專利名稱：超濃縮胎盤素組織液凍干膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含胎盤素多糖的保健品以及制備該保健品的 方法。
背景技術(shù)：
胎盤中藥名為紫河車，具有調(diào)節(jié)人體機(jī)能、增強(qiáng)抵抗力、大補(bǔ) 元?dú)饩淖饔谩ＬケP素是從胎盤中提取出來的藥用成分，含有多 種激素和生物酶。以前胎盤素的4是取多采用蒸煮濃縮的方法。本發(fā) 明人通過研究，提供了 一種利用二氧化碳超臨界萃取提取胎盤素的
方法，請參見中國專利200410096974.0,利用該方法t是取的胎盤素 具有所提取的胎盤素中的活性成分不會流失，而且胎盤中的胎盤素
提取比較徹底的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明人曽將利用二氧化碳超臨界萃取法提取的胎盤素制成 了針劑，但針劑產(chǎn)品具有給被注射人帶來注射痛苦、使用風(fēng)險較高， 不方便攜帶的缺點(diǎn)，而原來利用蒸煮工藝方法獲得胎盤素具有胎盤 中的 一 些活性基因調(diào)控因子和部分代謝調(diào)控酶會因高溫作用而失 活的缺點(diǎn)。因此，對于提供一種更便于使用，沒有注射痛苦、使用 風(fēng)險低，方便攜帶，而且能充分保持活性基因調(diào)控因子和代謝調(diào)控 酶的胎盤素產(chǎn)品具有廣泛和迫切的需要。
此外，利用二氧化碳超臨界流體低溫萃取技術(shù)(SFE)雖然在 胎盤素的提取分離水平上獲得了較大突破，使用該技術(shù)提取的人體胎盤的成Y分可較傳統(tǒng)工藝^是高1100多倍，且其提取成份的分子量 較傳統(tǒng)方法更小、更利于人體吸收，該技術(shù)最大優(yōu)點(diǎn)是可幾乎100% 保留提取成份的生理活性。但是，利用SFE技術(shù)"活性提取"的胎 盤素還存在產(chǎn)品的分子量還不夠小，人體最終吸收融合的胎盤素核 心成分仍達(dá)不到很高的水平的問題。

發(fā)明內(nèi)容
因此，針對目前利用SFE技術(shù)提取的胎盤素的分子量仍然較大 的問題，本發(fā)明人提供了 一種利用生物酶技術(shù)提取的超濃縮胎盤素 纟且織'液凍干力交嚢制劑。
本發(fā)明3是供的超濃縮胎盤素組織液凍干月交嚢的有效成分的分 子量達(dá)到6000道爾頓，優(yōu)選達(dá)到4000道爾頓以下。
本發(fā)明還4是供超濃縮胎盤素組織液凍干膠嚢的生產(chǎn)方法，包括 以下步-驟
a)將胎盤組織原液經(jīng)過二氧化^灰超臨界流體萃耳又，得到 胎盤素萃取物；
b利用生物酶處理所述胎盤素萃取物，將分子量降低到 6000道爾頓以下；
c) 將步驟b)中得到的小分子萃取物冷凍干燥，得到凍干 粉；以及
d) 采用脂質(zhì)體制備方法將所述凍干粉制成超濃縮胎盤素 纟且織'液凍干"交嚢。
本發(fā)明提供的胎盤素多肽因子的主要成分包括胎盤多肽、胎盤 核酸，及胎盤富有的8000多種原始生命物質(zhì)。由本發(fā)明制得的胎盤多糖因子月交嚢還具有以下優(yōu)勢
1. 能更多地提取胎盤富含的8000多種活性物質(zhì)，提取率 可高達(dá)99.999% (為目前口l良產(chǎn)品的最高純度)。
2. 其提取胎盤活性成份的分子量可純化分離到最低4000 道爾頓；
3. 功效不差于胎盤素針劑活性程度和活性物質(zhì)含量接近 胎盤素注射液，其美容、保健、護(hù)膚、治療疾病等功效也接近 胎盤素注射液。實-驗證明約1并瓦超濃縮胎盤素組織液凍干月交 嚢的美容抗衰老功效相當(dāng)于4支同樣劑量的胎盤素注射液。
4. 實驗證明其提取的胎盤成份的活性程度可較傳統(tǒng)制備 方法生產(chǎn)的胎盤素產(chǎn)品提高約67.73%。
具體實施例方式
