專利名稱：蓯黃補腎制劑質(zhì)量標準的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中成藥質(zhì)量控制領(lǐng)域。
技術(shù)背景蓯黃補腎處方由肉蓯蓉、熟地黃、菟絲子、五味子(酒蒸)四味藥材組成， 具有滋補腎陰、強筋壯骨的功效。此處方可制成丸、顆粒、片、硬膠囊等劑型。 目前，公開的藥品標準中只收載了丸劑標準(《國家藥品監(jiān)督管理局國家中成藥 標準匯編》內(nèi)科腎系分冊)，蓯黃補腎其他劑型標準未見報道。丸劑標準中只有顯微鑒別，肉蓯蓉TLC鑒別和毛蕊花糖苷HPLC含量測定。此藥處方由四味藥組 成，顯然丸劑標準并不完善，不能有效保證產(chǎn)品的質(zhì)量。同時，我們在試驗中還發(fā)現(xiàn)涉及的顆粒、片以及硬膠囊這三種蓯黃補腎 新劑型在用丸劑標準中肉蓯蓉鑒別項下供試液制備方法得到的供試液，其薄層 色譜上的斑點與甜菜堿對照品色譜的斑點在位置上存在一定的差距。另外，顆粒、片以及硬膠囊這三種蓯黃補腎新劑型在做毛蕊花糖苷的HPLC 含量測定時，陰性供試液有較大的干擾峰存在。試驗不同的色譜柱和流動相組 成均不能很好的把干擾峰與毛蕊花糖苷的峰分開。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種蓯黃補腎制劑質(zhì)量標準的檢測方法，從而提高蓯黃 補腎新劑型質(zhì)量可控性，保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定。其中制劑是指顆粒、片和硬膠本發(fā)明對丸劑標準檢測方法進行了較大的改進，具體為增加了處方中熟 地黃、菟絲子、五味子(酒蒸)的薄層定性鑒別，改變了肉蓯蓉鑒別供試液的制 備方法，更改了高效液相色譜含量測定成分為干擾小、含量高的松果菊苷。之所以改為測定松果菊苷是因為用原丸劑標準中的含測方法檢測蓯黃補腎 新劑型的毛蕊花糖苷含量時發(fā)現(xiàn)有比較大的干擾。試驗了甲醇一 乙腈_ 1 %乙酸(13: 10: 77， 11: 9: 80， 15: 10: 75)、甲醇一0. 1%甲酸(28: 72， 35: 65)流動相，以及kromasil—C18(250腿X4. 6mm， 5to)禾口 Ultimate—C18 (250mm X 4.6mm， 5to)色譜柱，結(jié)果均不能使干擾峰與毛蕊花糖苷的峰分開。而檢測松果 菊苷時沒有發(fā)現(xiàn)明顯干擾峰。由于中藥的復雜性，以及不能得到原丸劑標準申 報廠家的丸劑樣品進行比對研究，所以產(chǎn)生這種檢測毛蕊花糖苷時存在比較大 干擾問題的原因現(xiàn)在還不能確定，可能是所用的藥材產(chǎn)地不同或者是制造工藝 中的具體操作參數(shù)不同等原因造成的。有文獻報道，肉蓯蓉中起改善性功能功效的主成分是苯乙醇苷類化合物。 松果菊苷、毛蕊花糖苷都屬于含量較高的苯乙醇苷類化合物。經(jīng)過我們對市售5 個不同產(chǎn)地肉蓯蓉藥材(其中2個為新疆產(chǎn)的管花肉蓯蓉)的檢測，發(fā)現(xiàn)4個 產(chǎn)地松果菊苷的含量均大于毛蕊花糖苷含量，另一個產(chǎn)地的藥材中兩種成分的 含量相當。所以改為檢測干擾小、含量高的松果菊苷的含量也能較好的反映產(chǎn) 品質(zhì)量。本發(fā)明所涉及的灰黃補腎新劑型的制法，除輔料品種和用量、制成總量、 干燥工藝、最終劑型不同外，其它均按照丸劑標準中的處方和制法制造。整個 制造方法與丸劑比較并沒有大的、本質(zhì)的改變。所以按照藥品注冊管理辦法的 分類，本發(fā)明所涉及的蓯黃補腎顆粒、片或者是硬膠囊制劑應該屬于8類新藥 (即仿制藥改劑型)。本發(fā)明提供了蓯黃補腎制劑——顆粒、片、硬膠囊——質(zhì)量標準的檢測方 法，包括用薄層色譜(TLC)對肉蓯蓉、熟地黃、菟絲子、五味子(酒蒸)進行 定性鑒別和用高效液相色譜(HPLC)測定肉蓯蓉中活性成分一一松果菊苷 (echinacoside)的含量。 1、肉蓯蓉的薄層鑒別取蓯黃補腎制劑(顆粒、片或者是硬膠囊)適量，研細，稱取粉末0.5 l.Og，加水20ml，超聲10min使溶散，離心(4500r/min) 5min，取上清液再真 空抽濾，濾液過強酸性陽離子交換樹脂柱，用20ml水洗柱，再用0.5 4mo1/1 氨水溶液20 60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用乙醇2ml溶解，靜置，取上清液作為供試品溶液。另取缺肉蓯蓉的陰性樣品，同法制成陰性供試液。甜菜堿對照品加乙醇制成每lml含5mg的對照品溶液。吸取供試品溶液和陰性供試液 各10W，對照品溶液5W，分別點樣于同一硅膠G薄層板上，以甲醇一冰醋酸 _水(10 20: 0. 5 2: 2 8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化 鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。 陰性樣品色譜無對應斑點。
