)，又 稱B柔膚果酸，為脂溶性，具有優(yōu)秀去角質(zhì)，清潔毛孔的能力。對(duì)皮膚刺激較果酸低，不但有縮 小毛孔，去除細(xì)小皺紋，改善日曬引起的老化，還有淡化色素斑作用。② 激光除皺法及光子嫩膚法:激光除皺法應(yīng)用于治療皮膚老化皺紋也較原來(lái)有了新的進(jìn) 展，如高能超脈沖C02激光除皺技術(shù)的應(yīng)用，能使老化皮膚在瞬間即逝，且能使老化的膠原再生 ，皮膚彈性恢復(fù)，皮膚較術(shù)前明顯細(xì)嫩光滑。但由于這種方法仍然容易出現(xiàn)皮膚色素沉著，近 年來(lái)又出現(xiàn)鉺激光除皺技術(shù)，這種激光治療效果更顯著，更安全，且組織損傷更小，恢復(fù)更快， 更好。最近幾年又相繼出現(xiàn)幾種無(wú)創(chuàng)，無(wú)損，無(wú)副作用的脈沖染料激光和半導(dǎo)體激光及其該激 光除皺嫩膚儀器，這類特定譜段的強(qiáng)脈沖激光能夠穿透皮膚，并通過(guò)其產(chǎn)生潛熱效應(yīng)改善皮膚 微循環(huán)，刺激真皮膠原蛋白的再生和彈性纖維的重新排列以及真皮細(xì)胞外基質(zhì)分泌增加，使皮 膚彈性，韌性逐步恢復(fù)，粗大毛孔縮小，細(xì)小或較輕度皺紋減輕或消失。③ 水針及注射除皺法水針及注射除皺技術(shù)也是改變皮膚老化皺紋的重要方法之一。由 于這種方法不用開(kāi)刀，出血少，痛苦小，不留疤，且操作簡(jiǎn)單，因此，目前很多美容機(jī)構(gòu)和醫(yī)學(xué)美 容中心都在開(kāi)展這些技術(shù)?？梢哉f(shuō)，注射消除皮膚老化皺紋，成為當(dāng)今社會(huì)美容和對(duì)抗皮膚 老化的熱點(diǎn)，也有學(xué)者將其稱之為軟組織填充法。此法主要是在面部皺紋處注射填充一些軟 組織填充劑，通過(guò)軟組織填充劑注射，可達(dá)到一定的抗皺效果。以往多采用液體硅膠、硅凝 膠、水凝膠、生理鹽水和植物油等。以后，又從國(guó)外引進(jìn)聚丙烯酰胺凝膠，還又注射肉毒桿 菌毒素、膠原蛋白、自體脂肪、Artecoll和Restylane等。最近，有專家將Artecoll中PMMA的 表面制備成圓形光滑的微球，加入到一定濃度的膠原溶液中混合均勻，然后注射到皺紋部位； 當(dāng)機(jī)體吸收微粒體中的膠原蛋白后，PMMA會(huì)刺激皮膚產(chǎn)生新的膠原蛋白并逐漸取代注入的膠 原；同時(shí)，PMMA還能起到支架的作用，可使自身纖維結(jié)締組織增生并包裹PMMA微粒球，最終變 為自體成分，既不會(huì)被機(jī)體吞噬細(xì)胞吞噬和消化吸收，也使PMMA對(duì)組織的刺激性和變態(tài)反應(yīng)降低至最小，而且，看上去更顯得光滑平整，達(dá)到永久性除皺的目的。據(jù)報(bào)道，在加拿大整形 美容界常用它填充面部皺紋，包括額頭紋、眼角紋、眉紋、口角紋等。Restylane是一種由合 成透明質(zhì)酸加工而成的軟組織填充劑，為非動(dòng)物源性物質(zhì)。有報(bào)道，Restylane能夠與人體皮 膚組織自然融合，并能為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供有效的通道，注射用量很少，但除皺效果顯著。在歐洲 ，Restylane用于皮膚除皺其保持時(shí)間是膠原蛋白的兩倍。國(guó)外專家們預(yù)測(cè)， 一旦Restylane 獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)應(yīng)用，將會(huì)出現(xiàn)一個(gè)注射Restylane除皺的高潮。④ 機(jī)械磨削法:是一種手術(shù)性除皺法，通常在擬進(jìn)行磨削術(shù)部位常規(guī)消毒，并同時(shí)進(jìn)行浸 潤(rùn)麻醉，后用水砂紙或牙臺(tái)鉆帶動(dòng)磨削砂輪，以1000-1500rpm/min的速度在面部嚴(yán)重皺紋處進(jìn) 行淺表性磨削，其深度一般為致創(chuàng)面出現(xiàn)密集點(diǎn)狀出血為宜或磨削后出現(xiàn)白色平行線或隆線，表示已達(dá)到真皮乳頭層。磨削后用紗布?jí)浩戎寡⑷∠痉彩苛旨啿挤笥诨疾考訅喊?或涂抗生素軟膏防止創(chuàng)面感染，并使之自然干燥愈合。通過(guò)在皮膚皺紋出較表淺性的磨削，可 刺激皮下膠原蛋白增生，新生皮膚再生，從而使面部嚴(yán)重皺紋得以消除或減輕。⑤ 手術(shù)拉皺法:也被稱之為面部皮膚提升術(shù)，或者也稱為面部皮膚除皺術(shù)。隨著年齡增長(zhǎng) ，皮膚本身老化，面部骨骼吸收或退縮，軟組織萎縮，皮下組織減少或變性等，而使面部逐漸形 成較為明顯的皺紋。但由于整個(gè)面部的皮膚面積并未明顯縮小，因此，皮膚顯得多余而松弛形 成皺紋。如果將多余的皮膚切除，然后再通過(guò)手術(shù)縫合將皮膚拉緊就能消除皺紋。過(guò)去，一般 在發(fā)際線后側(cè)切開(kāi)皮膚，用鈍器將皮膚剝離，向上和向兩側(cè)拉緊皮膚，再將多余皮膚切除即能 將皺紋消除。對(duì)于面部除皺方式的選擇，在進(jìn)行上面部除皺時(shí)，通常在內(nèi)窺鏡下或非內(nèi)窺鏡下通過(guò)小切 口額部懸吊進(jìn)行，只對(duì)額部皺紋嚴(yán)重者采用傳統(tǒng)的冠狀切口手術(shù)。頸部采用頦部脂肪抽吸、 頸闊肌折疊等術(shù)式。頜下脂肪和頦下脂肪量多者，用細(xì)管進(jìn)行抽吸;對(duì)皮膚衰老以中面部為主 、頸部變化不明顯的中老年患者，用減少瘢痕除皺方式，縮短切口至耳垂部位，對(duì)頸部衰老明 顯患者仍以傳統(tǒng)的手術(shù)切口延長(zhǎng)到乳突發(fā)際。⑥ 手術(shù)重塑皮膚結(jié)構(gòu)抗皺法進(jìn)行手術(shù)重塑皮膚結(jié)構(gòu)抗皺前標(biāo)記受術(shù)者外眥皺紋范圍， 對(duì)明顯粗大的魚(yú)尾紋重點(diǎn)作出標(biāo)記，根據(jù)受術(shù)者選擇重瞼術(shù)，上瞼松垂皮膚切除成形，下瞼眼 袋整形術(shù)。在完成皮膚縫合前，從已切開(kāi)的上瞼或者下瞼外眥部皮膚切口，用眼科剪緊貼真皮 下銳性剝離，潛性分離至已表記的外眥皺紋范圍，將鐮刀狀手術(shù)刀伸入皮下創(chuàng)口，縱橫網(wǎng)狀切 割真皮，切割深度達(dá)真皮乳頭層，以不刺破表皮基底層為度，切割密度約lmm左右.對(duì)已標(biāo)記的 較粗大明顯的魚(yú)尾紋作重點(diǎn)切割。操作時(shí)皮膚切口要避免過(guò)度牽拉以及切割損傷，切割真皮 注意用力及間隔盡量均勻一致，壓迫止血，縫合皮膚，剝離創(chuàng)面加壓包扎。外眥魚(yú)尾紋屬而部動(dòng)力性皺紋，隨著皮膚衰老，真皮變薄，彈性纖維，膠原纖維數(shù)量減少及斷裂，使皺紋加深增粗 ，出現(xiàn)不可逆改變。30歲以下外眥魚(yú)尾紋主要在面部肌肉活動(dòng)時(shí)明顯，認(rèn)為皺紋發(fā)生主要是 眼輪匝肌收縮所致；31-40歲受術(shù)者皺紋在肌肉靜止時(shí)明顯，面肌肉活動(dòng)時(shí)更加深粗，認(rèn)為這 與肌肉收縮有關(guān)外，還與皮膚衰老有密切關(guān)系；40歲以上受術(shù)者皺紋靜止時(shí)也粗深， 一般伴有 外眥角下垂，認(rèn)為主要與皮膚衰老、真皮彈性膠原纖維減少斷裂有關(guān)。真皮切割除皺基礎(chǔ)為 切割后真皮創(chuàng)面刺激彈性、膠原纖維以及其它細(xì)胞外基質(zhì)增生合成，修復(fù)變薄斷裂的真皮組 織，使纖維重新排列而重塑皮膚結(jié)構(gòu)。另外，真皮切割和切斷一部分神經(jīng)纖維減少了肌肉動(dòng) 力作用，但真皮切割除皺術(shù)操作技巧很重要，外眥皮膚剝離時(shí)，應(yīng)緊貼真皮下進(jìn)行，縱橫切割 真皮時(shí)應(yīng)正確掌握深度及密度，對(duì)皺紋明顯的位置應(yīng)重點(diǎn)切割，如因術(shù)中及術(shù)后壓迫止血不夠 ，則可能形成輕度血腫；如因切口過(guò)度牽拉，則可能形成輕度癱痕。特別是由于面部血運(yùn)豐富 ，剝離真皮時(shí)有較多毛細(xì)血管滲血，術(shù)中應(yīng)注意對(duì)剝離區(qū)域的壓迫止血，確認(rèn)無(wú)滲血后再縫合 切口，且術(shù)后對(duì)除皺區(qū)域應(yīng)加壓包扎以避免滲血或血腫形成而影響愈后及恢復(fù)延遲，切割真 皮時(shí)應(yīng)避免對(duì)切口過(guò)度牽拉及損傷。真皮切割法除皺術(shù)或者說(shuō)手術(shù)重塑皮膚結(jié)構(gòu)抗皺法，對(duì) 于四十歲以下受術(shù)者魚(yú)尾紋消除滿意，除皺術(shù)后皮膚柔軟、平整、年青化改善明顯。對(duì)于40 歲以上受術(shù)者雖外眥皺紋較術(shù)前減少，但效果不甚滿意，表明真皮切割法除皺術(shù)更適用于40 歲以下中細(xì)皺紋去除?？朔四ハ鳌⒒瘜W(xué)學(xué)及注射等方法的許多不足點(diǎn)。 關(guān)于肉毒素的
背景技術(shù)：
肉毒毒素(Botulinum toxin， BTX)是由厭氧性的革蘭氏陽(yáng)性(G+)芽胞肉毒梭狀桿菌在生 長(zhǎng)繁殖過(guò)程中所產(chǎn)生的一種細(xì)菌外毒素，它具有極其強(qiáng)烈的毒性，通常O. 05 y g即可使人致死 。因此，肉毒毒素是所有細(xì)菌毒素中毒性作用最強(qiáng)的毒素之一。按其抗原性的不同，它可分為 A、 B、 C、 D、 E、 F、 G七種類型，其中A、 B、 E、 F四種類型能引起或誘發(fā)人類中毒，而C、 D、 G三種類型尚未發(fā)現(xiàn)引起或誘發(fā)人類中毒的正式報(bào)道。雖然，各型肉毒毒素的抗原性和免疫性 及其毒性作用機(jī)制不同，但其分子結(jié)構(gòu)基本一致，都是由重鏈(H)和輕鏈(L)構(gòu)成，而兩者主要 通過(guò)二硫鍵結(jié)合，但可以被蛋白酶裂解。肉毒毒素也是一類大分子蛋白復(fù)合物，其相對(duì)分子 質(zhì)量為15萬(wàn)道爾頓，其中，重鏈(H)相對(duì)分子質(zhì)量為10萬(wàn)道爾頓，輕鏈(L)為5萬(wàn)道爾頓，各 型肉毒毒素具有此相近的相對(duì)分子質(zhì)量。重鏈(H)的羧基端與靶細(xì)胞受體具有高度特異性結(jié) 合位點(diǎn)，重鏈(H)的氨基端則相關(guān)于細(xì)胞內(nèi)吞轉(zhuǎn)運(yùn)活動(dòng):另一條輕鏈(L)，實(shí)質(zhì)上是鋅肽鏈的 內(nèi)切酶，為肉毒毒素的活性成分。肉毒毒素溶液為無(wú)色、無(wú)臭、無(wú)味，如果溫度在4(TC以上、特別是在堿性環(huán)境中，肉毒 毒素很容易發(fā)生熱變性而失去其毒性作用。而且，在空氣-液體界面形成的氣泡，也能夠使肉毒毒素的伸展和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而使其失去部分毒性。同時(shí)，過(guò)低濃度的稀釋也可 使肉毒毒素的穩(wěn)定性降低，但加入PH《6.8其它蛋白(如明膠、血清白蛋白等)緩沖液稀釋可 以防止這一效應(yīng)。因此，肉毒毒素產(chǎn)品通常是以一種復(fù)合制劑的形式保存和運(yùn)輸。過(guò)去，一直視肉毒毒素為劇烈、甚至是致命的細(xì)菌毒素。但隨著上世紀(jì)70年代美國(guó)舊金 山眼科研究所從肉毒毒素中毒患者最早出現(xiàn)眼癥狀、后緩慢恢復(fù)中得到的啟示，大膽將肉毒 毒素應(yīng)用于斜視、眼瞼痙攣等眼科疾病的治療。在此基礎(chǔ)上，臨床上又逐步將肉毒毒素的應(yīng) 用擴(kuò)展到面部肌肉痙攣、痙攣性斜頸及肢體肌張力障礙等癥狀的治療，而且都取得了良好的 效果。事實(shí)上，早在1817年Justi皿s Kemer就首先發(fā)現(xiàn)在某些食物中攜帶的毒素能夠?qū)е鹿趋?肌和副交感神經(jīng)功能麻痹；1897年就有學(xué)者從肉毒中毒患者尸體中分離出肉毒毒素；1920年 有學(xué)者試圖提取肉毒毒素。1946年Scott提取了純?nèi)舛径舅兀?950年就有學(xué)者采用肉毒毒素 治療肌肉過(guò)度收縮。1973年Scott用猴眼肌作動(dòng)物試驗(yàn)，證明肉毒毒素可導(dǎo)致肌肉無(wú)力。 1979年美國(guó)眼力健(Allergan)公司正式生產(chǎn)肉毒毒素，其藥名為保妥適(Botox) ， 1980年 Scott用肉毒毒素治療斜視和眼瞼痙攣。1987年Carruthers等用肉毒毒素治療眼部疾病患者 ，1989年12月美國(guó)FDA正式批準(zhǔn)A型肉毒毒素作為臨床合法治療藥物，也是國(guó)際上第一個(gè)將A型 肉毒毒素用于臨床治療的國(guó)家，也是第一個(gè)細(xì)菌毒素被允許用于臨床治療。而英國(guó)生產(chǎn)的肉 毒毒素的商品名為迪斯波特(Dysport) ; 1993年中國(guó)研制出肉毒毒素產(chǎn)品，其商品名為肉 毒毒素(BTXA); 1997年2月中國(guó)衛(wèi)生部也正式批準(zhǔn)A型肉毒毒素作為臨床合法治療藥物，這是 繼美英兩國(guó)之后第三個(gè)能合法生產(chǎn)和應(yīng)用A型肉毒毒素的國(guó)家。2001年加拿人批準(zhǔn)可將肉毒 毒素用于美容，2002年4月美國(guó)FDA也正式批準(zhǔn)肉毒毒素應(yīng)用于美容領(lǐng)域，之后，英國(guó)和法國(guó) 等國(guó)家亦先后批準(zhǔn)肉毒毒素用于美容。目前，肉毒毒素中的A型肉毒毒素(BTXA)毒力最強(qiáng)，被研究也最多，很多基礎(chǔ)和臨床應(yīng) 用及其機(jī)制均較為清楚，其主要作用機(jī)制是①神經(jīng)毒素H鏈的羧基端受體識(shí)別位點(diǎn)與膽堿 能神經(jīng)末梢質(zhì)膜上受體特異性結(jié)合；②在受體介導(dǎo)下，經(jīng)能量依賴性細(xì)胞內(nèi)吞作用完成神經(jīng) 毒素跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)形成胞內(nèi)體；③酸性環(huán)境的胞內(nèi)體，神經(jīng)毒素經(jīng)一系列蛋白分解活動(dòng)，形成L 鏈一鋅肽鏈內(nèi)切酶并釋放進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)，裂解突觸相關(guān)膜蛋白或突觸融合蛋白，從而抑 制了乙酰膽堿以囊泡為單位的"傾囊"式突觸間隙釋放，即所謂量子式釋放。而肌肉化學(xué)性 去神經(jīng)支配效應(yīng)則是肉毒毒素作用的最主要臨床效應(yīng)，即是乙酰膽堿突觸間隙量子式釋放抑 制，從而阻斷了有效性神經(jīng)-肌接頭的興奮傳遞，致使肌肉失神經(jīng)支配，臨床則表現(xiàn)為肌肉 弛緩性癱，即所謂的肌肉化學(xué)性去神經(jīng)支配。具體地說(shuō)，A型肉毒毒素特異性地作用在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)終板的突觸前膜，通過(guò)作用于膽堿運(yùn)動(dòng)神經(jīng)末梢，阻斷乙酰膽堿釋放到突觸間隙中，導(dǎo) 致受累的神經(jīng)不能刺激肌纖維支配肌肉的收縮，因而肌張力減低，肌痙攣緩解。它不阻斷神 經(jīng)興奮的傳播，神經(jīng)和肌肉都沒(méi)有興奮性和傳導(dǎo)性的損害，這種作用也稱為化學(xué)去神經(jīng)作用 。肉毒毒素的麻痹效果在注射后l- 7天出現(xiàn)，7-14天達(dá)到高峰，持續(xù)12-24周不等，隨時(shí)間 推移，其作用逐漸減弱或消失。A型肉毒毒素是一種神經(jīng)毒素，也是一種肌肉松弛劑。正是應(yīng)用A型肉毒毒素的作用特點(diǎn) ，國(guó)內(nèi)外己將肉毒毒素用于涉及眼科、神經(jīng)科、康復(fù)科、消化科及皮膚科(多汗癥、美容)等 多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域超過(guò)五十多種病癥的治療，包括用于斜視、眼瞼痙攣、口及面部肌肉痙攣、痙 攣性斜頸、肢體痙攣和畸形、職業(yè)性肌張力障礙、半側(cè)面肌肉痙攣、小兒腦癱、小兒麻痹、 多汗癥等，并取得了較好的臨床療效。目前，國(guó)際上用于制備A型肉毒毒素的菌株通常采用A型肉毒梭狀桿菌Hall株，并通過(guò)含有 胰酪-酵母透析液-葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后，再通過(guò)硫酸沉淀、磷酸鹽緩沖液提取、核糖 核酸酶處理、DEAE A50層析、超濾濃縮、冷凍干燥結(jié)晶等過(guò)程制備A型肉毒毒素。按照美國(guó) 的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，純凈的A型肉毒毒素為單一針狀結(jié)晶，將它溶解于磷酸鹽緩沖液后，在278nm處 有最大的光吸收；且0D，/0D278之比《0. 6 ;其特異毒性或純度為3X1(/LD50 (小白鼠)±20% mgpr;在lcm比色光路中，lmg/ml的毒素具有1. 65的消光系數(shù)。A型肉毒毒素的穩(wěn)定性及有效 期與保存溫度密切相關(guān)。關(guān)于A型肉毒毒素(BTXA )的效價(jià)，各國(guó)制品略有差別。