專利名稱：：糖皮質(zhì)激素受體調(diào)節(jié)劑及使用方法糖皮質(zhì)激素受體調(diào)節(jié)劑及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在治療對(duì)甾類糖皮質(zhì)激素有響應(yīng)的炎性和免疫性障礙中可用作治療劑的三環(huán)化合物、包含所述化合物的藥物組合物、用所述化合物治療患者的炎性和免疫性障礙的方法和可用于合成所述化合物的中間體和方法。
背景技術(shù)：
：天然存在的以及合成的甾類糖皮質(zhì)激素(例如氫化可的松、可的松、潑尼松龍、地塞米松)被廣泛用于治療急性和慢性炎性和免疫性障礙已有50多年。糖皮質(zhì)激素特別是已經(jīng)被處方用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、津喘、變應(yīng)性鼻炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性阻塞性肺疾病、克隆病、炎性腸病和潰瘍性結(jié)腸炎。但是，糖皮質(zhì)激素的使用常常伴有嚴(yán)重的并且有時(shí)是不可逆的副作用如骨丟失/骨質(zhì)疏松、高血糖、糖尿病、高血壓、青光眼、肌肉萎縮、庫(kù)欣綜合征和精神病。因此，仍然需要具有甾類糖皮質(zhì)激素的有益作用、但是相伴的副作用的可能性或發(fā)生率降低的供替代選擇的療法。糖皮質(zhì)激素通過(guò)在與糖皮質(zhì)激素受體(GR)形成復(fù)合物后調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄來(lái)發(fā)揮其藥理學(xué)作用。該GR-糖皮質(zhì)激素復(fù)合物通過(guò)不同的機(jī)理影響基因轉(zhuǎn)錄。首先，在糖皮質(zhì)激素結(jié)合后，被復(fù)合的GR轉(zhuǎn)移到核中，其在那里在與特定基因的啟動(dòng)子區(qū)域中的DNA糖皮質(zhì)激素激素反應(yīng)元件(GRE)結(jié)合時(shí)以二聚物的形式發(fā)揮作用。然后，GR-糖皮質(zhì)激素/GRE復(fù)合物又激活(反式激活)或抑制鄰近位置的基因的轉(zhuǎn)錄。相反，GR-糖皮質(zhì)激素復(fù)合物可通過(guò)不涉及與DNA結(jié)合的過(guò)程負(fù)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。在這一稱為反式阻抑的過(guò)程中，在糖皮質(zhì)激素結(jié)合后，被復(fù)合的GR進(jìn)入核中，在那里其以單體的形式直接與其它轉(zhuǎn)錄因子相互作用(通過(guò)蛋白-蛋白相互作用)，從而抑制它們誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄的能力并由此抑制蛋白表達(dá)。介導(dǎo)其它生理學(xué)過(guò)程的其它類固醇激素受體例如雄激素受體(AR)、鹽皮質(zhì)激素受體(MR)和孕酮受體(PR)具有與GR同源的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的事實(shí)阻礙了對(duì)適宜作為甾類糖皮質(zhì)激素的替代物的GR配體的尋找。作為結(jié)果，GR配體可能對(duì)這些其它受體具有交叉反應(yīng)性。因此，所需的甾類糖皮質(zhì)激素替代物的屬性是相對(duì)于其它類固醇激素受體而言其以更大的親合性與GR結(jié)合。最近的認(rèn)識(shí)為鑒定相對(duì)于其誘導(dǎo)與糖皮質(zhì)激素療法有關(guān)的副作用的傾向而言具有有效抗炎性質(zhì)的GR配體提供了機(jī)會(huì)。長(zhǎng)久以來(lái)已知糖皮質(zhì)激素抑制促炎蛋白如白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-a(TNFa)的內(nèi)源性產(chǎn)生。重要的是，已有報(bào)道稱通過(guò)GR的DNA-結(jié)合非依賴性功能選擇性起作用的配體應(yīng)足以治療炎性疾病。Rdchardt等人，/，20:7168-7H3(2001)。此外，據(jù)報(bào)道，糖皮質(zhì)激素療法的許多副作用(例如高血糖、糖尿病、青光眼和肌肉萎縮)都是由GR與DNA結(jié)合后的反式激活機(jī)理介導(dǎo)的(見Shacke等人，尸A"r附"coA在7Tiem/;.，96(1):23-43(2002))。因此，能將GR介導(dǎo)的反式阻抑與GR介導(dǎo)的反式激活區(qū)分開的物質(zhì)是特別合乎需要的。此外，表現(xiàn)出有限的調(diào)節(jié)(即激動(dòng)、部分激動(dòng)、部分拮抗或拮抗)其它類固醇激素受體的轉(zhuǎn)錄活性的能力的物質(zhì)也是特別合乎需要的。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供相對(duì)于其它類固醇激素受體而言以更大的親合性與GR結(jié)合的物質(zhì)。更特定地，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供相對(duì)于AR、MR和PR而言以大30倍的親合性與GR結(jié)合的物質(zhì)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供相對(duì)于其誘導(dǎo)與糖皮質(zhì)激素療法有關(guān)的副作用的傾向而言具有有效抗炎性質(zhì)的物質(zhì)。更特定地，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供相對(duì)于其誘導(dǎo)骨丟失或骨質(zhì)疏松的傾向而言具有有效抗炎性質(zhì)的物質(zhì)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供表現(xiàn)出有限的調(diào)節(jié)其它類固醇激素受體活性的能力的物質(zhì)。5三環(huán)GR調(diào)節(jié)劑在本領(lǐng)域中是已知的。例如，WO04/052847公開了一類可用于治療對(duì)鹽皮質(zhì)激素受體或糖皮質(zhì)激素受體的調(diào)節(jié)敏感的障礙的三環(huán)類固醇激素受體調(diào)節(jié)劑。WO99/33786公開了與糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合并具有抗炎性質(zhì)的三苯基丙酰胺-衍生物化合物。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，通過(guò)從WO04/052847的范圍內(nèi)選擇化合物(其在下文作為化合物(I)被提供)，已經(jīng)鑒定了一種具有特定活性的新治療劑，表明其特別是可用于治療對(duì)甾類糖皮質(zhì)激素有響應(yīng)的炎性和免疫性障礙。因此，本發(fā)明提供了化合物(I):化合物(I)(("-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯(dibenzo[a，dcyclohepten)-5-叉基)-丙基I-苯基)-甲磺酰胺)或其藥學(xué)上可接受的鹽。作為一個(gè)特定的實(shí)施方案，本發(fā)明提供了結(jié)晶形式的化合物(I)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療炎性或免疫性障礙、特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，其包括給需要其的患者施用有效量的化合物(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了化合物(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療炎性或免疫性障礙、特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。此外，本發(fā)明還提供了用在療法中的化合物(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含化合物(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或發(fā)明概述稀釋劑。作為一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明提供了一種用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，其包含化合物(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。此外，本發(fā)明還提供了用于合成化合物(I)的新中間體和方法。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了化合物(I)，其具有使其特別可用于治療對(duì)甾類糖皮質(zhì)激素有響應(yīng)的炎性和免疫性障礙的活性。如體外和體內(nèi)試驗(yàn)所證明的那樣，化合物(I)以相對(duì)于其它類固醇激素受體而言更大的親合性與GR結(jié)合并且表現(xiàn)出相對(duì)于其誘導(dǎo)與糖皮質(zhì)激素療法有關(guān)的副作用的傾向而言有效的抗炎性質(zhì)。此外，化合物(I)還僅表現(xiàn)出有限的調(diào)節(jié)其它類固醇激素受體AR、MR和PR活性的能力。此外還有，化合物(I)還具有另外的技術(shù)效果或有利性質(zhì)，如本文進(jìn)一步討論的那樣，其解決了患者療法和藥物研發(fā)領(lǐng)域中的其它一些問(wèn)題。本發(fā)明還提供了化合物(I)用于治療對(duì)甾類糖皮質(zhì)激素有響應(yīng)的炎性和免疫性障礙的用途。該類障礙包括例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、哮喘、變應(yīng)性鼻炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性阻塞性肺疾病、克隆病、炎性腸病和潰瘍性結(jié)腸炎?；衔?I)對(duì)其有用的一種特定的病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種慢性障礙，其特征在于持續(xù)的關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥，通常的發(fā)作年齡為30至50歲。RA是最常見的炎性關(guān)節(jié)炎形式，估計(jì)全世界人口的患病率為約0.8%，女性比男性發(fā)病的可能性高2倍。Rindfleisch等人，爿附.F"附.尸/i",dfl"，72(6):1037-1047(2005)。還認(rèn)為化合物(I)用于治療炎性和免疫性障礙的用途與糖皮質(zhì)激素療法通常伴有的副作用的傾向、可能性或發(fā)病率降低有關(guān)。糖皮質(zhì)激素療法的一種該類副作用是骨丟失/骨質(zhì)疏松或糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松(GIOP)。GIOP是藥物誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松最常見的原因，已有報(bào)道稱在經(jīng)歷長(zhǎng)期(即持續(xù)6個(gè)月以上)糖皮質(zhì)激素療法的患者中高達(dá)50%出現(xiàn)GIOP。Feldstein等人，ay//wras./"t，16:2168-2174(2005)。特別是認(rèn)為化合物(I)的使用與7骨丟失或骨質(zhì)疏松的傾向、可能性或發(fā)病率降低有關(guān)。除非另有定義，否則本發(fā)明包括化合物(I)的藥學(xué)上可接受的鹽以及化合物(I)的游離堿或其藥學(xué)上可接受的鹽的溶劑化物。本文所用的術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的鹽"是指對(duì)活的生物體基本無(wú)毒的化合物(I)的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽以及其制備方法的實(shí)例在本領(lǐng)域中是常規(guī)知識(shí)。參見例如Stahl等人，"HandbookofPharmaceuticalSalts:Properties,SelectionandUse",VCHA/Wiley-VCH,(2002);Gould，P丄.，"Saltselectionforbasicdrugs",/o"尸wff/0//^tfr附flcef/ft'c51，33:201-217(1986);和Bastin等人，"SaltSelectionandOptimizationProceduresforPharmaceuticalNewChemicalEntities",Ogflw/c/eseair/jZ)eve/o/;附^，4:427-435(2000)?？商貏e提及的有氯化氫鹽、溴化氫鹽和半硫酸鹽，但是應(yīng)當(dāng)理解的是，優(yōu)選化合物(I)的游離堿。本文所用的術(shù)語(yǔ)"患者"是指人或非人哺乳動(dòng)物如狗、貓、牛、猴、馬或羊。術(shù)語(yǔ)"患者，，更特定地是指人。本文所用的術(shù)語(yǔ)"治療"包括抑制、防止、阻止、減緩、停止或逆轉(zhuǎn)癥狀或障礙的*或嚴(yán)重程度?；衔?I)或其藥學(xué)上可接受的鹽可以作為藥物組合物的一部分被配制用于施用。為此，包含化合物(I)或其藥學(xué)上可接受鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物是本發(fā)明一個(gè)重要的實(shí)施方案。藥物組合物和其制備方法的實(shí)例在本領(lǐng)域中是眾所周知的。參見例如REMINGTON:THESCIENCEANDPRACTICEOFPHARMACY,A.Gennaro等人編輯，第19版，MackPublishing(1995)。包含化合物(I)的舉例性組合物包括例如位于具有1%羧甲基纖維素鈉、0.25%聚山梨酯80和0.05%Antifoam1510(DowCorning)的混懸劑中的化合物(I);位于具有1%羧曱基纖維素鈉、0.25%聚山梨酯80和0.05%Antifoaml510的納米混懸劑(nanosuspension)中的化合物(I);和位于具有0.5%曱基纖維素、1%十二烷基硫酸鈉和0.1%位于0.01NHC1中的Antifoam1510的混懸劑中的化合物(I)。下面提供了包含化合物(I)的特定組合物被配制在口服溶液中的化合物(I)成分濃度化合物(I)0.1mg/mlHP-P-CD10%(w/v)薄荷矯味劑0.03%(v/v)沖洗用7K(waterforirrigation)至100%例如，將50.0g羥丙基-P-環(huán)糊精(HP-(3-CD)(Roquette)加入到一個(gè)500mL的燒杯中，然后加入約400mL沖洗用水并將該混合物機(jī)械攪拌約30分鐘以使HP-I3-CD溶解。將50.0mg化合物(1)、特別是微粉化形式的化合物(I)加入到該HP-(3-CD溶液中并將該混合物覆蓋，同時(shí)繼續(xù)攪拌(約2小時(shí))以使該化合物溶解。向混合物中加入薄荷矯味劑(0.15mL)，同時(shí)繼續(xù)攪拌以使該矯味劑分散。將溶液轉(zhuǎn)移到一個(gè)容量瓶中，加入另外的沖洗用水以4吏終體積為500mL。被配制在口服混懸劑基質(zhì)中的化合物(I)混懸劑基質(zhì)成分濃度MethocelE5-LV1.5%(w/v)山梨醇液體10%(w/v)糖精鈉0.08%(w/v)吐溫800.25%(w/v)Antifoam15100.05%(v/v)薄荷矯味劑0.03%(v/v)沖洗用水至100%例如，將1.25g吐溫80(Fluka)加入到一個(gè)500mL的燒杯中，然后加入7.5g羥丙基甲基纖維素(MethocdE5-LV，Colorcon)和0.4g糖精鈉(Sigma)。向燒杯中加入約300mL沖洗用水，將混合物覆蓋并進(jìn)行機(jī)械攪拌，直至其內(nèi)容物完全溶解。在一個(gè)IOOinL的燒杯中稱取50.0g山梨醇液體(Fluka),然后加入到羥丙基甲基纖維素溶液中(用水對(duì)該100mL燒杯進(jìn)行清洗并將清洗液加入到羥丙基曱基纖維素溶液中)。在攪拌的情況下向該混合物中加入0.15mL薄荷矯味劑，然后加入0.25mLAntifoam1510(DowCorning),同時(shí)繼續(xù)攪拌約10分鐘。然后，將該溶液轉(zhuǎn)移到一個(gè)500mL的容量瓶中，加入另外的沖洗用水以使終體積為500mL。然后將該最終的混懸劑基質(zhì)密封在螺旋帽的瓶中備用。