專利名稱：：穩(wěn)定形式的魚油的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明主要涉及包含魚油的合成物領(lǐng)域。技術(shù)背景魚油祐:公認為對健康有許多好處，包括為抵抗心臟病，抑郁癥，雙相抑郁癥，注意力不足過動癥，酒精中毒，產(chǎn)后抑郁癥和阿爾茨海默病提供保護，且它們也可以對糖尿病和關(guān)節(jié)炎起作用(3,4,7,9)。魚油中能夠提供這些健康特性的主要成份是Q-3甚長鏈多不飽和脂肪酸(VLC-PUFAs)，其包括，但不只限于，二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。食品和飼料工業(yè)想要利用這些健康的特性，通過在傳統(tǒng)的食物產(chǎn)品中添加魚油，來制備"功能性食品"或"功能性飼料，，。然而，與在食品或飼料中使用魚油相關(guān)的常見問題是油脂可以迅速氧化并且變腐臭，從而導(dǎo)致較差的器官感受，使消費者(人類或其它動物)拒絕該產(chǎn)品(5,6)。這不僅對于增補產(chǎn)品的味道是一個問題，而且氧化的魚油也含有對人類或其它動物有毒的化學(xué)類似物(例如，脂質(zhì)過氧化氫物)。為使魚油穩(wěn)定，通過使用親脂性抗氧化物(例如，維他命E或各種有機醌)或通過在魚油和食物產(chǎn)品基質(zhì)之間建立一個物理障礙(例如，通過孩吏膠嚢和/或涂層)進行了各種不同的嘗試。然而，每一個解決方法都有重要的限制條件。在多數(shù)情況下，最好的抗氧化物(例如，特丁基對苯二酚(TBHQ)或乙氧基奎寧)由于低水平的化學(xué)毒性或致癌性而禁止在食品中使用。其他的天然抗氧化物(例如，迷迭香提取物)是非常昂貴的，且沒有合成的抗氧化物有效。魚油的微膠嚢是昂貴的，且由于大多數(shù)的包裝材料不具有水穩(wěn)定性，而使魚油的微膠嚢可能與某個食品基質(zhì)不相容。先前有結(jié)果顯示，海藻油和魚油能夠通過添加大量(例如，卵磷脂和油脂的比例為1:4)(5,10)大豆卵磷脂而被穩(wěn)定。大豆卵磷脂不含有任何VLC-PUFAs，它被公認為可以加速氧化，并且所需含量可以導(dǎo)致最終混合物中的VLC-PUFA水平得到稀釋。某些海藻油也^皮公認為富含Q-3VLC-PUFAs。在某些發(fā)酵生產(chǎn)的藻類中富含。-3VLC-PUFAs(例如，寇氏隱曱藻(Co77^eco^'"/'咖co/w//)和裂殖壺菌(5^力/zoc力7〃J'咖sp.))的情況下，這一過程已被成比例提高并商業(yè)化(2,8，11，12)。這個過程包括培育藻類，強化有機體誘導(dǎo)油脂的生產(chǎn)，獲取且千燥藻類，用一種有機溶劑來萃取油脂，且使用在蔬菜油處理技術(shù)中廣為人知的過程來純化油脂。所有這些過程，當被用于這些藻類時，可以生產(chǎn)出高度富含Q-3VLC-PUFAs的良好的、純凈的油脂。這些油脂，如魚油，不像其它蔬菜油一樣穩(wěn)定，例如玉米油、大豆油、菜籽油、棕櫚油等，因為它們富含天生就易受氧化破壞影響的VLC-PUFAs。的確所有富含VLC-PUFAs的油脂都特別易被氧化。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明基于發(fā)明人發(fā)現(xiàn)富含VLC-PUFAs的藻類的提取物可以顯著地、出乎意料地抵抗氧化破壞，當與魚油、精煉海藻油、或藻類本身混合時，這些提取物具有穩(wěn)定混合物中所有VLC-PUFAs的功效。這種新的穩(wěn)定形式的魚油能被用作食品添加劑，生產(chǎn)出的產(chǎn)品用于由動物包括人類來消費，因此要解決的主要問題是保護產(chǎn)品中的VLC-PUFAs，使其氧化損害達到最小化。進一步地，由于來自提取物本身的VLC-PUFAs的貢獻，這個問題得以解決，而活性VLC-PUFAs本身并沒有被顯著地稀釋。更意想不到的是，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)添加富含DHA的寇氏隱曱藻的提取物，可以起到使魚油明顯穩(wěn)定化的效果，其中，寇氏隱曱藻是一種高度富含DHA油脂的藻類。圖l是一個流程圖，以圖表的形式說明了寇氏隱曱藻用發(fā)酵的方法，使其由細^^生長為對本發(fā)明有用部分的過程。該藻類是以葡萄糖/酵母提取物為基質(zhì)用發(fā)酵的方法使其生長的，通過離心過濾來獲取，并生產(chǎn)為一種濕的生物，它可以被直接用于與高含量的起穩(wěn)定作用的VLC-PUFA材料混合?？