專利名稱：一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切的說，它是一種分布于內(nèi)向(油相)的大蒜素和大蒜油 水包油型亞微乳劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
-.
大蒜的理化性質(zhì)和作用機制大蒜(Allium sativum)是百合科蔥屬植物的地下鱗莖，味 辛、性溫,有行氣滯、暖脾胃、解毒、殺蟲等獨特的藥理功效。大蒜含有氨基酸、肽類、蛋白 質(zhì)、酶類、糖類、甙類、維生素、脂肪、無機鹽及含硫化合物等各種成分[陳麗芳.大蒜素的 臨床應(yīng)用.天津藥學(xué)，2004,16 (6) -58-61]。大蒜中的酶解和化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生多種活性化學(xué)成 分。蒜氨酸在蒜酶的作用下代謝產(chǎn)生大蒜素及一系列抗生物質(zhì)——含硫化合物[宋衛(wèi)國，李寶 聚，劉丌啟.大蒜化學(xué)成分及其抗菌活性機理研究進(jìn)展.園藝學(xué)報，2004， 31 (2) :263-268.]。 現(xiàn)代藥物化學(xué)研究證明大蒜內(nèi)含硫成分多達(dá)三十余種,其中主要的含硫化合物有二烯丙基一 硫化物、二烯丙基二硫化物、二烯丙基三硫化物等。其中二烯丙基三硫化物為大蒜新素，即 大蒜素,我國已人工合成[林青，喬竟原.大蒜素的藥理與臨床應(yīng)用.首都醫(yī)藥，2004， 6: 38-39.]。大蒜素屬于揮發(fā)油類藥品，顏色為淡黃色，有濃烈的大蒜氣味，密度為1.050-1.095， 折光率為1.550-1.580,其溶于大多數(shù)非揮發(fā)性油，部分溶于乙醇，不溶于水、甘油和丙二醇 等，強酸、強氧化劑和紫外線可能引起變質(zhì)。雖然大蒜油中的主要成分屬硫醚類化合物，但 化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定。在非強酸環(huán)境中可耐12(TC以上高溫而不易分解，但若長期暴露于紫外線 下可誘發(fā)分解。在強酸環(huán)境中可形成硫鹽并析出硫而產(chǎn)生沉淀。在強氧化環(huán)境中則可被氧化 為亞砜甚至砜，因此大蒜油應(yīng)存放于陰涼處并避免與強酸和氧化性物質(zhì)存放在一起。大蒜素 具有多種藥理活性，對許多真菌細(xì)菌有拮抗活性。大蒜素及阿霍烯、大蒜油中的硫醚等多種 成分通過與半胱氨酸反應(yīng)、抑制巰基酶活性活脂類等物質(zhì)代謝，對多種病原真菌、細(xì)菌起到 抑制或殺滅作用。除此之外，近年國內(nèi)外的流行病學(xué)調(diào)査和實驗研究均表明，大蒜素對胃癌、 結(jié)腸癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病等多種腫瘤均有一定抑制作用。另外有研 究發(fā)現(xiàn)大蒜素在腫瘤化療中與其它化療藥物聯(lián)合應(yīng)用，可以提高腫瘤細(xì)胞對藥物的敏感性， 增強化療療效。
大蒜素劑型研究情況大蒜素，其分子式C6HIQS3，分子量為178.33，化學(xué)名為三硫二 丙烯。大蒜素現(xiàn)在臨床上主要應(yīng)用為抗感染藥，適用于深部真菌和細(xì)菌感染及防治急慢性菌 痢和腸炎、百R咳、肺部和消化道的真菌感染、白色念珠菌菌血癥、隱球菌性腦膜炎、肺結(jié)核等。Rl前，應(yīng)用較多的大蒜素劑型有普通的注射液、腸溶微丸，膠囊，軟膠囊，片劑等。 由于大蒜素幾乎不溶于水，最早的大蒜素是通過口服給藥方式而發(fā)生療效的，其后是普通注 射劑。目前，臨床上大蒜素的常用劑型有腸溶微丸，膠囊，軟膠囊，片劑等。中閨專利 200510055240.2制備了一種中藥組合物及其軟膠囊，將e -胡蘿卜素與大蒜素組合制成軟膠囊； 中國專利200610039610.8制備了一種大蒜素腸溶滴丸；中國專利96116051.訴開究了大蒜素片劑 及其生產(chǎn)方法；中國專利200310115331.1制備了一種單粒子納米大蒜素微膠囊，其用到有機 溶劑，可能導(dǎo)致有機溶劑殘留，大蒜素與胃腸道直接接觸會刺激胃腸道的蠕動，從而引起疼 痛，腹瀉，以及損傷胃腸道粘膜。因大蒜素對胃有刺激性且易被胃液破壞，所以其口服塵物 利用度較低，患者依從性差。為提高大蒜素的生物利用度人們開始研究大蒜素靜脈注射液， 中國專利88103251.4和200410014731.8制備了大蒜注射液，雖然生物利用度得以提高，但 其中用到乙醇、亞硫酸等作為增溶劑，使其血管刺激性增大，患者順應(yīng)性差；屮國專利 200510051474研制的大蒜素注射液中加入了吐溫-80，同樣使其刺激性增大，且吐溫-80靜脈 注射存在一定的毒性；中國專利03124592.7和03112233.7研制了一種環(huán)糊精包合物的注射 液，雖然解決了大蒜素水中溶解度低的問題，但使用了大量的環(huán)糊精類化合物，不僅可能引 起溶血等不良反應(yīng)，而且也增加了制劑的成本。大蒜素是一種對光和熱都較為敏感的藥物， 而且具有刺激性和特異性的蒜臭，普通注射劑對大蒜素的上述缺點不能很好的避免。近年來， 隨著藥劑學(xué)領(lǐng)域研究的不斷深入，藥物輸送系統(tǒng)在提高藥效、方便患者使用方面的重要作用， 大蒜素的劑型研究情況體現(xiàn)了這個趨勢，為了解決此問題中國專利已公開了脂肪乳劑、脂質(zhì) 體、納米粒的注射給藥研究、自(微)乳化口服制劑等多種現(xiàn)代藥物傳送系統(tǒng)的劑型研究， 并且中國專利200410013573. 4、 200510020730.9、 200510046401.1、 200610019770. 6和中國 專利200410060815.5已公開了大蒜素制成脂肪乳劑以解決大蒜素水溶性差和體內(nèi)注射血管刺 激性大的問題。