專利名稱：：局部皮膚用組合物、它們的制備方法和它們的應用的制作方法局部皮膚用組合物、它們的制備方法和它們的應用相關申請的交叉引用本申請是2006年7月31日遞交的美國專利申請序列號No.11/497，152的繼續(xù)，該美國專利申請是2002年5月24日遞交的美國專利申請序列號No.10/155，305的部分繼續(xù)申請，而后者進而是2001年5月31日以英語作為WO/2001/037788出版的PCT/US00/31933的部分繼續(xù)申請。這些申請中的每一件的全部內容被引入本文，就象再次充分闡述一樣。
背景技術：
：鑒于老年化的人口，已經(jīng)增加了對老年化的研究，因為這牽涉到人體，更具體地說牽涉到人的皮膚。例如，以細紋線、皺紋等的存在所顯示的老化皮膚的處理已受到很多關注。老年化的皮膚標志如細紋線、鈹紋、松弛和色素沉著過度已經(jīng)通過包括外科手術、激光處理和化妝品在內的許多手段來防止。化妝品處理包括各種霜劑和化妝水的使用，以改變皮膚老化的影響?，F(xiàn)有技術中許多文獻集中于單種主要組分的使用，以防止幾個有害的老化影響中的一個。例如，一種策略是使用一種或多種醇酸或視黃酸刺激真皮細胞的再生長，沒有其它組分。這一途徑是有缺陷的，因為它沒有認識到老化是由多種試劑對皮膚的有害相互作用所引起的，來源于多種影響源，通過多個同時損害途徑對皮膚造成損害。更全面的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)環(huán)境因素，如應激、日光暴露和食物、水和空氣中的雜質也不利地影響皮膚的表皮層和真皮層的組分，進而影響和改變皮膚的外觀并導致過早老化的外觀。例如，一些因素，如自由基、活'f生氮蔟(activenitrogenspecies)("RNS")、'活'f"生氧蔟(activeoxygenspecies)("ROS")和可具有或可不具有各自由基、RNS和ROS的特性的其它氧化性物質(oxidizingspecies)("OOS")將會不利地影響人的身體(包括皮膚)。已發(fā)現(xiàn)會損害和不利地影響皮膚外觀的以上指出的組之內的具體因素包括一氧化氮、超氧化物自由基、過氧化氫和羥自由基。這些因素已經(jīng)牽涉到許多的皮膚病癥，包括光致?lián)p傷、皮膚的一般老化、接觸性皮炎、起皺紋、脂質過氧化、酶降解、膠原和/或彈性蛋白的減少和破壞、DNA3的降解和受抑制的復制、炎癥和對皮膚組織的一般損害。ROS物質包括超氧化物(02-)、過氧化氫(H202)、過氧自由基(H02和R02)、烷基過氧化物(R202)、羥基自由基(OH)、烷氧基自由基(OR)和單線態(tài)氧。OOS物質包括次鹵酸(HOX)(其中X是氯、溴、碘)、Z-胺(其中Z是氯化或氡化的含胺化合物)、活性氮簇("RNS")—氧化氮(NO)、氨、環(huán)加氧酶、磷脂酶A2、磷脂酶C和過渡金屬。認為ROS中的每一種(直接或作為中間體)作用于細胞膜和/或其它細胞成分(包括細胞器及其內容物)，以不利地損害皮膚。因此，仍然需求局部用皮膚處理組合物和方法，該組合物和方法針對以上指出的ROS、RNS和OOS中的每一種提供防衛(wèi)作用。另外，如果此類組合物修復由以上所指出的ROS、RNS和OOS所引起的損傷，則是所希望的。發(fā)明概述本發(fā)明涉及包括所選擇的組分的組合物，其針對于不利地影響人^(包括皮膚)的以上所指出的自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物質(oxidizingspecies)的各種途徑機理提供防衛(wèi)作用。本發(fā)明因此還包括將本發(fā)明的組合物施用于皮膚，以抑制不利地影響皮膚的病因性因素，由此治療并改善皮膚質量的方法。一般地，本發(fā)明的組合物和方法涉及防止以上所指出的自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物質對人體(包括皮膚)的不利或有害影響。因此，本發(fā)明包括各種組合物，其包含至少一種抗自由基組分和/或抗超氧化物組分和/或抗過氧化氫組分和/或抗羥基自由基組分和/或斷鏈組分，本發(fā)明的實施方案包括組合物，該組合物包含有助于細胞能量產生的分，和/或有助于或提供細胞活性的組分。例如，已發(fā)現(xiàn)積極影響一種或多種上述因素的本發(fā)明組合物包含柑橘組分如葡萄柚組分(如葡萄柚提取物)、超氧化物歧化酶組分、谷胱甘肽組分、四氫二阿魏酰甲烷組分和/或姜黃組分(如姜黃提取物)、生物類黃酮組分(如柑橘生物類黃酮組分)、葡萄組分(如葡萄籽提取物)、綠茶組分(如綠茶提取物)、生育酴和生育酚衍生物如生育酚乙酸酯。已經(jīng)類似地發(fā)現(xiàn)積極影響改善皮膚健康的因素的本發(fā)明的另一個爽施方案是一種組合物，該組合物包含大豆組分(如大豆蛋白組分)、稻來(rice)組分(如稻米蛋白和更具體的水解稻米蛋白)和向日葵籽組分(如向曰葵籽提取物)。本發(fā)明的再一種組合物包含積雪草組分(如積雪草提取物)、玉米仁組分(如玉米仁提取物)、海藻組分(如海藻提取物)和泛醌(輔酶Q)。本發(fā)明的另一種組合物包含迷迭香組分(如迷迭香提取物)、卵磷脂組分、神經(jīng)酰胺組分(如神經(jīng)酰胺3組分)、谷甾醇組分(如P谷甾醇)、甘油組分、泛醇組分、脯氨酸組分(如L-脯氨酸)和透明質酸鹽組分(如透明質酸鈉)。如以下進一步解釋的，本發(fā)明進一步包括組合物，該組合物含有在以上段落中提到的每一種前迷組合物組分(更具體為其中所含的活性劑)中的一種或多種的組合。因此，還提供了為了以上所指出的任何原因將組合物施用于皮膚上、維持和/或改善個體的皮膚狀況的方法。因此，組合物可以施用于皮膚上，例如局部地施用一定量(例如有效量)的本發(fā)明的各種組合物中的一種或多種。本文提供根據(jù)本發(fā)明的組合物的制備方法。附圖簡述圖1是顯示了在施用配制劑的人皮膚上UV暴露后30分鐘時的紅斑增加的圖示，圖2是顯示了在施用配制劑的人皮膚上UV暴露后IO小時時的紅斑增加的圖示。圖3是顯示了樣品對原膠原分泌的影響的圖示。數(shù)據(jù)表達為通過將組織培養(yǎng)上清液中檢測到的原膠原的量除以WST-l減少量所計算的膠原/存活力比率，作為在暴露時期之后細胞存活能力的指標。圖4是顯示了樣品對彈性蛋白分泌的影響的圖示。數(shù)據(jù)表達為通過將在組織培養(yǎng)上清液中檢測到的彈性蛋白的量除以WST-1減少量所計算的彈性蛋白/存活力比率，作為在暴露時期之后細胞存活能力的指標。5圖5是顯示了樣品對MMP-1活性的影響的圖示。數(shù)據(jù)表達為％對照MMP-1活性。水平線表示100。/?；钚浴D6是顯示了樣品對MMP-9活性的影響的圖示。數(shù)據(jù)表達為％對照MMP-9活性。水平線表示100%活性。圖7是顯示了樣品對彈性蛋白酶活性的影響的圖示。數(shù)據(jù)表達為％對照彈性蛋白酶活性。水平線表示100%活性圖8是顯示了樣品對由RAW264.7細胞所進行的NO生產的影響的圖示。數(shù)據(jù)表達為與LPS刺激的陽性對照相比而言的所產生的。/。NO。L6=Lipochroman-6、NT=Nutriene生育三烯酴類、TQS-Y畫生育醌S、VC=ViapureCitrus、SZ=SoybeanZymbiosome、NPR=NABPikearobusta。圖9是顯示樣品對HEK001角質化細胞中脂質染色的影響的圖示。數(shù)據(jù)表達為來自未處理的細胞的％對照脂質。