蛇xi也，丸狀細胞可以被噴霧干燥以生產(chǎn)成粉末。然后粉末被提取以生產(chǎn)出一種粗制藻類提取物，它能被應(yīng)用于本發(fā)明。提取后留下的剩余物質(zhì)-生物4分也可用于本發(fā)明。它可以被進一步提煉以生產(chǎn)一種油脂和一種貧化甘油三酸脂餾分，本發(fā)明也描述了該粗制藻類提取物。具體實施方式本發(fā)明涉及穩(wěn)定形式的魚油或其它不穩(wěn)定食用油的制備，上述油脂的組分，以及它在食品和祠料中的應(yīng)用。該組分包括一種化合物，該化合物是由魚油和一種富含Q-3甚長鏈多不飽和脂肪酸(VLC-PUFAs)的藻類提取物組成，其包括，但不只限于，二十二碳六烯酸(DHA)和/或二十碳五烯酸(EPA)，魚油與藻類提取物的比例約為1:0.01-100。本發(fā)明中這種穩(wěn)定的魚油組分能被當作一種成份，該成份可為動物，包括人類，提供一種功能性食品，其中，VLC-PUFAs通過改善其在食物產(chǎn)品中抵抗氧化惡化的能力來發(fā)揮它們的臨床效果。本發(fā)明的另一個實施例涉及富含Q-3VLC-PUFAs的藻類提取物的使用，例如，但不只限于，隱甲藻屬(C/7/^力ecW/z7/頭)，裂殖壺菌屬(5^力/zoc力/"/wz7)，石皮嚢壺菌屬(r力ra〃"oc力/"/鵬)和烏肯壺菌(W化/7/aJ屬種類作為食品添加劑為動物，包括人類，提供一種在食物產(chǎn)品中以高度穩(wěn)定形式存在的VLC-PUFAs。本發(fā)明的另一個實施例涉及富含Q-3VLC-PUFAs的藻類提取物的使用，例如，但不只限于，隱曱藻屬，裂殖壺菌屬，破嚢壺菌屬和4#^蘿屬，作為一種抗氧化物。這種拔j又物可以加入回藻類生物，以防止上述生物在處理或儲藏過程中過度氧化。這種提取物也能夠被直接添加到食物產(chǎn)品中以提供一個Q-3VLC-PUFAs的穩(wěn)定來源。本發(fā)明的另一個實施例涉及使用隱曱藻屬，裂殖壺菌屬，破嚢壺菌屬和4:f^萄^屬藻類生物或生物粉直接添加到魚油中，其中生成的漿狀物與油脂本身相比，穩(wěn)定性有所改進。生成的穩(wěn)定混合物能被用作為一種食物產(chǎn)品，將飼料或食物產(chǎn)品中穩(wěn)定的Q-3VLC-PUFAs輸送給動物。定義下列每一個在這里使用的術(shù)語都有與其語境相聯(lián)系的含義。"VLC-PUFA"表示的是長鏈多不飽和脂肪酸，它具有一個20或更長的碳鏈以及3個或更多的雙鍵。這些可以是，但不僅限于是，二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)、花生四烯酸(ARA)和二十碳五烯酸UPA)。"粗制藻類提取物"表示的是使用有機溶劑從藻類生物中提取的任何物質(zhì)，例如，但不僅限于烴(例如，己烷，戊烷等)，酒精(例如，異丙醇，乙醇等)，卣化烴(例如，氯仿，二氯曱烷等)，或超臨界氣體(例如，二氧化碳，丙烷等)。此外，非傳統(tǒng)的提取過程，利用可提供等價粗制藻類提取物的含水的或干燥的提取物，也包含在這一定義中。"藻類提取物"表示的是提煉步驟(物理的或化學(xué)的)后剩余的物質(zhì)，它可以除去一部分粗制藻類提取物中包含的甘油三酸脂。"生物粉"表示的是油脂提取后殘留的固體物質(zhì)。它是由細胞壁、蛋白質(zhì)、剩佘油脂、穩(wěn)定化合物和阻遏油脂提取過程或參與油脂處理過程的其它化合物組成的。"VLC-PUFA藻類"表示的是可以生產(chǎn)出按上述定義的VLC-PUFAs的任何藻類種類。這種VLC-PUFA藻類的例子有，但不僅限于，寇氏隱甲藻，隱曱藻(Ci77^力ecotfi/7/'咖sp.),裂殖壺菌，雨生紅球藻(戶or;力/"'力'鵬cr〃e/7腦)，三角褐指藻(戶力aeo^2"/7咖f/7co/77w飾)，新氯藻(Afeoc力/o了/ssp.),矛肖叉素》萊(s/6aj禾口'J、J不卩葉(C/c/ofe//3sp.)。"海洋油"表示的是從水生動物(海水或淡水)中提取的任何油脂，主要是甘油三酸脂，水生動物包括魚(例如，鯰魚、緋魚、鮭魚、金槍魚、鯊魚等)，哺乳動物(例如，鯨、海豹等)，甲殼類動物(例如，壞、螃蟹等)，頭足類動物(例如，烏賊、墨魚等)，以及軟體動物(例如，牡蠣、蛤等)。詳細描述根據(jù)本發(fā)明，一種化合物已發(fā)展為由一種海洋油與一種粗制藻類提取物或者與藻類提取物組成，該藻類提取物包含呈現(xiàn)出乎意料地高度氧化穩(wěn)定性的VLC-PUFAs。本發(fā)明使用的微藻類含有VLC-PUFAs,并且能通過光合作用生長或者從光合的養(yǎng)殖、池塘或水溝中獲取。