中國(guó)產(chǎn)品和 美國(guó)的A型肉毒毒素產(chǎn)品效價(jià)基本一致，即中國(guó)和美國(guó)的l單位B0T0X等于英國(guó)4單位DysportA型肉毒毒素產(chǎn)品為結(jié)晶型粉末狀針劑，至少要保存在-4'C以下的環(huán)境中，在-2(TC的環(huán) 境中可長(zhǎng)期保存，且使用和操作過(guò)程中盡可能保持低溫環(huán)境，以減少肉毒毒素生物活性的損 失。關(guān)于保存溫度，有報(bào)道認(rèn)為，A型肉毒毒素凍干制品在-2(TC下保存，3年內(nèi)其毒性效價(jià) 可保持穩(wěn)定不變。而在2-8'C條件下，A型肉毒毒素的凍干制品2年內(nèi)保持穩(wěn)定，效價(jià)不變。 在25'C條件下一周內(nèi)保持穩(wěn)定，效價(jià)不變。說(shuō)明制品穩(wěn)定性、效期與保存溫度有關(guān)。因此， 有條件時(shí)最好將A型肉毒毒素的凍干制品保存在-2(TC以下的低溫冰箱最為理想;普通冰箱冷 凍室內(nèi)一般溫度在-15'C左右，也基木能達(dá)到同樣效果。由于A型肉毒毒素的凍干制品在25'C 保存一周其效價(jià)仍較穩(wěn)定，所以用干冰或冰皇等制冷劑包裝、運(yùn)輸，在數(shù)天內(nèi)不會(huì)影響制品 質(zhì)量。A型肉毒毒素在注射前應(yīng)根據(jù)需要用不含防腐劑的注射生理鹽水進(jìn)行稀釋才能使用。而 關(guān)于A型肉毒毒素的凍干制品經(jīng)稀釋后的應(yīng)用濃度，應(yīng)根據(jù)不同國(guó)家的B0T0X制劑分別對(duì)待。而肉毒毒素的實(shí)際用藥劑量主要依據(jù)注射位點(diǎn)及病種不同而酌情給藥，有條件的可在肌電圖 的引導(dǎo)下給藥，并根據(jù)肌電圖的反應(yīng)調(diào)整給藥的部位和劑量。應(yīng)用中國(guó)的產(chǎn)品時(shí)，使用時(shí)，用 生理鹽水稀釋至所需濃度。 一般地說(shuō)，采用現(xiàn)用現(xiàn)配的方法，用生理鹽水2-4ml將A型肉毒毒 素的凍干制品稀釋至2. 5- 5.0U/0. lml的濃度進(jìn)行應(yīng)用。稀釋應(yīng)用時(shí)，應(yīng)注意掌握好溫度。溫 度不能過(guò)低，更不能過(guò)高。因?yàn)?，A型肉毒毒素的凍干制品在室溫狀態(tài)下的溶解最好，溫度過(guò)低 將影響它的溶解性;而溫度過(guò)高，則影響它的生物活性及藥用效價(jià)。另外，配制好的肉毒毒素 溶液最好一次用完；實(shí)在用不完，可置2-8'C冰箱之中，但最多只能保持4個(gè)小時(shí)，即要求在4 小時(shí)內(nèi)全部用完；且在進(jìn)行稀釋配制肉毒毒素注射液的過(guò)程中，應(yīng)將注射器針頭貼在安瓶?jī)?nèi) 壁緩慢推入生理鹽水以使藥物全部溶解，不可用力沖注、搖晃、振蕩，應(yīng)盡量減少抽吸次數(shù) 及泡沫形成，而且，A型肉毒毒素的凍干制品切勿反復(fù)凍融，以減少因?yàn)闀r(shí)間和溫度等相關(guān) 因素對(duì)肉毒毒素空間結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性的影響，降低其生物活性，造成肉毒毒素藥效降低，影響 治療效果，同時(shí)增加機(jī)體產(chǎn)生肉毒素A抗體的機(jī)會(huì)，進(jìn)一步導(dǎo)致A型肉毒毒素效價(jià)降低及其生 物學(xué)功能的發(fā)揮。而且，，對(duì)于之前注射過(guò)A型肉毒毒素的患者，再次進(jìn)行治療時(shí)維持的時(shí)間會(huì) 比較長(zhǎng)些，因?yàn)樽⑸溥^(guò)的肌肉有姜縮。而且，A型肉毒毒素消除皺紋的效果還和皮膚本身的彈 性和厚度有關(guān)，所以相對(duì)年輕的人注射后效果會(huì)好些，而皮膚越松弛，效果越差。在應(yīng)用A型肉毒毒素B0T0X注射前，應(yīng)核實(shí)受術(shù)者有無(wú)肉毒毒素的適應(yīng)癥和禁忌癥，在確 定準(zhǔn)確無(wú)誤后才能進(jìn)行肉毒素的注射治療。另外，在應(yīng)用A型肉毒毒素B0T0X注射時(shí)，需要熟 練掌握A型肉毒毒素的特性，熟悉面部神經(jīng)、肌肉的解剖和眼眶部的結(jié)構(gòu)，注意產(chǎn)品的正確 保存、適合的稀釋濃度、準(zhǔn)確的劑量和精確到位的注射對(duì)于保證除皺療效非常重要。同時(shí)， 清楚了解A型肉毒毒素BOTOX應(yīng)用后可能會(huì)出現(xiàn)的副作用也非常必要。而且，要嚴(yán)格注意肉毒 毒素注射部位的消毒，用75%的酒精消毒注射部位皮膚，須待消毒酒精完全揮發(fā)后再進(jìn)行注 射，以免影響操作和消毒酒精降低肉毒毒素的生物活性。A型肉毒素本質(zhì)為異體蛋白、且分子量較大，因此，具有一定的免疫原性。肉毒毒素制 劑在凍干過(guò)程中或多或少有毒力的喪失，受術(shù)者實(shí)際上接受的是毒素和類毒素的混合注射， 因而其抗原性比生物活性檢測(cè)所指示的更強(qiáng)。用肉毒毒素免疫的人可產(chǎn)生特異的高水平的抗 毒素，在部分接受肉毒毒素重復(fù)注射的受術(shù)者已檢測(cè)到抗體。肉毒毒素抗體的形成的臨床表 現(xiàn)現(xiàn)是，對(duì)再次注射肉毒毒素的治療效果明顯減弱。而大劑量、頻繁注射是產(chǎn)生肉毒毒素抗 體的主要因素。一般來(lái)講，A型肉毒毒毒素治療是安全的，它對(duì)人的半數(shù)致死量(LD50)為40U/kg體重。而 一次美容除皺療法通常用量在20-25U，屬于微小劑量，且A型肉毒毒毒素注射后，會(huì)選擇性與高親和性地結(jié)合在神經(jīng)末稍，尚無(wú)多余毒素進(jìn)入血液或腦脊液，故毒副作用不會(huì)很大。然而，如 果注射A型肉毒毒素出現(xiàn)技術(shù)方面的問(wèn)題，或者A型肉毒毒素向注射部位周圍組織的擴(kuò)散，也可 引起此局部的不良反應(yīng);其常見(jiàn)副作用如下:①呼吸道的反應(yīng):A型肉毒毒素在進(jìn)行頸部的肌肉 或喉部的肌肉注射后，可能出現(xiàn)短暫的聲嘶、誤吸，吞咽障礙、呼吸阻塞感和呼吸困難等;② 眼部的反應(yīng):A型肉毒毒素眼部注射后的不良反應(yīng)主要有眼瞼下垂、局部水腫和瘀斑、上瞼 下垂、眼瞼閉合不全、眼眶脂肪疝、畏光流淚、視力模糊、眉毛下垂、眼瞼下外翻以及暴露 性角膜炎等;③面部的反應(yīng):A型肉毒毒素面部注射后的副反應(yīng)主要有上唇下垂、鼻唇溝變淺 、表情不自然、額部緊繃感、鄰近部位皺紋加深等;④遠(yuǎn)隔部位肌肉的反應(yīng):局部注射治療劑 量的A型肉毒毒素后，在遠(yuǎn)隔部位肌肉也發(fā)現(xiàn)了廣泛輕度的單纖維肌電圖異常，主要表現(xiàn)為顫 抖值和肌纖維密度增加，說(shuō)明A型肉毒毒素注射后可以弓1發(fā)遠(yuǎn)隔部位肌肉的反應(yīng)等; 肌肉組 織學(xué)改變:在小鼠的腿部肌肉內(nèi)注射A型肉毒毒素后，解剖注射部位的肌肉，發(fā)現(xiàn)肌纖維萎縮 ，神經(jīng)纖維發(fā)芽。神經(jīng)發(fā)芽呈現(xiàn)復(fù)雜的分支排列，肌肉萎縮通常為6周或更長(zhǎng)，然后在數(shù)周 內(nèi)增粗；⑥全身反應(yīng)A型肉毒毒素注射后可出現(xiàn)一些全身反應(yīng)，主要表現(xiàn)為發(fā)燒，全身不 適，疲倦，乏力和感冒樣癥狀等；除此之外，A型肉毒毒素注射還有一些主要的禁忌證，如重癥 肌無(wú)力，Lambert Eaton綜合征等全身性肌無(wú)力性疾病，使用影響神經(jīng)肌接頭傳遞藥物時(shí)，孕婦 及哺乳期婦女，注射部位感染，有A型肉毒毒素中毒史等。 關(guān)于肉毒素用于皮膚美容除皺的
背景技術(shù)：
隨著肉毒毒素臨床應(yīng)用的不斷發(fā)展，特別是1986年加拿大溫哥華不列顛哥倫比亞大學(xué)眼 科教授在用A型肉毒毒素治療眼瞼痙攣時(shí)意外發(fā)現(xiàn)它的皮膚除皺作用后，便開(kāi)始與皮膚科合 作，大膽在美容抗皺領(lǐng)域應(yīng)用。開(kāi)始，他們先將A型肉毒毒素應(yīng)用于眉間紋治療，以后，擴(kuò) 大到魚(yú)尾紋、額頭紋等部位皺紋的治療，均取得了意想不到的效果。1997年有關(guān)A型肉毒毒 素治療皺紋的綜述發(fā)表在權(quán)威性的雜志上，使A型肉毒毒素正式在美容除皺方面應(yīng)用。此后，A型肉毒毒素美容除皺方法便開(kāi)始在加拿大、美國(guó)、歐洲共同體國(guó)家逐步得到推 廣應(yīng)用，特別是美國(guó)一些好萊塢影星們?cè)趹?yīng)用A型肉毒毒素美容除皺治療后，其面部皺紋消 除，顯得面部更加年輕漂亮、美麗動(dòng)人，便開(kāi)始轟動(dòng)一時(shí)，使A型肉毒毒素除皺在美國(guó)美容 界風(fēng)靡開(kāi)來(lái)，并不斷波及到東南亞、中國(guó)乃至全世界，并被有關(guān)專家譽(yù)為"二十一世紀(jì)醫(yī)學(xué) 美容除皺的主要方法"，也被稱之為"生物美容除皺的主要方法"。實(shí)際上，最初將A型肉毒毒素用于面部除皺，主要是用在面部的上l/3除皺，如抬頭紋、 眉間紋、魚(yú)尾紋等，以后才逐步將它用于面部的中部和下部除皺，如鼻背部皺紋、口周皺紋 及面中部動(dòng)力性皺紋如過(guò)深的鼻唇溝紋等；最后，用于頸部和上胸部(包括乳房)的除皺，如頸闊肌索條狀畸形等?，F(xiàn)在除了除皺，還有用A型肉毒毒素治療面部不對(duì)稱、眉毛不對(duì)稱、 面癱、下眼瞼輪匝肌肥厚、軟組織移位等。除了單獨(dú)使用A型肉毒毒素，還將它配合其他的 除皺方法應(yīng)用，以增加療效和持續(xù)時(shí)間，如作為內(nèi)窺鏡額部提緊術(shù)、激光除皺術(shù)前、軟組織 充填術(shù)中的輔助性治療。A型肉毒毒素除皺方法是將一定劑量的肉毒毒素注射到面部對(duì)應(yīng)部位皮下肌肉組織。如 治療額頭紋，可采用"V"字形進(jìn)行肉毒毒素注射，同時(shí)在"V"字形中間再適當(dāng)增加一些注 射點(diǎn)。治療女性眉間紋，通常將一定劑量的肉毒毒素注射液注射在眉間5個(gè)點(diǎn)；而治療男性 眉間紋，則在治療女性眉間紋方法的基礎(chǔ)上于左右眉上各加l個(gè)點(diǎn)，S卩7個(gè)點(diǎn)同時(shí)注射一定劑 量的肉毒毒素注射液。在進(jìn)行魚(yú)尾紋治療時(shí)，則分別將一定劑量的肉毒毒素注射液于兩側(cè)外 眼角各放射狀注射3個(gè)點(diǎn)。具體方法是①注射應(yīng)用液準(zhǔn)備將每瓶50 U或55 U或IOO U的 A型肉毒毒素從-2(TC冰箱內(nèi)取出，臨用時(shí)，立即用注射生理鹽水稀釋成2.5U/ml，分裝于l ml皮試注射器內(nèi)，然后用4.5號(hào)針頭注射。用注射生理鹽水稀釋后的A型肉毒毒素要求于4h內(nèi) 用完，且使用過(guò)的注射器及其相關(guān)物品一律銷毀處理。②注射部位及劑量的選擇:根據(jù)額紋 及魚(yú)尾紋數(shù)量多少及年齡大小確定。 一般年齡偏小、皺紋少、皮膚柔軟者，額紋注射3-4個(gè) 點(diǎn)、魚(yú)尾紋注射l-2個(gè)點(diǎn)，每點(diǎn)注射1.25U或2. 5U。而年齡偏大、鈹紋密集、皮膚僵硬者，可 在額紋處注射5-6個(gè)點(diǎn)，魚(yú)尾紋注射2-3個(gè)，每點(diǎn)至少注射2. 5U，并于雙側(cè)皺眉肌內(nèi)各注射 2.5U。額紋注射位點(diǎn)距眉上緣2-3cm，魚(yú)尾紋注射位點(diǎn)距外眥部l cm。③注射方法:令受術(shù)者 仰臥，施術(shù)者坐于其頭頂側(cè)。將注射部位消毒后，右手持注射器，額紋從上向下、與皮膚成 5°夾角進(jìn)針深約5 mm，根抓情況注射肉毒毒素O. 05- 0.1 ml，即肉毒毒素用量l. 25-2. 5U。 一般正中線一點(diǎn)兩側(cè)各對(duì)稱性注射l-3點(diǎn)，兩點(diǎn)相距l(xiāng)-2cm?；蛞灾芯€為準(zhǔn)等距離兩側(cè)各注射 2-3個(gè)點(diǎn)。魚(yú)尾紋注射方向是從內(nèi)向外、與皮膚成5。夾角角度進(jìn)針。以魚(yú)尾紋的中線確定注 射位點(diǎn)。 一般為l-3點(diǎn)，劑量為0.05-0. 1 ml，即肉毒毒素用量1.25-2. 5U。為防止過(guò)敏反應(yīng) 的發(fā)生， 一般注射第1針后觀察10-15 min，若無(wú)反應(yīng)，再繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)注射。注射完畢后再 觀察30 min方可離院。為防萬(wàn)一，治療前應(yīng)常規(guī)備用腎上腺素和肉毒毒素抗血清，以便搶救 之用。④療效判斷:完全除皺，即注射肉毒毒素后額紋及魚(yú)尾紋完全消失，皮膚飽滿無(wú)痕跡 ，且持續(xù)3-6個(gè)月；部分除皺，即注射肉毒毒素后額紋及魚(yú)尾紋明顯變淺，但略有痕跡，持 續(xù)3-6個(gè)月；除皺無(wú)效，即注射肉毒毒素后額紋及魚(yú)尾紋等皺紋均無(wú)變化。A型肉毒毒素在面部美容除皺方面的應(yīng)用，目前主要是應(yīng)用在治療額紋、魚(yú)尾紋、眉間 紋。這是因?yàn)檫@幾類皺紋在面部最明顯處，且面部表情運(yùn)動(dòng)時(shí)更加清晰可見(jiàn)，并直接影響著 人的美容，因此，急于處理干凈。額紋俗稱抬頭紋，位于眉和眉間的上方至鄰近前額發(fā)際處，呈橫向排列，為額肌收縮所致 。額肌是前額的一塊縱向大肌肉，起于帽狀腱膜，止于眉和鼻根部皮膚，它的收縮可以產(chǎn)生抬 頭紋，同時(shí)額肌的下部有對(duì)抗眉毛下垂的作用。溝紋與肌纖維方向垂直，一般為3-6條，可分 為正中組和外側(cè)組。外側(cè)組的產(chǎn)生乃因額肌直接收縮所致，中間組的產(chǎn)生則系兩側(cè)額紋共同 牽拉正中皮膚的結(jié)果。注射位點(diǎn)的分布與額紋平行，且以前正中線為中心向兩側(cè)對(duì)稱分布。 注射的目標(biāo)肌肉實(shí)際上是額肌肌腹。注射位點(diǎn)一般遠(yuǎn)離眉弓，以免出現(xiàn)雙眼上瞼上抬困難。魚(yú)尾紋呈粗細(xì)不等的條紋狀，沿外眥部呈放射狀排列，閉眼時(shí)因眼輪匝肌收縮致紋理更為 明現(xiàn)。皺紋少者，選擇中線為注射點(diǎn)，距外眥l cm左右；皺紋稍多，則可選中線上、下各l點(diǎn)為 注射點(diǎn)；皺紋密集而多者，則可確定上、中、下三點(diǎn)為注射點(diǎn)，其目的使眼輪匝肌外眥部松弛 。因?yàn)檠圯喸鸭⑴c閉合眼睛的功能，環(huán)繞在瞼板和眶膈前，它的對(duì)抗肌是提上瞼肌，眼輪匝 肌眶部的用力收縮可以引起外眥部放射狀的皺紋一魚(yú)尾紋。而且，顴肌和眶外側(cè)眼輪匝肌的 協(xié)同作用，在外眥部可加深魚(yú)尾紋。眼輪匝肌外眥部松弛，則魚(yú)尾紋可得到消除。眉間紋也是肉毒毒素面部除皺首選的適應(yīng)證。應(yīng)注射皺眉肌、眼輪匝肌內(nèi)側(cè)緣和降眉肌 。因?yàn)檠劭羯蟽?nèi)側(cè)的部分肌纖維的功能可降低眉內(nèi)側(cè)部分，眶上外側(cè)的眼輪匝肌收縮可降低 眉外側(cè)。皺眉肌起于眉弓內(nèi)端，止于眉部皮膚，緊貼骨膜，在眼輪匝肌的下方，它向下內(nèi)側(cè) 牽拉產(chǎn)生垂直方向的眉間紋。降眉肌是指眼輪匝肌眼眶部少數(shù)纖維，終止于眉，可向下?tīng)坷?眉頭產(chǎn)生橫行的鼻背部皺紋。降眉間肌起于鼻上皮膚，止于前額皮膚。女性眉采用5點(diǎn)注射 ，每點(diǎn)5個(gè)單位；男性水平型眉采用7個(gè)點(diǎn)注射，每點(diǎn)3- 4個(gè)單位。如果肌肉塊比較大，用量 可以增加到每點(diǎn)5-7個(gè)單位。在A型肉毒毒素注射后，除了消除皺眉時(shí)產(chǎn)生的眉間紋，部分有 前額緊張性頭痛的患者在注射后頭痛癥狀消失;此外由于內(nèi)側(cè)降眉肌麻痹，患者注射后內(nèi)眉 上抬，眉型改變。與面部皮膚提緊除皺術(shù)、局部膠原注射術(shù)、激光除皺術(shù)、磨削術(shù)和化學(xué)剝脫術(shù)除皺等方 法相比，A型肉毒毒素除皺美容具有簡(jiǎn)便易行、作用短、起效快、效果明顯、非皮膚浸潤(rùn)性 、無(wú)痛苦、副作用小、不需住院、無(wú)嚴(yán)重并發(fā)癥和后遺癥等優(yōu)點(diǎn)。A型肉毒毒素美容除皺雖然較其它針對(duì)性治療方法有一定的優(yōu)點(diǎn)，但A型肉毒毒素美容除 皺的缺點(diǎn)也很突出，主要是①因?yàn)樯窠?jīng)突觸新芽形成和神經(jīng)-肌肉傳導(dǎo)的重建，使A型肉毒毒素松馳肌肉的作用 逐漸降低，從而會(huì)使治療后的局部皺紋逐漸重現(xiàn)。因此，肉毒毒素除皺效果是暫時(shí)性的，除皺 效果不能持久。通常，肉毒毒素除皺效果只能維持3-6個(gè)月時(shí)間，有些甚至只能維持l-2個(gè)月 ;而要維持除皺效果，則需要多次反復(fù)進(jìn)行注射。 一般情況下，按照每次注射肉毒毒素可維持3-6月除皺效果計(jì)算，則每年需注射2-3次。