專利名稱：：千里香葉總黃酮及其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)研究領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：千里香[Murrayapaniculata(L.)Jack]為蕓香科九里香屬植物，主要產(chǎn)自我國(guó)云南、貴州、湖南、廣東、廣西、福建、臺(tái)灣等地。千里香與九里香屬另外一種藥用植物九里香[MurrayaexoticaL.]—起被中華人民共和國(guó)藥典2005版一部所收載，是九里香藥材的原植物之一。到目前為止有人從千里香[Murrayapaniculata(L.)Jack]葉中共分得5個(gè)黃酮類化合物，分別是3，5，6，7，8，3'，4'，5'-八甲氧基黃酮(3，5，6，7，8，3'，4'，5'-octamethoxyflavone)即月桔素(Exotiein);3，5，7，8，3'，4'，5'-七甲氧基黃酮(3，5,7，8,3'，4',5'-h印tamethoxyflavone)即木槿黃素七甲醚(hibiscetinh印tamethylether);3，5，6，7，3'，4'，5'--七甲氧基黃酮(3,5，6，7,3'，4'，5'-h印tamethoxyflavone)(江蘇新醫(yī)學(xué)院，中藥大辭典，上冊(cè)，上海人民出版社，1977:44-45);5，7，8，3'，4'，5'-六甲氧基黃酮(5,7，8，3'，4'，5'-hexamethoxyflavone)即版納九里香素(ba腿murpanisin)(植物學(xué)報(bào)1984，26(2):184-186)以及5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮(5，7，3'，4'，5'-pentamethoxyflavone)(化學(xué)學(xué)報(bào)1984，42，1308-1311)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種從千里香葉中得到的以新發(fā)現(xiàn)的黃酮類化合物為主要成分，具有生物活性的黃酮類化合物的混合物即千里香葉總黃酮，它是一種中藥有效部位。其特征在于其中至少含有5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮、5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'，5'-六甲氧基黃酮、7-羥基-5，3'，4'-三甲氧基黃酮中的的兩種或兩種以上；而且其中5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮、5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'，5:六甲氧基黃酮、7-羥基-5，3'，4'-三甲氧基黃酮的含量之和大于50%或者5,7，3'，4'-四甲氧基黃酮、5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'，5'-六甲氧基黃酮的含量之和大于50%或者5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮和5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮的含量之和大于50%或者5，7，3'，4'_四甲氧基黃酮的含量大于50%。本發(fā)明還提供了千里香葉總黃酮的制備方法，其特征在于提供如下步驟獲得千里香葉總黃酮(1)千里香葉水煎煮或有機(jī)溶劑回流提取，水提取液直接過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附，有機(jī)溶劑提取液先回收有機(jī)溶劑，加水溶解或懸浮后過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附(2)堿水或低濃度有機(jī)溶劑洗脫后水洗至中性(3)有機(jī)溶劑解吸(4)洗脫液濃縮，得千里香葉提取物(5)千里香葉提取物用水溶解或懸浮后過(guò)聚酰胺柱吸附，有機(jī)溶劑洗脫，洗脫液回收溶劑，獲得千里香葉總黃酮(6)將千里香葉提取物或千里香葉總黃酮進(jìn)行柱層析純化獲得純度更高的九里香葉總黃酮。其中所述的大孔吸附樹(shù)脂選自AB-8、D4020、DlOl、D102、D103、860021、HP20的一種或一種以上混合物；所述的柱層析選自硅膠、氧化鋁、ODS或聚酰胺柱層析的一種或一種以上；堿溶液選自堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物的水溶液。本發(fā)明還提供了上述千里香葉總黃酮在制備治療心肌缺血藥物中的用途以及千里香葉總黃酮與醫(yī)學(xué)上可接受的藥用輔料組成的藥物組合物；其劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液或注射劑。本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案完成的。(1)通過(guò)對(duì)千里香葉化學(xué)成分的提取分離及結(jié)構(gòu)鑒定，從千里香葉中首次發(fā)現(xiàn)了5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮、5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'，5'-六甲氧基黃酮、7-羥基-5，3'，4'-三甲氧基黃酮以及3-羥基-5，7，4'-三甲氧基黃酮的存在(2)通過(guò)提取方法的研究，發(fā)明了以5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮、5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'，5'-六甲氧基黃酮、7-羥基-5,3'，4'-三甲氧基黃酮為主要成分的千里香葉總黃酮的制備工藝。