專利名稱：：一種海星皂苷類化合物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是從海洋生物中分離有生物活性的化合物，具體地說是從面包海星中提取分離到的一種海星皂苷類化合物在治療膠質(zhì)瘤方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：人膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)腫瘤中最常見的一種，致殘率和死亡率非常高。目前用以治療膠質(zhì)瘤的化療藥物主要有亞硝脲類烷化劑尼莫司汀(ACNU)、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)以及甲基節(jié)肼、甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺、替尼泊苷等，但這些藥物對(duì)膠質(zhì)瘤特別是惡性膠質(zhì)瘤的有效率較低，對(duì)生存時(shí)間延長不明顯，而且很易造成嚴(yán)重的肝臟損害及骨髓抑制，往往因?yàn)樗幬锏亩靖狈磻?yīng)較重而不得不放棄化療；此外，至少半數(shù)以上膠質(zhì)瘤對(duì)常用的化療藥物耐藥。因此，與對(duì)其他腫瘤的治療相比，目前臨床上更缺乏對(duì)膠質(zhì)瘤有效的治療藥物，新型安全高效的化療藥物的開發(fā)是治療該病的迫切需求。海星(starfish)屬棘皮動(dòng)物門海星綱,現(xiàn)存約1500種，為海生底棲動(dòng)物，分布廣泛。近二十年來，國外關(guān)于海星活性化學(xué)成分特別是海星甾體皂苷的研究非?；钴S，對(duì)海星皂苷(asterosaponins)的研究已導(dǎo)致90余種結(jié)構(gòu)新穎的化合物的發(fā)現(xiàn)。這些海星皂苷具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、1^+《+-六1酶抑制、抗?jié)?、溶血等多種多樣的藥理活性。海星阜苷的結(jié)構(gòu)特征為-具有A^W鄰，6a-二羥基甾體母核，并在3位硫酸化，6位糖基化》苷元側(cè)鏈至少有1個(gè)位置被氧化，寡糖基一般由5或6個(gè)糖基構(gòu)成，并具有相似的連接方式和連接位點(diǎn)(湯海峰，易楊華，張淑瑜，等.海星皂苷的研究進(jìn)展.中國海洋藥物，2004，23(6):4857和IorizziM>DeMarinoS，ZolloF.SteroidaloligoglycosidesfromtheasteroideaaCurrentOignicCh叫2001，5(9):951.)。我國南海生物資源極為豐富，是世界上海星集中分布的海域之一。我們采用多種體外篩選模型，經(jīng)活性追蹤分離，從采自三亞海域的面包海星(Ctf/dto恥v從伊/we從)中分離鑒定了16種具有生物活性的海星皂苷，包括ll種新化合物，這是國內(nèi)外首次對(duì)面包海星中的海星皂苷類化合物進(jìn)行分離和鑒定。深入的藥理研究表明，這些海星皂苷多數(shù)對(duì)稻瘟霉模型(一種篩選抗有絲分裂劑的簡易模型)顯示活性并具有顯著的腫瘤細(xì)胞毒性。其中一種新化合物HOMC對(duì)U87MG等多種膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有顯著細(xì)胞毒性并顯示了一定選擇性，IC50值與臨床常用于惡性腦腫瘤治療的鹽酸尼莫司汀接近，但不影響原代培養(yǎng)的人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生長。