專利名稱：：一種治療高血壓的中藥復(fù)方制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療高血壓的中藥復(fù)方制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：高血壓病是常見的心血管疾病之一，研究報(bào)道，高血壓病與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、腦血管疾病等密切相，迄今仍是心血管疾病的主要死因之一。雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)有了飛躍的進(jìn)展，但，近年來(lái)隨著大規(guī)?？垢哐獕号R床實(shí)驗(yàn)和心血管分子生物學(xué)等基礎(chǔ)研究的進(jìn)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到高血壓病不只是血流動(dòng)力學(xué)異常的疾病，還是多種心血管危險(xiǎn)因素聚集、遺傳的綜合征。因此，在治療上，不僅僅要將血壓降低到靶目標(biāo)水平，而且要綜合干預(yù)上述危險(xiǎn)因素，預(yù)防和逆轉(zhuǎn)靶器官不良重塑，降低心血管發(fā)病率和死亡率，提高患者生活質(zhì)量。隨著利尿劑、P受體阻滯劑、鈣離子拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑及血管緊張素受體拮抗劑的不斷應(yīng)用，其在降壓同時(shí)帶來(lái)的諸多副作用亦日益困擾著學(xué)術(shù)界。挖掘祖國(guó)醫(yī)學(xué)寶庫(kù)精髓，運(yùn)用中醫(yī)中藥防治高血壓病已成為一種強(qiáng)有力的手段。中醫(yī)理論研究表明，"陽(yáng)亢"、"血瘀"為高血壓病發(fā)病的基本病理環(huán)節(jié)，該藥現(xiàn)有技術(shù)有采用丹參、潼蒺藜等中草藥制成湯劑治療輕中度原發(fā)性高血壓病(血瘀陽(yáng)亢證)，存在服用、攜帶不便及質(zhì)量不容易控制、每天服用量超大等不足。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種符合中藥制劑現(xiàn)代化的治療高血壓的中藥復(fù)方制劑及其制備方法。本發(fā)明采用中藥原料藥丹參、白蒺藜、潼蒺藜(沙苑子)、澤瀉、青葙子制備治療高血壓的中藥復(fù)方制劑，優(yōu)選制備顆粒劑。其中原料藥的重量配比是丹參9g白蒺藜12g潼蒺藜12g澤瀉9g青葙子9g。本發(fā)明以丹參素及總黃酮提取率為指標(biāo)，應(yīng)用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)選顆粒劑的提取工藝；對(duì)中試成品進(jìn)行質(zhì)量檢查，包括溶化性、粒度、水分，裝量差異，微生物限度等;用HPLC法測(cè)定藥材中丹參酮IIA和丹參素的含量，測(cè)定顆粒中丹參素的含量并建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；采用TLC法對(duì)復(fù)方制劑中澤瀉和沙苑子兩味藥進(jìn)行定性鑒別。本發(fā)明優(yōu)選的提取工藝為6倍量的70%乙醇，加熱回流提取兩次，每次1.5小時(shí)；除粒度外，中試成品顆粒的其他檢查項(xiàng)結(jié)果均符合中國(guó)藥典所要求達(dá)到的標(biāo)準(zhǔn)；采用TLC法鑒別出顆粒劑中澤瀉和沙苑子；HPLC測(cè)定指標(biāo)成分丹參素的流動(dòng)相為甲醇-0.5y。甲酸(1:8),顆粒劑中丹參素的含量定為不低于1.40mg/g。所建立的顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)專屬性強(qiáng)，含量測(cè)定準(zhǔn)確，可用于本發(fā)明顆粒劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明為進(jìn)行大生產(chǎn)化提供可靠依據(jù)。