為了制備包含化合物(I)的混懸劑，首先向一個(gè)新的瓶子中加入所需量的化合物(I)(例如1-200mg，特別是微粉化形式的化合物(I))。將所述批量混懸劑基質(zhì)輕輕振搖，然后將10mL基質(zhì)加入到包含化合物(I)的瓶中。然后將瓶密封并劇烈振搖以使化合物(I)分散，然后放置約l分鐘后使用?；蛘?，可以將所需量的化合物(I)加入到一個(gè)包含10mL所述混懸劑基質(zhì)的新瓶中，然后將該瓶密封并如前所述的那樣進(jìn)行振搖。但是，應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明優(yōu)選的組合物包含被配制在膠嚢或片劑中的化合物(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽。的任何途徑施用，包括口服和胃腸外途徑。例如，化合物(I)或包含化合物(I)的組合物可以被口服、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、透皮、局部、鼻內(nèi)、直腸、口含等施用?；蛘撸摶衔锟梢酝ㄟ^(guò)連續(xù)輸入來(lái)施用。但是，應(yīng)當(dāng)理解的是，口服施用是優(yōu)選的施用途徑。本文所用的術(shù)語(yǔ)"有效量"是指在單劑量或多劑量施用于患者后為進(jìn)行診斷或治療的患者提供所需作用的化合物(I)的量或劑量。有效量可以由作為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的主治診斷醫(yī)生通過(guò)考慮多種因素而容易地確定，所述因素如哺乳動(dòng)物的種屬；其大小、年齡和一般健康狀況；所涉及的具體疾??；該疾病的程度或嚴(yán)重性；各患者的響應(yīng)；被施用的具體化合物；施用途徑；被施用的制劑的生物利用度特性；所選擇的劑量方案；和任何并行藥物的使用。1-200mg/天代表了化合物(I)的通常的有效量，但是絕不應(yīng)將其理解為對(duì)本發(fā)明的限制。生物學(xué)活性化合物(I)在體外試驗(yàn)中具有特定的活性性質(zhì)，所述體外試驗(yàn)表明其特別適合用于治療對(duì)經(jīng)典糖皮質(zhì)激素有響應(yīng)的炎性和免疫性障礙。例如，在用表達(dá)人GR、MR、AR和PR的HEK293細(xì)胞進(jìn)行的放射標(biāo)記配體結(jié)合研究中，化合物(I)以小于約0.50nM的Ki與GR結(jié)合。此外，化合物(I)以相對(duì)于MR、AR和PR各自而言約30倍或更大的親合性與GR結(jié)合。在用人皮膚成纖維細(xì)胞CCD-39SK細(xì)胞和U937單核細(xì)胞進(jìn)行的全細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的反式阻抑測(cè)定法中，化合物(I)是IL-6和TNFa的內(nèi)源性產(chǎn)生的有效的和完全的反式阻抑物(大于最大抑制的約90%)。值得注意的是，在GR-介導(dǎo)的反式激活功能測(cè)定法中，化合物(I)在誘導(dǎo)GR/GRE-介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄方面僅表現(xiàn)出部分激動(dòng)劑活性(小于最大功效的約50%)。因此，化合物(I)通過(guò)誘導(dǎo)完全的GR介導(dǎo)的反式阻抑、但是僅部分誘導(dǎo)GR/GRE-介導(dǎo)的反式激活而表現(xiàn)出有區(qū)別的性質(zhì)。此外，在檢查對(duì)其它類固醇激素受體的功能調(diào)節(jié)的作用的測(cè)定法中，化合物(I)在調(diào)節(jié)由AR、MR和PR介導(dǎo)的基因表達(dá)方面僅表現(xiàn)出有限的活性。在比較化合物(I)的作用與甾類糖皮質(zhì)激素的作用的急性和慢性炎癥動(dòng)物模型中，化合物(I)表現(xiàn)出有效的抗炎性質(zhì)。例如，在角叉菜膠-誘導(dǎo)的急性足胂脹(CPE)大鼠模型中，化合物(I)在口服施用后劑量依賴性地抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的足腫脹和抑制白介素-l-P(IL-ip)(在炎性響應(yīng)期間產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子)的產(chǎn)生。有利地將這些結(jié)果與由潑尼松龍產(chǎn)生的結(jié)果進(jìn)行比較，后者在類似條件下的效力比化合物(I)小約5倍。相反，當(dāng)在骨形成動(dòng)物模型中進(jìn)行檢查時(shí)，化合物(I)表現(xiàn)出引起GR介導(dǎo)的骨作用的傾向降低。例如，在比較化合物(I)的作用與潑尼松龍的作用(劑量接近在炎癥動(dòng)物模型中化合物(I)和潑尼松龍各自的ED50值)的小鼠血清骨鈣蛋白測(cè)定法中，在血清骨鈣蛋白(一種公認(rèn)的骨形成標(biāo)志物)的產(chǎn)生方面，化合物(I)誘導(dǎo)更小的降低。下面提供了上述體外測(cè)定法和體內(nèi)動(dòng)物模型的通常的操作。本文所用的"Kd"是指配體-受體復(fù)合物的平衡解離常數(shù)；"Ki"是指藥物-受體復(fù)ii合物的平衡解離常數(shù)，并且是在平衡時(shí)將與一半結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的藥物濃度的指征；"IC50"是指產(chǎn)生對(duì)該物質(zhì)而言可能的最大抑制響應(yīng)的50%的物質(zhì)濃度，或者是指產(chǎn)生與受體結(jié)合的配體的50%置換的物質(zhì)濃度；"EC50"是指產(chǎn)生對(duì)該物質(zhì)而言可能的最大響應(yīng)的50%的物質(zhì)濃度；"ED50"是指產(chǎn)生所施用的治療劑最大響應(yīng)的50%的物質(zhì)劑量。核激素受體結(jié)合測(cè)定法用由過(guò)表達(dá)人GR(糖皮質(zhì)激素受體)、AR(雄激素受體)、MR(鹽皮質(zhì)激素受體)或PR(孕酮受體)的人胚胎腎HEK293細(xì)胞獲得的細(xì)胞裂解物來(lái)進(jìn)行用于測(cè)定Ki值的受體-配體竟?fàn)幗Y(jié)合測(cè)定法。筒言之，在包含20mMHepes緩沖液(pH=7.6)、0.2mMEDTA、75mMNaCl、1.5mMMgCl2、20%甘油、20mM鉬酸鈉、0.2mMDTT(二硫蘇糖醇)、20i!g/mL抑酶肽和20嗎/mL亮抑酶肽的緩沖液中進(jìn)行類固醇受體竟?fàn)幗Y(jié)合測(cè)定法。通常，類固醇受體結(jié)合測(cè)定法每孔包括放射標(biāo)記的配體(如對(duì)于GR結(jié)合而言為0.3nM[3司-地塞米松，對(duì)于AR結(jié)合而言為0.36nM3H]-甲雌三烯醇酮，對(duì)于MR結(jié)合而言為0.25nM卩Hl-醛固酮，對(duì)于PR結(jié)合而言為0.29nM卩Hl-甲雌三烯醇酮)和20嗎293-GR裂解物、22嗎293-AR裂解物、20lig293-MR裂解物或40嗎M^PR裂解物。測(cè)定法通常以96-孔形式進(jìn)行。以約0.01nM至10pM不等的各種濃度加入竟?fàn)幑┰嚮衔?。?duì)于GR結(jié)合而言，在存在500nM地塞米松的情況下測(cè)定非特異性結(jié)合，對(duì)于MR結(jié)合而言，在存在500nM醛固酮的情況下測(cè)定非特異性結(jié)合，或者對(duì)于AR和PR結(jié)合而言，在存在500nM甲雌三烯醇酮的情況下測(cè)定非特異性結(jié)合。將結(jié)合反應(yīng)(140pL)在4。C下孵育過(guò)夜，然后向每個(gè)反應(yīng)中加入70^11冷的炭-葡聚糖緩沖液(每50ml測(cè)定緩沖液包含0.75g炭和0.25g葡聚糖)。將板在定軌振蕩器上在4。C下混合8分鐘。然后將板在3,000rpm下在^C下離心10分鐘。然后將120^L結(jié)合反應(yīng)混合物的等分試樣轉(zhuǎn)移到另一塊^孔板中并向每個(gè)孔中加入175pLWallacOptiphaseHisafe3，閃爍液。將板密封并在定軌振蕩器上劇烈振搖。孵育2小時(shí)后，將板在WallacMicrobeta計(jì)數(shù)器上進(jìn)行讀數(shù)。12用該數(shù)據(jù)來(lái)計(jì)算估算的IC50和10pM下抑制百分比。通過(guò)飽和結(jié)合來(lái)測(cè)定GR結(jié)合的卩H-地塞米松、AR結(jié)合的卩H-曱雌三烯醇酮、MR結(jié)合的卩H-醛固酮或PR結(jié)合的卩H]-甲雌三烯醇酮的Kd。用Cheng-Pmsoff方程將化合物的IC50值轉(zhuǎn)化成Ki。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地設(shè)計(jì)與上述那些相似的結(jié)合測(cè)定法方案。按照與上述操作基本相同的操作，化合物(I)表現(xiàn)出下面的受體結(jié)合性質(zhì)GRKi(nM)ARKi(nM)MRKi(nM)PRKi(nM)0.3516.20116.7631,00(Ki值表示5次獨(dú)立測(cè)定的均值)為了證明本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)類固醇激素受體活性(即激動(dòng)、部分激動(dòng)、部分拮抗或拮抗)的能力，進(jìn)行一些生物測(cè)定法，所述生物測(cè)定法在用核受體蛋白和激素反應(yīng)元件-報(bào)道基因構(gòu)建體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中檢測(cè)靶基因表達(dá)的功能調(diào)節(jié)。功能測(cè)定法中所用的溶劑、試劑和配體可容易地從商業(yè)來(lái)源獲得，或者可以被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員制備。核激素受體功能調(diào)節(jié)測(cè)定法用Fugene(RocheDiganostics)轉(zhuǎn)染試劑將人胚胎腎HEK293細(xì)胞用類固醇激素受體和報(bào)道基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。簡(jiǎn)言之，將在螢光素酶報(bào)道cDNA上游包含兩個(gè)拷貝的probasinARE(雄激素反應(yīng)元件5，GGTTCTTGGAGTACT3，(SEQIDNO:l))和TK(胸苷激酶)啟動(dòng)子的報(bào)道質(zhì)粒與用病毒CMV(巨細(xì)胞病毒)啟動(dòng)子組成型表達(dá)人雄激素受體(AR)的質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中。將在螢光素酶報(bào)道cDNA上游包含兩個(gè)拷貝的GRE(糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件5，TGTACAGGATGTTCT，3(SEQIDNO:2))和TK啟動(dòng)子的報(bào)道質(zhì)粒與用病毒CMV啟動(dòng)子組成型表iiA糖皮質(zhì)激素受體(GR)、人鹽皮質(zhì)激素受體(MR)或人孕酮受體(PR)的質(zhì)粒一起進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在T150cm燒瓶中在具有5V。炭-處理的胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在孵育過(guò)夜后，將被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用胰蛋白酶消化，將其鋪在96孔皿的包含5。/。炭處理的FBS的DMEM培養(yǎng)基中，孵育4小時(shí)，然后使其與約0,01nM至10|LiM不等的各種濃度的供試化合物接觸。在測(cè)定法的拮抗劑模式中，向培養(yǎng)基中加入各受體的低濃度的激動(dòng)劑(對(duì)于GR而言為0.25nM地塞米松，對(duì)于AR而言為0.3nM甲雌三烯醇酮，對(duì)于PR而言為0.05nM普美孕酮，對(duì)于MR而言為0.05nM醛固酮)，測(cè)定供試化合物拮抗激動(dòng)劑響應(yīng)的能力。與供試化合物一起孵育24小時(shí)后，將細(xì)胞裂解并用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)定螢光素酶活性。將數(shù)據(jù)擬合成一個(gè)四參數(shù)擬合對(duì)數(shù)曲線擬合以測(cè)定EC50值。測(cè)定相對(duì)于用下列參比激動(dòng)劑獲得的最大刺激而言的功效百分比(具有飽和的最大響應(yīng)的化合物)或最大刺激百分比(具有不飽和的最大響應(yīng)的化合物)對(duì)于AR測(cè)定法而言為100nM甲雌三烯醇酮，對(duì)于PR測(cè)定法而言為30nM普美孕酮，對(duì)于MR測(cè)定法而言為30nM醛固酮，對(duì)于GR測(cè)定法而言為100nM地塞米松?？梢杂棉卓箘┠Ｊ綔y(cè)定法數(shù)據(jù)類似地確定IC50值。還可以如上所述測(cè)定相對(duì)于僅存在激動(dòng)劑時(shí)的響應(yīng)而言的抑制百分比。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地設(shè)計(jì)與上述那些相似的用于核激素受體調(diào)節(jié)的功能測(cè)定法?；景凑丈鲜霾僮?，化合物(I)在人GR、人AR、人MR和人PR介導(dǎo)的活化轉(zhuǎn)錄中表現(xiàn)出下面的性質(zhì)GRARMRPREC50(nM)功效％*EC50(nM)功效％*EC50(nM)功效％*EC50(nM)功效％*1.945.7nd2.4nd8.5nd40.1"nd"表示數(shù)值大于10|iM*在10|iM下的功效百分比(EC50和功效％值表示3次獨(dú)立測(cè)定的均值)糖皮質(zhì)激素受體-介導(dǎo)的反式阻抑測(cè)定法1.在人皮膚成纖維細(xì)胞CCD-39SK細(xì)胞中IL-ip-刺激的IL-6產(chǎn)生簡(jiǎn)言之，將得自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(ATCC)，Manassas,VA.U.S.A.(ATCCCatalog#CRL-1501)的14充有1(T/。胎牛血清(FBS)、100U/mL青霉素、100ng/mL鏈霉素和2mmol/LL-谷氨酰胺的SF-GM(MEM)培養(yǎng)基(ATCCCatalog#30-20030)中。將細(xì)胞在37。C下維持在具有5。/。C02的加濕房間中。向各孔中加入終濃度為約4.65pM至4.64iaM的各種濃度的供試化合物。用O.lnM地塞米松作為陽(yáng)性對(duì)照。在用供試化合物處理后l小時(shí)，以lng/mL的終濃度加入IL-l(3并將反應(yīng)混合物孵育過(guò)夜。用ELISA試劑盒(R&DSystems,Inc.,Minneapolis,MN，U.S.A.)利用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)量IL-6濃度。簡(jiǎn)言之，從每個(gè)孔中取出10nL上清液并加入卯)iL測(cè)定緩沖液。通過(guò)讀取450nm下的吸光度來(lái)對(duì)IL-6濃度進(jìn)行定量。構(gòu)建吸光度-IL-6濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線并用其來(lái)測(cè)定實(shí)驗(yàn)樣品中的IL-6濃度。2.在PMA-分化的U937細(xì)胞中LPS-刺激的TNF-a產(chǎn)生使人U937幼單核細(xì)胞(ATCCCatalog#CRL-1593.2)在包含10。/。胎牛血清(FBS)的完全RPMI1640培養(yǎng)基(ATCCCatalog#30-2001)中生長(zhǎng)。為了使單核細(xì)胞分化為粘著的巨噬細(xì)胞，將U937細(xì)胞在PBS(無(wú)鈣、鎂)中洗滌并重新混懸于包含20nM佛波醇12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA)的新鮮RPMI培養(yǎng)基中過(guò)夜。分化后，以約4.65pM至4.64iaM的各種濃度向位于96孔板中的細(xì)胞中加入供試化合物。在用供試化合物處理后l小時(shí)，以100ng/mL的終濃度加入LPS并將反應(yīng)混合物孵育過(guò)夜。