專利名稱：：宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：宮炎康顆粒處方收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第二十冊(cè)228頁(yè)，標(biāo)準(zhǔn)代號(hào)為WS3-B-3921-98，具有活血化瘀，解毒消腫，用于慢性盆腔炎的治療。在臨床上應(yīng)用多年，取得比較令人滿意的療效。本品處方由當(dāng)歸90g、赤芍90g、北敗醬240g、香附(醋制)90g、炮姜90g、澤蘭90g、川芎60g、紅花60g、柴胡90g、海藻90g、車前子(鹽炙)120g、延胡索60g共12味藥材，按以下工藝制備而成延胡索粉碎成細(xì)粉，過篩；當(dāng)歸、香附、川芎、柴胡提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與赤芍、炮姜、海藻、車前子加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，藥液備用，其余北敗醬等三味加水煮沸后，于8(TC溫浸二次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，濾過，合并以上各藥液，濃縮至相對(duì)密度1.35(6(TC)的清膏，取清膏1份、糊精1份、蔗糖粉2份與上述延胡索粉混勻，加乙醇適量，制成顆粒，干燥，噴入上述當(dāng)歸等揮發(fā)油，混勻，制成900g。處方中當(dāng)歸，為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(01iv。)Diels的干燥根；赤芍，為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.或川赤芍PaeoniaveitchiiLynch的干燥根；北敗醬，為菊科植物苣荬菜SonchusarvensisL.的干燥全草；香附，為莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根莖，醋制香附炮制方法為，取香附粒(片)，照醋炙法(中華人民共和國(guó)藥典2005年版附錄IID)炒干；炮姜，為干姜的炮制加工品，干姜，為姜科植物姜ZingberofficinaleRose.的干燥根莖，炮姜炮制方法為，取凈干姜，照燙法(中華人民共和國(guó)藥典2005年版附錄IID)用沙燙至鼓起，表面棕褐色；澤蘭，為唇形科植物毛葉地瓜兒苗Lyc叩uslucidusTurcz.var.hirtusRegel的干燥地上部分；川芎，為傘形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort.的干燥根莖；紅花，為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL.的千燥花；柴胡，為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狹葉柴胡B叩leurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根；車前子，為車前科植物車前PlantagoasiaticaL.或平車前Plantagod印ressaWilld.的干燥成熟種子。車前子(鹽炙)，取凈車前子，照鹽水炙法(中華人民共和國(guó)藥典2005年版附錄nD)炒至起爆裂聲時(shí)，噴灑鹽水，炒干；海藻，為馬尾藻科植物海蒿子Sargassumpallidum(Turn.)C.Ag.或羊棲菜Sargassumfusiforme(Harv.)Setch.的干燥藻體；延胡索，為罌粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥塊蓮。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)處方中藥味赤芍的特征成分——芍藥苷進(jìn)行了薄層色譜鑒別，但其鑒別圖譜背景較深，鑒別效果不理想，供試品溶液需要進(jìn)一步純化。至今為止，也已有多篇文獻(xiàn)公開了處方中藥味赤芍特征成分——芍藥苷的含量測(cè)定方法，但公開的供試品溶液純化仍不夠，雜質(zhì)多，測(cè)定時(shí)色譜柱易受污染，色譜峰易受雜峰干擾，分離度不夠好。文獻(xiàn)《宮炎康顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究黑龍江醫(yī)藥2005.3》和《宮炎康顆粒的薄層鑒別研究黑龍江中醫(yī)藥2006.5》分別公開了處方中藥味當(dāng)歸、延胡索的薄層色譜鑒別和處方中藥味當(dāng)歸、川芎的薄層鑒別和延胡索的薄層色譜鑒別，但發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸和川芎鑒別斑點(diǎn)不圓整，重現(xiàn)性不好，陰性背景較深。綜上所述，現(xiàn)有的宮炎康質(zhì)量控制方法僅對(duì)處方12味藥材中的4味建立了質(zhì)量檢驗(yàn)方法，不僅檢驗(yàn)項(xiàng)目不夠全面，且方法沒有達(dá)到理想效果，因此需要尋求更全面更好的質(zhì)量控制方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種檢驗(yàn)項(xiàng)目更全面，含量測(cè)定分離度更好，赤芍薄層鑒別更清晰，質(zhì)量控制指標(biāo)更科學(xué)、合理，操作更簡(jiǎn)化、可進(jìn)一步確保藥品療效的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，該方法包括以下步驟中的一種或多種-1、用薄層色譜法對(duì)藥物中的柴胡進(jìn)行定性鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇或乙醇2040ml，超聲處理或加熱回流或溫浸1060分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?030ml分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用乙醚或甲苯或三氯甲垸振搖提取14次，每次1530ml，棄去(乙醚或甲苯或三氯甲烷)提取液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取24次，每次1530ml，合并(正丁醇)提取液，用正丁醇飽和的水或水洗滌14次，每次1040ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糽3ml使溶解，加中性氧化鋁13g(10020Q目)，拌勻，蒸干，加于中性氧化鋁柱(26g,100200目，內(nèi)徑9mm，干法裝柱)上，用5080。/。的甲醇2050ml洗脫，收集洗脫液，蒸千，殘?jiān)蛹状蓟蛞掖?3ml使溶解，作為供試品溶液。取柴胡對(duì)照藥材lg，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各310ul,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(1218:36:0.30.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含2%4%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液或10%硫酸乙醇溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈G65nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2、用薄層色譜法對(duì)藥物中的車前子進(jìn)行定性鑒別取車前子對(duì)照藥材2g，照1項(xiàng)下供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及l(fā)項(xiàng)下的供試品溶液各310ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲垸或乙酸乙酯-甲醇或乙醇-甲酸或冰乙酸-水(820:24:1:0.50.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液或10%硫酸乙醇，在6085'C加熱或用熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。3、用薄層色譜法對(duì)藥物中的炮姜進(jìn)行定性鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇或乙醇2040ml，超聲處理或加熱回流或浸泡1060分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?530ml使溶解，用濃氨試液或l3%NaOH溶液或25%的Na2C03溶液調(diào)pH值至79，用乙醚或甲苯或三氯甲垸振搖提取13次，每次1530ml，合并(乙醚或甲苯或三氯甲垸)提取液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取炮姜對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液510ul，對(duì)照藥材溶液l3ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酉旨-丙酮(1015:23:0.30.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液或硫酸乙醇溶液(2—10),在100105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。4、用薄層色譜法對(duì)藥物中的赤芍特征成分——芍藥苷進(jìn)行定性鑒別取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取1項(xiàng)下供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各310ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲垸-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(1620:12.5:35:0.10.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液或10%硫酸乙醇溶液或含2%4%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸、^液，在100105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。5、用高效液相色譜法測(cè)定該藥物中赤芍特征成分——芍藥苷的含量照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸溶液(12.516:8487.5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于5000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每lml中含40ug的溶液，即得。