不是所有的藻類都含有VLC-PUFAs，但是那些廣為人知的富含脂肪酸的化合物已經(jīng)被公布。這些藻類包括，但不僅限于，綠色藻類(greenalgae)(例如，微綠球藻屬(y^//20c力/or/'s)、擬微i求藻屬(化"/70c力/oro;^/s)等)，金藻類(Chrysophytes)(例如，等鞭金藻屬(/mc力/x5")等)，硅藻類(Diatoms)(例如，小環(huán)藻屬(C7C/We"a)、舟形藻屬(^r/cw/a)、扁藻屬(7Wrwe7yz")等)，凈曷'藻類(Phaeophytes)(侈'J^口，；爭帶屬(Zay^./sr/s)、石莼屬(〃/f<3)等)?？蛇x地，較佳地，藻類能通過發(fā)酵生長。這些藻類也廣為人知，而且包括，4旦不僅限于，溝鞭藻類(Dinoflagellates)(例如，隱甲藻屬等)和壺菌類(chytrids)(例如，裂殖壺菌屬、破嚢壺菌屬和4f產(chǎn)蘿屬等)。后者這些藻類含有很少的甚至沒有葉綠素，這就顯著地提高了粗制藻類提取物和藻類提取物的穩(wěn)定效果。據(jù)推測，富含VLC-PUFAs的藻類已經(jīng)進化產(chǎn)生抗氧4匕機制，以保護這些VLC-PUFAs在原處遠離導(dǎo)致細胞死亡的氧化損傷。微藻類可以通過任何標準方法獲取，包括離心、絮凝、過濾等，而且濃縮的藻類可被用做制備粗制藻類提取物的初始原料。藻類可以在提取前干燥或者他們也能以濕糊狀被提取。海藻油是典型地使用有機溶劑被提取的，例如己烷、酒精，或者任何其它用作蔬菜油提取的溶劑。粗制藻類提取物能直接在本發(fā)明中應(yīng)用，或者它能通過標準的蔬菜油的提煉步驟而被進一步純化，包括脫膠、提煉、漂白和除臭的步驟。由提煉粗制藻類提取物的過程而產(chǎn)生的廢水流，在本發(fā)明中特別地有用。藻類提取物是一種多油脂的或油膩的物質(zhì)，它高度富含藻類VLC-PUFA,并以甘油三酸脂、游離脂肪酸、脂肪酸皂質(zhì)、和磷脂的形式存在。如果使用光合的藻類，葉綠素一定要被去除(例如，通過漂白的方法)以改善提取物的穩(wěn)定特性。發(fā)酵生長的藻類，如隱曱藻屬或裂殖壺菌屬，不包含任何葉綠素，因此這個步驟也不是必需的。物理的和化學(xué)的提煉過程都能用來生產(chǎn)藻類提取物?；瘜W(xué)的提煉過程典型地包括用堿清洗原油提取物和磷酸，然后從富含甘油三酸脂的膠束片段中分離更多極性脂質(zhì)成份(例如，游離脂肪酸，脂肪酸鹽，磷脂等)。以隱曱藻屬生物的處理過程作為一個例子來說明這一處理過程可產(chǎn)出對本發(fā)明有用的部分(圖1)。然后把粗制藻類提取物或藻類提取物直接加入到海洋油中并使用任一傳統(tǒng)攪拌器混合，例如，但不只限于高速分散劑，齒輪驅(qū)動鼓膜攪拌器，雙刃行星攪拌器，或軸和螺旋推進攪拌器。生成的化合物仍然高度富含EPA和DHA,穩(wěn)定性遠大于單獨的海洋油。生成的混合物能被進一步穩(wěn)定，通過添加其它已知的抗氧化物，如，但不只限于，維他命E、類胡蘿卜素、沒食子酸鹽、卵磷脂、奎寧等。通過在技術(shù)上利用任何已知的方法用多油脂原料與該產(chǎn)品混合或面涂該產(chǎn)品，生成的穩(wěn)定海洋油能直接在食品或詞料產(chǎn)品中應(yīng)用?？蛇x地，生成的穩(wěn)定海洋油通過與其它碳水化合物聚合體(例如，溶解的或不溶解的淀;盼、纖維素、殼聚糖等)或蛋白質(zhì)(例如，凝膠、乳漿蛋白質(zhì)、干酪素等)結(jié)合，能被加工成一種干粉末形式。生成的混合物能被直接使用或被裝入膠嚢，擠壓，膨脹，或作為一種食品或銅料產(chǎn)品以任何適當?shù)姆绞郊右蕴幚怼１景l(fā)明的另一個實施例中，粗制藻類提取物或藻類提取物可直接被添加到任一有或沒有海洋油的食品基質(zhì)中，為食物產(chǎn)品提供一種穩(wěn)定形式的VLC-PUFAs。粗制藻類提取物或藻類提取物在制造谷類或以谷類為基礎(chǔ)的產(chǎn)品，如壓成塊的加工食品之前，能直接與處理的或未處理的谷物干燥成份混合。粗制藻類提取物或藻類提取物也能在混合、混勻、處理和包裝之前，在制備人造黃油、可用匙舀起的敷料劑、可倒的敷料劑等過程中直接與水或乳化成份混合。粗制藻類提取物或藻類提取物也能被直接添加到未提取的藻類生物中，是通過面涂干燥的生物或在干燥步驟之前把液體提取物加入藻類糊狀物中實現(xiàn)的。一旦干燥后，這樣的一個過程將會把顯著的穩(wěn)定性加入到生物本身，因此無需j吏用人工抗氧化物如衣索金(ethoxyquin)。卵磷脂也能^:添加到藻類生物中，是通過用稀釋的卵磷脂混合物來噴涂干燥的生物或在干燥步驟之前把卵磷脂直接加入藻類糊狀物中實現(xiàn)的。