用ELISA試劑盒(R&DSystems,Inc.,Minneapolis,MN，U.S.A.)利用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)量TNF-a產(chǎn)生。簡(jiǎn)言之，將25iaL無(wú)細(xì)胞的上清液轉(zhuǎn)移到另一塊96孔板中并加入75fiL測(cè)定緩沖液。通過(guò)在450nm下讀取吸光度來(lái)對(duì)TNF-a進(jìn)行定量。構(gòu)建吸光度-TNF-a濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線并用其來(lái)確定實(shí)驗(yàn)樣品中的TNF-a濃度?；景凑丈鲜霾僮鳎衔?I)誘導(dǎo)IL-6和TNF-a內(nèi)源性表達(dá)最大抑制的約90%或更高，其EC50值分別為約4.8和30nM(IL-6測(cè)定法的數(shù)據(jù)表示22次獨(dú)立測(cè)定的均值；TNF-a測(cè)定法的數(shù)據(jù)表示6次獨(dú)立測(cè)定的均值)動(dòng)物模型1.角叉菜膠-誘導(dǎo)的足腫脹(CPE)模型角叉菜膠是一組多糖，其能誘導(dǎo)動(dòng)物的急性炎性響應(yīng)。在注射后立即在注射部位形成炎癥主征，包括水腫、痛覺(jué)過(guò)敏和紅斑。CPE模型(Winter等人，Soc.Ex/;.A^/.111，544-547，1962)是一種公認(rèn)的炎癥模型，能用來(lái)評(píng)價(jià)糖皮質(zhì)激素受體配體的抗炎作用。為了評(píng)價(jià)化合物(I)的抗炎作用，將化合物(I)配制在包含0.5%羧甲基纖維素和0.25%吐溫80的基質(zhì)中，然后通過(guò)管伺法將其口服施用于雄性Sprague畫Dawley大鼠(180-200g)(HarlanIndustries,Indianapolis,IN.)。為了進(jìn)行比較，將潑尼松龍?jiān)谙嗤幕|(zhì)中口服施用。兩小時(shí)后，將1%的在50)liL0.9%無(wú)熱原生理鹽水中的角叉菜膠注射到右后足的跖下區(qū)域中。在注射角叉茱膠后3小時(shí)，將大鼠用C02安樂(lè)死。取下其足，然后用微量天平稱重。然后將足立即浸入液氮中直至冷凍。通過(guò)在足表面上進(jìn)行多次切割將冷凍的足切細(xì)，然后進(jìn)行離心以提取滲出物。然后利用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用ELISA(R&DSystems,Inc.,CatalogNo.RLB00)測(cè)量IL-ip(炎性響應(yīng)期間產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子)的滲出物水平。還用蛋白測(cè)定試劑盒(PierceBiotechnology,Inc.,Rockford,IL.，U.S.A.,CatalogNo,1856210)測(cè)量總足蛋白，將IL-ip的絕對(duì)水平標(biāo)準(zhǔn)化，從而得到ngIL-ip/mg總蛋白的濃度值?；衔?I)以約1.2mg/kg的ED50抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的足重量增加?；衔?I)還以約0.31mg/kg的ED50降低IL-1卩的足滲出物水平。相反，在該模型中，潑尼松龍?zhí)幚硪约s6.6mg/kg的ED50抑制足重量增加，以小于約1mg/kg的ED50降低IL-ip水平(ED50值表示5次獨(dú)立測(cè)定的均值)。2.血清骨鉤蛋白測(cè)定法骨丟失/骨質(zhì)疏松和因而導(dǎo)致的骨折風(fēng)險(xiǎn)增加是由糖皮質(zhì)激素療法導(dǎo)致的一種常見的且顯著的不良作用。認(rèn)為糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松至少部分是由骨形成抑制導(dǎo)致的。血清骨鈣蛋白(一種骨合成的生物學(xué)標(biāo)志物)的測(cè)量是一種公認(rèn)的評(píng)估糖皮質(zhì)激素療法對(duì)骨的不良作用的工具。(見16Pearce等人，/.C7/".E/ifttocWwo.Af""6.83:801-806，(1998))。為了評(píng)估化合物(I)對(duì)骨形成的影響，將化合物(I)配制在包含5%羧甲基纖維素和0.25%吐溫80的基質(zhì)中并將其通過(guò)管飼法口服施用于16周齡的雄'I"生Swiss-Web小鼠(HarlanIndustries,Indianapolis,IN)，施用7天。為了進(jìn)行比較，將潑尼松龍?jiān)谙嗤幕|(zhì)中口服施用。在最后一次劑量后24小時(shí)收集血清并用被調(diào)整用于96孔格式的竟?fàn)幮苑派涿庖邷y(cè)定(RIA)試劑盒(BiomedicalTechnologies,Inc.,Stoughton，MA)測(cè)定骨釣蛋白水平。簡(jiǎn)言之，將包含2.5^L小鼠血清、2.5pL山羊抗小鼠骨鈣蛋白、0.625pL正常的山羊血清和119.375pLRIA緩沖液(0.1225MNaCl，0.01MNaH2P04，pH7.4，0.025MEDTA四鈉，0.1%(w/v)BSA和(U。/o(w/v)吐溫-20)的MultiscreenTM板(MAHVN45,Millipore，Bedford,MA)的每個(gè)孔在4。C下在定軌振蕩器上在80rpm下孵育18小時(shí)。在向每個(gè)孔中加入位于25plRIA緩沖液中的0.2^Ci/ml[1251小鼠骨鈣蛋白后，將板在4。C下在定軌振蕩器上在80rpm下孵育24小時(shí)。通過(guò)加入位于0.2MNa2HP04，pH7.4中的驢抗山羊IgG(l:30)、5。/。(w/v)聚乙二醇，125nL/孔使復(fù)合物在25。C下沉淀2小時(shí)。通過(guò)真空過(guò)濾收集沉淀并用100pL/孔的dH20洗滌一次。將濾器沖壓(punched)并在y計(jì)數(shù)器(CobraII，PackardInstruments,Meriden,CT)上對(duì)放射活性進(jìn)行定量。在供試樣品的濾器上檢測(cè)到的放射活性與血清骨鈣蛋白濃度成反比。用純化的小鼠骨鈣蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算供試樣品中的血清骨鈣蛋白濃度。比較大鼠CPE模型中測(cè)得的接近ED50值的日劑量(lmg/kg/天的化合物(I)和10mg/kg/天的潑尼松龍)，化合物(I)在血清骨鈣蛋白水平方面比潑尼松龍誘導(dǎo)更小的降低(血清骨鈣蛋白水平代表6次獨(dú)立測(cè)定的均值)。如所述的那樣，化合物(I)具有解決患者療法和藥物研發(fā)領(lǐng)域的其它一些限制因素的另外的技術(shù)效果或有利性質(zhì)。例如，化合物(I)在口服施用于試驗(yàn)動(dòng)物后表現(xiàn)出良好的生物利用度和良好的血漿暴露。此外，當(dāng)與人肝細(xì)胞培養(yǎng)物一起進(jìn)行體外孵育時(shí)，化合物(I)僅表現(xiàn)出微小的代謝。此外，在化合物(I)的體內(nèi)施用后，大鼠、狗和猴血漿的代謝特性表明化合物(I)是17主要的循環(huán)實(shí)體，在猴血漿中沒(méi)有檢測(cè)到代謝物。此外，當(dāng)在體外測(cè)定法和體內(nèi)遺傳毒性潛能研究中進(jìn)行檢查時(shí)，化合物(I)表現(xiàn)為無(wú)遺傳毒性。由于這些性質(zhì)和其它一些性質(zhì)，認(rèn)為化合物(I)尤其適合用于治療常常需要重復(fù)或長(zhǎng)期進(jìn)行治療劑給藥的慢性炎性或免疫性障礙。除了對(duì)患者療法有益的性質(zhì)外，化合物(I)還具有促進(jìn)其藥學(xué)研發(fā)的另外的優(yōu)點(diǎn)。例如，化合物(I)能以結(jié)晶形式被分離。應(yīng)當(dāng)理解的是，除了具有所需的生物學(xué)性質(zhì)外，還希望治療劑也具有某些物理特性。具體而言，需要穩(wěn)定的結(jié)晶性固體形式的化合物，因?yàn)樗鼈兲貏e是可經(jīng)受化學(xué)合成、純化、儲(chǔ)存和配制或劑型研發(fā)的常規(guī)^^式。本文所用的"結(jié)晶形式"或"晶形"是指具有不同晶體排列的固體形式的一類化學(xué)品，所述晶體排列使得該固體形式區(qū)別于相同元素組成的其它形式。本文所用的"基本純的結(jié)晶形式"是指包含大于約95%的特定結(jié)晶形式、優(yōu)選大于約98°/。的特定結(jié)晶形式的化學(xué)品的純晶形?？梢杂贸Ｒ?guī)技術(shù)表征特定晶形并將其與同一化學(xué)品的其它固體形式相區(qū)別，所述常規(guī)技術(shù)包括X-射線粉末衍射(XRPD)、光譜法(例如紅夕卜(IR)或核磁共振(NMR)光譜)和熱技術(shù)(例如差示掃描量熱法(DSC)、熱重分析(TGA)或差示熱分析(DTA))。雖然XRPD是一種特別有用的表征化學(xué)品晶形的方法，但是應(yīng)當(dāng)理解的是，根據(jù)所分析的樣品和所用的儀器、溶劑或操作，在相同晶形的不同分析中，X-射線模式中的實(shí)際峰強(qiáng)度可能不同。此外，還應(yīng)當(dāng)理解的是，雖然由給定晶形的分析獲得的準(zhǔn)確峰位(以。29為單位)可能在不同的分析之間不同(例如±0.1。)，但是光譜間峰位的相對(duì)模式基本相同。本發(fā)明提供了結(jié)晶形式的化合物(I)。更特定地，本發(fā)明提供了在約10.9、18.8和22.9的。2e處具有特征峰的結(jié)晶形式的化合物(I)的游離堿(本文實(shí)施例中的I型)。此外，本發(fā)明還提供了在約4.5、9.0、11.5和14.7的。20處具有特征峰的結(jié)晶形式的化合物(I)的游離堿(本文實(shí)施例中的II型)。還更特定地，本發(fā)明提供了基本純的結(jié)晶形式的I型和II型的化合物(I)。此外，化合物(I)在增加的溫度、相對(duì)潮濕和光暴露的條件下是不吸濕性的和穩(wěn)定的。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解的是，粒度能影響藥用物質(zhì)的體內(nèi)溶出，其進(jìn)而又能影響該物質(zhì)的吸收。本文所用的"粒度"是指用常規(guī)技術(shù)如激光散射、激光衍射、米氏散射、沉降場(chǎng)流分級(jí)(sedhnentationfieldflowfractionation),光子相關(guān)光鐠等測(cè)得的藥用物質(zhì)的顆粒直徑。在藥用物質(zhì)溶解度差的情況下，小的或減小的粒度可幫助該物質(zhì)溶解并從而增加其吸收。Amidon等人，尸/^/m及MewrA，12;413-420(1995)。用于減小或控制粒度(微粉化)的方法是常規(guī)的，包括球磨、針磨(pinmilling)、氣流粉碎、濕法研磨等。用于控制粒度的另一種方法涉及制備位于納米混懸劑中的藥用物質(zhì)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，化合物(I)的化學(xué)制備產(chǎn)生具有特定粒度的晶體。具體而言，當(dāng)基本按照本文所述的實(shí)施例l(a)進(jìn)行制備時(shí)，化合物(I)的游離堿的樣品提供小于20pm的粒度和小于50pm的d卯粒度(即90%的顆粒的大小小于或等于該粒度)(粒度是用BeckmanCoulterLS13320激光衍射粒度分析儀測(cè)定的)。此外，當(dāng)基本按照本文實(shí)施例6和7中所述的那樣進(jìn)行制備時(shí)，化合物(I)的游離堿的微粉化樣品提供小于10|im的X5o粒度(即50%的顆粒的大小小于或等于該粒度)和小于2(Him的x9o粒度(即卯％的顆粒的大小小于或等于該粒度)(粒度是用Sympatec(HELOS粒度分析系統(tǒng))激光衍射粒度分析儀測(cè)定的)。為此，本發(fā)明的一個(gè)特定實(shí)施方案是其中化合物(I)具有小于20)xm的平均粒度和小于50urn的d卯粒度的化合物(I)的游離堿或包含化合物(I)的游離堿的藥物組合物。一個(gè)更特定的實(shí)施方案是其中化合物(I)具有小于15pm的平均粒度和小于40nm的d9o粒度的化合物(I)的游離堿或包含化合物(I)的游離堿的藥物組合物。甚至更特定的是其中化合物(I)具有小于10nm的x50粒度和小于20pm的x90粒度的化合物(I)的游離堿或包含化合物(I)的游離堿的藥物組合物。還更特定地是其中化合物(I)具有小于5|um的x50粒度和小于15nm的x90粒度的化合物(I)的游離堿或包含化合物(I)的游離堿的藥物組合物。此外，在本文的實(shí)施例中還提供了位于納米混懸劑中的化合物(I)的實(shí)例。制備化合物(I)的方法是本領(lǐng)域中已知的。例如，WO04/052847提供了可以使用的通用操作。此外，WO05/066161提供了可以使用的另外的通用操作。下面的流程圖、中間體和實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了舉例說(shuō)明，代表化合物(I)的典型合成。試劑和起始材料易于獲得或者可被本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地合成。應(yīng)當(dāng)理解的是，這些流程圖、中間體和實(shí)施例是作為舉例說(shuō)明給出的，不是對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以對(duì)其進(jìn)行修改。本文所用的"DMSO"是指二曱基亞砜；"DIAD"是指偶氮二甲酸二異丙基酯；"ADDP，，是指l，l，-(偶氮二羰基)二哌啶；"THF"是指四氫呋喃；"DMF"是指二曱基甲酰胺；"TMSCN，，是指三曱基氰基硅烷；"TEA"或"Et3N，，是指三乙胺；"DME，，是指1，2-二甲氧基乙烷；"AcOEt，，是指乙酸乙酯；"pyr"是指吡啶；"MsCl"是指甲磺酰氯；"Et2NH"是指二乙胺；"MeOH"是指甲醇；"PhCH3"是指甲苯；"PhH"是指苯；"PBii3"是指三丁基膦；"PPh3"是指三苯基膦；"dPPr是指l,l，-雙(二苯基膦基)二茂鐵；"NaO-t-Bu"是指叔丁醇鈉；"MTBE"是指叔丁基甲基醚。流程圖I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>在流程圖I中描述了吡啶中間體(5)、(6)和(7)的制備。在流程圖I的步驟1中，3-溴吡啶(l)被氧化成3-溴-吡啶-N-氧化物(2)。在流程圖I的步驟2中，氰化物取代提供了3-溴-吡啶-2-曱腈(3)。在步驟3中，式("的腈被水解成羧酸并在酸催化下被酯化成式(4)的酯。在流程圖I的步驟4中，用硼氫化鈉將該酯還原成式(5)的吡吱基甲醇。用曱磺酰氯將該吡咬基甲醇轉(zhuǎn)化成式(6)的甲磺酸酯(步驟5)或者用亞硫酰氯將該吡啶基甲醇轉(zhuǎn)化成式(7)的吡啶基甲基氯(步驟6)。流程圖II^"^Br(5)ADDP,PBu3,PhHO21在流程圖II中描述了最終的化合物I苯并吡-定基-10-氧雜萆(oxepine)的合成。在流程圖II的步驟1中，式(8)的苯胺的修改的Sandmeyer反應(yīng)提供了式(9)的5-氯-2-碘苯酚。在流程圖II的步驟2中，5-氯-2-碘苯酚和式(5)的吡咬基甲醇之間的Mitsunobu反應(yīng)提供了式(10)的碘代芳基醚。其它合適的試劑包括位于THF中的三苯基膦和DIAD?；蛘?，在步驟3中，通過(guò)用堿如叔丁醇鈉、叔丁醇鉀或碳酸鉀在惰性溶劑如THF或乙腈中用式(6)或(7)的吡咬甲基曱磺酸酯或吡啶曱基氯進(jìn)行的烷基化來(lái)獲得式(10)的碘代芳基醚。在流程圖II的步驟4中，在Sonagashira偶聯(lián)中用l-丁炔處理式(10)的多輿代芳基醚，得到式(ll)的炔基芳基醚。該反應(yīng)用二乙胺/乙腈/THF的混合物進(jìn)行；并且用1-丁炔向該反應(yīng)混合物中鼓泡?；蛘撸摲磻?yīng)用三乙胺作為堿來(lái)進(jìn)行并用24%wt/wt的1-丁炔的DMF溶液進(jìn)行處理。在流程圖II的步驟5和6中，式(ll)的炔基芳基醚的鉑催化的二硼化提供了式(12)的二硼酸酯，其經(jīng)分子內(nèi)Suzuki偶聯(lián)形成式(13)的乙烯基硼酸酯。在流程圖II的步驟7中，乙烯基硼酸酯(13)和3-碘苯胺之間的分子間Suzuki偶聯(lián)提供了式(14)的苯胺。為了改善式(14)的苯胺的純化，可以用適宜的酸處理該苯胺，以形成鹽。例如，可以用甲恭璜酸處理式(14)的苯胺，生成二甲恭績(jī)酸鹽形式的式(14)的苯胺。在流程圖II的步驟8中，用甲磺酰氯將該苯胺磺?；?，生成最終的化合物(I)苯并吡咬基-10-氧雜簞?；蛘撸诹鞒虉DII的步驟9中，通過(guò)用N-(3-碘-苯基)-甲磺酰胺進(jìn)行Suzuki偶聯(lián)來(lái)直接獲得化合物(I)苯并吡P定基-10-氧雜萆?