本發(fā)明復(fù)方制劑兼顧"活血化瘀"、"平肝潛陽(yáng)"兩個(gè)重要環(huán)節(jié)，組方合理，具有如下優(yōu)點(diǎn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，能降低麻醉犬血壓，可能通過降低外周阻力發(fā)揮作用，并具有改善血流動(dòng)力學(xué)的作用具有緩慢有效的降壓作用；能抑制自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓升高，作用平緩而持久，能改善高血壓內(nèi)皮細(xì)胞功能，可能與降低S冊(cè)血漿ET-1、AngII，提高血漿NO水平有關(guān)，還能改善S服大鼠高血壓相關(guān)行為；能改善SHR血液流變學(xué)指標(biāo)，調(diào)節(jié)SHR纖溶系統(tǒng)活性；改善急性血瘀證血液流變學(xué)、抗血小板聚集及體外血栓形成，控制S服隨周齡而上升的血壓，逆轉(zhuǎn)高血壓左心室肥厚；從活血化瘀-一改善血液流變學(xué)，平肝潛陽(yáng)-一抑制交感神經(jīng)活性，減少去甲腎上腺素的釋放，降低血漿AngII水平等方面控制血壓，逆轉(zhuǎn)左心室肥厚；對(duì)血管緊張素II(ATII)誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖的影響實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本復(fù)方制劑藥物血清具有抗VSMC增殖作用，抑制VSMCDNA合成，在一定范圍內(nèi)有劑量依賴性。此外，還可改善增殖VSMC的超微結(jié)構(gòu)。急性毒理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小鼠在給予活血潛陽(yáng)顆粒生藥浸膏后，在各時(shí)間點(diǎn)各組小鼠體重?zé)o明顯差異，所有給藥小鼠未出現(xiàn)死亡，也未發(fā)現(xiàn)其它與給藥有關(guān)的臨床表現(xiàn)；長(zhǎng)期毒理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在給藥3個(gè)月、6個(gè)月和恢復(fù)期內(nèi)，本發(fā)明復(fù)方制劑對(duì)大鼠的各重要臟器均未出現(xiàn)與藥物相關(guān)的病理學(xué)改變，未見有大鼠死亡，也未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，血液學(xué)、凝血酶原時(shí)間和病理組織學(xué)檢査，均未發(fā)現(xiàn)與藥物明顯相關(guān)的異常變化。說明本復(fù)方制劑的臨床用藥量是一個(gè)相當(dāng)安全的劑量。臨床研究結(jié)果表明，能顯著改善頭暈、頭痛、心煩、失眠、手足麻木、腰膝酸軟、舌質(zhì)紫暗、舌體瘀斑等臨床癥狀；可以有效阻止高血壓病導(dǎo)致的靶器官損害?；钛獫撽?yáng)膠囊能一定程度地改善高血壓血管重建情況，可能與改善血槳ET-1、AngII、TXB2/6-keto-PGF^及bFGF在血管壁的分布情況有關(guān)。可進(jìn)一步提高中醫(yī)藥治療高血壓病及其并發(fā)癥療效。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1提取工藝研究藥材及對(duì)照品丹參、白蒺藜、潼蒺藜(沙苑子)、澤瀉、青葙子等五味藥材均購(gòu)于上海康橋中藥飲片有限公司，并經(jīng)鑒別均符合中國(guó)藥典規(guī)定；丹參素鈉(批號(hào)110855-200203)購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品鑒定所；戸丁(批號(hào))購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品鑒定所。試劑醫(yī)用95%乙醇批號(hào)A2-54(上海振興化工一廠)；甲醇色譜級(jí)；蒸餾水。儀器馬頭牌JYT-10架盤藥物天平(上海醫(yī)用激光儀器廠)；HHS0-2型電恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)；W201S恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司)；R206D型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)；SHB-IIIA型循環(huán)水式多用真空泵(上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司)；ZK-82B型真空干燥箱(上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠)；FA-1004型電子天平(上海天平儀器廠)；HP1100型高效液相色譜儀(美國(guó)惠譜公司)；HP8453紫外分光光度儀(美國(guó)惠譜公司)。正交設(shè)計(jì)確定提取工藝條件采用醇提工藝，在整個(gè)提取過程中，提取所用醇的濃度和量以及提取時(shí)間對(duì)丹參素收率的影響較大，故采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選醇提的最佳條件。按L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。