② 由于肉毒毒素屬于浸潤(rùn)性美容治療方法，具有一定的風(fēng)險(xiǎn)性，且多部位實(shí)施多點(diǎn)注射， 較為痛苦，因此，A型肉毒毒素用于皮膚美容不是一般的美容行為(或行業(yè)行為)，而是一種醫(yī)療 行為，且是高一級(jí)的醫(yī)療行為，不能在一般美容院可以進(jìn)行的， 一定要在從事醫(yī)療美容的單位 進(jìn)行，并由技術(shù)水平較高的醫(yī)生操作，也就是使用單位和個(gè)人都要經(jīng)資質(zhì)認(rèn)證，只有具備上述 條件的單位和個(gè)人才能供藥和用藥。因此非一般美容院或普通美容師能合法應(yīng)用，必須在具 有國(guó)家衛(wèi)生部批準(zhǔn)的美容醫(yī)療單位和具有執(zhí)業(yè)醫(yī)師執(zhí)照的專業(yè)醫(yī)師才能組織實(shí)施。③ 肉毒毒素是一類外源性異種蛋白，具有一定的免疫源性，反復(fù)注射或者大劑量注射肉毒 毒素，機(jī)體有可能產(chǎn)生相應(yīng)的抗肉毒毒素抗體。通常，注射肉毒毒素后約有3-10%產(chǎn)生了抗體 ，而一旦形成這種抗體，以后再次使用肉毒毒素用于美容除皺將會(huì)產(chǎn)生抗藥性，從而影響治療 效果。大劑量、頻繁注射是產(chǎn)生肉毒毒素抗體的主要因素，因此，只能采用適量注射和盡可 能有較長(zhǎng)時(shí)間間隔期注射，原則上注射間隔期不應(yīng)短于3個(gè)月。④ 局部注射A型肉毒毒素對(duì)額部除皺效果較為理想，其次為魚(yú)尾紋、鼻背紋，但對(duì)于眉 間紋的治療效果較差。因?yàn)槊奸g紋由皺眉肌、降眉肌、眼輪肌內(nèi)側(cè)和額肌的下側(cè)緣共同作用 產(chǎn)生，且皺眉肌和降眉肌收縮力較大，位置較深，這給眉間注射A型肉毒毒素的位置準(zhǔn)確性、合適的用量及合適用藥濃度帶來(lái)一定困難，從而會(huì)導(dǎo)致部分病例效果欠佳。因此，注射A 型肉毒毒素后眉間紋效果相對(duì)較差；⑥注射A型肉毒毒素后眼袋明顯增加，另外，鼻根較粗 大患者眉間紋注射A型肉毒毒素后因皺眉肌及降眉肌松馳，可導(dǎo)致鼻根粗大，影響美觀。另外，A型肉毒毒素抗皺治療的副作用也很糟糕，主要表現(xiàn)為①部分人治療部位出現(xiàn)前 額繃緊感、沉重感、麻木感；②面肌無(wú)力，表情不自然、出現(xiàn)呆板現(xiàn)象；③雙眼上瞼活動(dòng)不 靈活；④眼睛畏光流淚；⑤少數(shù)出現(xiàn)鼻周圍皺紋加深；⑥出現(xiàn)眉形改變或眉下垂；⑦上眼瞼 下垂、下眼瞼外翻；⑧視力模糊或下降；⑨注射部位有輕度疼痛，局部出現(xiàn)水腫、紅斑、淤 斑；⑩暴露性角膜炎；而且，嚴(yán)重時(shí)，還可能出現(xiàn)復(fù)視、斜視、吞咽困難、心律失常、心臟病 發(fā)作等不良反應(yīng)。特別是肉毒毒素引起的上瞼下垂，是由于注射的肉毒毒素彌散，并通過(guò)眶膈膜使提上瞼肌 麻痹造成的。這與注射的手法關(guān)系密切，如果注射速度快，用力或過(guò)深(在骨膜周圍)可以促進(jìn) 毒素?cái)U(kuò)散，易引起上瞼下垂。上瞼下垂通常在注射后7-10天出現(xiàn)；另B0T0X稀釋體積過(guò)大時(shí)也 易出現(xiàn)。同時(shí)，如多數(shù)的額頭紋，則必須麻醉比較大范圍的肌肉才能達(dá)到滿意的效果，但額肌 的下2. 5-4cm部分參與眉毛的運(yùn)動(dòng)，如完全麻醉額肌會(huì)導(dǎo)致眉毛下垂，尤其是本身眉毛就比較 低的人。甚至可使眉、眼瞼下垂和表情失落等在眉外側(cè)特別明顯，嚴(yán)重的由于眉毛部位的軟組織也下垂，甚至?xí)踝⊙劬?。魚(yú)尾紋治療不當(dāng)，也可能使下眼皮松弛或眼袋突出，出現(xiàn)暫時(shí) 性的外下眼瞼下垂，如果肌肉麻痹的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可以導(dǎo)致角膜病變、眼干、淺表點(diǎn)狀角膜角 化，甚至角膜潰瘍。在A型肉毒毒素進(jìn)行鼻唇溝治療時(shí)，在遠(yuǎn)離口角的顴大肌起始點(diǎn)，即下瞼眼 輪匝肌的下緣水平注射，不僅可以柔和魚(yú)尾紋，且可以減輕鼻唇溝的皺折。但注射部位不是 鼻唇溝上方的鼻翼側(cè)，而是在頰正中注射，且注射后不當(dāng)向下按摩可致提上唇肌麻痹，到致同 側(cè)唇下垂。除此之外，A型肉毒毒素抗皺治療還有嚴(yán)格的禁忌證，如下列情況之一的人就不適合用 A型肉毒毒素注射治療面部皺紋:①精神不穩(wěn)定或有不現(xiàn)實(shí)目標(biāo)的人；②孕婦或哺乳期婦女； ③患有神經(jīng)肌肉疾病的患者；④對(duì)毒素制品中任何成分(毒素、鹽水、人血蛋白)過(guò)敏的人； ⑤目前正在使用影響神經(jīng)肌肉傳導(dǎo)和毒素效果的藥物治療(如氨基糖甙類藥物、青霉胺、奎 寧和鈣離子拮抗劑等)；⑥由于注射A型肉毒毒素后面部表情肌麻痹，表情會(huì)減少， 一些需要 靠面部表情的人如演員等也不適合注射；⑦年齡大、皮膚過(guò)度松弛，尤其是眼皮下墜的患者 ;⑧對(duì)于下眼皮過(guò)度松弛或眼袋突出的患者應(yīng)該避免用A型肉毒毒素治療魚(yú)尾紋，以免下眼 瞼外翻或眼袋惡化。關(guān)于勝肽的技術(shù)背景勝肽其化學(xué)本質(zhì)就是肽(P印tide)，民間也將其稱之為小分子蛋白質(zhì)。近年來(lái)，在美國(guó)等 發(fā)達(dá)國(guó)家或地區(qū)，已有將勝肽添加到護(hù)膚品中已經(jīng)很流行，因?yàn)樗煞窒冗M(jìn)，效果顯著，被 很多藥妝品牌使用。但是勝肽的價(jià)格很貴，所以添加了勝肽的產(chǎn)品也賣的比較貴。勝肽實(shí)際上也是蛋白質(zhì)的最小單位-氨基酸的縮合物，生物化學(xué)上也稱之為縮氨酸。按照 勝肽中所含有氨基酸的數(shù)目不同可將其分為二勝肽(含兩個(gè)氨基酸)，三勝肽(含三個(gè)氨基酸 )，四勝肽(含四個(gè)氨基酸)，……，十勝肽(含十個(gè)氨基酸)，等等，依此類推。在目前所發(fā)現(xiàn)或使用的勝肽中，按照美容化妝品的功效作用，可將它們的主要功效歸納為 以下五個(gè)方面的功能:①面部神經(jīng)傳導(dǎo)抑制作用抑制SNARE接受體的合成，抑制肌膚兒茶酚胺 (catecholamine)和乙酰膽堿(acetylcholine)過(guò)度釋放，局部阻斷神經(jīng)傳遞肌肉收縮訊息，影 響皮膚神經(jīng)傳導(dǎo)，使臉部肌肉放松，達(dá)到平撫動(dòng)態(tài)紋和靜態(tài)紋及細(xì)紋的，與此有關(guān)的這類勝肽 主要有六勝肽、五勝肽、七勝肽、八勝肽、二勝肽、十勝肽；②促進(jìn)膠原蛋白，彈力纖維和 透明質(zhì)酸增生，提高肌膚的含水量，增加皮膚厚度以及減少細(xì)紋的作用，這類勝肽有五勝肽、六勝肽、寡勝肽；③抗羰化，保護(hù)膠原不會(huì)被活性羰基團(tuán)損傷，促進(jìn)m型膠原的生長(zhǎng)，抗氧化，抗糖基化等作用，這類勝肽主要有二勝肽、三勝肽、銅勝肽；④抗水腫，改善微循環(huán) ，加強(qiáng)血液循環(huán)，消除炎癥等作用，這類勝肽主要有四勝肽；⑤阻斷MSH(促黑激素)的傳導(dǎo)，降低黑色素生成的作用，這類勝肽主要有九勝肽。而目前與美容化妝品應(yīng)用最為密切相關(guān)勝肽的主要有①六勝肽據(jù)報(bào)道，最早是由南極灣冰河泥中所發(fā)現(xiàn)的菌種-單胞綠膿菌所研發(fā)出 的六勝肽，因其具有類似肉毒桿菌所分泌的肉毒毒素對(duì)肌膚神經(jīng)傳導(dǎo)的抑制作用，故也稱之為 類肉毒毒素。將六勝肽作為主要功效成分，并透過(guò)涂抹六勝肽，以胺基酸復(fù)合成類似肉毒毒素 的結(jié)構(gòu)，可阻斷神經(jīng)傳遞肌肉收縮訊息，影響皮膚肌肉神經(jīng)傳導(dǎo)，使臉部肌肉放松，達(dá)到平撫 動(dòng)態(tài)紋和靜態(tài)紋及細(xì)紋的目的；并可預(yù)防兒茶酚胺過(guò)度釋放所產(chǎn)生的皺紋，如肌膚臉部重復(fù) 牽動(dòng)所形成的皺紋。有效舒緩并抑制額頭抬頭紋、眼睛魚(yú)尾細(xì)紋及皺紋周邊肌肉的收縮與活 動(dòng)，幫助肌肉放松，使肌膚彈性組織回復(fù)柔順平滑的線條，減少臉部細(xì)紋。六勝肽擁有肉毒毒 素的效果，但沒(méi)有注射用肉毒毒素的副作用。② 五勝肽:五勝肽具有促進(jìn)真皮膠原蛋白合成，以及彈力纖維和透明質(zhì)酸增生的作用，且還能提高皮膚組織的含水量，增加皮膚厚度及減少細(xì)紋的作用；同時(shí)增加一個(gè)長(zhǎng)鏈脂肪酸還可以增加吸收效果。③ 銅肽:被視為生長(zhǎng)因子，刺激細(xì)胞生長(zhǎng)，加速傷口修復(fù)，增加皮膚上皮組織再生;恢復(fù)肌 膚年輕，皮膚細(xì)胞增殖，減少粗細(xì)皺紋，減少疤痕，改善肌膚彈性，增加角質(zhì)細(xì)胞和纖維姆細(xì)胞 增生，亦可讓皮下組織增厚。同時(shí)，還具有刺激頭發(fā)生長(zhǎng)和減少落發(fā)，健全組織增加毛囊大小 及阻止組織氧化傷害。④ 四勝肽四勝肽具有抗水腫，改善微循環(huán)，加強(qiáng)血液循環(huán)，消除炎癥等作用，故在美容上 可用于抑制眼部水腫和眼袋加重等作用。⑤ 寡勝肽:寡勝肽也有一定的皮膚抗皺效果，且能豐唇和健胸等。綜上所述，上述任何一種皮膚抗皺方法均存在著這樣或那樣的問(wèn)題如采用預(yù)防性措施 (包括平衡膳食、適量運(yùn)動(dòng)、保持良好心態(tài)等)，只能對(duì)皮膚皺紋的產(chǎn)生起到一定的預(yù)防性 效果，而無(wú)法達(dá)到減輕或消除皮膚皺紋的效果。如采用合理化調(diào)理(包括中醫(yī)中藥療法抗皺 、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)療法抗皺、外用保濕類護(hù)膚品等)，雖能在一定程度上改善或減輕皮膚皺紋，特 別是對(duì)一些輕度皺紋確有一定幫助、且方式安全無(wú)痛苦，但對(duì)于一些中重度皺紋或一些運(yùn)動(dòng) 性皺紋、光老化性皺紋等作用效果非常之慢、且療效極其有限。如采用針對(duì)性治療方法(化 學(xué)剝脫法、激光除皺法、光子嫩膚法、水針及注射除皺法、機(jī)械磨削法、手術(shù)拉皺法、手術(shù) 重塑皮膚結(jié)構(gòu)抗皺法等)，雖對(duì)各種原因引起的皮膚老化或皺紋具有較好的效果，且時(shí)間短 、見(jiàn)效快，但這些方法均為創(chuàng)傷性方法，且可不同程度造成皮膚及組織直接或間接破壞或損 傷，不僅風(fēng)險(xiǎn)性大、后遺癥多、而且痛苦較大、愈合時(shí)間長(zhǎng)、費(fèi)用較高。特別是諸如皮膚磨削術(shù)、化學(xué)剝脫術(shù)等治療容易形成疤痕疙瘩、嚴(yán)重色素沉著或色素脫失。另外，磨削深度或 化學(xué)剝脫程度很難掌握，稍微疏忽，將很難避免毀容情況發(fā)生，而造成受術(shù)者終身遺憾和痛苦。與面部皮膚提緊除皺術(shù)、局部膠原注射術(shù)、激光除皺術(shù)、磨削術(shù)和化學(xué)剝脫術(shù)除皺等方 法相比，A型肉毒毒素除皺美容雖具有簡(jiǎn)便易行、作用明確、起效快速、效果明顯、淺皮膚浸 潤(rùn)性、痛苦較小、不需住院、且無(wú)嚴(yán)重并發(fā)癥和后遺癥等優(yōu)點(diǎn)。但采用A型肉毒毒素注射美 容除皺的缺點(diǎn)也很突出，如A型肉毒毒素注射時(shí)間過(guò)久后，其松馳肌肉的作用會(huì)逐漸降低，從而 會(huì)使治療后的局部皺紋逐漸重現(xiàn)。而要維持美容除皺效果，則需要多次反復(fù)注射或多位點(diǎn)注 射，但間隔期太短的反復(fù)多次注射，不僅較為痛苦，花費(fèi)更多，且容易產(chǎn)生相對(duì)應(yīng)的抗體抵消作 用效果，而且，具有更大的風(fēng)險(xiǎn)性和毒副作用。同時(shí)，A型肉毒毒素畢竟是一種生物毒素，注射用于皮膚美容，不是一般美容院可以合法進(jìn) 行的，而一定要在從事醫(yī)療美容的單位，且由技術(shù)水平高超的專業(yè)醫(yī)護(hù)人員操作，使其應(yīng)用 具有明顯的局限性。除此之外，局部注射A型肉毒毒素也可能使眼袋明顯增加，另外，鼻根較 粗大患者眉間紋注射A型肉毒毒素后因皺眉肌及降眉肌松馳，可導(dǎo)致鼻根粗大，影響美觀。尤其是注射A型肉毒毒素抗皺治療的副作用也很糟糕，不僅注射后容易出現(xiàn)治療部位的繃 緊感、沉重感、麻木感及面肌無(wú)力、表情不自然、呆板等現(xiàn)象，而且，有時(shí)出現(xiàn)雙眼上瞼活 動(dòng)不靈活、眼睛畏光流淚、視力模糊或下降、出現(xiàn)眉形改變或眉下垂及上眼瞼下垂、下眼瞼 外翻，甚至注射部位有時(shí)會(huì)出現(xiàn)疼痛、過(guò)敏、局部水腫、紅斑、淤斑，嚴(yán)重時(shí)，還可能出現(xiàn) 復(fù)視、斜視、吞咽困難等不良反應(yīng)。除此之外，A型肉毒毒素抗皺治療還有嚴(yán)格的禁忌證，如一些精神不穩(wěn)定的人、孕婦或 哺乳期婦女、患有神經(jīng)肌肉疾病的患者、對(duì)毒素制品中任何成分過(guò)敏的人、正在使用影響神 經(jīng)肌肉傳導(dǎo)和毒素效果的藥物治療(如氨基糖甙類藥物、青霉胺、奎寧和鈣離子拮抗劑等)； ⑥由于注射A型肉毒毒素后面部表情肌麻痹，表情會(huì)減少， 一些需要靠面部表情的人如演員 等也不適合注射；⑦年齡大、皮膚過(guò)度松弛，尤其是眼皮下墜的患者；⑧對(duì)于下眼皮過(guò)度松 弛或眼袋突出的患者應(yīng)該避免用A型肉毒毒素治療魚(yú)尾紋，以免下眼瞼外翻或眼袋惡化。特別是A型肉毒毒素在常溫(自然條件下)、特別是它稀釋成液體后非常不容易保存(必須 在四小時(shí)內(nèi)使用完畢)、儲(chǔ)存期很短、且很快失去生物活性，制備成皮膚外用精華素更加不容 易保存，即使置于冰箱中保存也是如此。而且，由于A型肉毒毒素分子量較大(大于15萬(wàn)道爾頓 )，因此，很難在皮膚上外用，或者通過(guò)皮膚作用途徑而發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)作用；如果采用不科學(xué)的態(tài) 度強(qiáng)行進(jìn)行皮膚外用，或皮膚外用過(guò)程中不慎進(jìn)入眼內(nèi)將會(huì)產(chǎn)生更加嚴(yán)重的影響和后果。由此可見(jiàn)，采用A型肉毒毒素注射治療進(jìn)行除皺有一定的風(fēng)險(xiǎn)和很多的局限性，配制成皮膚外用制劑因難以吸收和保持肉毒毒素活性又無(wú)法發(fā)揮其應(yīng)有的皮膚肌肉神經(jīng)麻痹作用而實(shí)現(xiàn)其皮膚肌肉松弛和美容抗皺的功效。雖然，勝肽種類和功效甚多，且已有不少歐美、日韓等發(fā)達(dá)國(guó)家及港澳臺(tái)地區(qū)用于高檔美 容化妝品之中，特別是將六勝肽作為肉毒毒素替代品用于皮膚美容和抗皺，但在應(yīng)用中仍然存 在一些缺陷和問(wèn)題，如勝肽(包括六勝肽)均為水溶性，雖然分子量很小，但仍很難透過(guò)皮膚發(fā) 揮其應(yīng)有的生物學(xué)效應(yīng)，即使采用一些能夠促進(jìn)其透皮吸收的促滲透劑等協(xié)助，其作用仍無(wú)法 達(dá)到理論上的效果，臨床試驗(yàn)表現(xiàn)為抗皺反應(yīng)較為緩慢，療效仍不十分顯著;而且，即使一部分 人群有效，但由于仍是通過(guò)類似肉毒毒素對(duì)面部肌肉神經(jīng)傳遞的抑制和面神經(jīng)的麻痹作用所 發(fā)揮的抗皺作用，因此，面部表情仍顯得有些不自然和不協(xié)調(diào)，特別是單純采用六勝肽這種類 似肉毒毒素的神經(jīng)麻痹作用，其抗皺效果仍只是對(duì)一些由于表情肌運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的皺紋有效，而 對(duì)生理性老化和光老化所致的皺紋無(wú)實(shí)質(zhì)性的改觀和療效，而且，對(duì)那些由于表情肌運(yùn)動(dòng)所產(chǎn) 生的皺紋的有效也只是十分短暫且可逆的，并不能從根本上解決皮膚皺紋問(wèn)題。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對(duì)背景技術(shù)中存在的缺點(diǎn)和問(wèn)題加以改進(jìn)、創(chuàng)新，提供一種使用簡(jiǎn)單 、來(lái)源方便、價(jià)格便宜、安全可靠、療效顯著的皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù) 合納米乳及其制備方法。本發(fā)明液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳是由下述重量份配比的原料制成 肉豆蔻酸異丙酯5-15克、維生素E 2-10克、蛋黃卵磷脂O. 5-5. 0克、人參皂苷O. 1-2. 0克 、紅景天素O. 003-0. 03克、六勝肽O. 001-0. Ol克、超氧化物歧化酶O. 0002-0. 002克、還原型 谷胱甘肽O. 2-2. 0克、胎牛血清2-20克、透明質(zhì)酸0.02-0.2克、神經(jīng)酰胺O. 02-0. 2克、蒸餾 水35-45克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯30-40克、聚甘油脂肪酸酯10-15克； 固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳是由下述重量份配比的原料制成 肉豆蔻酸異丙酯5-15克、維生素E2-IO克、蛋黃卵磷脂O. 5-5. 0克、人參皂苷O. 1-2. 0克 、紅景天素O. 003-0. 