專利名稱：一種治療魚鱗病的中藥組合物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是指中藥制劑中成份含量測(cè)定和鑒 別方法。
背景技術(shù)：
魚鱗病(ichthyosis)是一組遺傳性皮膚病，主要表現(xiàn)為肌膚甲錯(cuò)， 從細(xì)磷屑至鱷魚皮樣改變不等，這種病目前在國(guó)內(nèi)外尚無(wú)較好的治療方 法。西醫(yī)主要根據(jù)魚鱗病的不同臨床類型采取相應(yīng)的治療措施，治療目 的是緩解癥狀，增加角質(zhì)層含水量和促進(jìn)正常角化。用于全身治療的藥 物主要為維生素A及13-順維甲酸等；局部治療常用0.1%維甲酸霜、 10%尿素軟膏或尿素霜等藥物，但療效均不能令人滿意。中醫(yī)稱魚鱗病 為"蛇皮病""魚鱗風(fēng)"等，認(rèn)為系先天不足、后天失養(yǎng)、血虛風(fēng)燥、 營(yíng)衛(wèi)失和等所致，治療以養(yǎng)血潤(rùn)燥、活血和營(yíng)為主，常內(nèi)服、外用結(jié)合 治療，多用湯劑和酊劑，服用不方便，并且療效不確切。
在公開號(hào)為CN1762452A的中國(guó)專利申請(qǐng)文件中公開了一種治療 魚鱗病的藥物及其制備方法，該藥物由中藥材白鮮皮、威靈仙、生地黃、 蒼術(shù)、防風(fēng)、蟬蛻、紅花、火麻仁、桂枝、當(dāng)歸、川芎、甘草、苦參、 麻黃、地膚子十五味藥組成。該專利沒有公開其質(zhì)量控制方法，本發(fā)明 是在該發(fā)明藥物制劑的基礎(chǔ)上，提供了上述發(fā)明藥物的質(zhì)量控制方法, 通過(guò)此方法可以控制該發(fā)明藥物及含相同組分藥物的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種治療魚鱗病的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，其所 述藥物是由白鮮皮、威靈仙、生地黃、蒼術(shù)、防風(fēng)、蟬蛻、紅花、火 麻仁、桂枝、當(dāng)歸、川芎、甘草、苦參、麻黃、地膚子十五味藥組成，
特征在于用高效液相色譜法測(cè)定所述藥物的一種或幾種成分的含量； 用薄層色譜法鑒別其中的一種或幾種成分； 含量測(cè)定
a)用高效液相色譜法測(cè)定該中藥組合物中苦參的含量，操作步 驟如下
色譜條件以氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為 60-90:20-5:20-5的乙腈_無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為
220 nm，理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;
對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加體積比為 60-90:40-10的乙腈-無(wú)水乙醇溶解，制成每1 ml含50 u g苦參堿的 溶液，即得；
供試品溶液的制備取本品粉末0.5-1.5 g，精密稱定，加濃氨 試液1-2 ml，精密加入三氯甲烷20-30 ml密塞，稱定重量，超聲處 理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲垸補(bǔ)足減失的重量，搖 勻，濾過(guò)。精密量取濾液10 ml，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇使 溶解，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液 相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每lg含苦參以苦參堿計(jì)，不得少于0. 8 mg;
b)用高效液相色譜法測(cè)定該中藥組合物中當(dāng)歸和川芎的含量， 操作步驟如下
色譜條件以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為
20-40:80-60的甲醇-O. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm。理
論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于8000;
對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量 瓶中，加甲醇制成每l ml含5"g的溶液，即得；
供試品溶液的制備取本品粉末1-3 g,精密稱定，置具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇15-25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理20-40分 鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù) 濾液，即得；
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液 相色譜儀，測(cè)定，即得；
本品每lg含當(dāng)歸、川芎以阿魏酸計(jì)，不得少于30"g。 鑒別方法
其中對(duì)甘草的鑒別是采用甘草次酸對(duì)照品作為陽(yáng)性對(duì)照 和對(duì)苦參的鑒別是采用槐定堿對(duì)照品作為陽(yáng)性對(duì)照； 和對(duì)麻黃的鑒別是采用鹽酸麻黃堿對(duì)照品作為陽(yáng)性對(duì)照； 和對(duì)川芎的鑒別是采用川芎對(duì)照藥材作為陽(yáng)性對(duì)照； a)用薄層色譜法鑒別其中的甘草成分
取本品4-10 g，研細(xì)，加乙醇40 ml與鹽酸2 ml，置水浴上加 熱回流20-50分鐘，放冷，濾過(guò)，取濾液濃縮至約10ml，加水10ml， 攪勻，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用沸程為60 9(TC的石油醚提取兩次，每 次20ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇0.5ml 使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每 lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述 供試品溶液5-10 ul，對(duì)照品溶液5 tU，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254 薄層板上，以體積比為10: 20: 7: 0. 5的60 9(TC石油醚-苯-乙酸 乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置254 nm紫外光燈下檢 視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑 點(diǎn)。
b) 用薄層色譜法鑒別其中的苦參成分
取本品4-10 g，研細(xì)，加三氯甲烷25 ml與濃氨試液1 ml，超聲 處理15-30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄閘ml使溶解，作 為供試品溶液。另取槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成每l ml含0.2 mg的 溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4-8 u 1分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層版上，以體積比為5: 0. 6: 0. 3的三氯 甲垸-甲醇-濃氨試液l(TC以下放置后的下層溶液為展開劑，展開，取 出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相 應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
c) 用薄層色譜法鑒別其中的麻黃成分
取本品4-8 g，研細(xì)，置50 ml錐形瓶中，加濃氨試液l ml、乙 醚30ml，密塞，放置兩個(gè)小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，加酸性乙醇(取乙 醇20 ml，加鹽酸l ml，混勻)1 ml，蒸干，殘?jiān)蛹状糽 ml使溶解， 作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg
的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各