本制備工藝可以獲得上述黃酮類化合物的含量之和在50%至氧基黃酮、5，7，3'，4'，5:五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'，5'-六甲氧基黃酮、7-羥基-5，3'，4'-三甲氧基黃酮的HPLC含量測(cè)定方法(4)通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了千里香葉總黃酮的醫(yī)藥用途(5)對(duì)以千里香葉總黃酮為活性成分的藥物制劑進(jìn)行了研究，具體如下。1、千里香葉化學(xué)成分的提取分離本發(fā)明用千里香葉購(gòu)自云南，經(jīng)鑒定為蕓香科九里香屬植物千里香[Murrayapaniculata(L.)Jack]。將干燥的千里香葉2Kg粉碎后加水煎煮提取3次，加水量分別為30升，24升，20升，煎煮時(shí)間分別是2小時(shí)，1.5小時(shí)，1小時(shí)，合并三次提取液。濾液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，水洗，95%的乙醇解吸，回收乙醇得到千里香葉提取物。將千里香葉提取物上Al203柱，用乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，TLC檢測(cè)，合并相同組分，得到A、B、C三部分。將A、B、C三部分反復(fù)進(jìn)行硅膠柱層析，得到黃酮類單體化合物JA，JB，JC，JD，JE及JF六個(gè)單體化合物。2.千里香葉化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)鑒定2.1化合物JA的結(jié)構(gòu)鑒定JA為白色粉末，熔點(diǎn)195.5-196.5°C，紫外燈下顯示亮色熒光，易溶于氯仿，難溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于水。HCl—Mg反應(yīng)陽(yáng)性，顯示淡紫紅色。FeCl3反應(yīng)呈陰性，提示可能不含酚羥基，A1C1:,反應(yīng)陽(yáng)性，紫外燈下為黃綠色熒光。上述反應(yīng)提示JA可能為黃酮類化合物。"CNMR譜中共有19個(gè)信號(hào)，由135°和90°DEPT譜可知，其中Sc55.70、55.98、56.01和56.36為甲氧基碳信號(hào)。H麗R中SH3.90、3.94、3.95處的單峰為甲氧基質(zhì)子信號(hào)；7.46為1H、dd峰，J=9.0Hz，1.8Hz，說(shuō)明在母核的苯環(huán)上有相鄰的氫，并且在這個(gè)氫的間位還有一個(gè)氫；6.58為1H、s峰，是3位質(zhì)子信號(hào)；6.53、6.35各1H，均為d峰，J=2.4Hz，說(shuō)明這兩個(gè)氫在苯環(huán)上處于間位。由HMBC譜可知，SH6.35(1H，d，J=2.4Hz)與Cs、C7、C8、d。相關(guān)，應(yīng)歸屬為H-6;S6.53(1H，d，J=2.4Hz)與Ce、C7、C9、d。相關(guān)，歸屬為H-8;S6.58(1H，s)與C2、C4、C10、d.相關(guān)，歸屬為H-3;SH7.26(1H，d，J=1.8Hz)與C2、Cr、C3、C4、Ce.相關(guān)，歸屬為H-2';SH6.92(IH，d，J=9.0Hz)與C,.、C3'、(V相關(guān)，歸屬為H-5';SH7.47(1H，dd，J=9.OHz，1.8Hz)與C2、C2'、。相關(guān)，歸屬為H-6';5H3.90(3H，s)與G相關(guān)，歸屬為7-0CH3;而SH3.95(3H，，s)與〔3相關(guān)，歸屬為3'-0CH3;SH3.94(6H，brs)與C5和。相關(guān)，是4'位和5位甲氧基共同的吸收信號(hào)。ES-MS給出分子離子峰為343(M+H)，證明JA分子量為342。根據(jù)以上分析，確定化合物JA為5，7，3'，4'，-四甲氧基黃酮(5，7，3'，4'-tetramethoxyflavone)，此化合物首次從千里香葉中分得。<image>imageseeoriginaldocumentpage8</image>化合物JA的結(jié)構(gòu)式<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.2化合物JB的結(jié)構(gòu)鑒定JB為白色粉末，熔點(diǎn)199-200°C，紫外燈下顯示亮色熒光，易溶于氯仿，難溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯，不溶于冷水。HC1—Mg反應(yīng)陽(yáng)性，顯示淡紫紅色。FeCl3反應(yīng)陰性，提示可能不含有酚羥基。AlCl3反應(yīng)陽(yáng)性，紫外燈下為黃綠色熒光。上述反應(yīng)提示JB可能為黃酮類化合物。Molish反應(yīng)陰性，顯示分子中不含糖。"C麗R譜中共有17個(gè)信號(hào)，其中SG153.43、103.27、56.28比正常碳信號(hào)約高2倍，表明分子中有化學(xué)環(huán)境完全相同的碳，即母核的B環(huán)上含有對(duì)稱結(jié)構(gòu)，且由135°和90°DEPT可知，SJ53.43為季碳信號(hào)，103.27為叔碳信號(hào)，56.28為甲氧基碳信號(hào)，60.95、56.36、55.76也為甲氧基信號(hào)。'H麗R中S3.92(3H)、3.93(3H)、3.95(6H)、3.96(3H)處的單峰均為甲氧基質(zhì)子信號(hào)，7.07(s，2H)應(yīng)為母核B環(huán)上非相鄰對(duì)稱位置上的質(zhì)子信號(hào)，6.62(s，1H)為3位質(zhì)子信號(hào)，6.57(1H，d，J=2.4Hz)、6.38(1H，d，J=2.4Hz)，為母核A環(huán)上的間位質(zhì)子信號(hào)。通過(guò)HMBC譜可知，SH7.07(2H，s，)與C2、d.、C3.、C4.、C6.相關(guān)，歸屬為H-2';"6.62(1H，s，)與C2、C4、C)、C,'相關(guān)，歸屬為H_3;"6.38(d，J二2.4Hz)與C5、C7、C8、d。相關(guān)，歸屬為H_6;SH6.57(1H，d，J=2.4Hz)與"、C7、C9、d。