專利名稱：小葉黃楊總生物堿在制備防治結(jié)核桿菌感染性疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制藥組成，具體地說是小葉黃楊總生物堿在防治結(jié)核桿菌 感染性疾病上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前結(jié)核病又死灰復(fù)燃，呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。據(jù)WH02003年估計(jì)，全球現(xiàn)有20億 人患有結(jié)核病。隨著全球結(jié)核病疫情的回升，近10多年來一些發(fā)達(dá)國家和發(fā)展 中國家結(jié)核病耐藥性病例急劇增多。我國近5億人感染結(jié)核分枝桿菌，其中耐藥 結(jié)核病人約5， OOO萬人。開發(fā)低毒、高效的抗耐藥結(jié)核新藥是結(jié)核病防治的重 要任務(wù)。
小葉黃楊系黃楊科屬(BuxusL)植物，產(chǎn)于秦嶺以南各省區(qū)。黃楊屬(Buxus) 植物在我國產(chǎn)17種及幾個(gè)亞種和變種，富含生物堿，被稱為黃楊生物堿(Buxus Alkaloids)，國外學(xué)者一般將這類化合物的綜述放在甾體生物堿(steroidal alkaloids)部分。據(jù)中藥大辭典記載中藥黃楊性平，味苦，無毒。功用主治 祛風(fēng)濕.理氣，止痛.治風(fēng)濕疼痛，胸腹脹氣.牙痛.疼痛.跌打損傷。目前， 已從黃楊屬植物開發(fā)出了黃楊寧(環(huán)維黃楊星D)和冠安片，主要用于心血管疾 病。但到目前為止，在國內(nèi)外尚未見到用小葉黃楊總生物堿防治結(jié)核桿菌感染 性疾病的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開小葉黃楊總生物堿在防治結(jié)核桿菌感染性疾病上的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案是 一種小葉黃楊總生物堿的新用途，它是將從小葉黃
楊中分離提取出的小葉黃楊總生物堿，制成用于防治結(jié)核桿菌感染性疾病的藥 物。
本發(fā)明所述的小葉黃楊總生物堿通過下述工藝流程制備
小葉黃楊(根、莖、葉)用1%冰醋酸、乙醇提取3次一浸膏經(jīng)水溶后用活 性碳脫色，氨水調(diào)整PH二10 —異戊醇(或氯仿)萃取一產(chǎn)物用無水硫酸鈉干燥后 減壓回收一回收產(chǎn)物一用丙酮重結(jié)晶一總生物堿
本發(fā)明的化學(xué)結(jié)構(gòu)屬孕甾烷的衍生物，分子式C26H46N 0。
將小葉黃楊總生物堿體外應(yīng)用到結(jié)核桿菌上，試驗(yàn)結(jié)果證明
小葉黃楊總生物堿對(duì)結(jié)核分枝桿菌有明顯的抑制作用，在改良羅氏培養(yǎng)基
中，其MIC為2.5mg/ml。可以用小葉黃楊總生物堿開發(fā)成防治人類結(jié)核病的新 藥。其劑型可以制成注射劑、片劑、膠囊、顆?；蚩诜?。
小葉黃楊性平、無毒、富含生物堿，具有行氣活血、祛濕通絡(luò)之功效，原 來易得，高效低毒，副作用小，具有開發(fā)成抗結(jié)核病新藥的優(yōu)越性。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述 小葉黃楊總生物堿對(duì)結(jié)核分枝桿菌的體外抑菌作用的試驗(yàn) 結(jié)核分枝桿菌試驗(yàn)菌株分離來自桂林市結(jié)核病院住院病人的標(biāo)本；試驗(yàn)藥
物小葉黃楊總生物堿。
一、試驗(yàn)方法
1. 小葉黃楊總生物堿溶解取樣品0.5g用適量99X二甲基亞砜溶解，再
加蒸餾水至2ml，對(duì)倍稀釋三個(gè)濃度備用。
2. 試驗(yàn)菌及其在培養(yǎng)基中的菌量將在改良羅氏培養(yǎng)基斜面上生長(zhǎng)良好的
培養(yǎng)物，用瑪瑙乳缽磨成菌懸液，在改良羅氏培養(yǎng)基斜面上接種10—3mg/ml的菌 懸液O. lml。