中國專利200510047949.8和200510002446.9研制了大蒜素固體脂質(zhì)納米粒和脂 質(zhì)體制劑，但這些制劑不同程度的存在著藥物滲漏及體內(nèi)藥物的突釋行為。目前尚未見大蒜 素亞微乳劑的專利申請，亞微乳的形成理論尚未成熟，但乳化劑在乳劑形成過程中的作用巳 被逐漸認(rèn)識，其中界面吸附膜學(xué)說認(rèn)為，乳化劑在降低兩相界面張力同時，乳化劑被吸附于 液滴周圍，有規(guī)律地排列在液滴界面形成吸附膜。界面吸附屏障阻礙液滴合并，使乳劑穩(wěn)定。 界面膜的強度與緊密度直接影響乳劑的穩(wěn)定性，乳化劑種類不同，則界面吸附不同。亞微乳 存在的主要問題是分散相液滴有合并變大的趨勢，因此進(jìn)一歩提高制劑的物理穩(wěn)定性是解決 該類制劑穩(wěn)定性的先決條件。以上公開專利并沒有闡明此劑型中藥物在油相、水相和油/水界 面膜相的分布特點和作用機理，本發(fā)明人通過長期對此劑型的深入研究，掌握了此劑型的微 觀結(jié)構(gòu)特點并通過試驗在宏觀上闡明此劑型的特點。通過優(yōu)化處方工藝使得此劑型中藥物在油相中的分布率達(dá)到95%以上，很大程度上提高了油相屮的載藥量及包封率，相當(dāng)大的程度 上提高了大蒜素在體外的物理穩(wěn)定性及體內(nèi)的化學(xué)穩(wěn)定性，而且提高大蒜素在油相的分布， 可以掩蓋其特異性的蒜臭和減輕刺激性，能大大提高患者的順應(yīng)性，并可進(jìn)一步形成產(chǎn)業(yè)化 規(guī)模。關(guān)于本發(fā)明在技術(shù)方案和效果以及闡明藥物在該劑型中分布特點方面明顯優(yōu)于上述專
利申請。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提高大蒜素或大蒜油制劑的水溶性和穩(wěn)定性、降低刺激性，提供種 制備工藝簡單，可供工業(yè)化高效率大生產(chǎn)的大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑及其制備方法 并闡明其制劑的藥物分布特點。本發(fā)明通過從微觀及宏觀上闡明了大蒜素在此劑型上的分布 特點，證明其能改善或提高藥物在油相中的包封率，具有控制藥物釋放，靶向定位釋放，降 低靜脈給藥的血管刺激性并進(jìn)一步提高了制劑的物理穩(wěn)定性等優(yōu)點。本發(fā)明以中鏈油、大豆 油、維生素E、油酸乙酯等含6-24個碳原子的脂肪酸甘油脂作為油相，采用適當(dāng)?shù)奶幏胶凸?藝，制備出平均粒徑小于200nm的一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，從而大大提高藥 物的穩(wěn)定性，增加患者的順應(yīng)性。大蒜素或大蒜油亞微乳劑是將有效劑量的大蒜素或大蒜油 作為藥物，并配以藥用輔料，藥用輔料包括注射用油、等滲調(diào)節(jié)劑、乳化劑、助乳化劑、pH 調(diào)節(jié)劑、抗氧劑；藥物注射用油=1: 1~1: 500。
-種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑的處方如下大蒜素或大蒜油0.5-3份重量
注射用油5-20份重量
乳化劑0.2-5份重量
助乳化劑0.1-5份重量
等滲調(diào)節(jié)劑0.5-3份重量
抗氧劑適量
pH調(diào)節(jié)劑適量
注射用水適量
所述的注射用油可以是精制大豆油、辛葵酸甘油脂、麻油、紅花油、橄欖油、花生油、棉子油、維生素E、、油酸乙酯、亞油酸甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、亞油酸乙酯、油酸 山梨醇酯、油酸甘油酯、椰子油C8/C10甘油單酯或雙酯、椰子油C8/C10丙二醇雙酯、椰子 油C8/C10甘油三酯、純化乙?；膯胃视王?、純化向日葵油單甘油酯中的一種或幾種混合物。 所述的乳化劑可以是磷脂、泊洛沙姆、聚乙二醇12-羥基硬脂酸酯(HS-15)、 a-生育酚琥珀酸酯-聚乙二醇酯(TPGS)、聚乙二醇琥珀酸酯、乙酸單甘油酯、聚甘油棕櫚酸二醇酯、 中的一種或幾種混合物；
所述的助乳化劑可以是油酸或其鹽、辛酸、葵酸、月桂酸、棕櫚酸、亞油酸、亞麻油酸、 硬脂酸、膽酸、去氧膽酸或其鹽、二十二碳六烯酸(DHA)、無水乙醇、正丁醇、正己醇、 乙二醇或丙二醇中的一種或幾種混合物；
所述的等滲調(diào)節(jié)劑可以是甘油、葡萄糖、蔗糖、果糖、麥芽糖、丙二醇、甘露醇、木糖 醇、山梨醇中的一種或幾種混合物。
所述的抗氧劑可以是惰性氣體、EDTA及其鹽類、維生素E、 ci-生育酚、a-醋酸生fT酚、 a -硫辛酸、維生素C及其衍生物中的一種或幾種混合物。
所述的pH調(diào)節(jié)劑可以是鹽酸、氫氧化鈉、醋酸、醋酸鈉、磷酸、磷酸鈉、檸檬酸、檸 檬酸鈉等中的一種或幾種混合物。
所述的一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑的處方工藝如下 初乳化工藝
(1) 油相的配制a.在配制灌中加入注射用油、乳化劑、助乳化劑、抗氧劑混合，加熱溫
度至30 9(TC，攪拌溶解后，加入藥物，強烈攪拌混勻； b.在配制灌中加入注射用油、助乳化劑、抗氧劑，加熱溫度至30 9(TC, 攪拌混勻溶解后，加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備a.將水、等滲調(diào)節(jié)劑、抗氧劑在30 9(TC下，同油相溫度攪拌使之完全混
溶；
b.將水、乳化劑、等滲調(diào)節(jié)劑、抗氧劑在30 9(TC下，同油相溫度攪拌使 之完全混溶；
(3) 在20 80。C時，將油相加入水相或水相加入油相，強烈攪拌或高速剪切分散混勻，形成 初乳；
