專利名稱：：抗ilt7抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及能夠結(jié)合人ILT7的抗體。
背景技術(shù)：
：干擾素a(IFNa:在下文中"干擾素，，以縮寫IFN代表)以及干擾素(3(IFN卩)作為1型IFN為人們所知，該類型IFN具有抗病毒活性或者抗腫瘤活性。另一方面，已經(jīng)有研究表明IFNa涉及自身免疫病。例如，已經(jīng)報道過在以下的自身免疫病的病人體內(nèi)有IFNa的異常產(chǎn)生。已經(jīng)有研究提示可以通過中和IFNa來減輕自身免疫病的癥狀。系統(tǒng)性紅斑狼齊(Shiozawaetal.,Arthr.&Rheum.35,412,1992)慢性風(fēng)濕(Hopkinsetal.,Clin.Exp.Immunol.73，88,1988)已經(jīng)有報道在給藥重組的IFNa2或IFN之后自身免疫病的癥狀出現(xiàn)或者惡化的例子(Wadaetal.，Am.J.Gastroenterol.90,136,1995;Perezetal.,Am.J.Hematol.49,365,1995;WilsonLEetal，SeminArthritis.Rheum.32,163-173,2002.).進一步地，還有研究提示IFNoc能夠誘導(dǎo)樹突細胞(dendriticcell)的分化。樹突細胞也是一種抗原呈遞細胞。因此，認為樹突細胞的分化誘導(dǎo)包括自身免疫病的重要的機制。已經(jīng)有研究表明在IFNot誘導(dǎo)樹突細胞分化和系統(tǒng)性紅斑狼癡的發(fā)作之間有很深的聯(lián)系(Blancoetal.，Science,16:294,1540-1543,2001)。因此，已經(jīng)有研究指出IFNot與抗腫瘤活性以及自身免疫病密切相關(guān)。而且，IFNoc與銀屑病的發(fā)作有密切的關(guān)系(NestleFOetal.，J.Exp.Med.202,135-143，2005)。將當(dāng)病毒感染時能夠產(chǎn)生大量1型IFN的細胞鑒定為干擾素生成細胞(InterferonProducingcell,IPC)。很少有IPC在血液中出現(xiàn)。研究者認為在外周血淋巴細胞中僅有1%或者更少的IPC。然而，IPC具有很高的產(chǎn)生IFN的能力。IPC產(chǎn)生IFN的能力能夠達到,例如,3000pg/毫升/l()4細胞。也就是說，可以說雖然只有很少的細胞，但是在病毒感染時血液中產(chǎn)生的大部分的IFNa或IFNP是由IPC產(chǎn)生的。另一方面，IPC是未分化的淋巴樣樹突細胞，該細胞被認為是樹突細月包的前體細胞。IPC可能指的是類漿樹突細胞(Plasmacytoiddendriticcell)。在病毒的刺激下IPC會分化成樹突細胞并且誘導(dǎo)T細胞產(chǎn)生IFNy或IL-10。IPC也可以在IL-3的刺激下分化成樹突細胞。在IL-3的刺激下所分化的樹突細胞會誘導(dǎo)T細胞產(chǎn)生Th2細胞因子(IL-4，IL-5和IL-10)。因此，IPC具有在不同的刺激下分化成不同樹突細胞的性質(zhì)。相應(yīng)地，IPC具有兩種類型IFN產(chǎn)生細胞和樹突細胞的前體細胞。在免疫系統(tǒng)中兩種細胞都起重要的作用。換言之，IPC是在多個方面支持免疫系統(tǒng)的重要細胞。非專利文獻1:Shiozawaetal.，Arthr.&Rheum.35，412,1992非專利文獻2:Hopkinsetal.，Clin.Exp.Immunol.73，88，1988非專利文獻3:Wadaetal.，Am.J.Gastroenterol.90，136,1995非專利文獻4:Parezetal.，Am.J.Hematol.49,365，1995非專利文獻5:Biancoetal.，Science,16:294，1540-1543,2001非專利文獻6:Juetal.，Gene.2004Apr28;331:159-64.非專利文獻7:ColonnaMetal.，SeminarsinImmunology12:121-127，2000.非專利文獻8:NakajimaH.etal.，J.Immunology162:5-8.1999非專利文獻9:WilsonLEetal，SeminArthritis.Rheum.32，163-173，2002非專利文獻10:NestleFOetal.,J.Exp.Med.202，135-143，2005專利文獻1:WO03/12061(U.S.PatentPublishedApplicationNo.2003-148316)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供能結(jié)合免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄物7(Immunoglobulin-Liketranscript-7,ILT7)的抗體，并JU企測，鑒定或者分離IPC。本發(fā)明的另一個目的是調(diào)節(jié)IPC的活性。為了調(diào)節(jié)諸如IFN這樣的體液因子的活性，給藥能夠識別該因子的抗體是有效的。例如，已經(jīng)實現(xiàn)了通過針對白介素(IL)-1或者IL-4的抗體來治療自身免疫病的嘗試(Guleretal.,ArthritisRheum.,44.S307,2001)。進一步地，設(shè)想中和抗體可以和干擾素一樣作為種自身免疫病的治療制劑來起作用(Stewart,TA.CytokineGrowthFactorRev.14;139-154，2003)?？梢杂柝懷耘c上述相同的方法對于由IPC所產(chǎn)生的IFN同樣有效。然而，這樣的方法是基于在產(chǎn)生體液因子之后抑制該因子的效力。如果可以直接地控制所需體液因子的產(chǎn)生，就可以得到更明顯的療效。已經(jīng)報道過能夠識別人IPC的抗體。例如，抗BDCA-2單克隆抗體是人IPC-特異的單克隆抗體(DzionekA.etal.J.Immunol.165:6037-6046,2000)。研究者發(fā)現(xiàn)抗BDCA-2單克隆抗體能夠有效地抑制人IPC產(chǎn)生IFN(J.Exp.Med.194:1823-1834,2001.)。而且，還報道過能夠識別小鼠中干擾素生成細胞的單克隆抗體能夠抑制干擾素的產(chǎn)生(Blood2004Jun1;103/11:4201-4206.Epub2003Dec)。已經(jīng)有報道稱針對小鼠類漿樹突細胞的單克隆抗體會造成樹突細胞數(shù)目的減少(J.Immunol.2003,171:6466-6477)。相似地，如果能夠提供識別人IPC、并且調(diào)節(jié)其活性的抗體，那么會非常有用。例如，本發(fā)明的發(fā)明者已經(jīng)顯示了能夠識別Ly49Q的抗體會特異地結(jié)合小鼠的IPC。然而，針對Ly49Q的抗體不會干擾小鼠IPC的活性(Blood,1April2005，Vol.105,No.7，和pp.2787-2792.;WO2004/13325)。另一方面，已知ILT7是一種特異表達在類漿樹突細胞中的分子(JuXSetal.andGene,2004Apr28;331:159-64.;WO03/12061)。然而，還沒有獲得過任何針對ILT7的抗體。因此，抗體對于IPC的作用仍然未知。ILT7是一種含有免疫球蛋白樣基序的膜蛋白。已經(jīng)有報道稱該分子是在骨髓系統(tǒng)或者淋巴系統(tǒng)的細胞中表達的分子之一(ColonnaMetal.，SeminarsinImmunology12:121-127,2000.)。一類具有類似于ILT7結(jié)構(gòu)的分子纟皮指定為ILT家族。ILT家族也與殺傷細胞抑制受體(killercellinhibitoryreceptor,KIR)的結(jié)構(gòu)、功能相近。ILT7與ILT家族其它分子一樣具有4個C-型免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。研究者認為ILT7像ILT1、ILT1樣蛋白、ILT8和LIR6a等一樣將活化的信號送入到細胞內(nèi)。已經(jīng)確認了，在血系統(tǒng)細胞中有屬于ILT家力矣的分子的表達(Youngetal.,Immunogenetics53:270-278，2001;"TheKIRGeneCluster."Carrington,MaryandNorman,Paul.Bethesda(MD):NationalLibraryofMedicine(US),NCBI;2003)。于是，通過減除雜交法^r測到了ILT7在類漿樹突細胞(Plasmacytoiddendriticcell,PDC)中的高表達以及在單核細胞衍生的樹突細月包(monocyte-deriveddendriticcell,MDDC)中的低表達。ILT2和ILT3不僅在PDC中有表達，而且在從MDDC或CD34陽性細胞中獲得的DC中也有表達。然而，由于ILT7的mRNA在PDC中特異地表達，所以發(fā)現(xiàn)了可以4吏用該mRNA作為PDC的標(biāo)記。另外，當(dāng)時已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了，通過CpG的剌激可以降低ILT7的表達(JuXSetal.Gene.2004Apr28;331:159-64.;WO03/12061)。本發(fā)明的發(fā)明者通過研究人IPC確認了在IPC中ILT7的表達特異寸生地亢進。于是，本發(fā)明的發(fā)明者嘗試了制備ILT7抗體，并且闡述其作用。例如，諸如ILT2和ILT3這樣的構(gòu)成ILT家族的分子，特別是在其胞外i或的氨基酸序列上具有高保守性(圖9)。這些ILT家族分子分別在不同的血細胞中展示特有的表達譜。因此，獲得能夠從免疫學(xué)上區(qū)分ILT7與其他的ILT家族分子的抗體是非常重要的。然而，實際上，由于下述的障礙，制備以ILT7為免疫原特異性結(jié)合人IPC的抗體是困難的。通常，將通過基因重組技術(shù)制備的蛋白用作免疫原，以便獲得能夠識別從活體組織中得到的微量蛋白的抗體。本發(fā)明的發(fā)明者以人ILT7的cDNA序列、以及根據(jù)該堿基序列翻譯而成的氨基酸序列的信息(GenBankAccessionNo.NM—012276)為基礎(chǔ)設(shè)法表達了人ILT7。然而，在常規(guī)條件，不能作為重組體表達人ILT7。為了獲得蛋白的抗體，也經(jīng)常嘗試使用天然蛋白的部分氨基酸序列作為免疫原。然而，由于在ILT家族中其氨基酸序列同源性極高，所以對于人ILT7幾乎沒有氨基酸序列是特異的。而且，為了使抗體能夠識別細胞表面的分子，選擇位于細胞表面的區(qū)域是必要的，其中該區(qū)域是由能夠作為抗原表位被抗體識別的部分組成的。因此，研究者已經(jīng)認識到利用氨基酸序列片段作為免疫原來制備特異針對ILT7的抗體是不現(xiàn)實的。本發(fā)明的發(fā)明者明確了在這種條件下可以通過利用特異的免疫原獲得能夠結(jié)合IPC的抗體。更進一步地，本發(fā)明的發(fā)明者發(fā)現(xiàn)以這種方法獲得的抗體能夠特異地識別人IPC并且進一步地具有調(diào)節(jié)其活性的作用，因此成功的完成了本發(fā)明。就是說，本發(fā)明涉及下述的抗ILT-7抗體、其制備方法及其應(yīng)用。[本發(fā)明的效果〗本發(fā)明提供了可以用于制備能夠識別人ILT7的抗體的免疫原以及利用該免疫原制備抗人ILT-7抗體的方法。ILT7是屬于ILT家族的一種膜蛋白。具體地，ILT家族的胞外區(qū)的氨基酸序列是高度保守的。因此，想要通過常規(guī)的免疫方法來制備能夠區(qū)分ILT家族成員的抗體是非常困難的。本發(fā)明的發(fā)明者顯示了可以很方便地利用動物細胞來獲得能夠識別人ILT7的抗體，其中該動物細胞共表達了ILT7與細胞膜蛋白。通過本發(fā)明的方法獲4尋的抗ILT-7抗體具有高特異性，該抗體能夠區(qū)分人IPC與其他表達ILT家力矣成員的纟田胞。在優(yōu)選應(yīng)用實例中，本發(fā)明所提供的抗人ILT-7抗體能夠結(jié)合人IPC。另外，本發(fā)明的抗體特異地識別人IPC。因此，該抗體可用于檢測和分離IPC。IPC是產(chǎn)生大部分1型干擾素的細胞。因此，在診斷和研究諸如自身免疫病這樣的與IPC相關(guān)的疾病時，檢測和分離IPC是很重要的。具體地，按照本發(fā)明的發(fā)明者的發(fā)現(xiàn)，IPC中ILT7的表達不因IFNa的存在而降低。在患有自身免疫病的病人體內(nèi)，IFNa的表達經(jīng)常被促進。這意味著可以使用本發(fā)明的抗ILT-7的抗體來4企測和分離患有自身免疫病的病人的IPC，在該病人體內(nèi)IFNa的表達受到了促進。在優(yōu)選應(yīng)用實例中，本發(fā)明提供的抗ILT-7抗體具有調(diào)節(jié)人IPC的活性的作用。因此，可以使用本發(fā)明的抗ILT-7抗體來抑制IPC的活性。如前所述，在IFNa存在的情況下，IPC中ILT7的表達不會減少。因此，如果利用本發(fā)明的抗體對IPC的活性的抑制，那么可以預(yù)期該抗體對于患有自身免疫病的病人具有治療效果，其中在該病人體內(nèi)IFNa的表達被促進了。少量的IPC就可以產(chǎn)生大量的IFN。需要與IFN分子一樣多的抗體來中和IFN。然而，在本發(fā)明中直接抑制了生成細胞的活化。因此，可以預(yù)期與利用抗IFN抗體中和IFN相比，即使使用少量的抗體也能獲得強效的IFN抑制作用。此外，在持續(xù)產(chǎn)生IFN的情況中，可以預(yù)言通過IFN抗體來進行中和是暫時的抑制。在本發(fā)明中，由于抑制了IPC的活性，可以預(yù)期刈-IFN的產(chǎn)生的抑制作用可以在很長的時間內(nèi)有效。圖la是通過RT-PCR方法檢測ILT7基因的mRNA的表達的照片。該圖是對人免疫細胞中ILT7基因的mRNA的表達的分析結(jié)果。圖lb是利用定量PCR方法檢測和比較多種人組織和細胞中ILT7基因的mRNA的表達的圖表。橫軸顯示的是所檢測的組織和細胞，縱軸顯示的是ILT7的表達水平，其中ILT7的表達水平按照GAPDH的表達水平進行了標(biāo)準(zhǔn)化。圖2是顯示ILT7蛋白結(jié)構(gòu)的圖表。其中圖2(a)顯示的是ILT7蛋白的氨基酸序列，并且進一步在圖中顯示了推定的分泌信號序列以及跨膜區(qū)；圖2(b)顯示了由構(gòu)建的表達載體所編碼的ILT7蛋白的簡圖。圖3是一張圖片，該圖片顯示了將ILT7表達載體和FcRy表達載體導(dǎo)入到細胞內(nèi)、并且利用FCM檢測ILT7分子在細胞表面的表達的結(jié)果。橫軸表示利用抗FLAG抗體檢測的焚光強度，即帶有FLAG標(biāo)簽ILT7分子在細胞表面的表達強度，同時縱軸表示細胞數(shù)目。圖4是一張照片，該照片顯示的是利用免疫沉淀和Western印跡方法分析的、在導(dǎo)入了ILT7表達載體和FcRY表達載體的細胞中的分子結(jié)合。左邊的圖表顯示了在利用抗myc抗體對FcRy分子進行了免疫沉淀之后，利用抗FLAG抗體對ILT7分子進行印跡的結(jié)果的圖片(上方的圖片)、以及利用抗myc抗體對FcRy分子進行印跡的結(jié)果的圖片(下方的圖片)。相似地，右邊的圖片顯示的是在利用抗FLAG的抗體對FcRy分子進行免疫沉淀之后，利用抗FLAG抗體(上方的圖片)和抗myc抗體(下方的圖片)進行印跡的結(jié)果的圖片。圖5是顯示了通過將ILT7表達載體和FcRY表達載體導(dǎo)入到細胞內(nèi)、并利用N糖苦酶處理來檢測ILT7分子糖基化的照片。左側(cè)的照片顯示的是沒有利用N糖苷酶處理ILT7時ILT7的大小，右側(cè)的照片顯示的是利用N糖芬酶處理ILT7后ILT7的大小。圖6a是利用FCM分析來檢測所產(chǎn)生的抗ILT7單克隆抗體的反應(yīng)性的圖片。(a)顯示的是抗ILT-7抗體與BDCA-2陽性IPC結(jié)合的結(jié)果，該結(jié)果是利用人外周血淋巴細胞以及利用抗ILT-7抗體和抗BDCA-2抗體進4亍雙染色來分析的?？v軸顯示的是與BDCA-2抗體的反應(yīng)性，橫軸顯示的是每種制備各種抗ILT7抗體的反應(yīng)性。圖6b是顯示了利用FCM分析檢測制備的抗ILT7單克隆抗體的反應(yīng)性的圖片。(b)顯示了抗ILT-7抗體與ILT7分子結(jié)合能力的檢測結(jié)果，其中該檢測是利用導(dǎo)入了ILT7和FcRy表達載體的293T細胞進行的。縱軸顯示的是抗FLAG抗體的反應(yīng)性，即帶有FLAG標(biāo)簽的ILT7分子的表達強度，橫軸顯示的是各抗ILT7抗體的反應(yīng)性。圖7是一張圖片，該圖片顯示了通過FCM分析檢測制備的抗ILT7單克隆抗體中的兩個克隆對于人外周血淋巴細胞的反應(yīng)性。左側(cè)的三個圖片顯示的是#11的結(jié)果，右側(cè)的三個圖片顯示的是#17的結(jié)果。在左側(cè)圖表中，帶有ILT7標(biāo)記的每個軸表示的是ILT7弁11的反應(yīng)性。相似地，在右側(cè)圖表中，帶有ILT7標(biāo)記的每個軸表示的是ILT7#17的反應(yīng)性。圖8是制備的抗ILT7單克隆抗體ILT7#11和ILT7#17與人淋巴細胞的結(jié)合能力的檢測結(jié)果和與抗BDCA-2抗體的相應(yīng)結(jié)合能力的比較結(jié)果?？v軸顯示的是抗CD123抗體的反應(yīng)性，橫軸顯示的是每種抗體的反應(yīng)性。就是說，每種抗體結(jié)合CD123陽性細胞的一部分。該圖顯示了當(dāng)利用CpG和IFNa刺激淋巴細胞時分析反應(yīng)性得到的結(jié)果。圖9a是顯示了與ILT7分子具有高同源性的家族分子的氨基酸序列的圖片。主要顯示每個胞外區(qū)的氨基酸序列的比對；圖9b是圖9a的續(xù)圖；圖9c是圖9b的續(xù)圖。圖10是制備的抗ILT7單克隆抗體ILT7#11、ILT7#17針對ILT1分子、ILT2分子和ILT3分子的反應(yīng)性的檢測結(jié)果，該檢測是利用導(dǎo)入了該三種分子的表達載體的細胞進行的。上方的圖片顯示的是對反應(yīng)性的結(jié)果的再確定，該反應(yīng)性是針對共表達具有FLAG標(biāo)記的ILT7分子和FcRy的細胞的。下方的圖片顯示的是針對導(dǎo)入了ILT1、ILT2、ILT3以及FcRy的細胞的反應(yīng)性的結(jié)果(左側(cè)圖片ILT7#11，右側(cè)圖片ILT7#17)。橫軸顯示的是每種抗ILT-7抗體的反應(yīng)性。圖11是顯示了制備的抗ILT7單克隆抗體ILT7#11和ILT7#17對于人淋巴細胞的千擾素產(chǎn)生活性的作用的圖片。