4-8 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為40: 7: 1的三
氯甲垸-甲醇-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試
液，在105'C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相 應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
d)用薄層色譜法鑒別其中的川芎成分
取本品2-5g，研細(xì)，加lX碳酸氫鈉溶液50ml，超聲處理10-20 分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2 3，用乙醚振搖提取2 次，每次20 ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為 供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄 層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5-10 W,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上，以體積比為4: 1: 0. 1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開， 取出，晾干，置365 mn紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥 材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
藥品應(yīng)具有安全性、有效性、穩(wěn)定性及可控性，完善的質(zhì)量控制 標(biāo)準(zhǔn)能夠保證藥品質(zhì)量的可靠性和均一性。在公開號(hào)為CN1762452A 的中國(guó)專利申請(qǐng)文件中公開的藥物對(duì)魚鱗病的治療效果已經(jīng)得到臨床 的驗(yàn)證，但是否能夠保證該發(fā)明藥物的質(zhì)量以及藥物中有效成分的含 量，是決定該發(fā)明藥物療效的基礎(chǔ)。
在國(guó)家衛(wèi)生部頒發(fā)的藥品標(biāo)準(zhǔn)中，與該發(fā)明含相同藥味組方的質(zhì)量 控制方法中，除有一項(xiàng)顯微鑒別及兩個(gè)薄層鑒別項(xiàng)外，沒有其它含量測(cè) 定方法，難以很好地從多方面控制該發(fā)明藥物的質(zhì)量。本發(fā)明內(nèi)容彌補(bǔ)
了現(xiàn)有技術(shù)的不足，提高了該發(fā)明藥物的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，具體內(nèi)容如下 ①增加組方中麻黃的薄層色譜定性鑒別方法，并經(jīng)方法學(xué)試驗(yàn)確認(rèn)方法 專屬、可行、陰性無(wú)干擾；②增加組方中川芎的薄層色譜定性鑒別方法， 并經(jīng)方法學(xué)試驗(yàn)確認(rèn)方法專屬、可行、陰性無(wú)干擾；③增加組方中苦參 的定量測(cè)別方法，苦參堿是苦參中的一種生物堿成分，也是苦參的主要 活性成分之一，本發(fā)明利用高效液相色譜法測(cè)定該藥物中苦參堿的含 量，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，具有專屬性；④增加當(dāng)歸、川芎兩味藥材的 定量測(cè)定方法，阿魏酸在當(dāng)歸中含量豐富，是當(dāng)歸的主要活性成分，同 時(shí)也是川芎的主要功效成分之一，本發(fā)明利用高效液相色譜法測(cè)定該藥 物中當(dāng)歸和川芎的共有成分阿魏酸的總含量，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重 現(xiàn)性好。
具體實(shí)施例方式
對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，根據(jù)本發(fā)明所公開的技術(shù)內(nèi)容，本領(lǐng)域 技術(shù)人員將很清楚本發(fā)明的其它實(shí)施方案，本發(fā)明實(shí)施例僅作為示例。 在不違反本發(fā)明主旨及范圍的情況下，可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改變和改 進(jìn)，但只要使用本發(fā)明所述的質(zhì)量控制方法，均在本發(fā)明保護(hù)范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1
處方苦參44 g，甘草44 g，地黃88 g，防風(fēng)44 g，蒼術(shù)66 g， 威靈仙66 g，地膚子66 g，火麻仁44 g，麻黃44 g，紅花44 g，白 鮮皮66 g，蟬蛻44 g，當(dāng)歸66 g，川芎44 g，桂枝44 g。
制法以上十五味，取桂枝、當(dāng)歸、川芎全量及白鮮皮半量、共粉
成細(xì)粉；除紅花外，余之半量的白鮮皮及地黃等十一味，加水煎煮2
次，第二次煎煮時(shí)下紅花，每次3小時(shí)，合并煎液過(guò)濾，濾液濃縮成相 對(duì)密度為1. 00 1. 30的清膏、檢測(cè)溫度為50 80。C;將上述細(xì)粉與清 膏混合均勻，干燥后粉碎成細(xì)粉即得待檢藥物。
鑒別和含量測(cè)定方法如下
鑒別方法包括下列步驟
(1) 甘草的鑒別取本品4g，研細(xì)，加乙醇40ml與鹽酸2ml， 置水浴上加熱回流20分鐘，放冷，濾過(guò)，取濾液濃縮至約10ml，加 水10 ml，攪勻，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用石油醚(60 90°C)提取兩 次，每次20 ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇 0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇 制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥 典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10 u 1，對(duì) 照品溶液5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF^薄層板上，以體積比為10-20: 7: 0.5的石油醚(60 90°C)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑， 展開，取出，晾干，置紫外光燈(254mn)下檢視。供試品色譜中， 在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(2) 苦參的鑒別取本品4 g，研細(xì)，加三氯甲烷25ml與濃氨 試液lml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃综鵯ml 使溶解，作為供試品溶液。另取槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成每lml含 0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年 版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各8u 1分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層版上，以體積比為5: 0.6: 0.3的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液10
x:以下放置后的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍 鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的斑點(diǎn)。