03克、六勝肽O. 001-0. Ol克、超氧化物歧化酶O. 0002-0. 002克、還原型 谷胱甘肽O. 2-2. 0克、胎牛血清2-20克、透明質(zhì)酸0.02-0.2克、神經(jīng)酰胺O. 02-0. 2克、蒸餾 水35-45克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯30-40克、聚甘油脂肪酸酯10-15克、甘露醇15-30克、 甘氨酸2-8克。本發(fā)明液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳各原料最佳的重量配比是 肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E 2克、蛋黃卵磷脂O. 8克、人參皂苷O. 2克、紅景天素O.Ol克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽O. 5克、胎牛血清5克、 透明質(zhì)酸0.05克、神經(jīng)酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂 肪酸酯12克；本發(fā)明固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳各原料最佳的重量配比是 肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E2克、蛋黃卵磷脂0.8克、人參皂苷0.2克、紅景天素 O.Ol克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽O. 5克、胎牛血清5克、 透明質(zhì)酸0.05克、神經(jīng)酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂 肪酸酯12克、甘露醇22克、甘氨酸3克。本發(fā)明液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的制備方法如下1) 按液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳原料的配比，將肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、 蛋黃卵磷脂、人參皂苷、紅景天素共同置于容器中；將容器內(nèi)原料充分混合、溶解，不能溶 解的部分加少許無(wú)水醇促進(jìn)完全溶解，并將作為油相(A)備用；2) 按六勝肽、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、胎牛血清、透明質(zhì)酸、神經(jīng)酰胺及 適量蒸餾水混合使之完全溶解，再加蒸餾水使之作為水相(C)備用；3) 按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯等于3: l的比例，置于另一容器之中 ，充分?jǐn)嚢杈鶆颍怪纬蒘/C混合物(B)備用；4) 再按油相(A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取S/C混合物 (B)、水相(C)依此加入油相(A)容器中；5) 在室溫條件下，選用定時(shí)恒溫磁力攪拌器，并以200rpmmin—^勺轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min ，即可得到可供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳。本發(fā)明固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的制備方法如下1) 按固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳原料的配比，將肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、 蛋黃卵磷脂、人參皂苷、紅景天素共同置于容器中；將容器內(nèi)原料充分混合、溶解，不能溶 解的部分加少許無(wú)水醇促進(jìn)完全溶解，并將作為油相(A)備用；2) 按六勝肽、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、胎牛血清、透明質(zhì)酸、神經(jīng)酰胺及 適量蒸餾水混合使之完全溶解，再加蒸餾水使之作為水相(C)備用；3) 按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯等于3: l的比例，置于另一容器之中 ，充分?jǐn)嚢杈鶆?，使之形成S/C混合物(B)備用；4) 再按油相(A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取S/C混合物 (B)、水相(C)依此加入油相(A)容器中；5)在室溫條件下，選用定時(shí)恒溫磁力攪拌器以200rpmmin—i的轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min，再 加入甘露醇和克甘氨酸，再以200rpmmin—^勺轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min，并進(jìn)行冷凍干燥處理，即 可得到可供皮膚外用的固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳。本發(fā)明有以下有益效果第一，科學(xué)性加強(qiáng)本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳，不僅克服肉毒毒素 皮膚外用的諸多問(wèn)題和局限性，且在最大限度保留六勝肽類似肉毒毒素對(duì)抗表情肌運(yùn)動(dòng)所產(chǎn) 生的面部運(yùn)動(dòng)性皺紋的基礎(chǔ)上，針對(duì)性地添加了一些能對(duì)抗或延緩皮膚自然老化所產(chǎn)生的生 理性皺紋的輔助功效成分。兩者有機(jī)結(jié)合，聯(lián)合應(yīng)用，作用途徑和機(jī)制互補(bǔ)，即可相互協(xié)同，共 濟(jì)增效，可達(dá)到最佳的皮膚抗衰老和消除皮膚皺紋的效果，且科學(xué)性明顯加強(qiáng)，抗皺復(fù)合納 米乳國(guó)際尚屬空白。第二，新穎性突出本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的最大特點(diǎn)和新穎 性突出表現(xiàn)在①將能對(duì)抗表情肌運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的面部運(yùn)動(dòng)性皺紋的小分子類肉毒素(六勝肽 )與能對(duì)抗或延緩皮膚自然老化所產(chǎn)生的生理性皺紋的輔助功效成分(如S0D-CCE等)有機(jī)結(jié)合 和聯(lián)合應(yīng)用，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道(尚屬空白)；②將類肉毒素(六勝肽)與輔助功效成分(如 S0D-CCE等)復(fù)配后，再與目前最先進(jìn)的納米載體系統(tǒng)-納米乳復(fù)合應(yīng)用，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道(尚 屬空白)；③皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳按照不同的用途及使用條件和儲(chǔ)存要求， 不僅研制成功制備皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的技術(shù)方法，而且還研制成功 制備皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的技術(shù)方法，該技術(shù)和產(chǎn)品國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào) 道(尚屬空白)。第三，實(shí)用性明顯:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳，不僅可用在消除或 減輕純粹動(dòng)力性皺紋和運(yùn)動(dòng)性皺紋，且可用在消除或減輕皮膚生理性性皺紋和光老化皺紋;不 僅有短暫但較快的抗皺效果，且還有較長(zhǎng)但緩慢的皮膚抗老化方面;不僅可用于治療已形成的 面部鈹紋，且還可用于預(yù)防或延緩老化性和生理性鈹紋；不僅可用于青年人面部的鈹紋，也可 用于中老年人面部的皺紋，其實(shí)用性更加明顯，且此同步作用，國(guó)內(nèi)外尚屬空白；另外，本發(fā)明 的實(shí)用性還體現(xiàn)在所使用的功效成分及相關(guān)原料均來(lái)源方便、價(jià)廉物美。在確保使用安全和 作用效果基本一致的前提下，本發(fā)明可采用國(guó)產(chǎn)原料替代進(jìn)口原料，這樣不僅降低原料成本 或生產(chǎn)消耗，而且這樣也才能保證原料來(lái)源方便，使成品價(jià)格便宜，且產(chǎn)品制備也簡(jiǎn)單方便。 還有，本發(fā)明可使功效成分用量的減少，降低了資源消耗和浪費(fèi)，也使產(chǎn)品成本大大降低。尤 其是本發(fā)明可按照需要任意匹配一些理化特性不同、溶解性各異、分子量大小不一的功效成 分，使其工藝技術(shù)更方便和實(shí)用。第四，先進(jìn)性提高:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳，不僅采用具有高效 生物學(xué)作用為主導(dǎo)的生物制劑，而且，采用目前最為先進(jìn)的納米技術(shù)及其功效成分靶向載體系 統(tǒng)。同時(shí)，本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳，不僅大大提高了類肉毒素(六勝 肽)及其輔助功效成分的透皮吸收速率和轉(zhuǎn)運(yùn)效果，而且，大大提高了類肉毒素(六勝肽)及其 輔助功效成分作用的趨向性和耙向針對(duì)性，這較目前將類肉毒素(六勝肽)及其輔助功效成分 直接添加到傳統(tǒng)的美容化妝品基質(zhì)和產(chǎn)品中的技術(shù)水平大大提高。特別是美容功效成分的針 對(duì)性或靶向性非常重要。目前傳統(tǒng)美容化妝品制備技術(shù)尚只能保證含有相關(guān)美容功效成分， 但并非所有的美容功效成分都具有針對(duì)性或靶向性，即使添加了一些促皮膚滲透劑也只能增 加功效成分的透皮吸收，也無(wú)法使功效成分發(fā)揮靶向作用。而采用本發(fā)明制備的復(fù)合納米乳 ，由于可將功效成分結(jié)合在某一載體上，且這種載體具有一定的針對(duì)性和靶向性，因此，可實(shí) 現(xiàn)功效成分的針對(duì)性和靶向性，使其作用更加特異和直接，則相應(yīng)功效將會(huì)更加明顯和高效。第五，安全性更好:理論上講，無(wú)論哪種功效成分，在超過(guò)其使用劑量或多次反復(fù)時(shí)，均有 可能引起皮膚的異常反應(yīng);特別是一些化學(xué)合成物質(zhì)或異源性的生物大分子物質(zhì)更是如此。 如果不采用相關(guān)的制劑或載體處理，其產(chǎn)品自然無(wú)法保證其安全性，甚至出現(xiàn)嚴(yán)重的皮膚刺激 或過(guò)敏或皮膚損傷。采用本發(fā)明復(fù)合納米乳配制技術(shù)處理后，其功效成分添加濃度可大大降 低，使用次數(shù)也明顯減少，促皮膚滲透的化學(xué)合成或半合成物質(zhì)基本剔除，則使應(yīng)用的安全性 得以提高。而且，本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳中的主要功效成分和輔助 功效成分均不含有A型肉毒毒素和化學(xué)剝脫制劑，因此，理論上不會(huì)出現(xiàn)諸如肉毒毒素和化學(xué) 剝脫制劑易于出現(xiàn)的毒副作用，刺激反應(yīng)及臨床合并癥、禁忌癥和后遺癥等；除此之外，在使 用效果相同的情況下，大大降低了主要或輔助功效成分的應(yīng)用濃度，并減少了傳統(tǒng)方法添加的 濃度，使功效成分可能發(fā)生的皮膚刺激性、過(guò)敏反應(yīng)、毒副作用大大降低，而安全性則大大提 高。第六，穩(wěn)定性更高:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳中的主要功效成分六 勝肽及其輔助功效成分在美容化妝品中的穩(wěn)定性至關(guān)重要。如功效成分不能在美容化妝品中 保持穩(wěn)定，且在有效期穩(wěn)定存在，其產(chǎn)品自然無(wú)法保證質(zhì)量。六勝肽及其輔助功效成分在應(yīng)用 本發(fā)明的納米乳技術(shù)配制，其形成的功效納米乳則可顯著地提高其穩(wěn)定性，大大延長(zhǎng)其有效 期，且肉眼觀察外觀清澈、透明、美觀。按照納米乳穩(wěn)定性試驗(yàn)要求驗(yàn)證:①將復(fù)合納米乳和 傳統(tǒng)美容精華素同時(shí)置于日光燈和自然光下連續(xù)照射O、 5、 10、 15、 30天取樣測(cè)定證實(shí)，復(fù) 合納米乳較傳統(tǒng)工藝配制的美容精華素對(duì)光照的穩(wěn)定性大大提高;②將復(fù)合納米乳和傳統(tǒng)美 容精華素同時(shí)置于0。C、 4°C、 25°C、 40°C、 60°C、 8Q。C下，按0、 5、 10、 15、 30天取樣測(cè)定證實(shí)，復(fù)合納米乳較美容精華素對(duì)在不同溫度條件下的穩(wěn)定性更高;③將復(fù)合納米乳和傳統(tǒng)美 容精華素同時(shí)置于空氣中(室溫條件溫度為20-25。C，相對(duì)濕度為50%-75%)暴露，按0、 5、 10、 15、 30天取樣測(cè)定證實(shí)，復(fù)合納米乳較美容精華素對(duì)暴露在空氣中和室溫自然存放的穩(wěn)定性 試驗(yàn)更高；且置于自然室溫空氣中(室溫條件溫度為25 32。C，相對(duì)濕度為40 80%)存放30天取 樣測(cè)定也證實(shí)，復(fù)合納米乳較美容精華素穩(wěn)定性更高;④將復(fù)合納米乳和傳統(tǒng)的美容精華素分 別置于高速離心機(jī)中，并以10000-16000rpmmin—1的速度離心30min后測(cè)定證實(shí)，復(fù)合納米乳 較美容精華素穩(wěn)定性更高;⑤將復(fù)合納米乳和傳統(tǒng)的美容精華素分別用馬爾文粒徑測(cè)定儀分別測(cè)定其粒徑，證實(shí)復(fù)合納米乳粒徑全部在納米級(jí)，且絕大部分在20納米左右；而傳統(tǒng)的美容 精華素粒徑基本在微米級(jí)，大多數(shù)在i-ioo微米。由此可見(jiàn)，復(fù)合納米乳粒徑較美容精華素乳 滴粒徑小得多，且復(fù)合納米乳的粒徑分布更集中，均勻性更好。第七，合理性更優(yōu):本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳中的主要功效成分六 勝肽及其輔助功效成分組合和配方比例的合理性顯示出本發(fā)明的突出優(yōu)勢(shì)。如功效成分組合 因制備工藝使其無(wú)法在美容化妝品中復(fù)配、且復(fù)配比例的合理性受到影響，其產(chǎn)品自然無(wú)法 保證其作用。而本發(fā)明的主要功效成分六勝肽及其輔助功效成分在應(yīng)用本發(fā)明納米乳制備方 法配制時(shí)，則可按照配方或復(fù)配的需要進(jìn)行添加，不僅所形成的復(fù)合納米乳能保持更好的穩(wěn) 定性，并大大提高或增強(qiáng)了作用效果。特別是主要功效成分六勝肽及其輔助功效成分在復(fù)合 納米乳中的溶解性直接影響其配制和效果。在美容化妝品配制和使用過(guò)程中，只有一定濃度 的功效成分解決了溶解性，其功效成分協(xié)同才能發(fā)揮更好的效果。但是，傳統(tǒng)的美容化妝品 制備技術(shù)對(duì)完全解決功效成分的溶解性問(wèn)題尚存在一定困難，導(dǎo)致因其功效成分溶解不好， 產(chǎn)品穩(wěn)定性和使用濃度降低，或者不同溶解性的功效成分無(wú)法協(xié)同增效而無(wú)法達(dá)到相應(yīng)的劑 量效應(yīng)或共濟(jì)協(xié)同作用，產(chǎn)品自然無(wú)法保證其療效。本發(fā)明采用的復(fù)合納米乳制備技術(shù)進(jìn)行 配制，其溶解性，流動(dòng)性和分散性均好，且可促進(jìn)不同溶解性的功效成分互溶和共溶。分別按 照本發(fā)明的技術(shù)和傳統(tǒng)的美容精華素制備方法，在完全相同的條件下將同種單一功效成分( 如GSH)進(jìn)行溶解性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明納米乳的飽和溶解度明顯高于傳統(tǒng)的美容精華素產(chǎn)品； 同時(shí)，在完全相同的條件下，再將同樣種類的多種功效成分進(jìn)行溶解性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)皮膚復(fù)合納 米乳的飽和溶解度也明顯高于傳統(tǒng)的美容精華素產(chǎn)品。