專利名稱：：黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物,含該發(fā)酵產(chǎn)物的組合物及其制法的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法，屬于生物發(fā)酵領域。技術背景黃背木耳^"Wc"/flWfl/Wy加'c/rfl(Mont)Sacl.是熱帶及亞熱帶地區(qū)主要食用菌之一，屬于真菌門、擔子菌綱、銀耳目、木耳科、木耳屬，外形呈菊花狀。黃背木耳口感脆嫩，營養(yǎng)物質(zhì)豐富，具有益智健腦、強壯、補血治血、滋陰潤燥、養(yǎng)胃通便、清肺益氣、鎮(zhèn)靜止痛等功效。黃背木耳多糖對機體免疫功能有調(diào)節(jié)作用，能有效對抗機體衰老，防癌抗癌。其中的植物膠質(zhì)有較強的吸附能力，可將殘留在人體消化系統(tǒng)內(nèi)的雜質(zhì)、廢物排出體外。而豐富的纖維素能促進胃腸蠕動，促使腸道脂肪等排泄，減少食物中脂肪的吸收，從而起到防止肥胖和便秘的作用。經(jīng)國家糧食貯備局成都糧食儲藏科學研究所質(zhì)量檢測中心檢測表明，黃背木耳子實體含粗蛋白6%、粗纖維素22.5%、不溶性膳食纖維46.9%，氨基酸總量達4.57%,檢出人體必需的7種氨基酸。還含有豐富的微量元素，其中鐵4.57mg/kg、鎂93,52m^kg、鋅0.78mg/kg?，F(xiàn)有黃背木耳子實體總多糖含量為75.85175.48mg/g，氨基酸總量為2.57~6.75%。目前尚無采用乳酸菌與黃背木耳混合發(fā)酵的產(chǎn)物及制備方法的相關報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所解決的第一個技術問題是提供一種黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法。該方法是采用乳酸菌與黃背木耳混合發(fā)酵的制備方法，它包括如下步驟a、活化乳酸菌菌株，擴大培養(yǎng)，得乳酸菌菌種；b、取黃背木耳v4"r/c"/aWa/Vv加'c/rfl(Mont)Sac1.，粉碎，過篩；c、取步驟b粉碎所得黃背木耳粉末，按黃背木耳粉末lg、水2050ml計制備底物;d、取步驟c所得底物，在溫度為40100。C時加熱16小時，冷卻反應物至50'C;e、取步驟a所得擴大培養(yǎng)的菌種，加入步驟d所得冷卻后的反應物中，菌種接種量為反應物重量的515%，發(fā)酵2496小時，即得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物。該制備方法還包括如下步驟，滅活取步驟e所得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，按體積比1:1加入水，滅活溫度范圍為60100°C，滅活時間至少20min;濃縮濃縮至原發(fā)酵液體積的1/51/4;醇沉加入乙醇使?jié)饪s液的乙醇濃度為6585Xv/v;干燥靜置，收集沉淀，干燥沉淀，即得固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物。本發(fā)明所解決的第二個技術問題是提供一種黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，該發(fā)酵產(chǎn)物較黃背木耳子實體中的總多糖含量和氨基酸總量顯著提高。其中，液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物干燥后其總多糖含量為89.23~189.84mg/g，氨基酸總量為4.99~8.79%;固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物總多糖含量為89.23~189.84mg/g，氨基酸總量為4.99~8.79%。本發(fā)明所解決的第三個技術問題是提供一種組合物，它是含有本發(fā)明黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物為活性成分，加入藥學、食品或保健食品可接受的輔料、輔助性成分或添加劑制備而成的制劑。采用本發(fā)明制備方法制備黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，方法簡單，條件易于控制，可控性強，耗時少，成本低；制備而得的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物在總多糖含量和氨基酸總量方面顯著增加，總多糖含量增加約11%，氨基酸總量增加約50%。