專利名稱：鋰鹽在制備治療精神興奮類藥物成癮的藥物上的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于成癮藥物領(lǐng)域，具體地說涉及鋰鹽在制備治療精神興奮劑類藥 物成癮的藥物上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
藥物成癮是困擾全球人類健康和社會發(fā)展的重大公共衛(wèi)生和社會問題，嚴(yán) 重危害人類健康，影響家庭安定和社會發(fā)展，給社會造成巨大的經(jīng)濟損失。如
2007年我國艾滋病新增感染病例中，約42%患者與藥物成癮和濫用有關(guān)。
藥物成癮是一種慢性高復(fù)發(fā)的復(fù)雜性腦疾病，其特點表現(xiàn)為從初次用藥引 起沖動性覓藥進(jìn)行性發(fā)展為強迫性覓藥，形成強烈的軀體依賴和精神依賴。長 期吸食成癮性物質(zhì)會引起機體的功能失調(diào)和組織病理變化，伴有嗜睡、感覺遲 鈍、運動失調(diào)及幻覺和妄想等，從而產(chǎn)生精神類障礙疾病。精神興奮劑(如可 卡因)是主要的成癮藥物之一，重復(fù)或間斷的使用精神興奮劑，會導(dǎo)致持久的 進(jìn)行性自發(fā)活動增加，被稱為行為敏化(sensitization^它被認(rèn)為是神經(jīng)突 觸可塑性和成癮的基礎(chǔ)。成癮者軀體依賴癥狀是導(dǎo)致再次吸毒的原因之一，但 是當(dāng)軀體脫毒后仍會復(fù)吸，原因就在于成癮者有者強烈的心理渴求。如果能有 效控制行為敏化，改善突觸可塑性，那么就可能降低成癮的發(fā)生。 很多精神系統(tǒng)疾病均與大腦皮層發(fā)育異常以及突觸結(jié)構(gòu)異常相關(guān)，例如，精神 分裂癥與額前皮質(zhì)發(fā)育異常有密切關(guān)聯(lián)(Bhat RV，et al. J Alzheimers Dis 2002， 4:291-301. Bhat RV， et al. J Neurochem. 2004 ， 89:1313-1317)， 另外，阿爾茨海默病有明顯的腦萎縮以及膠質(zhì)細(xì)胞增殖。且這些疾病均涉及糖 原合成酶(glycogen synthase kinase 3 P ，簡寫為GSK-3 P )活性的改變.GSK-3 是一種絲氨酸/蘇氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶，是最早發(fā)現(xiàn)的蛋白激酶B (PKB) 的直接底物之一，活化的PKB與GSK-3結(jié)合，誘導(dǎo)GSK-3向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移，磷酸 化其N端的Ser活性位點使之失活。GSK-3有許多不同的底物，如tau蛋白、 e-catenin等在許多腦疾病的發(fā)病過程中起到重要作用。GSK-3P在中樞神經(jīng) 系統(tǒng)中高表達(dá)，如海馬，參與突觸可塑性的調(diào)節(jié)(Williams M丄et
3al.Neuropsychopharmaco].ogy. 2008,33:1779-1797)。對細(xì)胞的分裂，增殖，分化和粘附發(fā)揮著根本性的作用(Frame S， et al. Biochem J. 2001， 359:1-16)。精神興奮劑成癮是一種腦病，其中涉及到中腦邊緣獎賞系統(tǒng)的改變。精神興奮劑導(dǎo)致行為敏化現(xiàn)象同樣也涉及到屮腦邊緣多巴胺能系統(tǒng)的改變，尤其是伏隔核(nucleus accumbens NAc)多巴胺能系統(tǒng)的變化(Robinson & Berridge及Kalivas等)。使中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)發(fā)生長期神經(jīng)可塑性變化(neuroplasticity)從而導(dǎo)致行為敏化進(jìn)而導(dǎo)致藥物成癮。鋰鹽對情感障礙的躁狂和抑郁癥狀均有治療作用(Freeman et al. Am J Psychiatry. 1992 ， 149:108- 111)，且長期服用可預(yù)防情感障礙復(fù)發(fā)。另外鋰鹽具有神經(jīng)保護(hù)作用，長期使用鋰鹽可以防治神經(jīng)變性(Chen et al. J Biol Chem. 1999,274:6039-6042)。長期使用氯化鋰，會抑制異?