；衔?I)可以通過(guò)重結(jié)晶例如用甲醇重結(jié)晶來(lái)純化。流程圖IIa在流程圖IIa中描述了式(ll)的炔基芳基醚的另一種合成方法。在流程圖IIa的步驟1中，將式(9)的5-氯-2-碘苯酚保護(hù)成式(9a)的四氫吡喃(THP)醚形式。該反應(yīng)在惰性溶劑如二氯甲烷中在存在酸催化劑如對(duì)甲苯磺酸吡咬條t的情況下進(jìn)行。在30。C或低于約30。C的溫度下加入3,4-二氫-2H-吡喃，然后4吏反應(yīng)在約室溫下進(jìn)行10至24小時(shí)。在流程圖IIa的步驟2中，在Sonagashira偶聯(lián)中用l-丁炔處理式(9a)的碘苯，得到式(9b)的炔基苯。該反應(yīng)用三乙胺和惰性溶劑如乙酸乙酯和鈀催化劑如二氯雙(三苯基膦)鈀(II)和碘化亞銅(I)進(jìn)行。在約0至l(TC的溫度下加入1-丁炔并使反應(yīng)在約室溫下進(jìn)行約10至24小時(shí)。在后處理后，可以通過(guò)硅膠色諉法和用庚烷/三乙胺重結(jié)晶來(lái)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。在步驟3中，用酸性條件將式(9b)的THP醚去保護(hù)，得到式(9c)的炔基苯酚。特定的條件使用在醇性溶劑如甲醇中的催化量的礦物酸如鹽酸。使反應(yīng)在0。C至室溫下進(jìn)行30分鐘至6小時(shí)。在流程圖IIa的步驟4中，用堿如叔丁醇鈉、叔丁醇鉀或碳酸鉀在惰性溶劑如THF或乙腈中將式(9c)的炔基苯酚用吡啶甲基曱磺酸酯烷基化。特定的條件使用在THF中的叔丁醇鈉，在低于0。C的溫度下將其加入到甲磺酸酯和苯酚的溶液中，隨后在室溫下攪拌24至72小時(shí)。在萃取后處理后，將產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶。流程圖IIITMS在流程圖III中描述了最終的化合物(I)苯并吡啶基-10-氧雜革的另一種供替代選擇的合成方法。在流程圖III的步驟1中，三甲基硅烷基-(乙炔)和式(15)的3-碘硝基苯胺之間的Sonagashira反應(yīng)提供了式(16)的三甲基硅烷基炔烴，其經(jīng)去硅烷化轉(zhuǎn)換成流程圖III的步驟2中的式(17)的炔經(jīng)。在流程圖III的步驟3中，用典型的Sonagashira反應(yīng)條件將(17)與式(18)的吡淀基甲醇偶聯(lián)，得到式(19)的二芳基炔烴。在流程圖11I的步驟4中，二芳基炔烴(19)和式(9)的5-氯-2-碘苯酚之間的Mitsonobu反應(yīng)提供了式(20)的聯(lián)芳基炔基碘代芳基醚。典型的條件包括位于二氯甲烷中的DIAD和三苯基膦。在流程圖III的步驟5中，在存在三聚乙烯基硼酸酐的情況下通過(guò)鈀催化的分子內(nèi)Heck-Suzuki級(jí)聯(lián)反應(yīng)將聯(lián)芳基炔基^P典代芳基(20)轉(zhuǎn)化成式(21)的吡咬基氧雜萆。優(yōu)化的條件包括在90。C下向聯(lián)芳基炔基碘代芳基(20)、2mol。/。醋酸把(H)、2當(dāng)量碳酸鈉在4:1體積比的DME:水中的混合物中緩慢加入所述硼酸酐。在流程圖III的步驟6中，對(duì)吡咬基氧雜革(21)的雙鍵和硝基在Pd/C上進(jìn)行一罐式(one-spot)氬化，得到式(14)的苯胺。在流程圖III的步驟7中，利用吡咬堿將該苯胺用甲磺酰氯磺?；?，得到最終的化合物(I)苯并吡啶基-10-氧雜革。儀器分析GC-MS分析可以使用溫度編程(60-280。C7.3分鐘，然后280。C2分鐘)在配有Agilent0.25-mmxl5-mx0.25nm毛細(xì)管柱的HP6890SeriesGC-MS(70eV)上進(jìn)行。LC-MS分析可以在使用WatersXterraMSC184.6-mmx50-mm3.5-nm柱和大氣壓化學(xué)電離(APCI)的Agilent1100SeriesHPLC上進(jìn)行。該分析通常用80°/。甲醇:水至100%曱醇梯度進(jìn)行?；蛘週C-MS分析可以在WatersXTerraC182.1x50mm3.5nm柱和電噴霧電離上進(jìn)行。溶劑系統(tǒng)為具有0.2%甲酸]\114的5-100%乙腈/MeOH(50/50)。！HNMR光譜可以在Varian400MHz光語(yǔ)儀上在環(huán)境溫度下進(jìn)行記錄。數(shù)據(jù)的報(bào)道如下在S刻度上的以相對(duì)于內(nèi)標(biāo)四甲基硅烷的ppm為單位的化學(xué)位移，多重性(b=寬峰，s=單峰，d=雙重峰，t二三重峰，q=四重峰，qn二五重峰，m=多重峰)，積分，偶合常數(shù)(Hz)和歸屬。X-射線粉末衍射(XRPD)圖可以在配有CuKa源(入=1.54056angstrom)和電子固態(tài)檢測(cè)器的BrukerD825AdvanceXRPD粉末衍射儀上獲得，在40kV和40mA下進(jìn)行操作。將各樣品在以。2e計(jì)4。至40。之間進(jìn)行掃描，步長(zhǎng)為以2e計(jì)0.02。，掃描速率為3秒/步，使用受控的可變(vl2)發(fā)散狹縫和接受狹縫以及0.2mm的檢測(cè)器狹縫。或者，X-射線粉末衍射分析可以用BrukerD8Advance衍射儀進(jìn)行，將樣品在以。29計(jì)2。至44。之間進(jìn)行掃描，步長(zhǎng)為以。20計(jì)0.02。，掃描速率為5秒/步，使用0.6mm的發(fā)散狹縫、0.6mm的抗散射狹縫、O.lmm的接受狹縫和0.6mm的檢測(cè)器狹縫。差示掃描量熱法(DSC)分析可以在Mettler-ToledoDSC設(shè)備(Model822)上進(jìn)行。將樣品在具有小孔(pinhole)的封閉鋁盤中在50mL/min的氮?dú)鈨艋乱?。C/min的速度從30。C加熱至300。C。差示熱分析(DTA)和熱重分析(TGA)可以在MettlerToledoDTA和TGA設(shè)備(ModelTGA/SDTA851)上進(jìn)行。將樣品在具有小孔的封閉鋁盤中在50mL/min的氮?dú)鈨艋乱?0。C/min的速度從25。C加熱至300-350。C。用銦/鋁標(biāo)準(zhǔn)品(m.p.=156.6和660.3。C)對(duì)TGA溫度進(jìn)行校準(zhǔn)。用生產(chǎn)商提供的標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)進(jìn)行重量校準(zhǔn)，用檸檬酸鈉脫水物去溶劑化來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。本發(fā)明的化合物的名稱一般是用ChemDrawUltra,7.0.1版獲得的。將2-氨基-5-氯苯酚(5.7g，40mmol)溶解于DMSO〃K/H2S04(200/60/140mL)中并冷卻至0。C。向該溶液中加入在水(20mL)中的亞硝酸鈉(4.1g，60mmol)并將該混合物在0。C下攪拌l小時(shí)。向混合物中加入在水(20mL)中的碘化鉀(19.9g，120mmol)并將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。加入另一批在水(20mL)中的碘化鉀(19.9g，120mmol)并將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用水、飽和疏酸鈉水溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)部分用MgS04千燥，過(guò)濾，減壓濃縮。將所得的殘余物用快速色語(yǔ)進(jìn)行純化(BiotageTMSi65M，20%乙酸乙酯/己烷)，得到8.09g(79%)粉紅色固體形式的標(biāo)題化合物。GCMSm/e254[M]'。中間體l5-氯-2-碘-苯酚26另一種操作給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、加料漏斗、氮?dú)馊肟?、干燥管和熱電?放在冷卻管中)。向該燒瓶中加入水(4.5L)，開始攪拌，將反應(yīng)冷卻至0。C。滴加硫酸(3.7L)并維持溫度《30°C。歷經(jīng)20分鐘向燒瓶中加入2-氨基-5-氯苯酚(1500g)并維持溫度《30。C。歷經(jīng)1小時(shí)滴加DMSO(12L)并維持溫度S30°C。將反應(yīng)混合物冷卻至-5至0°C。歷經(jīng)1小時(shí)45分鐘滴加亞硝酸鈉(1082g)在水(6L)中的溶液并維持溫度《0。C。在完全加入后，將反應(yīng)混合物在S0。C的溫度下攪拌最少1小時(shí)。給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、加料漏斗、氮?dú)馊肟诤蜔犭娕?放在加熱套中)。向該燒瓶中加入碘化鉀(6.9kg)和水(7.5L)，開始攪拌并將反應(yīng)加熱至48至50°C。向燒瓶中分批加入2-氨基-5-氯苯酚的被重氮化的溶液并將溫度維持在48至50°C,用兩個(gè)冷凝器來(lái)排放氣體。將反應(yīng)混合物在48至50。C下加熱2小時(shí)。其后，停止加熱并將反應(yīng)在環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。用TLC(庚烷:EtOAc，9:1)對(duì)反應(yīng)進(jìn)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在Rf=0.3處觀察到的是起始材料，在Rf=0.6處觀察到的是產(chǎn)物。當(dāng)觀察不到起始材料時(shí)，認(rèn)為反應(yīng)完全。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)，將反應(yīng)混合物用MTBE(16L)稀釋并攪拌20分鐘。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中并將有機(jī)層與水層分開。將有機(jī)層用Na2S203溶液(3kg)和水(12L)洗滌并攪拌5-10分鐘。分離出有機(jī)層，將同樣的洗滌順序再重復(fù)兩次。將有機(jī)層與水層分開并棄去所有含水洗滌液。將有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液(4L)洗滌。將有機(jī)層與水層分開并將有機(jī)層用鹽水(4L)洗滌。分離出有機(jī)層并用硫酸鎂干燥，用炭處理，過(guò)濾，濃縮。用油泵將所得的殘余物與庚烷(lL)一起共蒸發(fā)以除去殘留的溶劑。將殘余的棕色油狀物(2880g)溶解于庚烷(lmL/g)中并將該溶液i文在冷凍器中過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾收集固體，用冷庚烷(2x600mL，0。C)洗滌并在真空烘箱中在環(huán)境溫度下干燥過(guò)夜。得到褐色固體。中間體23-溴-吡啶1-氧化物27將曱基三氧錸(methyltrioxorhenium)(100mg，0.401mmol)溶解于二氯曱烷(40mL)中并加入3-溴吡啶(15.8g，100mmol)，然后加入30%的H202水溶液(22.7mL)。將該雙相混合物在室溫下進(jìn)4亍攪拌。在18小時(shí)后，加入Mn02(25mg，0.29mmol)并將該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將該混合物用二氯甲烷萃取并將合并的萃取物用鹽水洗滌，用MgS04干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，得到9.52g(55。/o)橙色油狀物形式的標(biāo)題化合物。GCMSm/e1M-H1。另一種操作給一個(gè)22L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器和熱電偶。向該燒瓶中加入3-溴吡啶(3169g,20mo1)、二氯甲烷(8.2L)和甲基三氧錸(IOg)。用冷自來(lái)水浴將該反應(yīng)混合物冷卻至18。C并歷經(jīng)約15分鐘分批加入30%的過(guò)氧化氬水溶液(3.07L，30mol)。該反應(yīng)輕微放熱，向冷卻管中加入冰以將溫度維持在20-25°C。將反應(yīng)混合物在浴中在室溫下(不要將浴排空)攪拌過(guò)夜。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷:EtOAc，1:1)。觀察到起始的3-溴吡啶的Rf=0.6，產(chǎn)物的Rf-O.l。在攪拌過(guò)夜后可能存在痕量的起始材料，可以對(duì)反應(yīng)進(jìn)行后處理或再將其攪拌8-24小時(shí)。在認(rèn)為其反應(yīng)完全時(shí)，以控制起泡和將溫度維持在20-25。C的速度分小份加入二氧化錳(31g，<10微米)。如果溫度升得更高，可向冷卻水管中加入水。如果觀察到起泡，則可以再加入一些二氧化錳。當(dāng)加入新的二氧化錳后觀察到不再起泡時(shí)，加入固體氯化鈉(860g)并將反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中并分離出有機(jī)層。將水層用二氯甲烷(3x2.5L)萃取?？梢杂肨LC對(duì)各有機(jī)層的萃取物進(jìn)行監(jiān)測(cè)。如果在最后一次萃取后存在產(chǎn)物，則可以對(duì)水層進(jìn)行過(guò)濾，然后可以加入另外的氯化鈉(500g)并對(duì)該混合物進(jìn)行攪拌以使鹽溶解。然后將水層用二氯曱烷(3x2L)萃取。將合并的有機(jī)部分用硫酸鎂千燥，過(guò)濾，濃縮。在燒瓶中剩下淡黃色油狀物。可以直接用該物質(zhì)來(lái)制備3-溴吡咬-2-甲腈。中間體33-溴-吡啶-2-曱腈將3-溴-吡-定1-氧化物(9.4g，54mmol)溶解于乙腈(60mL)中并加入三乙胺(15mL)，然后加入三甲基氰基硅烷(21.7mL，163mmo1)。將該混合物加熱至100。C并攪拌16小時(shí)。將混合物冷卻至0。C，傾倒到250mL5MNaOH水溶液中并用二氯曱烷萃取。將合并的萃取物用鹽水洗滌，用MgS04干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。將所得的物質(zhì)用快速色譜進(jìn)行純化(Biotage⑧Si65M，20o/o乙酸乙酯/己烷)，得到7.8g(79。/。)黃色固體形式的標(biāo)題化合物。GCMSm/e182，184,。另一種操作給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、熱電偶、氮?dú)馊肟?、有效的回流冷凝器和干燥?在加入三甲基氰基硅烷期間不配備干燥管)。向該燒瓶中加入3778g(約20mol)3-溴吡啶-N-氧化物粗品(例如基本如中間體2的另一種操作中所述的那樣制備)、乙腈(19L)和三乙胺(6.667L，50mol)。將反應(yīng)混合物加熱至約70-73。C輕微回流，然后歷經(jīng)共計(jì)3小時(shí)以10-15分鐘的時(shí)間間隔通過(guò)加料漏斗加入純?nèi)龝趸杌柰?6.667L,50mol)。在加入每份三曱基氰基珪烷后，反應(yīng)向強(qiáng)回流進(jìn)行(如果有蒸汽溢出，則可能需要加入另外的三甲基氰基硅烷以驅(qū)動(dòng)反應(yīng)進(jìn)行完全)。在完全加入時(shí)，將反應(yīng)混合物在回流下攪拌20小時(shí)，同時(shí)根據(jù)需要調(diào)整加熱速率以保持回流。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷EtOAcl:l)。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，將反應(yīng)混合物冷卻至0-10。C。歷經(jīng)30分鐘以成流形式加入500/0NaOH(7.2kg)在水(9L)中的溶液，導(dǎo)致放熱。溫度升至20-25。C，將反應(yīng)在15-:2S。C下攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中并分離出有機(jī)層。將有機(jī)層用鹽水(4L)洗滌并將合并的水層用EtOAc(3x3L)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(3L)洗滌，用炭處理，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮。將所得的固體(約3.8kg)溶解于EtOAc(25L，進(jìn)行一定的加熱)中，用硫酸鎂干燥，炭處理，過(guò)濾并濃縮。在加熱的情況下將所得的褐色/棕色固體溶解于乙醇(7L)中。將所得的溶液轉(zhuǎn)移到一個(gè)桶中并使其在室溫下靜置過(guò)夜。