發(fā)明詳述正如在以上概述中所解釋的，本發(fā)明提供組合物，該組合物提供對坑人體(包括皮膚)上各種的自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物質的防衛(wèi)機理。這些組合物通過，例如，增加皮膚細胞中的能量和/或抑制不利的酶和/或維持和/或改進皮膚中的彈性蛋白、膠原和糖胺聚糖的質量和數(shù)量，來幫助維持和/或改善皮膚狀況。一般而言，本發(fā)明的組合物包含一種或多種的以下組分柑橘(citrus)組分，例如葡萄柚組分，如葡萄柚提取物組分，優(yōu)選葡萄柚皮提取物，優(yōu)選芽菜素(apigenin)組分；超氧化物歧化酶組分；谷胱甘肽組分；四氫二阿魏酰甲烷組分；酚類組分，如多元酚組分；，精油組分；抗壞血酸組分；姜黃組分，如姜黃提取物；類黃酮組分，例如生物類黃酮組分，如柑橘生物類黃酮；葡萄組分，如葡萄籽提取物；綠茶組分，如綠茶提取物；生育盼和/或它們的衍生物，如乙酸生育盼酯；大豆組分，如大豆蛋白組分；稻米組分，如稻米蛋白，更具體為水解稻米蛋白；向曰葵籽組分，如向日葵籽提取物；甲氧基肉桂酸辛酯(octinoxate)組分；丁基甲氧基二苯甲?；?甲烷組分；積雪草組分，如積雪草提取物；玉米仁組分，如玉米仁提取物；海藻組分，如海藻提取物，優(yōu)選掌狀海帶提取物；四異棕櫚酸抗壞血酸酯組分；輔酶組分，如泛醌(輔酶Q);迷迭香組分，如迷迭香提取物，優(yōu)選熊果酸組分；印砩脂組分；神經(jīng)醜胺組分，如神經(jīng)酰胺3;P谷甾醇組分；甘油組分；泛醇組分，如d-泛醇；腺苷組分；脯氨酸組分，如L-脯氨酸；透明質酸鹽組分，如透明質酸鈉鹽；碳水化合物組分；B維生素組分；和phylate組分。本文使用的術語"復合物(complex)"意指為了關注與哺乳動物皮膚的健康和維護有關的常見話題所選擇的各種成分的摻混物。這些成分的一種此類復合物將集中于調節(jié)活性氧簇和活性氮簇的作用。因其抗氧化劑性能而通常用于防止對皮膚的自由基損害、因此防止自由基損害引起的老化效應的此類組合物的一個具體實施方案包括柑橘組分(優(yōu)選含有茅菜素的柑橘組分)的組合。所述柑橘組分可以從檸檬、橙子、橘子、葡萄柚、胡椒、蕎麥、黑茶薦子(blackcurrents)、杏、櫻桃、葡萄和梅子得到。優(yōu)選的柑橘組分是葡萄柚組分，更具體為包含芽菜素的或簡單是芽菜素的葡萄柚提取物。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)柑橘組分(尤其含有萍菜素的柑橘組分，如水果提取物，更具體為葡萄柚提取物)抑制由活性氮簇(尤其，一氧化氮(NO)產生)所引起的損害。已進一步發(fā)現(xiàn)柑橘組分抑制脂質過氧化，以及由自由基引起的炎癥。因此，已發(fā)現(xiàn)含有柑橘組分(尤其優(yōu)選含有芽菜素的葡萄柚提取物組分)的本發(fā)明組合物抑制由一氧化氮產生和/或脂質過氧化引起的對皮膚的損害和/或抑制炎性因子(如由自由基引起的炎癥)。組合物一般進一步包含超氧化物歧化酶組分，它抑制由侵蝕例如酶的超氧化物所引起的對蛋白質、彈性蛋白、膠原和DNA的損害；和谷胱甘肽組分，它抑制由過氧化氫所引起的損害。該組合物的另外組分可包括酚類組分和/或一種或多種所謂的"精油"和/或抗壞血酸("維生素C，，)和z或四氳二阿魏酰甲烷，其例如可在姜黃組分(如姜黃提取物)中發(fā)現(xiàn)，其它組分可包括類黃酮組分，例如生物類黃酮組分，如來自例如葡萄柚、檸檬或橙子的柑橘生物類黃酮組分；和多元紛組分，它例如可在葡萄組分(如葡萄籽提取物)中見到，優(yōu)選原花青素(procyanidolic)低聚物；綠茶組分，優(yōu)選包括多元酚，尤其表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG);生育酚和/或乙酸生育酚酯，各自是抑制由侵蝕脂質的幾基所引起的損害的組分，因此，在一個具體的實施方案中，該組合物包含約0.01%~約1%的量的葡萄柚提取物、約0.0001%~約0.01%的量的超氧化物歧化酶、約0.01%約1%的量的谷胱甘肽、約0.001%-約1%的四氫二阿魏酰甲烷或姜黃提取物，約0.001%約1%的量的柑橘生物類黃酮、約0.001%~約1%的量的葡萄籽提取物、約0.01%約1%的量的綠茶提取物、約0.01%~約2%的量的生育酚、約0.01%約5%的量的乙酸生育酚酯。因此，將會認識到，一般性如上所述的組合物可通過減少炎癥、脂質過氧化以及膠原、彈性蛋白和DNA的降解之中的一種或多種所導致的有害影響來維持和/或改善皮膚質量，從而維持年輕外觀。在本發(fā)明的另一個具體實施方案中，組合物將一般包含大豆組分，如大豆蛋白組分，優(yōu)選異黃酮，如染料木黃酮和大豆黃酮。已發(fā)現(xiàn)所述大豆組分是彈性蛋白酶的抑制劑，彈性蛋白酶響應于諸如暴露于紫外線、干燥和一般環(huán)境應力之類的因素而釋放到皮膚上。因此，該大豆組分幫助維持和/或提高皮膚(特別是受到日光照射的紫外線損傷的那些皮膚)的堅實度和彈性，組合物的這種實施方案一般還包含稻米組分，如稻米蛋白，更具體為水解稻米蛋白，它對于膠原酶有抑制效果。膠原酶的抑制有助于保護皮膚中的膠原，由此維持和/或改善關于彈性、堅實度、皺紋、干燥度和老年斑方面的皮膚狀況。向日葵籽組分，如向日葵籽提取物也可包括在這種實施方案中。已發(fā)現(xiàn)向日葵籽組分用作抗糖化因子(anti-glycationfactor)，并且通過延遲各種引起膠原隨著年齡而變硬和引起以上討論的其它有害因素的變化來維持和/或改善皮膚狀況。組合物可進一步包含甲氧基肉桂酸辛酯組分和/或丁基甲氧基二苯曱酰基曱烷組分。因此，在一個具體的實施方案中，該組合物包含約0.01%~約3%的量的大豆蛋白(野生大豆(GlycineSoja))、約0.01%~約3V。的量的水解稻米蛋白、約0.01%約3%的量的向日葵籽提取物。本發(fā)明的其它具體實施方案是包含積雪草組分(如積雪草提取物)的組合物。已發(fā)現(xiàn)該積雪草組分促進膠原和彈性蛋白的合成，從而維持或改善皮膚的堅實度、彈性和一般強度。主要的活性成分是皂角苷(三萜類(triterpenords))，其包括積雪草皂苷、羥基積雪草苷和馬達積雪草酸。該實施方案中可包括玉米仁組分，如玉米仁提取物，更具體肌醇，它提供幾個益處，包括幫助細胞中的能量產生和儲存，抑制脂質過氧化，并且它一般是有效的抗氧化劑。可單獨地或相結合地包括在組合物中的玉米仁提取物組分包括氮元素、碳水化合物、B族維生素、微量元素和/或phylate形式的肌醇。海藻組分如海藻提取物(例如，掌狀海帶提取物)可以進一步包括在該實施方案中，并且當包括時它有助于提高細胞間ATP比率和增加細胞和組織的氧化，因此通常增大皮膚的結構。最后，可以包括泛敏(輔酶Q)組分，它(特別在細胞中能量的產生中)，任選與抗壞血酸四異棕櫚酸酯一起，用作各種重要的酶促途徑的輔酶。因此，在一個具體的實施方案中，該組合物包含約0.01%約3%的量的積雪草提取物、約0.01%~約3%的量的玉米仁提取物、約0.01%約3%的量的海藻提取物、約0.001%約P/。的量的輔酶Q-10。本發(fā)明的其它具體實施方案是通常為皮膚提供水脂(hydrolipid)基質的組合物。該組合物一般包含迷迭香組分，如迷迭香提取物，優(yōu)選迷迭香酸、酚類雙碎、鼠尾草酚、鼠尾草酸或熊果酸，或簡單地是熊果酸。迷逸香提取物優(yōu)選得自迷迭香葉子的提取物。優(yōu)選將迷迭香組分包封在脂質體.中以增強傳遞。