；罨腉SK-3e，使GSK—3^磷酸化，失去活性(Zhanget al.J Biol Chem 2003,278:33067-33077)。給予GSK — 3 P敲除的小鼠安非他明(苯丙胺)，小鼠自發(fā)活動不會增加(Beaulieu et al. Proc Natl Acad SciUSA. 2004,101:5099-5104)。給予紋狀體DAT敲除小鼠氯化鋰治療，小鼠高自發(fā)活動明顯降低，同時檢測小鼠紋狀體區(qū)pGSK-3P表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)升高，活性下降。表明氯化鋰可以抑制由于多巴胺系統(tǒng)異常引起的行為學(xué)表現(xiàn)。
藥物成癮是一種復(fù)雜的腦病，目前對于藥物成癮的藥物治療主要是針對軀體依賴的脫毒治療，脫毒后軀體依賴癥狀很快消失，而對于成癮后強烈的精神依賴并沒有好的治療方法，這種對藥物強烈的精神依賴很難消除甚至持續(xù)終生。因此需要尋找消除成癮者對藥物強烈的精神依賴的方法。
經(jīng)檢索，沒有發(fā)現(xiàn)有關(guān)針對鋰鹽通過抑制GSK-3 P活性來改善精神興奮藥物成癮中的報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對精神興奮藥物行為敏化導(dǎo)致的藥物成癮，本發(fā)明目的之一是提供鋰鹽在制備治療精神興奮類藥物成癮的藥物上的應(yīng)用。鋰鹽另一目的是提供鋰鹽在制備防止精神興奮類藥物脫毒后復(fù)吸的藥物上的應(yīng)用。本發(fā)明主要是通過干預(yù)GSK-3 3的活性來達(dá)到治療目的。
上述應(yīng)用中所述的精神興奮類藥物是指可卡因、甲基苯丙胺、苯丙胺或氯胺酮等。
上述應(yīng)用中所述的鋰鹽是指氯化鋰或鎢酸鋰等。本發(fā)明中所述的鋰鹽等能夠抑制GSK--3的活性，通過抑制GSK-的活性，抑制其下游蛋白tau、 0-catenin等過度磷酸化，同時GSK-3 P也涉及到Writs途徑，該信號途徑參與調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞的增殖，凋亡，也是DA神經(jīng)元生長所需要的。從而改善受損的中腦邊緣系統(tǒng)的多巴胺神經(jīng)元，抑制了可卡因引起的行為敏化。
使用時按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式給予有效劑量即可。本發(fā)明具有的優(yōu)點和有益效果(1)本發(fā)明為治療精神興奮藥物(如可卡
因等)行為敏化導(dǎo)致的藥物成癮提供了一種有效途徑；(2)本發(fā)明效果好，可
從根本上改善精神興奮藥物成癮患者的"精神依賴"。


圖1為鋰鹽抑制可卡因行為敏化形成的曲線圖。
圖2:可卡因敏化形成過程中氯化鋰抑制GSK-3 P活性的柱形圖。
圖3:大鼠伏隔核中央部磷酸化GSK-3 3含量的蛋白電泳圖譜；
1為A組，2為B組，3為C組，4為D組。圖4:氯化鋰抑制大鼠可卡因行為敏化表達(dá)的曲線圖。圖5:可卡因敏化表達(dá)過程中氯化鋰抑制GSK-3 e活性的柱形圖。圖6為大鼠伏隔核中央部磷酸化GSK-3 P含量的蛋白電泳圖譜；
1為A組，2為B組，3為C組，4為D組，5為E組，6為F組。
具體實施例方式
實施例l氯化鋰抑制了可卡因敏化的形成試驗(行為學(xué))試驗分組將SD大鼠(購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司)32只分成4組，具體如下
A組生理鹽水+生理鹽水組8只
B組氯化鋰+生理鹽水組8只
C組生理鹽水+可卡因組8只
D組氯化鋰+可卡因組8只
利用自發(fā)活動實驗建立SD大鼠可卡因行為敏化形成模型。(一)大鼠可卡因行為敏化形成模型的建立
適應(yīng)階段第1天所有32只大鼠在自發(fā)活動箱(購自上海吉量軟件科技有
限公司)中適應(yīng)2h,第2、 3天所有32只大鼠腹腔注射生理鹽水后在箱中適應(yīng)
52h。
訓(xùn)練階段(行為敏化形成階段)
A組和B組16只大鼠每天腹腔接受生理鹽水注射濃度為1mg/ml，劑量為1mg/kg，測試自發(fā)活動2h，連續(xù)14天；
C組和D組16只組大鼠每天腹腔接受可卡因注射濃度為lmg/ml，劑量為10mg/kg;測試自發(fā)活動2h，連續(xù)14天。
(二)給予氯化鋰干預(yù)大鼠行為敏化的形成(此階段大鼠同訓(xùn)練階段)