(4) 用一定濃度的pH調(diào)節(jié)劑將pH值調(diào)節(jié)到3 9;
精乳化工藝
(5) 用高壓勻質(zhì)機或用微射流儀，將壓力調(diào)至50 2000bar，將溶液反復(fù)勻化，制得均勻分散 的大蒜素或大蒜油亞微乳劑；
無菌或滅菌工藝
(6) a.上述(5)制得乳劑在無菌條件下，用0.22Wn的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，氮氣流保護(hù)
下，濾液灌封后即得。
b.將上述(5)制得乳劑經(jīng)0.45Wn的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，濾液在氮氣流保護(hù)下灌封
7后，在下列濕熱滅菌條件下旋轉(zhuǎn)滅菌①100'C流通蒸汽旋轉(zhuǎn)滅菌30min;②115'C旋 轉(zhuǎn)熱壓滅菌30min;③12rC旋轉(zhuǎn)熱壓滅菌15min。 本發(fā)明所述的一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，如說明書附圖3所示，該乳劑由 油相、水相、和油/水界面膜相組成，其中油相載藥量按重量百分比為98%以上，水相中含量 不到1%，油/水界面膜相載藥量為0.01% 1%之間。
所制成乳劑的粒徑范圍為10 500nm，平均粒度80 300nm。Zeta電位范圍為-60 +60mv， 優(yōu)選的粒徑范圍為50 500nrn，平均粒度100 200nrn， Zeta電位絕對值范圍為10 60之間。 所制成的乳劑其藥物98%以上被包裹于油相中。
所制成的乳劑可與臨床上允許使用的電解質(zhì)輸液(氯化鈉注射液、復(fù)方氯化鈉注射液、 乳酸納注射液等)和營養(yǎng)輸液(糖類注射液、氨基酸注射液、脂肪乳注射液等)中的一種或 多種配伍稀釋后，使其大蒜素或大蒜油的含量在0.1 60mg/mL之間，配得的單位注射劑量 體積在lml 500 ml之間。
本發(fā)明研制的大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑具有以下優(yōu)點
1. 該亞微乳劑生理相容性好，降低了毒副作用，提高了機體耐受性；
2. 通過相分布試驗結(jié)果表明該亞微乳劑提高了物理及化學(xué)穩(wěn)定性，可以掩蓋其特異性的 蒜臭并提高了載藥量；
3. 通過藥動試驗結(jié)果表明該亞微乳劑具有靶向性，改善了藥物的釋放性質(zhì)，提高了藥物 的生物利用度和患者的順應(yīng)性；
4. 該亞微乳劑制備工藝簡單，成熟，便于工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1大鼠尾靜脈注射大蒜素亞微乳注射液(30 mg/kg)后不同時刻各組織藥物濃度柱形圖
圖2大鼠尾靜脈注射大蒜素注射液(30mg/kg)后不同時刻各組織藥物濃度柱形圖
圖3水包油型大蒜素亞微乳注射液相分布示意圖①油/水界面膜相②油相③藥物 圖4實施例l光強粒徑分布圖
圖5實施例2光強粒徑分布圖
圖6實施例3光強粒徑分布圖
圖7實施例4光強粒徑分布圖
圖8實施例5光強粒徑分布圖
圖9實施例6光強粒徑分布圖
圖10實施例7光強粒徑分布11 實施例8光強粒徑分布圖 圖12實施例9光強粒徑分布圖 圖13實施例10光強粒徑分布圖 圖14實施例11光強粒徑分布圖 圖15實施例12光強粒徑分布圖
具體實施例方式
實施例h
處方大蒜素0.5g，蛋黃卵磷脂5g，注射用中鏈油10g，氫氧化鈉適量，甘油2.2，其余 為注射用水，共100ml。
(1) 油相的配制在配制灌中加入注射用中鏈油，控制注射用中鏈油的溫度在8(TC，加入 蛋黃卵磷脂，強烈攪拌至溶解，降溫至3(TC加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水和甘油在3(TC下攪拌5min,使之完全混溶；
(3) 在30'C時，將油相加入水相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一步調(diào)節(jié)勻化壓力至500bar，第二步再調(diào)至1000bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑在無菌條件下用0. 22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，在氮氣流保護(hù)下灌封 即得本品。
實施例2:
處方大蒜素1.0g，大豆磷脂0.2g，注射用大豆油5g，葡萄糖5.0g，氫氧化鈉適量，其 余為注射用水，共100ml。
工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入注射用大豆油，控制注射用大豆油的溫度在50°C，加入 大豆磷脂，強烈攪拌至溶解，降溫至30。C加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水和葡萄糖在35t:下攪拌5min，使之完全混溶；
(3) 在30'C時，將油相加入水相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一步調(diào)節(jié)勻化壓力至600bar,第二步再調(diào)至1500bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑用100。C流通蒸汽旋轉(zhuǎn)滅菌30min，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。
實施例3:處方大蒜素l.Og，蛋黃卵磷脂lg，注射用大豆油20g，辛葵酸甘油酯2g，甘油2.5g， 油酸0.01g，氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入注射用大豆油、辛葵酸甘油酯和油酸，控制溫度在60'C，