通過利用乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的某一個或一組酶對黃背木耳進行催化轉(zhuǎn)化反應，不僅大大提高了原材料中總多糖物質(zhì)的含量，使氨基酸總量增加，同時較黃背木耳子實體很大程度提高了營養(yǎng)價值和保健功效，所得產(chǎn)品完全安全、無毒。為公眾提供了黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物及其制備方法。圖l黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物制備流程圖。具體實施方式本發(fā)明提供了黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法，是采用乳酸菌與黃背木耳混合發(fā)酵的方法，它包括如下步驟-a、活化乳酸菌菌株，擴大培養(yǎng)，得乳酸菌菌種；b、取黃背木耳y4"/7'CM/flr/fl戶o(v加'c/ifl(Moiit)Sac1.，粉碎，過篩；c、取步驟b粉碎所得黃背木耳粉末，按黃背木耳粉末lg、水2050ml計制備底物;d、取步驟c所得底物，在溫度為40100'C時加熱16小時，冷卻反應物至50'C;e、取步驟a所得擴大培養(yǎng)的菌種，加入步驟d所得冷卻后的反應物中，菌種接種量為反應物重量的515%，發(fā)酵2496小時，即得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物。通過工藝條件篩選試驗，進一步優(yōu)選以下條件參數(shù)用于制備黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物步驟a所述的乳酸菌為嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、保加利亞乳桿菌、德氏乳桿菌、短乳桿菌中的至少一種；優(yōu)選其中的嗜酸乳桿菌。步驟a所述的種子培養(yǎng)基活化時間為24小時。步驟b所述的黃背木耳粉碎粒度為可過40120目篩，優(yōu)選步驟b所述的黃背木耳粉碎粒度為可過100目篩。步驟c所述的按黃背木耳粉末lg、水40ml計制備底物。步驟d所述的底物在80'C時加熱2小時。步驟e所述的菌種接種量為反應物重量的10%,發(fā)酵72小時。本發(fā)明制備方法還包括如下步驟，滅活取步驟e所得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，按體積比1:1加入水，滅活溫度范圍為60100°C,滅活時間至少20min;濃縮濃縮至原發(fā)酵液體積的1/51/4;醇沉加入乙醇使?jié)饪s液的乙醇濃度為6585%v/v，優(yōu)選加入乙醇使?jié)饪s液乙醇濃度為75%v/v;干燥靜置，收集沉淀，干燥沉淀，即得固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物。本發(fā)明制備方法所得的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物干燥后其總多糖含量為89.23~189.84mg/g，氨基酸總量為4.99~8.79%;固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物總多糖含量為89.23~189.84mg/g，氨基酸總量為4.99~8.79%。本發(fā)明組合物，它是含有本發(fā)明黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物為活性成分，加入藥學、食品或保健食品可接受的輔料、輔助性成分或添加劑制備而成的制劑?？刹捎每诜苿ㄆ瑒?、膠囊劑、散劑、丸劑或口服液等常規(guī)劑型。以下提供黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法中工藝參數(shù)的篩選試驗說明本發(fā)明制備方法的選擇依據(jù)。試驗材料原料、菌種、儀器設備及試劑等材料1、黃背木耳由德陽市食用菌專家大院提供。品種號781。