一般地，本發(fā)明提供的超濃縮胎盤素組織液凍干膠嚢的生產(chǎn)方 法，包括以下步驟
a) 將胎盤組織原液經(jīng)過二氧化碳超臨界流體萃取，得到 胎盤素萃取物；
b) 利用生物酶處理所述胎盤素萃取物，將分子量降低到 6000道爾頓以下；
c) 將步驟b)中得到的小分子萃取物冷凍干燥，得到凍干 粉；以及
d) 采用脂質(zhì)體制備方法將所述凍干粉制成超濃縮胎盤素 纟且織'液凍干力交嚢。
本發(fā)明的 一個特點(diǎn)是，將市場可得的胎盤組織原液進(jìn)行超臨界 二氧化碳萃取。該步驟是在30 40Mpa的壓力、30 4(TC的溫度條 件下進(jìn)4亍，萃取時間一力殳為8~12h。然后進(jìn)4亍兩級減壓分離經(jīng)過一級減壓分離，分別采用8-12Mpa和6Mpa的操作壓力，以及30~ 35。C和15 25。C的操作溫度。得到胎盤素萃取物。
本發(fā)明的另一個特點(diǎn)是，采用生物酶處理所述胎盤素萃取物， 以便將分子量降低至有利于人體吸收的范圍。在一種實施方式中， 利用限制性或半限制性內(nèi)切酶在30 ~ 4(TC下對胎盤素中大分子量 的核酸或多糖進(jìn)行限制性酶內(nèi)切反應(yīng)。所述限制性內(nèi)切酶為Mmel, TCCRAC(20/18) ;Eco571 ，CTGAAG(16/14) ;Eco57MI ， CTGRAG(16/14);或Bce831, CTTGAG(16/14)。
在實際生產(chǎn)中，優(yōu)選在上述步驟b)后引入超濾步驟，即，用 預(yù)定孔徑的超濾膜對所得的處理液進(jìn)4于超濾。在本發(fā)明的一個實施 例中，選用了美國millipore ^^司生產(chǎn)的截留分子量為6000道爾頓 的超濾膜，以使所得產(chǎn)品的有效成分的分子量達(dá)到6000以下；在 本發(fā)明的另一實施例中，選用了美國millipore^^司生產(chǎn)的截留分子 量為6000道爾頓的超濾膜，以使所得產(chǎn)品的有效成分的分子量達(dá) 到6000以下。這種有效成分分子量的控制對產(chǎn)品的性能是大有益 處的，因為小分子的胎盤素更有利于人體的吸收。在這種情況下， 要相應(yīng)地重復(fù)INT步驟和超濾步驟，以提高活性成分的收率。在本 發(fā)明中，可以將上述兩個步驟重復(fù)3到4次，以幾乎百分百地達(dá)到 6000道爾頓以下的活性成分；若將上述兩步驟重復(fù)7到9次，則能 百分百地得到4000道爾頓以下的活性成分。
在本發(fā)明中，采用冷凍千燥法對所得的萃取物進(jìn)行干燥是有益 的，因為它可以完好地保持這些生理活性物質(zhì)的活性，尤其是保持 熱壽文性物質(zhì)的活性。該凍干法在食品和制藥領(lǐng)域是熟知的，即在4氐 溫(通常是-60— - l(TC )和高真空下(例i口6.67-40Pa)將物泮牛 或者溶液中水份直接升華的千燥方法。在操作中，首先將干燥的藥 液裝入小瓶或平盤里，然后置于干燥箱中，降溫至例如-50~-40 。C進(jìn)行預(yù)凍，使藥液或者物料凍結(jié)，接著開啟真空泵，使干燥箱內(nèi)壓降至6.67~40Pa。與此同時，適當(dāng)升高干燥箱內(nèi)的溫度，使水加 快升華。需要注意的是，真空度的選擇要取決于干燥箱內(nèi)的溫度。 例如，-3(TC時，水的蒸汽壓為38.12Pa，應(yīng)將真空度控制在該蒸 汽壓的1/4 ~ 1/2之間，即9.33 ~ 18.63Pa之間。
本發(fā)明的進(jìn)一步的優(yōu)勢還在于使用脂質(zhì)體來制備超濃縮胎盤 素組織液凍干膠嚢，而不是采用其他載體。脂質(zhì)體因其具有無毒、 穩(wěn)定活性、緩釋、長效以及靶向性的優(yōu)點(diǎn)非常適于作為本發(fā)明多糖 月交嚢的載體。給脂質(zhì)體形式非常適合用于口服制劑。