HOMC的化學(xué)結(jié)構(gòu)和對(duì)BC-562人白血病細(xì)胞、BEL-7402人肝癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性已由^們報(bào)道(TangHF(湯海峰)，YimLiL,SunP,ZhangSQ，ZhaoYRHireenewasterosapcminsfromthestarfishnovoi^^ieaeandtheirbioactivity.P/flwtoMerf，2005，71(5):458^463),但其抗膠質(zhì)瘤活性尚未見有過報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的^H供一種高效低毒的抗膠質(zhì)瘤單體化合物,具體地說是以面包海星為原lm取的一種海星皂苷類化合物及其在制備治療膠質(zhì)瘤的藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種從面包海星提取的海星皂苷類化合物，它的分子式為CsftH^O^SNa,式1所示化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式I上述結(jié)構(gòu)其化學(xué)名稱為(20^24/0-6d"-,D-吡喃巖藻糖基"O—2Va-L-吡喃阿拉伯糖基《1—4>1-1>吡喃奎諾糖基"(1—2)卡-1>吡喃木糖基<1—3)+0-吡喃奎諾糖基}-20-羥基-23-酮-24>甲基-5a-膽甾-9(11)-烯-3p-硫酸鈉(sodium(20S;24iHki力^p-D-Aicc^ianosyl~(I—2)"a-L"arabiiu^yranosyHI~*4)-p-D"quinov叩yranosyl-(1—2)-p~D-xylopyranosyl-(l—3)~p"I>quinovqpyianosyl}-20-hydroxy-23~oxo~24-inethyI-5a"Cholest-9(11)^-3p-y^suI&te),是從面包海星中提取分離的海星皂苷類化合物，以下簡稱其為HOMC,其特征在于所述的式I化合物HOMC可以用于制備治療膠質(zhì)瘤的藥物。所述的式I化合物H()MC對(duì)U87MG、U251MG、BT325和SHG44四種人源性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞以及C6大鼠源性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞有明顯的抑制作用，半數(shù)有效神制濃度(IC501L)在1.403.05[imol/L之間；并且，在高至50nmol/L濃度時(shí)也基本不影響原代培養(yǎng)的人神，質(zhì)細(xì)胞生長。式I化合物HOMC對(duì)MKN-28人胃癌和A-549人肺癌細(xì)胞的抑制作用非常弱，表明其對(duì)膠質(zhì)瘤具有選擇性作用。所述的從面包海星中提取分離式I化合物HOMC的方法，以新鮮采集的面包海星為原料，原料經(jīng)剪碎后，按重量體積比加入35倍原料重的95%乙醇，回流提取3次，每次24小時(shí)；合并提取液，回收溶劑，得乙醇提取物，提取物分散于按重量體積比3倍的水中，分別用和水^#積的石油醚萃取10次，萃取后的水相再分別用與水等體積的正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，濃縮至1/3休積，加等體積的水洗滌1次，以除去鹽、多糖等強(qiáng)極性成分，得到總苷提取物?？傑仗崛∥飸?yīng)用硅膠柱層析，以體積比為2:1:00:6:1的氯仿-水飽和的正丁醇-甲醇混合溶劑洗脫，得到總海星皂苷?？偤Ｐ窃碥諔?yīng)用硅膠柱層析和SephadexLH-20凝膠柱層析純化，分別用體積比為12:1的正丁醇-甲醇混合溶劑和休積比為2:1的甲醇-水混合溶劑洗脫，合并含式I化合物HOMC的流份，再經(jīng)高效液相色譜儀分離純化，體積比為47:53的甲醇-水混合溶劑為流動(dòng)相洗脫，得到式1化合物HOMC的純品。所述的從面包海星中提取分離式I化合物HOMC的方法，除應(yīng)用常規(guī)的溶劑提取、溶劑萃取和各種色譜分離技術(shù)外，在應(yīng)用掛膠柱層析方法從總苷提取物制備總海星皂苷時(shí)，對(duì)于包含有HOMC的總海星皂苷的確定是采用如下手段來檢査的以硅膠薄層層析檢獮，采用體積比為12:3:5的正丁醇-乙酸-水混合溶劑或體積比為80:18:2的氯仿-甲醇-水混合溶劑展開，收集^值在0.10.35處顯示紫紅色斑點(diǎn)的流份，即為總海星皂苷。所述的式I化合物HOMC在作為藥物使用時(shí)，可以是單獨(dú)使用，也可以是與其他成分混合使用。在臨床應(yīng)用時(shí)，以常規(guī)的制劑工藝，單獨(dú)使用或與其他藥物配合制備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物，如注射劑、或散劑、或丸劑、或膠囊劑、或片劑、或微囊劑、或軟膠囊劑、或膜劑、或育劑、或酊劑、或顆粒劑、或氣霧劑等。