在該圖片中，橫軸顯示的是當(dāng)利用流感病毒刺激人淋巴細胞時培養(yǎng)上清中IFNot的濃度，縱軸顯示的是處理的抗體。術(shù)語"無感染"是指沒有用流感病毒刺激的細胞的結(jié)果。圖12是顯示了制備的抗ILT7單克隆抗體ILT7#37,ILT7#28和ILT7#33的CDC活性的圖片。使用從任何雜交瘤中獲得的抗ILT7單克隆抗體，當(dāng)抗體濃度為0.l!ag/毫升或更高時，均顯示了80%或更高的CDC活性。在除了抗ILT7單克隆抗體之外的抗體的例子中，沒有觀察到針對目標(biāo)細胞的CDC活性。圖13是顯示了制備的抗ILT7單克隆抗體ILT7#17、ILT7#26、ILT7#37、ILT7#28和ILT7#33在目標(biāo)細胞中的內(nèi)化(internalization)的圖片APC的熒光強度是在孵育之前出現(xiàn)在細胞表面的ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物的量的指示劑，并且無論ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物是在目標(biāo)細胞表面還是在孵育之后整合到細胞里都可以檢測到該復(fù)合物。另一方面，F(xiàn)ITC的熒光強度是在孵育之后仍然存在于細胞表面的ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物的量的指示劑。就是說，內(nèi)化會降低FITC的熒光強度。發(fā)明的具體實施例方式已經(jīng)有報道人ILT7(免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄本7)是在類漿樹突細胞中特異表達的分子(Gene.2004Apr28;331:159-64.;WO03/12061)。或者，已知可以使用人ILT7作為預(yù)測淋巴瘤的預(yù)測指示劑(W02005/24043)。然而，還沒有找到制備能夠識別人ILT7的抗體的方法。人ILT7由在SEQIDNO:2中顯示的499個氨基酸殘基構(gòu)成，并且該蛋白是在結(jié)構(gòu)上具有4個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和一個跨膜區(qū)(445-466;在SEQIDNO:2中顯示的從429到450)的1型跨膜蛋白。在包括N末端的444個氨基酸殘基中，16個氨基酸殘基(在SEQIDNO:2中顯示的從-15到-l)構(gòu)成信號序列，從17位到444位氨基酸殘基(在SEQIDNO:2中顯示的從1到428)構(gòu)成的胞外域。另一方面，C末端區(qū)是胞內(nèi)區(qū)。人ILT7的大部分是胞外域，由33個氨基酸殘基組成胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(從467到499;在SEQIDNO:2中顯示的從451到483)。目前還沒有預(yù)測與信號作用相關(guān)的基序出現(xiàn)在胞內(nèi)域中。人ILT7的全長氨基酸序列在SEQIDNO:2中顯示，并且編碼該氨基酸序列的cDNA堿基序列在SEQIDNO:1中顯示。此處，如SEQIDNO:1中顯示的成熟肽的編碼區(qū)(72).,(1520)不包含終止和起始密碼子(終始3卜、、7)。就是說，在SEQIDNO:1中的包含終止和起始密碼子的蛋白編碼序列是從24到1523?？梢哉J為配體信號是通過人ILT7與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的結(jié)合傳導(dǎo)到細胞的。例如，大部分Fc受體的Y鏈存在于細胞中。另外，胞內(nèi)域含有參與信號作用的免疫受體的以酪氨酸為基礎(chǔ)的激活基序(ITAM)。ITAM是氨基酸序列部分，該氨基酸序列部分在與諸如Fc受體這樣的免疫受體相關(guān)的轉(zhuǎn)接子分子中常見。諸如YxxL(SEQIDNO:76)這樣的絡(luò)氨酸磷酸化靶點的基序是包含在ITAM中的并且該信號是通過磷酸化傳導(dǎo)的。已知的在胞內(nèi)域含有ITAM的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的例子除了Fc受體的Y鏈還包括CD3;和DAP12。目前還沒有找到能夠結(jié)合人ILT7的配體。本發(fā)明的發(fā)明者通過基因表達分析確認了ILT7在人IPC的特異表達。本發(fā)明的發(fā)明者認為如果可以獲得能夠在免疫學(xué)上從其他的免疫分子中區(qū)分人ILT7的抗體，那么可以將該抗體用于針對IPC的研究中。然而，包括ILT7在內(nèi)在ILT家族中存在很多分子具有相似的結(jié)構(gòu)。諸如ILT1，ILT2，ILT3,ILT4,ILT5,ILT6或LIR-8這樣的分子含有高同源性的氨基酸序列，特別是在其胞外域中。因此，本發(fā)明的發(fā)明者認為利用含有組成胞外域的部分氨基酸序列作為免疫原很難獲得能夠區(qū)分這些分子的抗體。于是，本發(fā)明的發(fā)明者利用表達人ILT7的細胞作為免疫原來設(shè)法制備了針對人ILT7的抗體。然而，使用常規(guī)的表達載體不能夠?qū)е氯薎LT7的cDNA在動物細胞中的表達。已經(jīng)有報道具有與ILT7非常相似的結(jié)構(gòu)的ILT1分子與Fc受體的y鏈相關(guān)。就是說，當(dāng)將諸如RBL(大鼠噬堿細胞性白血病)細胞和P815(小鼠肥大細胞瘤)細胞這樣的表達Fc受體的y鏈的細胞作為宿主細胞時，可以觀察到ILT1在細胞表面的表達。然而，如果強迫ILT1在293這樣原本不表達Fc受體的Y鏈的細胞中表達，那么不能觀察到該蛋白在細胞表面的表達。另一方面，研究表明當(dāng)ILT1與Fc受體的y鏈共表達時可以確認ILT1在細胞表面的表達(NakajimaH.etal.，J.Immunology162:5-8.1999)。然而，還沒有用于制備ILT7抗體的免疫原的信息。例如，在該報道中，將導(dǎo)入了ILT1基因的RBL細胞作為免疫原來制備因的RBL細胞制備了ILT7抗體。然而，即使ILT7被迫在RBL細胞(P815)中表達，也沒有觀察到ILT7在細胞表面的表達，因此不能將該細胞用作抗原。本發(fā)明的發(fā)明者為了獲得能夠識別人ILT7的抗體進行了專門的研究。因此，本發(fā)明的發(fā)明者發(fā)現(xiàn)了可以使用指定的轉(zhuǎn)化細胞作為免疫原來制備所需抗體，并完成了本發(fā)明。就是說，本發(fā)明涉及能結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體，并且涉及含有其抗原結(jié)合區(qū)的片段。在本發(fā)明中，將人ILT7定義為在人IPC中表達的天然分子或者在免疫學(xué)上與人IPC中表達的ILT7等價的分子。在本發(fā)明中，可以通過例如以下方法確認抗體與人ILT7的結(jié)合。-基于與人細胞的反應(yīng)性的確認根據(jù)本發(fā)明的發(fā)明者的發(fā)現(xiàn)，在人IPC中觀察到了人ILT7的特異表達。最初，是將人ILT7作為在類漿樹突細胞中觀察到有表達的基因而分離的(Blood.2002100;3295-3303,Gene.2004Apr28;331:159-64.)。另外，還已知可以將其用作類漿樹突細胞的標(biāo)記(W003/12061)。^底設(shè)類漿樹突細胞和IPC是基本相同的細胞種群或者其大部分是相同的。因此在這些報道與本發(fā)明的發(fā)明者的發(fā)現(xiàn)之間沒有矛盾?？紤]到人ILT7這樣的表達謙，首先，本發(fā)明中能夠結(jié)合人ILT的抗體的一個重要性質(zhì)是與IPC或者類漿樹突細胞的，至少部分亞類(廿7'七少卜)的結(jié)合活性。可以使用各個細胞種群的特異的細胞表面標(biāo)記來確定某細胞是IPC還是類漿樹突細胞。例如，可以通過利用能結(jié)合細胞表面標(biāo)記的抗體和需要檢測結(jié)合活性的抗體進行的雙染色來確認該待測抗體與目標(biāo)細胞的結(jié)合。就是說，本發(fā)明中的IPC包含例如表達BDCA2的細胞。-基于與表達人ILT7基因的轉(zhuǎn)化細胞的反應(yīng)性的確認本發(fā)明的發(fā)明者發(fā)現(xiàn)當(dāng)人ILT7基因的表達是在一定條件下進行的時候，可以重構(gòu)在人IPC中表達的ILT7的免疫學(xué)性質(zhì)。因此，也可以基于抗體針對人為導(dǎo)入了編碼ILT7的基因的細胞的反應(yīng)性來確認針對人ILT7的反應(yīng)性。也就是，本發(fā)明涉及單克隆抗體或者含有該抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段，其中該抗體含有具有胞外域的氨基酸序列并且能夠結(jié)合與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子共表達的分子。此處，該胞外域包括與在SEQIDNO:2中顯示的氨基酸序列的N末端第17到第444位(在SEQIDNO:2中從1到428)相應(yīng)的氨基酸序列。例如，表達在人IPC中的ILT7的免疫學(xué)性質(zhì)可以在共轉(zhuǎn)染了兩種載體的細胞中維持，其中該兩種載體分別為含有編碼人ILT7的DNA的表達載體和含有編碼信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的DNA的表達載體。因此，在本發(fā)明中，優(yōu)選將共表達人ILT7和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的轉(zhuǎn)化細胞用作確認本發(fā)明中的抗體與人ILT7胞外域的親和性的細胞。在本發(fā)明中，當(dāng)利用轉(zhuǎn)化細胞來確認抗體的反應(yīng)性時，需要利用沒有被轉(zhuǎn)化的細胞作為對照。此外，利用只表達信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的相同宿主細胞作為對照，來確認沒有檢測到抗體的結(jié)合能力也是很重要的。在本發(fā)明中，可以將能夠誘導(dǎo)人ILT7在細胞表面表達的分子作為共表達的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子來使用。本發(fā)明中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子也可以被定義為在表達ILT7的細胞中，能夠?qū)⑻烊蝗薎LT7的免疫學(xué)性質(zhì)賦予ILT7分子的至少胞外域的分子。此處，天然人ILT7的免疫學(xué)性質(zhì)是指能夠被能結(jié)合人IPC的抗體所識別。具體地，優(yōu)選地使用Fc受體的Y鏈或者DAP12作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。在本發(fā)明中，特別優(yōu)選Fc受體的Y鏈作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。Fc受體的y鏈?zhǔn)怯蒘EQIDNO:16所示的氨基酸序列構(gòu)成的分子。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子也可以是片段，只要共表達的人ILT7定位在細胞表面。只要共表達的人ILT7定位在細胞表面，可以在如SEQIDNO:16所示的氨基酸序列上進行突變或者增加。也就是說，本發(fā)明提供制備細胞的方法，該細胞能夠制備能結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體，該方法包括以下步驟(1)給免疫動物施用細胞，其中，該細胞外源表達含有人ILT7的胞外域的蛋白和含有如SEQIDNO:16中所述的氨基酸序列的分子；和(2)從免疫動物的抗體生成細胞中選擇產(chǎn)生能夠結(jié)合人ILT7的抗體的抗體生成細胞。隨后，作為在本發(fā)明中能夠結(jié)合人ILT7的抗體，優(yōu)選地使用能與細胞種群交叉反應(yīng)的抗體，已知在該細胞種群中沒有觀察到除了ILT7以外的ILT家族其他成員的表達。具體地，作為在本發(fā)明中能夠結(jié)合人ILT7的抗體，優(yōu)選地使用能與指定細胞種群結(jié)合的抗體，其中該細胞種群已知沒有觀察到除了ILT7以外的ILT家族其他成員的表達，并且該觀察是在與確認對于IPC的結(jié)合的條件相同的條件下進行的。如已經(jīng)描述的，例如，ILT2和ILT3不僅在PDC中有表達，而且在從MDDC或者CD34陽性細胞中所獲得的DC中也有表達(Gene.2004Ap28;331:159-64.)。另一方面，由于IPC分化成樹突細胞，所以不能檢測到ILT7的表達。因此，在可以確認對于IPC的結(jié)合的條件下，不能檢測到與從MDDC或者CD34陽性細胞中獲得的DC結(jié)合的抗體也包括在本發(fā)明的能夠結(jié)合人ILT7的抗體中。已經(jīng)報道過下述其他ILT家族分子的表達圖式("TheKIRGeneCluster"Carrington,MaryandNorman,Paul,Bethesda(MD):NationalLibraryofMedidne(US),NCBI;2003,Gene.2004Apr28;331:159-64.)。因此，能結(jié)合人IPC或者PDC、并且不能確認與下述細胞結(jié)合的抗體也包括在具有針對ILT7的特異性的抗體中ILT1;骨髓系細胞(單核細胞、單核細胞來源DC、巨噬細胞)；ILT2;PDC、B細胞、CD34陽性細胞、來源于CD34P曰性細胞的DC以及來源于單核細胞的DC;ILT3;PDC和DC;ILT5;單核細胞，來源于CD34陽性細胞的DC和來源于單核細胞的DC;以及ILT8;單核細胞系。就是說，本發(fā)明中能夠結(jié)合人ILT7的胞外域的單克隆抗體優(yōu)選地包含具有以下免疫學(xué)性質(zhì)的單克隆抗體a)結(jié)合人IPC的單克隆抗體；b)該單克隆抗體在與人IPC結(jié)合的條件下，能夠確認不與從含有單核細胞、巨嗟細胞、B細胞、CD34陽性細胞和由這些細胞衍生出的樹突細胞的組中選擇出來的一種或多種細胞的結(jié)合。特別是，作為本發(fā)明的單克隆抗體，優(yōu)選的是在與人IPC結(jié)合的條件下，不能確認與單核細胞、巨噬細胞、B細胞、CD34陽性細胞和由這些細胞衍生出的樹突細胞結(jié)合的抗體?；蛘?，在本發(fā)明中能夠結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體優(yōu)選地包括具有以下免疫學(xué)性質(zhì)的單克隆抗體c)能夠結(jié)合共轉(zhuǎn)染了兩種表達載體的轉(zhuǎn)化細胞的單克隆抗體，其中這兩種表達載體分別為具有編碼人ILT7的DNA的表達載體和具有編碼信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的DNA的表達載體；d)在與c)中所描述的與共轉(zhuǎn)染細胞結(jié)合的條件下，可以不能確認與轉(zhuǎn)化之前的宿主細胞結(jié)合；或者本發(fā)明的單克隆抗體包括具有以下免疫學(xué)性質(zhì)的單克隆抗體e)在與c)中所描述的與共轉(zhuǎn)染細胞結(jié)合的條件下，不能確認與僅表達信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的宿主細胞結(jié)合。在本發(fā)明中，可以通過使用被迫表達每種其他ILT家族分子的細胞來確認抗ILT7的單克隆抗體與ILT家族的其他分子沒有交叉反應(yīng)的事實。也就是說，為了強迫表達，將編碼每種ILT家族分子的氨基酸序列的cDNA導(dǎo)入到合適的宿主細胞中。向獲得的宿主細胞中加入需要驗證交叉反應(yīng)的抗ILT7的單克隆抗體。然后，可以確認如果抗體與細胞的結(jié)合，那么該抗體能夠從免疫學(xué)上將ILT7與其他的ILT家族分子區(qū)分開來，其中在該細胞中沒有觀察到除了ILT7以外的ILT家族分子的表達。例如，在下述的例子中，確認了通過本發(fā)明的方法獲得的抗ILT7的單克隆抗體與ILT1,ILT2和ILT3沒有交叉反應(yīng)的事實。因此，本發(fā)明中的單克隆抗體的優(yōu)選的應(yīng)用實例是能夠結(jié)合ILT7的單克隆抗體，并且在相同條件下不能^r測到該單克隆抗體與ILT1，ILT2和ILT3的結(jié)合。具體地ILT2和ILT3是已經(jīng)證明在IPC中有表達的基因(Juetal.Gene331，159-164,2004)。然而，根據(jù)IPC的分化水平或者一定條件，這些分子各自對于每種細胞可能顯示出固有表達語，其中一定條件是諸如用病毒或者其他細胞因子刺激。使用能夠在免疫學(xué)上將這些ILT家族分子與ILT7區(qū)分開來的抗體，可以特異的測定ILT7表達的變化?？梢曰诶缌魇郊毎夹g(shù)的原理來確認需要確認結(jié)合能力的單克隆抗體對于各種類型細胞的結(jié)合。為了基于流式細胞技術(shù)的原理來確認抗體的反應(yīng)性，用可以產(chǎn)生可檢測的信號的分子或者原子團來預(yù)先標(biāo)記抗體是很方便的。通常使用熒光或者發(fā)光標(biāo)記?；诹魇郊毎夹g(shù)的原理可以使用熒光活化細胞分檢器(FACS)來分析熒光標(biāo)記抗體與細胞的結(jié)合。使用FACS可以有效地確認多種抗體與細胞的結(jié)合。具體的，例如以前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)能夠鑒定IPC的抗體A和需要分析其與IPC結(jié)合性質(zhì)的抗體B與含有IPC的細胞群同時反應(yīng)?？贵wA和抗體B預(yù)先標(biāo)記了能夠互相區(qū)分這些抗體的熒光信號。在相同的細胞群中檢測到兩種信號的例子中，可以確認這些抗體與相同的細胞群結(jié)合。換言之，抗體A和B具有相同的結(jié)合性質(zhì)。在抗體結(jié)合到不同的細胞群的例子中，很明顯兩種抗體具有不同的結(jié)合性質(zhì)。本發(fā)明中的優(yōu)選單克隆抗體包含由雜交瘤ILT7#11或ILT7#17產(chǎn)生的單克隆抗體。已經(jīng)于2005年10月21日在獨立行政法人國立產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利微生物保藏中心保藏了雜交瘤ILT7#11和雜交瘤ILT7#17，保藏號為FERMBP-10704和FERMBP-10705。