相關(guān)，歸屬為H-8;SH3.96(3H，s)與Cs相關(guān)，歸屬為5-0CH3;SH3.93(3H，s)與"相關(guān)，歸屬為7_0CH3;SH3.95(6H，s)與C:,.、C5相關(guān)，歸屬為3'和5'-0CH3;"3.92(3H，s)與(V相關(guān)，歸屬為4'-0CH3。ES-MS給出分子離子峰為373(M+H)，證明JB分子量為372。根據(jù)以上分析，確定化合物JB為5，7，3V4'，5'-五甲氧基黃酮(5，7，3'，4'，5'-pentamethoxyflavone)。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>難溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯，不溶于水。HCl—Mg反應(yīng)陽(yáng)性，顯示淡紫紅色。FeCl3反應(yīng)陰性，提示可能不含有酚羥基。AlCl3反應(yīng)陽(yáng)性，紫外燈下為黃綠色熒光。上述反應(yīng)提示JC可能為黃酮類化合物。Molish反應(yīng)陰性，顯示分子中不含糖。"CNMR譜中共有18個(gè)信號(hào)，與化合物JB相比較，大部分信號(hào)的化學(xué)位移值未發(fā)生顯著變化，但"由Sc96.13變?yōu)?30.52，且在S^6.49處多了1個(gè)甲氧基信號(hào)，'H麗R中較化合物JB少了間位偶合質(zhì)子信號(hào)，SH3.97(3H，s)為甲氧基質(zhì)子信號(hào)，這表明化合物JC為六甲氧基黃酮，其多出的甲氧基應(yīng)連接在6位碳上。通過(guò)匿BC譜可知，SH6.45(1H，s，)與C6、C7、C9、d。相關(guān)，歸屬為H-8;SH6.65(1H，s，)與C2、C4、C10、d相關(guān)，歸屬為H-3;SH7.19(2H，s)與G、、d'、C3.、C4.、Cr相關(guān)，歸屬為H-2'和H-6';"3.92(3H，s)與".相關(guān)，歸屬為4'-0CH3;"3.96(6H，s)與C:r、C5.相關(guān)，歸屬為3'和5'-0CH3;SH3.97(3H，s)與Cs相關(guān)，歸屬為5-0CH3;"4.00(3H，s)與Ce相關(guān)，歸屬為6-0CH3;SH4.02(3H，s)與(]7相關(guān)，歸屬為7-0CH3。ES-MS給出分子離子峰為403(M+H)，證明JC分子量為402。根據(jù)以上分析，確定化合物JC為5，6，7，3'，4'，5'-六甲氧基黃酮(5，6，7，3'，4'，5'-hexamethoxyflavone)。此化合物亦為首次從千里香中分得。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>化合物JC的結(jié)構(gòu)式Table3The'C畫(huà)RandH麗RdataforcompoundJCinCDC1<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.4化合物JD的結(jié)構(gòu)鑒定JD為白色粉末，熔點(diǎn)207-208°C，紫外燈下顯示亮色熒光，易溶于氯仿，難溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯，不溶于水。HCl—Mg反應(yīng)陽(yáng)性，顯示淡紫紅色。FeCls反應(yīng)陽(yáng)性，產(chǎn)生墨綠色沉淀，提示可能含有酚羥基。AlCl3反應(yīng)陽(yáng)性，紫外燈下為黃綠色熒光。上述反應(yīng)提示JD可能為黃酮類化合物。Molish反應(yīng)陰性，顯示分子中不含糖。"C麗R譜中共冇18個(gè)信號(hào)，由135°DEPT譜可知，其中Sc55.87、56.07、56.19為甲氧基碳信號(hào)，其它各碳信號(hào)符合黃酮母核的結(jié)構(gòu)。因135°DEPT譜顯示有9個(gè)季碳，而只有三個(gè)甲氧基，說(shuō)明在某一位置應(yīng)帶有一羥基。'H麗R中SH3.805、3.837、3.876處的單峰為甲氧基質(zhì)子信號(hào)；7.46為1H、dd峰，J=9.0Hz，1.8Hz，說(shuō)明在母核的苯環(huán)上有相鄰的氫，并且在這個(gè)氫的間位還有一個(gè)氫；6.67為1H單峰為3位質(zhì)子信號(hào)；6.37、6.57各1H，均為d峰，J=2.4Hz，說(shuō)明這兩個(gè)氫在苯環(huán)上處于間位。由HMBC譜可知，S6.47(1H，d，J=2.4Hz)與Cs、C7、C8、d。相關(guān)，應(yīng)歸屬為H-6;S6.77(1H，d，J=2.4Hz)與Ce、C7、C9、d。相關(guān)，歸屬為H-8;"6.58(1H，s)與C2、C4、C10、d相關(guān)，歸屬為H-3;SH7.37(1H，d，J二1.8Hz)與C2、C3.、C4.、Qr相關(guān)，歸屬為H-2';SH7.05(IH，d，J二9.0Hz)與d.、C3.、Cr相關(guān)，歸屬為H-5';5H7.47(IH，dd，J=9.OHz，1.8Hz)與G、C,、。相關(guān)，歸屬為H-6';S3.80(3H，s)歸屬為5-0CH3，SH3.84(3H，s)歸屬為4'-0CH3,5H3.87(3H，s)歸屬為7-0CH3。ES-MS給出分子離子峰為329(M+H)，證明JD分子量為328。根據(jù)以上分析，確定化合物JD為3'-羥基-5，7，4'-三甲氧基黃酮..<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>此化合物亦為首次從千里香中分<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>Table4<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2.5化合物JE的結(jié)構(gòu)分析JE為白色粉末，熔點(diǎn)235-236°C，紫外燈下顯示亮色熒光，易溶于氯仿，難溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯，幾乎不溶于冷水。HC1—Mg反應(yīng)陽(yáng)性，顯示淡紫紅色。