本發(fā)明的特點(diǎn)是目前臨床上缺乏治療膠質(zhì)瘤的有效藥物，雖然本發(fā)明人分離鑒定的一種海星皂苷類化合物HOMC同時(shí)也可以抑制K-562人白血病細(xì)胞和BEL-7402人肝癌細(xì)胞生長，但相比于治療其他腫瘤，開發(fā)其顯著的抗膠質(zhì)瘤作用并應(yīng)用于臨床治療膠質(zhì)瘤更具有重要意義》而且,該化合物對(duì)于MKN-28人胃癌、A-549人肺癌等其他腫瘤細(xì)胞的抑制作用非常弱，表明它對(duì)膠質(zhì)瘤的抑制作用具有一定選擇性。式I化合物HOMC的結(jié)構(gòu)為本發(fā)明人所發(fā)現(xiàn)和報(bào)道，但它的抗膠質(zhì)瘤作用未見任何文獻(xiàn)報(bào)道和專利申請(qǐng)，它對(duì)多種人和鼠惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的顯著抑制作用表明其可以進(jìn)一步作為新的,質(zhì)瘤藥物進(jìn)行研究開發(fā)。具體實(shí)施例方式以新鮮采集的面包海星為原料，原料經(jīng)剪碎后，按重量體積比加入35倍原料重的95%乙醇，回流提取，共提取3次，每次24小時(shí)。合并提取液，回收溶劑，得乙醇提取物，提取物分散于按重量體積比3倍的水中，分別用和水等體積的石油醚萃取10次，萃取后的水相再分別用與水等體積的正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，濃縮至1/3體積，加等體積的水洗滌1次，以除去鹽、多糖等強(qiáng)極性成分，將水洗后的正丁醇相蒸干得到總苷提取物?？傑仗崛∥飸?yīng)用硅膠柱層析,以體積比為2:l:00:6:l的氯仿-水飽和的正丁醇-甲醇混合溶劑洗脫，硅膠薄層層析檢測，采用體積比為12:3:5的正丁醇-乙酸-水混合溶劑或體積比為80:18:2的氯仿-甲醇-水混合溶劑展開，收集Rf值在0.10.35處顯示紫紅色斑點(diǎn)的流份，即為總海星皂苷。總海星皂苷應(yīng)用硅膠柱層析和SephadexLH-20凝膠柱層析純化，分別用體積比為12:1的正丁醇-甲醇混合溶劑和體積比為2:1的甲醇-水混合溶劑洗脫，合并含式I化合物HOMC的流份，再經(jīng)高效液相色譜儀分離純化，體積比為47:53的甲醇-水混合溶劑為流動(dòng)相洗脫，得到式I化合物HOMC的純品。下面結(jié)合具體實(shí)施例來說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。應(yīng)理解，這些實(shí)施例使本發(fā)明所說的式I化合物HOMC的用途得以證實(shí)，而不用于限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中未注明具體條件的試驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例1:化合物的提取和分離1制備實(shí)施例化合物的原料為采用潛水和拖網(wǎng)手段采集自海南三亞海域的面包海星，原料重68公斤，共85個(gè)面包海星，經(jīng)剪碎后，加入210升濃度為95%的乙醇進(jìn)行回流提取，^!取3次，每次2小時(shí)。合并提取液，減壓回收溶劑(減壓回收即本行業(yè)通常所采用的抽濾方法，下同)，得乙醇提取物3.1公斤。提取物分散于10升水中，用石油醚萃取10次，每次10升。萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，每次10升，合并正丁醇萃取液，濃縮至約3升，加3升的水洗滌1次，將水洗后的正丁醇相蒸干得到總苷提取物145克。將總苷提取物進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-水飽和的正丁醇-甲醇混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液的體積比分別為2:1力(取下層作為洗脫液)，0:1:0和0:6:1，按500mL為一個(gè)流份接收,并用硅膠薄層層析檢測(薄層展開溶劑采用體積比為12:3:5的正丁醇-乙酸-水混合溶劑，顯色劑為體積比為1:4的硫酸-甲醇溶液，噴顯色劑后于105TC加熱顯色)，收集Rf值在0.10.35處顯示紫紅色斑點(diǎn)的流份，即為總海星皂苷，共5.9克。