加入蛋黃卵磷脂，強烈攪拌至溶解，降溫至3(TC加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、甘油在4(TC下攪拌5min，使之完全混溶；
(3) 在3(TC時，將水相加入油相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一歩調(diào)節(jié)勻化壓力至400bar，第二歩再調(diào)至2000bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) h述制得乳劑用0. 22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例4:
處方大蒜素1.5g,蛋黃磷脂0.8g，泊洛沙姆0.5g，油酸乙酯5g，甘油2.5g，維生素E0.01g， 氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入油酸乙酯、維生素E，控制溫度在70'C，加入蛋黃磷脂和 泊洛沙姆，強烈攪拌至溶解，降溫至4(TC加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、甘油在40。C下攪拌5min，使之完全混溶；
(3) 在4(TC時，將水相加入油相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5. 4;
(5) 過勻質(zhì)儀第一步調(diào)節(jié)勻化壓力至300bar，第二歩再調(diào)至1000bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑用115。C旋轉(zhuǎn)熱壓滅菌30min，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例5:
處方大蒜素3g，蛋黃磷脂1.2g，油酸3g，注射用大豆油10g，甘油2.5g， a -硫辛酸 O.Olg，氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入注射用大豆油，控制溫度在80。C，加入蛋黃磷脂和油酸，
強烈攪拌至溶解，降溫至3crc加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、甘油和a-硫辛酸在3(TC下攪拌5min，使之完全混溶；
(3) 在3(TC時，將油相加入水相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一步調(diào)節(jié)勻化壓力至500bar,第二步再調(diào)至1200bar，將溶液反復(fù)勻化；(6)上述制得乳劑用0. 22咖的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例6:
處方大蒜素5g，蛋黃磷脂l,2g，注射用大豆油3g，辛葵酸甘油脂3g，油酸2,lg,甘 油2.5g，維生素E0.05g，泊洛沙姆0.3g，氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入注射用大豆油、維生素E和辛葵酸甘油脂，控制溫度在 60°C，加入蛋黃磷脂和油酸，強烈攪拌至溶解，降溫至3(TC加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、甘油、泊洛沙姆在3(TC下攪拌5min，使之完全混溶
(3) 在3(TC時，將水相加入油相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一歩調(diào)節(jié)勻化壓力至600bar，第二步再調(diào)至2000bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑用0.22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。
實施例7:
處方大蒜素1.0g，蛋黃磷脂2g，注射用大豆油3g,純化向閂葵油單甘油酯3g，亞油 酸2.1g，甘油2.5g，維生素E0.05g，氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝-
(1) 油相的配制在配制灌中加入注射用大豆油、維生素E和純化向日葵油單甘油酯，控制 溫度在8(TC，加入蛋黃磷脂和亞油酸，強烈攪拌至溶解，降溫至5(TC加入藥物，強烈攪拌混 勻；
(2) 水相的制備將水、甘油在5(TC下攪拌5min，使之完全混溶；
(3) 在50'C時，將油相加入水相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一步調(diào)節(jié)勻化壓力至700bar，第二步再調(diào)至1900bar,將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑IO(TC流通蒸汽旋轉(zhuǎn)滅菌30min，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例8:
處方大蒜素1.5g，大豆磷脂1.2§，純化向日葵油單甘油酯3g，辛葵酸甘油脂3g，油酸 2.1g，甘油2.5g，維生素E0.05g，氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入辛葵酸甘油脂、維生素E和純化向R葵油單甘油酯，控制 溫度在70。C，加入大豆磷脂和油酸，強烈攪拌至溶解，降溫至30。C加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、甘油在3(TC下攪拌5min，使之完全混溶；(3) 在3(TC時，將水相加入油相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一歩調(diào)節(jié)勻化壓力至600bar，第二步再調(diào)至1800bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑在115t:旋轉(zhuǎn)熱壓滅菌30min，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例9:
處方大蒜素1.0g，蛋黃磷脂1.28，泊洛沙姆0.4g，油酸乙酯5g，葡萄糖2.0g，維生素 E0.01g，氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入油酸乙酯，控制溫度在7(TC，加入蛋黃磷脂、維生素E， 強烈攪拌至溶解，降溫至30。C加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、葡萄糖和泊洛沙姆在3(TC下攪拌5min，使之完全混溶；
(3) 在3(TC時，將油相加入水相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一步調(diào)節(jié)勻化壓力至400bar，第二歩再調(diào)至1000bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑用0.22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例10:
處方大蒜素l,2g，蛋黃磷脂L2g,泊洛沙姆2,2g，注射用大豆油10g，甘油2.6g， a-硫辛酸0.01g，氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入注射用大豆油，控制溫度在8(TC，加入蛋黃磷脂和泊洛 沙姆，強烈攪拌至溶解，降溫至3(TC加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、甘油和a-硫辛酸在30。C下攪拌5min，使之完全混溶；
(3) 在30。C時，將油相加入水相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一歩調(diào)節(jié)勻化壓力至500bar，第二歩再調(diào)至1100bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑用0.22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例11:
處方大蒜素1.5g，聚乙二醇12-羥基硬脂酸酯(HS-15)5g，聚乙二醇月桂酸甘油酯2.5g， 油酸甘油酯3g，月桂酸1.8g,甘油2.5g，維生素E0.05g，氫氧化鈉適量，其余為注射用水， 共100ml。
工藝
12(1) 油相的配制在配制灌中加入聚乙二醇月桂酸甘油酯和油酸甘油酯，控制溫度在7(TC， 加入聚乙二醇12-羥基硬脂酸酯(HS-15)、維生素E和月桂酸，強烈攪拌至溶解，降溫至30 'C加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、甘油在3(TC下攪拌5niin，使之完全混溶；
(3) 在3(TC時，將水相加入油相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一歩調(diào)節(jié)勻化壓力至600bar，第二歩再調(diào)至1800bar，將溶液反復(fù)勻化；
(6) 上述制得乳劑在115'C旋轉(zhuǎn)熱壓滅菌30min，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例12:
處方大蒜素0.8g，大豆磷脂1.2g，椰子油C8/C10甘油單酯3g，棉子油2.6g，油酸2.3g, 甘油2g，維生素E0.05g，氫氧化鈉適量，其余為注射用水，共100ml。 工藝
(1) 油相的配制在配制灌中加入椰子油C8/C10甘油單酯和棉子油，控制溫度在7(TC，加 入維生素E和油酸，強烈攪拌至溶解，降溫至3(TC加入藥物，強烈攪拌混勻；
(2) 水相的制備將水、甘油和大豆磷脂在45。C下攪拌5min，使之完全混溶；
(3) 在30'C時，將水相加入油相，強烈攪拌混勻，形成初乳；
(4) 用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值到5;
(5) 過勻質(zhì)儀第一步調(diào)節(jié)勻化壓力至600bar,第二步再調(diào)至1800bar，將溶液反復(fù)勻化(6) 上述制得乳劑用0.22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，在氮氣流保護(hù)下灌封即得本品。 實施例13:
本發(fā)明制劑的相分布試驗 試驗條件24'C，相對濕度58%。
試驗樣品由實施例l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12所得制劑。 試驗方法與結(jié)果
由于本品實際為亞微乳制劑，藥物在各相分布的試驗結(jié)果是重要的質(zhì)量指標(biāo)之一。亞微 乳劑具有油相、水相和油/水界面膜相。測定藥物相分布的關(guān)鍵是將這三相從乳劑中分離出來, 以考察亞微乳中藥物在各相的分布。采用破乳和離心的方法使微觀的乳滴發(fā)生聚集形成宏觀 的分層現(xiàn)象，其過程并不改變藥物在三相中的分配趨勢，并能分離出油相、水相、油/水界面
膜相。用高效液相色譜法對其進(jìn)行含量測定，色譜條件為以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，