FeCh反應(yīng)陽(yáng)性，產(chǎn)生墨綠色沉淀，提示可能含有酚羥基。AlCl3反應(yīng)陽(yáng)性，紫外燈下為黃綠色熒光。上述反應(yīng)提示JE可能為黃酮類化合物。Molish反應(yīng)陰性，顯示分子中不含糖。"CNMR譜中共有18個(gè)信號(hào)，由135°DEPT譜可知，其中"55.99、55.93、55.82為甲氧基碳信號(hào)，其它各碳信號(hào)符合黃酮母核的結(jié)構(gòu)。^麗R中S3.786、3.823、3.855處的單峰為甲氧基質(zhì)子信號(hào)；7.58為1H、dd峰，J=9.0Hz，1.8Hz，說(shuō)明在母核的苯環(huán)上有相鄰的氫，并且在這個(gè)氫的間位還有一個(gè)氫；6.528、1H單峰為3位質(zhì)子信號(hào)；6.47、6.77各1H，均為d峰，J二2.4Hz，說(shuō)明這兩個(gè)氫在苯環(huán)上處于間位。由HMBC譜可知，SH6.37(1H，d，J=2.4Hz)與Cs、C7、C8、C。相關(guān)，應(yīng)歸屬為H-6;S6.57(1H，d，J=2.4Hz)與Cs、C7、C9、Cu)相關(guān)，歸屬為H-8;SH6.67(1H，s)與C2、C4、Clfl、d相關(guān)，歸屬為H-3;SH7.47(1H，d，J二1.8Hz)與C2、C3、C4.、Ce相關(guān)，歸屬為H-2';SH7.09(1H，d，J=9.0Hz)與d'、C3、C,'相關(guān)，歸屬為H-5';SH7.58(IH，dd，J=9.OHz，1.8Hz)與C2、C2、。相關(guān)，歸屬為H-6';SH3.79(3H，s)歸屬為5-0CH3，S3.82(3H，s)歸屬為4'-OCH3,SH3.86(3H，s)歸屬為3'-OCH3。ES-MS亦給出分子離子峰為329(M+H)，證明JE分子量為328。根據(jù)以上分析，確定化合物JE為7-羥基-5，3'，4'-三甲氧基黃酮。此化合物亦為首次從千里香葉中分得?；衔颙E的結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>"3C化學(xué)位移口J互換2.6化合物JF的結(jié)構(gòu)鑒定JF為白色粉末，紫外燈下顯示亮色熒光，易溶于氯仿，難溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯，不溶于冷水。HCl—Mg反應(yīng)陽(yáng)性，顯示淡紫紅色。FeCl3反應(yīng)陰性.，提示可能不含有酚羥基。A1CL反應(yīng)陽(yáng)性，紫外燈下為黃綠色熒光。上述反應(yīng)提示JB可能為黃酮類化合物。Molish反應(yīng)陰性，顯示分子中不含糖。13CNMR譜中共有17個(gè)信號(hào)，由135。和90°DEPT可知，61.47，56.53，56.25，56.03，55.90為甲氧基信號(hào)。窗R中SH3.964(6H)、3.977(3H)、3.996(3H)、4.015(3H)處的單峰均為甲氧基質(zhì)子信號(hào)。通過(guò)HMBC譜可知，6.444(s，1H)與Cfi、C7、U相關(guān)，歸屬為8位質(zhì)子信號(hào)；6.621(s，1H)與C2、d。、C2相關(guān)，歸屬為3位質(zhì)子信號(hào)，7.424(1H，d，J=1.8Hz)與C2、Gr、C4、Cr相關(guān)，歸屬為2'位質(zhì)子信號(hào)，7.597(1H，dd，J=8.4，J二1.8Hz)與"、C2、<:4相關(guān)歸屬為6'位質(zhì)子信號(hào)，7.002(1H，dd，J=8.4)與d.、C3.、C4-相關(guān)，歸屬為5'位質(zhì)子信號(hào)。SH4.015(3H，s)與Cs相關(guān)，歸屬為5-0CH3;SH3.996(3H，s)與。7相關(guān)，歸屬為7-0CH3;SH3.964(6H，s)與Cfi、CV相關(guān)，歸屬6和4'-0CH3;5H3.977(3H，s)與C3.相關(guān)，歸屬為3'-OCH3。根據(jù)以上分析，確定化合物JF為5，6，7，3'，4'-五甲氧基黃酮(5，6，7，3'，4'-pentamethoxyflavone)。此化合物亦為首次從千里香葉中分得?；衔颙F的結(jié)構(gòu)式<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>化合物JA、JB、JC、JD、JE、JF的'H-麗R、"C-NMR、DEPT、'H」HC0SY、HMQC以及HMBC等光譜圖如圖l一36所示。3、千里香葉總黃酮制備工藝研究為了從千里香葉得到黃酮含量高雜質(zhì)含量低的總黃酮，本發(fā)明經(jīng)反復(fù)研究最終完成了如下制備工藝。千里香葉中的黃酮類化合物可以通過(guò)水煎煮或有機(jī)溶劑回流等方法進(jìn)行提取。由于千里香葉中的黃酮類化合物均是低極性化合物，水煎煮提取效果不好，提取次數(shù)多達(dá)7-8次才能提取完全，因此最好是采用有機(jī)溶劑回流提取方法進(jìn)行提取，具體可用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等回流提取。因?yàn)橐掖级拘孕?，價(jià)格便宜，因此最好用乙醇回流提取。研究發(fā)現(xiàn)千里香葉中的黃酮類化合物可以被大孔吸附樹(shù)脂吸附，因此采用大孔吸附樹(shù)脂吸附法進(jìn)行初步純化，將提取液中的黃酮類成分與蛋白、多糖、葉綠素等雜質(zhì)分離。水提取液可以直接過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附，而有機(jī)溶劑提取液則回收溶劑至一定體積后加水稀釋，然后過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附。吸附完畢后先用低濃度有機(jī)溶劑或堿溶液洗脫，目的是把被大孔吸附樹(shù)脂吸附的部分雜質(zhì)洗脫下來(lái)。堿水洗脫完畢后用水洗至中性，然后用有機(jī)溶劑解吸，把黃酮類成分洗脫下來(lái)，洗脫液經(jīng)減壓或常壓濃縮，得千里香葉提取物。其中除了黃S類成分外還含有香豆素及生物堿類成分，黃酮類成分的含量低于50%，不能直接用來(lái)研制開(kāi)發(fā)中藥新藥。