第八，生物活性好:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳中的主要功效成分六 勝肽及其輔助功效成分大多數(shù)是生物活性成分，而生物活性物質(zhì)通常需要在低溫或常溫下保 存和使用才能發(fā)揮其生物學(xué)作用的優(yōu)勢(shì)；因此，在配制產(chǎn)品過(guò)程中，這些生物活性物質(zhì)對(duì)最終 反應(yīng)溫度要求甚高;如反應(yīng)溫度過(guò)高容易使功效成分結(jié)構(gòu)改變而失去生物活性;而如反應(yīng)溫度過(guò)低，又無(wú)法達(dá)到各反應(yīng)體系的溶解。但目前美容化妝品配制技術(shù)大多必須采用70-8(TC條件 下進(jìn)行水相和油相成分的乳化溶解，這樣是必使生物活性物質(zhì)大量丟失或滅活，不僅導(dǎo)致其含 量大大下降，而且功效作用明顯降低，甚至失去其應(yīng)有的作用效果。而本發(fā)明采用的復(fù)合納米 乳技術(shù)是在常溫25'C左右條件下進(jìn)行配制，使添加的功效生物活性物質(zhì)得以大量保存或保活 ，生物利用度提高，這樣能有效地發(fā)揮其應(yīng)有的作用效果。生物活性測(cè)試:分別按照本發(fā)明的 技術(shù)和傳統(tǒng)的美容精華素制備方法，在完全相同的條件下將同種具有生物活性的功效成分 (SOD)分別配制成S0D納米乳和S0D精華素，在完全相同的存放條件下分別于放置30天前后分 別測(cè)定SOD活性發(fā)現(xiàn)，SOD納米乳較SOD精華素中剩余SOD活性明顯高。第九，透皮吸收更多本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳中的主要功效成分 六勝肽及其輔助功效成分大多數(shù)是水溶性成分，不利于皮膚的滲透吸收。而美容化妝品要想 真正發(fā)揮功效作用，很重要的是生物活性物質(zhì)或功效成分能夠透過(guò)皮膚角質(zhì)層屏障達(dá)到相應(yīng) 的作用部位、并在這些部位維持一定的效應(yīng)時(shí)間。而傳統(tǒng)的美容化妝品要實(shí)現(xiàn)生物活性物質(zhì) 或功效成分或天然藥物的透皮吸收，需要添加一些有效的助劑、媒介、載體等協(xié)助才有可能 使其透過(guò)表皮屏障而進(jìn)入皮膚內(nèi)發(fā)揮它們應(yīng)有的生物學(xué)作用，且現(xiàn)有傳統(tǒng)的美容化妝品制備 技術(shù)及配方大多數(shù)是添加一些傳統(tǒng)的促皮膚滲透劑，不僅產(chǎn)品功效成分的透皮吸收無(wú)法保證 ，且添加過(guò)多的化學(xué)合成或半合成的促皮膚滲透劑添還有可能發(fā)生皮膚刺激反應(yīng)甚至出現(xiàn)過(guò) 敏和致癌等。而本發(fā)明的復(fù)合納米乳配制技術(shù)所得到的產(chǎn)品由于其粒徑小、粒徑分布均勻， 加上乳化好，與皮膚屏障結(jié)構(gòu)的相溶性好，因此，即使未添加任何促皮膚滲透劑，其功效成分也 較易透過(guò)表皮吸收，甚至可穿透全層皮膚發(fā)揮其良好的皮膚抗皺效果。特別是因納米乳明顯 提高了難溶性藥物在水相中的溶解度，且納米乳的粒徑和皮膚組織親合性，使功效成分或生物 活性物質(zhì)的經(jīng)皮擴(kuò)散速率明顯增加，透皮吸收明顯加快。第十，療效性更佳:功效成分應(yīng)用的有效性與其共濟(jì)協(xié)同和聯(lián)合增效密切相關(guān)。目前，傳 統(tǒng)美容化妝品并非所有的美容功效成分都能發(fā)揮共濟(jì)協(xié)同和聯(lián)合增效的優(yōu)勢(shì)，即使添加了一 些具有共濟(jì)協(xié)同和聯(lián)合增效的美容功效成分也未必能達(dá)到設(shè)計(jì)預(yù)期效果。而采用本發(fā)明制備 的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳，由于其分散性，流動(dòng)性，均勻性，穩(wěn)定性，透皮吸收 性，針對(duì)性或靶向性及與皮膚接觸的面積增大，作用時(shí)間延長(zhǎng)等共同影響，使配伍以后的功效 成分的共濟(jì)協(xié)同性和聯(lián)合增效性更加明顯，實(shí)際應(yīng)用效果將會(huì)更加明顯和高效。其對(duì)皮膚皺 紋的療效性更佳主要表現(xiàn)在:①有效和痊愈率更高;②有效反應(yīng)時(shí)間更快;③近期和遠(yuǎn)期效果 更顯著;④作用效果維持時(shí)間更持久;⑤多種生物學(xué)效應(yīng)更明顯;⑥預(yù)防和治療周期更短等。 ⑨應(yīng)用的有效性。應(yīng)用本發(fā)明研制的復(fù)合功效納米乳與傳統(tǒng)工藝所配制的同類型同劑量功效成分的非納米乳精華素臨床試用的結(jié)果表明，前者較后者有效率高25-35%，且最快有效時(shí)間 提高了一倍之多。第十一，舒適性更好:本發(fā)明的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳舒適性更好，而使 用的舒適性是高質(zhì)量美容化妝品的重要指標(biāo)之一。但按照目前傳統(tǒng)的美容化妝品制備工藝， 其顆粒相對(duì)較大，分子粒徑大多在微米級(jí)左右，而采用本發(fā)明制備的復(fù)合納米乳，其分子或乳 滴粒徑絕大多數(shù)在納米級(jí)(10-80納米之間)，且清亮透明，流動(dòng)性好，因此，使用起來(lái)感覺(jué)更加 細(xì)膩，光滑，潤(rùn)澤和舒適。第十二，高效性更突出傳統(tǒng)美容化妝品制備不僅生產(chǎn)工藝復(fù)雜，工藝流程繁瑣，生產(chǎn)周期 較長(zhǎng)，且無(wú)論生產(chǎn)何種類型美容化妝品，因需使用多種原料，油相和水相成分復(fù)雜，特別是它們 必須在高溫條件下才能完成乳化等，因而嚴(yán)重破壞對(duì)熱敏感生物活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，甚至妨礙其 應(yīng)有生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮。而本發(fā)明所制備的皮膚外用類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳條件簡(jiǎn)單 ，工藝快捷，操作容易，制備高效，周期較短，不需特殊儀器設(shè)備，不需外界提供能量，不需加熱 乳化，且配制成一批產(chǎn)品的全部完成時(shí)間不過(guò)30分鐘即可形成產(chǎn)品，因此，具有高效且易于產(chǎn) 業(yè)化的優(yōu)勢(shì)，使其產(chǎn)業(yè)化技術(shù)水平也明顯提高和改善;還在能量和原材料節(jié)省，降低環(huán)境污染 等方面也有明顯進(jìn)步和改觀。本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題第一，克服A型肉毒毒素皮膚外用的問(wèn)題，采用新的技術(shù)最大限度保留六勝肽類似肉毒毒 素抗皺的生物學(xué)作用。第二，解決六勝肽作為主要功效成分目前盲目添加和使用的問(wèn)題，科學(xué)設(shè)計(jì)其作為皮膚 外用抗皺制劑所添加的最佳有效濃度問(wèn)題。第三，解決六勝肽作為一種水溶性功效成分難以直接透過(guò)皮膚有效吸收的問(wèn)題，從而， 有效發(fā)揮和提高其皮膚抗皺作用的優(yōu)勢(shì)。第四，解決六勝肽與其它輔助功效成分科學(xué)組方的問(wèn)題，使其在真正意義上實(shí)現(xiàn)皮膚抗 皺和延緩皮膚衰老相結(jié)合的目標(biāo)。第五，解決六勝肽及其它輔助功效成分在皮膚制劑及美容化妝品中應(yīng)用的載體系統(tǒng)-納米 乳制備問(wèn)題，從而使皮膚外用固態(tài)和液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳在更大程度上發(fā)揮和 提高六勝肽及其它輔助功效成分在皮膚抗皺和延緩皮膚衰老方面的作用和優(yōu)勢(shì)。第六，解決六勝肽及其它輔助功效成分與載體系統(tǒng)配伍的穩(wěn)定性問(wèn)題，使皮膚外用固態(tài) 和液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳完全符合國(guó)家有關(guān)美容化妝品法規(guī)所要求的穩(wěn)定性和保 存期的問(wèn)題。第七，解決六勝肽及其它輔助功效成分與載體系統(tǒng)配伍的安全性問(wèn)題，使皮膚外用固態(tài) 和液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳完全符合國(guó)家有關(guān)美容化妝品法規(guī)所要求的使用安全性 問(wèn)題。第八，降低六勝肽及其輔助功效成分與載體系統(tǒng)配伍后的成本問(wèn)題，使皮膚外用固態(tài)和 液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳價(jià)廉物美。 本發(fā)明的技術(shù)原理本發(fā)明復(fù)合納米乳制備的原理:復(fù)合納米乳是以空白納米乳和皮膚抗皺功效成分配制而成?？瞻准{米乳則由油相、水相、表面活性劑或乳化劑、助表面活性劑或助乳化劑四個(gè)體系 組成，而皮膚抗皺功效成分則由主要功效成分和輔助功效成分組成。油相和水相是空白納米乳形成的基本條件；乳化劑有助于油相和水相交融并形成乳滴；助乳化劑也是納米乳形成的 重要條件，它可以插入到乳化劑的界膜中，使之形成復(fù)合凝聚膜，提高膜的凝固性和柔順性，并 可增加乳化劑的溶解度，進(jìn)一步降低界面張力，有利于納米乳形成后更加穩(wěn)定。本發(fā)明中，肉 豆蔻酸異丙酯作為油相，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯作為表面活性劑或乳化劑，聚甘油脂肪酸酯 為助表面活性劑或助乳化劑，蒸餾水作為水相。由于乳化劑辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯有助于 油相肉豆蔻酸異丙酯和水相蒸餾水的相互交融并形成乳滴，而助乳化劑聚甘油脂肪酸酯也是 皮膚外用空白納米乳形成的重要條件，特別是由于聚甘油脂肪酸酯與辛酸癸酸聚乙二醇甘油 酯各自特殊的理化特性，使助乳化劑聚甘油脂肪酸酯可以插入到與乳化劑辛酸癸酸聚乙二醇 甘油酯的界膜中，形成復(fù)合凝聚膜，以提高膜的凝固性和柔順性，并可增加與辛酸癸酸聚乙二 醇甘油酯的溶解度，且進(jìn)一步降低界面張力，有利于形成更加穩(wěn)定的皮膚外用空白納米乳。辛 酸癸酸聚乙二醇甘油酯常受溶解度的限制，而聚甘油脂肪酸酯能使辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 的溶解度增大，納米乳的乳滴更容易進(jìn)一步分散，特別是辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂 肪酸酯在肉豆蔻酸異丙酯和蒸餾水相界面進(jìn)一步大量吸附，使兩者在連續(xù)相內(nèi)的濃度降低，界 面張力重新成為正值，使之逐步形成穩(wěn)定的皮膚外用空白納米乳。理論上講，皮膚外用空白納 米乳僅僅只是作為功效成分的載體系統(tǒng)，單獨(dú)使用尚未發(fā)現(xiàn)其有明顯的皮膚抗皺和延緩皮膚 衰老的作用和功效，而添加的相關(guān)皮膚抗皺功效成分，才是發(fā)揮皮膚抗皺和延緩皮膚衰老的主 要成分。在實(shí)際配制皮膚抗皺和延緩皮膚衰老的復(fù)合納米乳的過(guò)程中，應(yīng)根據(jù)各個(gè)成分各自 水溶性或油溶性等理化特點(diǎn)，分別將皮膚抗皺功效成分，即皮膚抗皺主要功效成分一面部表情 肌抑制劑(六勝肽)和輔助功效成分--自由基清除劑(S0D和GSH)、皮膚營(yíng)養(yǎng)劑(維生素E和蛋 黃卵磷脂)、促細(xì)胞生長(zhǎng)劑(胎牛血清)、天然保濕因子(透明質(zhì)酸和神經(jīng)酰胺)、天然植物或 中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)等按一定比例先溶解，然后，再按照偽三相圖計(jì)算油相、水相及表面活性劑或乳化劑/助表面活性劑或助乳化劑的添加比例，并按照此比例進(jìn)行配制，即可得到皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳;如再將一定劑量的凍干保護(hù)劑一甘露醇 和甘氨酸適時(shí)添加至其中，并經(jīng)冷凍干燥處理，即可得到皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合 納米乳。本發(fā)明的作用原理皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳中的主要功效成分主要是由6個(gè)氨基酸縮合的具有類似肉毒毒素作用的六勝肽，以及能夠輔助和增強(qiáng)六勝肽皮膚抗皺和延緩皮膚衰老的輔助功效成分自由基清除劑(SOD和GSH)，促細(xì)胞生長(zhǎng)劑(胎牛血清)，皮膚營(yíng)養(yǎng)劑(維生 素E和蛋黃卵磷脂)，天然保濕因子(透明質(zhì)酸和神經(jīng)酰胺)，天然植物或中藥提取物(人參皂苷 和紅景天素)等組成。六勝肽為生物制劑，又稱之為類肉毒毒素，其皮膚抗皺機(jī)制與注射抗皺所使用的A型肉毒 毒素基本相同，即六勝肽類似面部皮膚肌肉的松弛劑，能選擇性作用于外周膽堿能神經(jīng)(運(yùn)動(dòng) 神經(jīng))末稍，在神經(jīng)肌肉接點(diǎn)突觸處(作用最強(qiáng)點(diǎn))，抑制突觸前膜釋放神經(jīng)介質(zhì)乙酰膽堿，有效 阻斷神經(jīng)介質(zhì)的傳遞，而引起肌肉松弛性麻痹，使肌纖維不能收縮，肌肉張力下降，肌痙孿緩解 ，面部表情肌無(wú)法發(fā)揮作用，從而，使臉部肌肉放松，減少或消除面部表情肌運(yùn)動(dòng)形成的皺紋， 達(dá)到平撫動(dòng)態(tài)紋、靜態(tài)紋及細(xì)紋的目的。同時(shí)，類肉毒毒素六勝肽還能有效預(yù)防兒茶酚胺 過(guò)度釋放所產(chǎn)生的皺紋，減少面部肌肉重復(fù)牽動(dòng)所形成的皺紋，從而，有效舒緩并抑制額頭抬 頭紋、魚(yú)尾紋、眉間紋、鼻橫紋、鼻背紋及皺紋周邊肌肉的收縮與活動(dòng)，幫助肌肉放松，使肌 膚彈性組織回復(fù)柔順平滑的線條，進(jìn)一步減少或消除臉部細(xì)紋。隨著年齡的增長(zhǎng)，老化皮膚的 膠原纖維變直，纖維蛋白束與皮膚表而越加平行，皮膚伸展余地大為減少，彈性減低，皮膚變 得松垂無(wú)張力而出現(xiàn)皺紋。自由基清除劑中超氧化物歧化酶(SOD)屬于自由基清除劑，能清除超氧陰離子自由基，具 有明顯而有效的抗氧化作用，能夠預(yù)防和修復(fù)由于氧自由基所導(dǎo)致的皮膚組織過(guò)氧化損傷出 現(xiàn)的皮膚細(xì)胞及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞、細(xì)胞合成與分泌代謝障礙、生物大分子(蛋白質(zhì)和核酸)變 性、酸性粘多糖降解、膠原纖維交聯(lián)、彈性纖維斷裂等引起的老化性皺紋的再形成和進(jìn)行性 加重。谷胱甘肽(GSH)是屬于含有巰基的小分子肽類物質(zhì)，具有三種重要的生理作用，即抗衰 老、抗氧化和整合解毒作用。它由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸通過(guò)肽鍵縮合而成的三肽化合 物，半胱氨酸上的巰基為其解毒的活性基團(tuán)；由于谷胱甘肽的化學(xué)本質(zhì)是小分子肽(分子量為 307)，容易透過(guò)細(xì)胞膜而被皮膚吸收。由于還原型谷胱甘肽本身易受某些物質(zhì)氧化，所以它在 體內(nèi)能夠保護(hù)許多蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基不被如自由基等有害物質(zhì)氧化，從而讓蛋白質(zhì)和酶等分子發(fā)揮其生理功能;它還能直接將SOD轉(zhuǎn)化的過(guò)氧化氫等氧化劑生成無(wú)毒的水，從而 提高SOD生物學(xué)作用，減少皺紋形成，延緩皮膚衰老，被美國(guó)著名營(yíng)養(yǎng)保健專家艾爾 敏德?tīng)柌?士稱之為三倍效能的抗衰老氨基酸。表皮和真皮細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞增殖和更新減慢，皮膚細(xì)胞內(nèi)量減少，細(xì)胞DNA和蛋白質(zhì)以 及膠原和彈性纖維合成的能力降低是皮膚衰老和皺紋形成的重要原因之一。促細(xì)胞生長(zhǎng)劑( 胎牛血清)是滋養(yǎng)皮膚組織和細(xì)胞的重要物質(zhì)，系采用健康母牛懷孕八月齡胎牛血液為原料制 備而成。它相對(duì)其它牛血清品質(zhì)更高，因胎牛尚未接觸外界，血清所含抗體和補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有 害成分更少，而血漿蛋白、多肽、氨基酸、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、核酸衍生 物、無(wú)機(jī)物、維生素等，特別是胎白蛋白和胎球蛋白及細(xì)胞生長(zhǎng)因子和激素更豐富，更適合皮 膚細(xì)胞的培養(yǎng)和生長(zhǎng)。