卵磷脂能與粗制藻類提取物或藻類提取物結(jié)合使用以改善其抗氧化能力，或單獨使用以穩(wěn)定生物。例子本發(fā)明現(xiàn)在通過下列相關(guān)例子來描述。這些例子僅僅是以說明為目的，而并非本發(fā)明只限于這些例子，而是由于在這里提供教學(xué)包含所有明顯的變換。例1制備^a制藻類提取物制備海藻油提取物首先是讓寇氏隱曱藻在含有基質(zhì)的發(fā)酵罐中生長，該基質(zhì)由葡萄糖、酵母提取物和人造海水組成，正如Kyle所描述的(美國專利號5,407,957)。藻類生物通過連續(xù)的流動離心和利用噴霧干燥器干燥固體而獲得。干燥后的固體用己烷萃取，且在己烷(膠束)中的粗制藻類提取物通過離心從提取的藻類粉中分離出來。然后把己烷從膠束中除去，留下粗制藻類提取物。接著，粗制藻類提取物通過加入堿水溶液和離心而被提煉。水層(藻類提取物)包含一種由甘油三酸脂油、游離脂肪酸、脂肪酸鹽、和水乳狀液的磷脂組成的混合物。這種原料在商業(yè)上可從高級生物營養(yǎng)7^司(AdvancedBioNutritionCorp.)得到，并表現(xiàn)為本發(fā)明的出發(fā)點。例2一種體、定的藻類魚油的制備和分析。例1中的粗制藻類提取物與魚油(Q蛋白質(zhì)；休斯頓，德克薩斯州)以不同的比例充分混合，生成的混合物通過測量其過氧化值(peroxidevalue;以下簡稱PV)來檢測其氧化穩(wěn)定性，使樣品暴露于室溫(約22°C)0小時，97.8匸下4小時或20小時，并伴隨有2.33毫升/秒的氣流。制備的樣品是這樣的，干燥產(chǎn)品的40%是脂肪。將每個樣品米拉米斯特(Miramist662(斯塔利(Staley)，印地安那州))，斯達德里(Stardri(泰特&菜爾(Tate&Lyle),英國))，魚油和DHA提取物稱重，放入2升的燒杯內(nèi)。加入蒸餾水使最終的體積為1升?；旌衔镉貌紕诙魇殖謹嚢铏C混勻。樣品被冷凍并接著被凍干。新澤西州飼料實驗室(特倫敦(Trenton)，新澤西州)進行了PV分析(表1)。總的氧化穩(wěn)定性可達到的比例為1.4:0.6(魚油DHA提:f又物(脂肪))。這相當于來自魚油70%的脂肪和來自DHA提取物30%的脂肪。因為DHA提取物不全部是脂肪，它可以準確地以1:1的比例把未加工的DHA提取物加入魚油以達到所需要的脂肪含量。如果我們假設(shè)魚油的10。/。是DHA,且DHA提取物中50%的脂肪是DHA，然后按魚油脂肪比DHA提取物脂肪為1.4:0.6的比例將會生產(chǎn)出一種干燥產(chǎn)品，其含有大約8.8%的DHA(重量)(上面列出的配方已給出)。表l.在加速降解研究中，藻類提取物/魚油在不同混合比例下的過氧化值<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>*這個數(shù)據(jù)僅表示DHA提取物中的脂肪而不是提取物本身。提取物還包含碳水化合物、蛋白質(zhì)和水，在配方中它們也占有一定比例。*"DHA提取物"一欄表示為達到樣品中的脂肪脂肪樣品的比例，所需要的實際提取物的量。例3酵母乳中一種穩(wěn)定的藻類魚油的應(yīng)用根據(jù)例1按藻類提取物比緋魚油為1:3的比例制備魚油(緋魚油)和藻類提取物(來自寇氏隱甲藻(C.co力/"7))。用高剪切混合器將該混合物加入酵母乳中并混合至平滑且均衡，每一作用單位提供100毫克DHA。然后^fc職能化的酵母乳裝入塑料容器并封閉。例4在壓成塊的加工食品中一種穩(wěn)定的藻類魚油的應(yīng)用根據(jù)例1按藻類提取物金槍魚油為1:1的比例制備魚油(金槍魚油)和藻類提取物(來自裂殖壺菌)。然后將該混合物加入到一種壓成塊的加工谷類混合物中，該壓成塊的加工谷類混合物由格蘭諾拉麥片、玉米糖漿、米花、葡萄干、燕麥片、山梨(糖)醇、鹽、天然香料、熟化乳漿、糖蜜、檸檬酸和水組成，每一作用單位(28克)對應(yīng)200毫克DHA,用高剪切混合器混合，并在100。C下擠壓。接著在13(TC的烘箱中烘干，產(chǎn)品溫度的最大值是115。C。把壓成塊的谷類加工食品切成大約28克的獨立部分，并在鋁箔包裝中封閉。例5應(yīng)用穩(wěn)定的藻類魚油面涂飼料顆粒根據(jù)例1按藻類提取物緋魚油為1:5的比例制備魚油(緋魚油)和藻類提取物(來自寇氏隱曱藻"力"/2'))。然后將該混合物轉(zhuǎn)移到一個存儲容器并保持為液態(tài)。該液體混合物被加熱到大約50°C,并噴涂在標準的飼料顆粒上，以提供一種含有1%(重量)DHA的化合物。