2、 熟地黃的薄層鑒別取蓯黃補腎制劑(顆粒、片或者是硬膠囊)適量，研細，稱取粉末1. 0 3. 0g， 加水30ml，超聲處理10min，離心(4500r/min) 5min，取上清液用正丁醇(氯仿、 乙酸乙酯)提取2次，每次15ml，合并提取液，提取液濃縮至干，殘渣加乙醇 lml溶解，作為供試品溶液。另取缺熟地黃的陰性樣品，同法制成陰性供試液。 5—羥甲基糠醛對照品加乙醇制成每lml含0. 5 mg的對照品溶液。吸取供試品 溶液和陰性供試液各IOW，對照品溶液5W，分別點樣于同一硅膠GF^薄層板 上，以石油醚I1—乙酸乙酯(1 8: 2 10)上層液為展開劑，展開，取出，晾 干，置于254nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上， 顯相同顏色的暗斑點。陰性樣品色譜無對應暗斑點。
3、 菟絲子的薄層鑒別取蓯黃補腎制劑(顆粒、片或者是硬膠囊)適量，研細，稱取粉末1. 0 3. 0g， 加氯仿(無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇)10ml，超聲處理15min，濾過， 濾液濃縮至干，加乙醇lml溶解殘渣，作為供試品溶液。另取缺菟絲子的陰性 樣品，同法制成陰性供試液。山萘素對照品加乙醇制成每lml含0. 2 mg的對照 品溶液。吸取供試品溶液和陰性供試液各IOW，對照品溶液5W，分別點樣于 同一硅膠G薄層板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲醇(4 10: 4 8: 1 6)為展開 劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，置于365nm紫外燈下檢視。 供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性 樣品色譜無對應斑點。4、 五味子(酒蒸)的薄層鑒別取蓯黃補腎制劑(顆粒、片或者是硬膠囊)適量，研細，稱取粉末8. 0 15. Og， 加入甲醇(無水乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇)20ml，超聲處理或加熱回流30min， 濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。另取缺五味子的陰性樣品，同法制 成陰性供試液。五味子乙素對照品加乙醇制成每lml含0. 4 mg的對照品溶液。 吸取供試品溶液、陰性供試液和對照品溶液各IOW，分別點樣于同一硅膠GF254 薄層板上，以石油醚I一甲酸乙酯一 甲酸(8 20: 2 8: 0. 5 2)上層液為展 開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對 照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點。陰性樣品色譜無對應暗斑點。5、 肉蓯蓉中松果菊苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料， 流動相為甲醇_乙腈一1%醋酸溶液(15: 10: 75);檢測波長為334nm。理論塔 板數(shù)按松果菊苷峰計算應不低于4000。對照品溶液制備精密稱取松果菊苷對照品適量，置棕色瓶中，加流動相 配成每lml含0. 16 mg的對照品溶液供試品溶液制備取蓯黃補腎制劑(顆粒、片或者是硬膠囊)適量，研細， 取0.5g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，精密加流動相20ml，密塞，搖勻， 稱定重量，浸泡O. 5小時，超聲處理40min，取出，放冷，再稱定重量，加流動 相補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用0. 45他的微濾膜濾過，濾液置 棕色瓶中，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5W，注入液相色譜儀，計算按下式計算-