表1是正交試驗(yàn)因素水平表。表1,一一__—一———<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>按配方量的一半稱取中藥材共九份，按L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表確定的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)。提取液濾過，合并兩次的濾液。濾液回收乙醇，用蒸餾水定容于50ml容量瓶中，以測(cè)定丹參素及總黃酮的含量。(1)丹參素精密稱取干燥至恒重的丹參素鈉對(duì)照品2.85mg置25ml容量瓶，用甲醇定容至刻度，濃度為0.114mg/ml。取所得的9份藥液各lml，經(jīng)微孔濾膜再次過濾。吸取上述丹參素鈉對(duì)照品及9份續(xù)濾液各5u1注入液相色譜儀，兩點(diǎn)法計(jì)算含量。(2)總黃酮精密稱取干燥至恒重的戸丁15.2mg，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，濃度為0.304mg/ml。精密移取上述戸丁溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分別置25ml容量瓶中。精密移取5。/。NaN02l.Oml，放置6分鐘；再精密加入10%A1(N03)3l.Oml，放置6分鐘；最后精密移取NaOH試液5.0ml，并用70%乙醇定容。放置30分鐘后，用紫外分光光度儀測(cè)定總黃酮的含量，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，O管作為空白。Y=0.4246X—0.0154R2=0.9995(X為濃度，Y為吸收值)。另移取9份藥液各0.lml，分別置25ml容量瓶中，處理方法同上。將測(cè)得結(jié)果代入標(biāo)曲，計(jì)算總黃酮含量。表2是正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表。表3是正交試驗(yàn)直觀分析表。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表3<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>直觀分析表明，以丹參素提取率為指標(biāo)，乙醇的濃度對(duì)丹參素的提取率影響最大，乙醇加入量和提取時(shí)間的影響均較小，其中提取時(shí)間對(duì)丹參素的提取率影響稍大。選取最優(yōu)的水平組合為A1B2C2。以總黃酮提取率為指標(biāo)，同樣也是乙醇濃度的影響最大，提取時(shí)間次之，乙醇加入量對(duì)總黃酮提取率的影響為最小。選取最優(yōu)的水平組合為A2B1C2。由于用單指標(biāo)不能完全反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故采用綜合評(píng)分法，即以丹參素和總黃酮來(lái)綜合判定結(jié)果。綜合指標(biāo)=丹參素含量><50%+總黃酮含量乂50%。表4是正交試驗(yàn)綜合指標(biāo)分析表。表5是正交實(shí)驗(yàn)方差分析表(綜合指標(biāo))。表4'試驗(yàn)號(hào)ABC綜合指標(biāo)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>9332I37.02833.25627.100II39.92528.72637.143III16.90631.87629.616R7.6731.5103.3489.232綜合指標(biāo)分析表表明，同樣是乙醇濃度的影響最大，提取時(shí)間次之，乙醇加入量對(duì)總黃酮提取率的影響為最小。故優(yōu)選的水平組合為A2B1C2。表5方差來(lái)源離差平方和自由度均方F值顯著性A104.794252.3979.14<0.1B3.59521.7970.31>0.1C18.20729.1031.59>0.1誤差項(xiàng)11.46825.734FO.1(2，2)=9.9方差分析表明提取用的乙醇濃度對(duì)有效成分的提取量有顯著性差異；加醇量和提取時(shí)間對(duì)有效成分的提取量無(wú)顯著性差異。與原工藝(水提醇沉)試驗(yàn)比較結(jié)果顯示，水提醇沉工藝無(wú)論丹參素含量或總黃酮含量均較低。特別是主要藥效成分丹參素，原工藝的提取率只是優(yōu)選工藝的17.18%;總黃酮提取率優(yōu)選工藝為原工藝的162.22%。表6是兩種工藝對(duì)有效成分提取率的比較。表6工藝生藥j丹參素提取率(mg)總黃酮提取率(mg/g)水提醇沉醇提A2B1C2處方量51g1/2處方量25.5g2.0105.85019.31031.324實(shí)施例2劑型選擇采用優(yōu)選的工藝提取3份，每份為處方的一半量(25.5g)回收乙醇后用蒸餾水定容于50ml容量瓶中。