2、菌種(1)嗜熱鏈球菌5^卬tococc"s狄er附印W/"s購于中國普通微生物菌種保藏管理中心菌種編號1.2471;(2)嗜酸乳桿菌"Cto6flc///"Sa"Vto/J緒"S購于中國普通微生物菌種保藏管理中心菌種編號1.1854;(3)植物乳桿菌"Cto6flC///""/fl"tonM購于中國普通微生物菌種保藏管理中心菌種編號1.3;(4)保加利亞乳桿菌h加6鎖7/附6"/gflr/c"s購于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心菌種編號6032;(5)德氏乳桿菌￡acto6fldW"srfe/6f"ecft購于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心菌種編號6032;(6)短乳桿菌i^Cto6fl7/"S6wv/s購于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心菌種編號6004。嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌菌種MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨10，牛肉浸膏10，酵母膏10，葡萄糖5,檸檬酸二胺2，吐溫801，磷酸氫二鉀2,NaAC3H205，MgS047H200.2，MnS04H200.05，蒸餾水lOOOml，瓊脂10-15，pH6.9士0.1，121'C滅菌15min。保加利亞乳桿菌、德氏乳桿菌菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)基(g/L):牛肉膏5，酵母膏5，蛋白胨10，葡萄糖10，乳糖5，氯化鈉5，瓊脂20，pH6.8。短乳桿菌菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)基(g/L):麥芽汁，酵母膏5，無菌碳酸鈣6，瓊脂1520。3、主要儀器隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱型號PYX-DHS-50X65-S，上海躍進醫(yī)療器械廠；分光光度計型號T6新世紀，北京普析通用儀器有限責任公司；直立型落地空氣浴恒溫振蕩器型號HZQ-X100，錢江儀器設備廠；液體發(fā)酵系統(tǒng)泰興(鼎星)生物有限公司。4、試劑苯酚、硫酸、蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、葡萄糖、檸檬酸、MnS04，H20、吐溫80、磷酸氫二鉀、瓊脂、牛血清白蛋白(BSA)、磷酸、無水乙醇等，均為市售產(chǎn)叩o菌落數(shù)的測定1、編號取無菌平皿9套，分別用記號筆標明10—4、1(TS、10—6、l(T7、l(T8、10-9(稀釋度)各3套。另取8支盛有4.5ml無菌水的試管，依次標上10"、10—2、l(T3、l(T4、10—5、106、107、108、109。2、倒平板滅菌后的固體培養(yǎng)基冷卻至55~60°〇時，倒入已滅菌的平板中，約15ml/平皿。放入37'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，無雜菌者可使用。3、稀釋無菌條件下，用移液器吸取0.5ml已充分混勾的發(fā)酵液(待測樣品)，放至10"的試管中，此即為10倍稀釋。將1(^試管置振蕩器振蕩，使菌液充分混勻。從10—1菌液中精確吸取0.5111至10-2試管中，此即為100倍稀釋，……其余依次類推。4、涂布分別吸取經(jīng)無菌條件下稀釋后的發(fā)酵液各0.21111對號放入已寫好稀釋度的平皿中，用無菌玻璃棒將其在培養(yǎng)基表面輕輕涂布均勻，室溫下靜置培養(yǎng)510min后，將平板倒置于培養(yǎng)箱中，37'C條件下，培養(yǎng)24h。5、計數(shù)培養(yǎng)24h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進行計算。每毫升中菌落形成單位(cfu)-同一稀釋度三次重復的平均菌落數(shù)x稀釋倍數(shù)xs發(fā)酵液中總多糖含量測定本實驗采用苯酚4酸分光光度法在室溫下測定不同發(fā)酵時間后，黃背木耳中發(fā)酵液中總多糖含量，以葡萄糖作為對照，測定波長為490nm。1、葡萄糖對照品貯備液的配制精密稱取60'C干燥至恒重的分析純葡萄糖標準品20mg，溶解并定容500ml則其濃度為40ug/ml。2、苯酚液的配制稱取化學純苯酚100g,置于燒瓶中，加入0.1g鋁片、0.05g碳酸氫鈉，加熱蒸餾，收集180182'C餾分。稱取重蒸苯酚6g，加入蒸餾水定容至100ml，置于棕色瓶中備用。3、實驗條件的選擇檢測波長的確定_一取葡萄糖對照品溶液和樣品溶液，分別經(jīng)苯酚一硫酸試劑顯色后，作全波長掃描測定，結(jié)果葡萄糖和樣品透析液經(jīng)顯色后，均在490nm波長處有最大吸收峰。因此選定490nm為檢測波長。