上述制備工藝中所述的大孔吸附樹(shù)脂可選用AB-8、D4020、DlOl、D102、D103、860021、HP20的一種或一種以上混合物或具有相同或相似功能的其他廠商牌號(hào)的吸附樹(shù)脂；所述的柱層析可選用硅膠、氧化鋁、ODS或聚酰胺柱層析的一種或一種以上。除雜質(zhì)或洗脫用有機(jī)溶劑可以使用甲醇、乙醇、丙酮、正丙醇、異丙醇、正丁醇等極性較大的有機(jī)溶劑或它們與水的混合溶液，最好是使用乙醇的水溶液。利用低濃度有機(jī)溶劑的水溶液洗脫除雜質(zhì)時(shí)所謂的低濃度是以不把黃酮類化合物洗脫下來(lái)為上限，一般不高于20%。堿溶液洗脫除雜質(zhì)時(shí)可以使用的堿溶液有堿金屬氫氧化物、堿土金屬氫氧化物的溶液或其他無(wú)機(jī)或有機(jī)堿的溶液，最好是氫氧化鈉水溶液，濃度以千分之一為宜。將千里香葉提取物用水溶解或懸浮后過(guò)聚酰胺柱吸附，有機(jī)溶劑洗脫，洗脫液回收溶劑，即可以獲得千里香葉總黃酮，其中除了黃酮類成分外還含有香豆素類成分但黃酮類成分的含量大于50%。將上述方法所得千里香葉提取物，加水溶解或懸浮后用有機(jī)溶劑萃取，萃取液減壓濃縮，干燥，也可以獲得千里香葉總黃酮，這樣得到的千里香葉總黃酮，其中黃酮類成分的含量有所提高，雜質(zhì)含量有所降低。用來(lái)萃取的有機(jī)溶劑可以是氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等與水不相混溶的溶劑，最好是氯仿或乙酸乙酯。最后將上述方法獲得的千里香葉提取物或千里香葉總黃酮進(jìn)一步進(jìn)行柱層析純化可以獲得純度更高的精制千里香葉總黃酮，經(jīng)薄層色譜及高效液相色譜檢測(cè)，其中主要成分是化合物JA、JB、JC、JD、JF，它們的含量之和在50%至100%之間，而且可以得到除了黃酮類成分外不含其他成分的總黃酮，其中包括只含有化合物JA、JB、JC、JD、JE、JF的千里香葉總黃酮。所述柱層析可選用硅膠、氧化鋁、0DS、聚酰胺柱層析的一種或一種以上。4、千里香葉總黃酮中黃酮類化合物的含量測(cè)定方法研究利用分光光度法可以測(cè)定黃酮類化合物的總含量，但其結(jié)果沒(méi)有HPLC法準(zhǔn)確，故建立了HPLC含量測(cè)定方法。(1)儀器、試劑、對(duì)照品Agilent1100Series高效液相色譜儀ZORBAXExtend—C184.6X250,0DS，5um色譜柱VWD可變波長(zhǎng)自外檢測(cè)器色譜甲醇、二次蒸餾水將前述分離得到的JA、JB、JC、JD、JF單體通過(guò)重結(jié)晶或ODS純化獲得含量測(cè)定用對(duì)照品。按本方法色譜條件，歸一化測(cè)得純度均超過(guò)98%，符合相關(guān)要求。(2)色譜條件色譜柱用ZorbaxExtend,4.6X250mm，5um，0DS;柱溫為25。C;流動(dòng)相為甲醇水=58:42;流速為1.2mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為337nm;進(jìn)樣量為20y1。(3)樣品溶液的制備取干燥的九里香莖葉粉末(過(guò)60目篩)lg,加甲醇78'C水浴回流提取3次，每次加甲醇15ml，回流時(shí)間分別是2h、1.5h、lh，合并提取液，蒸干溶劑后甲醇定容至50.00ml，過(guò)濾，取濾液2.0ml至10ml容量瓶中，定容，即得。(4)測(cè)定方法分別精密吸對(duì)照品液與供試品溶液各20y1，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，利用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量計(jì)算。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取千里香葉2公斤，加水煎煮提取7次，每次加水量為24升，煎煮時(shí)間為l小時(shí)，濾過(guò)，合并提取液，過(guò)AB-8大孔吸附樹(shù)脂吸附，用水沖凈后用50升千分之一氫氧化鈉的水溶液沖洗，用水洗至中性后用85%乙醇溶液洗脫至薄層層析檢測(cè)不到JA為止。洗脫液減壓回收乙醇，得千里香葉提取物153克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為23。/。。將此千里香葉提取物用水加熱溶解后過(guò)聚酰胺柱吸附，用水沖凈后用85%乙醇洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得千里香葉總黃酮74克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為51%，TLC表明其中還含有香豆素類成分。取此千里香葉總黃酮進(jìn)行硅膠柱層析，用乙酸乙酯和乙醇的混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢測(cè)，收集黃酮部分，回收溶劑，得精制千里香葉總黃酮35克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為75%，其中JA、JB、JC的含量之和為53%，不含香豆素等其他別的成分。實(shí)施例2取千里香葉2公斤，85%乙醇回流提取3次，乙醇量分別為10、8、6倍，回流時(shí)間為45分鐘，濾過(guò)，合并提取液，減壓濃縮至無(wú)乙醇味，加水稀釋，過(guò)860021大孔吸附樹(shù)脂吸附，用40升10%乙醇水溶液沖洗后用甲醇洗脫至薄層層析檢測(cè)不到JA為止，洗脫液減壓回收甲醇，得千里香葉提取物132克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為28%。將此千里香葉提取物用水加熱溶解后過(guò)聚酰胺柱吸附，用水沖凈后用80%乙醇洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得千里香葉總黃酮83克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為55%，TLC檢測(cè)表明含有香豆素。