分別從上述3份樣品中精密移取10ml藥液置3個(gè)已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，水浴至干，再放入烘箱到恒重。計(jì)算得膏率。表7是優(yōu)選工藝的得膏率計(jì)算。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>得膏率(％)=干樣量(g)X(50ml/10ml)/藥材量(g)X100%根據(jù)得膏率計(jì)算日服用量:51gX14.15%=7.2g，加上輔料后在10g以上，按每片片劑或每粒膠囊0.5g估算，則每天需服用20片(粒)以上，大大超過人們的日常服藥習(xí)慣。無(wú)法制成片劑、膠囊劑，故選擇顆粒劑。顆粒項(xiàng)檢查按上述方案常規(guī)制備顆粒劑，外觀性狀干燥；顆粒均勻；色澤一致，為棕色細(xì)小顆粒；無(wú)吸潮，結(jié)塊。粒度取單劑量分裝的顆粒劑5袋，稱定重量，置藥篩內(nèi)過篩。過篩時(shí)，將篩保持水平狀態(tài)，左右往返輕輕篩動(dòng)3分鐘。計(jì)算不能過一號(hào)篩(10目)和能通過四號(hào)篩(65目)的顆粒和粉末總和，應(yīng)不得過8.0%。實(shí)際操作時(shí)以能找到的，相近的14目和60目篩替代藥典要求的一號(hào)篩和四號(hào)篩。表8是粒度檢查分析表。表8一微<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由上表可見，不能通過14目篩和能通過65目篩的顆粒所占比例明顯超過藥典規(guī)定。溶化性取成品10g加20倍熱水(200ml)，攪拌。1—2分鐘內(nèi)全部溶化；顏色類似顆粒但稍淡，為淺棕色；不澄清，有輕微混濁；無(wú)焦屑等異物。裝量差異取供試品10袋，分別稱定每袋內(nèi)容物的重量，每袋的重量與標(biāo)示裝量相比較，超出限度的不得多于2袋，并不得有l(wèi)袋超出限量度一倍。標(biāo)示量1.5g以上至6g(本品為4.5g)的，裝量差異限度為±7%。表9是裝量差異分析表。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>每袋的裝量差異均小于±7%，合格。水分檢查因不含揮發(fā)性成分，采用烘干法測(cè)定水分。取供試品25g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱瓶中，厚度不超過5mra，精密稱定。開瓶在100105'C干燥5小時(shí)，蓋瓶，移置干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定重量W1。在上述溫度干燥l小時(shí)，冷卻，稱重W2。至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水分的百分?jǐn)?shù)。顆粒劑藥典規(guī)定不得超5.0%，因制作工藝控制水分在《2.5%,所以應(yīng)不得超2.5%。表10是水分測(cè)定。表10<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>微生物限度《1000JVg，霉i^母藤《100K/g，未檢出。實(shí)施例3顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究丹參藥材中有效成分含量測(cè)定1、丹參酮IIA含量的測(cè)定(1)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(15:5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)入270nm;理論板數(shù)按丹參酮IIA峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。(2)制備對(duì)照品溶液稱取丹參酮IIA對(duì)照品2.55mg，置25ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取lml，置10ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。(每lml中含丹參酮IIA10.2ug)。(3)制備供試品溶液取丹參藥材粉末(過三號(hào)篩)0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ral，密塞，稱定重量，加熱回流l小時(shí)，放冷，密塞，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液5ul，供試品溶液10iil注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。