另外的組分一般包括一種或多種的以下組分卵磷脂組分、神經(jīng)酰胺3組分、磷脂(如P谷翁醇)組分、甘油組分、泛醇組分、脯氨酸組分(如L-脯氨酸)和透明質酸鹽組分(如透明質酸鈉)；以上組合物的各種組分的子組合(Subcombinations)優(yōu)選包含迷迭香組分(如迷迭香提取物，優(yōu)選迷迭香葉子的提取物)和卯磷脂組分。該子組合有助于脂質保留和在皮膚之中和之上形成水分層屏障。以上組合物的另一個子組合優(yōu)選包含卵磷脂組分、神經(jīng)酰胺3組分和P谷甾醇組分，或優(yōu)選包含神經(jīng)酰胺3組分和P谷甾醇組分。以上組分的該子組合還有助于脂質保留和在皮膚之中和之上形成水分層屏障。因此，在一個具體的實施方案中，該組合物包含約0.0001%~約1%的量的迷迭香提取物、約0.001%約0.1%的量的包括神經(jīng)酰胺3在內的脂質復合物和約0.0001%約0.1%的量的0-谷甾醇、約0.1%~約10%的量的甘油、約0.01°/。~約1%的量的泛醇、約0.001%約1%的量的脯氨酸和約0.001%約5%的量的透明質酸鈉。將會認識到，前述組合物和子組合中的每一種可以單獨使用，或可與其它組分組合使用，以形成其它的新配制劑。因此本發(fā)明進一步包括組合物，其含有，與下面討論的另外組分進一步組合的，前述組合物組分中的(每一種的)一種或多種的組合。本發(fā)明的組合物還可包含化妝品或藥物學上可接受的栽體。可將組合物的組分包封在例如脂質體膠嚢中。當存在栽體時，該復合物占總組合物的約0.01%約10%(按重量)，優(yōu)選占總組合物的約1%~約7%(按重量)。10通常，該抗超氧化物組分可以包括具有抗超氧化物活性的那些物質，尤其具有超氧化物歧化酶活性的那些物質。換句話說，它包括能夠催化歧化反應的那些組分，例如，它包括超氧化物歧化酶(SOD)，通過接枝聚亞烷基氧、聚乙二醇、多糖或酰化基團改性的SOD,SOD的鹽，含有該SOD產物的物質，卟啉(porphorins)和具有超氧化物歧化酶樣活性的物質。在這方面，它包括在EP223257中提到的那些產物，該專利的相關內容引入本文供參考。如上所述的所有超氧化物歧化酶，以及本領域技術人員能夠從文獻中推知的變型和等同物適合作為用于本發(fā)明中的SOD。另外，它們能夠屬于不同的來源。例如，它們可以是動物(牛、豬等)、人(血液)或植物(真菌、藻類、菠菜等)。它們也可從細菌或酵母獲得，或者通過生物技術路線獲得?？捎糜诒景l(fā)明中的SOD的例子已描述在美國專利No.5，526，507中，其內容引入本文供參考。SOD可以是復合物的約0.0001%~約5%，0.01%~約5%(按重量)。更優(yōu)選，SOD以約0，1。/D約2%(按重量)的量包括在復合物中，一般地，抗過氧化氫組分可以是硫醇或硫醇衍生物。在本發(fā)明的上下文中，術語疏醇應理解為以-SH基團表征的有機化合物。硫醇衍生物是保留-SH基團的衍生物或是硫醚或者硫代酯，在這種情況下-SH基團轉化成-SR基團。被理解為與根據(jù)本發(fā)明的硫醇或硫醇衍生物等同的化合物是通過互變異構現(xiàn)象、由氫鍵合引起的二聚或低聚、水合或其它自發(fā)重排從該硫醇或硫醇衍生物形成的那些。如果衍生物通過不同類型的重排(例如烷基的遷移)與異構體保持平衡，則認為該異構體包括在本發(fā)明的硫醇和硫醇衍生物之中。合適的硫醇和硫醇衍生物可以包括甲巰丙脯酸、半胱胺、麥角硫因(ergothioneine)、巰基丙酰甘氨酸、青霉胺、N-乙酰半胱氨酸、S-乙酰半胱氨酸、N，S-二乙酰半胱氨酸、N，S-二乙酰半胱氨酸酰胺、半胱氨酸乙酯、N-乙酰基半胱氨酸乙酯、S-乙酰半胱氨酸乙酯、N，S-二乙酰半胱氨酸乙酯、巰基乙酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、谷胱甘肽、硫甘油、硫羥蘋果酸、2-巰基丙酸、3-巰基丙酸、硫二甘醇、2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇(dithioreitol)、噢噸、硫代水楊酸、硫幾乳酸、硫代丙酸、硫代二乙醇酸、硫辛酸和它們的化妝品上可接受的鹽。本文使用的化妝品上可接受的鹽包括但不限于堿金屬鹽，例如鈉、鋰、鉀和銣鹽；堿土金屬鹽，例如鎂、鈣和鍶鹽；無毒的重金屬鹽，例如鋁和鋅鹽；硼鹽；硅鹽；銨鹽；三烷基銨鹽，例如三甲基銨和三乙基銨，和四烷基氧絲鹽，一般地，該抗過氧化氫組分能夠以占復合物的約0.001%~約5%(按重量)，優(yōu)選約0.01%約2.5°/。(按重量)，更優(yōu)選約0.1%~約1%(按重量)的量混入到復合物中。一般地，抗羥基自由基組分能夠包括一種或多種的下列物質生育酚、生育酚衍生物、四氫二阿魏酰曱烷、葡萄籽提取物(例如vitisvinifera(葡萄)籽提取物)、葡萄柚提取物(例如，citrusgrandis(葡萄柚)提取物)、綠茶提取物(例如，camelliasinensis茶(葉)提取物)、姜黃酸、類姜黃色素(curc腿inoi棒四氳姜黃素"etrahydrocurcuminoid)、兒茶素、表沒食子兒茶素3-0-沒食子酸酯和多元酚，低聚原花色素、生物類黃酮、類黃酮，和它們的混合物。生育酚(維生素E)和它的衍生物(如生育酚的酯)可用于本發(fā)明的組合物中。合適的生育酚包括母育酚的單甲基、二曱基或三乙基衍生物，其包括但不限于ot生育酚、P生育酴、Y生育酚、&生育酚、e生育酚、g生育酚和ri生育酚。生育酚的合適酯包括但不限于乙酸生育酚酯、琥珀酸生育酚酯、苯甲酸生育酚酯、丙酸生育酚酯、山梨酸生育酚酯、油酸生育酚酯、乳清酸生育酚酯、亞油酸生育酚酯、煙酸生育酚酯和2-乙基-己酸酯。當生育紛和/或它的衍生物包括在本發(fā)明的復合物中時，它們的用量為約0.01%~約98%,優(yōu)選約0.01%~約5%，0.01%~約2%。四氫二阿魏酰甲烷和/或姜黃提取物也能夠以復合物的約0.1%~約20%(按重量)，優(yōu)選約1%~約10%(按重量)的量混入到復合物中。如以上所討論，葡萄籽提取物以及葡萄籽提取物與磷脂的復合物也可有利地用于本發(fā)明中。得自葡萄籽的提取物包括多元盼混合物，如表兒茶素、原花青素和兒茶素。葡萄籽提取物和磷脂的合適復合物已描述在美國專利No.4,963,527中，其內容引入本文供參考。當混入復合物中時，葡萄籽提取物或它與磷脂的復合物的存在量為復合物的約0.001%約5%(按重量)，優(yōu)選約0.01%約2.5%(按重量)?？砂c葡萄籽提取物相同的量的綠茶提取物。類黃酮和生物類黃酮也可用于本發(fā)明中。其在Bravo，Polyphenols:Chemistry,DietarySources,Metabolism,和NutritionalSignificance,NutritionReviews,56巻，No.ll，317-33(11月，1998)中已經(jīng)報道，該文章的內容引入本文供參考，類黃酮可以再分成以下所示的13種查耳酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>二氫查耳酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>橙酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>二氫黃酮醇黃烷酮黃烷醇黃烷二醇或無色花色素花青素異類黃酮14類黃酮一般具有二苯基丙烷(C6-C3-C6)的常見結構并且由通過三個碳(通常形成氧化的雜環(huán))連接的兩個芳香環(huán)組成?