制備脂質(zhì)體的方法有多種，包括薄膜法、復(fù)乳法、離心法、鈣 融合法、注入法、pH梯度法和前提脂質(zhì)體法。這些方法皆適用于 本發(fā)明的超濃縮胎盤素組織'液凍干力交嚢的生產(chǎn)。這些方法的詳細(xì)內(nèi) 容參見微膠嚢技術(shù)一原理與應(yīng)用,許時嬰等人，化學(xué)工業(yè)出版社， 2006年，pp91~124，在此將其4皮露的內(nèi)容引入本文作為參考。
本發(fā)明優(yōu)選前體脂質(zhì)體法用于超濃縮胎盤素組織液凍干月交嚢 的生產(chǎn)，前體脂質(zhì)體法具有成本低廉、條件溫和、操作簡便還同時 適用于熱敏性物質(zhì)。前提脂質(zhì)體法包括噴霧干燥法、冷凍干燥法、 薄膜沉積法和真空干燥法。這幾種方法皆適用于本發(fā)明，但是優(yōu)選 薄膜沉積法和冷凍干燥法。因為其工藝簡單，操作方便，適于工業(yè) 化生產(chǎn)，制得的前體脂質(zhì)體穩(wěn)定性好。其具體工藝包括
制備脂質(zhì)溶液稱取適量的磷脂、膽固醇及分散劑，用一 定量的三氯曱烷或二氯曱烷溶解成脂質(zhì)溶液備用；
芯材與載體的混合取適量的載體(如甘露醇、葡萄糖、 山梨醇、海藻糖或蔗糖)和芯材，將載體和芯材充分混合均勻， 方丈入力走轉(zhuǎn)的#唐衣鍋中；
包封芯材及載體制備前體脂質(zhì)體，用噴霧器將脂質(zhì)溶液少 量多次噴霧到滾動著的載體與藥物的混合物上。3(TC熱風(fēng)加熱，待有機(jī)溶劑揮發(fā)后再噴霧，直至將脂質(zhì)溶液噴完，得到前 ，提脂質(zhì)體，可以立即^f吏用。臨用前加水水合，即成脂質(zhì)體。
可用作本發(fā)明的膠嚢包衣選自由聚乙烯醇、改性殼聚糖、明膠、 海藻酸鈉、羥丙基纖維素、甲基纖維素、羥丙基曱基纖維素、羥乙 基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物、 聚乙烯醇縮乙醛-二乙氨基醋酸共聚物、二乙氨基乙基丙烯酸甲酯-曱基丙烯酸曱酯共聚物、鄰苯二甲酸醋酸纖維素，鄰苯二甲酸羥丙 基曱基纖維素、六氫鄰苯二甲酸醋酸纖維素、六氫鄰苯二曱酸羥丙 基曱基纖維素、聚丙晞酸甲酯、聚丙烯酸乙酯、聚丙烯酸丁酯、聚 甲基丙烯酸甲酯、聚曱基丙烯酸乙酯、聚丙烯酸丁酯、聚丙烯酸雍 乙酯、聚曱基丙烯酸羥乙酯、聚丙烯酸羥丙酯、聚甲基丙烯酸羥丙
酯、聚丙烯酸4-羥丁酯、聚曱基丙烯酸4-羥丁酯，及其共聚物或移" 和物構(gòu)成的組中。
在一具體實施方式
中，，本發(fā)明的膠嚢包衣是胃溶性的。 而在另一具體實施方式
中，本發(fā)明的膠嚢包衣是腸溶性的
下面用實施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，有利于對本發(fā)明及其優(yōu)點(diǎn)的 更好了解，但所述實施例僅用于說明本發(fā)明并非用于限制。
實施例1
將胎盤組織原液》文入萃取釜中，通入30 ~ 40Mpa的二氧4匕碳， 在30 ~ 4(TC條件下萃取8 ~ 12h;經(jīng)過一級減壓分離，才喿作壓力為8 ~ 12Mpa，操作溫度為30~35°C;再進(jìn)行二級減壓分離，條件為操作 壓力6Mpa以下，操作溫度為15~25°C,得到胎盤素萃取物。然后 使該胎盤素萃取物用內(nèi)切酶TCCRAC(20/18)在30。C下處理24小時，使主要成分的分子量降低到6000道爾頓以下。將得到的小分 子萃取物在-40。C、 12Pa的真空下經(jīng)過冷凍干燥，得到凍干4分。
稱80g磷脂、40g膽固醇及33g泊洛沙姆(F68),用1000ml 氯仿或者二氯曱烷溶解，制成脂質(zhì)體溶液鋇鹽。另取80g萃取物、 240g甘露醇過100目篩混合均勻，置于糖衣鍋中，30。C熱風(fēng)加熱， 糖衣鍋以30r/min旋轉(zhuǎn)，用噴霧器將所配制的脂質(zhì)溶液少量噴霧至 翻動著的物料中，熱風(fēng)揮干溶劑，然后再少量噴霧，揮干，如此反 復(fù)至全部脂質(zhì)沉積在藥物和載體的混合物上，揮干溶劑將物料置于 干燥器中過夜，過篩，即得干燥的流動性好的胎盤素脂質(zhì)體。最后 裝入明膠膠嚢。