把這些伺料顆粒包裝起來，且能在使用前貯存許多個月。例6一種含有穩(wěn)定的藻類魚油的擠壓顆粒的制備根據(jù)例1按藻類提取物緋魚油為1:1的比例制備魚油(緋魚油)和藻類提取物(來自寇氏隱曱藻(C.^力"http://))。然后將該混合物加入到一組合物中，該組合物由面粉(80%)、紫花苜蓿粉(15%)、和糖蜜(5%)組合而成，并將該組合物置入雙螺桿擠出機，擠壓成長度為5毫米、直徑為3毫米的顆粒。生成的擠壓產(chǎn)品包含約20%的油脂，且油脂中包含約20%的DHA(最終產(chǎn)品含有4%(重量)的DHA)。例7使用穩(wěn)定的藻類魚油預(yù)混料作為飼料中的一種成份根據(jù)例5制備藻類提取物中穩(wěn)定的魚油顆粒。這些顆粒與傳統(tǒng)的豬飼料混合，^吏其約占混合后總飼料的5%。生成的混合物包含約1%的DHA,且可以將其喂養(yǎng)給懷孕的和哺乳的母豬以提高DHA轉(zhuǎn)移給胎兒和乳豬的能力。例8帶藻類提取物的藻類生物的穩(wěn)定根據(jù)例1制備藻類提取物(來自寇氏隱甲藻(G"/w//))或從高級生物營養(yǎng)7>司購買。裂殖壺菌屬生物可按照美國專利號5,130,242的專利發(fā)酵生產(chǎn)。裂殖壺菌屬生物可通過離心或圓筒烘干完全發(fā)酵液獲得，藻類提取物與該小圓球按藻類提取物(濕重)比裂殖壺菌屬生物(在10-15%為固體下的濕重)為l:20的比例混合，然后生成的混合物被噴霧干燥。例9帶藻類提取物的藻類生物的穩(wěn)定根據(jù)例l制備藻類提取物(來自裂殖壺菌屬)或從高級生物營養(yǎng)公司購買。裂殖壺菌屬生物可按照參考文獻(1，2)發(fā)酵生產(chǎn)。裂殖壺菌屬生物可通過離心獲得并用旋轉(zhuǎn)式真空干燥器干燥。當裂殖壺菌屬生物的固體含量為80%時，把藻類提取物噴涂在干燥生物上并在千燥的最后階段，其水分含量4氐于8%之前混合。生成的混合物是裂殖壺菌生物屬生物的一種穩(wěn)定形式。例10帶卵磷脂的藻類生物的穩(wěn)定根據(jù)參考文獻(l，2)發(fā)酵生產(chǎn)裂殖壺菌屬生物。裂殖壺菌屬生物可通過對發(fā)酵的全部內(nèi)含物進行干燥而獲得，但是要在千燥的最后階段，其水分含量低于8%之前在干燥生物上添加卵磷脂(德固賽(Degussa))并混合。生成的混合物是裂殖壺菌屬生物的一種穩(wěn)定形式。例11帶混合物的費蒂爾利厄姆(Fertillium)的穩(wěn)定聯(lián)合飼料(UnitedFeeds)中擠壓出的魚油產(chǎn)品費蒂爾利厄姆的許多配方是在美國卡斯特姆干燥公司(AmericanCustomDryingCo)中(柏靈頓，新澤西州)制成的。第l批(魚油(FO))是一個對照，是按照聯(lián)合飼料的普通費蒂爾利厄姆配方用含有衣索金的魚油制成的。第2批是用魚油和DHA才是取物(F0+DHA)制成的。第3批僅用DHA提取物制成。制備過程完成后進行初始的PV測量。PV測量在第4個月時進行重復(fù)，并得到下列結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>*過氧化值或PV是以mep/千克為單位報告的；所有的分析是在新澤西州的飼料實驗室中完成的(特倫頓，新澤西州)。_這些配方被計算出在噴霧干燥的粉末中總脂肪可以達到40%。F0+MA的混合可用配方表達為20%的脂肪來自魚油和20%的脂肪來自DHA提取物。DHA提取物明顯地為魚油增加了測量的顯著穩(wěn)定性，并且延長了費蒂爾利厄姆產(chǎn)品的貨架期。為控制這些材料穩(wěn)定性的研究已被按月計劃。牢記為40的PV處于高的充足劑量時對動物有害。例12藻類生物粉對于穩(wěn)定魚油的應(yīng)用魚油與生物4分(馬爾泰克生物牙牛才支z&司(MartekBiosciencesCorp.))混合，生物粉是從寇氏隱曱藻中制備DHASCO(馬爾泰克生物科技公司)的過程中殘留下來的。生物粉按l:IO的比例加入油脂中，以形成一種粘性的漿液。然后把該漿液合并入任一標準食物的制備過程中，以傳遞穩(wěn)定的,。例13藻類生物粉對于穩(wěn)定魚油的應(yīng)用魚油與凍干的且含有高水平DHA(寇氏隱曱藻；馬爾泰克生物科4支公司)的藻類生物混合。該材料是按生物比魚油約為2:10的比例混合的。這種材料提供了一種混合物，在該混合物中DHA水平隨著普通魚油的EPA水平增長，且通過應(yīng)用本發(fā)明的共同混合物可以達到更高水平的穩(wěn)定性。例14從綠色藻類中制備粗制藻類提取物綠色藻類擬微球藻屬在如(14)所述的光生物反應(yīng)器中利用厄費斯克瑞博(Erdschreiber)基質(zhì)(15)進行光合生長。