色譜柱C18 (4.6x250 mm， 5 um);以甲醇水甲酸(87: 13: 0.1)為流動相，檢測波 長220 rnn'柱溫35°C，流速1.0 ml/min。系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果表明理論塔板數(shù)為大于10000,符合要求；檢測限為0.9ng，定量限為2.7ng;通過酸、堿、氧化和熱破壞試驗結(jié)果表 明其分離度符合要求；以峰面積對進(jìn)樣量回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性方程為A=29626C+36251 (r=0.9997)。結(jié)果表明，在25.50-127.5ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；精密度試驗結(jié)果 RSD。/。為0.60。/。；閂內(nèi)穩(wěn)定性試驗結(jié)果RSD。/。為1.33%，回收率試驗結(jié)果表明其平均回收率為 99.8%， RSDfl/(^0.18%,均符合要求。
精密吸取油相適量，加甲醇定容至刻度制成一定濃度的油相供試品溶液，作為油相含量 測定溶液，分別直接吸取水相溶液及油相供試品溶液204L注入液相色譜儀，照上述測定條件 的方法，以外標(biāo)法分別計算藥品總量、油相和水相中藥物的含量，油/水界面膜相中的量以公 式為藥物在油/水界面膜相中的量=總藥量一 (水相中的藥物+油相中的藥物)計算即可得到。 具體的測定結(jié)果見表l，圖3。
表1大蒜素亞微乳注射液相分布試驗結(jié)果
制劑總藥量 (%)油相中藥量 (%)水相中藥量 (%)油/水界面膜相中藥量 (%)包封率 (%)
實施例1101.2100.90.00980.29099.990
實施例2102.6100.40.01272.18799.988
實施例3100.3100.10.02120.17999.979
實施例4100.899.60.0026U9799.997
實施例5101100.50.01450.48699.986
實施例6100.2跳l0.00910週99.991
實施例7102.399.70.01672.58399駕
實施例8101.9100.60.02181.27899.979
實施例9103.2101.40.01871.78199.982
實施例10101.4100.50.00810.89299.992
實施例11102.7100.90.02371.77699.977
實施例12102.699.60.01432.98699.986
結(jié)果表明，藥物幾乎全部分布在油相中，進(jìn)一步證明了本發(fā)明可將大蒜素包裹于油相中，
經(jīng)計算在100%左右，這樣就減少了主藥與環(huán)境中光和熱接觸的幾率，不僅可以提高大蒜素的
物理及化學(xué)穩(wěn)定性，而且可以適量掩蓋其特異性的蒜臭味和減輕刺激性達(dá)到劑型設(shè)計的目的
和意義。計算公式如下
包封率(%)=總藥量-水相中鵬量x薩
總藥量實施例14:
本發(fā)明制劑的粒度測定試驗
試驗樣品由實施例l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12所得制劑。 試驗方法與結(jié)果
取本品O.lmL，用純化水(通過0.22pm膜濾過)分別稀釋至一定倍數(shù)，混勻，作為供 試液，用動態(tài)激光散射粒徑測定法測定。見表2，圖4至圖15。
' 表2大蒜素亞微乳注射液粒度測定試驗結(jié)果
光強粒徑分布(nm)平均粒 徑25%50%75%90%99%80%
實施例1163.8138. 3159.9184.9210. 7263. 7191.6
實施例2149. 5105.9138.2180.4229.3346.4192.7
實施例3152.8114.9144.3181. 1222.2316. 0191.6
實施例4152.0113.6143.2180.5222.3318.1191. 1
實施例5152.9113.8143.9181.8224.4322.5192.7
實施例6146. 6106.7136.8175. 5219.6322.9186.7
實施例7202. 3169.5197.2229.4262.8332.1238. 1
實施例8164.8144.6162.3182. 1202.0241.6187.4
實施例9149.6115.5142.5175.7212.3293.7185. 1
實施例10151. 5108.7140.7182.2229.9343.0194.3
實施例11151. 7112.5142.5180.6223. 5322.5191.5
實施例12150.8114.2142.7178.4218. 1308.2188.5
結(jié)果表明，本發(fā)明所制成的乳劑粒徑范圍為50 500nm，平均粒度100 200nm。
實施例15:
本發(fā)明制劑與現(xiàn)有注射劑對比的藥代動力學(xué)試驗 試驗樣品由實施例6所得制劑和現(xiàn)有大蒜素注射液。 試驗動物SD大鼠，雌雄各半。 試驗方法與結(jié)果-
大蒜素亞微乳注射液組給藥健康SD雌性大鼠54只，體重l柳 230g，隨機分成3 個劑量組(低劑量15只，中劑量18只，高劑量21只)，每個劑量組進(jìn)一歩隨機分成6 組(低劑量5組，高劑量7組)。給藥前禁食12h，自由飲水。按15mg/kg、 30mg/kg、45 mg/kg的劑量經(jīng)大鼠尾靜脈注射給予大蒜素亞微乳注射液，經(jīng)大鼠眼球后靜脈叢取靜 脈血，置肝素化試管中，迅速進(jìn)行全血樣品處理。雄性大鼠給藥及全血樣品采集同雌性大鼠。
結(jié)論