供試品溶液的制備本品研細(xì)，取2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入水/30%甲醇/50%甲醇/甲醇501111，稱定重量，超聲處理1030min，放冷，稱定重量，用水/30%甲醇/50%甲醇/甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，上大孔樹脂/氧化鋁/聚酰胺柱,用水/10%甲醇/20%甲醇/30%甲醇80ml洗脫，收集流出液和洗脫液，蒸干，殘?jiān)?(^甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，力口50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液20pl、供試品溶液1020pl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每袋含赤芍以芍藥苷(C23H280)計(jì)，不得少于7.0mg。6、按以下方法檢查本品的微生物取本品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1:10的供試液。細(xì)菌數(shù)取l:10的供試液lml注入平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定。霉菌和酵母菌數(shù)取1:10的供試液lml注入平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定。大腸埃希菌取1:10的供試液10ml接種至100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，依法檢査。大腸菌群取10ral的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入I:IO、1:100、1:1000的供試液lml，依法檢查。本品細(xì)菌數(shù)每lg不得過10000個(gè)，霉菌和酵母菌數(shù)每lg不得過100個(gè)，大腸埃希菌每lg不得檢出，大腸菌群每lg應(yīng)小于100個(gè)。優(yōu)選的技術(shù)方案包括下列步驟中的一種或多種1、用薄層色譜法對(duì)藥物中的柴胡進(jìn)行定性鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0ml分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，棄去乙醚提取液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，加中性氧化鋁lg(100200目)，拌勻，蒸干，加于中性氧化鋁柱(3g，100200目，內(nèi)徑9mm，干法裝柱)上，用80%的甲醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。取柴胡對(duì)照藥材lg，照供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及供試品溶液各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲垸-甲醇-水(15:4.5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含4%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2、用薄層色譜法對(duì)藥物中的車前子進(jìn)行定性鑒別取車前子對(duì)照藥材2g,照l(shuí)項(xiàng)下供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及1項(xiàng)下的供試品溶液各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-甲酸-水(16:3:1:0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在8085'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。3、用薄層色譜法對(duì)藥物中的炮姜進(jìn)行定性鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用濃氨試液調(diào)pH值至8，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取炮姜對(duì)照藥材lg，同法制j^寸照藥林溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10ul、對(duì)照藥林溶液2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙歐15:3:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(2—10)，在105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。4、用薄層色譜法對(duì)藥物中的赤芍特征成分——芍藥苷進(jìn)行定性鑒別取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照品溶液和l項(xiàng)下的供試品溶液各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20:2.5:5:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。5、用高效液相色譜法測(cè)定該藥物中赤芍特征成分——芍藥苷的含量照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液(12.5:87.5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230mn。理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于5000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加50。/。甲醇制成每lml中含40ug的溶液，即得。供試品溶液的制備本品研細(xì)，取2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入5(W甲醇50ml，稱定重量，超聲處理10分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加于聚酰胺柱(3g，3060目，內(nèi)徑lcm，干法裝柱)上，用水80ml洗脫，收集流出液與洗脫液，蒸千，殘?jiān)?0%甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液20!il、供試品溶液102(V1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。i本品每袋含赤芍以芍藥苷(C23H28Ou)計(jì)，不得少于7.0mg。6、按以下方法檢查本品的微生物取本品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1:10的供試液。細(xì)菌數(shù)取l:10的供試液lml注入平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定。霉菌和酵母菌數(shù)取1:10的供試液lml注入平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定。大腸埃希菌取1:10的供試液10ml接種至100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，依法檢査。大腸菌群取10ml的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入I:IO、1:100、1'.1000的供試液lml，依法檢査。本品細(xì)菌數(shù)每lg不得過10000個(gè)，霉菌和酵母菌數(shù)每lg不得過100個(gè)，大腸埃希菌每lg不得檢出，大腸菌群每lg應(yīng)小于IOO個(gè)。本發(fā)明主要特點(diǎn)在于車前子和赤芍薄層鑒別供試品溶液制備方法與柴胡一致，延胡索鑒別供試品溶液制備方法與炮姜一致。本發(fā)明宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，是一種檢測(cè)項(xiàng)目更全面，含量測(cè)定方法分離度更好，赤芍薄層鑒別更清晰，質(zhì)量控制指標(biāo)更科學(xué)、合理，操作更簡(jiǎn)化的能進(jìn)一步確保藥品療效的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的質(zhì)量控制方法是經(jīng)過大量的篩選得到的最佳方案，以下試驗(yàn)研究為本發(fā)明的篩選過程。一、柴胡的薄層色譜鑒別供試品溶液的制備方法比較方法一取本品9g，研細(xì)，加乙醇30ml，加熱回流l小時(shí)，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解，加以水飽和的正丁醇提取二次，每次25ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水提取二次，每次10ml，棄去水液，正丁醇層蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。方法二取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0ml分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，棄去乙醚提取液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，加中性氧化鋁lg(100200目)，拌勻，蒸干，加于中性氧化鋁柱(3g，100200目，內(nèi)徑9mm，干法裝柱)上，用80y。的甲醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。方法三取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml微熱分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用乙醚提取3次，每次20ml，棄去乙醚提取液，分取水溶液層，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次20ml，棄去水洗滌液，正丁醇液蒸千，殘?jiān)蛹状糽ral使溶解，加lg中性氧化鋁，拌勻，蒸干，加在中性氧化鋁柱(100200目，3g，內(nèi)徑9mm，干法裝柱)上，用甲醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。