具體保藏事項如下(a)保藏機構(gòu)名稱和地址名稱獨立行政法人國立產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利微生物保藏中心地址AISTTsukubaCentral6,1-1-1,Higashi,Tsukuba-shi,Ibaraki，Japan(zipcode305-8566)(b)保藏日期2005年10月21曰(c)保藏號FERMBP-10704(雜交瘤ILT7#11)(c)保藏號FERMBP-10705(雜交瘤ILT7#17)本發(fā)明的單克隆抗體也可以是含有其抗原結(jié)合區(qū)的片段。例如，可以將酶消化IgG所得的含有其抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段用作本發(fā)明中的抗體。具體的，可以通過用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化來獲得諸如Fab和F(ab，)2這樣的抗體片段。已經(jīng)眾所周知可以將這些抗體片段用作具有抗原親合性的抗體分子。或者，也可以使用通過基因重組構(gòu)建的抗體，只要能夠維持良好的抗原結(jié)合活性即可。通過基因重組構(gòu)建的抗體的例子包括嵌合抗體、CDR移植抗體、單鏈Fv、雙體(diabodies)、線性抗體以及由抗體片段形成的多特異性抗體。已經(jīng)眾所周知可以通過使用單克隆抗體或者能夠產(chǎn)生該抗體的抗體生成細胞來獲得這些抗體。可以使用一定的轉(zhuǎn)化細胞作為免疫原來獲得本發(fā)明的單克隆抗體。就是說，本發(fā)明涉及制備細胞的方法，其中該細胞產(chǎn)生能結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體，該方法包括以下步驟(1)給免疫動物施用細胞，其中該細胞能表達含有人ILT7胞外域的外源蛋白和與人ILT7結(jié)合的外源分子；以及(2)從免疫動物的抗體生成細胞中選擇產(chǎn)生能夠結(jié)合人ILT7的抗體的抗體生成細胞。培養(yǎng)如此獲得的抗體生成細胞或者永生化的抗體生成細胞，并且從該培養(yǎng)物中回收所需的單克隆抗體。關(guān)于永生化抗體生成細胞的方法，很多方法是已知的。在制備本發(fā)明的單克隆抗體的方法中，可以使用的分子的例子包括細胞膜蛋白，其中所述分子用于制備可以作為免疫原的轉(zhuǎn)化細胞、并能與人ILT7結(jié)合。其中，本發(fā)明優(yōu)選的細胞膜蛋白是定位在細胞膜上的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。"信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子"是指在細胞膜上與在胞外域具有受體結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)結(jié)合、將配體結(jié)合到受體的刺激轉(zhuǎn)導(dǎo)到細胞內(nèi)的分子。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的例子包括Fc受體y鏈，DAP12以及諸如此類的分子。例如，在本發(fā)明中優(yōu)選使用的細胞膜蛋白是Fc受體y鏈。人DAP12和Fc受體y鏈的氨基酸序列以及編碼該氨基酸序列的cDNA堿基序列是廣為人知的。人Fc受體Y鏈的堿基序列以及由該堿基序列編碼的氨基酸序列分別如SEQIDNO:15和16所示。在本發(fā)明中，用作免疫原的轉(zhuǎn)化細胞可以通過制備例如具有下述(a)和(b)的細胞來獲得(a)編碼含有人ILT7細胞外域的氨基酸序列的外源多核苷酸；以及(b)編碼Fc受體的y鏈的外源多核苦酸。在本發(fā)明中，外源多核苷酸指被人為導(dǎo)入到宿主細胞中的多核苷酸。當(dāng)使用人細胞作為宿主細胞時，人基因被導(dǎo)入到人細胞中。在該組合中，人為導(dǎo)入的多核香酸是外源多核苷酸。因此，外源多核苦酸的表達包括人ILT7或人Fc受體Y鏈的異位表達(異所生八発現(xiàn))。此處，"人ILT7的胞外域，，指SEQIDNO:2的氨基酸序列中、相當(dāng)于其胞外域的第17位到第444位的氨基酸序列(在SEQIDNO:2中顯示的從1到428)。在本發(fā)明中，作為含有人ILT7胞外域的氨基酸序列，優(yōu)選的是例如，從N末端側(cè)開始按照下述順序含有各區(qū)域的氨基酸序列或者，本發(fā)明中人ILT7胞外域的氨基酸序列也包括如下所述的部分缺失胞內(nèi)區(qū)的氨基酸序列。此外，本發(fā)明中人ILT7胞外域的氨基酸序列也包括如下所述的缺失胞內(nèi)區(qū)的結(jié)構(gòu)。在上述結(jié)構(gòu)中，除了胞外域以外的區(qū)域可以是從SEQIDNO:2所示的氨基酸序列中選擇出來的氨基酸序列，或者可以是與這些區(qū)域具有同源性的其他氨基選序列的組合。例如，組成信號序列、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)的氨基酸序列可以是除了ILT7以外的ILT家族分子的氨基酸序列。或者，可以是與除了人以外的其它物種的ILT家族的氨基酸序列的組合。此外，組成除了胞外域以外的區(qū)域的氨基酸序列中，可以包括在保持每個區(qū)域的功能的范圍內(nèi)的突變?；蛘撸梢詫⑵渌膮^(qū)域插入到任意區(qū)域之間。例如，可以將諸如FLAG這樣的表位標(biāo)簽插入到信號序列和胞外域之間。具體地，在翻譯成蛋白質(zhì)之后、轉(zhuǎn)移到細胞膜表面的過程中會通過加工去掉信號序列。因此，可以將任何誘導(dǎo)翻譯后的蛋白通過細胞膜的氨基酸序列用作信號序列。更具體地，優(yōu)選地將人ILT7的氨基酸序列(SEQIDNO:2)作為含有人ILT7胞外域的氨基酸序列來使用。因此，在本發(fā)明中可以將編碼含有上述結(jié)構(gòu)[信號序列+胞外域+跨膜區(qū)+胞內(nèi)區(qū)]的氨基酸序列的任意堿基序列作為(a)中描述的外源多核苦酸中的多核苦酸使用。例如，SEQIDNO:2的氨基酸序列是由SEQIDNO:l中所述的堿基序列編碼的。在本發(fā)明中，為了獲得可以用作免疫原的轉(zhuǎn)化細胞，可表達的帶有上述的(a)和(b)多核苦酸的表達載體可以被導(dǎo)入到合適的宿主細胞中?？梢栽谝粋€載體或者不同載體上帶有(a)和(b)的多核苷酸。當(dāng)不同的載體上帶有不同的多核苦酸時，利用兩種載體共轉(zhuǎn)染宿主細胞。本發(fā)明中，優(yōu)選的宿主細胞包括哺乳動物細胞。宿主細胞的具體例子包括人、猴子、小鼠或者大鼠來源的細胞。特別優(yōu)選的宿主細胞是來源于人的細胞。例如，本發(fā)明中來源于人的宿主細胞優(yōu)選使用293T細胞?？梢詮腁TCCCRL-11268獲得293T細胞。另外，也可以將來源于免疫動物的細胞用作宿主細胞。當(dāng)將來源于免疫動物的細胞用作免疫原時，對于宿主細胞的免疫反應(yīng)很少。因為這樣的理由，可以有效地獲得針對外源表達的ILT7的胞外域的抗體。因此，例如當(dāng)將小鼠用作免疫動物時，也可以將來源于小鼠的細胞用作宿主細胞?？梢酝ㄟ^可在宿主細胞中誘導(dǎo)表達的載體將上述多核苦酸導(dǎo)入到細胞內(nèi)。可以使用可在哺乳動物細胞中誘導(dǎo)表達的市售載體?？梢詫⒅T如pCMV陽Script(R)載體、pSG5載體(由Stratagene生產(chǎn))、pcDNA3.1(由Invitrogen生產(chǎn))這樣的表達載體用于本發(fā)明。如果需要，可以將如此獲得的轉(zhuǎn)化細胞和諸如佐劑這樣的附加成分一起施用于免疫動物?？梢允褂玫淖魟┑睦影ǜナ贤耆魟?，等等。在使用小鼠作為免疫動物的例子中，可以施用的轉(zhuǎn)化細胞的數(shù)目在104到109的范圍之內(nèi)，更具體的是104到106個細胞。通常，多倍劑量給藥是每隔一段時間間隔就給藥一次免疫原，直到抗體滴度升高。例如，在短期免疫的例子中，每隔2到4天就施用一次轉(zhuǎn)化細胞，更具體的是每隔3天。在施用兩或三次后，可以回收抗體生成細胞。或者，可以每周施用一次并且在施用五或六次之后回收抗體生成細胞。在本發(fā)明中，對回收的抗體生成細胞進行克隆化來得到單克隆抗體。為了克隆化，優(yōu)選將抗體生成細胞永生化。例如，可以使用以雜交瘤法為代表的細胞融合法、或者利用EB病毒(EBV)的轉(zhuǎn)化作為使抗體生成細胞永生化的方法作為抗體生成細胞，一個細胞可以產(chǎn)生一種抗體。因此，建立來源于一個細胞的細胞種群(即克隆化)，就可以獲得單克隆抗體。雜交瘤方法是指使抗體生成細胞與合適的細胞系融合、永生化，再進行克隆化的方法。可以利用諸如有限稀釋法這樣的技術(shù)來克隆化永生化抗體生成細胞。已知有很多的細胞系可以用于雜交瘤方法。這些細胞系在淋巴細胞的永生化方面表現(xiàn)良好，并且具有所需的用于選擇融合細胞的多種遺傳標(biāo)記。此外，當(dāng)需要獲得抗體生成細胞時，也可以使用缺乏抗體產(chǎn)生能力的細胞系。例如，在小鼠或大鼠細胞融合方法中，廣泛使用小鼠骨髓瘤P3x63Ag8.653(ATCCCRL曙1580)和P3x63Ag8U.l(ATCCCRL-1597)作為細胞系。通常，雜交瘤是通過同種細胞的融合來制備的，然而也可以通過親緣關(guān)系較近的異種的異質(zhì)雜交瘤來獲得單克隆抗體。細胞融合的具體方案已經(jīng)廣為人知。就是說，將免疫動物的抗體生成細胞與合適的融合伴估進行混合來進行細胞融合。可用的抗體生成細胞的例子包括脾細胞，從淋巴結(jié)收集到的淋巴細胞以及外周血B細胞。作為融合伴倡，可以使用前述的各種細胞系?？梢允褂镁垡叶挤椒ê碗娙诤戏椒▉磉M行細胞融合。此后，以融合細胞的選擇標(biāo)記為基礎(chǔ)，選擇成功融合的細胞。例如，當(dāng)使用HAT敏感細胞系進行細胞融合時，選擇在HAT培養(yǎng)基中生長的細胞作為成功融合的細胞。此外，已經(jīng)確認了由選擇出來的細胞產(chǎn)生的抗體具有所需的反應(yīng)性?；诳贵w反應(yīng)性對每一種雜交瘤進行篩選。就是說，可以通過上述的方法來選擇能夠結(jié)合人ILT7的雜交瘤產(chǎn)生的抗體。優(yōu)選地，先對選擇出來的雜交瘤進行亞克隆然后對所需抗體進行最終的確認，將經(jīng)過確認的抗體選擇出來作為本發(fā)明的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體?；毎姆磻?yīng)性來選擇所需的雜交瘤?？梢曰诿庖叻治龅脑韥頇z測能夠結(jié)合細胞的抗體。例如，可以使用將細胞作為抗原進行的ELISA來檢測所需抗體。具體的，向固定有作為免疫原的或轉(zhuǎn)化細胞的支撐物中加入雜交瘤的培養(yǎng)上清。在該例子中培養(yǎng)上清液中含有所需抗體，固定在支撐物上的細胞會募集抗體。然后，從培養(yǎng)上清中分離固定相，如果需要，對其進行清洗。其后，可以檢測募集在固定相上的抗體?？梢允褂媚軌蜃R別抗體的抗體來檢測抗體。例如，可以通過抗小鼠免疫球蛋白抗體來檢測小鼠抗體。如果標(biāo)記了能夠識別抗體的抗體，那么可以很容易進行這種檢測。可用的標(biāo)記的例子包括酶，焚光染料，發(fā)光染料以及諸如此類的。另一方面，可以使用微粒和微孔板的內(nèi)壁作為固定細胞的支撐物?？梢酝ㄟ^物理吸附作用將細胞固定在由塑料制成的微?；蛘呷萜鞯谋砻妗９潭毎捎玫闹挝锏睦影ň郾揭蚁┲瞥傻闹樽雍头磻?yīng)器。在雜交瘤的選擇中，有時可以預(yù)測產(chǎn)生了針對用作免疫原的轉(zhuǎn)化細胞的宿主細胞的、而不是針對ILT7的抗體。例如，在實施例中展示的，在以人細胞為免疫原并且以小鼠作為免疫動物的例子中，可以預(yù)計人細胞是作為外源物質(zhì)被識別從而產(chǎn)生了與之結(jié)合的抗體。在本發(fā)明中，希望獲得能夠識別人ILT7的抗體。因此，沒有必要獲得能夠識別除了人ILT7以外其他人細胞抗原的抗體。在篩選中，為了去除能夠產(chǎn)生這樣的抗體的雜交瘤，可以在確認抗體反應(yīng)性之前對非所需的抗體進行吸收?？梢酝ㄟ^與推測存在的抗體結(jié)合的抗原來吸收非所需抗體。具體的，例如，可以通過不能;f企測到人ILT7表達的細胞來吸收能夠識別除了人ILT7以外其他人細胞抗原的抗體。在本發(fā)明中，優(yōu)選地使用作為免疫原的宿主細胞來作為吸收非所需抗體的抗原?；蛘?，可以使用不表達人ILT7的胞外域而表達與ILT7結(jié)合的分子的宿主細胞作為吸收抗體的抗原。作為已經(jīng)確認了其與抗原結(jié)合活性的單克隆抗體，如果需要，可以確認其對于IPC活性的實際影響?？梢酝ㄟ^諸如以下所述的方法來確認其對于IPC的影響。作為本發(fā)明的單克隆抗體，培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤并且從得到的培養(yǎng)物中回收本發(fā)明的單克隆抗體?？梢栽隗w內(nèi)或體外培養(yǎng)該雜交瘤。在體外的例子中，可以通過諸如RPMI1640此類的已知培養(yǎng)基來培養(yǎng)該雜交瘤。該雜交瘤分泌的免疫球蛋白會在培養(yǎng)物上清中累積。因此，如果需要，可以通過收集并且純化培養(yǎng)物上清來獲得本發(fā)明的單克隆抗體。不在培養(yǎng)基中加入血清，會使對于免疫球蛋白的純化更容易。然而，出于使該雜交瘤快速擴增以及增加抗體產(chǎn)量的目的，可以在培養(yǎng)基中添加10%的胎牛血清。也可以在體內(nèi)培養(yǎng)該雜交瘤。具體的，可以通過將該雜交瘤接種到棵鼠的腹腔內(nèi)的方法來實現(xiàn)腹膜內(nèi)培養(yǎng)。單克隆抗體會在腹水內(nèi)累積。因此，如果按照需要來獲得并純化腹水就可以制備所需的單克隆抗體。依照預(yù)期的用途可以對獲得的單克隆抗體進行合適的修飾或處理?？梢酝ㄟ^從雜交瘤中獲得編碼抗體的抗原結(jié)合區(qū)的cDNA并將其插入到合適的表達載體中來表達本發(fā)明的單克隆抗體。獲得編碼抗體可變區(qū)的cDNA并在合適的宿主細胞中表達該cDNA的技術(shù)是已知的。另外，通過是已知的。發(fā)明中優(yōu)選的單克隆抗體包括由雜交瘤#11(保藏號FERMBP-10704)、雜交瘤#17(保藏號FERMBP-10705)或雜交瘤弁37所產(chǎn)生的單克隆抗體。組成這些單克隆抗體的可變區(qū)的氨基酸序列以及編碼該氨基酸序列的cDNA堿基序列如下所示。因此，例如，本發(fā)明中優(yōu)選的是通過將這些可變區(qū)與其他免疫球蛋白的恒定區(qū)連接起來形成的嵌合抗體。在序列列表中描述的氨基酸序列中，從第1位到C末端的氨基酸序列組成了成熟的蛋白。就是說，對于每種氨基酸序列來說從第1位到C末端的連續(xù)的氨基酸序列是每種氨基酸序列的成熟序列。另一方面，由從N末端到-1的數(shù)值表示的氨基酸序列是信號序列。重鏈可變區(qū)輕鏈可變區(qū)#11SEQIDNO:38SEQIDNO:40(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:39SEQIDNO:41(氨基酸序列)(氨基酸序列)#17SEQIDNO:42SEQIDNO:44(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:43SEQIDNO:45(氨基酸序列)(氨基酸序列)#3SEQIDNO:46SEQIDNO:487(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:47SEQIDNO:49(氨基酸序列)(氨基酸序列)例如，通過將這些可變區(qū)基因分別地連接到人IgGl重鏈恒定區(qū)和人IgK輕鏈恒定區(qū)來制備小鼠(可變區(qū))-人(恒定區(qū))嵌合抗體。這樣嵌合抗體的氨基酸序列和編碼該抗體的堿基序列分別如下所述。用這些序列表示的嵌合抗體顯示了本發(fā)明的抗ILT7單克隆抗體的構(gòu)建物的優(yōu)選實施方案。在以下嵌合抗體的氨基酸序列中，從N末端到-1的氨基酸序列對應(yīng)信號序列，并且從1到C末端的氨基酸序列對應(yīng)成熟蛋白。就是說，含有重鏈和輕鏈的嵌合抗體在本發(fā)明中是優(yōu)選的，其中該嵌合抗體含有每種氨基酸序列的從1到C末端的氨基酸序列。重鏈輕鏈#1SEQIDNO:50SEQIDNO:521(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:51SEQIDNO:53(氨基酸序列)(氨基酸序列)#1SEQIDNO:54SEQIDNO:567(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:55SEQIDNO:57(氨基酸序列)(氨基酸序列)此外，也可以將單克隆抗體的抗原結(jié)合活性移植到其他的免疫球蛋白上。免疫球蛋白的可變區(qū)含有互補性決定區(qū)(CDR)和框架區(qū)。每種免疫球蛋白抗原結(jié)合性是由CDR決定的，并且框架維持了抗原結(jié)合區(qū)的結(jié)構(gòu)。CDR的氨基酸序列具有極其豐富的多樣性，然而框架部分的氨基酸序列是高度保守的。已知通過將組成CDR的氨基酸序列整合到其他免疫球蛋白分子的框架區(qū)的方法可以對抗原結(jié)合活性進行移植。已經(jīng)確立了通過這樣的過程將不同免疫球蛋白的抗原結(jié)合性移植到人免疫球蛋白的方法。本發(fā)明中，"抗原結(jié)合區(qū)，，可以包含被移植到框架區(qū)的CDR。因此，指定單克隆抗體的"包含抗原結(jié)合區(qū)的片段"包括含有可變區(qū)的人免疫球蛋白的片段，其中該單克隆抗體的CDR被移植到該可變區(qū)上。例如，上述的可變區(qū)的氨基酸序列分別含有以下的氨基酸序列(SEQIDNO)作為CDR。CDR1CDR2CDR3#11重鏈SDYAWN(58)Y1SYSGSTSYNPSLKSR(59)SPPYYAMDY(60)#11輕鏈KASQDVGTAVA(61)WASTRHT(62)QQYSSYPLT(63)#17重鏈SYWIH(64)RIYPGTGSTYYNEKFKG(65)YPTYDWYFDV(66)#17輕鏈RASQSISNYLH(67)YASQSIS(68)QQSNSWPLT(69)#37重鏈SDYA麗(70)YISYSGSTSYNPSLKSR(71)ALPLPWFAY(72)#37輕鏈KASQDVGTAVA(73)WASTRHT(74)QQYSSYPYT(75)基于編碼上述氨基酸序列的堿基序列以及編碼人免疫球蛋白的框架(FR)的堿基序列的信息，可以設(shè)計引物并且可以擴增cDNA，其中該cDNA的堿基序列是通過將該兩種堿基序列連接起來形成的。對于每種框架的操作是重復(fù)的，并且可以構(gòu)建將小鼠的CDR1、CDR2和CDR3連接到人FR上所形成的可變區(qū)。