胎牛血清皮膚外用，不僅可提供皮膚組織和細(xì)胞生命活動(dòng)必需的營(yíng)養(yǎng) 物質(zhì)，且可提供促進(jìn)皮膚細(xì)胞分裂、增殖和生長(zhǎng)所需的多種激素和各種生長(zhǎng)因子(如成纖維細(xì) 胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等)；同時(shí)，還可提供細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作 用的結(jié)合蛋白(結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪及激素 等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵)；胎牛血清蛋白形成血清的粘度，可保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，其中一些微量元素和離子，在細(xì)胞代謝和解毒中也起重要作用，這些無(wú)疑對(duì)促進(jìn)表皮細(xì)胞和真皮細(xì)胞不斷分裂和增殖，形成大量新生年輕細(xì)胞有益；同時(shí)，這些新生細(xì)胞在代謝過(guò)程中又不斷合成并分 泌新的細(xì)胞外基質(zhì)及新生膠原蛋白和彈性蛋白，使面部皮膚出現(xiàn)年輕化趨勢(shì)，皺紋得以減輕或 消除。皮膚營(yíng)養(yǎng)劑(維生素E和蛋黃卵磷脂)，則能夠提供給皮膚組織和細(xì)胞新陳代謝所需要的充 足營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)；同時(shí)，能夠有效地維護(hù)皮膚細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和完整性，延緩細(xì)胞的凋亡，并及時(shí)修復(fù)受損的細(xì)胞，減少細(xì)胞損傷和破壞所導(dǎo)致的皺紋形成或加重。表皮和真皮水分大量丟失，表皮細(xì)胞層次變薄，真皮內(nèi)膠原纖維減少，排列紊亂。表皮和 真皮均變薄，含水量減少。皮膚缺少水的滋潤(rùn)，皮膚干燥、萎縮，出現(xiàn)皮膚老化，缺乏彈性，出現(xiàn)皺紋。透明質(zhì)酸(簡(jiǎn)稱HA)是由N-乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸的雙糖重復(fù)單元構(gòu)成的黏 多糖類物質(zhì)，白色無(wú)定形固體，有極強(qiáng)的吸濕能力。它是人體皮膚組成成分之一，也是細(xì)胞間 質(zhì)中重要的成分。由于它的高粘稠度和向空間伸展度以及疏松、膨大的分子形態(tài)，使它在溶 液中占據(jù)較大的空間，能結(jié)合大量水分，而皮膚水分決定著其濕潤(rùn)水平，這都與HA含量密切相 關(guān)。隨著年齡的增長(zhǎng)，皮膚中HA含量降低，使皮膚保水功能減弱，產(chǎn)生皺紋。HA具有較強(qiáng)的黏 彈性和潤(rùn)滑性，涂于皮膚表面，可形成一層保濕透氣膜，保持皮膚滋潤(rùn)，有利于皮膚對(duì)營(yíng)養(yǎng)物 質(zhì)的吸收，增加皮膚彈性，對(duì)皮膚老化、觸覺(jué)和外觀都有重大改善作用；HA在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收促進(jìn)劑，部分低分子量的透明質(zhì)酸還可滲透到皮膚的真皮層，改善和調(diào)節(jié)皮膚 中間代謝，使皮膚濕潤(rùn)光滑、細(xì)膩柔嫩、富有彈性，從而起到延緩皮膚衰老、防皺抗皺和美容 保健的作用。神經(jīng)酰胺是一種水溶性脂質(zhì)物質(zhì)，它占皮膚角質(zhì)層脂質(zhì)的主要成分，在保持角質(zhì)層水份平 衡上起重要的作用。由于它和構(gòu)成皮膚角質(zhì)層的物質(zhì)結(jié)構(gòu)相近，因此能很快滲透進(jìn)皮膚與角 質(zhì)層中的水結(jié)合，形成一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并通過(guò)氫鍵形成層狀結(jié)構(gòu)的分子復(fù)合體，促進(jìn)表皮層的 水合作用，從而改善皮膚保持水分的能力，維持皮膚水分的平衡。但隨著年齡增長(zhǎng)進(jìn)入老年 期，皮膚中存在的神經(jīng)酰胺逐漸減少，干性皮膚和粗糙皮膚型等皮膚異常癥狀的出現(xiàn)亦是由于 神經(jīng)酰胺量減少所致。神經(jīng)酰胺是高效保濕劑易被皮膚吸收，在皮膚應(yīng)用有改善和調(diào)節(jié)皮膚 細(xì)胞間質(zhì)的組成和功能，并能促進(jìn)其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)滲透，適用于粗糙、干燥多屑皮膚，尤其適合 對(duì)老年干性皮膚保濕。同時(shí)，神經(jīng)酰胺能增強(qiáng)表皮細(xì)胞的內(nèi)聚力，修復(fù)皮膚屏障功能，從而緩 解角層的脫屑癥狀，幫助皮膚再恢復(fù)，改善皮膚外觀，令皮膚光滑有彈性，也可避免或減少因紫 外線照射而引起的表皮剝落，從而有助于皮膚抗衰老。神經(jīng)酰胺并有助于減輕或消除皮膚上 的皺紋，除去皮膚皮炎，保持皮膚的彈性。而這些天然皮膚保濕因子(透明質(zhì)酸和神經(jīng)酰胺 )聯(lián)合應(yīng)用，不僅能通過(guò)吸收空氣中的水份保持皮膚的水份，而且還能有效地防止皮膚組織中 水份的揮發(fā)或丟失，從而，發(fā)揮出良好的皮膚保濕效果。通常面部許多細(xì)小皺紋是由于皮膚組 織短暫性缺水所致，因此，通過(guò)天然皮膚保濕因子(透明質(zhì)酸和神經(jīng)酰胺)的保濕或補(bǔ)水作用， 可使因皮膚缺水而導(dǎo)致的細(xì)小皺紋得以減輕或消失。天然植物或中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)均是天然生物活性物質(zhì)，且人參皂苷和紅 景天素的皮膚抗老化作用已得到大量動(dòng)物和人體試驗(yàn)證明。人參和紅景天均有滋陰壯陽(yáng)，促 進(jìn)細(xì)胞增殖，組織修復(fù)再生之功效。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，人參皂苷和紅景天素能增強(qiáng)組織SOD酶活性 ，降低LPO含量，還有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖作用和增強(qiáng)皮膚細(xì)胞抗衰老能力。外用人參皂苷和紅 景天素三個(gè)月以上所進(jìn)行的眼瞼皮膚掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，皮膚膠原纖維有新生細(xì)纖維出現(xiàn)， 纖維網(wǎng)有空隙存在，纖維束之間交織松軟，成纖維細(xì)胞數(shù)增多，新生性架橋增多，老化性架橋 數(shù)目相對(duì)減少，新生皮膚膠原有增加趨勢(shì);彈性纖維表面光滑，輪廓清晰，變性物質(zhì)顆粒附著 較少或沒(méi)有，真皮的結(jié)構(gòu)清楚，乳頭層和網(wǎng)狀層結(jié)構(gòu)得以辨認(rèn)，皮膚組織明顯改善，并呈現(xiàn)年 輕化趨勢(shì)，這證明人參皂苷和紅景天素不僅具有較好的預(yù)防和延緩皮膚老化效果，而且能使皮 膚抗衰老和抗皺紋效果更加持久和長(zhǎng)遠(yuǎn)。而將這些功效成分通過(guò)納米乳載體復(fù)合應(yīng)用，其皮 膚抗皺效果出現(xiàn)快慢結(jié)合，遠(yuǎn)近效果同現(xiàn)，其表達(dá)形式更具創(chuàng)新和特色。冷凍干燥是利用升華原理進(jìn)行干燥的一種技術(shù)，是將被干燥的物質(zhì)在低溫下快速凍結(jié)，然后在適當(dāng)?shù)恼婵窄h(huán)境下，使凍結(jié)的水分子直接升華成為水蒸氣逸出的過(guò)程。物質(zhì)在干燥前始 終處于低溫(凍結(jié)狀態(tài))，同時(shí)冰晶均勻分布于物質(zhì)中，升華過(guò)程不會(huì)因脫水而發(fā)生濃縮現(xiàn)象， 避免了由水蒸氣產(chǎn)生泡沫和氧化等副作用。干燥物呈干海綿多孔狀，體積基本不變，極易溶于 水而恢復(fù)原狀。在最大程度上防止干燥物質(zhì)的理化和生物學(xué)方面的變性。而皮膚外用液態(tài)復(fù) 合類肉毒毒素(六勝肽)納米乳由液態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣虘B(tài)，實(shí)際上就是冷凍干燥的結(jié)果。真空冷凍干 燥將含有水分的復(fù)合納米乳在低溫狀態(tài)下預(yù)冷后，再在低溫真空條件下，對(duì)其升溫加熱，使復(fù) 合納米乳中凍結(jié)成的細(xì)小冰晶顆粒直接升華，由冷凝器捕集，使含有水分的液態(tài)復(fù)合納米乳轉(zhuǎn) 變成功效完全一致的固態(tài)復(fù)合納米乳。而在皮膚外用液態(tài)復(fù)合類肉毒毒素(六勝肽)納米乳轉(zhuǎn) 變?yōu)楣虘B(tài)納米乳過(guò)程中，甘露醇和甘氨酸發(fā)揮著十分重要的作用，成為使液態(tài)復(fù)合納米乳成形 的重要添加劑。甘露醇和甘氨酸共同作為凍干賦形保護(hù)劑之所以能對(duì)液態(tài)復(fù)合納米乳起到較 好的賦形和保護(hù)效果，是因?yàn)楦事洞己透拾彼犭S納米乳的凍結(jié)和結(jié)晶的生長(zhǎng)，逐漸濃縮，并分 布在納米乳乳滴周圍，阻止乳滴的融合;在納米乳冷凍干燥過(guò)程中，賦形保護(hù)劑的加入使液態(tài) 復(fù)合類肉毒毒素(六勝肽)納米乳的粘性增加，弱化了水的結(jié)晶過(guò)程，從而減少了冰晶對(duì)乳滴的 損傷;而且，賦形保護(hù)劑加入提高了乳劑的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，并在一定的降溫速率下使乳劑實(shí) 現(xiàn)部分玻璃化，避免了晶態(tài)固化，減少了冰晶對(duì)乳滴的損傷；同時(shí)，可改善復(fù)合納米乳外觀及再 分散性能發(fā)揮重要作用。本發(fā)明的主要技術(shù)構(gòu)思和內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思分為三個(gè)部分:第一部分:空白納米乳制備。主要包括:①空白納米乳 工藝流程和操作方法設(shè)計(jì);②高質(zhì)量空白納米乳的制備。第二部分:皮膚外用液態(tài)類肉毒素( 六勝肽)復(fù)合納米乳制備。主要包括:①皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳工藝流程 和操作方法設(shè)計(jì);②皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的制備;第三部分:皮膚外用 固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳制備。主要包括:①皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合 納米乳工藝流程和操作方法設(shè)計(jì);②皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的制備。第一部分:空白納米乳制備:①稱取10-20克重量的肉豆蔻酸異丙酯(IPM)置于100mL三角 燒瓶中，使之為油相(A);②根據(jù)km等于3的設(shè)計(jì)系數(shù)配制乳化劑和助乳化劑混合物，即按辛酸 癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol):聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)等于3:1的比例， 再取30-40克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)和10-15克聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)，并將兩者置于另一容器之中，充分?jǐn)嚢?，混合均勻，從形成S/C混合物(B);③ 按油相(A) :S/C混合物(B):純蒸餾水(C)等于15:45:40的比例，分別取40-50克辛酸癸酸聚乙二 醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B) ， 30-50克的純蒸餾水(C)依此加入上述(A)中的100mL三角燒瓶中；④立即選用定時(shí)恒溫磁力攪拌器在室溫25。C條件下，以 200rpmmin—^勺轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min，即可得到供皮膚外用的空白納米乳載體。第二部分:皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳制備。①準(zhǔn)確稱取5-15克重量的 肉豆蔻酸異丙酯(IPM)置于100mL三角燒瓶之中；再用精密分析天平分別準(zhǔn)確稱取維生素 E(VE)2-IO克、蛋黃卵磷脂O. 5-5. 0克、人參皂苷O. 1-2. 0克、紅景天素3-30毫克，加入至上述 盛有肉豆蔻酸異丙酯(IPM)的100mL三角燒瓶之中，充分混合，盡可能溶解；實(shí)在不能溶解的部 分，可滴加少許無(wú)水乙醇以促使其完全溶解，并將之作為油相(A);②再用精密分析天平分別 準(zhǔn)確稱取六勝肽1-10毫克、超氧化物歧化酶(S0D)0.2-2.0毫克、還原型谷胱甘肽 (GSH)0.2-2.0克、胎牛血清2-20克、透明質(zhì)酸20-200毫克、神經(jīng)酰胺20-200毫克，加入適量 蒸餾水使之完全溶解，然后，再用蒸餾水加至30-50毫升，使之作為水相(C);④根據(jù)km等于3的 設(shè)計(jì)系數(shù)配制乳化劑和助乳化劑混合物，即按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol):聚甘油 脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)等于3:1的比例，分別準(zhǔn)確稱取30-40克辛酸癸酸聚乙二醇 甘油酯(Labrasol)和10-15克聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)，并將兩者置于另一容 器之中，充分?jǐn)嚢瑁旌暇鶆?，完全溶解，使之形成S/C混合物(B) ; 最后，再按油相(A) :S/C混 合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取40-50克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂 肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B) 、 30-50克的水相(C)依此加入上述油相(A)中的100mL三 角燒瓶中；⑥此時(shí)，立即選用定時(shí)恒溫磁力攪拌器在室溫25。C條件下，以200rpmmin一^勺轉(zhuǎn)速磁 力攪拌30min，即可得到供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳。第三部分:皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳制備:①稱取5-15克重量的肉豆蔻 酸異丙酯置于100mL三角燒瓶之中；再用精密分析天平分別稱取維生素E 2-10克，蛋黃卵磷脂 0. 5-5. 0克，人參皂苷O. 1-2. 0克、紅景天素3-30毫克，加入至盛有肉豆蔻酸異丙酯的100mL三 角燒瓶之中，充分混合，盡可能溶解；實(shí)在不能溶解的部分，可滴加少許無(wú)水乙醇以促使其完全 溶解，并將之作為油相(A);②再用分析天平分別稱取六勝肽1-10毫克，超氧化物歧化酶 0. 2-2. 0毫克，還原型谷胱甘肽O. 2-2. 0克，胎牛血清2-20克，透明質(zhì)酸20-200毫克，神經(jīng)酰胺 20-200毫克，加入適量蒸餾水使之完全溶解，然后再用蒸餾水加至30-50毫升，使之作為水相 (C);④根據(jù)km等于3的設(shè)計(jì)系數(shù)配制乳化劑和助乳化劑混合物.即按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 (Labrasol):聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)等于3:1的比例，稱取30-40克辛酸癸酸 聚乙二醇甘油酯(Labrasol)和10-15克聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)，并將兩者置 于另一容器之中，充分?jǐn)嚢?，混合均勻，完全溶解，使之形成S/C混合物(B)48克;⑤最后，按油相 (A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取40-50克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B) ， 30-50克的水相(C)依此加入上述油相(A)中的 100mL三角燒瓶中；⑥此時(shí)，立即選用定時(shí)恒溫磁力攪拌器在室溫25。