專利名稱：：一種中藥組合物在制備防治血栓的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物的用途，具體地，涉及一種中藥組合物在制備防治血栓的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：2005年11月2日公告的發(fā)明專利說明書CN1225250C公開了一種防治老年癡呆的中藥組合物，其主要由茯苓、白術(shù)和當(dāng)歸組成的原料藥中的多糖、正丁醇提取物和/或揮發(fā)油有效部位組成，或者主要由選自茯苓、白術(shù)和當(dāng)歸中的一種或兩種原料藥中的多糖、正丁醇提取物和/或揮發(fā)油有效部位組成。該中藥組合物可采用超臨界萃取和水提取的方法制得。上述中藥組合物具有防治老年癡呆的用途。本發(fā)明發(fā)掘了該中藥組合物新的醫(yī)藥用途。對于已知的藥物，發(fā)現(xiàn)其還具有治療另一種疾病的性能，從而可以治療另一種疾病，這種第二次醫(yī)藥用途發(fā)明對于滿足醫(yī)療臨床需求與市場需求，具有重要意義。鑒于第二次醫(yī)藥用途的重要作用，研究和開發(fā)上述中藥組合物的新用途具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種中藥組合物的新用途，即在制備防治血栓的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種中藥組合物在制備防治血栓的藥物中的應(yīng)用，所述的中藥組合物由茯苓、白術(shù)和當(dāng)歸三種原料藥的超臨界萃取物和/或水提取物，或者超臨界萃取物和/或水提取物有效部位組成。為敘述方便，將本發(fā)明茯苓、白術(shù)、當(dāng)歸組成的中藥組合物簡稱為FBD。茯苓簡稱F、白術(shù)簡稱B、當(dāng)歸簡稱D。本發(fā)明FBD可以采用以下方法制得將原料藥粉碎成粗粉，經(jīng)二氧化碳超臨界萃取得到超臨界萃取物，之后藥渣用水提取后得到水提取物；或者原料藥經(jīng)超臨界萃取得到超臨界萃取物后，藥渣用水提取后，加乙醇至含醇濃度為45-95%時沉淀，得到多糖，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，得到正丁醇提取物；或者，所述原料藥用水煎煮，水提取液濃縮后，加乙醇至含醇濃度為45-95%時沉淀，得到多糖，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，得到正丁醇提取物；多糖和正丁醇提取物是水提取物有效部位。在所述的超臨界萃取物和水提取物有效部位中可加入藥用載體或敷料，制成中藥制劑。常用制劑輔料可選用，崩解劑如羥丙基淀粉、羥丙纖維素、羧甲基淀粉鈉、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；填充劑如乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纖維素、糊精、淀粉、磷酸鈣、磷酸氫鈣、硫酸鈣、碳酸鈣、環(huán)糊精、微粉纖維素等；潤濕劑和粘合劑如乙醇、預(yù)膠化淀粉、聚維酮、羧甲基纖維素鈉、羥丙甲纖維素；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、微粉硅膠、氫化植物油、聚乙二醇4000和6000;潤濕劑如十二烷基硫酸鈉、吐溫80。本發(fā)明FBD的用量和療程可根據(jù)劑型、患者的年齡、疾病的輕重程度作適當(dāng)調(diào)整，但一般為每日口服3次，每次2片，以l個月為一個療程，可連續(xù)使用l個療程或更長時間。為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用本發(fā)明FBD的藥理試驗及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途在藥效學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)FBD可以抑制大鼠動靜脈旁路血栓形成，降低血栓濕重；FBD與陽性藥丹參注射液(3000mg/kg)對大鼠腦微循環(huán)障礙的血液流態(tài)有不同程度的改善，表現(xiàn)為血細(xì)胞聚集程度有所減輕，如血液流態(tài)由淤滯狀變?yōu)榱?，或由粒狀變?yōu)閹罨蚓€狀，或由虛線狀變?yōu)榫€狀，使腦膜毛細(xì)血管網(wǎng)點計數(shù)明顯增加。