3. 含藥培養(yǎng)基的制備按《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》提供的配方制備改良羅氏培
養(yǎng)基，各培養(yǎng)管在滅菌前加入不同濃度小葉黃楊總生物堿各0.2ml，改良羅氏培 養(yǎng)基三管，使其終濃度為IO. Omg/ml、 5. Omg/ml、 2. 5mg/ml、 1.25mg/ml。 同時(shí)，留出改良羅氏培養(yǎng)基用作空白對(duì)照各三管。然后，將各培養(yǎng)基平放在血 清凝固器內(nèi)90。C滅菌90 min， 一天一次，連續(xù)三天，制成斜面。冷卻后取出置 37'C恒溫箱內(nèi)孵育24h，無菌生長(zhǎng)即成。
4. 菌懸液的制備將2 3周菌齡的結(jié)核分枝桿菌(方法2試驗(yàn)菌)用接種 環(huán)小心取出，置于含0.5%吐溫_80溶液的無菌試管內(nèi)，用無菌玻棒小心研磨成 乳酪狀，用無菌生理鹽水稀釋，并與麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷?，配成濕重為l.O g/L的菌 懸液備用。
5. 接種方法將制備好的1.0g/L菌懸液經(jīng)兩次10倍稀釋后，以滅菌滴管 準(zhǔn)確吸取菌液O. lml分別接種于每支培養(yǎng)管，各管中的接種量為O. Olmg，接種完 畢后，置于37'C恒溫孵箱內(nèi)培養(yǎng)，4周觀察結(jié)果。
6. 判定標(biāo)準(zhǔn)以對(duì)照管生長(zhǎng)為有效結(jié)果，即對(duì)照管生長(zhǎng)，如含藥培養(yǎng)基上 生長(zhǎng)菌落少于20個(gè)，視為不生長(zhǎng)。
二、試驗(yàn)結(jié)果，如表
小葉黃楊總生物堿體外抗結(jié)核分枝桿菌作用結(jié)果 藥物 終濃度(n=3)
_10. 0mg/ml 5. 0mg/ml 2. 5 mg/ml 1. 25 mg/ml
小葉黃楊總生 _ _ 一 +
物堿
二甲基亞砜 +
+蒸餾水_
注(_)表示無菌落生長(zhǎng)，(+ )表示有菌落生長(zhǎng)
三、結(jié)論
由表可見，小葉黃楊總生物堿對(duì)結(jié)核分枝桿菌的生長(zhǎng)繁殖有一定的抑制作
用，在改良羅氏培養(yǎng)基中，其MIC為2.5 mg/ml。
權(quán)利要求
1.小葉黃楊總生物堿在制備防治結(jié)核桿菌感染性疾病藥物中的應(yīng)用，其特征是將小葉黃楊總生物堿應(yīng)用到制備防治結(jié)核桿菌感染性疾病藥物中。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉黃楊總生物堿在制備防治結(jié)核桿菌感染性疾 病藥物中的應(yīng)用，其特征是所述的小葉黃楊總生物堿可制成片劑、顆粒劑、 膠囊劑、口服液或注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了小葉黃楊總生物堿在制備防治結(jié)核桿菌感染性疾病藥物中的應(yīng)用，新藥可以開發(fā)做成針劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等劑型。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于又找到了一種高效低毒的防治結(jié)核病的新藥，而且是一種抗耐藥性的新藥，對(duì)保護(hù)人類健康有積極意義；本藥高效低毒，副作用小，藥源廣，開發(fā)成本低。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101199561SQ20071004955
公開日2008年6月18日 申請(qǐng)日期2007年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月12日
發(fā)明者慶 徐, 徐雅娟, 李利亞, 梁榮感 申請(qǐng)人:桂林醫(yī)學(xué)院