此外，當(dāng)將編碼人免疫球蛋白的恒定區(qū)的堿基序列按照需要連接起來的時候，可以獲得具有該恒定區(qū)的人化抗體。作為含有上述可變區(qū)的嵌合抗體或者移植了由CDR組成的可變區(qū)的人化抗體，本發(fā)明的抗體優(yōu)選地含有具有來源于IgG或IgM的恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的發(fā)明者確認了針對ILT7的單克隆抗體顯示了針對ILT7表達細胞的CDC作用。因此，具有來源于IgG或IgM的恒定區(qū)的抗體由于其CDC作用顯示出針對ILT7表達細胞的細胞毒性?？梢允褂眠@樣的抗體來抑制諸如IPC這樣的ILT7表達細胞的數(shù)目。可以通過使用編碼能夠識別ILT7的嵌合抗體或者人化抗體的多核苦酸、并利用基因工程來制備本發(fā)明所提供的能夠識別ILT7的嵌合抗體或者人化抗體。例如，可以將以下SEQIDNO所述的堿基序列的多核苷酸和編碼氨基酸序列的多核苷酸作為編碼可變區(qū)#11或#17的多核苷酸來使用，其中該氨基酸序列是組成每種氨基酸序列的成熟蛋白的。對于每一種氨基酸序列的從1到C末端的連續(xù)的氨基酸序列對應(yīng)一種成熟蛋白。在每種成熟蛋白作為分離蛋白表達的例子中，優(yōu)選的是將分泌信號置于每種氨基酸序列的N末端。例如，當(dāng)這樣的蛋白在動物細胞表達時，在這些SEQIDNO所顯示的氨基酸序列中可以將從N末端到-1的氨基酸序列作為信號序列來使用?；蛘?，通過使用能夠保證免疫球蛋白分泌的任意信號序列，這些可變區(qū)可以作為成熟蛋白被分泌。#11SEQIDNO:50(堿基序列)SEQIDNO:52(堿基序列)#17SEQIDNO:54(堿基序列)SEQIDNO:56(堿基序列)在如上所述的相同的方法中，對于編碼人化抗體的多核香酸，可以通過使用編碼具有信號序列的蛋白的堿基序列來制備表達人化抗體的多核香酸，其中該信號序列是被加到蛋白的N末端的。當(dāng)重鏈和輕鏈?zhǔn)怯刹煌妮d體攜帶的時候，將兩種載體共轉(zhuǎn)染到相同的宿主細胞中。用由每種載體表達的重鏈和輕鏈來構(gòu)建具有兩條鏈的免疫球蛋白?；蛘咭部梢栽谕惠d體上帶有編碼重鏈的多核苷酸和編碼輕鏈的多核苷酸。轉(zhuǎn)化了帶有兩種多核香酸的載體的宿主細胞可以表達重鏈和輕鏈并且可以制備具有兩種鏈的免疫球蛋白。使用能夠表達抗體基因的宿主載體系統(tǒng)，可以將這些多核苷酸表達為抗體。此外，在通過將重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)連接起來的方法將其表達為單一蛋白分子的例子中，可以將信號序列置于蛋白分子的N末端。這樣的抗體分子的已知的例子包括scFv分子，在該scFv分子中通過連接子將重鏈可變區(qū)與輕鏈可變區(qū)連接起來。本發(fā)明的單克隆抗體包含每種如此制備的單克隆抗體。換言之，本發(fā)明中的單克隆抗體包括由免疫球蛋白組成的單克隆抗體，該免疫球蛋白含有由多核苷酸所編碼的抗原結(jié)合區(qū)，該多核苷酸是由編碼上訴單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的cDNA衍生來的。如前所述，可以使用ILT1基因強制表達的RBL細胞作為獲得ILT1抗體的免疫原。然而，不能夠確認ILT7在RBL細胞(P815)表面的表達，因此不能將其作為免疫原。本發(fā)明的發(fā)明者發(fā)現(xiàn)了可以通過將人ILT7與其他與人ILT7結(jié)合的細胞膜蛋白共表達來誘導(dǎo)人ILT7在細胞表面的表達。于是，本發(fā)明的發(fā)明者發(fā)現(xiàn)了可以通過利用轉(zhuǎn)化細胞作為免疫原來獲得能結(jié)合人IPC的抗體并完成了本發(fā)明，其中該轉(zhuǎn)化細胞的表達是通過上述方法誘導(dǎo)的。就是說，本發(fā)明提供能夠用于制備能結(jié)合人ILT7胞外域的抗體的免疫原，并且包含動物細胞或其細胞膜成分，在該動物細胞中攜帶以下的多核香酸用于外源表達，其中該多核苷酸包括(a)編碼含有人ILT7的胞外域的氨基酸序列的多核苷酸；以及(b)編碼Fc受體的y鏈的多核苷酸。自從1998發(fā)現(xiàn)了人ILT7的結(jié)構(gòu)以來已經(jīng)過了六年或者更長的時間了。然而，仍然沒有獲得能夠特異地識別ILT7的抗體。通過使用本發(fā)明的免疫原首次提供了能夠識別人ILT7的抗體。就是說，本發(fā)明提供了能夠識別人ILT7的抗體，該抗體是通過以下的步驟獲得的(l)對免疫動物施用細胞，該細胞能夠外源表達含有人ILT7胞外域的蛋白和與人ILT7結(jié)合的分子；(2)從免疫動物的抗體生成細胞中選擇能夠產(chǎn)生能夠結(jié)合人ILT7的抗體的抗體生成細胞；并且(3)培養(yǎng)步驟(2)中選擇出來的抗體生成細胞，并且從培養(yǎng)物中回收能夠識別人ILT7的抗體。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人ILT7在人IPC中有特異性的表達。本發(fā)明的發(fā)明者利用SAGE對基因表達進行了分析，也確認了人ILT7在人IPC中的特異表達。然而，在以前的報道中，基于mRNA對兩個例子中的ILT7的表達水平進行了分析。由于不能提供能夠檢測人ILT7的抗體，所以沒有按照慣例來分析蛋白的表達狀態(tài)。通過提供本發(fā)明的能結(jié)合人ILT7胞外域的抗體實現(xiàn)了對于人ILT7蛋白的分析。本發(fā)明的發(fā)明者實際上確認了能夠結(jié)合到基于本發(fā)明的人ILT7的胞外域的單克隆抗體能夠特異的檢測人IPC。就是說，本發(fā)明涉及檢測千擾素生成細胞的方法，該方法包括以下步驟向受試細胞中加入能結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體或者含有其抗原結(jié)合區(qū)的片段；并且檢測結(jié)合到細胞上的單克隆抗體或者含有其抗原結(jié)合區(qū)的片段。通過對于基于本發(fā)明的人ILT7的檢測可以確定特定細胞是否是IPC。就是說，本發(fā)明提供了利用人ILT7作為指示劑來鑒定IPC的方法?；蛘?，通過分離檢測到人ILT7的細胞可以分離人IPC，其中檢測人ILT7的方法是基于本發(fā)明的。就是說，本發(fā)明提供了利用人ILT7作為指示劑來分離IPC的方法?；谕ㄟ^人ILT7抗體進行的分析，確認了ILT7在IPC中的表達水平降低了，其中該IPC的分化是由CpG誘導(dǎo)的。就是說，通過利用ILT7作為指示劑可以特異的檢測在其分化被誘導(dǎo)之前的IPC。換言之，本發(fā)明的單克隆抗體可以特別的用于在IPC分化成樹突細胞之前檢測該細胞。可以將此處所使用的術(shù)語"分化之前的IPC"定義為具有產(chǎn)生干擾素能力的細胞群。在本發(fā)明中，可以預(yù)先標(biāo)記能夠結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體或者含有其抗原結(jié)合區(qū)域的片段。例如，通過標(biāo)記發(fā)光染料或者熒光染料可以很容易的檢測抗體。更具體的，將制備的焚光染料標(biāo)記的抗體加入到可能含有IPC的細胞群中然后可以通過利用熒光染料作為指示劑來檢測本發(fā)明的抗體結(jié)合的細胞。進一步地，可以通過分離檢測到焚光染料的細胞來分離IPC?；贔ACS的原理可以很容易的進行一系列的步驟。或者，可以預(yù)先將本發(fā)明的抗體結(jié)合到諸如磁性顆粒這樣的固相支持物上。結(jié)合到固定相支持物上的抗體會識別人ILT7然后IPC被捕獲到固定相支持物上。因此，可以對IPC進行檢測和分離?；诒景l(fā)明可以提供對于檢測IPC的方法必需的抗體作為檢測IPC的試劑。就是說，本發(fā)明提供用于檢測干擾素生成細胞的試劑，該試劑含有能夠結(jié)合人ILT7的胞外域的單克隆抗體或含有其抗原結(jié)合區(qū)的片段。除了將該檢測本發(fā)明的IPC的試劑用作抗體以外還可以將其與正對照或負對照組合使用。例如，可以將表達人ILT7的胞外域并且被用作免疫原的轉(zhuǎn)化細胞以及從人體內(nèi)獲得的IPC用作正對照。通常，從外周血中只能獲得很少的人IPC。因此，特別優(yōu)選的在本發(fā)明的試劑中使用轉(zhuǎn)化細胞作為正對照。另一方面，可以使用任意不能表達人ILT7的細胞作為負對照。就是說，本發(fā)明提供檢測人IPC的試劑盒，該試劑盒包括(a)能夠結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體或者含有其抗原結(jié)合區(qū)域的片段；以及(b)表達外源蛋白和外源分子的細胞，該外源蛋白含有人ILT7的胞外域，該外源分子能與人ILT7結(jié)合。本發(fā)明的發(fā)明者分析了能結(jié)合人ILT7胞外域的抗體對于IPC的作用。因此，可以確認能夠結(jié)合人ILT7胞外域的抗體抑制IPC的活性。就是說，本發(fā)明涉及抑制干擾素生成細胞活性的方法，該方法包括向干擾素生成細胞中加入以下任意成分的步驟(a)能夠結(jié)合人ILT7并且抑制干擾素生成細胞活性的單克隆抗體、或者含有其抗原結(jié)合區(qū)的片段；以及(b)移植了(a)所述的單克隆抗體的互補性決定區(qū)的免疫球蛋白、或者其含有抗原結(jié)合區(qū)的片段。或者，本發(fā)明涉及抑制活體組織中的千擾素生成細胞活性的方法，該方法包括向活體組織中加入以下任意成分的步驟(a)能夠結(jié)合人ILT7并且抑制干擾素生成細胞活性的單克隆抗體、或者其含有抗原結(jié)合區(qū)的片段；(b)含有移植了(a)所述的單克隆抗體的互補性決定區(qū)的免疫球蛋白、或者其含有抗原結(jié)合區(qū)的片段；以及(c)編碼(a)或(b)所述成分的多核苷酸。此處，"干擾素生成細胞(InterferonProducingcell,IPC)"是指具有產(chǎn)生IFN能力的、并且在細胞表面表達ILT7的細胞。在下文中，除非特別提及，"IPC，，不僅包括樹突細胞的前體細胞還包括具有產(chǎn)生IFN并且在細胞表面表達ILT7的能力的細胞。鑒定此類IPC的方法已經(jīng)廣為人知?？梢岳靡恍┘毎砻鏄?biāo)記作為指示劑來區(qū)分IPC和其他血細胞。具體的，人IPC的細月包表面才示i己物i普i口下所述(Shortman，K.andLiu，YJ.NatureReviews2:151-161，2002)。近年來，特定的報道建議將BDCA-2陽性的細胞定義為IPC(Dzionek，A.etal.J.Immunol.165:6037-6046,2000.)。CD4陽性，CD123陽性，譜系(CD3、CD14、CD16、CD19、CD20、CD56)陰性以及CD1lc陰性因此，也可以說IPC是具有這些已知標(biāo)記的表達譜并且具有產(chǎn)生IFN能力的細胞。此外，甚至即使細胞是一群具有這些已知標(biāo)記的表達圖式不同的表達語的細胞，只要活體組織中的細胞具有產(chǎn)生IFN能力，該細胞就也包括在IPC中。此外，人IPC的共同特征如下-與漿細胞相似-具有平滑細胞表面的圓細胞-核相對大-在病毒感染的過程中，在短時間內(nèi)會產(chǎn)生大量的l型干擾素。-在病毒感染之后分化成樹突細胞。"抑制IPC的活性"是指對于至少一項IPC功能的抑制。IPC的功能的例子包括產(chǎn)生IFN以及細胞存活。也可以將細胞存活說成是細胞數(shù)目。因此，在抑制這兩個功能中的一項或者兩項的例子中，可以說抑制了IPC的活性。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由IPC產(chǎn)生的1型IFN能夠?qū)е露喾N疾病。因此，對IPC的數(shù)目和IFN的產(chǎn)生的抑制可以用于這些疾病的內(nèi)科治療方法。例如，已經(jīng)指出了多種自身免疫病的病理狀態(tài)與IFNa之間的關(guān)系。大部分IFNoc是由IPC產(chǎn)生的。因此，可以通過抑制IFNa的產(chǎn)生來緩解由IFNa導(dǎo)致的病理狀態(tài)。此處，"抑制由IPC產(chǎn)生的IFN，，是指抑制至少一種IPC產(chǎn)生的IFN的產(chǎn)生。本發(fā)明中優(yōu)選的IFN是1型IFN。其中IFNa是重要的。就是說，本發(fā)明涉及抑制IFN產(chǎn)生的抑制劑，該抑制劑包括作為活性成分的能夠結(jié)合ILT7胞外域的抗體?；蛘撸景l(fā)明提供能夠抑制IFN的產(chǎn)生的方法，該方法包括給藥能夠結(jié)合ILT7胞外域的抗體的步驟。此外，本發(fā)明涉及能夠結(jié)合ILT7胞外域的抗體在生產(chǎn)用于抑制IFN產(chǎn)生的藥用成分的用途。在IPC之中包含以少量細胞產(chǎn)生大量的IFN的細胞。例如，通過病毒或諸如此類的條件來刺激樹突細胞的前體細胞，該細胞會產(chǎn)生活體中所產(chǎn)生的大部分IFN中。對于能夠產(chǎn)生很多IFN的IPC的數(shù)目的抑制能夠抑制IFN的產(chǎn)生。因此，通過抑制IPC的數(shù)目可以減輕由IFNa所引起的病理狀態(tài)。已經(jīng)確認了在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，抗ILT7的單克隆抗體會結(jié)合到ILT7表達細胞上，然后通過互補依賴細胞毒性(CDC)發(fā)揮了細胞毒性的作用。CDC作用是抗體藥物的一種重要的機理。由于本發(fā)明的抗ILT7的單克隆抗體的CDC作用，該抗體也具有針對諸如IPC此類的ILT7表達細月包的潛在細胞毒性。就是說，對于抗ILT7的單克隆抗體，除了在優(yōu)選的實施方案中的對于IFN產(chǎn)生的抑制的機理以外，可以預(yù)期通過針對IPC的纟田月包毒性來獲得對于IFN的產(chǎn)生的抑制作用。可以通過基于前述的方法來獲得本發(fā)明所使用的能夠識別人ILT7的月包外域的抗體。本發(fā)明中的抗體可以是任意級別的?？贵w來源的物種也沒有特殊限制。此外，可以將含有抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段用作抗體。例如，可以將通過酶解IgG所獲得的含有其抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段用作本發(fā)明中的抗體。具體的，可以通過利用木瓜蛋白酶或者胃蛋白酶來進行酶解以獲得諸如Fab和F(ab，)2這樣的抗體片段。已經(jīng)廣為人知可以將這些抗體片#殳用作具有抗體親和力的抗體分子?；蛘?，只要能夠維持良好的抗原結(jié)合活性，也可以使用通過遺傳重組技術(shù)構(gòu)建的抗體。通過遺傳重組構(gòu)建的抗體的例子包括嵌合抗體、CDR移植抗體單鏈Fv、雙體、線性抗體以及由抗體片段組成的多特異性抗體。已知通過利用單克隆抗體可以獲得這些抗體。在本發(fā)明中，如果需要可以對抗體進行修飾。按照本發(fā)明，能夠識別人ILT7的胞外域的抗體具有對IPC的活性的抑制作用。就是說，可以預(yù)期抗體本身具有針對IPC的細胞毒性。展示了潛在的效應(yīng)子活性的抗體的亞類是已知的。或者，通過使用細胞毒試劑來修飾抗體可以進一步的增強其對IPC活性的抑制效果。細胞毒試劑的例子如下所述。毒素假單胞菌內(nèi)毒素(PE)、白喉毒素、蓖麻毒素放射性同位素Tc99m、Sr89、I131、Y90抗腫瘤試劑加利剎霉素，絲裂霉素，紫杉醇可以通過雙功能試劑將由蛋白組成的毒素連接到抗體或其片段上?；蛘?，將編碼毒素的基因連接到編碼抗體的基因上，也可以獲得兩條基因的融合蛋白。將抗體與同位素連接起來的方法也是已知的。例如，利用螯化試劑將放射性同位素標(biāo)記到抗體上的方法是已知的。此外，可以利用糖鏈或者雙功能試劑將抗腫瘤試劑連接到抗體上。本發(fā)明的發(fā)明者已經(jīng)確認了一種現(xiàn)象，該現(xiàn)象是結(jié)合到表達在細胞表面的ILT7上的單克隆抗體會在結(jié)合之后整合到細胞之內(nèi)(內(nèi)化作用)。因此，可以通過向ILT7表達細胞中加入連接了本發(fā)明的細胞毒試劑的抗體來把該細胞毒試劑轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi)。就是說，本發(fā)明提供了ILT7表達細胞的活性抑制劑，該抑制劑包括連接了作為活性成分的細胞毒試劑的抗ILT7的單克隆抗體?；蛘?，本發(fā)明涉及抗ILT7的單克隆抗體在生產(chǎn)ILT7表達細胞的活性抑制劑中的用途，該抗體上連接了細胞毒試劑。此外，本發(fā)明提供抑制ILT7表達細胞活性的方法，該方法包括給藥連接了細胞毒試劑的抗ILT7的單克隆抗體的步驟。在本發(fā)明中，也可以將人為改變過結(jié)構(gòu)的抗體作為活性成分來使用。例如，為了提高抗體的細胞毒性和穩(wěn)定性而對其進行修飾的方法是已知的。具體的，對其重鏈的糖鏈進行了修飾的免疫球蛋白是已知的(Shinkawa，T.etal.J.Biol.Chem.278:3466-3473.2003.)。通過修飾糖鏈增強了免疫球蛋白的抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒性(ADCC)的活性?；蛘撸揎椓薋c區(qū)的氨基酸序列的免疫球蛋白也是已知的。就是說，通過人為增加免疫球蛋白對于Fc受體的結(jié)合活性增強了ADCC的活性(Shield,RL.etal.J.Biol.Chem.276;6591-6604，2001.)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象結(jié)合到Fc受體的IgG會立即整合到細胞內(nèi)。然后IgG結(jié)合到表達在內(nèi)涵體內(nèi)的Fc受體上，并且會被再次釋放到血液中。具有針對Fc受體高結(jié)合活性的IgG在整合到細胞內(nèi)之后，具有更多的機會被釋放到血液中。因此，延長了IgG在血液中的維持時間(Hinton，PR.etal.JBiolChem.279:6213-6216.2004)。除此之外，有報道稱對于Fc區(qū)氨基酸序列的修飾可以引起互補依賴的細胞毒性(CDC)的活性的改變?？梢詫⑦@些改良的抗體作為本發(fā)明中的抗體使用。向IPC中加入能夠結(jié)合人ILT7胞外域的抗體，可以抑制IPC的活性。因此，可以將這些抗體用作抑制IPC的活性的抑制劑或者用于抑制IPC的活性的方法。就是說，本發(fā)明提供了IPC的活性抑制劑，該抑制劑包括從由(a)到(c)組成的組中選擇出來的至少一種成分，該成分是作為活性成分使用的?；蛘?，本發(fā)明涉及抑制IPC的活性的方法，該方法包括給藥從由以下的(a)到(c)組成的組中選擇出來的至少一種成分的步驟。