總海星皂苷進(jìn)行賺柱層析，用體積比為12:1的正丁醇-甲醇混合溶劑洗脫，按100毫升為1個(gè)流份接收，薄層層析檢測，合并含如下式I化合物HOMC的第1925流份，減壓蒸干溶劑后再采用SephadexLH-20凝膠柱(Phamiacia公司)進(jìn)行柱層析，用體積比為2:1的甲醇-水混合溶劑洗脫，按10毫升為1個(gè)流份接收，薄層層析檢測，合并含如下式I化合物HOMC的第3540流份，減壓蒸千溶劑后得0.32克樣品。樣品經(jīng)高效液相色譜儀(安捷倫公司)分離純化(高效液相色譜條件為杜邦Zoitax300SB"Q8色譜柱250mmX9.4咖，47%甲醇為流動(dòng)相，流速1.5mLtain,室溫，示差折光檢測器檢測)，得到如下式I化合物HOMC的純品15.8毫克。上述結(jié)構(gòu)其化學(xué)名稱為(20&24/)^6c^O-^D-吡喃巖藻糖基^(1—2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基~(1—4)-OH^吡喃奎諾糖基^l—2)I-P-D-吡喃木糖基^0—3)-^>吡喃奎諾糖基}-20-羥基-23-酮-24^甲基-5a-膽甾-9(11>烯-3|5"硫酸鈉(sodium(206',24/>^力-{&1>fiicqpytanosyl-(l—2)-a-L*arabiiiopyranosyHl—4)-[J3-D-quinovopyranosyl"(l~*2)I-|i~D-xylopyranosyl-(l一3)-p-D-quinov<qjyranosyl}-20-hydroxy-23-oxo~24-niethyl-5a"cholest-9(ll>ea-3^yl，lfete)，是從面包海星中提取分離的海星皂苷類化合物，簡稱其為HOMC。實(shí)施樹2:化合物的提取和分離2采用潛水和拖網(wǎng)手段采集自海南三亞海域的面包海星作為原料，原料重100公斤，共129個(gè)面包海星，經(jīng)剪碎后，加入400升濃度為95%的乙醇進(jìn)行回流提取，共提取3次，每次4小時(shí)。合并提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物4.8公斤。提取物分散于15升水中，用石油醚萃取10次，每次15升。萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，每次.15升，合并正丁醇萃取液，濃縮至約5升，加5升的水洗滌I次，將水洗后的正丁醇相蒸干得到總苷提取物220克。將總苷提取物進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-水飽和的正丁醇-甲醇混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液的體積比分別為2丄0(取下層作為洗脫液)，0丄0和0:6:1，按750mL為一個(gè)流份接收，并用,薄層層析檢測(薄層展開溶劑采用體積比為80:像2的氯仿-甲醇-水混合溶劑，顯色劑為體積比為l:4的硫酸-甲醇溶液，噴顯色劑后于105"C加熱顯色)，收集Rf值在0.10.35處顯示紫紅色斑點(diǎn)的流份，即為總海星皂苷，共9.1克?？偤Ｐ窃碥者M(jìn)行SJK柱層析，用體積比為12:1的正丁醇-甲醇混合溶劑洗脫，按150毫升為1個(gè)流份接收，薄層層析檢測，合并含實(shí)施例I式I化合物HOMC的第2026流份，減壓蒸干溶劑后再采用SephadexLH-20凝膠柱(Phamiacia公司)進(jìn)行柱層析，用體積比為2:1的甲醇-水混合溶劑洗脫，按15毫升為1個(gè)流份接收，薄層層析檢測，合并含實(shí)施例1式I化合物HOMC的第3541流份，減壓蒸干溶劑后得0.50克樣品。樣品經(jīng)高艦相色譜儀(安捷倫公司)分離純化(高效液相色譜條件為杜邦Zori)ax300SB"ds色譜柱250mmX9.4mm，47%甲醇為流動(dòng)相，流速1.7mL/min,室溫，示差折光檢測器檢測)，得到實(shí)施例1式I化合物HOMC的純品24.1毫克。