4、標準曲線精密吸取葡萄糖標準貯備液0.2、0.3、0.4、0,5、0.6ml定容至lml，各加入苯酚液1.0ml，迅速滴加濃硫酸5.0ml，另以l.Oml水同上操作，作為空白液。20min后，于波長4卯nm處測其吸光度，分別為0.047、0.071、0.109、0.139、0.184，得回歸方程為Y=142.32x+0.2137，R2=0.9939。式中Y為葡萄糖濃度，x為吸光度。氨基酸含量測定按GB/T5009.124-2003執(zhí)行。菌種的活化及液體種子的培養(yǎng)取一4'C冰箱保存的乳酸菌菌種斜面，經(jīng)種子培養(yǎng)基活化24h后，每一斜面菌種接五瓶300ml種子培養(yǎng)基(500mL錐形瓶)，37'C條件下，靜置培養(yǎng)24h。對培養(yǎng)基中的乳酸菌進行平板記數(shù)，此時培養(yǎng)液中乳酸菌菌落數(shù)達10S個/ml。一、菌種篩選的試驗研究1、實驗方法1.1發(fā)酵用培養(yǎng)基的制備準確稱取黃背木耳粗粉(50~60目)60g，加水2400ml，充分混勻。用量筒量取100ml置250ml錐形瓶中進行分裝，U5'C條件下，滅菌30min。每種乳酸菌在菌落測定時設三次重復。1.2菌種的活化及液體種子的培養(yǎng)同前。1.3發(fā)酵培養(yǎng)將上述菌種液分別以10%(約3.0xl()8個/ml)接種量接入滅菌后的黃背木耳發(fā)酵培養(yǎng)基中，37'C條件下，連續(xù)培養(yǎng)96h。1.4菌落數(shù)的測定同前。1.5發(fā)酵液中總多糖含量測定同前。2、結(jié)果2.1不同發(fā)酵時間不同乳酸菌的菌落數(shù)變化表l不同發(fā)酵時間不同乳酸菌的菌落數(shù)(cfu)變化<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表1可以看出，嗜酸乳桿菌在發(fā)酵72h時，菌落數(shù)最高，每毫升中菌落數(shù)為3.0x103.2乳酸菌液體發(fā)酵黃背木耳的總多糖的變化表2不同乳酸菌發(fā)酵而得的本發(fā)明黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的總多糖變化^總多糖含量(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表2可以看出，嗜酸乳桿菌發(fā)酵而得的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，其總多糖含量增加最多，表明其對黃背木耳具有較強的生物轉(zhuǎn)化作用。二、底物濃度、菌種接入量以及發(fā)酵時間的試驗研究1、實驗方法1.1發(fā)酵用培養(yǎng)基的制備準確稱取黃背木耳粗粉(50~60目)200g、140g、100g、80g，按底物濃度(g/ml)為1:20、1:30、1:40、1:50分別加水定容，并充分混勻。用量筒量取100ml置250ml錐形瓶中進行分裝，115'C條件下，滅菌30min。1.2菌種的活化及液體種子的培養(yǎng)同前。1.3發(fā)酵培養(yǎng)將上述種子液分別以5%、10%、15%(約3xl()S個/ml)接種量接入滅菌后的黃背木耳發(fā)酵培養(yǎng)基中，37'C條件下，連續(xù)培養(yǎng)96h。1.4菌落數(shù)的測定同前。1.5發(fā)酵液中總多糖含量測定同前。2、結(jié)果2.1嗜酸乳桿菌在不同底物濃度、細菌接種量及發(fā)酵時間條件下的生長與發(fā)酵特性的研究表3嗜酸乳桿菌在不同底物濃度、接種量及發(fā)酵時間下的菌落數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>續(xù)表3<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由表3可以看出，當黃背木耳底物濃度(g/ml)為1:40，嗜酸乳桿菌的接種量為15%時，嗜酸乳桿菌液體發(fā)酵黃背木耳72h后，嗜酸乳桿菌的菌落數(shù)最高。3.2嗜酸乳桿菌液體發(fā)酵黃背木耳總多糖含量的變化由表4可以看出，底物濃度(g/ml)為l:40時，接種量為10%和15%時，總多糖含量基本相當，分別為3.397mg/ml和3.402mg/ml。表4不同底物濃度、接種量及發(fā)酵時間條件下發(fā)酵液中總多糖含量<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>綜上，從節(jié)約生產(chǎn)成本，利于工業(yè)化生產(chǎn)的角度出發(fā)，確定整個發(fā)酵過程中的最佳底物濃度(g/ml)為1:40，接種量為10%，發(fā)酵時間為72h。