此外，本發(fā)明涉及從由以下的(a)到(c)組成的組中選擇出來的至少一種成分的用于制備IPC活性抑制劑的用途(a)能夠結(jié)合人ILT7的單克隆抗體、或者含有其抗原結(jié)合區(qū)的片段；(b)移植了(a)中描述的抗體的互補性決定區(qū)的免疫球蛋白、或其含有抗原結(jié)合區(qū)的片段；以及Cc)編碼(a)或(b)描述的成分的多核苦酸。在本發(fā)明中，可以將能夠識別人ILT7的胞外域的單克隆抗體用作能夠抑制IPC活性的單克隆抗體。在本發(fā)明中，可以使用一種或多種單克隆抗體。例如，在本發(fā)明中可以混合使用一種或多種能夠識別人ILT7的胞外域的單克隆抗體?？梢酝ㄟ^下述的方法確i^抗體對IPC的IFN產(chǎn)生活性的抑制作用。用病毒刺激IPC會產(chǎn)生大量的IFN。在利用病毒刺激IPC之前，之后或者同時，向IPC中加入抗體。將得到的每種IPC的產(chǎn)生IFN的能力與相應(yīng)的沒有加入抗體的每種對照的能力進行比較。通過測定IPC的培養(yǎng)上清中含有的IFNa或IFNp來評估生成IFN的能力。作為比較的結(jié)果，當(dāng)加入了抗體的組的上清中的IFN的量明顯降低的時候可以確認所測試的抗體具有抑制IFN生成能力的作用。測定IFN的方法是已知的。在活體中IPC生成大多數(shù)IFN。因此，可以通過抑制IPC的生成IFN的能力來調(diào)節(jié)活體中的IFN的生成狀態(tài)。在本發(fā)明中，IPC的活性包括維持IPC的數(shù)目。因此，本發(fā)明中對于IPC的活性的抑制包括抑制IPC的數(shù)目。當(dāng)確認了在抗體存在時IPC的數(shù)目受到了抑制，可以發(fā)現(xiàn)抗體在抑制IPC的活性。當(dāng)測量IFN的生成時，可以使用來源于相同的動物品種的無活性的免疫球蛋白作為測定抗體活性的比較對照組?？梢酝ㄟ^細胞計數(shù)來在數(shù)量上比較IPC的數(shù)目?？梢酝ㄟ^FACS或者顯微鏡來計算細胞的數(shù)目。此外，有報道稱由于病毒感染或此類的刺激，IPC可以分化成Th2也被稱作樹突細胞2(DC2)。如果可以抑制由于病毒刺激IPC所產(chǎn)生的IFN，那么也可以抑制其分化成Th2。因此，可以預(yù)期能夠抑制IFN的產(chǎn)生的本發(fā)明的單克隆抗體，對于多種過敏疾病可能也具有治療的作用。當(dāng)向與獲得抗體的組織種類不同的宿主中加入能夠識別人ILT7的胞外域的抗體時，需要將抗體加工成不會被宿主識別成外源成分的形態(tài)。例如，通過將抗體加工成以下的分子的方法使得免疫球蛋白不會很容易的被識別成外源物質(zhì)。下述的對免疫球蛋白加工的技術(shù)是已知的。含有抗原結(jié)合區(qū)的片4殳在夾乏恒定區(qū)。(MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,thirdedition,AcademicPressLimited.1995;AntibodyEngineering,APracticalApproach,IRLPRESS,1996)-含有單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)和宿主的免疫球蛋白的恒定區(qū)的嵌合抗體("GeneExpressionExperimentManual",IsaoIshida,TamieAndo，eds.，Kodansha,1994)-CDR替代抗體，在該抗體中用單克隆抗體的互補決定區(qū)(CDR)替換宿主的免疫3求蛋白的CDR("GeneExpressionExperimentManual",IsaoIshida,TamieAndo，eds.,Kodansha，1994)或者，當(dāng)使用非人動物時，可以通過將人抗體基因整合到作為免疫動物的非人動物中的方法來獲得人抗體。例如，已經(jīng)將具有人抗體基因的轉(zhuǎn)基因小鼠作為免疫動物付諸實際應(yīng)用來制備人抗體(Ishidaetal.，CloningandStemCells,4:85-95，2002)?？梢酝ㄟ^使用此類動物以及上訴的免疫原來獲得能夠識別ILT7的人抗體。優(yōu)選的是對人給藥人抗體?；蛘?，可以通過噬菌體展示方法來獲得人免疫球蛋白的可變區(qū)基因(McCaffertyJ.etal.，Nature348:552-554，1990;KretzschmarTet.al.，CurrpinBiotechnol.2002Dec;13(6):598-602.)。在噬菌體展示方法中，將編碼人免疫球蛋白可變區(qū)的基因整合到噬菌體基因中。也可以通過使用多種免疫球蛋白基因作為調(diào)整來制備噬菌體庫。噬菌體會將可變區(qū)作為組成噬菌體的蛋白的融合蛋白來表達。由噬菌體表達在噬菌體表面的可變區(qū)保持了與抗原的結(jié)合活性。考慮到從噬菌體庫中篩選表達了具有所需結(jié)合活性的可變區(qū)的噬菌體，因此，選擇出能夠結(jié)合抗原或者表達抗原的細胞的噬菌體。此外，如此篩選得到的噬菌體顆粒保持了編碼具有所需結(jié)合活性的可變區(qū)的基因。就是說，在噬菌體展示方法中，可以使用可變區(qū)的結(jié)合活性作為指示劑來獲得編碼具有所需結(jié)合活性的可變區(qū)的基因。在本發(fā)明中的IPC的活性抑制劑中或者抑制IPC的活性的方法中，可抗體片段作為蛋白或多核苷酸編碼的蛋白進行給藥。在多核苷酸的給藥中，需要使用載體來表達所需蛋白，在該載體中將編碼所需蛋白的多核苷酸置于合適的啟動子的調(diào)控之下。也可以將增強子和終止子插入到載體中。帶有組成免疫球蛋白的重鏈和輕鏈的基因以及能夠表達免疫球蛋白分子的基因的載體是已知的?？梢酝ㄟ^將能夠表達免疫球蛋白的載體導(dǎo)入到細胞中來給藥。在對活體組織的給藥中，對于可以通過對活體組織給藥來感染細胞的載體可以直接給藥。先從活體組織中分離出淋巴細胞，然后將載體導(dǎo)入到能夠被重新注射回活體組織的淋巴細胞中(回體法)。在基于本發(fā)明IPC的活性抑制劑中或者抑制IPC的活性的方法中，對于活體組織給藥單克隆抗體的量來說通常給藥免疫球蛋白的范圍為每公斤體重0.5mg到100mg，例如，每7>斤體重1mg到50mg，優(yōu)選的是每乂>斤體重2mg到10mg。對于活體組織給藥抗體的間隔可以進行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以便在治療的過程中能夠維持活體組織中免疫球蛋白的有效濃度。具體的，例如，給藥抗體的間隔可以是1到2周。給藥途徑是可選的。本領(lǐng)域4支術(shù)人員可以適當(dāng)?shù)剡x擇在治療中有效地給藥途徑。其具體的例子包括口服給藥或者非經(jīng)腸道給藥?？贵w可以進行全身給藥或者局部給藥，例如，通過靜脈注射，肌肉注射，腹腔內(nèi)注射，皮下注射或者此類方法。本發(fā)明中非經(jīng)腸道給藥的合適的劑型包括注射液劑，栓劑以及噴劑。當(dāng)向細胞中加入抗體時，向培養(yǎng)基中加入免疫球蛋白，加入的濃度的范圍通常為lpg/毫升，優(yōu)選的是lOiig/毫升，更優(yōu)選的是50pg/毫升，再進一步優(yōu)選的是0.5mg/毫升。在本發(fā)明中的IPC的活性抑制劑中或者抑制IPC的活性的方法中，可以通過可選的方法對活體組織進行單克隆抗體的給藥。通常，是將單克隆抗體與藥學(xué)上可接受的支持物進行混合。如果需要，可以將單克隆抗體與諸如稠化劑、穩(wěn)定劑、防腐劑以及增溶劑此類的添加試劑混合。這樣的支持物或者添加試劑的例子包括乳糖、檸檬酸、硬脂酸、硬脂酸鎂、蔗糖，淀粉、滑石粉、凝膠、瓊脂、植物油以及乙二醇。術(shù)語"藥學(xué)上可接受"是指各個政府的管理機構(gòu)所認可的或者列在各個國家藥典上的或者被用于動物，哺乳動物以及更具體的人的藥典所普遍公認的。也可以通過單劑量或多劑量的凍干粉末或者藥片的形式提供本發(fā)明的IPC的活性抑制劑。此外，可以將凍干粉末或者藥片與使用注射用無菌水，生理鹽水溶液或者緩沖溶液聯(lián)合使用以便在給藥之前將合成物溶解成所需的濃度。此外，當(dāng)以能夠表達免疫球蛋白的載體的形式進行單克隆抗體的給藥的時候，共轉(zhuǎn)染具有重鏈和輕鏈的質(zhì)粒，每種質(zhì)粒的給藥范圍為0.1到10mg，例如，l到5mg每公斤體重。為了將質(zhì)粒導(dǎo)入到細胞內(nèi)，所使用的載體的濃度為1到5|^/106細胞。下文中將結(jié)合實施例來具體描述本發(fā)明。實施例實施例1A.對ILT7表達的分析A-l)利用SAGE庫進行分析通過SAGETM(SerialAnalysisofGeneExpression;基因表達連續(xù)分析)方法將基因在人單核細胞，IPC以及HSV處理過的IPC中的表達進行比較和分析。分析的方法如下。利用細胞分選儀從人外周血中分離了作為CD14陽性細胞的單核細胞，并且分離了作為BDCA-4陽性細胞的IPC。此外，在存在單純皰滲病毒(HSV)的情況下將IPC培養(yǎng)了12小時，制備了分化的IPC。利用I-SAGETM試劑盒(Invitrogen生產(chǎn))從各種細胞中獲得了RNA，然后制備了SAGE庫。利用SAGE分析軟件(由Invitrogen生產(chǎn))分析了獲得的大約100,000個標(biāo)簽的堿基序列的數(shù)據(jù)。其結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了已知基因ILT7(GenBankAcc#NM—012276),對于該基因，單核細胞/IPC/IPC+HSV的得分是0/16/0，即，該基因顯示IPC特異性表達。ILT7是由SEQIDNO:1中顯示的堿基序列所編碼的、具有免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域的膜蛋白(圖2(a))。已經(jīng)報道了ILT7的mRNA在IPC中的表達(Blood100,3295-3303(2002))。A-2)RT隱PCR更加詳細的考察了ILT7在血細胞中的表達。利用細胞分選儀從人外周血中分離了每種細胞。從每種分離的細胞群中分離了RNA,以該RNA為模板合成了cDNA。利用所得的cDNA按照通常的方法進行了定量PCR，并且分析了ILT7的mRNA的表達水平。所使用的PCR條件以及引物的堿基序歹ij如下正向引物5，CTCCAACCCCTACCTGCTGTC3，(SEQIDNO:3)反向引物5'TTCCCAAGGCTCCACCACTCT3，(SEQIDNO:4)94。C3分鐘，1個循環(huán)，25個循環(huán)72。C6分鐘，1個循環(huán)當(dāng)對單核細胞、IPC、HSV刺激過的IPC、CD19陽性細胞(即B細胞)、CD3陽性細胞(即T細胞)、用PMA刺激過的T細胞以及CD56陽性細胞(即NK細胞)進行考察時，發(fā)現(xiàn)了ILT7在IPC中的特異表達(圖l(a))。A-3)定量RT-PCR此外，利用ABIPRISM7000(由AppliedBiosystem生產(chǎn))進行定量PCR,檢測了在其他組織和器官中的表達。作為cDNA模板(cDNA^凈A)，使用了BDTMMTC多組織cDNA模板(MTCmultipletissuecDNApanel;HumanI;Cat.No,636742,Humanimmune;Cat.No.636748,Humanbloodfractions;Cat.No.636750;均由BectonDickinson制造)以及與上述2)相同的血細胞來源的cDNA。所使用的引物的堿基序列如下ILT7的正向引物5，CCTCAATCCAGCACAAAAGAAGT3，(SEQIDNO:5)ILT7的反向引物5，CGGATGAGATTCTCCACTGTGTAA3'(SEQIDNO:6)GAPDH的正向引物5，CCACCCATGGCAAATTCC3'(SEQIDNO:7)GAPDH的反向引物5，TGGGATTTCCATTGATGACAAG3，(SEQIDNO:8)利用ABIPRISM7000(由AppliedBiosystem生產(chǎn))和SYBRgreenPCR預(yù)混合試劑盒(由相同公司生產(chǎn))進行了PCR。利用SequenceDetectionSystemSoftware(由相同公司生產(chǎn))進行了分析。反應(yīng)條件如下第1步50。C2分鐘，1個循環(huán)第2步95IM0分鐘，1個循環(huán)第3步(95。C15秒，60。Cl分鐘)，40個循環(huán)通過將ILT7基因針對磷酸-3-甘油醛脫氬酶(GAPDH)基因進行標(biāo)準(zhǔn)化，比較了ILT7基因在每種組織中的表達，其中已知該磷酸-3-甘油醛脫氫酶(GAPDH)基因的表達是穩(wěn)定的。其結(jié)果，觀察到了ILT7在除了淋巴組織以外的其他器官中沒有表達，其特異地在IPC中表達。B.ILT7和FcRy表達載體的制備此后，為了表達ILT7蛋白進行了基因的克隆和表達載體的制備。B-1)ILT7基因的克隆從IPC中抽提多聚(A)+RNA，所述IPC是從人外周血分離的，并利用寡聚dT引物和SuperScriptChoiceSystemforcDNASynthesiskit合成了cDNA。在合成的cDNA上連接了EcoRI接頭，然后將該cDNA連接到了用EcoRI酶切之后的pME18S載體上，其結(jié)果是制備了人IPCcDNA庫。利用制備的cDNA庫作為模板，利用具有以下堿基序列的引物通過PCR的方法擴增了ILT7基因。在PCR反應(yīng)中使用了l活力單位的KODPlusDNA聚合酶(由TOYOBOCO.，LTD制造)。反應(yīng)條件為94。C2分鐘，1個循環(huán)；然后，[94。C15秒，55。C30秒，68。C2分鐘]，25個循環(huán)。正向引物5，CAGGGCCAGGAGGAGGAGATG3，(SEQIDNO:9)反向引物5'TCAGCAGACACTTCCCCAACT3，(SEQIDNO:10)利用1%的瓊脂糖凝膠進行電泳對擴增出的約2kb的ILT7cDNA片段進行了分離和回收，然后利用ZeroBluntTOPOPCR克隆試劑盒(由Invitrogen生產(chǎn))將該片段克隆到了pCR4BIunt-TOPO質(zhì)粒載體(由Invitrogen生產(chǎn))中。對獲得的基因的堿基序列進行了分析，確認獲得了在SEQIDNO:1中顯示的目的ILT7基因。B-2)具有FLAG標(biāo)簽的ILT7表達載體的制備分別構(gòu)建了如下表達質(zhì)粒，所述表達質(zhì)粒表達在ILT7的N末端或C末端融合了FLAG標(biāo)簽所形成的蛋白。ILT7融合了標(biāo)簽，通過^r測該標(biāo)簽可以確認ILT7蛋白的表達。利用l)中得到的ILT7基因作為模板，并且使用具有下述堿基序列的引物，通過PCR的方法擴增了目的序列。在PCR反應(yīng)中使用了1活力單位的KODPlusDNA聚合酶(由TOYOBOCO.,LTD制造)。反應(yīng)條件為94。C2分鐘，l個循環(huán)；然后，[94。C15秒，55。C30秒，68°C2分鐘],25個循環(huán)。對于N-FLAGILT7正向引物(SEQIDNO:11):5，CCGetcgagATGACCCTCATTCTCACAAGCCTGCTCTTCTTTGGGCTGAGCCTGGGC眼TTACAAG反向引物(SEQIDNO:12):AGGCTC3'對于C-FLAGILT7正向引物(SEQIDNO:13):ACAAGC3'反向引物(SEQIDNO:14):CTAGactagtTCAGATCTGTTCCCACCGetcgagATGACCCTCATTCTCCTAGactagtTCAfCTTATCGTCGTC在上述的堿基序列中，在括號中的具有下劃線的部分顯示的是編碼FLAG標(biāo)簽的堿基序列，并且每組小寫字母顯示的是限制性內(nèi)切酶Xhol或Spel的酶切位點。用Xhol和Spel酶切了PCR擴增出的DNA片段，然后利用凝膠電泳分離了該片段?；厥樟思s2kb的DNA片段，然后將該片段連接到了按照上述相同方法用Xhol和Spel酶切過的pME18X載體之中。這樣，分別構(gòu)建了能夠表達目的蛋白的兩種質(zhì)粒，即pME18X-N-FLAGILT7和pME18X-C-FLAGILT7。B-3)對FcRy基因的克隆FcRy蛋白被認為是能夠與ILT7蛋白結(jié)合的蛋白。該分子是具有在SEQIDNO:15和16中顯示的堿基序列和氨基酸序列的基因(GenbankAcc#NM—004106,J.Biol.Chem.265，6448-6452(1990))。該分子是組成FcsRI(高親和性IgE受體)的分子(丫鏈)。雖然也將其命名為FcsRIy，但這里將該分子稱為FcRy。在這方面，已知該分子也是FcyR或FcaR的組成分子。通過以下顯示的PCR方法克隆了該基因，制備了表達載體。利用l)中制備的人IPCcDNA庫作為模板，并且利用具有以下堿基序列的引物，通過PCR方法擴增了FcRy基因。在PCR反應(yīng)中使用了l活力單位的KODPlusDNA聚合酶(由TOYOBOCO.,LTD制造)。反應(yīng)條件為94。C2分鐘，1個循環(huán)；然后，[94。C15秒，55。C30秒，68。Cl分鐘]，25個循環(huán)。正向引物5，CCCAAGATGATTCCAGCAGTG3，(SEQIDNO:17)反向引物5，GGAAGAACCAGAAGCCAAAGA3，(SEQIDNO:18)利用2%瓊脂糖凝膠對擴增得到的約0.3kb的FcRycDNA片段進行了分離和回收，然后利用ZeroBluntTOPOPCR克隆試劑盒(由Invitrogen生產(chǎn))將該片段克隆到了pCR4Blunt-TOPO質(zhì)粒載體(由Invitrogen生產(chǎn))中。對所獲得的該基因的堿基序列進行了分析，確認已經(jīng)克隆了SEQIDNO:15中所示的目的FcRy基因。B-4)具有Myc標(biāo)簽的FcRy表達載體的制備構(gòu)建了能夠表達C末端連接了Myc標(biāo)簽的蛋白的表達質(zhì)粒，以確認FcRy蛋白的表達。利用上述3)中制備的FcRy基因作為模板，并且利用具有以下堿基序列的引物進行PCR,擴增了目的序列。在PCR反應(yīng)中使用了1活力單位的KODPlusDNA聚合酶(由TOYOBOCO,,LTD制造)。。反應(yīng)條件為94。C2分鐘，l個循環(huán)；[94。C15秒，55。C30秒，68。Cl分鐘]，25個循環(huán)。正向引物(SEQIDNO:19):5，CCGetcgagATGATTCCAGCAGTGGTCTTG3，反向引物(SEQIDNO:20):5，CTAGactagtCTA「CAGATCCTCTT在上述的堿基序列中，在括號中的具有下劃線的部分顯示的是編碼Myc標(biāo)簽的堿基序列，并且每組小寫字母顯示的是限制性內(nèi)切酶Xhol或Spel的酶切位點。用XhoI和SpeI酶切了PCR擴增出的DNA片段，然后利用凝膠電泳分離了該片段?