化合物的^鑒定實(shí)施例1式I化合物HOMC為白色結(jié)晶性粉末，分子式為CssHwO^SNa,熔點(diǎn)為225~227°C，W蓉-5°(c0.128，MeOH),Liebennann-Burchard和Molish反應(yīng)均為陽性。對(duì)化合物進(jìn)行酸水解和糖衍生物的分析，具休方法為取1.2mg樣品，溶于2mol/LCFaCOOHlmL,置2mL安瓿中,充氮?dú)?，封管，于烘箱?20'C加熱反應(yīng)2h，40t:減壓蒸千，反復(fù)加MeOH(1mLX3)后減壓抽千以除去CF3COQH，殘?jiān)訡H2CI2/H2O(5mL/5mL)分配，水層以5mLCHaCk洗滌1次，蒸干，0.8mL無水吡啶溶解至10mL反應(yīng)瓶中，加入2mgNH2C)HHC1,90T水浴振蕩反應(yīng)30min,冷卻至室溫后加入醋酐0.8mL，再于90t:振搖反應(yīng)lh，減壓蒸千，反復(fù)加CH2Cl2(1mLX3)后減壓蒸干，溶于CHC'I3(UmL，取lnL進(jìn)行GC/MS分析。單糖對(duì)照品L-阿拉伯糖、1>巖藻裙、D-奎諾糖、D^木糖各10mg,分別溶于lmL無水?dāng)『埃聪嗤苌椒ㄖ苽涮请嬉宜狨?，作為GC分析時(shí)的對(duì)照。GC/MS分析采用FinniganVoyagerGC/MS聯(lián)用儀，配DB-5石英毛細(xì)管色譜柱(30mX0.25mm，0.25^m)。柱溫150*C，保持2min,.升溫至300C(15"CAnin),保持10min。汽化溫度250C。進(jìn)樣量1pL。載氣(流量)N2(lmUmin),分流比30:1,延遲2min。MS檢測器EI電離源，電離電壓70eV,源溫200"C。MS標(biāo)準(zhǔn)庫NBS,NIST庫。GC/MS對(duì)比分析表明實(shí)施例1式I化合物HOMC含有4種糖基1>奎諾糖(&=6.259min),L-阿拉伯糖(ts^6.262min),1>木糖(1&=6.359mio),D~巖藻糖(^=6.351min),組成比約為2:1:1:1。通過髙分辨質(zhì)譜和核磁共振譜特別是二維核磁共振譜的綜合解析，確定了該化合物的結(jié)構(gòu)。其波譜數(shù)據(jù)如下ESI-MS(正離子模式)附/z:1289[M+K廣，1274[M+Na+H]+,12M+Na廣，1159[M+Na-114，lossofsidechain(C2o~C28)l+，1153[M+Na-NaHS04]+,723X146+2X132+Na廣，579[2X146+2X132+Na]+;MS/MS(m/z1273)m/z:1274[M+Na+Hf,12M+Na廣，1159[M+Na-114+，1153[M+Na-NaHSOJ+,1039[1153-114+，1013[1159-146+,891039-146廣，893-132+,725[3X146+2X132"HSTa+。ESI-MS(負(fù)離子模式)1227[M-Na-,1113[M-Na-lMf;MS/MS(/z1227)m/z:1227[M-NaJ;122M-Na-H',1113[M-Na-114r。HRESI-MS(正離子模式)"i/z:1274.5432[M"Wa+H]+(計(jì)算值CssHgoQ^SNas:1274.5342),1273.5276[M+Na廣(計(jì)算值CseHwO^SNas:1273.5264)。股(KBr)cm":3435(()印，1698(C=0),1645(C=C)，1240，1210(sulfete),1065(CO)。CD(c0.09，MeOH):[6產(chǎn)(nm)=0(350),-3630(286,valley),0(213)。其lH和BC核磁共振數(shù)據(jù)以及重要的HMBC和NOESY相關(guān)信號(hào)見表1。表1實(shí)施例1式I化合物HOMC的tH和l3C核磁共振數(shù)據(jù)a以及重要的HMBC和NOESY<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>a核磁數(shù)據(jù)經(jīng)由DQCOSY，TOCSY，HMQC和HMBC譜的分析得以確定。b括號(hào)內(nèi)為偶合常數(shù)(Hz)。c多重性由DEPT譜確定。