FBD對AA和ADP誘導(dǎo)的血小板聚集亦有明顯的抑制作用，對膠原誘導(dǎo)的血小板聚集則無明顯的抑制作用。結(jié)果表明FBD能有效改善血栓形成，降低血栓濕重。在作用機制的研究中發(fā)現(xiàn)1、在大鼠動靜脈旁路血栓形成實驗中，F(xiàn)BD對血栓形成有抑制作用，與陰性組比較有顯著性差異(P<0.05)。但其抑制率小于陽性藥阿司匹林(25mg/kg)。2、FBD對血小板聚集功能影響的研究中，F(xiàn)BD可有顯著性地抑制ADP和AA誘導(dǎo)的血小板聚集，而對膠原誘導(dǎo)的血小板聚集無明顯作用，其作用強度均低于阿司匹林(25mg/kg)。本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明對己知的中藥組合物FBD發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明FBD安全無毒，藥理作用強，預(yù)示著很好的藥用前景。本發(fā)明FBD制備工藝簡單，并可制成各種口服劑型，如片劑、膠囊等。本發(fā)明FBD能有效改善血栓形成，降低血栓濕重，有利于防治血栓。具體實施例方式以下通過試驗例對本發(fā)明的有益效果作進(jìn)一歩的闡述試驗例lFBD對動靜脈旁路血栓形成的影響1.1實驗?zāi)康挠^察受試樣品對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響。1.2動物品系SD大鼠來源上海斯萊克實驗動物責(zé)任有限公司性別雌雄各半體重200-240g動物合格證號SCXK(滬)2003-0003飼養(yǎng)動物飼養(yǎng)于正壓凈化通風(fēng)動物房內(nèi)，室溫25土2。C,自由進(jìn)食與飲水。1.3藥品1.3.1受試樣品名稱歸苓片(FBD)來源上海中藥制藥技術(shù)有限公司性狀深紅色片劑批號040904規(guī)格0.48g/片1.3.2陽性對照樣品名稱阿司匹林來源上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司規(guī)格25mg/片性狀白色腸溶片批號0305031.4動物分組30只雌性、30只雄性大鼠按隨機數(shù)字法各分為6組，每組10只(5只雌鼠，5只雄鼠)動物。1.5藥液配制I.阿司匹林_15%兩黃蓍砍10mlII.FBD藥液的配制:FBD量l片0.5%西黃蓍膠_3.,6ml_1.6實驗方法第1組動物給予0.5%西黃蓍膠，其余5組動物按應(yīng)給予的藥液口服灌胃給藥，給藥體積均為0.5ml/100g，每天給藥1次，連續(xù)5天。在末次給藥后1小時，大鼠腹腔注射3y。戊巴比妥鈉35mg/kg麻醉，將大鼠仰臥固定，切開頸部皮膚，分離左側(cè)頸動脈和右側(cè)頸外靜脈，以一旁路管連接，管中置一7cm長的4號手術(shù)絲線。手術(shù)結(jié)束后開放血流15分鐘，取出絲線稱重，減去絲線重量，即為血栓濕重。1.7結(jié)果從表1可見，與陰性組相比FBD不同劑量組能劑量依賴性地抑制大鼠動一靜脈旁路血栓的形成(P〈0.05或0.01);4.60、2.30、1.15和0.56g/kg給藥組對血栓形成的抑制率分別為19.95、16.77、11.62和8.17%。陽性藥阿司匹林能非常顯著地抑制大鼠動靜脈旁路血栓的形成(P〈0.01)，抑制率達(dá)36.58%(表l)。數(shù)據(jù)以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(；土SD)表示，數(shù)據(jù)差異統(tǒng)計采用t檢驗，組間差異以P<0.05判斷。表l.FBD對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響組別動物數(shù)血栓濕重(mg)抑制率(只)(％)陰性組1043.71±4.32/阿司匹林1027.72±4.01**36.58FBD1034.99±8.52*19.95*P<0.05，**P<0.01，aP=0.05034與陰性對照組相比試驗例2FBD對血小板聚集功能的影響2.1實驗?zāi)康挠^察FBD對血小板聚集功能的影響。2.2動物品系SD大鼠性別雄性體重250270克來源上海斯萊克實驗動物責(zé)任有限公司動物合格證號SCXK(滬)2003-0003飼養(yǎng)恒溫凈化通風(fēng)動物房，自由進(jìn)食與飲水，25±2°C。