<formula>formula see original document page 8</formula>式中W:松果菊苷含量，％; Cs:對照品中松果菊苷的濃度，mg/ml; M:供試品的稱樣量，mg;As:對照品中松果菊苷的色譜峰面積；Ai:供試品中松果菊苷的色譜峰面積。 本發(fā)明所述蓯黃補腎制劑中松果菊苷的含量測定方法經(jīng)過了方法學考察試 驗(由于本發(fā)明所涉及的片劑和硬膠囊都是從顆粒劑通過機器壓制或裝填而成， 只是外形的變化，沒有成分變化，所以以下發(fā)明內(nèi)容所采用的試驗對象如果未 有說明均為顆粒劑。)(1) 儀器和試藥SPD-10Avp紫外檢測儀日本島津公司；P4000四元泵美國熱電公司； AT-130色譜柱恒溫箱天津市恒奧科技發(fā)展有限公司；HN1006超聲清洗機中 國華南超聲設備廠；剛202電子分析天平日本AND公司松果菊苷(111670-200502)中國藥品生物制品檢定所；蓯黃補腎制劑顆粒 (批號070801、 070802、 070803，規(guī)格為2. Og/袋)為廣州美晨藥業(yè)有限公司提 供；乙睛為色譜純迪馬公司。其余試劑為分析純。(2) 色譜條件采用kromasil-Q8柱(250誦X4. 6mm， 5Mm)色譜柱，柱 溫3(TC;流動相為甲醇一乙腈一1%醋酸溶液(15: 10: 75);流速為lml/min; 檢測波長為334nm。(3) 對照品溶液制備精密稱取松果菊苷對照品適量，置棕色瓶中，加 流動相配成每lml含0. 16 mg的對照品溶液(4) 供試品溶液制備取本品適量，研細，取0.5g，精密稱定，置50ml 棕色量瓶中，精密加流動相20ml，密塞，搖勻，稱定重量，浸泡0.5小時，超 聲處理40min，取出，放冷，再稱定重量，加流動相補足減失的重量，搖勻，離 心，取上清液，用0. 45to的微濾膜濾過，濾液置棕色瓶中，即得。取缺肉蓯蓉的陰性樣品0.3g，同法制成陰性供試液。(5) 線性關(guān)系考察精密吸取上述對照品溶液3W、 5^1、 7ri、 IOW、 12W分別注入液相色譜儀，以峰面積A為橫坐標，以進樣量W(mg)為縱坐標， 計算得出回歸方程W二一3. 3143X 10—5 + 7. 97149X 10—WA， R=0. 99996。 松果菊 苷在0. 48~——1. 92Pg之間有良好的線性關(guān)系。(6) 陰性對照試驗精密吸取上述對照品溶液、供試液和陰性供試液各 5W，注入液相色譜儀，結(jié)果在松果菊苷保留時間位置上陰性供試液色譜沒有明 顯干擾。(7) 加樣回收率試驗精密適當稱取本品9份，每3份為1組，每組均 按高、中、低三個濃度分別加入上述對照品溶液3ml、 2ml、 lml。按照上述供試 品溶液制備方法制備并測定。結(jié)果平均回收率為99. 1%， RSD%=1.52%。(8) 精密度試驗精密吸取對照液5^1注入液相色譜儀，重復6次，記 錄峰面積。其RSD二1.03。/。，表明本方法具有良好的精密度。(9) 穩(wěn)定性試驗分別于0、 2、 4、 6、 8小時精密吸取供試液各注入 液相色譜儀，記錄峰面積。其RS》1.41。/。，表明供試液在0—8小時內(nèi)穩(wěn)定。(10) 重復性試驗對同一批樣品，按照上述測定方法，重復測定6次。 其RSD4.01。/。，表明本方法具有良好的重復性。(11) 樣品測定按照上述方法對三批樣品進行測定，結(jié)果見下表(按公式 計算所得質(zhì)量百分比含量乘以制劑規(guī)格即為所列單位含量)表l蓯黃補腎顆粒中松果菊苷的含量 ("二3) 批號 _含量/mg/袋 RSD/%_070801 18.1 0.87070802 18.4 0.68070803 17.8 0.74本發(fā)明具有以下優(yōu)點
1、 本發(fā)明對蓯黃補腎制劑——顆粒、片、硬膠囊——中四味藥材都分別進 行薄層色譜定性鑒別，對所含的一種活性成分進行含量測定。與丸劑標準檢測 方法相比，本發(fā)明更完善、更科學合理。。
2、 本發(fā)明首次提出對蓯黃補腎制劑中除肉蓯蓉外其他三味藥材的薄層鑒別 方法，并對丸劑標準檢測方法中不適合檢測蓯黃補腎新劑型(顆粒、片、硬膠囊) 的部分進行了較大的修改(改變了肉蓯蓉鑒別供試液的制備方法，更改了高效 液相色譜含量測定成分為干擾少、含量高的松果菊苷)。從而提高了蓯黃補腎新 劑型的質(zhì)量控制水平，保障產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定