；厥樟舜蠹s0.3kb的DNA片段，然后將該片段連接到了按照上述相同方法用Xhol和Spel酶切過的pME18X載體之中。這樣，構(gòu)建了能夠表達所需蛋白的質(zhì)粒，即pME18X-Myc-FcRy。C.ILT7在動物細胞中的表達利用上述制備的表達載體檢測了ILT7在動物細胞中的表達。C-l)在293T細胞中的表達使用EffecteneTransfectionKit(由Qiagen制造)將以下五種組合的DNA導(dǎo)入到293T細胞(7x105個細胞)中。導(dǎo)入兩天之后，進行了流式細胞技術(shù)分析(FCM分析)。(1)pME18X-N畫FLAGILT72嗎(2)pME18X-C畫FLAGILT72嗎(3)pME18X-N-FLAGILT71|ig+pME18X-Myc-FcRy1pg(4)pME18X-C-FLAGILT71嗎+pME18X-Myc畫FcRy1嗎(5)pME18X-Myc-FcRy2嗎按照如以下實施例2中A-4所述的相同的方法進行了FCM分析。使用連接了Cy3的抗FLAG抗體(由Sigma生產(chǎn))進行了反應(yīng)，并且使用FACScan(由BectonDickinson制造)進行了分析。其結(jié)果，明確了當(dāng)單獨反應(yīng)時，僅有少量ILT7在細胞表面表達；然而，當(dāng)與FcRy共存的時候，ILT7在細胞外強表達(圖3)。而且，已知小鼠的FcRy與人的FcRy具有高度的同源性，但當(dāng)使用內(nèi)源性表達小鼠FcRy的p815細胞(小鼠肥大細胞瘤)作為宿主時，沒有觀察到ILT7的表達。C-2)通過免疫沉淀反應(yīng)和Western印跡的方法進行分析按照以下的方法確認了在細胞表面上ILT7是與FcRy共同表達的。對以上述(1)(5)的組合的形式共表達兩種基因的293T細胞，在免疫沉淀反應(yīng)后，使用各種抗體進行了分析。像上述l)那樣，將DNA導(dǎo)入了293T細胞(7乂105個細胞)，兩天后回收了293T細胞。用裂解緩沖液(0.5。/。Triton，150mMNaCl)溶解了細胞組分，然后將該溶液冰浴了20分鐘。其后，使用針頭(27G)進行了數(shù)次吹吸，然后15Krpm離心了20分鐘。向200嗎得到的裂解產(chǎn)物中加入了抗myc抗體(2嗎，由Santacruz生物4支術(shù)生產(chǎn))或抗FLAG抗體(2ng，由Sigma生產(chǎn))，然后在4'C旋轉(zhuǎn)攪拌了4小時。然后，向其中加入了ProteinA/GSepharose4FastFlowmix(由Amershambioscience生產(chǎn))，在4。C旋轉(zhuǎn)攪拌了1小時。然后，利用具有以下的成分的裂解緩沖液洗滌了所得的沉淀成分3次。裂解緩沖液0.5%TritonX-100,50mMHEPES(pH7.6),150mMNaCl，1mMEDTA，10%甘油，1mMDTT，2mMPMSF,1pg/毫升抑肽酶，1pg/毫升亮抑肽酶，1嗎/毫升胃酶抑制劑A，0.1pg/毫升糜蛋白酶抑制劑，1mMNa3V04，0.1mMP-甘油磷酸酯向洗滌過的沉淀加入SDS-PAGE樣品緩沖液，煮沸5分鐘并且離心，然后利用10%SDS凝膠進行了電泳。在電泳之后，按照常規(guī)的方法將樣品從膠上轉(zhuǎn)移到了PVDF膜上(Immobilon-p-轉(zhuǎn)移膜由Millipore生產(chǎn))。利用抗FLAG抗體和抗myc抗體進行印跡實驗。由于在每個免疫沉淀組分中觀察到了其存在，所以確認了ILT7與FcRy二者在293T細胞中是結(jié)合存在的(圖4)。C-3)糖鏈的分析由于在Western分析中觀察到了幾條ILT7的帶，所以考察了ILT7被糖基化了的可能性。利用抗FLAG抗體按照在l)和2)中所描述的方法對200|ig的293T細胞裂解物進行了免疫沉淀反應(yīng)，其中該293T細胞表達N-FLAGILT7和Myc-FcR"y。此后，用60pL具有以下組分的N-糖芬酶緩沖液重懸了沉淀，并且向兩個管中各分裝了30pL。N-糖苷酶緩沖液lOmMEDTA,0.2%SDS，0.5%TritonX100,含有1%2-巰基乙醇的PBS(磷酸鹽緩沖液)然后向一個管子中加入3pL的N糖苷酶(弁1365177，由Roche生產(chǎn))3個活力單位，37"C反應(yīng)了15小時。并且，向其中加入了7liL上樣緩沖液，100。C加熱5分鐘，然后用10%SDS凝膠進行了電泳。電泳之后，將膠轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，加入4)中所描述的抗ILT7多克隆抗體lpg，并在4。C反應(yīng)了一夜。用TBS-T緩沖液洗滌，并且與100，000倍稀釋的HRP標(biāo)記的抗兔抗體(由Jackson制造)在室溫的條件下進行了反應(yīng)。然后利用ECLWesternBlottingDetectionSystem(由Amershambioscience生產(chǎn))進4亍了顯色。結(jié)果是,通過N糖苷酶處理之后表觀分子量下降了。因此，認為ILT7上帶有糖鏈(圖5)。C-4)抗ILT7多克隆抗體的制備按照如下方法制備了在3)中使用的抗ILT7多克隆抗體?；瘜W(xué)合成了對應(yīng)于ILT7的C末端的23個氨基酸的肽(CSQEANSRKDNAPFRVVEPWEQI;SEQIDNO:21)，并且用作為載體的KLH蛋白結(jié)合了該肽，作為免疫原。利用混合了弗氏完全佐劑的免疫原，對兔子進行了皮內(nèi)免疫。在總共六次免疫之后(每周進行一次)，確認了血清中抗體滴度的增加并且收集了全血。然后，利用相同序列的肽親和柱對一部分血清進行了親和純化，作為抗ILT7多克隆抗體。實施例2A.抗ILT7單克隆抗體的制備A-l)免疫原的制備按照如下描述的方法將基因?qū)氲?93T細胞中，通過該方法制備了免疫原。向樸滿100mm/CollagenCoatedDish(培養(yǎng)涂鋪盤)(IWAKI)的整個底部的3mL的opti-MEM(GIBCO)中，加入46,4|ag轉(zhuǎn)基因(pME18X-C-FLAGILT723.2嗎以及pMElSX-Myc-FcRY23.21^)，并且進行混合。此后，將轉(zhuǎn)基因溶液放在一邊，用3mL的opti-MEM稀釋58|iL的Lipofectamine(商品名)2000(Invitrogen)，室溫下放置5分鐘，通過這樣的步驟制備了Lipofectamine溶液。此后，向含有轉(zhuǎn)基因溶液的培養(yǎng)皿中力口入Lipofectamine溶液并進行了混合。在室溫下放置了20分鐘，利用含有10。/。FBS(胎牛血清)的DMEM培養(yǎng)基(SIGMA)將的293T-細胞稀釋成1x106個細胞/mL的細胞溶液，然后向該培養(yǎng)皿中輕柔地加入了該細胞溶液10mL。37。C下，在C02培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)48小時，然后通過移液管回收了細胞，作為免疫原用轉(zhuǎn)染子(卜，〉義:7工夕夕y卜)。A-2)雜交瘤的制備在進行細胞免疫前一天，對四只Balb/c雌性小鼠(四周大)的雙腳腳底各注射了50iuL乳劑進行免疫，該乳劑是通過將200^iLPBS與200pL佐劑(完全佐劑FREUND)(RM606-1，由MitsubishiKagakuIatron，Inc.生產(chǎn))混合制備的。在此后一天，將2x107個細胞懸浮在400的PBS中，各利用50jaL進行了免疫。此后，每隔三天進行了第二次和第三次免疫。在第三次免疫三天以后，按如下方法進行了細胞融合。從免疫小鼠的雙腳淋巴結(jié)中收集了細胞。將其與培養(yǎng)在含有10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基(SIGMA)中的小鼠骨髓瘤細胞P3-X63-Ag8-Ul混合，使得從淋巴結(jié)和骨髓瘤獲得的細胞的比例為2:1~10:1，然后通過離心分離回收了細胞。向所得的細胞組份中加入了用等量RPMI1640培養(yǎng)基稀釋過的G4000(MERCK)，進行了細胞融合。在洗滌細胞之后，用含有添加物(supplement)的160mL的15%FBS-HAT培養(yǎng)基重懸，然后將該混合物以200^L/孔接種到了16個96孔板中。三天之后更換了培養(yǎng)基。觀察到克隆形成一到兩周之后，進行了初步篩選。A-3)通過CellELISA的方法篩選雜交瘤通過以下的CellELISA對產(chǎn)生目標(biāo)抗體的雜交瘤進行了篩選。以1x107個細胞每個96孔板的濃度使用按照在l)中制備的細胞，利用0.5%BSA/2mMEDTA/PBS溶液重懸，然后以100^L/孔的量分裝到CellELISA用培養(yǎng)板(NUNC24957096VNWPS)中。在4'C以2，000rpm的速度進行了2分鐘的離心，然后棄去了上清。以50^L/孔的量加入了取樣過的上清，室溫下反應(yīng)了30分鐘。進行了兩次洗滌操作，其中該洗滌操作如下進行向每孔中加入0.5%BSA/2mM-EDTA/PBS，在4°C以2,000rpm的速度離心2分鐘，然后棄去上清。洗滌之后向每孔中加入了50^L的10，OOO倍稀釋的過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體(IM0819;Beckmancoulter),并反應(yīng)了30分鐘。使用0.5y。BSA/2mM-EDTA/PBS進行了3次洗滌操作，然后加入顯色溶液，測定OD450nm-620nm，選擇呈陽性反應(yīng)的孔。A-4)利用流式細胞技術(shù)(FCM)分析考察抗體反應(yīng)性利用流式細胞技術(shù)(FCM)分析的方法分析了雜交瘤培養(yǎng)上清。用0.5%BSA/2mMEDTA/PBS重懸了上述l)中制備的細胞，然后以每個樣品lx105的量收集到離心管中，此后加入每種培養(yǎng)上清40(iL，并且在室溫下反應(yīng)30分鐘。進行了兩次洗滌操作，該洗滌操作如下向每管中加入1ml0.5%BSA/2mM-EDTA/PBS,在4°C以1,200rpm的速度離心3分鐘，然后棄去上清。洗滌之后向每孔中加入了40|iL的100倍稀釋的FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體(IM0819;Beckmancoulter),在室溫下反應(yīng)了30分鐘。進行了兩次使用0.5%BSA/2mM-EDTA/PBS的洗滌操作，然后利用流式細胞4義FC500(Beckmancoulter)進行了分析。選擇了產(chǎn)生抗體的雜交瘤，其中該抗體不與宿主細胞產(chǎn)生反應(yīng)，而特異地與導(dǎo)入了基因的細胞產(chǎn)生反應(yīng)。利用極限稀釋法克隆化了選擇出來的雜交瘤，并且獲得了產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤#11和#17。B.抗ILT-7的抗體反應(yīng)性的考察在293T細胞中，按照實施例1中的C-1)所描述的相同的方法對N末端連接了FLAG標(biāo)簽的ILT7和FcRy分子進行了共表達。然后，利用FACScan(BectonDickinson)通過FCM分析確認了實施例2中所獲得的抗體的反應(yīng)性。其結(jié)果，確認了由八中獲得的雜交瘤#11和#17產(chǎn)生的抗體均對于導(dǎo)入了ILT7基因并表達ILT7的細胞有反應(yīng)(圖6(b))。此外，利用聚蔗糖從人外周血中分離了淋巴細胞，然后利用制備的抗ILT-7抗體和PE標(biāo)記的抗BDCA-2抗體(Miltenyi)對其進行了雙染色。然后，考察了該抗體對于淋巴細胞的反應(yīng)性。其結(jié)果，檢測到了由雜交瘤#11和#17所產(chǎn)生的單克隆抗體對于BDCA-2陽性細胞的結(jié)合。就是說，確認了兩種抗體都識別人IPC上表達的ILT7分子(圖6(a))。將該單克隆抗體分別命名為抗ILT-7抗體#11和抗ILT-7抗體#17。還進行了更詳細的分析。利用制備的抗ILT-7抗體，抗譜系1抗體(抗CD3，CD14，CD16,CD19，CD56抗體；BectonDickinson),才元CD1234元體(BectonDickinson)以及才元BDCA-2抗體(Miltenyi)對人外周血淋巴細胞進行了多重染色分析。對于ILT7抗體陽性的組分，譜系標(biāo)記物(LineageMarker)是陰性的，CD123是陽性的并且BDCA-2是陽性的。從這些結(jié)果中，確認了ILT7#11和ILT7#17僅對IPC進行了染色(圖7)。此外，當(dāng)利用CpG或者IFNa對外周血淋巴細胞刺激了24小時的時候，利用FCM分析對多種分子的表達進行了檢測。將CpGODN2216用作誘導(dǎo)IPC產(chǎn)生IFN的CpGA,并且將CpGODN2006用作促進樹突細胞成熟的CpGB(Mosemanetal,J.Immunology.173，4433-4442,2004)。對語系標(biāo)記物陰性組分設(shè)置了標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)分析抗BDCA-2抗體和抗ILT-7抗體針對CD123陽性細胞群的反應(yīng)性的時候，在CpG刺激24小時之后，ILT7陽性組分基本上消失了。另一方面，對于BDCA-2，一部分細胞在CpG刺激24小時之后仍顯示陽性(圖8)。認為在CpG刺激之后IPC立即分化成不同的細胞，這表明可以將本發(fā)明的抗ILT-7抗體用作IPC的階段特異性抗體。此外，可以確認在IFNoc存在時，外周血淋巴細胞中的IPC不會分化，存活率高，但此時在IPC上維持了ILT7的表達，在血清中的IFN可能處于高水平的自身免疫病中，IPC上的ILT7是穩(wěn)定存在的。C.對抗ILT-7抗體特異性的考察ILT7屬于ILT/LIR家族，并且該家族有許多分子具有高同源性，特別是在胞外區(qū)具有高同源性(圖9)。已經(jīng)報道過在IPC中有諸如ILT2和ILT3的mRNA的表達(Juetal.Gene331,159-164，2004)。因此，利用轉(zhuǎn)基因細胞確認了該類分子的反應(yīng)性。C-1)ILT1分子的克隆以及表達載體的制備利用寡聚dT引物和SuperscriptChoiceSystemcDNA合成試劑盒，以從人扁桃體得到的RNA為模板合成了cDNA。在合成的cDNA上連接了Notl接頭，然后將其連接到了用Notl酶切之后的pME18S載體上，其結(jié)果是制備了人扁桃體cDNA庫。利用所得的cDNA庫作為模板，并且使用具有下述堿基序列的引物，通過PCR的方法擴增了C末端連接了FLAG標(biāo)簽的ILT1基因。在PCR反應(yīng)中使用了1活力單位的KODPlusDNA聚合酶(由TOYOBOCO.，LTD制造)。反應(yīng)條件為94。C2分鐘，1個循環(huán)；然后，[94"C15秒，55。C30秒，68。C2分鐘]，25個循環(huán)。正向引物(SEQIDNO:22):5，CCGetcgagATGACCCCCATCCTCACGGTCC3'反向引物(SEQIDNO:23):5，CTAGactagtTCA「CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC1CCTCCCGGCTGCATCTTG3'在上述的引物序列中，在括號中的具有下劃線的部分顯示的是編碼FLAG標(biāo)簽的堿基序列，并且每組小寫字母顯示的是限制性內(nèi)切酶Xhol或Spel的酶切位點。用Xhol和Spel酶切了PCR擴增出的DNA片段，然后利用凝膠電泳分離了該片段?；厥樟思s2kb的DNA片段，然后將該片段連接到了按照上述相同方法用Xhol和Spel酶切過的pME18X載體之中。這樣，構(gòu)建了能夠表達目的融合蛋白的質(zhì)粒，即pME18X-C-FLAGILTl。其堿基序列和氨基酸序列如SEQIDNO:24和25所示。C-2)表達細胞的制備以及抗體反應(yīng)性的考察對于ILT2(SEQIDNO:26)以及ILT3(SEQIDNO:28),使用了將兩種基因分別克隆到pcDNA4.1(由Invitrogen生產(chǎn))的Xbal、Xhol位點所制備的表達載體。使用與C-l)中所描述的相同的方法向293T細胞(7xl()S個細胞)中導(dǎo)入了以下的DNA組合。導(dǎo)入兩天之后，進行了流式細胞技術(shù)分析(FCM分析)，分析了抗ILT7抗體。G)pME18X-N-FLAGILT7l嗎+pME18X-Myc-FcRy1(ig(2)pME18X-C-FLAGILT10,5嗎+pME18X-Myc-FcRy0.5嗎+pcDNA4.1畫ILT20.5pg+pcDNA4.1陽ILT30.5pg其結(jié)果，任何抗體對于表達了ILT1等的細胞都沒有反應(yīng)。因為這樣的原因，證明了該抗ILT7抗體特異地識別IPC上的ILT7分子(圖10)。實施例3抗ILT-7抗體對產(chǎn)人IFN能力的影響將人外周血淋巴細胞以2x105個細胞/孔的量接種到96孔板中，然后在37。C與各種抗體進行了反應(yīng)，各種抗體的量均為5ng/mL。培養(yǎng)1小時之后，向其中加入了流感病毒PR8。培養(yǎng)24小時之后，利用ELISA試劑盒(BenderMedSystem)測定了培養(yǎng)上清中的IFNoc。其結(jié)果，通過加入抗ILT-7抗體抑制了IFN的產(chǎn)生(圖11)。也就是，明確了本發(fā)明的抗ILT-7抗體對IPC的產(chǎn)IFN活性有影響。實施例4抗ILT-7抗體的CDC活性A.抗ILT7的單克隆抗體的制備按照實施例2中A-l)A-4)所描述的相同的方法獲得了產(chǎn)生單克隆抗體的克隆。按照實施例2中B所描述的相同的方法測定了反應(yīng)性，并且按照實施例2中C所描述的相同的方法測定了特異性。其結(jié)果，獲得了產(chǎn)生反應(yīng)性和特異性良好的抗ILT7單克隆抗體的雜交瘤#37，#28以及#33。利用由這三種雜交瘤所產(chǎn)生的抗ILT7單克隆抗體按照下述方法測定了CDC活性。B.CDC活性的確定B-l)在前一天，利用EffecteneTransfectionReagent(由QLAGEN生產(chǎn))將以下的DNA導(dǎo)入到了CHO-kl細胞中，所述CHO-kl細胞是以每盤6x105個細胞的數(shù)量接種在6cm(j)盤上的，然后利用800pg/毫升的Zeocin(由Invitrogen生產(chǎn))選擇了抗性才朱。導(dǎo)入的DNA:pcDNA3.1-C-FLAGILT71嗎+pME18X-MycFcRy2|ag此后，利用細胞分選儀(BDFACSAria，由BectonDickinson制造)獲得了大量表達ILT7的細胞系。通過FCM分析確認了所選擇的細胞系大量表達ILT7。