方法四接方法三，再用75。/。甲醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。方法五取本品9g，研細(xì)，加甲醇20ml，溫浸60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml微熱分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用三氯甲垸提取4次，每次15ml，棄去三氯甲烷提取液，分取水溶液層，用水飽和的正丁醇提取4次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌4次，每次10ml，棄去水洗漆液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加3g中性氧化鋁，拌勻，蒸干，加在中性氧化鋁柱U00200目，6g，內(nèi)徑9mm，干法裝柱)上，用50。/。甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸千，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。方法六將溫浸60分鐘提取換成超聲處理10分鐘，將三氯甲垸換成甲苯，將洗脫劑50%甲醇用量換成20ml，其它同方法五。結(jié)果方法一(原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)赤芍的鑒別方法)雜質(zhì)較多，方法三無(wú)特征斑點(diǎn)，方法四、五、六及方法二均有特征斑點(diǎn)，但方法二背景最淺，特征斑點(diǎn)最清晰，因此選擇其為最佳的方法。展開系統(tǒng)曾比較1)三氯甲烷-甲醇-水(8:2:0.2);2)三氯甲垸-甲醇-水(15:4:0.5);3)乙酸乙酯-甲醇-水(8:2:1);4)三氯甲烷-甲醇-水(9:3:0.4);5)三氯甲垸-甲醇-水(4:1:0.1);6)三氯甲烷-甲醇-水(15:4.5:0.5)。結(jié)果系統(tǒng)l)、2)Rf值偏低，系統(tǒng)3)Rf值偏高，系統(tǒng)4)、5)斑點(diǎn)不夠圓整，系統(tǒng)6)Rf值適中，斑點(diǎn)圓整，因此選為最佳方案。顯色方法對(duì)比了1)噴以10%磷鉬酸乙醇液，105T加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；2)噴以5%香草醛硫酸溶液，105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；3)噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；4)噴以含4%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在100105r加熱至斑點(diǎn)顯色清晰檢視方法，結(jié)果方法l)和2)斑點(diǎn)不夠清晰，方法3)加熱顯色時(shí)間長(zhǎng)，方法4)為最佳顯色方法。二、車前子的薄層色譜鑒別是在研究柴胡鑒別時(shí)發(fā)現(xiàn)其供試品可同時(shí)鑒別車前子，因此供試品的篩選同柴胡。另外對(duì)車前子的展開條件進(jìn)行了研究①硅膠G薄層板，乙酸乙酯-乙醇-甲酸-水(8:2:1:0.5);②1。/oNaOH制備的硅膠G薄層板，乙酸乙酯-乙醇-甲酸-水(20:4:1:0.8);③硅膠G薄層板，三氯甲烷:甲醇:冰乙酸t(yī)K(15:3:1:0.6);④硅膠G薄層板，氯仿:甲醇:水(15:5:0.4);⑤硅膠G薄層板，乙酸乙酯-乙醇-甲酸-水(16:3:1:0.8)，其中①、③、④斑點(diǎn)不夠圓整，②拖尾較為嚴(yán)重，方法(D最好，因此選為最佳方法。顯色方法對(duì)比了1)噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，60'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；2)噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，8085'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；3)噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，9(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；4)噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，用熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；5)噴以10%硫酸乙醇，6(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；6)噴以10%硫酸乙醇，90'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；7)噴以10%硫酸乙醇，8085。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；結(jié)果方法l)顯色時(shí)間太長(zhǎng)，方法3)、6)易被烤焦，方法4)、5)、7)斑點(diǎn)沒有方法2)明亮，因此選2)為最佳顯色條件。三、炮姜的薄層色譜鑒別供試品溶液的制備方法比較方法一取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，浸泡60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，用P/。NaOH溶液調(diào)pH值至7,用三氯甲烷30ml振搖提取1次，三氯甲烷提取液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。方法二取本品9g，研細(xì)，加乙醇20ml，加熱回流60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用3。/。NaOH溶液調(diào)pH值至9，用甲苯振搖提取3次，每次15ml，合并二氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。方法三取本品9g，研細(xì)，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用濃氨試液溶液調(diào)pH值至8，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。結(jié)果方法一和二背景較深，方法三效果最好，因此選為最佳方案。對(duì)比了展開劑(1)甲苯一乙酸乙酯一丙酮(15:3:0.5)，(2)甲苯-乙酸乙酯(8:3)，(3)甲苯一乙酸乙酯一丙酮(10:2:0.3)，(4)甲苯—乙酸乙酯一丙酮(15:3:0.8)，結(jié)果均可檢出炮姜(2)Rf值偏高，以(1)為最優(yōu)；對(duì)比噴以10%硫酸乙醇溶液顯色劑，顯色慢，改用濃度大的硫酸乙醇溶液(2—10)為顯色劑，顯色較快，且斑點(diǎn)較清晰。四、赤芍特征成分——芍藥苷的薄層色譜鑒別是在研究柴胡鑒別時(shí)發(fā)現(xiàn)其供試品可同時(shí)鑒別赤芍特征成分——芍藥苷，因此供試品的篩選同柴胡。試用了不同的展開系統(tǒng)①氯仿:甲醇:醋酸乙酯:濃氨(50:20:10:2.5);②氯仿甲醇醋酸乙酯(10:5:6);③醋酸乙酯乙醇水(8:2:1);三氯甲垸-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20:2.5:5:0.1)。結(jié)果①、②、③分離效果均不好，斑點(diǎn)不夠圓整，比移值不太適合，分離效果好，斑點(diǎn)圓整，比移值適中。檢視方法對(duì)比了1)噴以5%香草醛硫酸溶液，100105t:加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；2)噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；3)噴以含4%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰檢視方法；4)噴以10%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果l)4)均可檢出芍藥苷，以l)斑點(diǎn)最清晰，效果最好。五、赤芍特征成分——芍藥苷的含量測(cè)定方法研究1、儀器與試藥儀器日本島津LC-lOATvp高效液相色譜儀；檢測(cè)器日本島津SPD-10Avp紫外檢測(cè)器;十八垸基硅垸鍵合硅膠色譜柱(島津VP-ODSCw柱，4.6X150mra)試藥芍藥苷化學(xué)對(duì)照品；乙腈(色譜純)，磷酸(分析純)，水(自制雙蒸水)樣品宮炎康顆粒(批號(hào)031101)及缺赤芍的陰性對(duì)照樣品2、供試品溶液制備方法選擇方法一本品研細(xì)，取2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理10min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0ral使溶解，上聚酰胺柱，用水80ml洗脫，收集流出液和洗脫液，蒸干，殘?jiān)?(^甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，力U50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。方法二取本品2g，加甲醇40ml，超聲處理30min，靜置至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。方法三取本品2g，加甲醇50ral，超聲處理30min，濾過，取續(xù)濾液25ml，蒸干，水溶解，氯仿振搖提取，棄去，水層用水飽和正丁醇振搖提取5次，合并正丁醇提取液，蒸干，甲醇溶解。進(jìn)樣后發(fā)現(xiàn)，不上柱的供試品提取方法二和三色譜峰雜質(zhì)多，色譜峰易被雜峰千擾，分離度不夠好，且易污染色譜柱。故選用方法一做供試品溶液。2.1供品提取溶劑選擇對(duì)比了水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇和乙醇五種溶解作為供試品提取溶劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用甲醇和乙醇提取的供試品色譜峰形較差，70%甲醇色譜峰形不好，水和30%甲醇提取的供試品溶液含雜質(zhì)較多，故采用50%甲醇作為提取溶劑。2.2色譜柱選擇試用大孔樹脂、氧化鋁、聚酰胺三種色譜柱對(duì)50%甲醇提取液進(jìn)行純化，經(jīng)聚酰胺柱純化制備的供試液色譜圖中雜質(zhì)峰較少，芍藥苷峰形較好，測(cè)定值之間波動(dòng)小，穩(wěn)定性較好，故采用聚酰胺柱純化。