3、 本發(fā)明專屬性強、重復性好，可用于該藥品的日常質(zhì)量控制。


下面給出附圖用于進一步說明本發(fā)明，但并不對本發(fā)明構(gòu)成限制。 圖1是本發(fā)明的肉蓯蓉的TLC圖； 圖2是本發(fā)明的熟地黃的TLC圖； 圖3是本發(fā)明的菟絲子的TLC圖； 圖4是本發(fā)明的五味子的TLC圖； 圖5是本發(fā)明的蓯黃補腎膠囊HPLC色譜圖。
具體實施方式
下面列舉檢測的實施例進一步詳細說明本發(fā)明，但對本發(fā)明并沒有限制。 實施例一1. 儀器紫外點樣儀上海安亭電子儀器廠；SPD-10Avp紫外檢測儀日本島津公司； P4000四元泵美國熱電公司；AT-130色譜柱恒溫箱天津市恒奧科技發(fā)展有限 公司；HN1006超聲清洗機中國華南超聲設備廠；HM202電子分析天平日本AND 公司；4K15C高速冷凍離心機；德國SIGMA公司。2. 試藥硅膠G青島海洋化工有限公司；甜菜堿(894-200202) 、 5-羥甲基糠醛(111626-200402)、五味子乙素(765-200104)、山萘素(0861-200002)、松果菊 苷(111670-200502)中國藥品生物制品檢定所；蓯黃補腎顆粒(批號070801，規(guī) 格2.0g/袋)，蓯黃補腎片(批號070811，規(guī)格0.5g/片)，蓯黃補腎硬膠囊(批 號070821，規(guī)格0.4g/粒)為廣州美晨藥業(yè)有限公司提供；乙睛為色譜純迪馬 公司。其余試劑為分析純。3.薄層鑒別(以顆粒劑為例，片劑和硬膠囊劑與之相同)3. 1.肉灰蓉取蓯黃補腎顆粒適量，研細，稱取粉末0.5 1.0g，加水20ml，超聲10min 使溶散，離心(4500r/min) 5min，取上清液再真空抽濾，濾液過強酸性陽離子 交換樹脂柱，用20ml水洗柱，再用0. 5 4mol/l氨水溶液20 60ml洗脫，收 集洗脫液，蒸干，用乙醇2ml溶解，靜置，取上清液作為供試品溶液。甜菜堿 對照品加乙醇制成每lml含5mg的對照品溶液。吸取供試品溶液10W，對照品 溶液5ri，分別點樣于同一硅膠G薄層板上，以甲醇一冰醋酸一水(10 20: 0. 5 2: 2 8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。結(jié)果供試品 色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。3. 2.熟地黃取灰黃補腎顆粒適量，研細，稱取粉末l. 0 3. Og，加水30ml，超聲處理10min， 離心(4500r/min) 5min，取上清液用正丁醇(氯仿、乙酸乙酯)提取2次，每 次15ml，合并提取液，提取液濃縮至干，殘渣加乙醇lml溶解，作為供試品溶液。 5—羥甲基糠醛對照品加乙醇制成每lml含0.5 mg的對照品溶液。吸取供試品 溶液1(￥1，對照品溶液5W，分別點樣于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚II 一乙酸乙酯(1 8: 2 10)上層液為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm 紫外燈下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏 色的暗斑點。3. 3.菟絲子取蓯黃補腎顆粒適量，研細，稱取粉末1.0 3.0g，加氯仿(無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇)10ml,超聲處理15min，濾過，濾液濃縮至干，加乙醇 lml溶解殘渣，作為供試品溶液。山萘素對照品加乙醇制成每lml含0.2 mg的 對照品溶液。吸取供試品溶液對照品溶液5ri，分別點樣于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲醇(4 10: 4 8: 1 6)為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，置于365nm紫外燈下檢視。結(jié)果供試 品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。 3.4.五味子(酒蒸)取蓯黃補腎顆粒適量，研細，稱取粉末8.0 15.0g，加入甲醇(無水乙醇、 氯仿、乙酸乙酯、正丁醇)20ml，超聲處理或加熱回流30min，濾過，濾液濃縮 至約lml，作為供試品溶液。五味子乙素對照品加乙醇制成每lml含0. 