；窘Y構顯示如下類黃酮偶而以糖普配基出現(xiàn)在植物中，雖然它們最通常被發(fā)現(xiàn)為糖苷衍生物。用于本發(fā)明的特別合適的類黃酮包括但不限于蕓香苷、檸檬素、槲皮素、橙皮苷、柚皮苷、紫杉葉素、兒茶素、表兒茶素、圣草酴、柚苷配基、三羥乙基蘆丁、白楊黃素、福桔黃素、木犀草素、表沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、漆樹黃酮、莰非醇、高良姜素、沒食子兒茶精、表兒茶素沒食子酸酯、斤菜素、洋芫荽黃素、楊梅黃酮、染料木黃酮、大豆黃酮，或它們的衍生物。類黃酮可以從任何合適的來源得到。優(yōu)選的來源是柑橘屬。當類黃酮混入復合物中時，它們的存在量為復合物的約0.001%約20%(按重量)，優(yōu)選約0.01%~約10%(按重量)。還可包含其它專用組分，如棕櫚酰羥丙基三甲基銨支鏈淀粉，在一個實施方案中，椋櫚酰羥丙基三甲基銨支鏈淀粉可與茶提取物混合。這可以復合物的約0.001%約2%(按重量)的量存在。斷鏈劑可包括與以上對于抗羥基自由基組分所述的那些相同的組分。因此，以上抗羥基自由基組分中的一種或多種也可用作斷鏈劑組分。斷鏈抗氧化劑是一旦引發(fā)脂質過氧化就能夠中斷鏈反應的那些組分。如上所述，復合物組合物(complexcomposition)也可包含選擇來修復由ROS所引起的損害的組分。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包含提供細胞能量產生的至少一種組分，協(xié)助膠原合成的至少一種組分，和/或協(xié)助或提供細胞活性的至少一種組分。這些組分可以單獨使用，或理想地，組合使用。合意的細胞能量產生組分包括泛醌。泛敏廣泛發(fā)現(xiàn)于細菌、真菌、酵母、植物和動物中。已知不同的種類產生具有不同數(shù)量的異戊二烯單元(n)的異構形式(isoforms)(Q-n)。例如，異戊二烯單元的數(shù)量，在一些微生物中是6(Q6)，在植物中是9(Q9)，在人中是10(Q10)。輔酶Q10或2，3-二甲氧基-5-曱基-6-癸異戊二烯基-苯醌用于恢復和維持呼吸并在細胞活性所需的能量供應方面促進ATP產生。泛醌的衍生物如泛醇也是有用的。細胞能量產生組分，將例如輔酶Q10，以復合物的約0.001%約10%,優(yōu)選約0.01%~約5%(按重量)的量混入復合物中。為了修復由ROS所引起的損害，希望包含促進膠原合成的組分，已經(jīng)建議，包括ot和P羥基酸在內的醇酸在這方面可能是有用的。結果，奪發(fā)明考慮包括一種或多種a或P醇酸。合適的例子包括乳酸、蘋果酸、乙醇酸、檸檬酸和水楊酸。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抗壞血酸(維生素C)和它的衍生物促進膠原合成。用于本發(fā)明中的抗壞血酸衍生物包括單獨或組合的全部對映異構體。優(yōu)選地，以左旋體提供抗壞血酸，另外，抗壞血酸或它的衍生物可以是水溶性或油溶性的形式。維生素C(抗壞血酸)衍生物的非排他性例子是，例如，L-抗壞血酸的烷基酯，其中烷基部分具有8到20個碳原子。就酯而言，它們可以選自抗壞血酸的脂肪酸單-、二-、三-或四-酯。例如，此類酯包括但不限于抗壞血酸棕櫚酸酯、抗壞血酸月桂酸酯、抗壞血酸肉豆蔻酸酯、抗壞血酸硬脂酸酯、抗壞血酸二棕櫚酸酯、抗壞血酸二月桂酸酯、抗壞血酸二肉豆蔻酸酯、抗壞血酸二硬脂酸酯、抗壞血酸三棕櫚酸酯、抗壞血酸三月桂酸酯、抗壞血酸三肉豆蔻酸酯、抗壞血酸三硬酯酸酯、抗壞血酸四棕櫚酸酯(四己基癸基抗壞血酸酯)、抗壞血酸四月桂酸酯、抗壞血酸四肉豆蔻酸酯、抗壞血酸四硬脂酸酯、L-抗壞血酸棕櫚酸酯、L-抗壞血酸異棕櫚酸酯、L-抗壞血酸二棕櫚酸酯、L-抗壞血酸異硬脂酸酯、L-抗壞血酸二硬脂酸酯、L-抗壞血酸二異硬脂酸酯、L-抗壞血酸肉豆蔻酸酯、L-抗壞血酸異肉豆蔻酸酯、L-抗壞血酸2-乙基己酸酯、L-抗壞血酸二-2-乙基己酸酯、L-抗壞血酸油酸酯和L-抗壞血酸二油酸酯、四己基癸基抗壞血酸酯；L-抗壞血酸的磷酸酯如L-抗壞血酸-2-磷酸酯和L-抗壞血酸-3-磷酸酯；L-抗壞血酸的硫酸酯如L-抗壞血酸-2-硫酸酯和L-抗壞血酸-3-硫酸酯；它們與堿土金屬(如鉤和鎂)形成的鹽。關于鹽，它們可以選自磷酸鹽和硫酸鹽，優(yōu)選磷酸鹽?？箟难崃姿猁}一般選自L-抗壞血酸3-磷酸鹽、L-抗壞血酸2-磷酸鹽、L-抗壞血酸3-焦磷酸鹽和雙(L-抗壞血酸3，3-)磷酸鹽。優(yōu)選地，抗壞血酸磷酸鹽是抗壞血酸磷酸鎂或鈉；更優(yōu)選抗壞血酸磷酸鎂。同樣地，抗壞血酸硫酸鹽一般選自L-抗壞血酸3-多危酸鹽、L-抗壞血酸2-琉酸鹽、L-抗壞血酸3-焦石危酸鹽和雙(L-抗壞血酸3，3-)-危酸鹽。膠原合成組分(例如，抗壞血酸和它的衍生物)以復合物的約0.001%~約10%,優(yōu)選約0.01%約5%(按重量)的量混入復合物中。相信類視黃醇可以影響細胞活性，因此將類視黃醇混入本發(fā)明的復合物中是合意的。類視黃醇包括視黃醇、視黃醛(維生素A醛)和視黃酯(如乙酸視黃酯、丁酸視黃酯、丙酸視黃酯、辛酸視黃酯、月桂酸視黃酯、棕櫚酸視酯、油酸視黃酯和亞油酸視黃酯)。類視黃醇傾向于刺激皮趺，因此將它們以盡可能減少潛在刺激的量混入到復合物中是合意的。或者，刺激減輕劑可引入到組合物中以協(xié)助防止對用戶造成的過度不舒適感，同時潛在地允許提高類視黃醇的劑量水平。'此類刺激減輕劑包括但不限于神經(jīng)酰胺類、假神經(jīng)酰胺類、脂肪酸、膽固醇、磷脂、泛醇、燕麥提取物、尿嚢素、銀杏、甘草提取物、金盞花、人參、假椴樹，等等。將細胞活性組分例如類視黃醇以復合物的約0.001%約10%，優(yōu)選約0.01%~約5%(按重量)的水平混入復合物中。根據(jù)本發(fā)明的復合物組合物一般與可藥用的或化妝品上可接受的賦形劑或栽體混合?？蓪⒈景l(fā)明的復合物組合物配制成溶液、凝膠、奶液、霜劑、軟骨、水包油型乳液、油包水乳液或其它可藥用的或化妝品上可接受的形式。本發(fā)明的復合物組合物還可含有各種已知的常規(guī)化妝品組分，只要它們不有害地影響所預期的效果?？伤幱玫幕蚧瘖y品上可接受的賦形劑用作在復合物組合物中存在的其它材料用的稀釋劑、分散劑或栽體，從而當復合物組合物施加于皮膚時促進它們的分配。除水以外的賦形劑可包括液體或固體潤膚劑、溶劑、濕潤劑、增稠劑和粉末。例如，下列賦形劑能夠單獨使用或作為一種或多種的賦形劑的組合使用。賦形劑還可包括推進劑，如丙烷、異丁烷、二甲醚、二氧化碳、一氧化二氮；和溶劑，如乙醇、異丙醇、丙酮、乙二醇單甲醚、二甘醇單丁醚、二甘醇單乙醚，或粉末，如白堊、滑石、漂白土、高呤土、淀粉、樹膠、膠態(tài)氧化硅、聚丙烯酸鈉、四烷基和/或三烷基芳基銨蒙脫土、化學改性的硅酸鋁鎂、有機改性的蒙脫土、水合硅酸鋁、火成二氧化硅、羧乙烯基聚合物、羧基曱基纖維素鈉、硬脂酸乙二醇酯。潤膚劑，如硬脂醇、甘油單蓖麻醇酸酯、貂油、十六烷醇、異硬脂酸異丙酯、硬脂酸、棕櫚酸異丁酯、硬脂酸異十六烷基酯、油醇、月桂酸異18丙酯、月桂酸己酯、油酸癸酯、十八烷-2-醇、異十六烷基醇、二十烷基醇、山崳醇、十六酸鯨蠟酯、硅氧垸油(如聚二甲基硅氧烷)、癸二酸二正丁酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸異丙酯、硬脂酸丁酯、聚乙二醇、三甘醇、羊毛脂、可可脂、玉米油、棉籽油、橄欖油、棕櫚仁油、菜籽油、紅花籽油、月見草油、大豆油、向曰葵籽油、垮梨油、芝麻籽油、椰油、花生油、荒麻油、乙酰化羊毛脂醇、凡士林、礦物油、肉豆蔻酸丁酯、異硬脂酸、棕櫚酸、亞油酸異丙酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯。'