d在HMBC譜中可以檢測到6-H和QuilC-l的相關(guān)信號(hào)》eAra:阿拉伯糖，Qui:奎諾糖(其中，Qui連接于苷元的6位，QuiII連接于木糖的2位)，Xyl:木糖，F(xiàn)uc:巖藻糖?；衔矬w外^質(zhì)癯作用的研究對(duì)實(shí)施例1式I化合物HOMC進(jìn)行了體外抗膠質(zhì)瘤,試驗(yàn)所采用的細(xì)胞株分別為U87MG、U25IMG、BT325和SHG44等4種人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞以及C6大鼠源性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞。為測試實(shí)施例1式I化合物HOMC對(duì)膠質(zhì)瘤的選擇性以及對(duì)正常神經(jīng)細(xì)胞的毒性，另取MKN-28人胃癌和A-549人肺癌細(xì)胞株以及原代培養(yǎng)的人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞同時(shí)測定實(shí)施例1式I化合物HOMC的細(xì)胞毒性。采用常規(guī)的MTT法測試。具體方法為根據(jù)細(xì)胞生長速率，將處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞以4000個(gè)細(xì)胞/L接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時(shí)后，棄去原培養(yǎng)液，加入用DMEM培養(yǎng)液配制好的含不同濃度本發(fā)明化合物的溶液200HL,每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)L,并設(shè)鹽酸尼莫司汀(ACNU)陽性對(duì)照、生理鹽水對(duì)照和無細(xì)胞調(diào)零孔。細(xì)胞在371C、5%CC)2-95%Qz條件下培養(yǎng)48小時(shí)，然后加入PBS溶解的濃度為10mgAnL的MTT(Sigma公司)20|iL，在同樣條件下孵育4小時(shí)。最后，每孔加入200ML的二甲基亞砜，混勻。將96孔板置酶標(biāo)儀上測定各孔在490nm處的吸光度(OD淮。按下式計(jì)算被測物對(duì)細(xì)胞生長的抑制率7tf=l.25m^-68m82.10m91012o=2J^dd(:16.8,6.4)p=2-50n1314I30m17l說m181.00s190.94s20211.56s222.77ABq(16_2>23242.47tlike(6.5)25l鄰m260.79d(6.5)270.89d(6-5)280.順6.5>612341.55d(6.4)18.4QuilC4，54.99d(7.1>104.5QuiIC-3QuiI3-H4.05m82.1QuillCMQuilll-HXyl034.18m75JXyl<M4.14m77.4Are1-H4.38m，3.67m642Quill*12346Arae1234Fuc'123465.26d(6.5>4.03m4.06m3.99m3.65ra104.976276.875.573.617.8XylC-2QuillC-3QuillC4QuillC-3QuillC4QuiHC4，54.96d(6-6>101.3Xyl(M4.40m81.7FucOl，AraC"34_25m73J2AraC-2430m67.9432m3-69m65.6AiaCM4.81《7.8)106.4AraC-24.36m73.3Fuc01，375.0FucC-23.95m72.53.63m71.8FucC-l,41.43d(6.0)17.1F恥C4，5Xyl2-HFuc1-HAra2-H41.6t35.4d145.6s116.6d42.5t41.6s53.8d233t.it54.1d30.0d18.4q213q12.0q2細(xì)胞抑制率=(1一治療組()DH/對(duì)照組OD值)X100%半數(shù)有效抑制濃度ICsoM用Logit法計(jì)算。試驗(yàn)結(jié)果見表2。表2實(shí)施例1式I化合物HOMC'對(duì)5種惡性膠質(zhì)癯細(xì)胞、2種其他腫瘤細(xì)胞以及原代培養(yǎng)的人神劉咬質(zhì)細(xì)胞的抑制作用(ICso值，Minol/L)_細(xì)瓶株U87MG肪1MGBT325SHG44C6MKN-28A-549神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞HOMC2A0土0.24Z45±0.403.05±0.