除了將BDFACSCaliber(由BD生產(chǎn))用于FCM以外，按照實施例2中A-4)中所描述的相同的方法實施了FCM分析操作。分別使用了以下的抗體作為第一抗體和第二抗體。第一抗體5iag/毫升小鼠抗ILT-7抗體(#37)，第二抗體R藻紅蛋白(R-PE)連接的山羊抗小鼠免疫球蛋白特異性多克隆抗體(BD公司)B-2)目標(biāo)細月包與抗ILT7抗體的反應(yīng)利用5mMEDTA/PBS溶液回收了B-l)中獲得的目標(biāo)細胞(ILT7-CHO細胞)，然后利用含有以下成分的CDC培養(yǎng)基重懸了該細胞而獲得4x105個細胞/毫升的濃度。將該重懸液按50)Lil/孔濃度分裝到V形底96孔板中。CDC培養(yǎng)基RPMI16400.1%BSA100活力單位/毫升青霉素100iug/毫升鏈霉素10mMHepes(pH7.6)2mML-谷氨酰胺向每個孔中加入了50pl用CDC培養(yǎng)基制備的抗ILT-7抗體溶液，并且進行了混勻以使最終的抗體濃度為0.1)ig/毫升，0.5pg/毫升，1iig/毫升以及5pg/毫升。此外，向其中加入了50fxl含有具有以下成分的含補體的CDC培養(yǎng)基，并且進行了混合以使補體的終濃度為6%,然后在37。C培養(yǎng)了2小時。含補體的CDC培養(yǎng)基1ml幼兔的補體(CatalogNo.:CL3441，由CEDARLANE生產(chǎn))CDC培養(yǎng)基(同上)然后，將懸浮液進行了離心(離心條件250G離心4分鐘)并且回收了上清，在回收的時候注意不要帶入細胞的污染。利用常規(guī)的方法測定了上清中的LDH,將該結(jié)果確定為"由補體活性引起的目標(biāo)細胞滲漏出的LDH的量(實驗樣本)"。為了確定CDC的活性也測定了以下的參數(shù)。-目標(biāo)細胞自發(fā)的LDH的釋放(TargetCellSpontaneousLDHRelease):僅培養(yǎng)了與樣品相同體積的目標(biāo)細胞并對其進行了制備。-目標(biāo)細胞最大的LDH釋放(TargetCellMaximumLDHRelease):<又培養(yǎng)了與樣品相同體積的目標(biāo)細胞，然后在回收上清液之前60分鐘，向其中加入了試劑盒里包含的TritonX-100溶液以使最終濃度為0.8%,這樣對其進行了制備.-體積修正對照(VolumeCorrectionControl):向與樣品具有相同體積的培養(yǎng)基中加入了與制備目標(biāo)細胞最大的LDH釋放時所加入的相同的量的TritonX-100,這樣對其進行了制備.-培養(yǎng)基的本底(CultureMediumBackground):制備了與樣品具有相同的體積的培養(yǎng)基，以及，向培養(yǎng)基中加入了含補體的CDC培養(yǎng)基使之與樣品具有相同體積而成的溶液。如下進行了修正從目標(biāo)最大以及目標(biāo)自發(fā)的吸收中減去了與樣品具有相同體積的培養(yǎng)基的吸收，從實驗樣品的吸收中減去了向培養(yǎng)基中加入了含補體的CDC培養(yǎng)基使之與樣品具有相同體積而成的溶液的吸收。通過以下的等式計算了CDC活性。結(jié)果在表1和圖12中顯示。在佳_用了從任何雜交瘤中獲得的抗ILT7單克隆抗體的例子中，當(dāng)抗體濃度為0.5iag/毫升或者更高時，顯示出80%或者更多的CDC活性。CDC活性=[(實驗樣品-目標(biāo)自發(fā))/(目標(biāo)最大-體積對照-目標(biāo)自發(fā))]x100<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>比4交例1除了將抗ILT7抗體替換成小鼠IgG2a以外，其他完全按照實施例4的B和C中所描述的相同的方法進行操作。其結(jié)果與實施例4一起顯示在表5和圖12中。在除了抗ILT7單克隆抗體以外的其他抗體中沒有觀察到針對目標(biāo)細胞的CDC活性。實施例5抗ILT-7抗體在目標(biāo)細胞上的內(nèi)化A.抗ILT7單克隆抗體使用了以下的抗ILT7單克隆抗體。抗ILT7單克隆抗體#17，#26，#37，#28以及#33B.內(nèi)化的觀察B-l)目標(biāo)細胞系(ILT7-CHO細胞系)的制備按照實施例4的B-l中所描述的相同的方法制備了目標(biāo)細胞系(ILT7-CHO細胞系)。B-2)目標(biāo)細胞與抗ILT-7抗體的反應(yīng)用含有以下成分的冰預(yù)冷的(T(-)+10%FBS)緩沖液重懸了回收的ILT7-CHO細胞，重懸后的濃度為lxl(^個細胞/毫升，回收細胞時使用的是5mMEDTA/PBS溶液。T(-)培養(yǎng)基RPMI1640100活力單位/毫升青霉素100ng/毫升鏈霉素10mMHepes(pH7.6)2mML-谷氨酰胺(Glutamin)1mM丙酮酸鈉50pM2-巰基乙醇10%熱滅活的胎牛血清將1毫升上述的懸浮液放入15毫升離心管中，進行離心(離心條件在4。C以1200rpm的速度離心5分鐘)，然后棄去了上清。向細胞沉淀中加入了200nL抗ILT7單克隆抗體懸液(10ing/毫升)，然后對其進行了混合，并且在4'C孵育30分鐘，此后利用冰預(yù)冷的T(-)培養(yǎng)基洗滌兩次(所使用的培養(yǎng)基的量每次洗滌用IO毫升，離心條件在4。C以1200rpm的速度離心5分鐘)。B-3)對存在于目標(biāo)細胞表面的ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物的修飾隨后，利用第二抗體對存在于細胞表面的ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物進行了修飾，使得能夠通過熒光進行檢測。具體方法如下所述。向B-2)中獲得的細胞沉淀中加入了含有APC-標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG多克隆抗體(目錄號550826BD，由Biosciences生產(chǎn))的冰預(yù)冷的T(-)培養(yǎng)基，然后在4。C避光孵育20分鐘，此后用水預(yù)冷的T(-)培養(yǎng)基洗滌兩次(所使用的培養(yǎng)基的量每次洗滌用IO毫升，離心條件在4。C以1200rpm的速度離心5分鐘)。然后向其中加入了冰預(yù)冷的T(-)培養(yǎng)基，作為濃度為1乂106個細胞/毫升的懸液。B-4)通過在37。C孵育來誘導(dǎo)內(nèi)化將按照B-3中獲得的懸液平均分到兩個管子里(即管(a)和(b))。將管(a)和(b)分別在37。C和4。C避光孵育了60:分鐘。在孵育之后，向其中加入了1%FBS/PBS(水預(yù)冷的)來終止內(nèi)化。對其進行了離心(離心條件在4。C以KOOrpm的速度離心5分鐘)，然后棄去了上清，接著利用1%的FBS/PBS(冰預(yù)冷的)洗滌兩次(溶液的量每次洗滌用10毫升，離心條件在4。C以1200rpm的速度離心5分鐘)。B-6)對在孵育之后仍存在于目標(biāo)細胞表面的ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物的修飾利用第三抗體對孵育之后仍保留在細胞表面的ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物進行修飾，使得能夠通過熒光來檢測。具體方法如下所述。向B-4)中獲得的細胞沉淀中加入了20含有第三抗體(FITC標(biāo)記的驢抗山羊IgG抗體(目錄號sc-2024,由Santacruz生物技術(shù)生產(chǎn)))的懸浮液，然后在4°C避光孵育15分鐘。然后用1°/。的FBS/PBS(溶液的量每次洗滌用IO毫升，離心條件在4°C以1200rpm的速度離心5分鐘)對所得的溶液進行了洗滌。B-5)對目標(biāo)細胞中存在的抗ILT，7'的抗體的分析隨后，向B-5)中獲得的細胞沉淀中加入了150jaL的1%FBS/PBS,然后將其重懸并收集到1.2毫升的微量滴定管中，對其進行FCM分析。在分析中，分FITC和APC分析了每種細胞的平均熒光強度(MPI)。進一步，按照以下的等式計算了熒光強度比(％)。熒光強度比(％)=(37。C孵育了60分鐘的細胞的平均熒光強度/4°C孵育了60分鐘的細胞的平均熒光強度)x100該結(jié)果在表2，表3和圖d中顯示。'<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>FITC的焚光強度是在孵育之后仍保留在細胞表面的ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物的量的指示劑。與在4'C孵育的細胞相比較，在37。C孵育60分鐘的細胞的FITC的平均熒光強度降低到了大約50%。另一方面，APC的萸光強度是在孵育之前存在于細胞表面的ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物的量的指示劑。在孵育之后，無論ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物是存在于細胞表面還是整合到細胞內(nèi)，都能夠檢測到該復(fù)合物。在實施例5中，在37。C孵育的例子與在4。C孵育的例子相比，孵育之后的APC焚光強度是相等的。該結(jié)果表明無論在兩種溫度中任何一種溫度中孵育，ILT7-抗ILT-7抗體免疫復(fù)合物均存在于目標(biāo)細胞的任何部位。如上所述，可知通過37。C孵育，抗ILT7單克隆抗體引起了ILT7的內(nèi)化。比豐交例2除了將抗ILT7抗體替換成小鼠IgG2a以外，其他完全按照實施例5中所描述的相同的方法進行操作。其結(jié)果實施例5—起顯示在表2，表3以及圖13中。在使用小鼠IgG2a的例子中沒有觀察到FITC的熒光強度的任何變化，因此可知小鼠IgG2a沒有51起ILT7的內(nèi)化。實施例6關(guān)于小鼠抗人ILT7單克隆抗體的結(jié)構(gòu)[可變區(qū)的序列]A.編碼小鼠抗ILT-7抗體可變區(qū)的cDNA的克隆A-l)關(guān)于產(chǎn)生小鼠抗ILT7抗體的雜交瘤使用了以下的雜交瘤作為產(chǎn)生小鼠抗ILT7抗體的雜交瘤。-雜交瘤#11(保藏號FERMBP-10704)-雜交瘤#17(保藏號FERMBP-10705)A-2)總RNA的分離利用市售試劑盒"RNeasyMiniKit"(目錄號74106,由Qiagen制造)按照試劑盒中所附的說明，從A-1)中所述的雜交瘤中抽提了總RNA。均是從lxl(^個雜交瘤細胞中獲得了大約200嗎的總RNA。A-3)對于編碼小鼠重鏈可變區(qū)的cDNA的擴增和片段化以5昭的A-2中分離的總RNA作為模板，并利用5'RACE的方法擴增了編碼小鼠重鏈可變區(qū)的cDNA。對于擴增，使用了市售試劑盒"5，RACESystemforRapidAmplificationofcDNAENDs,Version2.0Kit，，(目錄號18374-058，由Invitrogen生產(chǎn))。其具體描述如下。首先，利用反轉(zhuǎn)錄酶以A-2中分離的總RNA作為模板合成了cDNA的第一條鏈。此時，所使用的反義引物(GSP1)的堿基序列如表4所示。用于擴增小鼠重鏈可變區(qū)編碼基因的引物<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>此后，利用RNaseH降解了總RNA，并且利用低熔點瓊脂糖法(1.5%)純化了保持單鏈形式的cDNA的第一鏈。此外，利用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)將dC(即核苷酸同聚物)連接到cDNA的第一條鏈的3，末端。利用錨定引物(SEQIDNO:34)以及如表4中所示的反向引物(GSP2)通過PCR的方法擴增了cDNA，其中該錨定引物在3'末端具有與dC(錨定序列)互補的核苷酸多聚物。此外，將所獲得的PCR產(chǎn)物用作模板，利用AUAP引物(SEQIDNO:35)以及如表4中所示的反向引物通過巢式PCR的方法擴增了cDNA。此外，通過低熔點瓊脂糖法(1.5。/。)的方法純化了該PCR產(chǎn)物。用于5'RACE(SEQIDNO:34)的錨定引物5'陽GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGIIGGGilGGGIIG-3，(36個寡核苷酸)用于5'RACE的AUAP引物(SEQIDNO:35)5，-GGCCACGCGTCGACTAGTAC-3，(20個寡核苦酸)A-4)編碼小鼠輕鏈可變區(qū)的cDNA的擴增和片段化以A-2)中分離的總RNA作為模板，并利用A-3)中所述的相同的方法擴增了編碼小鼠輕鏈可變區(qū)的cDNA。此時，所使用的引物的堿基序列如表5所示。利用低熔點瓊脂糖法(1.5%)純化了所得的PCR產(chǎn)物。用于擴增小鼠輕鏈可變區(qū)編碼基因的引物<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>A-5)對cDNA堿基序列的確認以及CDR區(qū)的確定利用市售試劑盒"ZeroBluntTOPOPCRCloningKit"(目錄號1325137，由Invitrogen生產(chǎn))按照試劑盒中所附的說明，將A-3)中獲得的重鏈可變區(qū)以及A-4)中獲得的輕鏈可變區(qū)的cDNA片段克隆到pCR4Blunt-TOPO載體中，然后將所得的載體導(dǎo)入到大腸桿菌感受態(tài)細胞中，獲得了大腸桿菌轉(zhuǎn)化抹。從上述的轉(zhuǎn)化抹中獲得了上述的質(zhì)粒，然后利用自動DNA測序儀"PCR畫basedABIPRISM3100GeneticAnalyzer，，(由AppliedBiosystems生產(chǎn))確認了質(zhì)粒中的cDNA堿基序列。通過排除從無活性RNA獲得的轉(zhuǎn)錄子獲得了正確的序列，其中該無活性RNA是由于在互補性決定區(qū)(此后稱為"CDR區(qū)，，)周圍的移碼以及無意義突變造成的。此外，將該質(zhì)粒中所包含的cDNA堿基序列的同源性與Kabat數(shù)據(jù)庫進行了比較，并且確定了各個可變區(qū)中CDR區(qū)和可變區(qū)的序列。同樣，對于實施例4中制備的雜交瘤#37,按照利用雜交瘤#17的實施例6中A-l)A-5)所描述的程序確定了可變區(qū)中CDR區(qū)和可變區(qū)的序列。在以下的SEQIDNO中顯示的是由每種雜交瘤產(chǎn)生的抗ILT7單克隆抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的cDNA的堿基序列以及由該序列編碼的氨基酸序列。重鏈可變區(qū)輕鏈可變區(qū)#11SEQIDNO:38SEQIDNO:40(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:39SEQIDNO:41(氨基酸序列)(氨基酸序列)#17SEQIDNO:42SEQIDNO:44(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:43SEQIDNO:45(氨基酸序列)(氨基酸序列)#37SEQIDNO:46SEQIDNO:48(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:47SEQIDNO:49(氨基酸序列)(氨基酸序列)對于雜交瘤培養(yǎng)上清，使用市售小鼠單克隆抗體分型試劑盒(目錄號MMT1,由SerotecProduct生產(chǎn))確認了制備的單克隆抗體的恒定區(qū)的同種型。小鼠抗人ILT-7抗體#11的重鏈恒定區(qū)是Igy3,而輕鏈恒定區(qū)是Igic。此外，小鼠抗人ILT-7抗體#17的重鏈恒定區(qū)和小鼠抗人ILT-7抗體#37的重鏈恒定區(qū)都是Ig丫2a，并且其輕鏈恒定區(qū)都是IgK。實施例7嵌合抗體的制備A.編碼人IgG恒定區(qū)的cDNA的克隆從人IPC的cDNA庫選擇了人IgGl的重鏈恒定區(qū)以及人IgK的輕鏈恒定區(qū)。然后，利用市售試劑盒"ZeroBluntTOPOPCRCloningKit"(目錄號1325137,由Invitrogen生產(chǎn))按照試劑盒中所附的說明將選出的區(qū)域克隆到pCR4Blunt-TOPO載體中，然后將所得的載體導(dǎo)入到大腸桿菌感受態(tài)細胞中，獲得了大腸桿菌轉(zhuǎn)化抹。從上述的轉(zhuǎn)化抹中獲得了上述的質(zhì)粒，然后利用自動DNA測序儀"PCR-basedABIPRISM3100GeneticAnalyzer"(由AppliedBiosystems生產(chǎn))確認了質(zhì)粒中的cDNA的堿基序列。B.可變區(qū)與恒定區(qū)的連接和克隆分別使用了A中獲得的重鏈恒定區(qū)的編碼cDNA以及實施例6的A-5中荻得的重鏈可變區(qū)的編碼cDNA。兩種DNA具有DNA的堿基序列重疊的區(qū)域。因此，利用該區(qū)域使用重疊延伸方法獲得了雙鏈DNA。詳細方法如下。C-l)制備編碼嵌合ILT7抗體的重鏈的cDNA利用限制性內(nèi)切酶NotI和XbaI消化了A-5)中獲得的"具有編碼弁11和#17重鏈可變區(qū)的cDNA的質(zhì)粒"，然后利用瓊脂糖凝膠方法(1.5%)對其進行了純化。利用具有以下成分的TE緩沖液溶解了所得的產(chǎn)物，制備了濃度為100pmol/nL的編碼重鏈可變區(qū)的cDNA片段的溶液。TE緩沖液10mMTris-HCl1mMEDTApH7.5~8.0此外，按照上述相同的方法處理了B中獲得的"具有編碼重鏈恒定區(qū)的cDNA的質(zhì)粒"了制備濃度為100pmol/pL的溶液。隨后，將兩種溶液進行了混合，然后通過最初將混合液在70。C放置10分鐘，然后在37。C放置5分鐘來使二者的重合區(qū)雜交。其后，通過PCR的方法擴增了cDNA,并且利用限制性內(nèi)切酶NotI和XbaI對所得的cDNA進行了消化，然后利用低熔點瓊脂糖凝膠方法(1.5%)對其進行了純化。C-2)制備編碼嵌合ILT7抗體的輕鏈的cDNA分別使用了A中獲得的輕鏈恒定區(qū)的編碼cDNA以及實施例6的A-5中獲得的輕鏈可變區(qū)的編碼cDNA。使用這些cDNA按照C-l)中所描述的相同的方法獲得了編碼嵌合ILT7抗體的輕鏈的cDNA。C-3)克隆化使用NotI和XbaI作為克隆位點將C-l)中獲得的cDNA克隆到質(zhì)粒載體pcDNA3.1-Zeocin(由Invitrogen生產(chǎn))中，制備了嵌合ILT7抗體重鏈表達載體。此外，使用Notl和Xbal作為克隆位點將C-2)中獲得的cDNA克隆到質(zhì)粒載體pcDNA3.1-hygromycin(由Invitrogen生產(chǎn))中，制備了嵌合ILT7抗體輕鏈表達載體。表6中顯示的是每種載體的名稱。