4mg的對 照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各IOW，分別點樣于同一硅膠GF^薄 層板上，以石油醚I一甲酸乙酯一甲酸(8 20: 2 8: 0.5 2)上層液為展開 劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外燈下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與 對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點。圖1中所指的"1"是供試液，"2"是對照液，"3"是陰性供試液。 圖2中所指的"1"是供試液，"2"是對照液，"3"是陰性供試液。 圖3中所指的"1"及"3"是對照品，"2"及"5"是供試液，"4"是陰 性供試液。圖4中所指的"1"及"4"是對照液，"2"及"5"是供試液，"3"是陰性 供試液。4.含量測定(以顆粒劑為例，片劑和硬膠囊劑除結(jié)果外其他與之相同)。 4. l.色譜條件色譜柱采用kromasil-C18柱(250mmX4. 6謹，5Mm);柱溫3(TC;流動相為甲醇一乙腈一1%醋酸溶液(15: 10: 75);流速為lml/min;檢測波長為334nm。4.2.對照品溶液制備精密稱取松果菊苷對照品適量，置棕色瓶中，加流動相配成每lml含0. 16 mg的對照品溶液4.3.供試品溶液制備取蓯黃補腎顆粒適量，研細，取0.5g，精密稱定， 置50ml棕色量瓶中，精密加流動相20ml，密塞，搖勻，稱定重量，浸泡0. 5小 時，超聲處理40min，取出，放冷，再稱定重量，加流動相補足減失的重量，搖 勻，離心，取上清液，用0.45,的微濾膜濾過，濾液置棕色瓶中，即得。4. 4.測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5W，注入液相色譜 儀，測定。(按公式計算所得質(zhì)量百分比含量乘以制劑規(guī)格即為所列單位含量。)4. 5.結(jié)果 顆粒劑每袋含松果菊苷18. lmg 片劑每片含松果菊苷4. 5mg 硬膠囊劑每粒含松果菊苷3.9mg圖5中所指的"I"是供試液，"II"是對照液，"III"是陰性供試液，"a" 是松果菊苷。圖1、 2、 3、 4、 5所示陰性試驗結(jié)果是為了驗證和說明本發(fā)明。在對檢測 方法進行專屬性考察時一定要做陰性試驗。當檢測方法確定后，在日常的檢測 中一般并不需要做陰性試驗。
權(quán)利要求
1、蓯黃補腎制劑質(zhì)量標準的檢測方法，其特征在于用薄層色譜對肉蓯蓉、熟地黃、菟絲子、酒蒸炮制五味子進行定性鑒別和用高效液相色譜測定肉蓯蓉中活性成分松果菊苷的含量。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述蓯黃補腎制劑質(zhì)量標準的檢測方法，其特征在于所 述制劑指顆粒、片和硬膠囊。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述蓯黃補腎制劑質(zhì)量標準的檢測方法，其特征在于所述的肉蓯蓉、熟地黃、菟絲子、酒蒸炮制五味子的定性鑒別包括以下步驟(1)肉蓯蓉取蓯黃補腎顆粒、片或者是硬膠囊劑型制劑適量，研細，稱取粉末0.5 1.0g，加水20ml，超聲10min使溶散，離心轉(zhuǎn)5min，取上清液再 真空抽濾，濾液過強酸性陽離子交換樹脂柱，用20ml水洗柱，再用0. 5 4mol/l 氨水溶液20 60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用乙醇2ml溶解，靜置，取上清 液作為供試品溶液，甜菜堿對照品加乙醇制成每lml含5mg的對照品溶液；吸 取供試品溶液10W，對照品溶液5W，分別點樣于同一硅膠G薄層板上，以甲 醇一冰醋酸一水為展開劑，比例是10 20: 0.5 2: 2 8，展開，取出，晾干， 噴以改良碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相 同顏色的斑點；(2) 熟地黃取蓯黃補腎顆粒、片或者是硬膠囊劑型制劑適量，研細，稱 取粉末1. 