幼1.40±0.073*.5±5.38^豕±7.0>50ACNU0.84±ao1.55±0.26淺±0_440.42±汰0未獮未測>50可見,實(shí)施例1式I化合物HOMC對(duì)4種人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞和1種大鼠源性惡性膠質(zhì)癯細(xì)胞均有顯著抑制作用，IC50值與臨床常用于惡性腦腫瘤治療的鹽酸尼莫司汀接近，但對(duì)其他2種腫瘤細(xì)胞的抑制作用非常弱，表明其對(duì)膠質(zhì)瘤具有選擇性作用。實(shí)施例l式I化合物HOMC不影響原代培養(yǎng)的^v神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生長(IC5oii〉50拜ol/L),具體試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，既使在實(shí)施例1式I化合物H()MC為50jimol/L濃度時(shí)，對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的抑制率也只有7.2%(i>XK05)，但陽性對(duì)照鹽酸尼莫司汀在50萍o(jì)l/L濃度時(shí)的抑制率可達(dá)26.8%(戶<0.05)，可見，實(shí)施例1式I化合物HOMC對(duì)正常神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞基本無毒性，可用于制備治療膠質(zhì)瘤的藥物。藥物的制備注射劑配方2毫克HOMC,50毫摩爾每升磷酸緩沖液，pH7.0，總體積1毫升。制法取實(shí)施例1式I化合物HOMC10毫克，加50毫摩爾每升的磷酸緩沖液(pH7.0)5毫升，在無菌條件下完全溶解，分別經(jīng)過G3和G6玻砂過濾器過濾，灌封于l毫升安瓿中，100攝氏度滅菌30分鐘，得5支?？诜苿┡浞?毫克HOMC，50毫克甘露醇，100毫克可溶性淀粉。制法取實(shí)施例1式I化合物HOMC5毫克，加50毫克甘露醇和100毫克可溶性淀粉，充分混勻后制粒，所制顆粒包裝即得顆粒劑；所制顆粒裝于空膠囊殼中，即得膠囊抓所制顆粒直接壓片，包薄膜衣，即得片劑。權(quán)利要求1.一種海星皂苷類化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下上述式I結(jié)構(gòu)的化學(xué)名稱為(20S，24R)-6α-O-{β-D-吡喃巖藻糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→4)-[β-D-吡喃奎諾糖基-(1→2)]-β-D-吡喃木糖基-(1→3)-β-D-吡喃奎諾糖基}-20-羥基-23-酮-24-甲基-5α-膽甾-9(11)-烯-3β-硫酸鈉(sodium(20S，24R)-6αO-{β-D-fucopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl-(1→4)-[β-D-quinovopyranosyl-(1→2)]-β-D-xylopyranosyl-(1→3)-β-D-quinovopyranosyl}-20-hydroxy-23-oxo-24-methyl-5α-cholest-9(11)-en-3β-yl-sulfate)，是從面包海星中提取分離的海星皂苷類化合物，以下簡稱其為HOMC，其特征在于它在制備抗膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用。2.