三、黃背木耳粉碎細度的試驗研究1、實驗方法1.1黃背木耳微粉的制備新鮮黃背木耳經(jīng)兩次清洗后，棄去其中雜質(zhì)，70'C條件下進行烘干后，將黃背木耳粉碎，過20目、40目、60目、80目、100目、120目篩，備用o1.2發(fā)酵用培養(yǎng)基的制備根據(jù)實驗對黃背木耳底物濃度的篩選，確定最佳底物濃度(g/ml)為1:40。準確稱取20目、40目、60目、80目、100目、120目黃背木耳粉碎各15g，分別加水定容至600ml，充分混勻，用量筒量取100ml置250ml錐形瓶中進行分裝，115'C條件下，滅菌30min。每個目數(shù)設計三次重復。1.3菌種的活化及液體種子的培養(yǎng)同前。1.4發(fā)酵培養(yǎng)將上述種子液分別以5%、10%、15%(約3Xl()S個/ml)接種量接入滅菌后的黃背木耳發(fā)酵培養(yǎng)基中，37'C條件下，連續(xù)培養(yǎng)96h。1.5菌落數(shù)的測定同前。1.6發(fā)酵液中總多糖含量測定同前。2、結(jié)果2.1黃背木耳細粉粒度對嗜酸乳桿菌菌落數(shù)的影響表5黃背木耳細粉粒度對嗜酸乳桿菌菌落數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表5可見，當粉碎度達到120目時，菌落總數(shù)最多為3.9Xl()U個/ml。而細粉粒度為100目時，菌落總數(shù)略低于120目，為3，8Xl()H個/ml。2.2黃背木耳細粉粒度對發(fā)酵前后發(fā)酵液中總多糖含量的影響表6黃背木耳細粉粒度對發(fā)酵前后發(fā)酵液中總多糖含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表6可以看出，當細粉粒度達到120目時，發(fā)酵液中總多糖含量最高為3.428mg/ml，其增長率為9.25%;細粉粒度為100目時，發(fā)酵液中總多糖含量略低于120目時，為3.427mg/ml，其增長率為9.23%。綜上，結(jié)合工業(yè)生產(chǎn)成本考慮，確定黃背木耳最佳細粉粒度為IOO目，更利于其后續(xù)產(chǎn)品的開發(fā)。四、黃背木耳蒸煮時間及溫度的試驗研究1、實驗方法1.1黃背木耳微細粉的制備黃背木耳經(jīng)兩次清洗后，棄去其中雜質(zhì)，在70'C條件下進行烘干，粉碎。根據(jù)對黃背木耳細粉粒度的試驗篩選結(jié)果，黃背木耳微細粉過篩100目J備用o1.2發(fā)酵用培養(yǎng)基的制備準確稱取黃背木耳微細粉180g，加水定容至7200ml，充分混勻，用量筒量取100ml置250ml錐形瓶中進行分裝，在115'C條件下，滅菌30min。每一組合(蒸煮溫度和蒸煮時間)設計三次重復。1.3菌種的活化及液體種子的培養(yǎng)同前。1.4發(fā)酵培養(yǎng)將上述種子液以15%(約3.0xl()S個/ml)接種量接入滅菌后的黃背木耳發(fā)酵培養(yǎng)基中，在37'C條件下，連續(xù)培養(yǎng)72h，檢測發(fā)酵液中的菌落數(shù)和總多糖含且里o1.5菌落數(shù)的測定同前。1.6發(fā)酵液中總多糖含量測定同前。2、結(jié)果2.1蒸煮溫度及時間對嗜酸乳桿菌菌落數(shù)的影響由表7可以看出，綜合蒸煮溫度與時間兩個因素看，黃背木耳微細粉在8(TC條件下蒸煮2h時，最利于嗜酸乳桿菌增殖，其菌落數(shù)達到最高為3.5X10"個/ml。表7蒸煮溫度及時間對嗜酸乳桿菌菌落數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>3.2蒸煮溫度及時間對發(fā)酵液中總多糖含量的影響表8蒸煮溫度及時間對發(fā)酵液中總多糖含量的影響試驗序號蒸煮溫度rc)蒸煮時間(h)總多糖含量(mg/ml)1003.4624013.7434023.7544033.8354043.7564053.7674063.7686013.7796023.79106033.81116043.80126053.81136063.81148013.85158023.87168033.87178043.86188053.85198063.872010013.832110023.862210033.862310043.872410053.862510063.87由表8可以看出，在蒸煮溫度達到8(TC，蒸煮2h時，發(fā)酵液中總多糖含量最高為3.461mg/ml。