表11是丹參藥材中丹參酮IIA含量測(cè)定。表ll標(biāo)號(hào)重量(g)峰面積(10nl)標(biāo)品峰面積(5nl)含量(mg)含量(％)平均含量(％)10.3043237.644358.3690.1690.0560.05420.3235247.4800.1760.05430.3013233.8280.1660.055含量(mg)-(標(biāo)品濃度XSulX藥材峰面積)/(標(biāo)品峰面積X10!il)X50ml2丹參素含量的測(cè)定(1)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇_0.5%甲酸(1:8)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)A280nra。(2)制備對(duì)照品溶液精密稱取丹參素鈉對(duì)照品2.85mg，置25ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。(每lml中含丹參素鈉0.114mg)。(3)制備供試品溶液取丹參藥材20g共3份，精密稱定。加入10倍量的水，煎煮分別為l小時(shí)、1.5小時(shí)和2小時(shí)。將提取液定容至250ml。吸取少許，經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，得。(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液5ul注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。表12丹參藥材中丹參素含量測(cè)定。表12一,,，■■■一，，，—翁一一標(biāo)號(hào)重量(g)提取時(shí)間(小時(shí))峰面積標(biāo)品峰面積含量(mg)含量(％)平均含量(％)120.3461.0605.226522.54933.0090.160.187220.5251.5701.38938.2540.19320.2002.0768.76841.9290.21含量(mg)=(標(biāo)品濃度乂5111乂藥材峰面積)/(標(biāo)品峰面積X10ul)X50ml3、丹參素含量測(cè)定(HPLC)的成品顆粒處理方法的確定色譜條件通上。確定溶劑(1)稱取平行的兩份樣品，分置于25ml容量瓶中，一份用蒸餾水定容，另一份用甲醇定容，超聲30分鐘，經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液。(2)稱取丹參素鈉對(duì)照品12.lmg，用甲醇定容于25ml容量瓶，以次為母液，濃度為0.484mg/nil。從母液中移取l.Oml置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，濃度為0.0484tng/ml。(3)吸取稀釋后的丹參素鈉對(duì)照品液5ul注入高效液相儀，用于定位。(4)吸取兩份用不同溶劑溶的樣品續(xù)濾液5yl注入高效液相儀，每份進(jìn)3針，比較不同溶劑的效果。(5)結(jié)果用水溶的樣品圖譜上鋒形較佳，分離度較好。確定溶劑為水。確定超聲提取時(shí)間(1)稱取平行的樣品6份，置10ml容量瓶中，用蒸餾水定容。(2)以2份為一組，3組的超聲提取時(shí)間分別是IO分鐘，20分鐘和30分鐘，超聲后經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液。(3)吸取上述稀釋后的丹參素鈉對(duì)照品液5u1注入高效液相儀；吸取6份樣品續(xù)濾液IOpI注入高效液相儀。用兩點(diǎn)法計(jì)算丹參素提取量，比較超聲時(shí)間對(duì)提取量的影響。表13是超聲時(shí)間對(duì)丹參素提取量的影響。表13_蘇—_試驗(yàn)號(hào)超聲時(shí)間(分鐘)峰面積(10ul)標(biāo)品峰面積(5nl)丹參素提取量(mg)110275.502154.4390.4317210246.3390.3860320292.3230.4580420231.2480.3623530282.1260.4421630267.9340.4198丹參素提取量=(丹參素標(biāo)準(zhǔn)品濃度X5lilX樣品峰面積)/(丹參素標(biāo)準(zhǔn)品峰面積X10ul)由上表可得超聲時(shí)間對(duì)丹參素的提取量有一定影響，但差異量不大，故選定超聲時(shí)間為IO分鐘。本發(fā)明確定樣品處理方法為用蒸餾水溶，并超聲10分鐘。