A組8只大鼠每天接受生理鹽水注射前30分鐘，腹腔注射生理鹽水，濃度和劑量同上，后在自發(fā)活動箱中測試自發(fā)活動2h，連續(xù)14天；
B組8只大鼠每天接受生理鹽水注射前30分鐘，腹腔給予氯化鋰100mg/kg，每天測試自發(fā)活動2h，連續(xù)14天；
C組8只大鼠每天接受可卡因10mg/kg注射前30分鐘，腹腔注射生理鹽水，濃度和劑量同上，后在自發(fā)活動箱中測試自發(fā)活動2h，連續(xù)14天；
D組8只大鼠每天接受可卡因10mg/kg注射前30分鐘，腹腔給予氯化鋰100mg/kg，后在自發(fā)活動箱中測試自發(fā)活動2h，連續(xù)14天；
上述所有32只大鼠均在第15天斷頭，取伏隔核中央核團(tuán)，Westernblotting檢測伏隔核中央GSK-3 P蛋白磷酸化水平；
結(jié)果(見圖1) (1)與A組相比，C組每天自發(fā)活動明顯增加，差異具顯著性；*/X0.05 (2)與C組相比，D組大鼠高自發(fā)活動明顯受到抑制，在可卡因注射第十四天時，大鼠自發(fā)活動不再增加，**/X0.05。說明氯化鋰可以抑制大鼠可卡因行為敏化的形成。
實施例2氯化鋰抑制伏隔核中央GSK-3 P活性的檢測試驗
本試驗的大鼠來源與實施例1為同一批，試驗分組
A、 B、 C、 D各組的前14天的操作同實施例1的行為學(xué)訓(xùn)練實驗，然后于第15天將所有32只大鼠斷頭，取伏隔核中央核團(tuán)，利用通常的蛋白印漬技術(shù)((1)腦組織準(zhǔn)備大鼠斷頭，腦組織(伏隔核)冷凍(一4(TC); (2)腦組
A組B組C組D組
生理鹽水+生理鹽水組氯化鋰+生理鹽水組生理鹽水+可卡因組氯化鋰+可卡因組
8只8只8只8只織勻漿，離心，蛋白定量；(3)蛋白印漬技術(shù)(Western blotting); (4) —抗抗p-GSK-3 3抗體(Cell Signaling公司)；二抗羊抗兔二抗(Santa Cruz公司))檢測GSK-3P蛋白磷酸化水平。
結(jié)果(見圖2，圖3) (1)與A組比較，生化檢測提不，C組伏隔核中央部GSK-3P磷酸化下降，差異具顯著性，v<o.05;*><o.05; (2)與C組比較，D組的GSK-3 3活性明顯受到抑制，使伏隔核中央部GSK-3 P磷酸化水平恢復(fù)至正常生理鹽水組水平，***^<0.05。說明在可卡因行為敏化形成過程中，伏隔核中央部GSK-3P活性升高，氯化鋰抑制了伏隔核中央部GSK-3 3的活性，從而可以阻止可卡因行為敏化的形成。
實施例3氯化鋰抑制大鼠行為敏化的表達(dá)(行為學(xué))
試驗分組(1)生理鹽水組18只(2)可卡因組21只
利用自發(fā)活動實驗建立S-D大鼠可卡因行為敏化表達(dá)模型。
(一)大鼠行為敏化表達(dá)模型的建立
適應(yīng)階段第1天所有大鼠39只在自發(fā)活動箱中適應(yīng)2h，第2、 3天所有大鼠腹腔注射生理鹽水后在箱中適應(yīng)2h。訓(xùn)練階段(行為敏化表達(dá)階段)
第(1)組18只大鼠每天腹腔接受生理鹽水注射濃度為lmg/ml，劑量為lmg/kg，測試自發(fā)活動2h，連續(xù)14天，停止生理鹽水注射5天后，于第19天18只大鼠腹腔給予可卡因10mg/kg，測試自發(fā)活動2h。
第(2)組21只大鼠每天接受可卡因劑量為10mg/kg，濃度為10mg/ml注射，測試自發(fā)活動2h，連續(xù)14天，可卡因戒斷5天后，于第19天21只大鼠腹腔給予可卡因10mg/kg，測試自發(fā)活動2h。
(二)給予氯化鋰干預(yù)大鼠行為敏化的表達(dá)(此階段大鼠與訓(xùn)練階段大鼠是相同的大鼠)，具體分組如下
生理鹽水組18只大鼠再次分三組，每組6只A組生理鹽水+可卡因(生理鹽水)B組低劑量氯化鋰+可卡因(生理鹽水)C組高劑量氯化鋰+可卡因(生理鹽水)可卡因組21只大鼠再次分三組，每組7只
7D組生理鹽水+可卡因(可卡因) E組低劑量氯化鋰+可卡因(可卡因) F組高劑量氯化鋰+可卡因(可卡因) 實驗步驟如下
A組大鼠于第19天腹腔給予可卡因10mg/kg前30分鐘，腹腔給予生理鹽
水注射濃度和劑量同上，測試自發(fā)活動2h。
B組大鼠于第19天腹腔給予可卡因10mg/kg前30分鐘，腹腔給予低劑量 氯化鋰30mg/kg注射上，測試自發(fā)活動2h。
C組大鼠于第19天腹腔給予可卡因10mg/kg前30分鐘，腹腔給予高劑量 氯化鋰100mg/kg注射上，測試自發(fā)活動2h。
D組大鼠于第19天腹腔給予可卡因10mg/kg前30分鐘，腹腔給予生理鹽 水注射濃度和劑量同上，測試自發(fā)活動2h。