同時(shí)對(duì)聚酰胺柱的裝柱量進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)(3g，3060目，內(nèi)徑lcm，干法裝柱)裝柱方法即可達(dá)到理想效果。2、3洗脫溶劑選擇采用水、10%甲醇、20%甲醇、30%甲醇和40%甲醇洗脫，結(jié)果以水洗脫雜質(zhì)最少，選擇水為最佳的洗脫溶劑。2.4提取時(shí)間的選擇通過采用50%甲醇作為溶劑分別超聲處理5min、10min、20rain、30min、40min，濾過后進(jìn)樣，經(jīng)比較，超聲處理10min已提取完全，故10min為最優(yōu)超聲時(shí)間。3、測(cè)定波長(zhǎng)的選擇精密稱取芍藥苷對(duì)照品12.7mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取lml至10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用紫外分光光度計(jì)于200400nm范圍內(nèi)掃描，記錄吸收光譜圖。結(jié)果芍藥苷在230.20nm處有最大吸收峰，故選擇230咖為檢測(cè)波長(zhǎng)。4、色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱為填充柱，乙腈-0.1%磷酸溶液(12.5:87.5)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。理論板數(shù)按赤芍計(jì)算應(yīng)不低于5000。流動(dòng)相比較了(1)乙腈-0.W磷酸溶液(12.5:87.5);(2)乙腈一O.1%磷酸溶液(15:85)(3)乙腈一O.1%磷酸溶液(14:86)(4)0.05mol/L磷酸二氫鉀一乙腈(75:15);(5)甲醇—水(17:38);(6)乙腈一水(16:84);(7)0.05mol/L磷酸二氫鉀一乙腈(85:15)。結(jié)果流動(dòng)相(1)-(3)均可分離芍藥苷，以(1)為最優(yōu)，(4)(5)(6)峰形不佳。5、陰性樣品溶液的測(cè)定不含赤芍的陰性樣品研細(xì)，取2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理10min，放冷，稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，上聚酰胺柱(3g，3060目，內(nèi)徑lcm，干法裝柱)，用水80ml洗脫，收集流出液和洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，力口50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。取陰性樣品溶液20]il，注入液相色譜儀，結(jié)果在芍藥苷的位置處無(wú)相應(yīng)色譜峰，表明對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾。6、線性關(guān)系考察精密稱取芍藥苷對(duì)照品11.lmg，置50ml量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.5ml、l.Oml、2.Oml、3.Oml、4.Oml、5.Oml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻，即得。按上述色譜條件分別進(jìn)樣20pl，測(cè)定，以芍藥苷峰面積積分y對(duì)芍藥苷進(jìn)樣量x(卩g)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程y=-10255+66315"，^0.9999，表明芍藥苷進(jìn)樣量在0.2222.220pg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，并且直線通過原點(diǎn)，可用單點(diǎn)外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定和計(jì)算見表l。表1線性關(guān)系考察數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>7、精密度試驗(yàn)取芍藥苷對(duì)照品溶液(44.4yg/ml)，按上述色譜條件，依法操作測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算芍藥苷峰面積A的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表2，表明精密度較好。表2精密度試驗(yàn)Ns12345平均值RSD(%)A5684415686885678715682085696835685780.128、穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液(批號(hào)031101)，分別在放置O、2、4、6、8h及24、48、72h后，依法操作，測(cè)定芍藥苷峰面積A，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表3、表4，表明穩(wěn)定性較好。表3穩(wěn)定性試驗(yàn)(日內(nèi)差)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>200810073729.6說明書第13/24頁(yè)表4穩(wěn)定性試驗(yàn)(日間差),(h)5^^^平離RSD(%)A6586996563486579886567846574550.169、重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品(批號(hào)031101)，按供試品溶液的制備方法制備5份供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算芍藥苷的含量及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表5，表明方法重復(fù)性較好。表5方法重復(fù)性試驗(yàn)_Ne12345平均值RSD(%)含量(mg/g)1.2401.2181.1991.2331.2401.2261.4410、加樣回收率試驗(yàn)精密吸取己測(cè)知含量的樣品(批號(hào)031101含量1.226mg/g)lg，再分別精密加入1.0ml(1.17mg/ml,精密稱取芍藥苷對(duì)照品11.7mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度)的芍藥苷對(duì)照品溶液，揮去溶劑，按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表6，表明方法回收率較好。表6加樣回收率試驗(yàn)~"稱樣量已知量~~加入量~~測(cè)得量~~回收量回收率平均回收率RSD(g)(mg)(mg)(rag)(mg)(%)(%)(%)^0.99701.222TT7I"5^E~~TT^99.3520.98541.2081.172.3641.15698.8530.99061.2141.172.3861.172100.1899.170.6240.99271.2171.172.3721.15598.7051.00261.2291.172.3851.15698.7811、樣品測(cè)定按選定的含測(cè)條件測(cè)定031102、031103兩批樣品，以峰面積按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品中芍藥苷的含量，結(jié)果見表7。表7樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)欄比號(hào)含量(mg/袋)含量(mg/袋)RSD%03110214.9214.7514.840.8103110313.7213.8513.790.6519六、微生物檢查方法1儀器與樣品l.l實(shí)驗(yàn)菌種大腸埃希菌[CMCC(B)44102]、金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]，均由廣西食品藥品檢驗(yàn)所提供。1.2樣品宮炎康顆粒，批號(hào)060601、060701、060702，廣西博科藥業(yè)有限公司提供。1.3培養(yǎng)基及稀釋劑營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖增菌液、營(yíng)養(yǎng)肉湯、改良馬丁培養(yǎng)基、曙紅亞甲藍(lán)瓊脂、MUG培養(yǎng)基、膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液、pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液。1.4儀器PYX-DHS-60X75-B-II隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱、HH.Bll.600-S-II電熱恒溫培養(yǎng)箱、SPX-300B型生化培養(yǎng)箱，均購(gòu)于上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；SW-CJ-2FD型凈化工作臺(tái)，上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司、上海圣欣科學(xué)儀器有限公司制造；BSC-1300-n-A2型生物安全柜，購(gòu)于蘇州市華宇凈化設(shè)備有限公司。2細(xì)菌、霉菌及酵母菌試驗(yàn)方法的建立及驗(yàn)證2.1菌液制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液的制備接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯中，3035'C培養(yǎng)18~24小時(shí)，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)為50100cfu的菌懸液，備用。白色念珠菌菌液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，23~28'C培養(yǎng)2448小時(shí)，用0.9W無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)為50100cfLi的菌懸液，備用。黑曲霉菌液的制備接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5~7天，加入3~5ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)為50100cfu的菌懸液，備用。2.2供試液的制備方法為確定細(xì)菌數(shù)、霉菌及酵母菌數(shù)的測(cè)定方法，對(duì)以下供試液的制備方法分別進(jìn)行預(yù)試驗(yàn):取樣品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液稀釋至100ml，制備成溶解均勻的1:10的供試液。