其后，通過(guò)過(guò)濾收集固體并在濾器上用冷乙醇(2xlL，-20°(:)洗滌。將固體溶解于EtOAc(20至25L)中，將該溶液用硫酸鎂干燥，用炭處理以脫色，然后過(guò)濾。將濾餅用EtOAc(2x2L)洗滌，合并濾液，將其濃縮至干。將殘余的固體(2Z7kg)與EtOH(lL)共蒸發(fā)。然后通過(guò)加熱將該固體溶解于EtOH(6L)中。在約70。C下形成一種澄清的溶液，然后將該溶液冷卻至0-5。C并在該溫度下攪拌2小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集固體，用冷乙醇(2xlL，0-5。C)、然后用庚烷(lL，0-5。C)洗滌，在真空烘箱中在40。C下進(jìn)行干燥。將3-溴-吡啶-2-甲腈(14,7g，80.3mmol)溶解于濃HCl(50mL)中并加熱至110。C達(dá)18小時(shí)。將該混合物冷卻至0。C,過(guò)濾，用少量乙醚洗滌，在烘箱中減壓干燥。將所得的棕色固體溶解于甲醇(80mL)中，滴加濃H2S04(6.6mL)，將該溶液加熱至90。C達(dá)16小時(shí)。減壓除去甲醇，加入飽和碳酸氫鈉水溶液從而獲得堿性pH，然后將該混合物用乙酸乙酯萃取。將合并的萃取物用鹽水洗滌，用MgS04干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，得到12.8g(74%)白色固體形式的標(biāo)題化合物。GCMSm/e215，217[M—。另一種操作給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、熱電偶、氮?dú)馊肟诤突亓骼淠?。向該燒瓶中加入HC1(20L)和3-溴吡咬-2-甲腈(67卯g，37.1mol)(例如基本如中間體3的另一種操作中所述的那樣制備)。將反應(yīng)混合物加熱至回流，起始材料溶解，形成一種粉紅色的混懸液。將反應(yīng)混合物在回流下攪拌20小時(shí)。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷:EtOAc,1:1)。在Rf=0.5處不存在起始材料或者在Rf=0.15處不存在中間體酰胺。在認(rèn)為反應(yīng)完全中間體43-溴-吡啶-2-甲酸曱酉l30時(shí)，將反應(yīng)混合物冷卻至0-5。C，然后在該溫度下攪拌3小時(shí)。其后，通過(guò)過(guò)濾收集固體(不洗滌，在濾器上按壓)。將固體(3-溴吡啶-2-甲酸)在真空烘箱中在50。C下干燥，因?yàn)樵跐癞a(chǎn)物中存在HC1，所以使用適宜的捕獲物。給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、熱電偶和回流冷凝器。向該燒瓶中加入MeOH(25.5L)和3-溴吡啶-2-甲酸(5.098kg)，然后加入HCI(15mL)。將該反應(yīng)混合物在約64-65。C下加熱至回流并在該溫度下攪拌9小時(shí)。使該反應(yīng)混合物冷卻至40-50°C，然后濃縮成糊狀物。向一個(gè)50L的分液漏斗中加入水(12L)和固體NaHC03(2338g)，將該混合物攪拌10-15行著攪拌的碳酸氫鈉溶液中。在該殘余物被全部加入后，向該漏斗中加入EtOAc(lOL)并攪拌10-15分鐘。分離出水層并將有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液(1L)洗滌，然后用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮。將合并的水層用EtOAc(2x2L)萃取，將合并的有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液(1L)洗滌，然后用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，與第一次萃取物一起濃縮。得到淡黃色油狀物，其經(jīng)冷卻固化。將所得的物質(zhì)在真空烘箱中在室溫下干燥過(guò)夜。中間體5(3-溴-吡啶-2-基)-曱醇將3-溴-吡咬-2-甲酸甲酯(12.8g，59.2mmol)溶解于曱醇(150mL)中并冷卻至0。C。以每份l.Og的量分批向該混合物中加入NaBH4(11.2g，296mmol)。將該混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?小時(shí)。減壓除去甲醇，加入乙酸乙酯，將該溶液用飽和氯化銨水溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)部分用MgS04干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，得到6.8g(62。/。)白色固體形式的標(biāo)題化合物。GCMSm/e187，189[M。另一種操作給兩個(gè)50L的三頸圓底燒瓶分別裝配上機(jī)械攪拌器、熱電偶、氮?dú)馊肟诤透稍锕堋Ｏ蛎總€(gè)燒瓶中加入3-溴-吡啶-2-甲酸甲酯(1886g，8."mol)(例如基本如中間體4的另一種操作中所述的那樣制備)和MeOH(19L)。用MeOH/干冰浴將該反應(yīng)混合物冷卻至-5至5°C，分批加入干冰，同時(shí)小心地使其不過(guò)冷。以每份100g的量分份向每個(gè)燒瓶中加入硼氫化鈉(約1651g，43.64mol)，將溫度維持在-5至5。C并在加入各份前使溫度穩(wěn)定。在完全加入后，將MeOH浴用冰水代替。將反應(yīng)混合物在0-5。C下攪拌6-8小時(shí)，通過(guò)根據(jù)需要向浴中加入冰來(lái)小心地將溫度維持在0-5。C。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷:EtOAc，l:l)。在&=0.6處應(yīng)當(dāng)沒(méi)有起始材料，在Rf-0.1-1.5處觀察到產(chǎn)物。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，將水水浴用冰/MeOH或MeOH/干冰浴代替。加入丙酮(向每個(gè)燒瓶中加入4.5L)，控制加入速度以便在加入前一半時(shí)將溫度維持在10。C以下，在加入第二部分時(shí)將溫度維持在10-20。C。在丙酮被完全加入后，將反應(yīng)在水水浴上攪拌過(guò)夜或者進(jìn)行后處理。將各反應(yīng)混合物用水稀釋(向每個(gè)燒瓶中加入5L水)，將反應(yīng)混合物濃縮至幾乎干燥。將所得的固體殘余物用水(共計(jì)15L)和EtOAc(20L)稀釋并將該混合物轉(zhuǎn)移到一個(gè)15加侖的罐中。向該混合物(2kg)中加入50。/。氫氧化鈉溶液并將該混合物/混懸液在室溫下攪拌20-30分鐘。過(guò)濾混合物，將濾餅用EtOAc(2x2L)洗滌，保留固體。將合并的濾液合并到一個(gè)分液漏斗中并分離出有機(jī)層，用疏酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮。保留水層。將由過(guò)濾獲得的固體和該水層加入到一個(gè)具有水(15L)和EtOAc(15L)的15加侖的罐中。將該混合物在室溫下攪拌20-30分鐘。其后，將混合物過(guò)濾，分離出有機(jī)層并用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，與第一次萃取物一起進(jìn)行濃縮。根據(jù)需要重復(fù)萃取?？梢詫⒑喜⒌臐鉃V液(3.12kg微粉色油狀物)儲(chǔ)存在冷庫(kù)中或者可以立即進(jìn)行純化。將濃的過(guò)濾殘余物(3.12kg)溶解于EtOAc(6L)中，根據(jù)需要實(shí)施加熱。將所得的微粉色溶液用庚烷(6L)稀釋并將所得的溶液荷載到一根硅膠短柱(5.5kg,d=24in，h=2in，在庚烷(9L)和EtOAc(lL)的混合物中預(yù)荷載)上并用庚烷:EtOAc，8:2的混合物(約30L)、然后用庚烷:EtOAc，7:3的混合物(約40L)洗脫。用TLC(庚烷:EtOAc，l:l)對(duì)級(jí)分進(jìn)行監(jiān)測(cè)。將產(chǎn)物級(jí)分濃縮成混懸液狀態(tài)，而不是濃縮至干。將該混懸液冷卻至0-5。C,在該溫度下攪拌l小時(shí)。其后，通過(guò)過(guò)濾收集固體，用庚烷(0-S。C，2L)洗滌，然后在真空烘箱中在25t:下干燥至恒重。中間體63-溴-2-(5-氯-2-碘-苯氧基甲基)-吡啶將(3-溴-吡啶-2-基)-甲醇(3.4g，18mmol)和2-硤-5-氯苯酚(4.5g，18mmol)溶解于苯(60mL)中并冷卻至0°C。向該溶液中加入三丁基膦(15mL，90mmol)和1，1，-(偶氮二羰基)二哌咬(ADDP)(6.6g，18mmol)，將該混合物在40。C下加熱3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，用飽和NH4C1水溶液和鹽水洗滌，用MgS04干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。將所得的殘余物用快速色諳進(jìn)行純化(Biotage⑧Si65M，15%乙酸乙酯/己烷)，得到3.77g(51。/o)白色固體形式的標(biāo)題化合物。GCMSm/e296，298[M-I卩。另一種烷基化方法將(3-溴-吡啶-2-基)-甲醇(7.39g，39.30mmoles)和三乙胺(7.15mL，51.3mmoles)在氮?dú)庀潞喜⒌剿臍溥秽?70mL)中。用水浴將該溶液冷卻至t).6。C。歷經(jīng)20分鐘滴加甲磺酰氯(3.35mL，43.28mmol)，控制放熱使其內(nèi)部溫度不超過(guò)5。C。在加入后，將反應(yīng)在冰浴上進(jìn)行攪拌。在20分鐘后，HPLC分析表明(3-溴-吡啶-2-基)-甲醇被完全消耗。用垂熔玻璃漏斗將鹽酸三乙胺濾出，用冷THF(50mL)洗滌。將該包含所述甲磺酸酯的THF濾液放置在氮?dú)庀虏⒃诒≈欣鋮s。加入2-碘-5-氯苯酚(10.00g，39.30mmol),然后分成兩等份加入叔丁醇鈉(4.10g，41.38mmol),每次加入具有約5。C的輕微放熱。除去水浴并將反應(yīng)攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)用水(50mL)淬滅并緩慢分離出下面的水層。將有機(jī)部分用鹽水(25mL)洗滌，然后將該鹽水和含水部分用THF(IOmL)反萃取。合并有機(jī)部分并用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，得到鐵銹色橙色固體。將該固體溶解于二氯甲烷(25mL)中，在AnaLogixInc.,Intelliflash180自動(dòng)色鐠儀，1,8.0版上進(jìn)行色譜處理，歷經(jīng)35分鐘使用10-20%乙酸乙酯/己烷梯度，得到11.0g(65。/o)黃色固體形式的產(chǎn)物。33畫R(DMSO)85'31(2H，s)，6.85(1H，dd)，7.25(1H，m)，7.39(1H，dd)7.77(1H，d)，8.17(1H，d)，8.59(1H，d)。中間體73-溴-2-(2-丁-l-炔基-5-氯-苯氧基曱基)-吡啶將3-溴-2-(5-氯-2-碘-苯氧基曱基)-吡啶(3.8g，8.9mmol)放到一個(gè)耐壓瓶中，溶解于二乙胺乙腈:THF(18mL:4mL:4mL)中并用氮?dú)饷摎?5分鐘。使過(guò)量的1-丁炔通過(guò)該溶液鼓泡，然后加入Cul(507mg，2.66mmol)和PdCl2(PPh3)2(623mg，0.888mmol)。將該混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。然后將混合物用乙醚稀釋，用飽和氯化銨水溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)部分用MgS04干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。將殘余物用快速色譜進(jìn)行純化(Biotage⑧Si65M，30。/。己烷/CH2Cl2，然后20%乙酸乙酯/己烷)，得到2.3g(75。/。)淡橙色固體形式的標(biāo)題化合物。LCMSm/e351[M+。另一種操作將3-溴-2-(5-氯-2-碘-苯氧基甲基)-吡啶(5.00g，11.54mmoles)混懸于三乙胺(60mL,430.5mmol)中并脫氣。加入1-丁炔(2.6g，11.54mmol)(24%wt/wtDMF溶液)，然后加入氯化雙(三苯基膦)鈀(11)(410mg，0.584mmol)和不典化亞銅(1)(220mg1.16mmol)。將該反應(yīng)攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)用叔丁基甲基醚(50mL)稀釋，用NBUC1溶液(50mL)淬滅，伴有3。C的輕微放熱，將其攪拌30分鐘。取出水層，將有機(jī)物用5NHC1(80mL)洗滌以清除TEA的有機(jī)層。取出酸性層(pH-2)，將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)，得到深棕色油狀物。將該油狀物在AnaLogixInc.,Intelliflash180自動(dòng)色譜儀，1.8,0.版上進(jìn)行色譜處理，歷經(jīng)5分鐘使用從0%至10%乙酸乙酯的庚烷溶液梯度，保持5分鐘，歷經(jīng)10分鐘使用從10%至20%乙酸乙酯的庚烷溶液梯度。得到橙色固體(4.0g)，其是起始材料和預(yù)期產(chǎn)物的混合物。將該物質(zhì)用庚烷重結(jié)晶，得到3.1g起始材料(HPLC表明其占6%)和標(biāo)題產(chǎn)物的混合物。&NMR(DMSO)51.05(3H，t)，2.33(2H，q)，5.31(2H，s)，6.96(1H，dd)，7.22(1H，m)，7.31(1H，d),7.37(1H，dd)，8.15(1H，dd)，8.57(1H，dd)。用HPLC測(cè)得該物質(zhì)包含6%的起始材料柱ZorbaxEclipseXDB-C8;溶劑梯度為50%乙腈/水(具有0.01%TFA)至80%乙腈。產(chǎn)物的TR=6.15分鐘。另一種合成方法A.2-(5-氯-2-碘-苯氧基)-四氫-吡喃的制備給一個(gè)22L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、加料漏斗、氮?dú)馊肟?、干燥管和熱電?放在冷卻管中)。向該燒瓶中加入5-氯-2-碘苯酚(22卯g,9niol)(例如基本如中間體l的另一種操作中所述的那樣制備)、二氯曱烷(11.45L)和對(duì)-曱苯磺酸吡"定錯(cuò)(45.2g，0.18mol),歷經(jīng)約l小時(shí)向該燒瓶中滴加3，4-二氫-2H-吡喃(1211g，14.4mo1)。在加入期間觀察到溫和放熱，向冷卻浴中加入冷自來(lái)水以維持溫度S30。C。在完全加入后，將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌最少12小時(shí)。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷:EtOAc，9:1)。在Rf=0.2處觀察到起始材料，在Rf-0.5處觀察到產(chǎn)物。如果存在超過(guò)痕量的起始材料，則可以將該反應(yīng)再攪拌4小時(shí)。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)，將混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(1.5L)洗滌，將有機(jī)層與水層分開，將水層用二氯甲烷(1L)萃取，將合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥，用炭處理，過(guò)濾，濃縮。將所得的棕色油狀物與甲苯一起共蒸發(fā)以除去可能殘留的3，4-二氫-2H-吡喃。將產(chǎn)物溶解于三乙胺(4.5L)中，形成一種渾濁的溶液，過(guò)濾，將濾餅用三乙胺(200mL)洗滌。隨后將該產(chǎn)物以三乙胺溶液的形式用于接下來(lái)的反應(yīng)中。B.2-(2-丁-l-炔基-5-氯-苯氧基)-四氫-吡喃的制備將得自前面反應(yīng)的產(chǎn)物的三乙胺溶液加入到一個(gè)配有機(jī)械攪拌器、氮?dú)馊肟凇⒏稍锕芎蜔犭娕?放在冷卻管中)的50L三頸圓底燒瓶中。向該燒瓶中加入三乙胺(4.28L)、乙酸乙酯(8.78L)、二氯雙(三苯基膦)鈀(126.3g，0.18mol)和碘化亞銅(1)(34.3g，0.18mol)，將反應(yīng)混合物攪拌并在氮?dú)飧采w下冷卻至0-10。C(注意也可首先將產(chǎn)物溶解于部分A中的9L三乙胺中，隨后則不再如上所述的那樣加入三乙胺)。其后，中斷氮?dú)饬?