實施例2
將胎盤組織原液方丈入萃取釜中，通入20 ~ 30Mpa的二氧化碳， 在30 ~ 40 。C條件下萃取8 ~ 12h;經(jīng)過一級減壓分離，才喿作壓力為8 ~ 12Mpa,操作溫度為30~35°C;再進(jìn)行二級減壓分離，條件為操作 壓力6Mpa以下，操/f乍溫度為15~25°C,;浮到胎盤素萃取物。然后 4吏該胎盤素萃取物用內(nèi)切酶CTGAAG(16/14在30°C下處理18小時， 4吏主要成分的分子量降低到6000道爾頓以下。用截留分子量為6000 道爾頓的超濾月莫(美國mimpore7>3 ,標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾萃取物， 使超濾液經(jīng)過冷凍干燥，得到凍干粉，將超濾截留物重復(fù)進(jìn)行內(nèi)切 酶處理，再進(jìn)行超過濾。如此重復(fù)直到幾乎全部萃取液能透過超濾 膜。重復(fù)大約4至5次。將得到的小分子萃取物在-40°C、 12 Pa 的真空下經(jīng)過冷凍干燥，得到凍干粉。
考爾80g石粦月旨、40g月旦固酉事及33g泊〉各沙、姆(F68),用1000ml 氯仿或者二氯曱烷溶解，制成脂質(zhì)體溶液鋇鹽。另取80g萃取物、 240g甘露醇過100目篩混合均勻，置于糖衣鍋中，30。C熱風(fēng)加熱， 糖衣鍋以30r/mini走轉(zhuǎn)，用噴霧器將所配制的脂質(zhì)溶液少量噴霧至翻動著的物并+中，熱風(fēng)揮干溶劑，然后再少量噴霧， 一軍干，如此反 復(fù)至全部脂質(zhì)沉積在藥物和載體的混合物上，揮干溶劑將物料置于 干燥器中過夜，過篩，即得干燥的流動性好的胎盤素脂質(zhì)體。最后 裝入明膠膠嚢。
實施例3
將胎盤組織原液放入萃取釜中，通入20 ~ 30Mpa的二氧化碳， 在30 ~ 40。C條件下萃取8 ~ 12h;經(jīng)過一級減壓分離，才乘作壓力為8 ~ 12Mpa，操作溫度為30~35°C;再進(jìn)行二級減壓分離，條件為操作 壓力6Mpa以下，操作溫度為15~25°C，得到胎盤素萃取物。然后 4吏該胎盤素萃耳又物用內(nèi)切酶CTTGAG(16/14)在30。C下處理24小 時，使主要成分的分子量降低到4000道爾頓以下。用截留分子量 為4000道爾頓的超濾月莫(美國millipore ^>司，才示準(zhǔn)超濾系纟克)超 濾萃取物，將超濾截留物重復(fù)進(jìn)行內(nèi)切酶處理，再進(jìn)行超過濾。如 此重復(fù)直到幾乎全部萃取液能透過超濾膜。重復(fù)大約7至9次。
將得到的小分子萃取物在-4CTC、 12 Pa的真空下經(jīng)過冷凍干 燥，得到凍干粉。稱80g磷脂、40g膽固醇及33g泊洛沙姆(F68), 用1000ml氯仿或者二氯曱烷溶解，制成脂質(zhì)體溶液鋇鹽。另取80g 萃取物、240g甘露醇過100目篩混合均勻，置于糖衣鍋中，3(TC熱 風(fēng)加熱，糖衣鍋以30r/min旋轉(zhuǎn)，用噴霧器將所配制的脂質(zhì)溶液少 量噴霧至翻動著的物料中，熱風(fēng)揮千溶劑，然后再少量噴霧，揮干， 如此反復(fù)至全部脂質(zhì)沉積在藥物和載體的混合物上，揮干溶劑將物 料置于干燥器中過夜，過篩，即得干燥的流動性好的胎盤素脂質(zhì)體。 最后裝入明膠膠嚢。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用二氧化碳超臨界萃取與內(nèi)切酶多糖制 備技術(shù)的結(jié)合。二氧化碳超臨界萃取技術(shù)可以完全所有胎盤素提取 物的生物活性，而內(nèi)切酶技術(shù)可以有效控制活性成分的分子量，使得由該方法制得的口服膠嚢中的活性成分能夠完全被人體吸收，其 保健效果不差于針劑產(chǎn)品，而且避免了針劑產(chǎn)品的不便和使用者扎 針的痛苦。因此，與現(xiàn)有才支術(shù)相比，本發(fā)明4是供的方法和產(chǎn)品優(yōu)于