本文使用的"潤膚劑"指用于防止或緩解干燥以及用于保護皮膚的材料。各種各樣的合適潤膚劑是已知的并且可以用于本文。Sagarin,Cosmetics,ScienceandTechnology,笫二版，Vol.1，pp.32-43(1972)，引入本文供參考，含有合適材料的許多例子。組合物可任選地包含防曬劑，如無機和有機防曬劑以便在本發(fā)明的復合物組合物的使用過程中提供保護作用，避免過度暴露于太陽光所造成的有害影響。合適防曬劑的例子包括在theU.S.OTCSunscreenMonograph中描述的那些，如曱氧基肉桂酸辛酯和丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷，該文獻的內容引入本文供參考。本發(fā)明的組合物因此可包含0.1-10%，優(yōu)選1-5%(按重量)的有機防8$劑材料。組合物任選還可以包含作為防曬劑的具有1-300nm的平均粒度的二氧化鈦或氧化鋅，具有1-300nm的平均粒度的氧化鐵，具有1-100nm的平均粒度的二氧化硅，例如火成二氧化硅。應該指出的是，當用作本發(fā)明的乳液中的組分時，二氧化硅能夠提供保護不受紅外輻射。兩種形式中的任何一種的超細二氧化鈦(即水分散性二氧化鈦和油分散性二氧化鈦)都可以使用。水分散性二氧化鈦是超細二氧化鈦，其顆粒是未涂覆的或涂覆有賦予顆粒親水性表面性能的材料。此類材料的例子包括氧化鋁和硅酸鋁。油分散性二氧化鈦是超細二氧化鈦，其顆粒顯示出疏水性表面性質，并且為此目的，該顆粒涂覆有金屬皂，如硬脂酸鋁、月桂酸鋁或硬脂酸鋅，或涂覆有有機硅氧烷化合物。"超細二氧化鈦"指具有低于100nm，優(yōu)選10-40nm，最優(yōu)選15-25nm的平均粒度的二氧化鈦顆粒。能任選地混入根據(jù)本發(fā)明的組合物中的二氧化鈦的總量占組合物重量的1-25%,優(yōu)選2-10%，理想為3-7%。組合物的特別適宜形式是乳液，在這種情況下油或油質材料(潤膚刑)通常與乳化劑一起存在，以得到油包水型乳液或水包油型乳液。組合物還可包含水，通常至多95%，優(yōu)選5-95%(按重量)。組合物還可任選地包含高分子量硅氧烷表面活性劑，其也能夠用作乳化劑，代替已提到的任選乳化劑或與該任選乳化劑一起使用。，二甲基硅氧烷的高分子量聚合物，分子量為IO，OOO到50，000。當使用時，聚二甲基硅氧烷聚合物便利地以在揮發(fā)性硅氧烷中的分散體來提供，該分散體包含例如1-20%(按體積)的聚合物和80-99%(按體積)的揮發(fā)性硅氧烷。理想地，分散體由10%(按體積)的分散在揮發(fā)性硅氧烷中的聚合物組成。聚硅氧烷聚合物能夠分散在其中的揮發(fā)性硅氧烷的例子包括聚二甲基硅氧烷(五聚物和/或六聚物)。優(yōu)選的硅氧烷表面活性劑是環(huán)狀聚曱基硅氧烷和聚二曱基硅氧烷共聚醇(copolyol)，如從DOWCORNING商購的DC3225CFormulationAid。另一種是也可從DowCorning商購的月桂基聚甲基硅氧烷共聚醇，如DCQ2-5200。當在組合物中存在時，硅氧烷表面活性劑的量通常是乳液重量的至多25%,優(yōu)選0.5-15%?？扇芜x使用的常規(guī)助劑的例子包括防腐劑，如對-羥基苯曱酸酯；抗氧化劑，如丁基幾基甲苯；濕潤劑，如甘油、乙氧基化甘油如十六烷基聚氧乙烯醚基甘油-26(glycereth-26)、山梨糖醇、2-吡咯烷酮-5-羧酸酯、鄰苯二甲酸二丁酯、明膠、聚乙二醇(如PEG200-600);緩沖劑連同堿(如三乙醇胺或氬氧化鈉)；蠟，如蜂蠟、地蠟、石蠟；植物提取物，如蘆薈、矢車菊、金縷梅、接骨木花、黃瓜；以及針葉櫻桃發(fā)酵產物(fermentate)、增稠劑；活性增強劑；著色劑；和香料，如芳香劑，可包括在本發(fā)明所制20備的組合物中?；瘖y品用助劑能夠構成該組合物的余量。[00881也希望混入抗炎藥和/或抗刺激藥劑。優(yōu)選天然的抗炎藥和/或抗刺激藥劑。可以使用例如，甘草和它的提取物，甘草酸二鉀鹽，燕麥和燕麥提取物，小燭樹蠟，oc紅沒藥醇，蘆薈，Manjistha(從茜草屬中的植物(特別是萏草)提取)和Guggal(從沒藥屬中的植物(特別是穆庫爾沒藥)提取)?？梢园ǖ娜缟纤龅钠つw調理劑是透明質酸，它的衍生物和鹽(包括透明質酸鈉)，植物提取物如可樂果、巴西可可茶(guaranamate)、藻類提取物、脯氨酸、L-脯氨酸和皮膚有益劑如神經(jīng)酰胺、甘油神經(jīng)酰胺、假神經(jīng)酰胺、神經(jīng)鞘脂類如鞘磷脂、腦苷脂類、硫酸腦苷酯、和神經(jīng)節(jié)苷脂、鞘氨醇、二氫神經(jīng)鞘氨醇、植物鞘氨醇、磷脂，單獨或以混合物形式。脂肪酸也可與這些皮膚有益劑相組合。例如，神經(jīng)酰胺和甘油神經(jīng)酰胺包括描述在美國專利No5,589,178、5，661，118和5，688，752中的那些，所述專利的相關部分引入本文供參考。例如，假神經(jīng)酰胺包括描述在美國專利No5，198，210，5，206，020和5，415，855中的那些，所述專利的相關公開內容引入本文供參考。一般地，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以按照本領域已知的常規(guī)程序來制備。例如，本發(fā)明的各種組分可以通過順序添加(有或沒有優(yōu)先順序)來摻混，隨后混合形成混合物。例如，水溶性組分通常摻混形成水相，脂溶性組分通常摻混形成油相。其后，兩個相可以乳化，然后與載體等摻混?；蛘撸M合物可以通過混合(例如在單釜系統(tǒng)中)來制備。如上所述，本發(fā)明的組合物可以施用于個體，優(yōu)選局部施用于個體的皮膚上。組合物可以有效抑制自由基、活性氧簇和其它氧化性物質的量施用。顯然，個體可以根據(jù)它們所希望或相信必要來施用較多或較少的組合物，但是，例如，本發(fā)明的組合物能夠以約1mg/cm2至約3mg/cm2的量施用于皮膚上。優(yōu)選以約2mg/cmV每平方英寸皮膚的用量施用本發(fā)明的組合物，一般地，組合物應該每天施用兩次，如在早晨和在晚上施用。組合物優(yōu)選包含用于增強輸送活性組分到皮膚的表皮層和真皮層中的組分。此類組分包括二甲亞砜(DMSO)或正癸基甲基亞砜(NDMS),實施例下列實施例用來舉例說明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明。下面的實施例用于說明本發(fā)明的組合物的各組分的作用。這些實施例還闡述根據(jù)本發(fā)明的組合物，與可以另外混入以上所述的組合物當中的任何一種之中的附加任選組分相結合。實施例1進行研究，探索樣品對于膠原和彈性蛋白合成的作用。兩個分析體系用于這些研究。人的真皮成纖維細胞，因為這些細胞積極地合成原膠原，和彈性蛋白。樣品被稀釋在介質中。RONSBD101、積雪草和維生素C是以0.001%、0，01%和0.1%濃度制備的。剩余樣品是以0.1%、1%和10%濃度制備的。積雪草是作為在50:30:20的DMSO:乙醇水中的提取物制備的。將人的真皮成纖維細胞(Hs-27)置于24孔板中，并孵育過夜。第二天，用前面指出的濃度的樣品進行處理細胞。收集上清液，并通過使用商購ELISA試劑盒測試原膠原的存在和通過使用Fastin彈性蛋白試劑盒測試彈性蛋白的存在。由細胞產生的膠原的量示于圖3中。