專利名稱：枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸-羥乙酸共聚物微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬防治乳腺癌藥物制劑制備領(lǐng)域，特別是涉及枸櫞酸他莫昔芬微球的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來，乳腺癌的發(fā)病率急劇增長。在西方國家，乳腺癌已成為女性頭號(hào)死亡原因。 而我國最近幾年來，乳腺癌發(fā)病率也在不斷上升中。據(jù)衛(wèi)生部門的最新報(bào)道，我國的上海、 天津、北京、哈爾濱、武漢等特大型城市里，乳腺癌發(fā)病率亦已成為女性的第一或第二號(hào) 腫瘤疾病，而在廣大農(nóng)村地區(qū)，乳腺癌仍排在腫瘤疾病的第9位。近幾年我國每年新增腫 瘤病人約160萬-180萬人，腫瘤病人總數(shù)約為450萬-600萬人。目前乳腺癌的治療主要手段包括手術(shù)治療，放射治療，化學(xué)治療和內(nèi)分泌治療。其 中內(nèi)分泌治療是乳腺癌的重要治療手段，其療效已得到廣泛的認(rèn)可。乳腺癌內(nèi)分泌治療已 有一百多年的歷史，早在1896年英國學(xué)者Beastson首先報(bào)道卵巢切除成功地控制絕經(jīng)前 乳腺癌的進(jìn)展，成為乳腺癌內(nèi)分泌治療的第一個(gè)里程碑。盡管從20世紀(jì)30年代即開始使 用內(nèi)分泌藥物治療乳腺癌，但效果不那么理想。直到1971年，第一個(gè)抗雌激素藥物枸櫞 酸他莫昔芬研制成功，成為乳腺癌內(nèi)分泌治療的第二個(gè)里程碑。但到目前為止，枸櫞酸他 莫昔芬的劑型主要是片劑，它有藥物釋放時(shí)間短，對(duì)胃腸刺激大等缺點(diǎn)，所以開發(fā)一種新 的藥物劑型具有重要意義。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方 法。該方法以美國FDA認(rèn)證的可用于人體的降解性生物相容材料——聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA作為載體來制備枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球，該微球可 用作防治乳腺癌的植入劑型，給藥安全，方便，藥效持久。本發(fā)明的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法，包括下列步驟(1) 將聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA溶于有機(jī)溶劑中，再加入枸櫞酸他莫昔芬，超聲溶解， 作為有機(jī)相；(2) 在攪拌條件下，將有機(jī)相慢慢加入作為水相的聚乙烯醇(PVA)水溶液中，然后加入電解 質(zhì)，室溫下繼續(xù)攪拌至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，離心、洗滌、冷凍干燥即得枸櫞酸他莫昔芬聚乳 酸—羥乙酸共聚物PLGA微球。所述的聚乳酸一羥乙酸共聚物規(guī)格是乳酸(LA):羥乙酸(GA)的重量比為50:50， 分子量Mr為20000; LA:GA=50:50， Mr=40000; LA:GA=75:25， Mr=20000; LA:GA=75:25， Mr=40000，聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA在有機(jī)相中的濃度是40~60mg/ml。所述步驟(1)中的有機(jī)溶劑是乙腈。所述枸櫞酸他莫昔芬的用量是20mg 40mg。所述步驟(2)中的聚乙烯醇的規(guī)格是PVA-124，醇解度的摩爾百分?jǐn)?shù)為98~99%，平 均聚合度n為2400-2500，聚乙烯醇水溶液質(zhì)量濃度是1%~3%。所述步驟(2)中的電解質(zhì)是氯化鈉，在溶液中的質(zhì)量濃度為5%~15%。 所述步驟(2)中的攪拌速度為400 600rpm。所述枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的粒徑在l(Him以下。 本發(fā)明的有益效果(1) 本發(fā)明的用的聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA具有良好的生物相容性和生物可降解性，植入人體能夠達(dá)到較好的緩釋效果；(2) 制備的微球通過掃描電鏡觀察，形態(tài)圓整，分布均勻，微球的藥物包封率在80%左右，藥物含量在10%以上；(3) 制備的微球在體外釋放實(shí)驗(yàn)中，2化內(nèi)藥物釋放度為5.23%， 30d累計(jì)釋放度達(dá)到68.46%，滿足植入劑型緩釋長效的要求，可以作為防治乳腺癌的藥物植入劑型。


圖1是制備的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的顯微鏡照片； 圖2是制備的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的掃描電鏡照片； 圖3是枸櫞酸他莫昔芬乙醇溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖4是制備的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的體外釋放曲線。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限 定的范圍。實(shí)施例1(1)枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備精確稱取聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA (LA:GA=50:50， Mr=20000) lOOmg，溶于2ml4乙腈中，再加入枸櫞酸他莫昔芬20mg，超聲溶解，作為有機(jī)相；配制60ml P/。PVA水溶液, 再加入0.45gNaCl，作為水相。在攪拌條件下(600rpm)，緩慢的(lml/min)把有機(jī)相加 入到水相中，室溫下繼續(xù)攪拌24h，然后離心分離，用雙蒸水洗滌3次，冷凍干燥即得枸 櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球。(2) 微球的形態(tài)和粒徑尺寸 通過光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡拍攝的微球照片(圖l，圖2)，可以看到，研究所得的微球具有很好的圓形形態(tài)。用校正過的帶目鏡測微尺的顯微鏡測微球的粒徑大小，發(fā)現(xiàn)所得 微球的直徑在3-10 P m， 300個(gè)微球的平均粒徑為7.36 y m。(3) 藥物含量及包封率測定a. 