常規(guī)法取1:10的供試液lml注皿。2.3回收率試驗(yàn)試驗(yàn)組同2.2，另分別取各試驗(yàn)菌50100cfu，分別注入同一平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度，細(xì)菌培養(yǎng)2428小時(shí)，白色念珠菌和黑曲霉培養(yǎng)4872小時(shí)。菌液組取試驗(yàn)菌50100cfu注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度，細(xì)菌培養(yǎng)2428小時(shí)，白色念珠菌和黑曲霉培養(yǎng)4872小時(shí)，測(cè)定所加入的試驗(yàn)菌數(shù)，平行制備2個(gè)平皿。供試品對(duì)照組同2.2，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度，細(xì)菌培養(yǎng)2428小時(shí)，白色念珠菌和黑曲霉培養(yǎng)4872小時(shí)，測(cè)定供試品本底菌數(shù)。試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>菌液組的平均菌落數(shù)2.4方法的確定2.4.1常規(guī)法預(yù)試驗(yàn)用大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見表8。表8常規(guī)法驗(yàn)證預(yù)試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>結(jié)果，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率均大于70%，表明宮炎康顆粒對(duì)細(xì)菌、真菌沒有抑制作用，采用常規(guī)法進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)測(cè)定檢驗(yàn)應(yīng)可行。2.5細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證取3個(gè)批號(hào)宮炎康顆粒樣品，細(xì)菌、霉菌及酵母菌均按常規(guī)法進(jìn)行加菌回收率試驗(yàn)，結(jié)果見表9。表9三批宮炎康顆?；厥章试囼?yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>三個(gè)批號(hào)樣品的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，宮炎康顆粒常規(guī)法進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌微生物限度檢驗(yàn)，五種規(guī)定試驗(yàn)菌的回收率均大于70%，符合《中國(guó)藥典》的規(guī)定，方法可行。確定宮炎康顆粒細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法均為常規(guī)法。3.控制菌檢驗(yàn)方法的建立及驗(yàn)證菌液制備同2.1。3.1大腸埃希菌3.1.1常規(guī)法試驗(yàn)組取l:10的供試液10ml接種至100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基(BL)，同時(shí)加入大腸埃希菌10100cfo，35'C培養(yǎng)24~48小時(shí)。取培養(yǎng)物0.2ml接種至含5mlMUG培養(yǎng)基的試管中，35'C培養(yǎng)24小時(shí)左右，366nm紫外光下觀察熒光，然后進(jìn)行靛基質(zhì)試驗(yàn)，觀察結(jié)果；另取培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)(EMB)平板，35'C培養(yǎng)1824小時(shí)，觀察其菌落形態(tài)。陰性菌對(duì)照組取金黃色葡萄球菌作為陰性對(duì)照試驗(yàn)菌，方法同試驗(yàn)組。3.2大腸菌群3.2.1常規(guī)法試驗(yàn)組取1:10的供試液lml接種至含10ml膽鹽乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基管1支，同時(shí)加入大腸埃希菌10100cfu，35'C培養(yǎng)1824小時(shí)，觀察是否有產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象；取培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)(EMB)平板，35'C培養(yǎng)18~24小時(shí)，觀察其菌落形態(tài)。陰性菌對(duì)照組取金黃色葡萄球菌作為對(duì)照試驗(yàn)菌，方法同試驗(yàn)組。3.3試驗(yàn)結(jié)果3.3.1大腸埃希菌常規(guī)法試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)膽鹽乳糖培養(yǎng)基(BL)培養(yǎng)后，試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組相比較有明顯的變化，試驗(yàn)組有明顯產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，結(jié)果見表10。表10大腸埃希菌檢查常規(guī)法試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表明，采用常規(guī)法進(jìn)行大腸埃希菌檢驗(yàn)，方法成立。3.3.2大腸菌群常規(guī)法試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)膽鹽乳糖(BL)發(fā)酵管培養(yǎng)基培養(yǎng)后，試驗(yàn)組有明顯產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，陰性對(duì)照組沒有明顯變化，試驗(yàn)結(jié)果見表ll。表ll大腸菌群檢查常規(guī)法試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表明，采用常規(guī)法進(jìn)行大腸菌群檢驗(yàn)，方法成立。根據(jù)上述驗(yàn)證結(jié)果，確定大腸埃希菌、大腸菌群檢査方法為常規(guī)法。4.結(jié)果根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果及2005年版《中國(guó)藥典》一部附錄VfflC微生物限度檢查規(guī)定，擬定宮炎康顆粒微生物限度檢查法標(biāo)準(zhǔn)正文如下微生物限度照微生物限度檢査法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIC)。取本品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液稀釋至100ml，混勻，作為1:10的供試液。細(xì)菌數(shù)取l:10的供試液lml注入l個(gè)平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定。霉菌及酵母菌數(shù)取l:10的供試液lml注入l個(gè)平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定。大腸埃希菌取1:10的供試液10ml接種至100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，依法檢查。大腸菌群取10ml膽鹽乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基管3支，分別加入I:IO、1:100、1:1000的供試液lml，依法檢查。細(xì)菌數(shù)每lg不得過10000個(gè)，霉菌及酵母菌數(shù)每lg不得過100個(gè)，大腸埃希菌每lg不得檢出，大腸菌群每lg應(yīng)小于100個(gè)。5三批宮炎康顆粒的微生物限度檢查按上述建立的宮炎康顆粒微生物限度檢查法，對(duì)三批樣品進(jìn)行了檢驗(yàn)，結(jié)果詳見表12。表12三批宮炎康顆粒微生物限度檢查結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>上述步驟并不需要按照先后順序進(jìn)行，而且同時(shí)還可以進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)和延胡索的薄層色譜鑒別，其中延胡索鑒別參考現(xiàn)有文獻(xiàn)5和6進(jìn)行研究后確定了其的鑒別方法，本發(fā)明的主要特點(diǎn)是赤芍、車前子和柴胡薄層鑒別采用同一供試品溶液，延胡索和炮姜鑒別采用同一供試品溶液，極大地簡(jiǎn)化了操作。常規(guī)檢查如性狀，該成品性狀為棕黃色的顆粒；味甜、微苦。此外，該成品還應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IC顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。實(shí)施例1:鑒別(1)——柴胡的薄層色譜鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0ml分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，棄去乙醚提取液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ni1，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，加中性氧化鋁lg(100200目)，拌勻，蒸干，加于中性氧化鋁柱(3g，100200目，內(nèi)徑9mm，干法裝柱)上，用80%的甲醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。取柴胡對(duì)照藥材lg，照供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(15:4.5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含戰(zhàn)對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。鑒別(2)——車前子的薄層色譜鑒別取車前子對(duì)照藥材2g，照鑒別(1)項(xiàng)下供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及鑒別(1)項(xiàng)下的供試品溶液各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-甲酸-水(16:3:1:0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在8085'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。