最后取此千里香葉總黃酮進(jìn)行氧化鋁柱層析，用乙酸乙酯和甲醇的混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢測(cè)，收集黃酮部分，回收溶劑，得精制千里香葉總黃酮38克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為84%，其中JA、JB的含量之和為59%,不含香豆素類成分。實(shí)施例3取千里香葉2公斤，甲醇回流提取3次，甲醇量分別為IO、8、6倍，回流時(shí)間為1小時(shí)，濾過(guò)，合并提取液，減壓濃縮至干，加水加熱溶解，過(guò)D4020大孔吸附樹(shù)脂吸附，用水沖凈后用50升千分之一氫氧化鉀水溶液沖洗，用水洗至中性后用丙酮洗脫至薄層層析檢測(cè)不到JA為止，洗脫液減壓回收丙酮，得千里香葉提取物149克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為21%。將此千里香葉提取物用水加熱溶解后過(guò)聚酰胺柱吸附，用水沖凈后用80%甲醇洗脫，洗脫液減壓回收甲醇，得千里香葉總黃酮89克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為58%，TLC檢測(cè)含有香豆素類成分。最后取此千里香葉總黃酮進(jìn)行聚酰胺柱層析，用氯仿和甲醇的混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢測(cè)，收集黃酮部分，回收溶劑，得精制千里香葉總黃酮41克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量為65。/。，另含有少量香豆素類成分。實(shí)施例4取千里香葉2公斤，丙酮回流提取3次，丙酮量分別為IO、8、6倍，回流時(shí)間為1小時(shí)，濾過(guò)，合并提取液，減壓濃縮至干，加水加熱溶解，過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂吸附，用水沖凈后75%異丙醇洗脫至薄層層析檢測(cè)不到JA為止，洗脫液減壓回收異丙醇，得千里香葉提取物146克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為19%。將此千里香葉提取物用水加熱溶解后過(guò)聚酰胺柱吸附，用水沖凈后用80%乙醇洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得千里香葉總黃酮68克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為54%，TLC檢測(cè)含有香豆素。最后取此千里香葉總黃酮7克乙醇和水的混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行ODS柱層析，TLC檢測(cè)，收集黃酮部分，回收溶劑，得精制千里香葉總黃酮2.9克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為83。/。，不含香豆素。實(shí)施例5取千里香葉2公斤，乙醇回流提取3次，乙醇量分別為IO、8、6倍，回流時(shí)間為1小時(shí)，濾過(guò)，合并提取液，減壓濃縮至干，加水加熱溶解，過(guò)HP20大孔吸附樹(shù)脂吸附，用水沖凈后用50升千分之一氫氧化鈣水溶液沖洗，用水洗至中性后用正丁醇洗脫至薄層層析檢測(cè)不到JA為止，洗脫液減壓回收正丁醇，得千里香葉提取物172克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量為18%。將此千里香葉提取物用水加熱溶解后用氯仿萃取，氯仿層回收溶劑，得千里香葉總黃酮93克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為50.5%，TLC檢測(cè)含有香豆素。最后取此千里香葉總黃酮用乙酸乙酯和乙醇的混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行硅膠柱層析，TLC檢測(cè)，收集黃酮部分，回收溶劑，得精制千里香葉總黃酮39克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為85%，不含香豆素。實(shí)施例6取千里香葉2公斤，85%乙醇回流提取3次，乙醇量分別為10、8、6倍，回流時(shí)間為45分鐘，濾過(guò)，合并提取液，減壓濃縮至無(wú)乙醇味，加水稀釋，過(guò)860021大孔吸附樹(shù)脂吸附，用60升10%乙醇水溶液沖洗后用甲醇洗脫至薄層層析檢測(cè)不到JA為止，洗脫液減壓回收甲醇，得千里香葉提取物132克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為3P/。。將此千里香葉提取物用水加熱溶解后過(guò)聚酰胺柱吸附，用水沖凈后用80%乙醇洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得千里香葉總黃酮83克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為58%，TLC檢測(cè)表明含有香豆素。最后取此千里香葉總黃酮進(jìn)行氧化鋁柱層析，用乙酸乙酯和甲醇的混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢測(cè)，收集黃酮部分，回收溶劑后在進(jìn)行硅膠柱層析純化，得精制千里香葉總黃酮30克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、，的含量之和為94%，其中JA的含量之和為51%，不含香豆素類成分。實(shí)施例7取千里香葉2公斤，加水煎煮提取7次，每次加水量為30升，煎煮時(shí)間為l小時(shí)，濾過(guò)，合并提取液，過(guò)AB-8大孔吸附樹(shù)脂吸附，用水沖凈后用70升千分之一氫氧化鈉的水溶液沖洗，用水洗至中性后用85%乙醇溶液洗脫至薄層層析檢測(cè)不到JA為止。洗脫液減壓回收乙醇，得千里香葉提取物143克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為27。