(3) 麻黃的鑒別取本品4 g，研細(xì)，置50 ml錐形瓶中，加濃 氨試液l ml、乙醚30 ml，密塞，放置兩個(gè)小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)， 加酸性乙醇(取乙醇20 ml，加鹽酸l ml，混勻)1 ml，蒸干，殘?jiān)?甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇 制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥 典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各8ixl，分別點(diǎn) 于同一硅膠G薄層板上，以體積比為40: 7: l的三氯甲垸-甲醇-濃氨 試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105-C加熱 至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的斑點(diǎn)。
(4) 川芎的鑒別取本品2g，研細(xì)，加1X碳酸氫鈉溶液50ml， 超聲處理20分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2 3，用乙 醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使 溶解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材 溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上 述兩種溶液各10W，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為4: 1: 0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的熒光斑點(diǎn)。含量測(cè)定方法包括下列步驟
(1) 苦參的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部
附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體 積比為60:20:20的乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220 nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加體積比為 60:40的乙腈-無(wú)水乙醇溶解，制成每1 ml含50p g苦參堿的溶液， 即得。
供試品溶液的制備:取本品粉末0. 5g，精密稱定，加濃氨試液lml， 精密加入三氯甲垸20ml密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷， 再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取濾 液10ml，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇使溶解，并轉(zhuǎn)移至5ml量 瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液 相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每lg含苦參以苦參堿(C15H24N20)計(jì)為1.0 mg。
(2) 當(dāng)歸、川芎的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年
版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑； 以體積比為20:80的甲醇-0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm。 理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。
對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量 瓶中，加甲醇制成每l ml含5ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶
中，精密加入甲醇15ml，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10"1，注入液
相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每lg含當(dāng)歸、川芎以阿魏酸(C10H1004)計(jì)，為45ug。 實(shí)施例2取實(shí)施例1中的藥物組合物
鑒別方法包括下列步驟
(1) 甘草的鑒別取本品6g，研細(xì)，加乙醇40ml與鹽酸2ml， 置水浴上加熱回流40分鐘，放冷，濾過(guò)，取濾液濃縮至10ml，加水 10 ml，攪勻，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用石油醚(60 90°C)提取兩次， 每次20 ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇0. 5 ml 使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每 1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005 年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液8ul，對(duì)照品溶液5 ta，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為10: 20: 7: 0.5 的石油醚(60 90°C)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出， 晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(2) 苦參的鑒別取本品6 g，研細(xì)，加三氯甲烷25 ml與濃氨 試液lml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄閘ml 使溶解，作為供試品溶液。另取槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成每lml含
0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年 版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各8ul分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層版上，以體積比為5: 0.6: 0.3的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液10 'C以下放置后的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍 鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的斑點(diǎn)。
(3) 麻黃的鑒別取本品6 g，研細(xì)，置50 ml錐形瓶中，加濃 氨試液l ml、乙醚30 ml，密塞，放置兩個(gè)小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)， 加酸性乙醇(取乙醇20 ml，加鹽酸l ml，混勻)1 ml，蒸干，殘?jiān)?甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇 制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥 典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn) 于同一硅膠G薄層板上，以體積比為40: 7: l的三氯甲垸-甲醇-濃氨 試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105。C加熱 至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的斑點(diǎn)。
(4) 川芎的鑒別取本品3g，研細(xì)，加1X碳酸氫鈉溶液50ml， 超聲處理10分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2 3，用乙醚 振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶 解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶 液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述 兩種溶液各10ri，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為4: 1:
0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定方法包括下列步驟
(l)苦參的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部
附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以氨基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以體 積比為80:10:10的乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220 nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加體積比為 80:20的乙腈-無(wú)水乙醇溶解，制成每l ml含50ug苦參堿的溶液， 即得。
供試品溶液的制備取本品粉末1.0 g，精密稱定，加濃氨試液 1.5 ml，精密加入三氯甲垸25 ml密塞，稱定重量，超聲處理30分 鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。 精密量取濾液10 ml，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇使溶解，并轉(zhuǎn) 移至5ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液 相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每lg含苦參以苦參堿(C15H24N20)計(jì)為0.9 mg。 (2)當(dāng)歸、川芎的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005
年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；
以體積比為30:70的甲醇-O. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm。 理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。
對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量 瓶中，加甲醇制成每l ml含5ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品粉末2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10yl，注入液 相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每lg含當(dāng)歸、川芎以阿魏酸(d晶A)計(jì)為43ug。
實(shí)施例3取實(shí)施例1中的藥物組合物
鑒別方法包括下列步驟 (l)甘草的鑒別取本品10g，研細(xì)，加乙醇40ml與鹽酸2ml， 置水浴上加熱回流50分鐘，放冷，濾過(guò)，取濾液濃縮至10ml，加水 10ml，攪勻，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用石油醚(60 90°C)提取兩次， 每次20ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇0.5ml 使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每 lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005 年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5ul，對(duì)照品溶液5ul， 分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為10: 20: 7: 0.5的石 油醚(60 90°C)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾 干，置紫外光燈(254nrn)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(2) 苦參的鑒別取本品10g，研細(xì)，加三氯甲垸25ml與濃氨 試液lml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄閘ml 使溶解，作為供試品溶液。另取槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成每lml含 0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版 一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4ix 1分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層版上，以體積比為5: 0.6: 0.3的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液l(TC 以下放置后的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀 試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的 斑點(diǎn)。
(3) 麻黃的鑒別取本品8 g，研細(xì)，置50 ml錐形瓶中，加濃 氨試液l ml、乙醚30 ml，密塞，放置兩個(gè)小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)， 加酸性乙醇(取乙醇20 ml，加鹽酸l ml，混勻)1 ml，蒸干，殘?jiān)?甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇 制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典 2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各，分別點(diǎn)于同一 硅膠G薄層板上，以體積比為40: 7: 1的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液為 展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105。C加熱至斑點(diǎn) 顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏 色的斑點(diǎn)。
(4) 川芎的鑒別取本品5g，研細(xì)，加1X碳酸氫鈉溶液50ml， 超聲處理20分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2 3，用乙 醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状糽ml使
溶解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材 溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上 述兩種溶液各5W，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為4: 1: 0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈
(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定方法包括下列步驟
(l)苦參的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部
附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體 積比為90:5: 5的乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220 nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加體積比為 90:10的乙腈-無(wú)水乙醇溶解，制成每1 ml含50u g苦參堿的溶液， 即得。