現(xiàn)有的胎盤素保^:品。
權(quán)利要求
1.一種超濃縮胎盤素組織液凍干膠囊的生產(chǎn)方法，包括以下步驟a)將胎盤組織原液經(jīng)過二氧化碳超臨界流體萃取，得到胎盤素萃取物；b)利用生物酶處理所述胎盤素萃取物，將分子量降低到6000道爾頓以下；c)將步驟b)中得到的小分子萃取物冷凍干燥，得到凍干粉；以及d)采用脂質(zhì)體制備方法將所述凍干粉制成超濃縮胎盤素組織液凍干膠囊。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述萃取步驟是在20 40MPa,30 — 4(TC的條^f牛下進(jìn)^亍。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，將所述萃取步驟重復(fù)3 次至10次，伊C選5次至10次。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟b中，利用限制性 或半限制性內(nèi)切酶在30 ~ 40°C下對胎盤素中大分子量的核酸 或多糖進(jìn)行限制性酶內(nèi)切反應(yīng)。
5. 才艮據(jù)沖又利要求4所述的方法，其中，所述限制性內(nèi)切酶為 Mmel, TCCRAC(20/18); Eco571， CTGAAG(16/14); Eco57MI， CTGRAG(16/14);或Bce831， CTTGAG(16/14)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟b)之后進(jìn)一步包 括一個超濾步驟，并且通過選擇超濾膜的孔徑來控制截留分子量。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，將所述脂質(zhì)體制備方法選 自由薄膜法、復(fù)乳法、離心法、4丐融合法、注入法、pH梯度 法和前纟是脂質(zhì)體法構(gòu)成的組。
8. —種由4又利要求1至7任一項所述方法制得的超濃縮胎盤素組 織液凍干力交嚢。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的超濃縮胎盤素組織液凍干膠嚢，其中胎 盤素多糖的分子量在6000道爾頓以下。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的超濃縮胎盤素組織液凍干膠嚢，其中胎 盤素多^f唐的分子量在4000道爾頓以下。
全文摘要
一種超濃縮胎盤素組織液凍干膠囊的生產(chǎn)方法，包括a)將胎盤組織原液經(jīng)過二氧化碳超臨界流體萃取，得到胎盤素萃取物；b)利用生物酶處理所述胎盤素萃取物，將分子量降低到6000道爾頓以下；c)將步驟b)中得到的小分子萃取物冷凍干燥，得到凍干粉；以及d)采用脂質(zhì)體制備方法將所述凍干粉制成超濃縮胎盤素組織液凍干膠囊。本發(fā)明還提供由所述方法制成的膠囊，本發(fā)明提供的膠囊和方法消除了現(xiàn)有針劑產(chǎn)品的使用和攜帶不便的問題。
文檔編號A61P37/04GK101306018SQ20071010791
公開日2008年11月19日 申請日期2007年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月15日
發(fā)明者陳包容 申請人:陳包容