，用被放到反?yīng)混合物表面之下的玻璃浸管向該燒瓶中加入1-丁炔(681.5g,12.6mol)，同時(shí)在3小時(shí)加入期間維持溫度《l(TC。在完全加入后，除去冷卻浴，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌最少12小時(shí)。用TLC(庚烷:EtOAc，9:1)對(duì)反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在Rf=0.6處觀察到起始材料，在Rf=0.5處觀察到產(chǎn)物。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，過(guò)濾反應(yīng)混合物，將濾餅用EtOAc(3xlL)洗滌，釋放各洗涂物的真空。將所有有機(jī)部分合并，濃縮，得到棕色油狀物。將殘余物用庚烷(5L)和三乙胺(25mL)稀釋。將產(chǎn)物用硅膠柱進(jìn)行純化(在庚烷(5L)和三乙胺(60mL)中預(yù)荷載3kg硅膠，d-8in，h-18in)。將粗產(chǎn)物在溶液中荷載，隨后用庚烷(9L)/0.2%EtOAc、庚烷(9L)/3。/。EtOAc和庚烷(9L)/40/0EtOAc洗脫。將適宜的級(jí)分合并，得到棕色油狀物(2644g，不潔)。將該油狀物溶解于庚烷(1mL/g)和三乙胺(20mL)中，將該溶液放在冷凍器中。在約12小時(shí)后，分離出固體。傾出上清液，對(duì)固體稱重并溶解于庚烷(lmL/g)和三乙胺(20mL)中。重復(fù)進(jìn)行結(jié)晶，得到純產(chǎn)物(2003g)。另外的純化將固體溶解于二氯甲烷(2mL/g)中并將所得的溶液放到一個(gè)配有機(jī)械攪拌器、氮?dú)馊肟诤捅环诺嚼鋮s管中的干燥管的適宜的三頸圓底燒瓶中。加入Si-硫醇衍生化的硅膠(荷載1.33mmol/g),將所得的混懸液在室溫下攪拌最少12小時(shí)。其后，過(guò)濾混懸液，將濾餅用二氯甲烷(3x500mL)洗滌并將合并的濾液濃縮，得到琥珀色油狀物。將該油狀物溶解于庚烷(lmL/g)中并在冷凍器中放置過(guò)夜。然后潷析固體并將其在真空烘箱中在環(huán)境溫度、1mmHg下干燥最少18小時(shí)。C.2-丁-l-炔基-5-氯-苯酚的制備給一個(gè)22L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、加料漏斗、氮?dú)馊肟?、熱電偶和被J故到冷卻管中的干燥管。向該燒瓶中加入MeOH(2.3L)和HC1(9mL)，開始攪拌，將反應(yīng)冷卻至10-20。C。給一個(gè)20L的寬嘴圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器(放在加熱套中)，向該燒瓶中加入2-(2-丁-l-炔基-5-氯-苯氧基)_四氫_吡喃(2313g，8.736mol)和MeOH(3.47L)。對(duì)其溫和加熱以4吏固體36溶解，用MeOH(70mL)對(duì)燒瓶進(jìn)行清洗。歷經(jīng)45分鐘將該溶液通過(guò)加料漏斗加入到三頸圓底燒瓶中并維持溫度《20°C。停止冷卻并將反應(yīng)混合物攪拌最少30分鐘。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷:EtOAc，9:l)。在1^=0.6處觀察到起始材料，在Rf-0.5處觀察到產(chǎn)物。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，將反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(300mL)稀釋并在室溫下攪拌5-10分鐘。其后，將反應(yīng)混合物濃縮以除去MeOH。將殘余的油狀物(2118g)用MTBE(4L)稀釋，用鹽水溶液(1.5L)洗涂。分離出有機(jī)層，用MTBE(2xlL)萃取水層。將合并的有機(jī)部分用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮。然后將產(chǎn)物與曱苯(2x800mL)—起共蒸發(fā)并將其就這樣直接使用。D.3-溴-2-(2-丁-l-炔基-5-氯-苯氧基甲基)-吡啶(中間體7)的制備給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、加料漏斗、氮?dú)馊肟?，熱電偶和被》文到冷卻管中的干燥管。向該燒瓶中加入(3-溴-吡啶-2-基)-甲醇(例如基本如中間體5的另一種操作中所述的那樣制備)(1837g，9.769mol)、THF(14.7L)和三乙胺(1.53L，11.01mol)，將反應(yīng)混合物冷卻至-5至5'C。歷經(jīng)1.5小時(shí)滴加純凈的曱磺酰氯(1155g，10.09)并維持溫度〈5。C,形成白色的混懸液。將所得的混懸液在-5至0。C下攪拌1小時(shí)并用TLC(二氯甲烷:MeOH，20:1)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。在Rf=0.5處觀察到起始材料，在Rf=0.95處觀察到甲磺酸酯產(chǎn)物。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，過(guò)濾反應(yīng)混合物，將濾餅用冷THF(0-5。C，3x2L)洗滌。給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、加料漏斗、氮?dú)馊肟?、熱電偶和被力丈到冷卻管中的干燥管。向該燒瓶中加入合并的包含曱磺酸3-溴-吡吱-2-基曱基酯和2-丁-1-炔基-5-氯-苯酚(8.736mol，0.95eq)(例如基本如上面步驟C中所述的那樣制備)的濾液，用THF(70mL)清洗燒瓶。開始攪拌，將反應(yīng)混合物冷卻至-15至0。C。歷經(jīng)40分鐘分批加入叔丁醇鈉(969.7g，10.09mol)并保持溫度〈0。C。使反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝夭嚢枳钌?8小時(shí)，直至出現(xiàn)渾濁的褐色/黃色溶液。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷:EtOAc，l:l)。在Rf=0.1處觀察到甲磺酸酯，在Rf0.5處觀察到產(chǎn)物。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，將反應(yīng)混合物用水(5L)稀釋，將有機(jī)層與水層分開，將有機(jī)物濃縮成濃稠37的漿液。用MTBE(2x2L)萃取水層，分離出有機(jī)層。將濃漿液溶解于MTBE(12L)中，與之前的萃取物(4L)合并，進(jìn)行攪拌，直至所有固體均溶解。將有機(jī)層用鹽水(3L)洗滌，分離出來(lái)，用硫酸鎂干燥，用炭處理，過(guò)濾，濃縮。然后將產(chǎn)物與EtOH(lL)—起共蒸發(fā)，得到灰白色固體(3581g)。將該固體用EtOH(2.5L，0.7mL/g)重結(jié)晶，同時(shí)攪拌并在-5至5。C下冷卻1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集固體并用冷EtOH(2x卯0mL，-20至-10。C)洗滌。用油泵將產(chǎn)物在真空烘箱中在30'C下進(jìn)行干燥。中間體8(Z)畫2-(2-l，2-雙-(4，4，5，5-四曱基-ll，3，21二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2畫基)國(guó)丁-l曙烯基1-5-氯-苯氧基甲基}-3-溴-吡啶將3-溴-2-(2-丁-1-炔基-5-氯-苯氧基曱基)-吡啶(2.3g，6.6mmol)溶解于DMF(65mL)中并通過(guò)向該溶液中用氮?dú)夤呐?5分鐘來(lái)對(duì)其進(jìn)行脫氣。向該溶液中加入雙(頻哪醇合)二硼(bis(pinocalato)diboron)(1.8g,7.2mmol)和Pt(PPh3)4(653mg，0.525mmol)。將該混合物在80。C下加熱24小時(shí)，冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用鹽水洗滌，用MgS04干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，得到固體。將該固體溶解于乙醚中，過(guò)濾，減壓濃縮，得到3.61g(91°/。)黃色固體形式的標(biāo)題化合物，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。LCMSm/e605同+。另一種操作給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、氮浸管(diptube)、熱電偶和祐j文到冷卻管中的干燥管。向該燒瓶中加入DMF(27L)、3-溴-2-(2-丁-1-炔基-5-氯-苯氧基甲基)-吡啶(3381g，9.642mol)(例如基本如上面中間體7的另一種合成方法中所述的那樣制備)，將所得的溶液在室溫下攪拌，同時(shí)用強(qiáng)氮?dú)饬鞴呐葑钌賚小時(shí)。其后，向該燒瓶中一次性加入二(頻哪醇合)二硼(2522g，9.93mol)，將所得的溶液在室溫下攪拌，同時(shí)用強(qiáng)氮?dú)饬鞴呐葜辽?5分鐘。向該燒瓶中加入四(三苯基膦)鉑(0)(24g，0.019mmol)，將浸管用正常氮?dú)馊肟诖妗⒎磻?yīng)混合物加熱至80。C并在該溫度下攪拌8-10小時(shí)。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷:EtOAc)。在Rf=0.4處應(yīng)當(dāng)觀察不到起始材料，在Rf=0.35處觀察到產(chǎn)物。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。將該反應(yīng)混合物用MTBE(20L)、然后用l(T/。NaCl水溶液(25L)稀釋。將有機(jī)層與水層分開并用10%NaCl水溶液(lOL)洗滌。分離出有機(jī)層并用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮。將水層合并并用MTBE(5L)萃取。將MTBE萃取物用10。/。NaCI水溶液(3L)洗涂，用疏酸鎂干燥，過(guò)濾，與第一次萃取物一起進(jìn)行濃縮，得到濃稠的糊狀物。加入異丙醇(7L)并繼續(xù)濃縮以除去殘留的MTBE。將所得的混懸液在冷卻浴上在室溫下攪拌最少l小時(shí)。其后，通過(guò)過(guò)濾收集固體并將濾餅用異丙醇(2xl.5L)洗滌。將固體在真空烘箱中在40-45°C下用油泵干燥最少18小時(shí)。")-8-氯-5-[1-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，21二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-丙叉基1-5，11-二氫-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，d]環(huán)庚烷將(Z)-2-(2-[l，2-雙-(4，4，5，5-四甲基-[l，3，2二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-丁-1-烯基-5-氯-苯氧基甲基}-3-溴-吡啶(3.6g，6.0mmol)溶解于二嗜、烷(600mL)中并通過(guò)用氮?dú)庀蛟撊芤褐泄呐?5分鐘來(lái)對(duì)其進(jìn)行脫氣。加入粉碎的K3P04(3.8g,18mmol),然后加入PdCl2dppf*CH2Cl2(488mg，0.598mmol)。將漿液在80。C下加熱22小時(shí)，冷卻至室溫，用鹽水洗滌，用MgS04干燥，減壓濃縮，得到固體。將該固體溶解于乙酸乙酯中，重力過(guò)濾，減壓濃縮，得到2.37g(約100%)標(biāo)題化合物，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。LCMSm/e中間體9398M+H十。另一種合成方法給兩個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、氮浸管、熱電偶、回流冷凝器和被放到加熱套中的干燥管。向該燒瓶中加入1，4-二7悉烷(每個(gè)燒瓶26L)、(Z)-2-(2-l，2-雙-(4，4，5，5-四甲基-[l，3，2I二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)畫丁-1-烯基-5-氯-苯氧基甲基}-3-溴-吡啶(例如基本如中間體8的另一種操作中所述的那樣制備)(每個(gè)燒瓶2610g)和碳酸鉀粉末(每個(gè)燒瓶1790g)。將所得的混懸液在室溫下進(jìn)行攪拌，同時(shí)用強(qiáng)氮?dú)饬鞴呐葜辽?小時(shí)。其后，向該燒瓶中加入[l，l'-雙(二苯基膦基)-二茂鐵I二氯鈀(II)與二氯甲烷的復(fù)合物(l:l)(每個(gè)燒瓶176.3g)并將浸管用正常氮?dú)馊肟诖?。將反?yīng)混合物加熱至80。C并在該溫度下攪拌最少20小時(shí)。觀察到深棕色的混懸液。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(庚烷:EtOAc1:1)。在Rf=0.7處存在痕量的起始材料，在Rf-0.6處觀察到產(chǎn)物。如果存在痕量以上的起始材料，則加入另外的碳酸鉀(每個(gè)燒瓶596.5g，共計(jì)1193g)。將反應(yīng)混合物在80。C下攪拌4小時(shí)。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，將反應(yīng)混合物冷卻至60。C或者攪拌至室溫。過(guò)濾反應(yīng)混合物，用1，4-二哺、烷(3x3L)和EtOAc(3x3L)洗滌濾餅。將合并的濾液濃縮，得到固體。將該深色固體溶解于EtOAc(20L)中并將所得的溶液用15%NaCl水溶液(5L)洗滌。攪動(dòng)(用分液漏斗)該混合物。未發(fā)生分離。將混合物收集到桶中并加入硅藻土(向每個(gè)桶中加入1kg)，對(duì)桶進(jìn)行攪拌，將整個(gè)混合物過(guò)濾以除去阻礙層分離的固體。將濾餅用EtOAc(3xlL)洗滌。合并濾液，分離出有機(jī)層。將有機(jī)層用15。/。NaCl水溶液(5L)洗滌。然后將有機(jī)層合并，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮。與1，4-二嗜、烷(2L)—起共蒸發(fā)，獲得微棕色固體形式的殘余物。實(shí)施例1(￡>7\43-[1-(8-氯-1111-10-氧雜-1-氮雜-二苯并[3，(1環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基1-苯基}-甲磺酰胺將(Z)-8-氯-5-[l-(4，4，5,5-四甲基-[l，3，2I二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-丙叉基-5，ll-二氫-10-氧雜-l-氪雜-二苯并[a，d環(huán)庚烷(2.37g，5.96mmol)、N-(3-碘苯基)甲磺酰胺(2.66g，8.94mmol)、3，5-二曱氧基苯酚(4.6g，30mmol)和KOH(5.0g，89mmol)溶解于二噁烷/水(40mL/15mL)中并通過(guò)用氮?dú)庀蛟撊芤褐泄呐?5分鐘來(lái)對(duì)其進(jìn)行脫氣。向該混合物中加入Pd(PPh3)4(689mg，0.596mmol)，將該溶液在80。C下加熱18小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用水、飽和氯化銨水溶液和鹽水洗滌，用MgS04干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。將所得的殘余物用快速色鐠進(jìn)行純化(Biotage⑧Si65M，3。/。乙醇/CHC13)，然后用離子交換色鐠進(jìn)行純化(分成兩份，BondElu傾SCX，用80/20CH2Cl2/甲醇沖洗，用80/20CH2Cl2/2.0MNH3的甲醇溶液洗脫)，進(jìn)行另一次快速色譜純化(Biotage⑧Si40M，40%乙酸乙酯/己烷至80%乙酸乙酯/己烷)，得到1.01g(3SY。)白色固體形式的標(biāo)題化合物。LCMSm/e441[M+H]+。(E)-3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基l-苯基胺在氮?dú)鈿夥障?，將氫氧化?500g，8.91mol)在水(1.50L)中的溶液加入到一個(gè)配有機(jī)械攪拌器、回流冷凝器和熱電偶的12L的4頸圓底燒瓶中。