膠原合成表達為所檢測到的原膠原的量除以對允許樣品的任何有毒影響的存活力所得到的比率。數(shù)據(jù)表明，積雪草樣品以0.1%的濃度在誘導新膠原合成上是最有效的。生物肽(Biopeptide)CL和生物肽EL樣品也在10%的濃度下誘導膠原合成的可檢測的增加。其它樣品對于原膠原合成沒有可檢測的影響。圖4中的數(shù)據(jù)顯示樣品對于彈性蛋白分泌的影響。該數(shù)據(jù)再次表達為.在上清液收集時所分泌的彈性蛋白的量除以細胞的存活力的比率。與它對膠原分泌的有效性相似，積雪草樣品是彈性蛋白的最有效的誘導劑，生物肽CL和生物肽EL也誘導彈性蛋白分泌的可檢測的增加。最后，Odraline和生物因素(Biodynes)EMPP樣品在所使用的最高濃度(10%)下誘導彈性蛋白的輕微增加。結果表明，積雪草是膠原和彈性蛋白兩者的有效誘導劑。另外，結果顯示生物肽CL&EL樣品同時誘導膠原和彈性蛋白，雖然這些材料的高濃度是為了誘導觀察到的生物效應所需要的。22實施例2對十六個樣品測試它們對三種不同酶(基質金屬蛋白酶或MMP)的影響，這牽涉到細胞外基質蛋白的斷裂，Elhibin是抑制MMP-1的唯一樣品，MMP-1的最有效的活化劑是CoQlO、BVOSC抗壞血酸酯、槐堿(Sophorine)、檸檬生物類黃酮、ACTIMP1.3.9、檸檬和混合柑橘提取物、和Kelpadelpie,大部分的樣品對MMP-9無影響，其中僅僅BVOSC抗壞血酸酯是強抑制劑。彈性蛋白酶的最強抑制劑是CoIIalift、良姜葉(Alphinialeaf)、Elhibin、槐堿、檸檬生物類黃酮、ACTIMP1.3.9、檸檬和混合柑橘提取物、Kelpadelpie、Extracellium和Co，hibin。因此，以MMP-1和彈性蛋白酶抑制的預期輪廓(profile)為基礎，盡管對MMP-9無影響，elhibin將是所選擇的原材料，基質金屬蛋白酶(MMP)是一組的鋅依賴性酶，它在正常和患病的組織中均降解細胞外基質的各種組分。認為MMP-1(間質膠原酶)引發(fā)原纖狀膠原的劈裂，同時MMP-9(明膠酶)消化由MMP-1產生的變性膠原片段。MMP-9消化的產物然后能夠自由引入到新膠原纖維中。彈性蛋白酶分裂彈性蛋白。這些酶的表達是在嚴格的控制之下并且隨著個體年齡變化而改變或暴露于紫外線照射。因為MMP-1涉及到膠原分裂的引發(fā)，這對于皮膚護理產物抑制MMP-1活性是有利的。相反，該皮膚護理產物不會抑制MMP-9，因為它將通過阻斷膠原構造單元的利用來潛在地抑制新膠原合成。最終，彈性蛋白酶應該被抑制以防止彈性蛋白的消化和皮膚的彈性下降。下表I中的數(shù)據(jù)給出了與所測試的每一種樣品的來源和溶解度有關的信息。圖5中的數(shù)據(jù)顯示了樣品對MMP-1活性的影響。Elhibin是抑制MMP-1的唯一樣品。圖6中的數(shù)據(jù)顯示大部分的樣品不抑制MMP-9。對MMP-9具有強抑制活性的唯一樣品是BVOSC酯，最后，圖7中的數(shù)據(jù)顯示許多樣品抑制彈性蛋白酶'這些樣品是Collalift、良姜葉、Elhibin、槐堿、ACTIMP1.3.9、檸檬和混合柑橘提取物、Kelpadelpie、Extraeellium和Colhibin,表I.樣品名稱、供應商、批號和用于各樣品的溶劑。樣品供應商批號溶劑CoHaliftMalt提取物Coletica03020348PBSBVOSC抗壞血酸酯ABG11797RYADMSO/EtOH/水CoOlOABG1190LM5ADMSOAlpha-LupalineBarnet982DMSO良姜葉B3rnct010202PBS槐堿5H636PBSElhibinPentapharm40197/301-02PBS柑橘生物類黃酮ABG003-01PBS檸檬生物類黃酮ABG1084X87APBSACTIMP1.3.9Barnet105PBSExtracelHumColetica02120464PBS檸檬提取物Silab2-294-1PBSKelpadelie未知104-182PBS混合柑橘提取物Silab2-179-2-1PBSColhibinPentapharm404652/325-01PBSBAR-TIMPBurnet030317PBS商購的試劑盒用于測試樣品對感興趣的MMP的活性的影響。對于MMP-1，按照制造商的使用說明書使用得自Amersham的試刑盒。對于MMP-9和彈性蛋白酶，使用從MolecularProbes獲得的試劑盒。樣品是在表I中所注明的溶劑中在100mg/ml的貯備(stock)濃度下制備的。用PBS將樣品稀釋到100mg/ml。實施例3當暴露于UV光時，皮膚細胞能夠產生一氧化氮(NO),所產生的NO潛在誘導皮膚中與年齡相關的變化。進行這一研究，以便就其對由RAW264.7細胞進行的NO產生的影響來篩選一組化妝品和皮膚護理原材料。24鼠巨噬細胞系RAW264.7用于該研究中，因為已經(jīng)表明當用LPS剌激時它顯示產生NO,以1x105個細胞/孔的量將鼠RAW264.7細胞接種在96孔板中。孵育該板過夜。在第二天，用樣品在0.001%、0,01%和0.1%的用量下處3^細胞2小時。樣品列在以下表II中。在暴露期之后，將LPS以100ng/ml的量添加到孔中。該板孵育過夜，將相等體積的培養(yǎng)物上清液和格里斯(Griess)試劑在室溫下孵育15分鐘，然后讀取在540nm處的吸光度，樣中亞硝酸鹽的量是從用亞硝酸鈉產生的標準曲線計算的。表II.樣品描述PD-IDLIMS#溶劑E23D92200300444-DMSO口口口.品樣，Lipochroman-6NutrieneTocotricnolsg-生育酴基-醌SViapureCitrusSoybeanZymbiosomeNABPikeaRobusta11999354700200300444-200071319200300444-3200300444-4200300444-A90/02B001JQ1124DMSODMSODMSO46280200300444-6水水外觀淺棕褐色結晶粉末棕色、澄明、粘性的液體棕色、澄明、粘性的液體淺黃色細粉末澄明棕色液體澄明黃色液體在下表HI和圖8中示出的數(shù)據(jù)表明，全部所試驗的樣品對LPS刺激的RAW細胞上清液中的亞硝酸鹽積聚具有抑制效果。樣品全部具有抑制活性。表III.通過用LPS刺激的RAW264.7細胞所產生的NO。數(shù)據(jù)顯示為ng亞硝酸鹽/ml上清液。__<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>結果顯示，所有樣品對培養(yǎng)物上清液中的亞硝酸鹽積聚具有抑制效果。最有效的樣品是lipochroman-6、vitapurecitrus和g-生育敏S,含水樣品Pikearobusta和SoybeanZymbiosome兩者都在本實驗中顯示出抑制性能，當它們在比前一實驗中所用的那些濃度更高的濃度下使用時，懷疑在Pikea處理的細胞中見到的高抑制活性歸因于稀釋誤差。最后，似乎表明生育三烯酴類(NT)和合成生育酴(L6)具有比混合生育酚更高的抑制活性。實施例4對增進細胞能量的四個新樣品測試它們響應積雪草和生物因素(Biodynes)擴增細胞外基質組分產生量的能力。人真皮成纖維細胞用作這些細胞，積極地合成細胞外基質組分。除測量原膠原和彈性蛋白的水平之外，還測量透明質酸的水平。透明質酸是糖胺聚糖家族化合物中的成員。糖胺聚糖構成結締組織的基礎物質，并且與彈性蛋白一起幫助為皮膚提供彈性。它們還保持水，因此提供粘度并水合性能。將樣品稀釋在介質中。