枸櫞酸他莫昔芬最大吸收波長的測定 為確定用紫外分光光度法測定枸橡酸他莫昔芬含量的測定波長，研究中用UV—2102PC型紫外可見分光光度計(jì)對(duì)枸櫞酸他莫昔芬的最大吸收波長進(jìn)行了測定，測定 步驟為精密稱取20mg枸櫞酸他莫昔芬，用95%的乙醇溶液溶解，以95%的乙醇溶液為 空白，在200 400nm間作紫外掃描，便可得到最大吸收波長為276nm。b. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密稱取50mg枸櫞酸他莫昔芬，用95%的乙醇溶液溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中定 容，得1.000mg/ml的枸櫞酸他莫昔芬對(duì)照液。精密吸取對(duì)照液0.05， 0.1， 0.15， 0.2， 0.25， 0.3ml，在試管中分別用95%的乙醇定容至5ml。按照分光光度法在枸櫞酸他莫昔芬的最大 吸收波長處測定吸光度。并以枸櫞酸他莫昔芬濃度為縱坐標(biāo)、吸光度為橫坐標(biāo)作圖得到枸 櫞酸他莫昔芬乙醇溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3所示。通過線性回歸得到枸櫞酸他莫昔芬濃度C 對(duì)吸光度A的回歸方程為C=0.0446A-0.0065 [R2=0.9994， RSD=0.0518% ， n=6， PO.OOOl]。c. 藥物含量及包封率的計(jì)算 精密稱取10mg枸櫞酸他莫昔芬PLGA微球，并加10ml95。/。乙醇于試管中，超聲加熱破壞lh后，用微孔濾膜抽濾，精密吸取濾液lml，以95%乙醇為空白，在276nm處測得， 代入回歸方程并計(jì)算，便可得到枸櫞酸他莫昔芬含量為12.1%。然后根據(jù)下列公式便可以 計(jì)算得到微球制備過程中枸櫞酸他莫昔芬的包封率是78.95%。包封率=微球中枸櫞酸他莫昔芬的實(shí)際含量/微球中枸櫞酸他莫昔芬的理論含量 (4)體外釋放實(shí)驗(yàn)精密稱取微球10mg置10ml離心管中，加入10mL30。/。乙醇溶液，超聲lmin，在37°C 振蕩條件下分別于l， 5， 10， 15， 20， 25, 30d時(shí)將離心管取出，5 000r/min離心10min，取出所有l(wèi)ml上清液，同時(shí)補(bǔ)充同溫30%乙醇溶液lmL，超聲lmin后繼續(xù)振蕩。按(3) 項(xiàng)方法測定枸櫞酸他莫昔芬濃度，做累計(jì)釋放枸櫞酸他莫昔芬PLGA微球體外累計(jì)釋放 曲線見圖4。在最初的24h內(nèi)藥物釋放度為5.23。/。，在以后的30d枸櫞酸他莫昔芬從微球 中緩慢持續(xù)釋放，30d累計(jì)釋放度達(dá)到68.46%,并且可以進(jìn)一步釋放，可見所得的微球滿 足緩釋長效的要求。
權(quán)利要求
1.枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸-羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法，包括下列步驟(1)將聚乳酸-羥乙酸共聚物PLGA溶于有機(jī)溶劑中，再加入枸櫞酸他莫昔芬，超聲溶解，作為有機(jī)相；(2)在攪拌條件下，將有機(jī)相慢慢加入作為水相的聚乙烯醇PVA水溶液中，然后加入電解質(zhì)，室溫下繼續(xù)攪拌至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，離心、洗滌、冷凍干燥即得枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸-羥乙酸共聚物PLGA微球。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法， 其特征在于所述的聚乳酸一羥乙酸共聚物規(guī)格是乳酸LA:羥乙酸GA的重量比為50:50， 分子量Mr為20000; LA: GA=50:50 ， M產(chǎn)40000; LA: GA=75:25 ， Mr=20000; LA: GA=75:25 ， Mr=40000;聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA在有機(jī)相中的濃度是40~60mg/ml。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法， 其特征在于所述步驟(1)中的有機(jī)溶劑是乙腈。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法， 其特征在于所述枸櫞酸他莫昔芬的用量是20mg 40mg。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法， 其特征在于所述步驟(2)中的聚乙烯醇的規(guī)格是PVA-124,醇解度的摩爾百分?jǐn)?shù)為 98~99%，平均聚合度n為2400-2500，聚乙烯醇水溶液質(zhì)量濃度是1%~3%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法， 其特征在于所述步驟(2)中的電解質(zhì)是氯化鈉，在溶液中的質(zhì)量濃度為5% 15%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法， 其特征在于所述步驟(2)中的攪拌速度為400 600卬m。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的制備方法， 其特征在于所述枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羥乙酸共聚物PLGA微球的粒徑在lOpin以下。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸—羥乙酸共聚物微球的制備方法，包括1)將聚乳酸—羥乙酸共聚物PLGA溶于有機(jī)溶劑中，再加入枸櫞酸他莫昔芬，超聲溶解，作為有機(jī)相；2)在攪拌條件下，將有機(jī)相慢慢加入作為水相的聚乙烯醇PVA水溶液中，然后加入電解質(zhì)，室溫下繼續(xù)攪拌至有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，離心、洗滌、冷凍干燥即得枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸—羥乙酸共聚物PLGA微球。該微球形態(tài)圓整，粒度分布均勻，粒徑分布在10微米以下，載藥量可達(dá)10％以上，包封率在80％左右，體外釋藥性能符合長效制劑特征，可以作為防治乳腺癌的藥物植入劑型。
文檔編號(hào)A61K47/34GK101249082SQ20081003548
公開日2008年8月27日 申請(qǐng)日期2008年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日
發(fā)明者余燈廣, 周毓婷, 朱利民, 馬宗會(huì) 申請(qǐng)人:東華大學(xué)