顆粒中丹參素含量測(cè)定(HPLC)的方法學(xué)研究標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定稱取105'C干燥至恒重的丹參素鈉對(duì)照品12.lmg，置25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，從中移取l.Oml置5ml容量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得濃度為0.0968mg/ml的丹參素鈉對(duì)照品溶液，分別吸取2ul，4"1，6jxl，8ul，10ul，按上述的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y，丹參素鈉對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)X(mg)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算回歸方程Y(Area)=639.160301X—0.9397103r=0.99999即丹參素在0.1936mg~0.9680mg之間線形關(guān)系良好。表14是丹參素標(biāo)準(zhǔn)曲線(n=5)。表14l234進(jìn)樣量(ul)含量(mg)峰面積20,1936122.69640.3872244.89960,5808369.70580.7744495.838100.9680617.343吸取濃度為0.0968mg/ml的丹參素鈉對(duì)照品溶液20u1，重復(fù)進(jìn)5次，計(jì)算丹參素的RSD=0.17%。表15是精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表153峰面積峰面積平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD621.411622.059622.138622.4161.0690.17%624.238622.235重復(fù)性實(shí)驗(yàn)平行取樣品5份，精密稱定。用蒸餾水定容于10ml容量瓶，超聲1410分鐘。經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液10ul，注入液相色譜儀。測(cè)定并計(jì)算丹參素含量的10=1.38%。表16是重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品一份，精密稱定，處理方法同重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。每隔1.5小時(shí)進(jìn)20ixl，測(cè)定并計(jì)算丹參素含量的RSD=2.46%。表17是穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表17<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>由RSD〈3y?？傻?，在顆粒水溶后的9小時(shí)內(nèi)丹參素含量較穩(wěn)定。加樣回收率實(shí)驗(yàn)平行取己知含量的樣品6份，精密稱定。分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，具體為1，2號(hào)樣品加樣品中含量的80%;3，4號(hào)加100%;5，6號(hào)加120%。處理方法同重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。進(jìn)樣量為10u1，測(cè)定含量并計(jì)算回收率。表18是加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表18<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>丹參素轉(zhuǎn)移率計(jì)算上述成品顆粒的生藥量為63.75kg，其中丹參藥材為11.25kg。制成浸膏，加入輔料共制得1000包顆粒，每包重4g，即每包中含丹參藥材11.25g。利用重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)計(jì)算轉(zhuǎn)移率。丹參素藥材含量按表12的0.187%計(jì)算。表19是丹參素轉(zhuǎn)移率計(jì)算。表19<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>轉(zhuǎn)移率(％)=(丹參素含量(mg/g)X4g)/(丹參11.25gX藥材丹參素含量0.187%)X100%TLC定性鑒別沙苑子(1)稱取沙苑子藥材粉末(40目)lg，于索氏提取器中，加70ml石油醚(6090°C)，回流提取5小時(shí)。取出，連同濾紙筒，置50ml錐形瓶中，力1175%乙醇30ml，浸泡1小時(shí)，再超聲30分鐘。用濾紙過濾，取濾液5ml，蒸干，加lml甲醇使溶，得藥材溶液。(2)稱取成品顆粒(浸膏-輔料1:1)lg，加甲醇5ml，超聲30分鐘。