向該溶液中加入3-碘苯胺(128g，585mmol)、(Z)-8-氯-5-[l-(4，4，5，5-四曱基中間體1041-1，3，2]二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-丙叉基1-5，11-二氫-10-氧雜-1-氮雜-二苯并[a，d]環(huán)庚烷(232g，583mmoles)、1，4-二巧悉烷(2.40L)和3,5-二甲氧基苯酚(454g，2.92moles),導(dǎo)致形成深棕色的混合物。通過(guò)i文在回流冷凝器上的一個(gè)三通閥來(lái)對(duì)該混合物進(jìn)行脫氣。通過(guò)該三通閥應(yīng)用房間真空約3分鐘。然后向被排空的燒瓶施加氮?dú)鈨艋?。將其重?fù)共計(jì)3次。加入固體四(三苯基膦)釔(20.4g，17.5mmol)并重復(fù)脫氣操作。將該深棕色的混合物加熱至80。C達(dá)2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至40。C并加入到一個(gè)包含15%NaCl溶液(2.5L)的22L的圓口燒瓶中。將該混合物攪拌10分鐘并分離各層。將有機(jī)層第二次用15%NaCl溶液(2.5L)洗滌。分離出有機(jī)層并真空濃縮，得到濃稠的深色油狀物。加入兩升庚烷并真空濃縮以除去殘留的二噁烷。將產(chǎn)物用大規(guī)模硅膠色鐠進(jìn)行純化，使用3kg用庚垸濕潤(rùn)的硅膠填充的10in.(約25cm)的垂熔玻璃漏斗。將該物質(zhì)溶解于庚烷(約500mL)中并應(yīng)用到硅膠上。用輕微真空將該物質(zhì)裝在硅膠上，用3L庚烷作為洗脫劑。將流動(dòng)相變成9:1的庚烷:EtOAc，使用1:1的庚烷:EtOAc梯度，同時(shí)收集3.5L級(jí)分。用TLC(1:1EtOAc:庚烷，Si02，Rf=0.45)對(duì)級(jí)分進(jìn)行監(jiān)測(cè)。將包含所需產(chǎn)物的級(jí)分合并并真空濃縮，得到深綠色油狀物。向該油狀物中加入庚烷(2L)，然后將該物質(zhì)真空濃縮，得到201.3g(95。/。)深綠色的固體。LC-ES/MSm/e363.2[M+司+。另一種操作用一個(gè)40L的分液漏斗將(E)-3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基]-苯基胺二曱苯磺酸鹽(5765g)(例如基本如下面中間體11所述的那樣使用另一種合成方法制備)混懸于水(12L)和EtOAc(12L)中。一次性加入50%的NaOH溶液(4.8kg)。對(duì)混懸液進(jìn)行攪拌，直至所有固體均溶解。分離出有機(jī)層并用5%的NaOH水溶液(lL)洗滌。將合并的水層用EtOAc(2x2L)萃取。分離出有機(jī)層并用5。/。的NaOH水溶液(500mL)洗滌。將合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，用炭處理并過(guò)濾。將濾液用庚烷(16L)稀釋，制得庚烷:EtOAc，1:1的溶液。將產(chǎn)物用硅膠短柱進(jìn)行純化(在庚烷:EtOAc,1:1(8L)中預(yù)荷載6kg硅膠，直徑=18in，高度-3in)。將粗產(chǎn)物在溶液中荷載并用庚烷:EtOAc，l:l，(約40-50L)、然后用庚烷:EtOAc，l:3，(約20-30L)、然后用庚烷:EtOAc，1:9,(10-20L)洗脫。用TLC(EtOAc，100%)測(cè)定包含產(chǎn)物的級(jí)分。在Rf=0.0處觀察到雜質(zhì)。在Rf=0.4處觀察到產(chǎn)物。將包含產(chǎn)物的級(jí)分合并并濃縮，形成糊狀物。將所得的殘余物用庚烷(2-3L)稀釋。將該混懸液在室溫下攪拌30分鐘，通過(guò)過(guò)濾收集固體，用庚烷(2xl.5L)洗滌。將固體在真空烘箱中在40-45。C下千燥過(guò)夜。實(shí)施例l(a)(由中間體10開始)(J5)-7V-(3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-曱磺酰胺o在氮?dú)鈿夥障拢瑢⒐腆w(E)-3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a,dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基]-苯基胺(198g，545mmol)、吡啶(67.0mL，828mmol)和二氯甲烷(1.6L)加入到一個(gè)配有機(jī)械攪拌器和熱電偶的5升的4頸圓底燒瓶中。歷經(jīng)20分鐘由一個(gè)加料漏斗向該深綠色的反應(yīng)混合物中滴加曱磺酰氯(51.0mL，658mmol)在二氯曱烷(400mL)中的溶液。在加入過(guò)程中觀察到6.9。C的放熱。在完全加入時(shí)，將反應(yīng)在環(huán)境溫度下攪拌l6小時(shí)。將混合物加入到一個(gè)包含10%檸檬酸溶液(2L)的22L圓口燒瓶中。將該混合物攪拌15分鐘，經(jīng)靜置分層。將有機(jī)層用15%NaCl溶液洗滌。將有機(jī)層在氮?dú)鈿夥障录尤氲揭粋€(gè)配有機(jī)械攪拌器的5L的4頸燒瓶中。將該深紅色的溶液用DARCO活性炭(200g)、Na2SO4(200g)和TMT(三硫代氰尿酸三鈉鹽水合物)(50g)處理。將該混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)，然后在2in(約5cm)硅藻土墊(Hy-floS叩ercel⑧)上進(jìn)行過(guò)濾。將濾液43真空濃縮，得到硬的白色泡沫狀物。向該泡沫狀物中加入異丙醇(lL，5體積)，將漿液在40。C下攪拌1小時(shí)。將濃稠的混合物冷卻至環(huán)境溫度。將固體在布氏漏斗中的聚丙烯墊上真空過(guò)濾。將該物質(zhì)在70。C下在房間真空下干燥16小時(shí)，得到171.85g(71.4。/o)白色結(jié)晶性產(chǎn)物。LC-ES/MSm/e441.2[M+H+，439.1[M畫H]。C23H21N2C103S的分析值C，62.65;H，4.80;N，6.35。實(shí)測(cè)值C，62.81;H，4.82;N，6.20。中間體11(^)-3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜小氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基胺二甲苯磺酸鹽標(biāo)題化合物是基本如中間體10所述的那樣用3-碘苯胺(13.72g，62.64mmol)和(Z)-8-氯-5-[l-(4，4,5，5-四曱基-[l，3，2二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-丙叉基15，ll-二氫-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a,d環(huán)庚烷(24.91g,62.64mmol)制備的。在反應(yīng)完全后，將其冷卻至40。C。加入水(250mL)、15%鹽水溶液(50mL)和叔丁基甲基醚(250mL)。將頂部的有機(jī)層分離出來(lái)，將水層用叔丁基甲基醚(IOOmL)萃取。使有機(jī)溶液通過(guò)在預(yù)填充70mmSUPELCO⑧布氏漏斗中的二氧化硅墊。將濾液濃縮，得到42.45g油狀物。向該油狀物中加入EtOAc(200mL)，然后加入甲苯磺酸單水合物(23.83g)，同時(shí)攪拌18小時(shí)。將褐色沉淀濾出，用EtOAc(100mL)、然后用庚烷(50mL)和l:lEtOAc/庚烷(50mL)洗滌。將該物質(zhì)在房間真空下在50。C下干燥18小時(shí)，得到34.43g(收率為77.7%重量)。LC-ES/MSm/e3M+；！HNMRDMSO(5)0.8(三重峰，3H),2.22(s，6H)，2.6(m，1H)，2.65(m，1H)，5.1(d，1H)，5.88(d，1H)，7畫7.5(Ar和NH3，21H),8.2(d，lH)。另一種合成方法給兩個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、氮?dú)馊肟凇犭娕肌?4回流冷凝器和千燥管(放在冷卻管中)。向該燒瓶中加入水(每個(gè)燒瓶8.5L)和氫氧化鉀(每個(gè)燒瓶2422g)，將混合物攪拌5-15分鐘以使固體溶解和溫度穩(wěn)定(約40。C)。將混合物在氮?dú)飧采w下冷卻至20-3(TC。其后，將燒并K^文到加熱套中，向每個(gè)燒瓶中加入1，4-二噴、烷(每個(gè)燒瓶3L)、3-碘苯胺(每個(gè)燒瓶945.5g，4.317mol)和均分的(Z)-8-氯-5-[l-(4，4，5,5-四甲基-[l，3，2二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-丙叉基l-5，ll-二氫-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，d]環(huán)庚烷(認(rèn)為是8.634mol，1eq)(基本如中間體9的另一種合成方法中所述的那樣制備)在1，4-二噁烷(15L，每個(gè)燒瓶7.5L)中的溶液，然后加入3,5-二甲氧基苯酚(每個(gè)燒瓶3328g,21.585mol)和四(三苯基膦)鈀(O)(每個(gè)燒瓶149.58g，0.26mo1)。將反應(yīng)混合物加熱至80。C并在該溫度下攪拌2小時(shí)。觀察到深色溶液。用TLC(庚烷:EtOAc，1:l)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。在Rf=0.6處應(yīng)當(dāng)不存在起始材料。在Rf=0.2處觀察到產(chǎn)物。在認(rèn)為反應(yīng)完全后，使反應(yīng)混合物冷卻至室溫。將反應(yīng)混合物用水和MTBE(8L)稀釋。分離出有機(jī)層并將水層用MTBE(4x2L)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水溶液(5L)洗滌，用疏酸鎂干燥，用炭處理，過(guò)濾，濃縮。與EtOAc(1.5L)—起共蒸發(fā)，獲得淺棕色的油狀物(4080g)。給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、氮?dú)馊肟诤捅环诺嚼鋮s管中的干燥管。向該燒瓶中加入對(duì)-甲^t酸單水合物(4106g，21.585mol，2,5eq)和EtOAc(15L),開始攪拌，觀察到白色混懸液。將棕色油狀物溶解于EtOAc(16.3L，4mL/g)中，將該溶液分批加入(開始迅速加入，然后當(dāng)出現(xiàn)固體時(shí)緩慢加入)到對(duì)-甲苯磺酸單水合物在EtOAc中的混懸液中。將所得的灰-棕色混懸液在室溫下攪拌12小時(shí)。其后，通過(guò)過(guò)濾收集固體并用EtOAc(3x2L,室溫)洗滌。將固體轉(zhuǎn)移到一個(gè)桶中并用EtOAc(14L)制成漿液，然后通過(guò)過(guò)濾收集固體。將該固體轉(zhuǎn)移到一個(gè)桶中并再次用異丙醇(14L)制成漿液，然后通過(guò)過(guò)濾進(jìn)行收集。給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、回流冷凝器、氮?dú)馊肟诤透稍锕?放在加熱套中)。向該燒瓶中加入所述固體和異丙醇(12L)。將所得的混懸液加熱至回流達(dá)30分鐘，冷卻至室溫并通過(guò)過(guò)濾收集固體。然后將固體用室溫的異丙醇C2x2L)、EtOAc(2x2L)和庚烷(2x2L)洗滌，然后在真空烘箱中在40至45。C下干燥過(guò)夜。得到灰-棕色固體。實(shí)施例l(b)(^)-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-曱磺酰胺給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、氮?dú)馊肟?、熱電偶和?故到冷卻管中的干燥管。向該燒瓶中加入(￡)-3-[1-(8-氯-1111-10畫氧雜-1-氮雜-二苯并a，d環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基-苯基胺(1800g，4.96mol)(基本如中間體10中所述的那樣使用另一種操作制備)、二氯曱烷(18L)和吡啶(588.5g，7.44mol)。將反應(yīng)混合物冷卻至0至5。C，歷經(jīng)約20-30分鐘滴加純凈的甲磺酰氯(681.8g，5.952mol)并維持溫度^5。C。在完全加入后，將反應(yīng)混合物在0至5。C下攪拌1小時(shí)。除去冷卻浴并將反應(yīng)在室溫下攪拌最少12小時(shí)。用TLC(純EtOAc)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。在認(rèn)為反應(yīng)完全時(shí)，用一個(gè)40L的分液漏斗用10V。檸檬酸水溶液(14L)洗滌將反應(yīng)混合物。用二氯曱烷(1.5L)反萃取水層。將合并的有機(jī)層用10%的檸檬酸水溶液(2L)洗滌。用二氯曱烷(1.5L)反萃取水層。將合并的有機(jī)層用15。/。氯化鈉水溶液(5L)洗滌，用二氯曱烷(1.5L)反萃取水層。將合并的有機(jī)層用半飽和的碳酸氫鈉水溶液(5L)洗滌。該碳酸氫鈉洗滌應(yīng)進(jìn)行最少30分鐘。用二氯甲烷(1.5L)反萃取水層。將合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過(guò)濾。給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、氮?dú)馊肟凇犭娕己捅环诺嚼鋮s管中的干燥管。將包含產(chǎn)物的二氯甲烷溶液加入到燒瓶中，然后向該燒瓶中加入三硫代氰尿酸三鈉鹽(630g，0.35g/g起始材料)、硫酸鈉(3.6kg，2g/g起始材料)和炭(180g，0.1g/g起始材料)。將混懸液在室溫下攪拌12小時(shí)。過(guò)濾混懸液，將濾餅用二氯甲烷(3x3L)制成漿液。將濾液合并并濃縮，獲得灰白色固體。將產(chǎn)物在真空烘箱中在40。C下干燥過(guò)夜。實(shí)施例l(c)(由中間體ll開始)(^)-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并a，dj環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜46苯基}-甲磺酰胺部分A.向一個(gè)配有磁力攪拌器的250mL的RB燒瓶中加入中間體11(3.14g，5.09mmol)和二氯甲烷(70mL)。歷經(jīng)5分鐘向該混合物中分批加入15%碳酸鈉溶液。將混合物攪拌30分鐘。分離出下層的有機(jī)層，用無(wú)水MgS04干燥。過(guò)濾混合物，將濾餅用二氯甲烷(IOmL)洗滌。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上在5(TC的浴溫下濃縮濾液，得到1.85g油狀物。部分B.在一個(gè)獨(dú)立的250mL的3-頸反應(yīng)容器中加入得自部分A的油狀物(1.85g)溶解于二氯甲烷(65mL)和吡啶(0.62mL，7.64mmol)中的溶液。然后將反應(yīng)溶液攪拌5分鐘。歷經(jīng)5分鐘加入溶解于二氯甲烷(5mL)中的甲磺酰氯(0.46mL，6.12mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。用HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，中間體11消失后用10%檸檬酸溶液(10mL)淬滅反應(yīng)。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘。加入去離子水(20mL)并在攪拌20分鐘后分離出下面的有機(jī)層。將有機(jī)層用DARCC^活性炭(2.0g)處理20分鐘。用硅藻土過(guò)濾混合物，用二氯甲烷(20mL)洗滌濾餅。將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，得到1.84g標(biāo)題化合物。LC-ES/MSm/e440[M+；巾NMRDMSO(56)0.8(三重峰，3H)，2.45(m，1H)，2.55(m,4H)，5.0(d，1H)，5.85(d，1H)，6.9畫7.1(m，7H)，7.2(d，1H)，7,38(d，lH),8.24(d，1H)，9.45(s，1H)。實(shí)施例2(^)-7￥-{3-[1-(8-氯-1111-10-氧雜-1-氮雜-二苯并[3，^環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基-苯基}-甲磺酰胺.H2S04(2:1)將(^)-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-甲磺酰胺(251mg，0.57mmol)與丙酮(4mL)—起合并到一個(gè)閃爍瓶中。