E組大鼠于第19天腹腔給予可卡因10mg/kg前30分鐘，腹腔給予低劑量 氯化鋰30mg/kg注射上，測試自發(fā)活動2h。
F組大鼠于第19天腹腔給予可卡因10mg/kg前30分鐘，腹腔給予高劑量 氯化鋰100mg/kg注射上，測試自發(fā)活動2h。
結(jié)果(見圖4) (1)與A組相比，第19天給予可卡因誘導(dǎo)后，D組大鼠自 發(fā)活動明顯升高，差異有顯著性，#p<o.05; (2),與D組比較，第19天給予可卡 因誘導(dǎo)后，F(xiàn)組大鼠明顯降自發(fā)活動降低，vo.05。說明氯化鋰可以抑制大鼠行 為敏化的表達(dá)。
實施例4氯化鋰抑制大鼠行為敏化表達(dá)過程中GSK活性檢測 前期實驗過程同實施例3，大鼠分組和數(shù)量同實施例3并且和實施例3是 相同的大鼠，具體分組如下
A組生理鹽水+可卡因(生理鹽水) 6只 B組低劑量氯化鋰+可卡因(生理鹽水) 6只
C組高劑量氯化鋰+可卡因(生理鹽水) 6只
D組生理鹽水+可卡因(可卡因) 7只
E組低劑量氯化鋰+可卡因(可卡因) 7只
F組高劑量氯化鋰+可卡因(可卡因) 7只
于第19天六組大鼠測試自發(fā)活動2h后，所有大鼠共39只斷頭，取伏隔核中央核團(tuán)，蛋白印漬技術(shù)((l)腦組織準(zhǔn)備大鼠斷頭，腦組織(伏隔核)冷
凍(一40。C);(2)腦組織勻漿，離心，蛋白定量；(3)蛋白印漬技術(shù)(Western blotting); (4)--抗:抗p-GSK-3 P抗體(Cell Signaling公司)；二抗羊 抗兔二抗(Santa Cruz公司))檢測GSK-3 |3蛋白磷酸化水平。
結(jié)果(見圖5，圖6): (1)、與A組比較，第19天給予可卡因誘導(dǎo)后，D 組大鼠伏隔核中央部磷酸化GSK-3P水平有明顯降低，差異有顯著性，,<0.05;
(2)、與D組比較，第19天可卡因誘導(dǎo)后，給予F組大鼠伏隔核中央部磷酸化 GSK-3 0水平有明顯增加，**P<o.o5。說明在可卡因行為敏化表達(dá)中，伏隔核中 央部GSK-3P活性升高，氯化鋰抑制了伏隔核中央部GSK-313的活性，從而可以 阻止可卡因行為敏化的表達(dá)。
權(quán)利要求
1、鋰鹽在制備治療精神興奮類藥物成癮的藥物上的應(yīng)用。
2、 鋰鹽在制備防止精神興奮類藥物脫毒后復(fù)吸的藥物上的應(yīng)用。
3、 按照權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述的精祌興奮類藥物是指可卡因、甲基苯丙胺、苯丙胺或氯胺酮。
4、 按照權(quán)利耍求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述的鈕鹽是指氯化鋰或鎢酸鋰。
5、 按照權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述的精神興奮類藥物是指可卡因。
6、 按照權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述的鋰鹽是指氯化鋰。
7、 按照權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的精神興奮類藥物是指可卡因、甲基苯丙胺、苯丙胺或氯胺酮。
8、 按照權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的鋰鹽是指氯化鋰或鴇酸鋰。
9、 按照權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的精神興奮類藥物是指可卡因。
10、 按照權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的鋰鹽是指氯化鋰。
全文摘要
本發(fā)明公開了鋰鹽在制備治療精神興奮類藥物成癮的藥物上的應(yīng)用以及鋰鹽在制備防止精神興奮類藥物脫毒后復(fù)吸的藥物上的應(yīng)用。本發(fā)明為治療精神興奮藥物(如可卡因等)行為敏化導(dǎo)致的藥物成癮提供了一種有效途徑；其次，本發(fā)明效果好，可從根本上改善精神興奮藥物成癮患者的精神依賴。
文檔編號A61K33/00GK101491538SQ20081024756
公開日2009年7月29日 申請日期2008年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者徐春梅, 朱維莉, 林 陸 申請人:北京大學(xué)