以0,001%制備積雪草和維生素C。以0.1%制備生物因素EMPP。積雪草是作為在50:30:20的DMSO:乙醇水中的提取物制備的。"能量增進劑"樣品(Seanergilium海藻提取物、Throtaine、Sepitonic和Phytovityl玉米仁提取物)全部是在介質中以0.01、0.1和1.0%制備。將人的真皮成纖維細胞(Hs-27)置于24孔板中，并孵育過夜。在所指定的濃度下用樣品處理細胞2個連續(xù)日。收集上清液并通過使用商購ELISA試劑盒(分別從Takara和Corgenix獲得)測試原膠原和透明質酸的存在，使用Fastin彈性蛋白試劑盒(Biocolor)測試彈性蛋白的存在。由細胞產生的原膠原的水平示于表IV中。數(shù)據(jù)表明，能量增進劑樣品無一對細胞的原膠原分泌產生積極影響。相反，能量增進劑樣品對未刺激和受刺激的細胞的原膠原分泌沒有影響或實際上抑制該分泌。唯一的例外是用Seanergilium處理的細胞，它比未處理的陰性對照細胞產生更多的原膠原。表IV.樣品對原膠原分泌的影響。數(shù)據(jù)表達為從標準曲線計算的ng/ml原膠原/ml上清液，該標準曲線是用EL1SA試劑盒提供的原膠原辨準品產生的。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表V中的數(shù)據(jù)顯示了樣品對彈性蛋白分泌的影響。當S印itonic和Thiotaine是共刺激劑時，發(fā)現(xiàn)生物因素EMPP刺激的彈性蛋白分泌的增加。最后，對上清液分析透明質酸的存在。表VI中的數(shù)據(jù)顯示樣品對細胞分泌透明質酸的影響'數(shù)據(jù)表明，Sepitonic和Phytovityl兩者都增進了用積雪草和生物因素EMPP刺激的細胞分泌的透明質酸。相反，Seanergilium和Thiotaine兩者都抑制透明質酸分泌'表V.樣品對于彈性蛋白分泌的影響。數(shù)據(jù)表達為通過來自經(jīng)處理的細胞的組織培養(yǎng)上清液中檢測到的彈性蛋白的量除以未處理的對照細胞分泌的彈性蛋白的量所計算的％介質對照彈性蛋白。對照物積雪草生物因素EMPP維生素C基質100115107148Seanergilium107117111112Sepitonic119110118116Thiotaine107107122112Phytovityl13810011094以上表IV顯示了樣品對于透明質酸分泌的影響。數(shù)據(jù)表達為ng透明質酸/ml培養(yǎng)物上清液。各上清液中的透明質酸的量是從標準曲線計算的，該標準曲線通過使用ELISA試劑盒提供的透明質酸標準品來產生的，對照物積雪草生物因素EMPP維生素C基質1112989862633Seanergilium694687691789Sepitonic1175129613161226Thiotaine692636743916Phytovityl144912051520943在本實驗中最顯著的結果是一些的能量增進樣品對于透明質酸分泌的影響。Sepitonic和Phytovityl兩者均單獨誘導透明質酸。在S印itonic的存在下由積雪草和生物因素EMPP兩者增進了分泌，在Phytovityl的存在下由生物因素EMPP增進分泌。Sepitonic還增強生物因素刺激的彈性蛋白分泌但抑制膠原分泌。另一方面Phytovityl抑制膠原和彈性蛋白兩者的分泌。Seanergilium對于任何基質組分的分泌的影響極小，Thiotaine僅僅增強生物因素刺激的彈性蛋白的分泌?？傊捎谔峁┧?、粘度和28彈性的透明質酸性能，S印itonic或Phytovityl材料對于希望增加透明質酸并隨后增加水合的皮膚應用是有價值的。實施例5經(jīng)Urlisomes和MerospheresV處理過夜的角質化細胞比未處理的對照細胞具有更高的細胞內脂質水平?？磥砼cMerospheres相比，Urlisomes誘導更高水平的脂質引入，但這歸因于在兩種產物的脂質濃度上的差異。似乎沒有任何非特異性的染色，因為在染色之后、但在萃取染色劑之前，細胞的目測檢查顯示了多個的細胞內脂質小滴。干燥是皮膚的刺激性問題，并且它由皮膚水分的損失所引起。保持水的能力與皮膚(特別是在角質層中)的脂質含量有關。因此似乎顯得合理的是，如果角質化細胞(角質層中發(fā)現(xiàn)的主要細胞類型)中的脂質含量能夠提高，則可以防止水分損失并因此減輕干燥皮膚。為了測試這一可能性，對兩個含脂質的樣品測試它們提高所培養(yǎng)的角質化細胞的脂質水平的能力圖9中所示的代表性實驗的數(shù)據(jù)表明，細胞暴露于兩個樣品會導致增大的脂質染色。與MerospheresV相比，Urlisomes對脂質水平有更大的影響。然而，這簡單地歸因于在兩個樣品的脂質含量上的差異?；蛘?，該差異能夠由與MerosphereV樣品相比，更好吸收Urlisome樣品中的脂質所導致。以2x1(^個/孔將人HEK001細胞置于96孔板并孵育過夜。笫二天，.將細胞暴露于已經(jīng)以0.005%、0.05%和0.5%被稀釋在細胞培養(yǎng)介質中的樣品。再次孵育細胞過夜。第二天，將細胞固定在l。/o甲醛中。然后用油紅(OilRed)O染料(l)對細胞的脂質染色。在染色之后，結合脂質的染色劑用異丙醇萃取。在515nm處讀取所萃取的染色劑的OD。實施例6下面是根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選組合物的例子。_<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>甘油___脯氨酸__透明質酸鈉__甘油(&)卵磷脂(&)神經(jīng)酰胺3(&)P-谷甾醇__水(&)迷迭香(迷迭香)葉提取物(&)卵磷脂__大豆(野生大豆)蛋白質__水解稻米蛋白__向曰葵籽提取物__超氧化物歧化酶__谷胱甘肽__生育酚__乙酸生育酚酯__四氳二阿魏酰甲烷_棕櫚?；u丙基三甲基銨支鏈淀粉/甘油交聯(lián)聚合物_(crosspolymer)(和)卵磷脂(和)茶提取物__柚類(葡萄柚)水果提取物__葡萄籽提取物(&)磷脂__去離子水__聚甲基丙烯酸甘油酯__丁二醇__十六烷基磷酸鉀(&)氫化棕櫚酸甘油酯_花生醇(&)山崳醇(&)二十烷基葡糖苷—_PEG-8聚二甲基硅氧烷_丙烯酸羥乙酯(&)丙烯酰基二甲基?；撬徕c共聚物(和)角簠烷(&)失水山梨醇聚氧乙烯UO)瞇硬脂酸酯(Polysorbate60)苯氧基乙醇(&)對羥基苯甲酸甲酯(&)對羥基苯甲酸乙酯(&)對羥苯甲酸丙酯(&)對羥基苯甲酸丁酯(&)對羥基苯甲酸異丁酯EDTA二鈉_苯氧基乙醇(&)丁基氨基甲酸碘丙炔酯__,薈凝膠__生物類黃酮_苯甲酸C12-15烷基酯&二苯甲酸二丙二醇酯(&)PPG-15硬脂基_醚苯甲酸酯__聚二甲基硅氧烷__抗壞血酸四己基癸酯_FragranceCamom出eDay451101實施例6下面是根據(jù)本發(fā)明的另一種組合物的例子。____甲氧基肉桂酸辛酯__阿伏苯宗_甘油泛醇透明質酸鈉甘油(&)卵磷脂(&)神經(jīng)酰胺3(&)P-谷甾醇水(&)迷迭香(迷迭香)葉提取物(&)卯磷脂_大豆(野生大豆)蛋白__水解稻米蛋白__向曰葵籽提取物__超氧化物歧化酶__谷胱甘肽__生育酚__乙酸生育酚酯__四氫二阿魏酰甲烷_棕櫚酰基羥丙基三甲基銨支鏈淀粉/甘油交聯(lián)聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物_31<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>_苯氧基乙醇(&)丁基氨基甲酸碘丙炔酯_生物類黃酮__乙基己酸C，2-as烷基酯__^__抗壞血酸四己基癸基酯_FragranceCamomil，eNight451100實施例8下面是能夠根據(jù)本發(fā)明制備的另外的組合物的例子。