<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>D.嵌合ILT7抗體的表達D-l)瞬時轉(zhuǎn)染利用effectinetransfectionkit(目錄號301427,由Qiagen制造)將l(ig的嵌合ILT7抗體重鏈表達載體和l嗎的嵌合ILT7抗體輕鏈表達載體共轉(zhuǎn)染了293T細胞，其中兩種載體是在C-3)中制備的。此后，使用含有以下成分的加入了2。/。LowIgGFBS的DMEM培養(yǎng)基，在37。C進行了培養(yǎng)。加入了2%LowIgGFBS的DMEM培養(yǎng)基DMEM培養(yǎng)基(目錄號D5796,由Sigma生產(chǎn))2%LowIgGFBS(S錄號SH30151.03,HyClone產(chǎn))2mML-谷氨酰胺(Glutamin)100U/毫升青霉素100pg/毫升鏈霉素pH7.2pH7.4在導(dǎo)入了載體之后，培養(yǎng)96小時，收集了培養(yǎng)上清。然后，通過離心去除了細胞碎片，獲得了粗制的抗體溶液。D-2)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染利用effectinetransfectionkit(目錄號301427,由Qiagen制造)將lpg的嵌合ILT7抗體的重鏈表達載體和1嗎的嵌合ILT7抗體的輕鏈表達載體共轉(zhuǎn)染了YB2/0細胞(該細胞來自于大鼠骨髓瘤，ATCC#CRL-1622),其中兩種載體是C-3)中制備的。在所使用的質(zhì)粒載體中，重鏈表達載體的標(biāo)記是Zeocin抗性，而輕鏈表達載體的標(biāo)記是潮霉素抗性。因此，導(dǎo)入了兩種載體的細胞能夠在同時加入了Zeocin和潮霉素的培養(yǎng)基中生長。然后，利用加入了Zeocin和潮霉素的RPMI培養(yǎng)基培養(yǎng)該細胞并且選擇了抗性株。加入了Zeocin-潮霉素的RPMI培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)基(目錄號R8758,由Sigma生產(chǎn))腦FBS0.01MHEPES(N-2-羥乙基派溱-N'-2-乙磺酸鈉)1mM丙酮酸鈉2mML畫谷氨酰胺100U/毫升青霉素100ng/毫升鏈霉素55pM2-巰基乙醇0.5mg/毫升Zeocin0.5mg/毫升潮霉素pH7.2~pH7.4在此操作三天以后，通過ELISA方法確定了培養(yǎng)上清中的抗體產(chǎn)量。選擇了具有高抗體表達水平以及細胞明顯增加的ILT7嵌合抗體生成細胞系。此外，通過細胞分選的方法進行單克隆化，獲得了以下的細胞系。#11ILT7嵌合抗體生成細胞系#11-5細胞系和#11-16細胞系#17ILT7嵌合抗體生成細胞系#17-24細胞系將上述的細胞系(#11-5細胞系，#11-16細胞系和#17-24細胞系)分別在具有以下成分的加入了5%FBS的RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將孵育溫度和孵育時間分別設(shè)置為37"C和96小時。加入了5%FBS的RPMI培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)基(目錄號R8758，由Sigma生產(chǎn))5%FBS0.01MHEPES1mM丙酮酸鈉2mML-谷氨酰胺100U/毫升青霉素100pg/毫升鏈霉素55jiM2-巰基乙醇pH7.2~pH7.4收集了培養(yǎng)上清并且通過離心去除了細胞碎片以便，獲得了粗制的抗體溶液。E.抗體的純化通過蛋白A親和柱(rProteinAS印haroseFF，目錄號17-1279-01，由AmershramPharmacia生產(chǎn))純化了D-l和D-2中獲得的每種粗制抗體溶液。純化條件如下。使用具有如下成分的PBS(-)緩沖液作為吸附緩沖液，以及0.1M檸檬酸鈉緩沖液(pH3)作為洗脫緩沖液，按照附帶的說明書進行了親和純化。向洗脫組分中加入了1MTris-HCl(pH8.0)將pH調(diào)節(jié)至大約7.2。對于調(diào)整好pH的抗體溶液，使用透析膜將其交換成PBS(-),得到了純化的抗ILT7嵌合抗體。關(guān)于純化抗體的濃度，測定了在280nm處的吸收值，并且以1.38OD為lmg/毫升進行了換算。表7中總結(jié)了所獲得的嵌合ILT7抗體、其可變區(qū)基因的來源雜交瘤以及宿主細胞之間的關(guān)系。PBS(-)緩沖液0.2g/L磷酸二氬鉀0.2g/L氯化鉀8g/L氯化鈉U5g/L無水磷酸氬二鈉[表7]<table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table>制備的嵌合抗體的重鏈和輕鏈的氨基酸序列以及cDNA堿基序列分別如下所示。在每種氨基酸序列中，從氨基酸序列N末端到-l是信號序列的氨基酸序列，從氨基酸序列的1到C末端是成熟蛋白的氨基酸序列。就是說，組成這些嵌合抗體的重鏈和輕鏈?zhǔn)怯梢韵旅糠N氨基酸序列的從1到C末端的氨基酸序列所組成的。重鏈輕鏈SEQIDNO:50SEQIDNO:52(堿基序列)(堿基序列)SEQIDNO:51SEQIDNO:53(氨基酸序列)(氨基酸序列)SEQIDNO:54SEQIDNO:56(石成基序列)(堿基序列)SEQIDNO:55SEQIDNO:57(氨基酸序列)(氨基酸序列)工業(yè)實用性本發(fā)明提供了可用于制造特異性識別人ILT7的抗體的免疫原，以及利用該免疫原生產(chǎn)抗ILT-7抗體的方法。本發(fā)明的特異識別人ILT7的抗體能夠在ILT家族存在的情況下特異地識別ILT7。因此，可以使用本發(fā)明的抗體來測定和分離人ILT7。例如，也可以使用本發(fā)明的抗體來分析ILT7的定位。已經(jīng)認識到ILT7是與IPC或樹突細胞的分化和功能密切相關(guān)的分子。因此，可以使用能夠識別ILT7并且具有高特異性的抗體來分析IPC或樹突細胞的功能。IPC樣的(具有表達BDCA-2的特性)癌細胞是已知的(ChaperofLetal.Eur.J.Immunol.34;418-426,2004,MaedaTetal.,Int.J.Hematol.81;148-154，2005)。對于在這些細胞中ILT7的表達的確認可能會使得對癌癥的診斷和治療成功。在自身免疫病的例子中，例如，已經(jīng)有人指出由IPC產(chǎn)生的IFNoc與銀屑病的發(fā)展之間有很深的關(guān)系，其中的銀屑病是一種皮膚病(NestleFOetal.，J.Exp.Med.202，135-143，2005)。因此，可以通過鑒定銀屑病病人皮膚組織中的IPC來測定銀屑病的程度，即在活檢標(biāo)本中使用抗ILT-7的抗體。已知HIV感染的病人的AIDS的發(fā)展是與IPC的數(shù)目相關(guān)的。也就是，在還沒有顯示出癥狀的病人中觀察到了很多的IPC并且在發(fā)病時觀察到了IPC的減少(SoumellsV.etal.，Blood98;906-912，2001)。因此，可以有效地對諸如HIV的病毒的感染的預(yù)后進行預(yù)測。例如，ILT7是在人源IPC中特異表達的分子。因此，可以使用本發(fā)明的抗ILT-7的抗體來檢測，鑒定或者分離IPC。IPC是產(chǎn)生大多數(shù)1型干擾素的細胞。因此，在診斷和研究與1型干擾素相關(guān)的疾病時對該分子的枱r測，鑒定或者分離是重要的指標(biāo)?？赡芤呀?jīng)展示了諸如多種自身免疫病以及感染這樣的在病理狀態(tài)形成的過程中牽涉到干擾素的疾病。另外，本發(fā)明的抗ILT-7的抗體對IPC的活性具有抑制作用。所以，可以使用本發(fā)明的抗ILT-7的抗體來抑制IPC的活性。此外，可以通過抑制IPC的活性來治療涉及1型干擾素的疾病。具體的，本發(fā)明的抗ILT-7的抗體可以用于多種自身免疫病以及感染這樣的在病理狀態(tài)形成的過程中涉及到干擾素的疾病。特殊地由于該抗ILT-7的抗體具有高特異性，該抗體可以有效地去除IPC。權(quán)利要求1.能夠結(jié)合人ILT7的胞外域的單克隆抗體，或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。2.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段，其中，所述單克隆抗體能夠結(jié)合人干擾素生成細胞。3.保藏號為FERMBP-10704的雜交瘤ILT7#11或保藏號為FERMBP-10705的雜交瘤ILT7#17產(chǎn)生的單克隆抗體，或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。4.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段，其中，所述單克隆抗體在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)中含有如下i)至iii)任意一項的氨基酸序列作為CDR1、CDR2和CDR3:i)重鏈可變區(qū)的CDR1:SDYAWN(SEQIDNO:58);重鏈可變區(qū)的CDR2:YISYSGSTSYNPSLKSR(SEQIDNO:59);和重鏈可變區(qū)的CDR3:SPPYYAMDY(SEQIDNO:60);輕鏈可變區(qū)的CDR1:KASQDVGTAVA(SEQIDNO:61);輕鏈可變區(qū)的CDR2:WASTRHT(SEQIDNO:62);和輕鏈可變區(qū)的CDR3QQYSSYPLT(SEQIDNO:63);ii)重鏈可變區(qū)的CDR1:SYWIH(SEQIDNO:64);重鏈可變區(qū)的CDR2:RIYPGTGSTYYNEKFKG(SEQIDNO:65);和重鏈可變區(qū)的CDR3:YPTYDWYFDV(SEQIDNO:66);輕鏈可變區(qū)的CDR1:RASQSISNYLH(SEQIDNO:67);輕鏈可變區(qū)的CDR2:YASQSIS(SEQIDNO:68);輕鏈可變區(qū)的CDR3:QQSNSWPLT(SEQIDNO:69);iii)重鏈可變區(qū)的CDR1:SDYAWN(SEQIDNO:70);重鏈可變區(qū)的CDR2:YISYSGSTSYNPSLKSR(SEQIDNO:71);重鏈可變區(qū)的CDR3:ALPLPWFAY(SEQIDNO:72);輕鏈可變區(qū)的CDR1:KASQDVGTAVA(SEQIDNO:73);輕鏈可變區(qū)的CDR2:WASTRHT(SEQIDNO:74);和輕鏈可變區(qū)的CDR3:QQYSSYPYT(SEQIDNO:75).5.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段，其中，所述單克隆抗體含有選自如下(a)至(c)的組合中的任意一項的氨基酸序列的成熟序列作為重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)a)SEQIDNO:39的重鏈可變區(qū)和SEQIDNO:41的輕鏈可變區(qū)；b)SEQIDNO:43的重鏈可變區(qū)和SEQIDNO:45的輕鏈可變區(qū)；以及c)SEQIDNO:47的重鏈可變區(qū)和SEQIDNO:49的輕鏈可變區(qū)。6.編碼權(quán)利要求4或5的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段的多核苷酸。7.含有編碼權(quán)利要求4或5的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段的多核苷酸的載體。8.以可表達的方式攜帶權(quán)利要求7的載體的轉(zhuǎn)化細胞。9.制備權(quán)利要求4或5的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段的方法，該方法包括如下步驟培養(yǎng)權(quán)利要求8的轉(zhuǎn)化細胞，從培養(yǎng)物中回收單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。10.產(chǎn)生權(quán)利要求1或2的單克隆抗體的雜交瘤。11.保藏號為FERMBP-10704的雜交瘤ILT7#11或者保藏號為FERMBP-10705的雜交瘤ILT7#17。12.制備單克隆抗體的方法，該方法包括以下步驟培養(yǎng)權(quán)利要求11的雜交瘤，從培養(yǎng)物中收集單克隆抗體。13.制備單克隆抗體產(chǎn)生細胞的方法，其中，所述單克隆抗體能夠結(jié)合人ILT7的胞外域，該方法包括以下步驟(l)給免疫動物施用細胞，所述細胞表達含有人ILT7胞外域的外源蛋白和與人ILT7結(jié)合的外源分子；以及體生成細胞產(chǎn)生能夠結(jié)合人ILT7的抗體。14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中與人ILT7結(jié)合的分子是細胞膜蛋白。15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述細胞膜蛋白是Fc受體Y鏈。16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中表達人ILT7和與人ILT7結(jié)合的分子的細胞是以可表達的方式攜帶以下的(a)和(b)的細胞(a)編碼含有人ILT7胞外域的氨基酸序列的外源多核苷酸；以及(b)編碼Fc受體y鏈的外源多核苦酸。17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述細胞是動物細胞。18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述細胞是人源細胞。19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述人源細胞是293T細胞。20.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，該方法還包括克隆化按照權(quán)利要求13的方法所獲得的抗體生成細胞的步驟。21.制備能夠結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體的方法，該方法包括如下步驟培養(yǎng)按照權(quán)利要求8的方法獲得的抗體生成細胞，從培養(yǎng)物中收集單克隆抗體。22.能夠識別人ILT7的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段，所述單克隆抗體或片段能夠通過以下的步驟獲得(l)給免疫動物施用細胞，所述細胞外源性表達含有人ILT7胞外域的蛋白和與人ILT7結(jié)合的分子；體生成細胞產(chǎn)生能夠結(jié)合人ILT7的抗體；以及(3)培養(yǎng)從步驟(2)中選擇出來的抗體生成細胞，從培養(yǎng)物中回收能夠識另'J人ILT7的抗體。23.用于制備能夠結(jié)合人ILT7胞外域的抗體的免疫原，該免疫原包括下述動物細胞或者其細胞膜成分，所述細胞以可外源性表達的方式攜帶(a)編碼含有人ILT7胞外域的氨基酸序列的多核苷酸和(b)編碼Fc受體Y鏈的多核芬酸。24.根據(jù)權(quán)利要求23的免疫原，其中，所述動物細胞是人源細胞。25.檢測干擾素生成細胞的方法，該方法包括以下步驟使能夠結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段與受試細胞接觸；以及檢測與細胞結(jié)合了的單克隆抗體或含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。26.用于檢測干擾素生成細胞的檢測試劑，該檢測試劑包含能夠結(jié)合人ILT7胞外域的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段。27.抑制干擾素生成細胞的活性的方法，該方法包括使以下任意成分與干擾素生成細胞接觸的步驟(a)能夠結(jié)合人ILT7并且抑制干擾素生成細胞活性的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段；以及(b)免疫球蛋白或含有該免疫球蛋白的抗原結(jié)合區(qū)的片段，在所述免疫球蛋白中導(dǎo)入了(a)的單克隆抗體的互補決定區(qū)。28.抑制活體中干擾素生成細胞的活性的方法，該方法包括給活體施用以下任意成分的步驟(a)能夠結(jié)合人ILT7并且抑制干擾素生成細胞活性的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段；(b)免疫球蛋白或含有該免疫球蛋白的抗原結(jié)合區(qū)的片段，在所述免疫球蛋白中導(dǎo)入了(a)的單克隆抗體的互補決定區(qū)；以及(c)編碼(a)或(b)所述成分的多核苷酸。29.根據(jù)權(quán)利要求27或28的方法，其中，所述干擾素生成細胞的活性是干擾素生成活性，或者干擾素生成細胞的存活，或者二者皆有。30.干擾素生成細胞活性抑制劑，其包含下述的任意成分作為活性成分(a)能夠結(jié)合人ILT7并且抑制干擾素生成細胞活性的單克隆抗體或者含有該單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)的片段；(b)免疫球蛋白或含有該免疫球蛋白的抗原結(jié)合區(qū)的片段，在所述免疫球蛋白中導(dǎo)入了(a)的單克隆抗體的互補決定區(qū)；以及(c)編碼(a)或(b)所述成分的多核苷酸。31.根據(jù)權(quán)利要求30的干擾素生成細胞活性抑制劑，其中，所述干擾素生成細胞的活性是干擾素生成活性，或者干擾素生成細胞的存活，或者二者皆有。全文摘要能夠結(jié)合IPC的抗體是通過利用動物細胞來獲得的，在該細胞中與ILT7結(jié)合的細胞膜蛋白是作為免疫原共表達的。本發(fā)明的抗體具有高特異性，使得該抗體能夠從免疫學(xué)上將ILT7與其他ILT家族分子區(qū)分開來。本發(fā)明的抗ILT-7的抗體能夠結(jié)合IPC并抑制其活性。通過本發(fā)明的抗ILT-7的抗體可以抑制IPC的活性，并且可以治療或預(yù)防干擾素相關(guān)疾病。在IFNα存在的情況下，ILT7在IPC中的表達仍可維持。因此，在IFNα生成量增加的多種自身免疫病病人體內(nèi)，可以預(yù)期抗ILT-7的抗體對于IPC活性的抑制作用。文檔編號A61P37/02GK101379089SQ20068005313公開日2009年3月4日申請日期2006年12月20日優(yōu)先權(quán)日2005年12月20日發(fā)明者新井直子,石田晃司,趙民權(quán),鴨川由美子申請人:Sbi生物技術(shù)有限公司