供試品溶液的制備取本品粉末1.5 g，精密稱定，加濃氨試液 2ml，精密加入三氯甲烷30 ml密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘， 放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密 量取濾液10ml，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇使溶解，并轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液 相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每lg含苦參以苦參堿(C15H24N20)計(jì)為1. 1 mg。
(2)當(dāng)歸、川芎的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005
年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑； 以體積比為40: 60的甲醇-O. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm。 理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。
對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量 瓶中，加甲醇制成每l ml含5ng的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品粉末3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液
相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每lg含當(dāng)歸、川芎以阿魏酸(C10H1004)計(jì)，為42ug。
權(quán)利要求
1.一種治療魚鱗病的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，其所述藥物是由白鮮皮、威靈仙、生地黃、蒼術(shù)、防風(fēng)、蟬蛻、紅花、火麻仁、桂枝、當(dāng)歸、川芎、甘草、苦參、麻黃、地膚子十五味藥組成，特征在于用高效液相色譜法測(cè)定所述藥物的一種或幾種成分的含量；用薄層色譜法鑒別其中的一種或幾種成分；含量測(cè)定a)用高效液相色譜法測(cè)定該中藥組合物中苦參的含量，操作步驟如下色譜條件以氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為60-90:20-5:20-5的乙腈-無(wú)水乙醇-3％磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加體積比為60-90:40-10的乙腈-無(wú)水乙醇溶解，制成每1ml含50μg苦參堿的溶液，即得；供試品溶液的制備取該中藥組合物粉末0.5-1.5g，精密稱定，加濃氨試液1-2ml，精密加入三氯甲烷20-30ml密塞，稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取濾液10ml，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇使溶解，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；該中藥組合物每1g含苦參以苦參堿計(jì)，不得少于0.8mg；b)用高效液相色譜法測(cè)定該中藥組合物中當(dāng)歸和川芎的含量，操作步驟如下色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為20-40:80-60的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm。理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于8000；對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物粉末1-3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15-25ml，密塞，稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；該中藥組合物每1g含當(dāng)歸、川芎以阿魏酸計(jì)，不得少于30μg；鑒別方法其中對(duì)甘草的鑒別是采用甘草次酸對(duì)照品作為陽(yáng)性對(duì)照和對(duì)苦參的鑒別是采用槐定堿對(duì)照品作為陽(yáng)性對(duì)照；和對(duì)麻黃的鑒別是采用鹽酸麻黃堿對(duì)照品作為陽(yáng)性對(duì)照；和對(duì)川芎的鑒別是采用川芎對(duì)照藥材作為陽(yáng)性對(duì)照；a)用薄層色譜法鑒別其中的甘草成分取該中藥組合物4-10g，研細(xì)，加乙醇40ml與鹽酸2ml，置水浴上加熱回流20-50分鐘，放冷，濾過(guò)，取濾液濃縮至約10ml，加水10ml，攪勻，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用沸程為60～90℃的石油醚提取兩次，每次20ml，合并石油醚提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5-10μl，對(duì)照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為102070.5的60～90℃石油醚-苯-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；b)用薄層色譜法鑒別其中的苦參成分取該中藥組合物4-10g，研細(xì)，加三氯甲烷25ml與濃氨試液1ml，超聲處理15-30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4-8μl分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層版上，以體積比為50.60.3的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液10℃以下放置后的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；c)用薄層色譜法鑒別其中的麻黃成分取該中藥組合物4-8g，研細(xì)，置50ml錐形瓶中，加濃氨試液1ml、乙醚30ml，密塞，放置兩個(gè)小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，加酸性乙醇(取乙醇20ml，加鹽酸1ml，混勻)1ml，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4-8μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為4071的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；d)用薄層色譜法鑒別其中的川芎成分取該中藥組合物2-5g，研細(xì)，加1％碳酸氫鈉溶液50ml，超聲處理10-20分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為410.1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療魚鱗病的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，屬于中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域。其所述藥物是由白鮮皮、威靈仙、生地黃、蒼術(shù)、防風(fēng)、蟬蛻、紅花、火麻仁、桂枝、當(dāng)歸、川芎、甘草、苦參、麻黃、地膚子十五味藥組成，特征在于用高效液相色譜法測(cè)定所述藥物的一種或幾種成分的含量；用薄層色譜法鑒別其中的一種或幾種成分。本發(fā)明彌補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)的不足，提高了本發(fā)明藥物的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，且方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。
文檔編號(hào)A61K36/804GK101366856SQ20081005128
公開日2009年2月18日 申請(qǐng)日期2008年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月17日
發(fā)明者劉志昆, 周文波, 偉 姜, 張成海, 石桂芳, 心 陳 申請(qǐng)人:大連美羅中藥廠有限公司