鑒別(3)——炮姜的薄層色譜鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用濃氨試液調(diào)pH值至8，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取炮姜對(duì)照藥材lg，同法帶MX寸照藥林溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10ul、對(duì)照藥林溶液2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮(15:3:0.5)為展開齊i」，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(2—10)，在105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。鑒別(4)——赤芍特征成分芍藥苷的薄層色譜鑒別另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照品溶液及鑒別(1)項(xiàng)下各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20:2.5:5:0.l)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。鑒別(5)——延胡索特征成分——延胡索乙素的薄層色譜鑒別取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及鑒別(3)項(xiàng)下的供試品溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉制備的以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-三氯甲垸-甲醇(7:3:0.5)為展開劑，置以展開劑預(yù)飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。檢查微生物限度照微生物限度檢查法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄XmC)檢驗(yàn)。取本品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1:10的供試液。細(xì)菌數(shù)取l:10的供試液lml注入平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定。霉菌和酵母菌數(shù)取1:10的供試液lml注入平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定大腸埃希菌取1:10的供試液10ml接種至100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，依法檢查。大腸菌群取10ml的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入1:10、1:100、1:1000的供試液lml，依法檢査。本品細(xì)菌數(shù)每lg不得過IOOOO個(gè)，霉菌和酵母菌數(shù)每lg不得過100個(gè)，大腸埃希菌每lg不得檢出，大腸菌群每lg應(yīng)小于100個(gè)。其他應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IC)。含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液(12.5:87.5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于5000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每lml中含40ug的溶液，即得。供試品溶液的制備本品研細(xì)，取2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理10分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加于聚酰胺柱(3g，3060目，內(nèi)徑lcm，干法裝柱)上，用水80ml洗脫，收集流出液與洗脫液，蒸千，殘?jiān)?0%甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液20nl、供試品溶液102(^1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。實(shí)施例2:鑒別(1)——柴胡的薄層色譜鑒別取本品9g，研細(xì)，加乙醇30ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0ml分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用甲苯搖提取2次，每次20ml，棄去甲苯提取液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加中性氧化鋁2g(100200目)，拌勻，蒸千，加于中性氧化鋁柱(6g，100200目，內(nèi)徑9mm，干法裝柱)上，用50%的甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸千，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取柴胡對(duì)照藥材lg，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各3ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(12:3:0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈G65nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。鑒別(2)——車前子的薄層色譜鑒別取車前子對(duì)照藥材2g，照鑒別(l)項(xiàng)下供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及鑒別(1)項(xiàng)下的供試品溶液各3ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰乙酸-7K(20:2:1:0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，在用熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。鑒別(3)——炮姜的薄層色譜鑒別取本品9g，研細(xì)，加乙醇40ml，加熱回流40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，用1。/。NaOH溶液調(diào)pH值至9，用甲苯振搖提取3次，每次15ml，合并甲苯提取液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取炮姜對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5ul，對(duì)照藥材溶液3ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮(10:2:0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100105"C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。鑒別(4)——赤芍特征成分芍藥苷的薄層色譜鑒別取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取鑒別(1)項(xiàng)下供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲斷16:1.5:3:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。鑒別(5)——延胡索特征成分——延胡索乙素的薄層色譜鑒別取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及鑒別(3)項(xiàng)下的供試品溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一用1。/。氫氧化鈉制備的以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己垸-三氯甲垸-甲醇(7:3:0.5)為展開劑，置以展開劑預(yù)飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈G65nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。微生物限度檢査同實(shí)施例l。其他應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IC)。含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸溶液(16:84)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230咖。理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于5000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每lml中含40yg的溶液，即得。供試品溶液的制備本品研細(xì)，取2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入水50ral，稱定重量，超聲處理30min，放冷，稱定重量，用水補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)铀谷芙?，上大孔樹脂?長(zhǎng)度1020cm),用10%甲醇80ml洗脫，收集流出液與洗脫液，蒸千，殘?jiān)?0%甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液20口1、供試品溶液1020口1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每袋含赤芍以芍藥苷(C23H2SOu)計(jì)，不得少于7.0mg。