如例1所述，藻類被進行提取。傘且制藻類提取物、藻類提取物、生物、和生物粉如先前例子所描述的那樣應(yīng)用。例15從金藻類中制備粗制藻類提取物金藻類等鞭金藻屬LB987(德克薩斯大學(xué)培養(yǎng)收藏)在如(14)所述的光生物反應(yīng)器中利用厄費斯克瑞博基質(zhì)(15)進行光合生長。如例1描述的那樣，藻類^皮進行提取。粗制藻類提取物、藻類提取物、生物、和生物粉如先前例子所描述的那樣應(yīng)用。例16從光合硅藻中制備粗制藻類提取物硅藻(diatom)小環(huán)藻屬1269(德克薩斯大學(xué)收藏)在如(l4)所述的光生物反應(yīng)器中的紫球藻屬(Porphyridium)基質(zhì)(500毫升中結(jié)合有200毫升玻璃蒸餾水，250毫升滅菌的、過濾的海水，50毫升表層土壤水，0.5克酵母提取物，0.5克胰化胨)中進行光合生長。如例1描述的那樣，藻類被進^f亍提取。粗制藻類提取物、藻類提取物、生物、和生物粉如先前例子所描述的那樣應(yīng)用。例17從異養(yǎng)硅藻中制備粗制藻類提取物的方法紡錘狀珪藻柱嚢藻(Cylindrotheciafusiformis)(13)在本質(zhì)上是利用葡萄糖作為碳源進行異養(yǎng)生長的，正如例1中對于隱曱藻的描述。如例l描述的那樣，藻類被進行提取。粗制藻類提取物、藻類提取物、生物、和生物4分如先前例子所描述的那樣應(yīng)用。例18從一種褐藻(phaeophyte)中制備粗制藻類提取物正如文獻中描述的那樣，海帶屬是從大海中收集來的。該材料按照描述的那樣凈皮進行提取，而除了將藻類生物風(fēng)干和在干燥后增加制粉步驟。如例l描述的那樣，藻類被進行提取。粗制藻類提取物、藻類提取物、生物、和生物^j^分如先前例子所描述的那樣應(yīng)用。例19從壺菌(chytrid)4#*霧中制備粗制藻類提取物4f^麥是進行發(fā)酵生長的，且如例1描述的那樣被進行提取。粗制藻類提取物、藻類提取物、生物、和生物粉如先前例子所描述的那樣應(yīng)用。例20藻類細胞生物(裂殖壺菌)按照Barclay的方法(美國專利號為6,451,567)進行發(fā)酵培養(yǎng)，然后被一種天然的抗氧化嚢處理，該嚢由維他命C、維他命E和迷迭香提取物組成，經(jīng)過離心和圓筒烘干而獲得。這被稱為INT生物，它可以從馬爾泰克生物科技公司得到(哥倫比亞，馬里蘭州，美國)。INT生物的總脂質(zhì)含量為59.9%(重量)，并且與4%(重量)脫脂的、粉狀的大豆卵^疇脂(Epikuron100P)干燥混合。生成的材料被放入IO(TC(加速對穩(wěn)定性的挑戰(zhàn))的烘箱，樣品每隔4個小時取出一次，檢測其過氧化值(PV)。在0和24小時利用從生物樣品中制備的脂肪酸曱酯的氣相色譜分析測量DHA的含量。得到的數(shù)據(jù)在表2中示出。表2.INT生物和IO(TC烘箱中熟化的INT生物+4。/。卵磷脂<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>例21INT生物按照例20中的方法制備。5%(重量)的卵磷脂(Epikuron100P)與INT生物千燥混合。在第二個樣品中，由建明工業(yè)(KeminIndustries)(得梅因，愛荷華州，美國)提供的，推薦重量水平為1%的商業(yè)抗氧化嚢與INT生物干燥混合。建明(Kemin)抗氧化嚢是一種天然及合成的抗氧化物(除了衣索金)的專有混合，通常以1%的含量水平被用來保存魚粉。在加速穩(wěn)定的測試中，樣品被放入IO(TC的烘箱16小時。16小時后，將所有的樣品取出，并測定其過氧化值(PVs)(表3)。例22INT生物按照例20中的方法制備。向一份100克的生物中，通過干燥混合加入5克的卵磷脂(葉皮古龍(Epikuron)100P)。向第二份100克的生物中，加入150毫升水(模擬來自發(fā)酵獲得物的濃縮漿液)和5克葉皮古龍100P。生成的漿液;陂充分混合和凍干，以除去水分。在加速穩(wěn)定的測試中，干的和濕的混合材料樣品被放入100。C的烘箱16小時。16小時后，將樣品取出，并測定其過氧化值(PVs)(表3)。表3.經(jīng)卵磷脂或商業(yè)抗氧化嚢在IO(TC下穩(wěn)定16小時后的樣品的過氧化值<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>例23已經(jīng)檢測了各種類型的卵磷脂對于穩(wěn)定富含多不飽和脂肪酸材料的能力。