_^____^__脯氨酸__透明質酸鈉__甘油(&)卵磷脂(&)神經(jīng)酰胺3(&)P-谷甾醇_水(&)迷迭香(迷迭香)葉提取物(&)卵磷脂_積雪草__水(&)玉米(玉米)仁提取物__掌狀海帶提取物(&)丁二醇_超氧化物歧化酶_谷胱甘肽生育酴四氫二阿魏酰曱烷棕櫚?；u丙基三甲基銨支鏈淀粉/甘油交聯(lián)聚合物(和)_卵磷脂(和)茶提取物__柚類(葡萄柚)水果提取物__葡萄籽提取物(&)磷脂__去離子水_丁二醇34_硬脂酸甘油酯(&)PEG100硬脂酸酯__花生醇(&)山崳醇(&)二十烷基葡糖苷__山崳醇__十六烷醇__卡波姆980(Carbomer980)__三乙醇胺_重氮烷基咪唑脲(diazolidinylurea)(和)丁基氨基甲酸捵_丙炔酯(替代R4161)__苯氧基乙醇__，薈凝膠__生物類黃酮__棕櫚酸異硬脂基酯__角鯊烷_苯甲酸C，w5烷基酯&二苯甲酸二丙二醇酯(&)PPG-15硬_脂基醚苯甲酸酯__辛酸/癸酸三甘油酯__聚二甲基硅氧烷__泛醌__抗壞血酸四己基癸基酯_FragranceCamomilleNight451100實施例9下面是根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的局部皮膚用組合物。除非另有說明，否則，對于每一個下列實施例，百分數(shù)按重量計。組分wt.%去離子水56.595抗超氧化物組分(超氧化物歧化酶)0.005抗過氧化氫組分(谷胱甘肽)0.2抗羥基自由基組分(乙酸生育酚酯)1.0抗羥基自由基組分(生育盼)0，235抗羥基自由基組分(四氫二阿魏酰曱烷)0.1抗羥基自由基組分(葡萄籽提取物(與)磷脂)0.1抗羥基自由基組分(生物類黃酮)0.1抗羥基組分(棕櫚?；u丙基三甲基銨支鏈淀粉/甘油交聯(lián)聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物)0.1潤膚劑21.5濕潤劑5.205乳化劑2.3皮膚調理劑0.1防曬劑(UVA)3,0防曬劑(UVB)7.5增稠劑0.3pH調節(jié)劑0.3防腐劑1.25香料0,1500總量100.000實施例10下面是根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的局部皮膚用組合物。在這一實施方案中，組合物提供針對ROS的防護作用并且還包含有助于修復由ROS引起的損傷的組分。組分wt%去離子水57.635抗超氧化物組分(超氧化物歧化酶)0.005抗過氧化氫組分(谷胱甘肽)0.2抗羥基自由基組分(乙酸生育盼酯)1.0抗羥基自由基組分(生育酚)0.2抗羥基自由基組分(四氫二阿魏酰甲烷)0.1抗羥基自由基組分(葡萄籽提取物(與)磷脂)0.1抗羥基自由基組分(生物類黃酮)0.136<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>實施例1OOlOOj下面是根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的局部皮膚用組合物，在這一實施方案中，組合物提供針對ROS的防護作用并且還包含有助于修復由ROS引起的損傷的組分。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>抗羥基自由基組分(葡萄籽提取物(與)磷脂)0.1抗羥基自由基組分(生物類黃酮)0.1抗羥基自由基組分(棕櫚?；u丙基三曱基銨支鏈淀粉/甘油交聯(lián)聚合物(和)卵褲脂(和)茶提取物)0.1細胞活性組分(乙酸視黃酯)0.16細胞能量產生組分(泛醌)0.05膠原合成組分(四己基癸基抗壞血酸酯)O，l潤膚劑1濕潤劑1.65乳化劑皮膚調理劑0.1增稠劑0.2pH調節(jié)劑防腐劑0.3香料0.15環(huán)狀聚甲基硅氧烷10.00聚甲基丙烯酸甘油酯10.00聚二甲基硅氧烷共聚醇2.0012微米二氧化硅2.003微米二氧化硅2.00聚丙烯酰胺(和)(:13.14異鏈烷烴(和)月桂基瞇-71.00聚山梨酸酯20(Polysorbate20)0.50總量100.00實施例12進行下面試驗來測定提供根據(jù)本發(fā)明的復合物組合物的效果，與安慰刑、維生素E和維生素C對比。通過在人的背上描繪多個的兩英寸節(jié)段來進行試驗。下列配制劑以隨機方式施用于這些節(jié)段。38<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>棕櫚?；u丙基三甲基銨支鏈淀粉/甘油交聯(lián)聚合物(和)卵磷月旨(和)茶提取物0.1000<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>施用以上配制劑之后，使背經(jīng)受紫外線輻射，測量皮膚紅斑。圖1和2顯示了結果。應理解，能夠對以上所迷的實施方案進行各種各樣的改變和改進。因此前面的敘述意在舉例說明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明，由所附權利要求(包括所有等同技術方案)定義本發(fā)明的范圍。權利要求1.組合物，它包含迷迭香組分、卵磷脂、神經(jīng)酰胺組分、谷甾醇組分、甘油、泛醇、脯氨酸組分和透明質酸鹽組分。2.根據(jù)權利要求1的組合物，其中所述迷迭香組分是迷迭香提取物。3.根據(jù)權利要求l的組合物，其中所述神經(jīng)酰胺組分是神經(jīng)酰胺3。4.根據(jù)權利要求l的組合物，其中所述谷甾醇組分是P-谷甾醇。5.根據(jù)權利要求1的組合物，其中所述透明質酸鹽組分是透明質酸鈉。6.根據(jù)權利要求l的組合物，其中所述迷迭香組分是迷迭香提取物，所述神經(jīng)酰胺組分是神經(jīng)酰胺3，所述谷甾醇組分是P-谷甾醇以及所述透明質酸鹽組分是透明質酸鈉。7.包含迷迭香提取物和卵磷脂的組合物。8.包含卵磷脂、神經(jīng)酰胺3和P谷甾醇的組合物。9.抑制自由基、活性氧簇或活性氮簇的方法，該方法包括局部施用有效量的組合物，該組合物包含迷迭香組分、卵磷脂、神經(jīng)酰胺組分、谷甾醇組分、甘油、泛醇、脯氨酸組分和透明質酸鹽組分。全文摘要局部皮膚用組合物，其包含含有組分的復合物來提供防護作用，避免在人體(包括皮膚)上的自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物質的各種途徑機理(的損害)。這些組合物能夠以抑制這些機理的用量局部施涂它們來施用。本發(fā)明的組合物和方法涉及自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物質對人身體(包括皮膚)的不利或有害影響的防止。因此，根據(jù)本發(fā)明的組合物改進阻隔功能，抑制彈性蛋白酶和膠原酶，和/或促進膠原和彈性蛋白的合成。文檔編號A61K38/44GK101522265SQ200780036684公開日2009年9月2日申請日期2007年7月27日優(yōu)先權日2006年7月31日發(fā)明者A·C·齊默曼,D·A·奧圖爾,D·J·德帕,J·R·梅內申請人:捷通國際有限公司