0 3. Og，加水30ml，超聲處理10min，離心轉(zhuǎn)5min，取上清液用正丁醇、 氯仿或者是乙酸乙酯提取2次，每次15ml，合并提取液，提取液濃縮至干，殘渣 加乙醇lml溶解，作為供試品溶液；5—羥甲基糠醛對照品加乙醇制成每lml含 0.5mg的對照品溶液，吸取供試品溶液10W，對照品溶液5W，分別點樣于同 一硅膠GF254薄層板上，以比例為1 8: 2 10石油醚II—乙酸乙酯上層液為展 開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對 照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；(3) 菟絲子取蓯黃補腎顆粒、片或者是硬膠囊劑型制劑適量，研細，稱 取粉末1.0 3.0g，加氯仿、無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯或者是正丁醇10ml，超聲處理15min，濾過，濾液濃縮至干，加乙醇lml溶解殘渣，作為供試品溶液， 山萘素對照品加乙醇制成每lml含0. 2 mg的對照品溶液，吸取供試品溶液IOW， 對照品溶液5W，分別點樣于同一硅膠G薄層板上，以比例為4 10: 4 8: l 6甲苯一乙酸乙酯一甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇 溶液，置于365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)酒蒸炮制五味子取蓯黃補腎顆粒、片或者是硬膠囊劑型制劑適量，研 細，稱取粉末8.0 15.0g，加入甲醇、無水乙醇、氯仿、乙酸乙酯或者是正丁 醇20ml，超聲處理或加熱回流30min，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液， 五味子乙素對照品加乙醇制成每lml含0. 4 mg的對照品溶液；吸取供試品溶液 對照品溶液各10W，分別點樣于同一硅膠GF254薄層板上，以比例為8 20: 2 8: 0.5 2石油醚I一甲酸乙酯一甲酸上層液為展開劑，展開，取出，晾干，置 于254nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相 同顏色的暗斑點。
4、根據(jù)權(quán)利要求l所述蓯黃補腎制劑質(zhì)量標準的檢測方法，其特征在于所 述的肉蓯蓉中活性成分松果菊苷的含量測定包括以下步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱采用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料； 流動相為比例是15: 10: 75甲醇一乙腈一1%醋酸溶液；檢測波長為334nm，理 論塔板數(shù)按松果菊苷峰計算應不低于4000;對照品溶液制備精密稱取松果菊苷對照品適量，置棕色瓶中，加流動相 配成每lml含0. 16 mg的對照品溶液；供試品溶液制備取本品適量，研細，取0.5g，精密稱定，置50ml棕色 量瓶中，精密加流動相20ml，密塞，搖勻，稱定重量，浸泡0.5小時，超聲處 理40min，取出，放冷，再稱定重量，加流動相補足減失的重量，搖勻，離心， 取上清液，用0.45Wn的微濾膜濾過，濾液置棕色瓶中，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5W，注入液相色譜儀，計算按下式計算<formula>formula see original document page 4</formula>式中W:松果菊苷含量，％; Cs:對照品中松果菊苷的濃度，mg/ml;M:供試品的稱樣量，mg; As:對照品中松果菊苷的色譜峰面積； Ai:供試品中松果菊苷的色譜峰面積。
全文摘要
本發(fā)明涉及蓯黃補腎制劑質(zhì)量標準的檢測方法，用于蓯黃補腎制劑的質(zhì)量控制。其中制劑指顆粒、片和硬膠囊。本發(fā)明公開了建立蓯黃補腎新劑型質(zhì)量標準的檢測方法時，對已有的丸劑質(zhì)量標準的檢測方法進行了較大改進，具體為增加了處方中熟地黃、菟絲子、五味子(酒蒸)的薄層定性鑒別，改變了肉蓯蓉鑒別供試液的制備方法，更改了高效液相色譜含量測定成分為干擾少、含量高的松果菊苷。通過利用本發(fā)明的檢測方法，可提高蓯黃補腎新劑型的質(zhì)量可控性，有利于產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定。
文檔編號A61P1/00GK101274036SQ200810028000
公開日2008年10月1日 申請日期2008年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月12日
發(fā)明者峰 侯, 芳 劉, 徐天生, 王寶東, 王鴻昶, 莫啟武 申請人:美晨集團股份有限公司