將魚油樣品(每15毫升試管10克)準備好，然后把5%含量水平的不同類型的卵磷脂加入魚油。另外，把推薦含量為0.1%含量水平的兩個合成的抗氧化混合物加入魚油樣品。所有的樣品保持打開著，且將15毫升試管放入IO(TC的烘箱培養(yǎng)8小時，測定每2小時取出的樣品的PV(表4)。表4.經(jīng)卵磷脂或商業(yè)抗氧化囊在100。C下穩(wěn)定16小時后的樣品的過氧化值<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>例24魚油樣品是按照例24制備的，且僅檢測了葉爾金(Yelkin)1018液體的大豆卵磷脂在不同添加量的情況下的穩(wěn)定效果，添加量從重量2D/。到8%。通過采用蘭奇馬特(Rancimat)分析法(對每特羅罕姆(Metrohm)AG,黑里紹(Herisau),瑞士)和近似于氧化穩(wěn)定指數(shù)(OSI)測定的程序來測定油脂的氧化穩(wěn)定性。該方法是一個由美國油脂化學(xué)家學(xué)會(AmericanOilChemistsSociety,AOCS)公布的標準方法。在油脂4皮迫氧化期間的不同時間點，取出樣品并測定過氧化值(PV)(表5)。表5.在采用不同數(shù)量的卯磷脂穩(wěn)定魚油的蘭奇馬特法中，魚油的過氧化值為時間的函凄t<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>例25藻類細胞生物按照例20中的方法制備，并用于飼料制備中。把"％含量比例的INT生物與面粉、紫花苜蓿粉、和亞麻粉混合，而第二份樣品以32%的含量比例混合。在兩種情況下，卵磷脂(葉皮古龍IOOP)按總食物5%的比例添加，且生成的混合物被蒸汽擠壓(IO(TC持續(xù)3分鐘后，熱氣千燥20分鐘，最終溫度達到145°C)以形成高度富含藻類細胞生物的飼料顆粒。擠壓產(chǎn)品的樣品被放入標準袋中，且在室溫下貯存。在0、3和7個月后，脂肪從等分樣品中提取出來，并測定提取的脂肪樣品的過氧化值(PV)(表6)。表6.高度富含以卵磷脂穩(wěn)定藻類細胞生物的飼料的長期穩(wěn)定性結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>例26藻類細胞生物按照例20中的方法培養(yǎng)，但是新獲得的生物與卵磷脂混合并噴霧干燥。葉爾金液體的大豆卵磷脂以5%固體的比例被直接加入到濃縮的裂殖壺菌屬(ca.20%固體)發(fā)酵液中。該樣品和沒有加入卵磷脂的對照樣品在小范圍噴霧干燥器(AmericanCustomDryingCo.,柏靈頓，新澤西州，美國)中干燥。把50克的樣品轉(zhuǎn)移到樣品容器中，并在22。C或4(TC下儲存。由從生物中提取的油脂而獲得的初始過氧化值(表7)表明添加卯磷脂可顯著降低(50%)由于噴霧干燥造成的氧化損傷。利用從生物樣品中制備的脂肪酸曱酯的氣相色譜分析而測定的初始DHA水平也表明添加卵磷脂可顯著降低由于噴霧干燥造成的氧化損傷(DHA損失)。表7.從藻類生物樣品中提取的、有和沒有卵磷脂的油脂在噴霧干燥后的過氧化值<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>所引用的參考文獻用下列數(shù)字標明。1.Barclay,W.2002.Fermentationprocessforproducinglongchainomega-3fattyacidswitheuryhalinemicroorganisms.USPT06,451,567Bl.Omegatech,Inc.,USA.2.Barclay,W.2003.Processfortheheterotrophicproductionofmicrobialproductswithhighconcentrationsofomega—3highlyunsaturatedfattyacids./刀USPubl.US20030138477.USA.3.Bracco，U.andR.Decekba亂1992.Polyunsaturatedfattyacidsinhumannutrition.RavenPress,NewYork,NewYork.4.Connor,W.E.2000.Importanceofn-3fattyacidsinhealthanddisease.AmJClinNutr77:171S-175S.5.Fom謂，L.B.,M.CorredigandC.C.Akoh.2002.Effectofemulsifieronoxidationpropertiesoffishoil-basedstructuredlipidemulsions.JAgricFoodChemJft2957-2961.6.Frankel,E.N.