/。。將此千里香葉提取物用水加熱溶解后過(guò)聚酰胺柱吸附，用水沖凈后用85%乙醇洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得千里香葉總黃酮74克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為61%，TLC表明其中還含有香豆素類成分。取此千里香葉總黃酮進(jìn)行硅膠柱層析，用乙酸乙酯和乙醇的混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢測(cè)，收集黃酮部分，回收溶劑，得精制千里香葉總黃酮35克，將此精制千里香葉總黃酮用甲醇重結(jié)晶，得千里香葉總黃酮26克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中JA、JB、JC、JD、JF的含量之和為95%，其中JA的含量之和為53%，不含香豆素等其他別的成分。實(shí)施例8取精制千里香葉總黃酮10克，加淀粉適量，制粒，裝入膠囊，制成1000粒，得千里香葉總黃酮膠囊。實(shí)施例9取千里香葉總黃酮10克，加預(yù)膠化淀粉、羧甲基淀粉鈉適量，制粒，壓片，制成1000粒，得千里香葉總黃酮片。實(shí)施例10取精制千里香葉總黃酮10克，加入1000ml丙二醇和1000ml注射用水，攪拌溶解，過(guò)濾，滅菌，罐裝，每支2ml，得千里香葉總黃酮注射液。實(shí)施例11取千里香葉總黃酮5克，加吐溫80適量，加10升加熱溶解，高溫滅菌，分裝成100瓶，得千里香葉總黃酮口服液。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1千里香葉總黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血的保護(hù)作用研究1材料和方法1.1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雌雄各半，體重240260g，合格證號(hào)為醫(yī)動(dòng)字第10-5112，由長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物研究中心供給。1.2.藥品與試劑1.千里香葉總黃酮(QLXYZHT)2.肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)試劑為進(jìn)口試劑。1.3.實(shí)驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)分組將100只Wistar大鼠隨機(jī)分為5組，每組20只，分組如下(1)假手術(shù)組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉5ml/kg.dX3d(2)梗死模型組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉5ml/kg.dX3d(3)小劑量組灌胃千里香葉總黃酮25mg/kg.dX3d(4)中劑量組灌胃千里香葉總黃酮50mg/kg.dX3d(5)大劑量組灌胃千里香葉總黃酮100mg/kg.dX3d2.實(shí)驗(yàn)方法及觀測(cè)指標(biāo)于末次給藥后30min將Wistar大鼠乙醚麻醉，仰位固定于手術(shù)臺(tái)上，測(cè)定大鼠II導(dǎo)聯(lián)正常心電圖后，正中剃毛，以10號(hào)線做荷包縫合，以手術(shù)刀正中切開(kāi)，用止血鉗剝離肋間肌肉，自左側(cè)34肋間開(kāi)胸，暴露心臟，在肺動(dòng)脈圓錐及左心耳間找出左冠狀動(dòng)脈前降支，于左心耳下23皿處用0號(hào)線立即結(jié)扎之，將心臟送回胸腔，迅速擠出胸腔內(nèi)氣體，拉緊荷包縫合線結(jié)扎以關(guān)閉胸腔，整個(gè)開(kāi)胸時(shí)間不超過(guò)30秒，假手術(shù)組不結(jié)扎而只置手術(shù)線。結(jié)扎冠脈24h后，以戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔靜脈麻醉，每組一半動(dòng)物腹主動(dòng)脈插管取血，用COBAS-FARA自動(dòng)生化分析儀測(cè)血清CK、AST及LDH活性。取血后剖取大鼠心臟，用生理鹽水洗凈心腔內(nèi)積血，去掉心房組織及脂肪，稱重，將左心室心肌橫切45片，然后浸入N-BT磷酸緩沖液中，置37。C恒溫水浴，待染色完全后取出，正常組織染色，缺血組織不染色。切下缺血心肌稱重，用缺血心肌與左心室濕重的百分比計(jì)算心肌梗死面積(MIS)。3.統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差0^^)表示，多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1.千里香葉總黃酮對(duì)急性心肌梗死大鼠MIS，血清CK、AST及LDH活性的影響與假手術(shù)組相比，梗死模型組MIS，血清CK、AST及LDH活性均明顯增加(P〈0.05P〈0.001)，表明急性心肌梗死模型建成。與梗死模型組相比，千里香葉總黃酮25、50、100mg/kg組均能明顯縮小MIS，降低血清CK、AST及LDH活性(P〈0.05或P〈0.01)，100mg/kg組對(duì)上述指標(biāo)無(wú)明顯影響(P〉0.05)，見(jiàn)表1。Tab.1EffectsofQLXYZHTonMTSandserumCK，ASTandLDHactivitiesinacutemyocardialinfarctrats(x±s，n=10)GroupMIS(%)AST(u/L)CK(u/L)LDH(u/L)Sham3.31±0.68wModel31.24±5.66QLXYZHT25mg/kg28.74±5.5750mg/kg24.37±5.24"lOOmg/kg21.14±4.38"738.5±87.5**633.4±164.廣1506.5±542.7"987.8±287.51097.5±368.72356.3±574.4873.4±134.8906.5±177.52192.3±407.8821.2±171.2*785.4±134.9"1869.7±504.5*743.1±127.1"717.6±125.7"1774.6±414.3**補(bǔ)〈0.05，林FKO.01,嫩P〈0.001comparedwithmodel.