五、液體發(fā)酵生產(chǎn)工藝1、實驗方法1.1黃背木耳微細粉的制備黃背木耳經(jīng)兩次清洗后，棄去其中雜質(zhì)，在7(TC條件下進行烘干，粉碎，過篩100目，備用。1.2發(fā)酵用培養(yǎng)基的制備準確稱取黃背木耳微細粉300g，加水定容至12000ml，充分混勻。1.3菌種的活化及液體種子的培養(yǎng)同前。1.4發(fā)酵培養(yǎng)根據(jù)試驗設計安排，共在液體發(fā)酵系統(tǒng)中發(fā)酵培養(yǎng)4次。發(fā)酵罐(總?cè)萘繛?0L)的裝液量為20L，待篩選的接種量為10%、15%，待篩選的轉(zhuǎn)速為200rpm、250rpm。根據(jù)實驗設計要求，共利用液體發(fā)酵罐發(fā)酵四次，發(fā)酵溫度為37°C，pH值保持在7.0—7.5之間，連續(xù)發(fā)酵96h，并分別于發(fā)酵第24h、48h、72h、96h收樣檢測菌落數(shù)和總多糖含量。1.5菌落數(shù)的測定同前。1.6發(fā)酵液中總多糖含量測定同前。2結(jié)果2.1液體發(fā)酵系統(tǒng)中嗜酸乳桿菌生長特性的研究表9接種量、轉(zhuǎn)速和發(fā)酵時間對菌落數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由表9可以看出，當轉(zhuǎn)速為250rpm，發(fā)酵時間為72h，接種量為15%時，菌落總數(shù)達到最大為2.7X10"個/ml。當轉(zhuǎn)速為250rpm，發(fā)酵時間為72h，接種量為10%時，菌落總數(shù)達到最大為2.6X1011個/ml。2.2接種量、轉(zhuǎn)速和發(fā)酵時間對發(fā)酵液中總多糖含量的影響表io接種量、轉(zhuǎn)速和發(fā)酵時間對發(fā)酵液中總多糖含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>由表10看出，當接種量為15%，轉(zhuǎn)速為250rpm，發(fā)酵72h,發(fā)酵液中總多糖含量較發(fā)酵前增加11.37%，增加率達到最高。但是，當接種量為10%，轉(zhuǎn)速為250rpm，發(fā)酵72h，總多糖含量也能增加達到11.34%，其增長率基本一致。綜上，結(jié)合工業(yè)生產(chǎn)成本考慮，確定發(fā)酵轉(zhuǎn)速為250rpm，接種量為10%。六、黃背木耳發(fā)酵液滅活工藝的試驗研究1、實驗方、法1.1發(fā)酵液的稀釋按照發(fā)酵液與加水量體積比(v/v)為1:1。1.2滅活將稀釋后的發(fā)酵液進行100'C滅活處理，滅活時間設計為10min、20min、30min、40min、50min、60min。1.3菌落數(shù)的測定同前。2結(jié)果2.1滅活時間對嗜酸乳桿菌菌落數(shù)的影響從表ll可以看出，高溫(IOO'C)條件下滅活時間為30min時即可將發(fā)酵液中的嗜酸乳桿菌全部殺死。表11滅活時間對嗜酸乳桿菌菌落數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>七、黃背木耳發(fā)酵液醇沉工藝的試驗研究1、實驗方法1.1醇沉將滅活后的發(fā)酵液濃縮為原體積的1/5，在濃縮液中加入適量的95%乙醇，使混合液的乙醇濃度分別為65%、75%、85%，常溫下沉淀0.5h、lh、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、28h，過濾，收集沉淀物，并回收乙醇。1.2干燥將沉淀平鋪成厚度為l.Ocm的托盤上，在溫度為80'C的電熱鼓風干燥箱中進行烘干，并記錄千重。1.3不同乙醇濃度醇沉后，發(fā)酵干粉中總多糖含量測定同前。2結(jié)果2.1乙醇終濃度對發(fā)酵干粉總多糖含量的影響表12乙醇終濃度對發(fā)酵干粉中總多糖含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>由表12可以看出，乙醇終濃度達到75%和85%時，發(fā)酵液中總多糖含量分別為3.015mg/ml和3.018mg/ml。2.2醇沉時間對發(fā)酵干粉總多糖含量的影響(乙醇終濃度為75V。時)由表13可以看出，以終濃度為75%的乙醇沉淀0.511時，發(fā)酵液中總多糖可得到最大程度的保留，其總多糖含量可達原發(fā)酵液的69.26%。表13醇沉時間對發(fā)酵液中總多糖含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>由表12和表13得出，醇沉最佳工藝為乙醇終濃度為75%，醇沉時間為0.511。