2.3藥品2.3.1試驗樣品同1.3.12.3.2陽性對照樣品名稱阿司匹林腸溶片來源BayerHealthCareAG規(guī)格100mg/片批號BTA4E31性狀白色藥片2.3.3其它試劑2.3.3.1名稱ADP來源Sigma公司批號129F04962.3.3.2名稱AA(花生四烯酸)來源Fluka公司批號318175/11932.3.3.3名稱膠原來源TrinityBiotechPlc，Bray,Co.Wicklow，Treland.公司批號200501142.4實驗儀器2.4.1名稱80—2型離心機來源上海手術(shù)器械廠生產(chǎn)2.4.2名稱MK4/HC血小板計數(shù)儀來源美國BakerInstruments公司2.4.3名稱Laboraggregometer_153型雙道血小板聚集儀來源德國LaborGmbHHanburg公司2.5動物分組每組10—12只。2.6藥液配制I.阿司匹林_0.5%兩黃蓍膠,20mlII.FBD受試樣品的的配制同1.5III.ADP:pH7.4磷酸緩沖液配成200|aM濃度溶液，—2(TC冰箱保存?zhèn)溆?。AA:0.1MNa2CO3緩沖液配成0.5隨ol/L濃度溶液，一18r冰箱保存?zhèn)溆?。膠原制劑標(biāo)識量2.0mg/ml，28'C冰箱保存，白色粉針劑，臨用前以雙蒸水溶解，0.5ml/支，現(xiàn)配現(xiàn)用。2.7實驗方法試驗藥物單次口服灌胃，體積為5ml/kg，陰性對照組給予同體積西黃蓍膠。口服灌胃給藥后1小時腹腔注射戊巴比妥鈉45mg/kg麻醉，仰臥固定，腹主動脈采血，用3.8%枸櫞酸鈉按1:9比例抗凝，以500卬m離心5分鐘，取上部血漿即為富血小板血漿(PRP)，余下部分再次以3000rpm離心15分鐘，上清液為貧血小板血漿(PPP),用血小板計數(shù)儀計數(shù)PRP血小板數(shù)，用PPP調(diào)整PRP的血小板數(shù)至6X1(f個/m^左右。在測試管中加入PRP200pl，調(diào)節(jié)記錄儀至零點，另用一PPP管放入測試孔，調(diào)節(jié)增益至記錄儀行程為60格，以此為100%。樣品管37。C保溫2分鐘后開始攪拌1分鐘，攪拌子轉(zhuǎn)速500rpm，再加入ADP5pl或AA4pl或膠原8pl，使ADP終濃度為5pM;AA濃度為4|iM;膠原濃度為8pM;，記錄加入ADP或AA或膠原后的記錄筆移動的行程，按下式計算聚集率力口ADP后的行程<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>計算出各試驗組的平均聚集率及標(biāo)準(zhǔn)差，用t-檢驗同西黃蓍膠組進(jìn)行比較。并按下式計算各試驗組的聚集抑制率<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>2.8實驗結(jié)果實驗結(jié)果表明，陽性藥阿司匹林(25mg/kg)對ADP、膠原、AA誘導(dǎo)的血小板聚集均有非常顯著的抑制作用(P〈O.OOU。FBD對ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集均有抑制作用，且抑制作用與劑量正相關(guān)。FBD對AA誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集均有抑制作用，且抑制作用與劑量呈正相關(guān)。實驗結(jié)果見表1517。表15.FBD對ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*P<0.05，林P〈0.01、***P<0.001與西黃蓍膠組比較表16.FBD對膠原誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*P<0.05，**P<0.01，***P〈0.001與西黃蓍膠組比較表17.FBD對M誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001與西黃蓍膠組比較結(jié)論通過以上試驗結(jié)果可以看到FBD對大鼠線栓法局灶性腦缺血及四動脈阻斷全腦缺血模型均有治療或預(yù)防作用，表現(xiàn)為改善大鼠行為學(xué)評分，減小大腦壞死面積；延長模型大鼠缺血后腦電圖消失時間、縮短再灌注后腦電圖恢復(fù)時間和翻正反射恢復(fù)時間，其效果優(yōu)于尼莫地平(25mg/kg)。