實(shí)施例3:鑒別(1)——柴胡的薄層色譜鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理IO分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0ml分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用三氯甲烷振搖提取1次，每次30ml，棄去三氯甲垸提取液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用水40ml洗滌l次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加中性氧化鋁lg(100200目)，拌勻，蒸干，加于中性氧化鋁柱(2g，100200目，內(nèi)徑9mm，干法裝柱)上，用70%的甲醇20ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取柴胡對(duì)照藥材lg，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲垸-甲醇-水(18:6:0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。鑒別(2)——車前子的薄層色譜鑒別取車前子對(duì)照藥材2g，照鑒別(l)項(xiàng)下供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及鑒別(1)項(xiàng)下的供試品溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-甲酸-水(8:2:1:0.5)為展開劑，展開，取出，晾千，噴以含2°/。對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在6(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。鑒別(3)——炮姜的薄層色譜鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，浸泡60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用25。/。的Na2C03溶液調(diào)pH值至7，用三氯甲垸振搖提取3次，每次15ml，合并三氯甲烷提取液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取炮姜對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10ul，對(duì)照藥材溶液3ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮(12:2:0.6)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(2—10)，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。鑒別(4)——赤芍特征成分芍藥苷的薄層色譜鑒別取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取鑒別(1)項(xiàng)下供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠0薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(16:2:3:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含4%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。鑒別(5)——延胡索特征成分——延胡索乙素的薄層色譜鑒別取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液及鑒別(3)項(xiàng)下的供試品溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉制備的以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠0薄層板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(7:3:0.5)為展開劑，置以展開劑預(yù)飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈G65nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。微生物限度檢查同實(shí)施例l。其他應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IC)。含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸溶液(14:86)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230咖。理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于5000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每lml中含40iig的溶液，即得。供試品溶液的制備本品研細(xì)，取2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理10min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，上氧化鋁(內(nèi)徑lcm,36g)，用3(m甲醇80ml洗脫，收集流出液和洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液20ial、供試品溶液1020pl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每袋含赤芍以芍藥苷(C23H2S0)計(jì)，不得少于7.0mg。權(quán)利要求1、一種宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是該方法包括以下柴胡的薄層色譜鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇或乙醇20～40ml，超聲處理或加熱回流或溫浸10～60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0～30ml分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用乙醚或甲苯或三氯甲烷振搖提取1～4次，每次15～30ml，棄去乙醚或甲苯或三氯甲烷提取液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取2～4次，每次15～30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水或水洗滌1～4次，每次10～40ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?～3ml使溶解，加1～3g、100～200目的中性氧化鋁拌勻，蒸干，加于2～6g、100～200目、內(nèi)徑9mm、干法裝柱的中性氧化鋁柱上，用50～80％的甲醇20～50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状蓟蛞掖?～3ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對(duì)照藥材1g，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各3～10ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水12～18∶3～6∶0.3～0.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含2％～4％對(duì)二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液或10％硫酸乙醇溶液，在100～105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及波長(zhǎng)為365m的紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2、如權(quán)利要求l所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是柴胡的薄層鑒別方法為取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0ml分次溶解，置分液漏斗中，放冷，用乙醚振搖提取3次，每次20ml，棄去乙醚提取液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，加100200目的中性氧化鋁lg，拌勻，蒸干，加于3g、100200目、內(nèi)徑9咖、干法裝柱的中性氧化鋁柱上，用80%的甲醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對(duì)照藥材lg，照供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及供試品溶液各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲垸-甲醇-水15:4.5:0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含4%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及波長(zhǎng)為365nm的紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。3、如權(quán)利要求1所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是車前子的薄層色譜鑒別方法是取車前子對(duì)照藥材2g，照權(quán)利要求1項(xiàng)下供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及權(quán)利要求1項(xiàng)下的供試品溶液各310ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷或乙酸乙酯-甲醇或乙醇-甲酸或冰乙酸-水820:24:l:0.50.8為展開齊l」，展開，取出，晾干，噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液或10%硫酸乙醇，在6085。C加熱或用熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，置波長(zhǎng)為365nm的紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。