C條件下，以200rpmmin一1 的轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min后，再加入15-30克甘露醇和2-8克甘氨酸，再以200rpmmin—工轉(zhuǎn)速的磁力 攪拌器攪拌30min，并進(jìn)行冷凍干燥處理，即可得皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳本發(fā)明的主要技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn)用本發(fā)明設(shè)計(jì)的組方及工藝技術(shù)制備的納米乳同時(shí)作為不同作用途徑的多種復(fù)雜功效成 分的同一載體，即主要抗皺功效成分類肉毒毒素(六勝肽)和輔助功效成分自由基清除劑(SOD 和GSH)，促細(xì)胞生長(zhǎng)劑(胎牛血清)，皮膚營(yíng)養(yǎng)劑(維生素E和蛋黃卵磷脂)，天然保濕因子(透 明質(zhì)酸和神經(jīng)酰胺)，天然植物或中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)等的載體系統(tǒng)，目前國(guó)際 上未見(jiàn)報(bào)道，為本發(fā)明首創(chuàng);②用本發(fā)明設(shè)計(jì)的組方及工藝技術(shù)制備的納米乳作為功效成分的 有效載體系統(tǒng)，將主要皮膚抗皺功效成分一類肉毒毒素(六勝肽)作為面部運(yùn)動(dòng)神經(jīng)抑制和面 部表情肌松弛劑制備的皮膚抗皺納米乳，用于對(duì)抗由面部表情運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的皺紋，并發(fā)揮快速見(jiàn) 效作用，同時(shí)將輔助皮膚抗皺功效成分一 自由基清除劑(SOD和GSH)，促細(xì)胞生長(zhǎng)劑(胎牛血清 )，皮膚營(yíng)養(yǎng)劑(維生素E和蛋黃卵磷脂)，天然保濕因子(透明質(zhì)酸和神經(jīng)酰胺)，天然植物或 中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)制備的延緩皮膚衰老(抗皮膚生理性衰老)，增強(qiáng)類肉毒毒 素(六勝肽)皮膚抗皺效果的乳米乳，并發(fā)揮緩慢而持久效果，使快慢結(jié)合，近期和遠(yuǎn)期效果結(jié) 合，內(nèi)外抗皺效果并用的設(shè)計(jì)理念，目前國(guó)際上未見(jiàn)報(bào)道，為本發(fā)明首創(chuàng);③用本發(fā)明設(shè)計(jì)的組 方及工藝技術(shù)制備的可供皮膚外用的液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳，且兩者可以 相互轉(zhuǎn)化的納米乳(即由液態(tài)轉(zhuǎn)為固態(tài)，或者由固態(tài)轉(zhuǎn)為液態(tài))，目前國(guó)際上未見(jiàn)報(bào)道，為本發(fā) 明首創(chuàng);④外用皮膚抗皺及延緩皮膚生理性衰老的雙效液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納 米乳，目前國(guó)際上未見(jiàn)報(bào)道，為本發(fā)明首創(chuàng)。本發(fā)明的主要注意事項(xiàng)第一，皮膚抗皺的主要功效成分一類肉毒毒素(六勝肽)的用量非常關(guān)鍵。劑量太小，無(wú) 法達(dá)到面部神經(jīng)抑制和面部表情肌松弛的作用；而劑量太大，可能過(guò)多抑制面部神經(jīng)傳導(dǎo)和面 部表情肌松弛的作用，引起面部表情不自然和不協(xié)調(diào)；而且，由于六勝肽價(jià)格昂貴，添加過(guò)多， 還可能造成產(chǎn)品成本過(guò)高或不必要浪費(fèi)。第二，皮膚抗皺及延緩皮膚生理性衰老的輔助功效成分一 自由基清除劑(SOD和GSH)，促 細(xì)胞生長(zhǎng)劑(胎牛血清)，皮膚營(yíng)養(yǎng)劑(維生素E和蛋黃卵磷脂)，天然保濕因子(透明質(zhì)酸和神 經(jīng)酰胺)，天然植物或中藥提取物(人參皂苷和紅景天素)等，具有各自不同的作用途徑和功效，其添加比例也是有明確的規(guī)定和要求，過(guò)多或過(guò)少，都難以達(dá)到設(shè)計(jì)效果和實(shí)際功效，尤其是 生物制劑的添加更應(yīng)控制好劑量。第三，皮膚抗皺及延緩皮膚生理性衰老的輔助功效成分中的胎牛血清為血液制品，它必 須系來(lái)源于健康胎的血清，且必須在檢定后剔除含有致病性微生物(包括致病菌、病毒、支原 體、衣原體等)和遺傳變異的胎牛血清，且大部分血清在使用前必須經(jīng)過(guò)加熱滅活處理，即在 56。C恒溫水浴的條件下滅活30分鐘。滅活的目的主要是去除血清中可能含有的補(bǔ)體成分，避 免補(bǔ)體對(duì)皮膚組織和細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。第四，在對(duì)胎牛血清進(jìn)行熱滅活時(shí)，溫度和時(shí)間必須嚴(yán)格按照規(guī)定。如滅活溫度過(guò)高，時(shí) 間過(guò)長(zhǎng)，均可能會(huì)損失一些對(duì)皮膚組織和細(xì)胞生長(zhǎng)有利的細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其它對(duì)熱敏感的生 物活性成分；因此，對(duì)于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新生牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接使用。第五，在對(duì)胎牛血清滅活前，應(yīng)盡量避免長(zhǎng)時(shí)間將血清置于高溫環(huán)境中，以防止血清出現(xiàn) 污染而造成浪費(fèi)。而且，在操作胎牛血清時(shí)務(wù)必注意無(wú)菌觀念和無(wú)菌操作；另外，胎牛血清在 不馬上使用時(shí)應(yīng)儲(chǔ)存在一2(TC冰箱，同時(shí)應(yīng)避免將其反復(fù)凍融。收集或采集胎牛血清及滅活 處理后，最好是分裝成小包裝，以方便使用時(shí)融化或使用。除此之外，已融化后的胎牛血清，在 4"C冰箱中不宜長(zhǎng)時(shí)間存放，應(yīng)盡快使用。第六，胎牛血清解凍的正確操作很重要， 一般規(guī)范的操作規(guī)程應(yīng)是:在將胎牛血清從一 2(TC冷凍箱中取出后，先置于2-8。C冰箱中使之溶解，然后，再在室溫下使之全溶。但必須注意 的是，溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻，切莫?jiǎng)×艺袷帲@樣才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損。第七，胎牛血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，可能是血清中脂蛋白變性造成；血纖維 蛋白在血清解凍后也會(huì)存在于血清中，亦是造成血清沉淀物的原因之一。但這些絮狀沉淀物 ，并不影響血清本身的質(zhì)量，若絮狀沉淀物不太多，可直接使用；若絮狀沉淀物太多，應(yīng)先設(shè)法 去除，即可將其分裝在無(wú)菌容器中，置于離心機(jī)中稍微離心即可。第八，由于添加功效成分較多，可能是油溶或水溶或醇溶或水油兼溶，因此，實(shí)際配制時(shí) ，應(yīng)根據(jù)各自功效成分溶解特性，先將固體或液體功效成分溶于同相之中。如功效成分屬水溶 性，則先將它溶于水相之中；如功效成分屬油溶性，則先將它溶于油相之中；如功效成分屬醇溶性，則先將它溶于醇劑之中，再分別溶于油相或水相或乳化齊IJ/助乳化劑體系之中，之后，再 按本發(fā)明設(shè)計(jì)的比例進(jìn)行復(fù)合納米乳配制。第九，由于納米乳是一個(gè)自發(fā)形成的體系，因此在制備納米乳時(shí)，應(yīng)以相圖為基礎(chǔ)，綜合考慮乳化劑、助乳化劑、油相、水相以及Km溫度的作用。而納米乳配制時(shí)的油相、水相、 乳化劑、助乳化劑的比例非常關(guān)鍵，但在實(shí)際配制其它功效納米乳時(shí)，可根據(jù)配制過(guò)程中出現(xiàn)的具體情況適當(dāng)調(diào)整油相、水相、乳化劑、助乳化劑的比例，但上下最好不要超過(guò)5%。如此 方法仍無(wú)法解決，則可根據(jù)偽三相圖進(jìn)行估算，再采用滴定的方式，即用水相滴定或乳化劑/ 助乳化劑混合物進(jìn)行滴定。滴定用滴管或注射器均可， 一滴滴緩慢進(jìn)行;滴定過(guò)程中，攪拌器 仍正常工作，直至滴定配制完全透明和澄清為止;此時(shí)，應(yīng)計(jì)算準(zhǔn)確滴定所消耗量并記錄之，以 便再次配制時(shí)參考。第十，因配方中有些功效成分添加量極微，故應(yīng)稱量準(zhǔn)確，溶解完全，蕩洗干凈，以免影響 其實(shí)際濃度或效果；且在按照所添加的功效成分各自的理化特性及溶解特性完成溶解并添加 至納米乳各液相時(shí)再次出現(xiàn)渾濁或不溶解時(shí)，仍可先根據(jù)偽三相圖進(jìn)行估算，在納米乳配制過(guò) 程的最后攪拌階段，采用水相滴定或者醇滴定，或乳化劑/助乳化劑混合物滴定，或乳化劑或助 乳化劑單獨(dú)滴定，直至納米乳完全澄清和透明為止。偽三元相圖法是研制納米乳相行為最常 用和基本的方法，本設(shè)計(jì)可采用繪制偽三元相圖法進(jìn)行納米乳的制備，選擇將水相和油相按比 例混合制備成二元液，同時(shí)用S/C混合液作為滴定液對(duì)二元液進(jìn)行滴定，這樣在滴定過(guò)程中只 需觀察一次相變過(guò)程，降低了用水相或油相作為滴定液進(jìn)行滴定時(shí)出現(xiàn)兩次相變而產(chǎn)生的誤 差。第十一，按照本發(fā)明專利的技術(shù)工藝和制備方法，也可選擇其他乳化劑/助乳化劑體系， 但最好是選擇能與各功效成分相互匹配，以及無(wú)色、無(wú)味、無(wú)臭、透明、且高度安全、對(duì)皮 膚無(wú)刺激性的乳化劑/助乳化劑體系。這樣，不僅可以替代進(jìn)口試劑，來(lái)源方便，且可大大降低 成本;不過(guò)，選擇新的乳化齊iJ/助乳化劑體系及油相和水相時(shí)，應(yīng)先摸索并計(jì)算好比例。第十二，本發(fā)明制備固態(tài)復(fù)合納米乳所采用的賦形保護(hù)劑為甘露醇與甘氨酸的混合物。 其中，甘露醇的結(jié)晶為羽毛狀，乳滴分散在結(jié)晶的片層之間，因此能得到外觀較好的凍干制品 。通常甘露醇的量越大，產(chǎn)生的結(jié)晶空隙越多，其納米乳滴分散越均勻，且重分散性越好。而 甘露醇與甘氨酸合用，其共晶點(diǎn)溫度相對(duì)較高，這能有效保持樣品凍干過(guò)程中固態(tài)的形狀，減 少樣品的皺縮，提高凍干速率，縮短凍干時(shí)間。但甘露醇和甘氨酸最好在形成納米乳前加入 ，如配制好的納米乳再加入 一方面不好溶解，浪費(fèi)時(shí)間，而且，也影響賦形和保護(hù)的效果。第十三，功效成分在納米乳液體系中的釋放和分散程度，取決于這些功效成分在納 米乳體系中的濃度。 一般說(shuō)，功效成分在納米乳載體中的濃度越高，則功效成分釋放和分散就 越快，因此，功效成分在納米乳中的濃度不可太低，否則功效成分會(huì)強(qiáng)烈吸附于乳化劑或表 面活性劑組成的液膜上，從而造成擴(kuò)散受阻;另一方面，功效成分濃度低，體系濃度差小，擴(kuò)散 就慢，導(dǎo)致功效成分生物利用率降低，效果下降。第十四，納米乳較其它體系最突出的一個(gè)特點(diǎn)就是可以增溶功效成分，不管是水溶性的功效成分，還是脂溶性的功效成分，在納米乳液中都可以達(dá)到很大的增溶量。而功效成分在納 米乳內(nèi)的增溶，對(duì)功效成分的緩釋和控釋具有重要的意義。因?yàn)樾∫旱蝺?nèi)功效成分釋放，必須 先通過(guò)由乳化劑或表面活性劑分子組成的界面膜，此過(guò)程通常是較慢，而功效成分在納米乳液 的小液滴內(nèi)的總濃度卻可達(dá)很高。而且，功效成分增溶在納米乳中，可減少用藥次數(shù)，緩慢釋 放藥物的目的。第十五，納米乳雖然屬于熱力學(xué)穩(wěn)定系統(tǒng)，但溫度過(guò)高和過(guò)低則直接影響到它的穩(wěn)定性 。低溫時(shí)，乳化劑或表面活性劑主要分布在水相，而高溫時(shí)則主要分布在油相。溫度的升高， 乳化劑或表面活性劑的親油性增大，親水性減弱，形成反膠團(tuán)，因此，非離子乳化劑或表面活性 劑的親水基與水形成的氫鍵強(qiáng)度減弱，甚至斷裂，將導(dǎo)致乳化劑或表面活性劑從水溶液中析出 ，即產(chǎn)生濁點(diǎn)現(xiàn)象。溫度降低，由于非離子乳化劑或表面活性劑的親水性大于親油性，它與水 形成正膠團(tuán)，因此，也將產(chǎn)生類似的濁點(diǎn)現(xiàn)象;只有當(dāng)體系處在某個(gè)中間溫度，非離子乳化劑或 表面活性劑則能形成層狀膠團(tuán)，從而真正達(dá)到平衡，體系也維持平衡和穩(wěn)定。因此，納米乳需 要在常溫下保存。第十六，乳化劑或表面活性劑的選擇上首先需要考慮的就是它的親水親油平衡(HLB)值 ，如選擇HLB介于8 18之間乳化劑或表面活性劑，則它將形成0/W型納米乳，而選擇3 6之間 的乳化劑或表面活性劑則易形成W/0型納米乳。本發(fā)明設(shè)計(jì)選擇的乳化劑或表面活性劑 Labrasol主要來(lái)源于植物，它的HLB值為14，它適用于功效成分制劑的高HLB值的非離子型兩 性輔料。而作為助乳化劑或助表面活性劑的Plurol Oleique CC 497主要作為非離子型乳化 劑及納米乳的助表劑，將兩種表面活性劑按一定比例混合能形成混合膜，可以制得更為穩(wěn)定 的復(fù)合納米乳制劑。
具體實(shí)施方式
1、 主要原料①空白納米乳主要制備原料肉豆蔻酸異丙酯(IPM)，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 (Labrasol)，聚甘油脂肪酸酯(Plurol Oleique CC497)，純蒸餾水，無(wú)水乙醇等；②主要功效 成分:類肉毒素(六勝肽)；③輔助功效成分維生素E，蛋黃卵磷脂，人參皂苷，紅景天素，超氧 化物歧化酶(SOD)，還原型谷胱甘肽(GSH)，胎牛血清，透明質(zhì)酸，神經(jīng)酰胺第三部分:皮膚外用 固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳制備；④冷凍干燥賦形保護(hù)劑甘露醇，甘氨酸。2、 主要配制器材十萬(wàn)分之一電子天平、萬(wàn)分之一電子天平、千分之一藥物天平、液體快速混合器、定時(shí) 恒溫磁力攪拌器、石英管玻璃雙重蒸餾水器、大容量低溫離心機(jī)、冷凍干燥機(jī)、無(wú)菌過(guò)濾器、各種規(guī)格容器、燒瓶、燒杯、吸管、采血器等。一、 空白納米乳制備(以配制100g為例) ①用千分之一藥物天平準(zhǔn)確稱取15g重量的肉豆蔻酸異丙酯，并立即置于經(jīng)過(guò)洗消過(guò)的100mL潔凈三角燒瓶之中，加蓋后，用彩色記號(hào)筆清楚地標(biāo)記為油相(A) 15g。② 按照事先已設(shè)計(jì)好的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯聚甘油脂肪酸酯等于3:1的比例，分別 準(zhǔn)確稱取36g辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和12g聚甘油脂肪酸酯，并將兩者置于經(jīng)過(guò)洗消過(guò)的 100mL潔凈三角燒瓶之中；加蓋，并將此三角燒瓶迅速置于液體快速混合器上，打開(kāi)液體快速混 合器，并將其調(diào)至II檔，充分混合均勻，使之形成乳化劑/助乳化劑(S/C)混合物，3-5min后，關(guān) 閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用彩色記號(hào)筆清楚標(biāo)記為S/C混合物(B)48g。③ 再按油相(A) :S/C混合物(B):純蒸餾水(C) =15:45:40的比例，分別取45g辛酸癸酸聚乙 二醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B) ， 40g的純蒸餾水(C)依此加入上 述(A)中的100mL三角燒瓶之中，加蓋，固定于定時(shí)恒溫磁力攪拌器上。④ 檢査固定放置牢固后，立即啟動(dòng)定時(shí)恒溫磁力攪拌器開(kāi)關(guān)，在室溫25'C條件下，以 200rpmmin一1的轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min 。⑤ 關(guān)閉定時(shí)恒溫磁力攪拌器，取下100mL三角燒瓶，觀察其外觀為淡淡藍(lán)色，清亮，透明，流 體性和分散性好，有明顯可見(jiàn)的乳光，即為100g的皮膚外用空白納米乳。二、 皮膚外用液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳制備(以配制100g為例) ①用千分之一藥物天平準(zhǔn)確稱取10g重量的肉豆蔻酸異丙酯，立即置于經(jīng)過(guò)洗消過(guò)的100mL潔凈三角燒瓶之中。② 再用萬(wàn)分之一的精密分析天平分別稱取維生素E(VE)2g，蛋黃卵磷脂O. 8g，人參皂苷0. 