用濾紙過濾，濾液濃縮到lml左右，得成品顆粒溶液。(3)稱取自制陰性干浸膏(缺沙苑子)0.5g，處理方法同成品顆粒，得陰性對(duì)照溶液。(4)用定量毛細(xì)管吸取藥材溶液，成品顆粒溶液和陰性對(duì)照溶液各15ul，點(diǎn)于聚酰胺薄膜上，展開劑為甲醇-水(4:1)，展開。取出，晾干，噴以1%三氯化鋁溶液，12(TC加熱5分鐘，于365nmUV下觀察熒光。(5)結(jié)果成品顆粒溶液色譜與沙苑子藥材溶液色譜在相應(yīng)位置有相同熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照溶液的色譜在相應(yīng)位置無(wú)熒光斑點(diǎn)。(6)熒光圖譜見附錄()澤瀉(1)稱取澤瀉對(duì)照藥材粉末(40目)0.5g，加乙酸乙脂15ml，超聲30分鐘。放冷，用濾紙過^1，濾液濃縮至0.5ml，得對(duì)照藥材溶液。(2)稱取成品顆粒2.5g(浸膏-輔料1:1)，加硅藻土lg，研勻。加入乙酸乙脂10ral，超聲30分鐘。放冷，用濾紙過濾，濾液濃縮至0.5ml，得成品顆粒溶液。(3)稱取自制陰性干浸膏1.25g，處理方法同成品顆粒，得陰性對(duì)照溶液。(4)用定量毛細(xì)管吸取藥材溶液，成品顆粒溶液和陰性對(duì)照溶液各15ixl，點(diǎn)于HSG硅膠預(yù)置板，展開劑為氯仿-乙酸乙脂-甲酸(6:3.5:0.5)，展開。取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105'C烘5分鐘，待其顯色，觀察。(5)結(jié)果成品顆粒溶液色譜與沙苑子藥材溶液色譜在相應(yīng)位置有相同熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照溶液的色譜在相應(yīng)位置無(wú)熒光斑點(diǎn)。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)材料和儀器均為市購(gòu)。權(quán)利要求1、一種治療高血壓的中藥復(fù)方制劑，其特征是由下列原料藥與藥用載體制成丹參、白蒺藜、潼蒺藜、澤瀉、青葙子。2、根據(jù)權(quán)利要求1的中藥復(fù)方制劑，其特征是其中各原料藥的重量配比為丹參9g白蒺藜12g潼蒺藜12g澤瀉9g青葙子9g。3、權(quán)利要求1或2的中藥復(fù)方制劑的制備方法，其特征是以丹參素及總黃酮提取率為指標(biāo)，用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選提取工藝；對(duì)成品進(jìn)行質(zhì)量檢査；用HPLC法測(cè)定藥材中丹參酮IIA或丹參素的含量，并建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；用TLC法對(duì)復(fù)方制劑中澤瀉和/或潼蒺藜進(jìn)行定性鑒別。4、根據(jù)權(quán)利要求3的制備方法，其特征是所述的提取工藝為6倍量的70%乙醇，加熱回流提取兩次，每次1.5小時(shí)。5、根據(jù)權(quán)利要求3的制備方法，其特征是所述的HPLC測(cè)定指標(biāo)成分丹參素的流動(dòng)相為甲醇-0.5%甲酸1:8。6、根據(jù)權(quán)利要求3的制備方法，其特征是所述的HPLC法測(cè)定藥材中丹參素的含量定為不低于1.40mg/g。7、根據(jù)權(quán)利要求1或2的中藥復(fù)方制劑，其特征是所述的制劑是顆粒劑。全文摘要本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療高血壓的中藥復(fù)方制劑及其制備方法。本發(fā)明采用中藥原料藥丹參、白蒺藜、潼蒺藜、澤瀉、青葙子制成復(fù)方制劑，應(yīng)用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)選顆粒劑的提取工藝；本發(fā)明制劑兼顧“活血化瘀”、“平肝潛陽(yáng)”環(huán)節(jié)，組方合理，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究結(jié)果表明，能顯著改善頭暈、頭痛、心煩、失眠、手足麻木、腰膝酸軟、舌質(zhì)紫暗、舌體瘀斑等臨床癥狀；可以有效阻止高血壓病導(dǎo)致的靶器官損害，能一定程度地改善高血壓血管重建情況，可進(jìn)一步提高中醫(yī)藥治療高血壓病及其并發(fā)癥療效。文檔編號(hào)A61K9/16GK101306129SQ20071004066公開日2008年11月19日申請(qǐng)日期2007年5月14日優(yōu)先權(quán)日2007年5月14日發(fā)明者端周,楊建梅,志王,王佑華,肖梅芳,顧仁樾,莉魏申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院