4、如權(quán)利要求3所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是車前子的薄層鑒別方法為取車前子對(duì)照藥材2g，照權(quán)利要求2項(xiàng)下供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2005年一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液及權(quán)利要求2項(xiàng)下的供試品溶液各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-甲酸-水16:3:1:0.8為展開劑，展丌，取出，晾干，噴以含2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在8085'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置波長(zhǎng)為365nm的紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。5、如權(quán)利要求1所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是該方法還包括以下炮姜的薄層色譜鑒別取本品9g，研細(xì)，加甲醇或乙醇2040ml，超聲處理或加熱回流或浸泡1060分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?530ml使溶解，用濃氨試液或l3%NaOH溶液或25%的Na2CO:,溶液調(diào)pH值至79，用乙醚或甲苯或三氯甲垸振搖提取13次，每次1530ml，合并乙醚或甲苯或三氯甲垸提取液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液；另取炮姜對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液510ul，對(duì)照藥材溶液l3ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮1015:23:0.30.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2—10的硫酸乙醇溶液或10%硫酸乙醇溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。6、如權(quán)利要求5所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是炮姜的薄層鑒別法方法為取本品9g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用濃氨試液調(diào)pH值至8，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液；另取炮姜對(duì)照藥材lg，同法制m照藥梓溶液;照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10ul、對(duì)照藥矛矛溶液2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮15:3:0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2—10的硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與X寸照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。7、如權(quán)利要求1所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是該方法還包括以下微生物的檢查方法取本品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1:10的供試液；細(xì)菌數(shù)取l:10的供試液lml注入平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定；霉菌和酵母菌數(shù)取1:10的供試液lml注入平皿中，平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定；大腸埃希菌取1:10的供試液10ml接種至100ral膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，依法檢査；大腸菌群取10ml的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入1:10、1:100、1:1000的供試液lml，依法檢查；本品細(xì)菌數(shù)每lg不得過10000個(gè)，霉菌和酵母菌數(shù)每lg不得過100個(gè)，大腸埃希菌每lg不得檢出，大腸菌群每lg應(yīng)小于100個(gè)。8、如權(quán)利要求1所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是還包括以下赤芍特征成分芍藥苷的含量測(cè)定方法照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID的高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；乙腈-O.1%磷酸溶液12.516:8487.5為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nra;理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于5000;對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每lml中含40iig的溶液，即得；供試品溶液的制備本品研細(xì)，取2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入水/30y。甲醇/50。/。甲醇/甲醇50ml，稱定重量，超聲處理1030min，放冷，稱定重量，用水/30%甲醇/50%甲醇/甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，上大孔樹脂/氧化鋁/聚酰胺柱，用水/10%甲醇/20%甲醇/30%甲醇80ml洗脫，收集流出液和洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液20pl、供試品溶液1020pl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本品每袋含赤芍以芍藥苷C23H280,,計(jì)，不得少于7.Omg。9、如權(quán)利要求8所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是芍藥苷的含量測(cè)定方法為照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID的高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-O.1%磷酸溶液12.5:87.5為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于5000;對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每lml中含40ug的溶液，即得；供試品溶液的制備本品研細(xì)，取2g,精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理10分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加于3g、3060目、內(nèi)徑lcm、干法裝柱的聚酰胺柱上，用水80ml洗脫，收集流出液與洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶?jī)?nèi)，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45um的微孔濾膜濾過，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液2(Hil、供試品溶液1020vd，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本品每袋含赤芍以芍藥苷(:2晶80計(jì)，不得少于7.Omg。10、如權(quán)利要求1所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是該方法還包括以下赤芍特征成分芍藥苷的薄層色譜鑒別方法取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取權(quán)利要求1項(xiàng)下供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各310ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸1620:12.5:35:0.10.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液或10。/。硫酸乙醇溶液或含2%4%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在100105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。11、如權(quán)利要求10所述的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是芍藥苷的薄層鑒別方法是取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照品溶液和權(quán)利要求2項(xiàng)下的供試品溶液各6ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸20:2.5:5:0.l為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。全文摘要本發(fā)明公開了一種宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法。增訂了柴胡、車前子和炮姜的薄層色譜鑒別，對(duì)赤芍特征成分芍藥苷含量測(cè)定和薄層鑒別的供試品提取方法進(jìn)行了純化，同時(shí)增訂了微生物的檢查方法。本發(fā)明質(zhì)量控制方法的車前子和赤芍薄層鑒別供試品溶液制備方法與柴胡一致，延胡索鑒別供試品溶液制備方法與炮姜一致，是一種檢測(cè)項(xiàng)目更全面、含量測(cè)定方法分離度更好、赤芍薄層鑒別更清晰、質(zhì)量控制指標(biāo)更科學(xué)、合理、操作更簡(jiǎn)化、能進(jìn)一步確保藥品療效的宮炎康顆粒的質(zhì)量控制方法。文檔編號(hào)A61K36/88GK101337060SQ200810073729公開日2009年1月7日申請(qǐng)日期2008年8月8日優(yōu)先權(quán)日2008年8月8日發(fā)明者偉吳,唐弟光,廖厚知,梁山丹,嬋王,莫少紅,蒙華英,陳曉軍申請(qǐng)人:廣西博科藥業(yè)有限公司