在9.2g/kg的劑量時，對小鼠斷頭全腦缺血模型也能延長其張口呼吸時間，提高SOD的活力，但效果低于尼莫地平(5mg/kg)。此外，在FBD對麻醉犬外周及腦血流量影響的研究中，F(xiàn)BD組對麻醉犬具有一定的降低腦部血管阻力，增加腦部血流量的作用，并且對動物的外周血壓也有類似尼莫地平的作用降低外周血壓，特別是舒張壓；減慢心率。但作用強度和作用時間均小于尼莫地平(5mg/kg)。其對腦部血流的改善作用在給藥后30min最明顯。在作用機制方面的研究中發(fā)現(xiàn)FBD可以抑制大鼠動靜脈旁路血栓形成，降低血栓濕重；FBD與陽性藥丹參注射液(3000mg/kg)對大鼠腦微循環(huán)障礙的血液流態(tài)有不同程度的改善，表現(xiàn)為血細(xì)胞聚集程度有所減輕，如血液流態(tài)由淤滯狀變?yōu)榱?，或由粒狀變?yōu)閹罨蚓€狀，或由虛線狀變?yōu)榫€狀，使腦膜毛細(xì)血管網(wǎng)點計數(shù)明顯增加。FBD對AA和ADP誘導(dǎo)的血小板聚集亦有明顯的抑制作用，對膠原誘導(dǎo)的血小板聚集則無明顯的抑制作用。以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述實施例1取茯苓25g，白術(shù)12g，當(dāng)歸7g，混合后，用水煎煮，水提取液濃縮后，加入乙醇沉淀，得多糖(2.3g)，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，得正丁醇部位(0.71g)，合并水提取物有效部位(多糖與正丁醇提取物)，加入適量輔料后，壓成片劑。實施例2取茯茶50g，白術(shù)40g，當(dāng)歸20g，混合后，C02超臨界萃取提取揮發(fā)油(2.5ml)，控制提取萃取罐壓力為IO.OMP，溫度為35'C，提取時間為2小時。藥渣用水提取后，加乙醇至含醇量為90%，沉淀，得到總多糖(4.2g)，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，合并揮發(fā)油，總多糖及正丁醇提取物(7.5g)，加適量輔料，制粒，灌制膠囊。實施例3取茯苓40g，白術(shù)20g，當(dāng)歸10g，混合后，C02超臨界萃取，控制萃取罐壓力為12.0MP，溫度為35'C，提取時間為2小時，得到超臨界萃取物。藥渣用水提取后，力口乙醇至含醇量為85%，沉淀，得到總多糖，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，合并超臨界萃取物，總多糖及正丁醇提取物，加適量輔料，制粒，灌制膠囊。實施例4取茯苓40g，白術(shù)20g，當(dāng)歸12g，混合后，用乙醇用夾帶劑，進(jìn)行C02超臨界萃取提取揮發(fā)油(1.64ml)，藥渣用水提取后，加乙醇沉淀，得到總多糖(2.74g)，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取(4.9g)，合并揮發(fā)油，總多糖及正丁醇提取物，加適量淀粉，制粒，灌制膠囊16粒。服用劑量一日服用2次，每次2粒。實施例5取茯苓50g，白術(shù)25g,當(dāng)歸15g，混合后，用水煎煮，水提取液濃縮后，加入乙醇沉淀，得多糖(4.77g)，上清液回收乙醇后用正丁醇萃取，得正丁醇部位(1.46g)，合并多糖與正丁醇提取物，加入適量輔料后，制成片劑18片。服用劑量一日服用2次，每次2片。實施例6取茯苓50g，白術(shù)40g，當(dāng)歸20g，混合后，C02超臨界萃取提取揮發(fā)油(2.5ml)，控制提取萃取罐壓力為10.OMP，溫度為35'C，提取時間為2小時。藥渣用水權(quán)利要求1、一種中藥組合物在制備防治血栓的藥物中的應(yīng)用，所述的中藥組合物由茯苓、白術(shù)和當(dāng)歸三種原料藥的超臨界萃取物和/或水提取物，或者超臨界萃取物和/或水提取物有效部位組成。全文摘要本發(fā)明公開了一種中藥組合物在制備防治血栓的藥物中的應(yīng)用，該中藥組合物由茯苓、白術(shù)和當(dāng)歸三種原料藥的超臨界萃取物和/或水提取物，或者超臨界萃取物和/或水提取物有效部位組成。文檔編號A61P7/02GK101439072SQ200810188569公開日2009年5月27日申請日期2005年12月20日優(yōu)先權(quán)日2005年12月20日發(fā)明者嚴(yán)永清,周迎新,朱丹妮,林志宏,沈平孃,偉虞,阮克鋒申請人:上海中藥制藥技術(shù)有限公司;中國藥科大學(xué)