2g，紅景天素10mg，加入至已盛有10g肉豆蔻酸異丙酯(IPM)的100mL三角燒瓶之中，充分混合 ，盡之可能溶解；實(shí)在不能溶解的部分，可用10mL吸管緩慢滴加分析醇(AR級(jí))的無(wú)水乙醇，以促 使其完全溶解，并用記號(hào)筆清楚標(biāo)記為油相(A)。③ 再用十萬(wàn)分之一的精密分析天平分別稱取六勝肽5mg、超氧化物歧化酶(SOD) lmg(丁氏 S0D微量快速測(cè)定法定量的6000U)，還原型谷胱甘肽(GSH)O. 5g，胎牛血清5g，透明質(zhì)酸50mg，神 經(jīng)酰胺50mg，置于同一個(gè)經(jīng)過(guò)洗消滅菌的50mL潔凈的三角燒瓶之中。④ 直接加入40mL的蒸餾水至上述盛有各種功效成分的50mL三角燒瓶之中，加蓋，并將此三 角燒瓶迅速置于液體快速混合器上;打開(kāi)液體快速混合器，并將其調(diào)至II檔，充分混合均勻使 之完全溶解，3-5min后，關(guān)閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用彩色記號(hào)筆清楚標(biāo)記為水 相(C)。⑤ 按照事先已設(shè)計(jì)好的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯聚甘油脂肪酸酯等于3:1的比例，分別 準(zhǔn)確稱取36克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和12克聚甘油脂肪酸酯，并將兩者置于經(jīng)過(guò)洗消過(guò)的 100mL潔凈三角燒瓶之中；加蓋，并將此三角燒瓶迅速置于液體快速混合器上，打開(kāi)液體快速混 合器，并將其調(diào)至II檔，充分混合均勻，使之形成乳化劑/助乳化劑(S/C)混合物，3-5分鐘后，關(guān) 閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用記號(hào)筆清楚標(biāo)記為S/C混合物(B)。⑥ 最后，再按油相(A) : S/C混合物(B):水相(C)等于l5:45:40的比例，取40g的水相(C)直接 加入至上述油相(A)中的100mL三角燒瓶中；然后，再取45g辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油 脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B)直接加入至上述油相(A)和水相(C)混合的100mL三角 燒瓶中。⑦ 立即選用定時(shí)恒溫磁力攪拌器在室溫25。C條件下，以200rpmmin一^勺轉(zhuǎn)速磁力攪拌 30min。⑧ 關(guān)閉定時(shí)恒溫磁力攪拌器，取下100mL三角燒瓶，觀察其外觀為清亮，透明，流體性和分 散性好，有明顯可見(jiàn)的乳光，即為100g可供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳。三、皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳制備(以配制100g為例)① 用千分之一藥物天平準(zhǔn)確稱取10g重量的肉豆蔻酸異丙酯，立即置于經(jīng)過(guò)洗消過(guò)的 100mL潔凈三角燒瓶之中。② 再用萬(wàn)分之一的精密分析天平分別稱取維生素E(VE)2g，蛋黃卵磷脂O. 8g，人參皂苷0. 2g，紅景天素10mg，加入至已盛有10g肉豆蔻酸異丙酯(IPM)的100mL三角燒瓶之中，充分混合 ，盡之可能溶解；實(shí)在不能溶解的部分，可用10mL吸管緩慢滴加分析醇(AR級(jí))的無(wú)水乙醇，以促 使其完全溶解，并用記號(hào)筆清楚標(biāo)記為油相(A)。③ 再用十萬(wàn)分之一的精密分析天平分別稱取六勝肽5mg、超氧化物歧化酶(SOD) lmg(丁氏 S0D微量快速測(cè)定法定量的6000U)，還原型谷胱甘肽(GSH)O. 5g，胎牛血清5g，透明質(zhì)酸50mg，神 經(jīng)酰胺50mg，置于同一個(gè)經(jīng)過(guò)洗消滅菌的50mL潔凈的三角燒瓶之中。④ 直接加入40mL的蒸餾水至上述盛有各種功效成分的50mL三角燒瓶之中，加蓋，并將此三 角燒瓶迅速置于液體快速混合器上;打開(kāi)液體快速混合器，并將其調(diào)至II檔，充分混合均勻使 之完全溶解，3-5min后，關(guān)閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用彩色記號(hào)筆清楚標(biāo)記為水 相(C)。⑤ 按照事先已設(shè)計(jì)好的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯聚甘油脂肪酸酯等于3:1的比例，分別 準(zhǔn)確稱取36克辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和12克聚甘油脂肪酸酯，并將兩者置于經(jīng)過(guò)洗消過(guò)的 100mL潔凈三角燒瓶之中；加蓋，并將此三角燒瓶迅速置于液體快速混合器上，打開(kāi)液體快速混合器，并將其調(diào)至II檔，充分混合均勻，使之形成乳化劑/助乳化劑(S/C)混合物，3-5分鐘后，關(guān) 閉液體快速混合器，取下三角燒瓶，并用記號(hào)筆清楚標(biāo)記為S/C混合物(B)。⑥ 最后，再按油相(A) : S/C混合物(B):水相(C)等于l5:45:40的比例，取40g的水相(C)直接 加入至上述油相(A)中的100mL三角燒瓶中；然后，再取45g辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油 脂肪酸酯充分混合形成的S/C混合物(B)直接加入至上述油相(A)和水相(C)混合的100mL三角 燒瓶中。⑦ 立即選用并啟動(dòng)定時(shí)恒溫磁力攪拌器，在室溫25。C條件下，以200rpmmin—^勺轉(zhuǎn)速磁力 攪拌30min。⑧ 關(guān)閉定時(shí)恒溫磁力攪拌器，取下100mL三角燒瓶，觀察其外觀為清亮，透明，流體性和分 散性好，有明顯可見(jiàn)的乳光，即為100g可供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳。⑨ 用千分之一藥物天平準(zhǔn)確稱取22g甘露醇和3g甘氨酸，分別加入上述皮膚外用的液態(tài)類 肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳中，加蓋，立即用定時(shí)恒溫磁力攪拌器在室溫25'C條件下，以 200rpmmin—^勺轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min后，關(guān)閉定時(shí)恒溫磁力攪拌器，取下100mL三角燒瓶。⑩ 100mL三角燒瓶打開(kāi)瓶蓋，先置于-2(TC冰箱預(yù)凍，12 h后取出，然后置于-5(TC的環(huán)境 中保持3. 5h，待達(dá)到預(yù)凍效果之后，立即置于冷凍干燥機(jī)中；開(kāi)動(dòng)真空系統(tǒng)，將凍干箱內(nèi)壓力抽 至7Pa，并保持此真空度；讓此復(fù)合納米乳樣品自然升溫至-2(TC，保溫8h，使其中大部分水分升 華;最后，緩慢將溫度升至(TC，再通過(guò)加熱板將此復(fù)合納米乳樣品溫度緩慢加熱至3(TC，去除 殘余水分，在真空狀態(tài)下壓蓋，即可得到冷凍干燥后的皮膚外用固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納 米乳。另外，如需要將此固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳再次轉(zhuǎn)化為液態(tài)類肉毒素(六勝肽 )復(fù)合納米乳，只要在此固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳中加入40mL蒸餾水，置于液體快 速混合儀器上振搖3-5 min，此時(shí)，固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳可迅速分散于蒸餾水 之中，再次形成均勻一致、流體性和分散性較好的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳。本發(fā)明所述的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行的描述，并非對(duì)本發(fā)明構(gòu)思和 范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)思想的前題下，本領(lǐng)域中的學(xué)者或工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā) 明的技術(shù)方案作出的各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍，本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù) 內(nèi)容，已經(jīng)全部記在權(quán)利要求書(shū)中。
權(quán)利要求
1. 一種皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳，其特征在于液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳是由下述重量份配比的原料制成肉豆蔻酸異丙酯5-15克、維生素E 2-10克、蛋黃卵磷脂0.5-5.0克、人參皂苷0.1-2.0克、紅景天素0.003-0.03克、六勝肽0.001-0.01克、超氧化物歧化酶0.0002-0.002克、還原型谷胱甘肽0.2-2.0克、胎牛血清2-20克、透明質(zhì)酸0.02-0.2克、神經(jīng)酰胺0.02-0.2克、蒸餾水35-45克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯30-40克、聚甘油脂肪酸酯10-15克；固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳是由下述重量份配比的原料制成肉豆蔻酸異丙酯5-15克、維生素E2-10克、蛋黃卵磷脂0.5-5.0克、人參皂苷0.1-2.0克、紅景天素0.003-0.03克、六勝肽0.001-0.01克、超氧化物歧化酶0.0002-0.002克、還原型谷胱甘肽0.2-2.0克、胎牛血清2-20克、透明質(zhì)酸0.02-0.2克、神經(jīng)酰胺0.02-0.2克、蒸餾水35-45克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯30-40克、聚甘油脂肪酸酯10-15克、甘露醇15-30克、甘氨酸2-8克。
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù) 合納米乳，其中液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳各原料最佳的重量配比是肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E 2克、蛋黃卵磷脂O. 8克、人參皂苷O. 2克、紅景天素 O.Ol克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽O. 5克、胎牛血清5克、 透明質(zhì)酸0.05克、神經(jīng)酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂 肪酸酯12克；固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳各原料最佳的重量配比是 肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E2克、蛋黃卵磷脂0.8克、人參皂苷0.2克、紅景天素 O.Ol克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽O. 5克、胎牛血清5克、 透明質(zhì)酸0.05克、神經(jīng)酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂肪酸酯12克、甘露醇22克、甘氨酸3克。
3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的制備 方法，其特征在于包括以下步驟 1) 按液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳原料的配比，將肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、蛋黃卵磷脂、人參皂苷、紅景天素共同置于容器中；將容器內(nèi)原料充分混合、溶解，不能 溶解的部分加少許無(wú)水醇促進(jìn)完全溶解，并將作為油相(A)備用； 2) 按六勝肽、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、胎牛血清、透明質(zhì)酸、神經(jīng)酰胺及 適量蒸餾水混合使之完全溶解，再加蒸餾水使之作為水相(C)備用； 3) 按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯等于3: l的比例，置于另一容器之中 ，充分?jǐn)嚢杈鶆?，使之形成S/C混合物(B)備用； 4) 再按油相(A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取S/C混合 物(B)、水相(C)依此加入油相(A)容器中； 5) 在室溫條件下，選用定時(shí)恒溫磁力攪拌器，并以200rpmmin-l的轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min ，即可得到可供皮膚外用的液態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳。
4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳的制備 方法，其特征在于包括以下步驟 1) 按固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳原料的配比，將肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、蛋黃卵磷脂、人參皂苷、紅景天素共同置于容器中；將容器內(nèi)原料充分混合、溶解，不能 溶解的部分加少許無(wú)水醇促進(jìn)完全溶解，并將作為油相(A)備用； 2) 按六勝肽、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、胎牛血清、透明質(zhì)酸、神經(jīng)酰胺及 適量蒸餾水混合使之完全溶解，再加蒸餾水使之作為水相(C)備用； 3) 按辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯等于3: l的比例，置于另一容器之中 ，充分?jǐn)嚢杈鶆?，使之形成S/C混合物(B)備用； 4) 再按油相(A) :S/C混合物(B):水相(C)等于15:45:40的比例，分別取S/C混合 物(B)、水相(C)依此加入油相(A)容器中； 5) 在室溫條件下，選用定時(shí)恒溫磁力攪拌器以200rpmmin-l的轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min，再 加入甘露醇和克甘氨酸，再以200rpmmin-l的轉(zhuǎn)速磁力攪拌30min，并進(jìn)行冷凍干燥處理，即 可得到可供皮膚外用的固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種皮膚外用液態(tài)和固態(tài)類肉毒素(六勝肽)復(fù)合納米乳及其制備方法。液態(tài)類納米乳各原料重量配比是肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E 2克、蛋黃卵磷脂0.8克、人參皂苷0.2克、紅景天素0.01克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽0.5克、胎牛血清5克、透明質(zhì)酸0.05克、神經(jīng)酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂肪酸酯12克；固態(tài)類納米乳各原料重量配比是肉豆蔻酸異丙酯10克、維生素E2克、蛋黃卵磷脂0.8克、人參皂苷0.2克、紅景天素0.01克、六勝肽0.005克、超氧化物歧化酶0.001克、還原型谷胱甘肽0.5克、胎牛血清5克、透明質(zhì)酸0.05克、神經(jīng)酰胺0.05克、蒸餾水40克、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯36克、聚甘油脂肪酸酯12克、甘露醇22克、甘氨酸3克。
文檔編號(hào)A61K8/85GK101214200SQ20081030015
公開(kāi)日2008年7月9日 申請(qǐng)日期2008年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月21日
發(fā)明者宇 丁, 丁克祥, 朱曉亮 申請(qǐng)人:丁克祥