在攪拌下將該樣品加熱至約55。C。加入1摩爾當(dāng)量的硫酸(0.25M)。在升溫加熱和攪拌數(shù)小時(shí)后，在攪拌下使樣品冷卻至約25。C過(guò)夜。未出現(xiàn)沉淀，將樣品在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)至干。向所得的殘余物中加入丙酮(2mL)，同時(shí)在約55。C下攪拌和加熱，得到混懸液。加入另外的丙酮(l47mL)，得到澄清的溶液。將樣品在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)至干。向所得的殘余物中加入丙酮(2mL),同時(shí)在約55。C下攪拌和加熱，得到混懸液。在攪拌下使樣品冷卻至約25r過(guò)夜。通過(guò)真空過(guò)濾對(duì)混懸液進(jìn)行分離，使固體風(fēng)干。用差示熱分析(DTA)測(cè)定該物質(zhì)的熔點(diǎn)特性。開始熔化=139°(:;熔化峰值=148°C。通過(guò)用于定量抗衡離子的具有ESACoronaTM檢測(cè)器的HPLC(Waters2695(Alliance)型自動(dòng)進(jìn)樣器，ChromolithPerformanceRP-18柱，用5%乙腈/水(具有0.1%TFA)至100%乙腈(具有0.1%TFA)以1mL/min的流速洗脫)確定該物質(zhì)是半硫酸鹽，發(fā)現(xiàn)其包含56.7%理論單鹽。用UV(245nm，PDAWaters996檢測(cè)器)檢測(cè)游離堿，發(fā)現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比其具有89.5%效價(jià)。這相當(dāng)于化學(xué)計(jì)量為2摩爾游離堿:l摩爾H2S04(半硫酸鹽)。實(shí)施例3(巧-AM3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，d環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-甲磺酰胺.HBr將(^)-iV-(3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二笨并a，d]環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-甲磺酰胺(183mg，0.42mmol)與乙醇(5mL)—起合并到一個(gè)閃爍并瓦中。將該樣品在攪拌下加熱至約75°C。加入1摩爾當(dāng)量的HBr(0.25M)。在升溫加熱和攪拌數(shù)小時(shí)后，在攪拌下使該樣品冷卻至約25。C過(guò)夜。未出現(xiàn)沉淀，將樣品在氟氣流下蒸發(fā)至干。向所得的殘余物中加入"濕，，EtOAc(6mL),其是通過(guò)在分液漏斗中用水洗滌EtOAc從而得到約3。/。水/EtOAc制備的。將所得的混懸液在約65。C下攪拌和加熱數(shù)小時(shí)。在攪拌下使樣品冷卻至約25。C過(guò)夜。通過(guò)真空過(guò)濾將固體從混懸液中分離出來(lái)并使其風(fēng)干。用差示熱分析(DTA)測(cè)定該物質(zhì)的熔點(diǎn)特性。熔化開始=227。C;熔化峰值-233。C。實(shí)施例4(￡>7\43-[1-(8-氯-1111-10-氧雜-1-氮雜-二苯并[8，3]環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基]-苯基卜甲磺酰胺.HC1將(^)-AM3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，d環(huán)庚三烯-5-叉48基)-丙基-苯基}-甲磺酰胺(218mg，0.49mmol)與乙醇(5mL)—起合并到一個(gè)閃爍瓶中。將該樣品在攪拌下加熱至約75°C。加入1摩爾當(dāng)量的HC1(1N)。在升溫加熱和攪拌數(shù)小時(shí)后，在攪拌下使該樣品冷卻至約25。C過(guò)夜。未出現(xiàn)沉淀，將該樣品在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)至干。向所得的殘余物中加入"濕"EtOAc(6mL)，其是通過(guò)在分液漏斗中用水洗滌EtOAc從而得到約3%水/EtOAc制備的。將所得的混懸液在約65。C下攪拌和加熱數(shù)小時(shí)。在攪拌下使該樣品冷卻至約25。C過(guò)夜。通過(guò)真空過(guò)濾將固體從混懸液中分離出來(lái)并使其風(fēng)干。用差示熱分析(DTA)測(cè)定該物質(zhì)的熔點(diǎn)特性。分解=180匸實(shí)施例5(^)-7￥-{3-[1-(8-氯-1111-10-氧雜-1-氮雜-二苯并[3,(1環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基1-苯基}-甲磺酰胺(結(jié)晶)(1型)初始分析用差示掃描量熱法和X-射線粉末衍射對(duì)基本如實(shí)施例I(a)中所述的那樣制備的(^)-A^3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，d環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基-苯基}-曱磺酰胺樣品進(jìn)行分析(在輕微研磨之前和之后)。DSC:開始189.79。C;峰值109.91°C。重結(jié)晶通過(guò)在室溫下逐步加入溶劑直至完全溶解而將得自實(shí)施例I(a)的甲磺酰胺樣品(約50mg)溶解于異丙醇、乙酸異丙酯、乙腈、甲醇、乙醇(無(wú)水)、乙醇(96%)和丙酮中。在殘留未溶解的顆粒的情況下，將溶液加熱至約50°C。然后在攪拌下將各溶液于室溫下放在一個(gè)開口瓶中，直至發(fā)生結(jié)晶(數(shù)小時(shí)至過(guò)夜)。繼續(xù)蒸發(fā)以使得形成足夠的晶體，直至剩余約0.5ml溶液(對(duì)于丙酮溶液而言約0.2ml)。在形成足夠的晶體時(shí)，將溶液過(guò)濾，將所得的粉末在玻璃板上在空氣下于室溫干燥過(guò)夜。然后用X-射線粉末衍射分析由各重結(jié)晶獲得的粉末樣品。獲得初始分析中的樣品(在研磨之前和之后)以及重結(jié)晶樣品的X-射線圖，其揭示了一種普通晶形(I型)，該晶形具有的特征峰位(。2e值)與用輕微研磨后的初始樣品獲得的下列峰位相同峰#。29I/Io110.90.51215.80.28316.90.43418.81.00520.50.41622,90.96729.70.27831.80.19實(shí)施例6(^)-7\43-[1-(8-氯-1111-10-氧雜-1-氮雜-二苯并^，(1環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基]-苯基}-曱磺酰胺(甲醇重結(jié)晶)給一個(gè)50L的三頸圓底燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、回流冷凝器、熱電偶和干燥管并將其放在加熱套中。向該燒瓶中加入2263g基本如實(shí)施例I(b)中所述的那樣制備的固體物質(zhì)和MeOH(30L)。開始攪拌，在持續(xù)加熱下將該混合物加熱至回流，直至所有固體均溶解。在得到澄清的溶液時(shí)，小心地向燒瓶中加入炭(180g)。將混合物熱過(guò)濾并將濾液加入到一個(gè)配有機(jī)械攪拌器、熱電偶和干燥管(放在冷卻管中)的50L的三頸圓底燒瓶中。首先使所得的溶液緩慢冷卻，然后冷卻至-10至0。C并在該溫度下攪拌最少1小時(shí)。其后，通過(guò)過(guò)濾收集固體并用冷MeOH(2x600mL，-40。C)洗滌。將產(chǎn)物在真空烘箱中在7(TC下干燥過(guò)夜，得到1942g。實(shí)施例7(fi)-A^3-U-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-甲磺酰胺(微粉化的)用0101Jet-O掘zer系列(回路磨)(FluidEnergyProcessingandEquipmentCompany)和壓縮氮?dú)庋心怏w(露點(diǎn)>40°C)來(lái)降低化合物(I)(例如基本如實(shí)施例6中所述的那樣制備)樣品的粒度。在Sympatec50(HELOS粒度分析系統(tǒng))激光衍射粒度分析儀上測(cè)量粒度分布并測(cè)定x5()和x90粒度。<5拜；x卯〈15拜。實(shí)施例8(￡)-]\43-[1-(8-氯-1111-10-氧雜-1-氮雜-二苯并&，(1環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基-苯基}-曱磺酰胺(結(jié)晶)(11型)用BrukerD8Advance衍射儀對(duì)未微粉化的化合物(I)(例如基本如實(shí)施例6中所述的那樣制備)和微粉化的化合物(I)(例如基本如實(shí)施例7中所述的那樣制備)的樣品進(jìn)行X-射線粉末衍射分析，將樣品在以。29計(jì)2°至45。之間掃描，步長(zhǎng)位以。29計(jì)0.02。，掃描速率位5秒/步，使用0.6mm的發(fā)散狹縫、0.6mm的抗散射狹縫、O.lmm的接受狹縫和0.6mm的檢測(cè)器狹縫。未微粉化的和微粉化的樣品的X-射線圖揭示了一種在下列。20值處具有特征峰位的普通晶形(II型)_<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>實(shí)施例9位于納米混懸劑中的(巧-7V-(3-ll-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并a，d環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-甲磺酰胺在一個(gè)250mLPyrexNo.1395培養(yǎng)基瓶中，將約579mg初始d卯粒度=32nm的化合物I(初始粒度是用BeckmanCoulterLS13320激光衍射粒度分析儀測(cè)定的)混懸于174mL包含1%羧甲基纖維素鈉、0.25%聚山梨酯80和0.05%Antifoam1510的基質(zhì)中。然后用BransonSonifer250將該制劑進(jìn)行聲處理46分鐘，使用0.5英寸的探針，功率輸出為最大功率的約86%。用HoribaLA-920粒度分析儀測(cè)定探針聲處理的制劑中化合物I的粒度平均粒度3.8jim;d90粒度6.5nm。然后用配有JR3075微米相互作用室和冷卻螺管的MicrofluidicsM-110SMicrofluidizer將探針聲處理的制劑勻化，得到納米混懸劑。將冷卻螺管維持在水浴中，除了短暫偏移低至14。C和高至39。C以外，水浴溫度被保持在20-30。C。將壓力表設(shè)定在IOOpsi(約6.89bar)，其向制劑施加23,000psi的壓力。將制劑置于一個(gè)1L的加料斗中，由加料斗的底部將其引入到Microfluidizer中并通過(guò)產(chǎn)物引流和一定長(zhǎng)度的硅酮管使其回到加料斗中液體的頂部。還用標(biāo)準(zhǔn)螺旋槳混合器在漏斗中對(duì)制劑進(jìn)行攪拌。使全部體積的制劑通過(guò)相互作用室81次。用HoribaLA-920粒度分析儀測(cè)定納米混懸劑制劑中化合物I的最終粒度平均粒度0.430nm;d卯粒度0.594jim。權(quán)利要求1.一種化合物，其是(E)-N-{3-[1-(8-氯-11H-10-氧雜-1-氮雜-二苯并[a，d]環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基]-苯基}-甲磺酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的化合物，其是(^)-A^3-l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基-苯基卜甲磺酰胺。3.—種化合物，其是(^)-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，d環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-甲磺酰胺。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽，其是(^)-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基I-苯基P甲磺酰胺.HBr、(巧-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基)-曱磺酰胺.HCl或(E)-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，d環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基)-甲磺酰胺.H2S04(2:l)。5.—種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、哞喘、變應(yīng)性鼻炎、系統(tǒng)性紅斑狼疳、慢性阻塞性肺疾病、克隆病、炎性腸病或潰瘍性結(jié)腸炎的方法，其包括給需要其的患者施用有效量的權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的化合物或鹽。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。7.—種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，其包括給需要其的患者施用有效量的化合物(E)-Aq3-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯畫5畫叉基)-丙基I-苯基卜甲磺酰胺。8.權(quán)利要求l-4中任意一項(xiàng)所述的化合物或鹽在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、哮喘、變應(yīng)性鼻炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性阻塞性肺疾病、克隆病、炎性腸病或潰瘍性結(jié)腸炎。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，所述藥物用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。10.化合物(JE)-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基}-甲磺酰胺在制備用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。11.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求l-4中任意一項(xiàng)所述的化合物或鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。12.—種用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，其包含權(quán)利要求l-4中任意一項(xiàng)所述的化合物或鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。13.—種藥物組合物，其包含化合物(^)-A43-[l-(8-氯-llH-10-氧雜-l-氮雜-二苯并[a，dl環(huán)庚三烯-5-叉基)-丙基卜苯基》-甲磺酰胺以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。14.根據(jù)權(quán)利要求l-4中任意一項(xiàng)所述的化合物或鹽，其用在療法中。全文摘要本發(fā)明提供了化合物(I)化合物(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽；包含化合物(I)以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物；和治療炎性和免疫性障礙的方法，該方法包括給需要其的患者施用有效量的化合物(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽。文檔編號(hào)A61K31/4745GK101489556SQ200780025807公開日2009年7月22日申請(qǐng)日期2007年7月12日優(yōu)先權(quán)日2006年7月14日發(fā)明者M(jìn)·J·科格倫,M·W·卡森申請(qǐng)人:伊萊利利公司