—種海星皂苷類化合物H()MC的制備方法，其特征在于以新鮮采集的面包海星為原料，原料經(jīng)剪碎后，按重量體積比加入35倍原料重的95%乙醇，回流提取3次，每次24小時(shí)；合^取液，回收溶劑，得乙醇提取物，提取物分散于按重量體積比3倍的水中，分別用和水等體積的石油醚萃取10次，萃取后的水相再分別用與水##積的正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，濃縮至1/3休積，加等體積的水洗滌1次，以除去鹽、多糖等強(qiáng)極性成分，得到總苷提取物；總苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以體積比為2100:6:1的氯仿-水飽和的正丁醇-甲醇混合溶劑洗脫，得到總海星皂苷；總海星皂苷應(yīng)用硅膠柱層析和SephadexLH-20凝膠柱層析純化，分別用體積比為12:1的正丁醇-甲醇混合溶劑和體積比為2:的甲醇-水混合溶劑洗脫，合并含式I化合物HOMC'的流份，再經(jīng)高效液相色譜儀分離純化，體積比為47:53的甲醇-水混合溶劑為流動(dòng)相洗脫，得到式I化合物HOMC的純品o3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種海星皂苷類化合物HOMC的制備方法，其特征在于除應(yīng)用常規(guī)的溶劑提取、溶劑萃取和各種色譜分離技術(shù)外，在應(yīng)用硅膠柱層析方法從總苷提取物制備總海星皂苷時(shí),對(duì)包含有HOMC'的總海星皂苷的確定是采用如下手段來檢査的以硅膠薄層層析檢測，采用體積比為12:3.5的正丁醇-乙酸-水混合溶劑或體積比為80:18:2的氯仿-甲醇-水混合^!j展開，收集Rf值在0.10.35處顯示紫紅色斑點(diǎn)的流份，即為總海星皂苷。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種海星皂苷類化合物HOMC在制備抗膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的海星皂苷類化合物可以單獨(dú)使用或與其他藥物配合制備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物，如注射劑、或散劑、或丸劑、或膠囊劑、或片劑、或微囊劑、或軟膠囊劑、或膜劑、或膏劑、或ST劑、或顆粒劑、或氣霧劑。全文摘要本發(fā)明提供了一種從面包海星中提取的海星皂苷類化合物在治療膠質(zhì)瘤方面的應(yīng)用。式I結(jié)構(gòu)的化學(xué)名稱為(20S，24R)-6α-O-{β-D-吡喃巖藻糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→4)-[β-D-吡喃奎諾糖基-(1→2)]-β-D-吡喃木糖基-(1→3)-β-D-吡喃奎諾糖基}-20-羥基-23-酮-24-甲基-5α-膽甾-9(11)-烯-3β-硫酸鈉(sodium(20S，24R)-6α-O-{β-D-fucopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl-(1→4)-[β-D-quinovopyranosyl-(1→2)]-β-D-xylopyranosyl-(1→3)-β-D-quinovopyranosyl}-20-hydroxy-23-oxo-24-methyl-5α-cholest-9(11)-en-3β-yl-sulfate)，是從面包海星中提取分離的海星皂苷類化合物，以下簡稱其為HOMC，其特征在于它在制備抗膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用。體外抗腫瘤試驗(yàn)表明，該化合物對(duì)U87MG、U251MG、BT325和SHG44四種人源性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞以及C6大鼠源性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞有明顯的抑制作用，而不影響原代培養(yǎng)的人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生長。該化合物可望用于制備治療膠質(zhì)瘤的藥物。文檔編號(hào)A61K31/7028GK101348515SQ20081015084公開日2009年1月21日申請(qǐng)日期2008年9月8日優(yōu)先權(quán)日2008年9月8日發(fā)明者文愛東,易楊華,楊志福,湯海峰,光程,陳曉莉申請(qǐng)人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)