大鼠靜脈注射給予劑量分別為15， 30和45mg/kg的大蒜素亞微乳注射液后，大蒜素 全血消除半衰期/1/2分別為0.62 ± 0.08， 3.44 ± 0.02和4.37 ± 0.02 min; J"C0.t分別為7.23 ± 0.16， 44.5 ± 1.78禾口 442 ± 47.7 ng-min/mL; Jt/CVoo分另ll為8.25 ± 0.60， 49.8 ± 1.01禾口 451 ±46.4嗎.min/mL;平均滯留時間MKr分別為0.66 ± 0.03， 2.56 ± 0,33禾口 1.59 ±0.12 min;清除率C丄分別為1.83 ± 0.13， 0.30 ± 0.01和0.034 ± 0.004 L/min/kg;表觀分布容積 Fz分別為1.62±0.10， 1.50 ± 0.04禾卩0.21 ± 0.02 L/kg。采用DAS 2丄1軟件對大鼠靜脈注 射給予大蒜素亞微乳注射液后的大蒜素全血藥物濃度進(jìn)行房室模型擬合，發(fā)現(xiàn)該藥物在 大鼠體內(nèi)的動力學(xué)過程符合二室模型。
實施例16:
本發(fā)明制劑與現(xiàn)有注射劑對比的組織分布試驗 試驗樣品由實施例6所得制劑和現(xiàn)有大蒜素注射液。 試驗動物SD大鼠，雌雄各半。 試驗方法與結(jié)果
大蒜素亞微乳注射液組給藥健康SD大鼠18只，雌雄各半，隨機分成3組，每組
6只，雌雄各3只，給藥前禁食12h，自由飲水。以30 mg/kg的劑量尾靜脈注射給予大 蒜素亞微乳注射液，分別于給藥后0.5min、 2min、 6min斷頭取血后，立即解剖采集心、 肝、脾、肺、腎、腦組織及全血0.4mL。
市售大蒜素注射液組給藥健康SD大鼠18只，雌雄各半，隨機分成3組，每組6 只，雌雄各3只，給藥前禁食12h，自由飲水。以30mg/kg的劑量尾靜脈注射給予大蒜 素注射液，分別于給藥后0.5 min、 2min、 6min斷頭取血后，立即解剖采集心、肝、脾、 肺、腎、腦組織及全血0.4mL。
結(jié)果大鼠尾靜脈注射30mg/kg大蒜素亞微乳注射液和大蒜素注射液(市售)后，在各 時間點肝、脾、腎中均未檢測到藥物。其它組織三個時間點大蒜素濃度的排序如下所述， 其組織分布試驗結(jié)果見圖1、圖2。
結(jié)論大鼠尾靜脈注射大蒜素制劑后，肝、腎中未檢測到藥物，而肺中藥物濃度較高，說明該藥可能主要經(jīng)肺排泄，腦中藥物濃度較高說明大蒜素可以通過血腦屏障到達(dá)腦組 織，但6min時幾乎所有的大鼠腦中都檢測不到藥物，說明藥物在腦組織中沒有蓄積。
與市售大蒜素注射液相比，大蒜素亞微乳注射液在組織中駐留時間較長，尤其在血 漿中的藥物濃度是市售制劑2倍以上，可以很好地將藥物輸送至病變部位；在心臟中的 藥物濃度分布趨緩，可以降低大蒜素在峰濃度下對心臟的刺激性，同時保證心腦血管疾 病治療所需的濃度。因此，將大蒜素制成乳劑，較市售的注射用大蒜素具有明顯優(yōu)勢。
藥理藥效文獻(xiàn)資料顯示，大蒜素可以用于治療肺部感染，另外還有降低血脂，預(yù)防 心腦血管疾病的發(fā)生，這與組織分布的試驗結(jié)果相一致。因此，將大蒜素制成乳劑，較 市售的注射用大蒜素具有明顯優(yōu)勢，達(dá)到劑型設(shè)計的目的。
實施例17:
本發(fā)明制劑的安全性試驗。具體包括過敏試驗資料；溶血試驗資料；血管刺激性試驗。
試驗方法與結(jié)果如下
將大蒜素亞微乳注射液1支稀釋在250 ml的5%葡萄糖注射液中，制成供試品溶液。 給豚鼠腹腔注射該溶液0.5ml/只，隔閂一次，共三次，給藥后第14天及第21天分 別股靜脈注射該溶液l.O ml/只，結(jié)果均未見豚鼠有過敏反應(yīng)。給予2%新鮮蛋清的豚鼠 在給予蛋清后第14天及第21天分別經(jīng)股靜脈注射蛋清后均出現(xiàn)過敏反應(yīng)，且皆于15 min內(nèi)死亡。
大蒜素亞微乳注射液的供試品溶液在體外試驗條件下，在加樣0.25-4.0小時內(nèi)對家 兔紅細(xì)胞無溶血作用和紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。
給家兔耳靜脈緩慢滴注大蒜素亞微乳注射液的供試品溶液，劑量為1.2mg/kg，每F1 一次，連續(xù)三R。結(jié)果家兔耳靜脈給藥部位肉眼觀察無明顯變化；組織病理切片顯微 鏡檢顯示距注射部位l cm處血管、5cm處血管內(nèi)皮連續(xù)、完整，未見增生、腫脹；血 管周圍組織未見炎性細(xì)胞浸潤及壞死；管腔內(nèi)無血栓形成。大蒜素亞微乳注射液對家兔 耳靜脈血管未見剌激作用。
權(quán)利要求
1、一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，其特征是治療有效量的大蒜素或大蒜油加入輔料后，通過乳化劑或助乳化劑的作用，被包裹于油相和油/水界面膜相中制成的水性分散體，分散相中藥物的包封率在98％以上，含有0.5-3份重量的大蒜素或大蒜油、所述的輔料有5-20份重量的注射用油、0.2-5份重量的乳化劑、0.1-5份重量的助乳化劑、適量的等滲調(diào)節(jié)劑、抗氧劑、pH調(diào)節(jié)劑和適量的注射用水。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，其特征是該非均相分散 體系由油相、水相、和油/水界面膜相組成，其中油相載藥量按重量百分比為98%以上，水相 中含量不到1%，油/水界面膜相載藥量為0.01% 1%之間。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，其特征是可與臨床 允許使用的電解質(zhì)輸液(氯化鈉注射液、復(fù)方氯化鈉注射液、乳酸鈉注射液等)和營養(yǎng)輸液(糖類注射液、氨基酸注射液、脂肪乳注射液等)中的一種或多種配伍稀釋后，使其大蒜素 或大蒜油的含量在0.1 60mg/mL之間，配得的單位注射劑量體積在lml 500 ml之間。