通過對制備方法條件參數(shù)的篩選，最終確定實施例1的制備方法為最佳生產(chǎn)工藝，可以兼顧生產(chǎn)所得的發(fā)酵產(chǎn)物在氨基酸總量和總多糖含量等方面具有較高的水平，也可以減少耗能，降低成本。通過檢測黃背木耳子實體與本發(fā)明黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的氨基酸總量和總多糖含量，對比兩者的平均含量，見表14，本發(fā)明黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物相比于黃背木耳子實體，其氨基酸總量增加約50%;總多糖含量增加約11。/。。表14黃背木耳子實體與本發(fā)明黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的氨基酸總量和總多糖含量對比<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>采用本發(fā)明黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物為活性成分，或以其為主要原料，可按照常規(guī)制備方法可制備膠囊劑、片劑、口服液等常規(guī)口服制劑。實施例l本發(fā)明黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物(液體或固態(tài))的制備a、活化嗜酸乳桿菌菌株24小時，擴大培養(yǎng)，得乳酸菌菌種；b、取黃背木耳v4"r/cw/flr/fl/Wj;加'cAfl(Mont)Sac1.，粉碎，過篩，至黃背木耳粉碎粒度為可過100目篩；c、取步驟b粉碎所得黃背木耳粉末，按黃背木耳粉末lg、水40ml計制備底物；d、取步驟c所得底物，在溫度為80'C時加熱2小時，冷卻反應物至50'C;e、取步驟a所得擴大培養(yǎng)的菌種，加入步驟d所得冷卻后的反應物中，菌種接種量為反應物重量的10%，發(fā)酵72小時，即得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物；f、取步驟e所得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，按體積比l:l加入水，滅活溫度范圍為60100°C，滅活時間至少20min，濃縮至原發(fā)酵液體積的1/5;加入乙醇使?jié)饪s液的乙醇濃度為75^v/v，靜置，收集沉淀，烘干沉淀，即得固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物。實施例2本發(fā)明膠囊劑的制備原料固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物(由實施例l制備)100g、淀粉60g。制備方法將固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物與淀粉混合均勻后，用膠囊機裝膠囊，共制成1000粒，得到每粒膠囊含固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物100mg的制劑。實施例3本發(fā)明片劑的制備原料固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物(由實施例1制備)100g、淀粉60g、乳糖30g、硬酯酸鎂10g。制備方法將固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物、淀粉、乳糖混勻，常規(guī)方法制粒后，加入硬酯酸鎂整粒，壓片，共制成1000片，得到每片含固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物100mg的制劑。實施例4本發(fā)明口服液的制備取液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物(由實施例1制備)80000ml，稀釋至20000ml，分裝成2000支，相當于每支約含黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物總多糖108mg。權利要求1.黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法，其特征在于，采用乳酸菌與黃背木耳發(fā)酵。