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，千里香葉總黃酮具有治療急性心肌梗死的作用。附圖l化合物JA的'H-NMR附圖2化合物JA的^C-麗R附圖3化合物JA的DEPT譜附圖4化合物JA的'H」HCOSY附圖5化合物JA的醒QC附圖6化合物JA的HMBC附圖7化合物JB的'H-NMR附圖8化合物JB的"C-NMR附圖9化合物JB的DEPT譜附圖10化合物JB的力」HCOSY附圖ll化合物JB的匿QC附圖12化合物JB的HMBC附圖13化合物JC的力-NMR附圖14化合物JC的"ONMR附圖15化合物JC的DEPT譜附圖16化合物JC的力」HCOSY附圖17化合物JC的HMQC附圖18化合物JC的HMBC附圖19化合物JD的^-NMR附圖20化合物JD的130NMR附圖21化合物JD的DEPT譜附圖22化合物JD的力」HCOSY附圖23化合物JD的HMQC附圖24化合物JD的訓(xùn)BC附圖25化合物JE的'H-NMR附圖26化合物JE的"C-麗R附圖27化合物JE的DEPT譜附圖28化合物JE的^」HCOSY附圖29化合物JE的HMQC附圖30化合物JE的HMBC附圖31化合物JF的力-NMR附圖32化合物JF的"C-麗R附圖33化合物JF的DEPT譜附圖34化合物JF的力」HCOSY附圖35化合物JF的HMQC附圖36化合物JF的HMBC。權(quán)利要求1、一種千里香葉總黃酮，其特征在于其中至少含有5，7，3′，4′-四甲氧基黃酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黃酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黃酮、7-羥基-5，3′，4′-三甲氧基黃酮中的兩種或兩種以上。2、權(quán)利要求1所述的千里香葉總黃酮，其特征在于其中5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮、5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3'，4'，5'-六甲氧基黃酮、7-羥基-5，3'，4'-三甲氧基黃酮的含量之和大于50%。3、權(quán)利要求1所述的千里香葉總黃酮，其特征在于其中5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮、5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮、5，6，7，3、4'，5'-六甲氧基黃酮的含量之和大于50%。4、權(quán)利要求1所述的千里香葉總黃酮，其特征在于其中5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮和5，7，3'，4'，5'_五甲氧基黃酮的含量之和大于50%。5、權(quán)利要求1所述的千里香葉總黃酮，其特征在于其中5，7，3'，4'-四甲氧基黃酮的含量大于50%。6、權(quán)利要求1所述的千里香葉總黃酮，其特征在于其中不含有香豆素類成分。7、權(quán)利要求1所述的千里香葉總黃酮的制備方法，其特征在于通過(guò)如下步驟得到相應(yīng)的千里香葉總黃酮(1)千里香葉水煎煮或有機(jī)溶劑回流提取，水提取液直接過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附，有機(jī)溶劑提取液先回收有機(jī)溶劑，加水溶解或懸浮后過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附(2)堿水或低濃度有機(jī)溶劑洗脫，水洗至中性(3)有機(jī)溶劑解吸(4)洗脫液濃縮，得千里香葉提取物(5)千里香葉提取物用水溶解或懸浮后過(guò)聚酰胺柱吸附，有機(jī)溶劑洗脫，洗脫液回收溶劑，獲得千里香葉總黃酮(6)將千里香葉提取物或千里香葉總黃酮進(jìn)行柱層析純化獲得純度更高的九里香葉總黃酮。8、權(quán)利要求7所述的千里香葉總黃酮的制備方法，其特征在于所述的大孔吸附樹(shù)脂選自AB-8、D4020、DlOl、D102、D103、860021、HP20的一種或使用它們的混合物。9、權(quán)利要求7所述的千里香葉總黃酮的制備方法，其特征在于所述的柱層析選自硅膠、氧化鋁、ODS或聚酰胺柱層析的一種或一種以上。10、權(quán)利要求7所述的千里香葉總黃酮的制備方法，其特征在于所述的堿溶液選自堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物的水溶液。11、權(quán)利要求1所述的千里香葉總黃酮在制備預(yù)防和治療心肌缺血藥物中的用途。12、權(quán)利要求1所述的千里香葉總黃酮與醫(yī)學(xué)上可接受的藥用輔料組成的藥物組合物。13、權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其特征在于其劑型選自片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液或注射劑。全文摘要本發(fā)明提供千里香葉總黃酮及其制備方法及用途。千里香葉總黃酮是從中藥千里香的葉中提取分離的以黃酮類化合物為主要成分的有效部位，其中主要含有5，7，3′，4′-四甲氧基黃酮、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮、5，6，7，3′，4′-五甲氧基黃酮、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黃酮以及7-羥基-5，3′，4′-三甲氧基黃酮。本發(fā)明的千里香葉總黃酮對(duì)急性心肌梗死具有治療作用。文檔編號(hào)A61K9/10GK101380379SQ20071014735公開(kāi)日2009年3月11日申請(qǐng)日期2007年9月5日優(yōu)先權(quán)日2007年9月5日發(fā)明者李緒文,楊瑞杰,桂明玉,王曉中,金永日,馬彥冬申請(qǐng)人:金永日