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，其特征是所 述的注射用油為含6 24個碳原子的脂肪酸甘油酯，可以是精制大豆油、辛葵酸甘油脂、麻 油、紅花油、橄欖油、花生油、棉子油、維生素E、、油酸乙酯、亞油酸甘油酯、聚乙二醇月 桂酸甘油酯、亞油酸乙酯、油酸山梨醇酯、油酸甘油酯、椰子油C8/C10甘油單酯或雙酯、椰 子油C8/C10丙二醇雙酯、椰子油C8/C10甘油三酯、純化乙?；膯胃视王?、純化向閂葵油 單甘油酯中的一種或幾種混合物。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1 4所述的任一項一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，其特征是所述 的乳化劑可以是磷脂、泊洛沙姆、聚乙二醇12-羥基硬脂酸酯(HS-15)、 a-生育酚琥珀酸酯 -聚乙二醇酯(TPGS)、聚乙二醇琥珀酸酯、乙酸單甘油酯、聚甘油棕櫚酸二醇酯中的一種或 幾種混合物；乳化劑中可以根據(jù)需要加入助乳化劑，助乳化劑可以是油酸或其鹽、辛酸、葵 酸、月桂酸、棕櫚酸、亞油酸、亞麻油酸、硬脂酸、膽酸、去氧膽酸或其鹽、二十二碳六烯 酸(DHA)、無水乙醇、正丁醇、正己醇、乙二醇或丙二醇中的一種或幾種混合物；所述的 等滲調(diào)節(jié)劑可以是甘油、葡萄糖、蔗糖、果糖、麥芽糖、丙二醇、甘露醇、木糖醇、山梨醇 中的一種或幾種混合物；所述的抗氧劑可以是惰性氣體、EDTA及其鹽類、維生素E、 ci-生 宵酚、a-醋酸生育酚、a-硫辛酸、維生素C及其衍生物中的一種或幾種混合物；所述的pH 調(diào)節(jié)劑可以是鹽酸、氫氧化鈉、醋酸、醋酸鈉、磷酸、磷酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉等中的一 種或幾種混合物。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1 5所述的任一項一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，其特征是所制成乳劑的粒徑范圍為10 500nm，平均粒度80~300nm; Zeta電位范圍為-60 +60mv。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑，其特征是優(yōu)選的粒徑范圍為50 500nrn，平均粒度100 200nm， Zeta電位絕對值范圍為10 60之間。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1 7所述的任一項一種大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑的制備方法，其特 征是(1) 油相的配制a.在配制灌中加入注射用油、乳化劑、助乳化劑、抗氧化劑混合，氮氣流保護(hù)下，加熱至30 9(TC，攪拌溶解后，加入藥物，混合均勻； b.在配制灌中加入注射用油、助乳化劑、抗氧劑，氮氣流保護(hù)下，加熱 至30 9(TC，攪拌溶解后，加入藥物，混合均勻；(2) 水相的制備a.將水、等滲調(diào)節(jié)劑、抗氧劑在30 9(TC下，攪拌使之完全溶解；b.將水、乳化劑、等滲調(diào)節(jié)劑、抗氧劑在30 9(TC下，攪拌使之完全溶解；(3) 在30 90。C，氮氣流保護(hù)下，將油相加入水相或水相加入油相(a、 a相加或b、 b相加)， 強烈攪拌或高速剪切分散混勻，形成粗乳；(4) 用一定濃度的pH調(diào)節(jié)劑將pH值調(diào)節(jié)到3 9;(5) 精乳化工藝用高壓勻質(zhì)機或用微射流儀，將壓力調(diào)至50 2000bar，將上述粗乳溶液反復(fù)勻化，制得 均勻分散的大蒜素或大蒜油亞微乳劑；(6) 無菌或滅菌工藝a. 上述(5)制得乳劑在無菌條件下，用0.22Mrn的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，氮氣流保護(hù) 下，濾液灌封后即得。b. 將上述(5)制得乳劑經(jīng)0.45Mra的微孔濾膜進(jìn)行過濾，濾液在氮氣流保護(hù)下灌封后， 選擇下列濕熱滅菌條件下的其中一種方法旋轉(zhuǎn)滅菌后即得①10(TC流通蒸汽旋轉(zhuǎn)滅菌 30min;②115。C旋轉(zhuǎn)熱壓滅菌30min;③121。C旋轉(zhuǎn)熱壓滅菌15min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種分布于內(nèi)向(油相)的大蒜素和大蒜油水包油型亞微乳劑及其制備方法。該乳劑的處方中含有0.5-3份重量的大蒜素或大蒜油作為藥物，所述的大蒜素或大蒜油加入藥用輔料制成大蒜素或大蒜油亞微乳劑，所述的藥用輔料包括5-20份重量的注射用油、0.2-5份重量的乳化劑、0-5份重量的助乳化劑、0.5-3份重量的等滲調(diào)節(jié)劑、適量的抗氧劑、適量的pH調(diào)節(jié)劑和適量的注射用水。本發(fā)明從宏觀及微觀上探討了大蒜素或大蒜油在水包油型分散體系中，油、油/水界面膜、水中的藥物分布，將98％以上的藥物包裹于油相中，游離在水相中的藥物不到1％，解決了疏水性藥物大蒜素或大蒜油靜脈注射制劑的問題，并提高了其乳劑的穩(wěn)定性，還減輕了靜脈注射時的血管刺激性，能大大提高患者的順應(yīng)性。本發(fā)明可用于抗菌和心腦血管及腫瘤的輔助治療。
文檔編號A61K47/44GK101524459SQ20081001334
公開日2009年9月9日 申請日期2008年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月24日
發(fā)明者紅 寧, 李淑斌, 娜 高, 魏曉瑩, 海 黃 申請人:沈陽萬愛普利德醫(yī)藥科技有限公司