2、根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，它包括如下步驟a、活化菌株，擴大培養(yǎng)，得乳酸菌菌種；b、取黃背木耳，粉碎，過篩；c、取步驟b粉碎所得黃背木耳粉末，按黃背木耳粉末lg、水2050ml計制備底物;d、取步驟c所得底物，在溫度為40100'C時加熱16小時，冷卻反應物至50'C;e、取步驟a所得擴大培養(yǎng)的菌種，加入步驟d所得冷卻后的反應物中，菌種接種量為反應物重量的515%,發(fā)酵2496小時，即得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物。3、根據(jù)權利要求2所述的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法，其特征在于，步驟a所述的乳酸菌為嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、保加利亞乳桿菌、德氏乳桿菌、短乳桿菌中的至少一種；步驟a所述的活化時間為24小時；步驟b所述的黃背木耳粉碎粒度為可過20120目篩；步驟c所述的按黃背木耳粉末lg、水40ml計制備底物；步驟d所述的底物在80。C時加熱2小時；步驟e所述的菌種接種量為反應物重量的10X，發(fā)酵72小時。4、根據(jù)權利要求3所述的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法，其特征在于，步驟a所述的乳酸菌嗜酸乳桿菌；步驟b所述的黃背木耳粉碎粒度為可過100目篩。5、根據(jù)權利要求2所述的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法，其特征在于，它還包括如下步驟滅活取步驟e所得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，按體積比1:1加入水，滅活溫度范圍為60100°C，滅活時間至少20min;濃縮濃縮至原發(fā)酵液體積的1/5~1/4;醇沉加入乙醇使?jié)饪s液的乙醇濃度為6585^v/v;干燥靜置，收集沉淀，干燥沉淀，即得固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物。6、根據(jù)權利要求5所述的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物的制備方法，其特征在于，醇沉步驟中加入乙醇使?jié)饪s液乙醇濃度為75%v/v。7、權利要求24任一項所述的制備方法所得的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物干燥后其總多糖含量為89.23~189.84mg/g，氨基酸總量為4.99~8.79%。8、權利要求5或6所述的制備方法所得的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，固態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物總多糖含量為89.23~189.84mg/g，氨基酸總量為4.99~8.79%。9、一種組合物，其特征在于，它是含有權利要求7或8任一項所述的黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物為活性成分，加入藥學、食品或保健食品可接受的輔料、輔助性成分或添加劑制備而成的制劑。10、根據(jù)權利要求7所述的組合物，其特征在于，所述制劑口服制劑；所述口服制劑為片劑、膠囊劑、散劑、丸劑或口服液。全文摘要本發(fā)明涉及黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物及其制備方法，屬生物發(fā)酵領域。該制備方法步驟如下活化、擴大培養(yǎng)嗜酸乳桿菌菌株；粉碎黃背木耳；制備底物；蒸煮底物；接種后發(fā)酵即得液態(tài)黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物；取液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物，滅活、濃縮、醇沉、靜置，收集沉淀，烘干沉淀即得黃背木耳發(fā)酵產(chǎn)物粉末。該方法簡單，條件易于控制，可控性強，耗時少，成本低；制備而得的發(fā)酵產(chǎn)物在總多糖含量和氨基酸總量方面顯著增加。文檔編號A61K36/06GK101278947SQ20071004882公開日2008年10月8日申請日期2007年4月6日優(yōu)先權日2007年4月6日發(fā)明者余夢瑤,葉利明,源清,霞羅,許曉燕,偉譚,費小凡,鄭林用申請人:德陽市食用菌專家大院