，T.Satu6-Gracia，A.S.MeyerandJ.B.German.2002.OxidativeStabilityofFishandAlgaeOilsContainingLong—ChainPolyunsaturatedFattyAcidsinBulkandinOil-in-WaterEmulsions.JAgricFoodChem2094-2099.7.Horrocks，LA.andY.LYeo.1999.Healthbenefitsofdocosahexaerioicacid咖A).PharmacolRes4ft211-225.8.Kohn,G.，W.BanzhafandJ.Abril.2002.Productionanduseofapolarlipid-richfractioncontaining0mega-3and/orOmega-6highlyunsaturatedfattyacidsfrommicrobes,geneticallymodifiedplantseedsandmarineorganisms.//PCTPublNo.WO02092540.MartekBiosciencesBoulderCorp.Kremer，J.M.2000.n—3fattyacidsupplementsinrheumatoidarthritis.AmJClinNutr349S-351S.10.Kyle,D.J.andC.Becker.2000.Infantformulasandotherfoodproductscontainingphospholipids.//PCTPubl.W00054575.MartekBiosciences,USA.11.Kyle,D.J.，S.ReebandV.Sicotte.1998.Dinoflagellatebiomass，methodsforitsproduction,andcompositionscontainingthesame.//USPatent5,711,983.MartekBiosciences.12.Kyle,D.J.,S.E.ReebandV.J.Sicotte.1998.Dinoflagellatebiomass，methodsforitsproduction,andcompositionscontainingthesame.//MartekBiosciencesCorporation.13.Lewin,J.andLA.Hellebust.1970.Heterotrophicnutritionofthemarinepennatediatom,Cylindrothecafusiformis.CanJMicrobiol":1123-1129.14.Radmer，R.1990.Photobioreactor./y^IartekBiosciencesCorp.15.Rosowski，J.R.andB.C.Parker.1971.SelectedPapersinPhycology.PhycologicalSocietyofAmerica,Inc.因此，在這里所引用的每一個公開的專利、專利申請、和出版物已被此處的參考文獻全部合并在一起。當本發(fā)明涉及的具體實施例已被公開的時候，很顯然，本發(fā)明的其它實施例和變換可以被本領(lǐng)域的其他熟練技術(shù)人員聯(lián)想到，而不脫離本發(fā)明的真實精神和范圍。從屬權(quán)利要求包括所有這樣的實施例和等同的變換。權(quán)利要求1.一種化合物，包括粗制藻類提取物和卵磷脂。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述卵磷脂的量的范圍為藻類提取物重量的約4%到約5%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述粗制藻類提取物是從一種發(fā)酵生長的藻類中提取的。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中所述藻類是溝鞭藻類。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物，其中所述溝鞭藻類是隱曱藻屬。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中所述藻類是壺菌。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中所述壺菌是從裂殖壺菌屬、破嚢壺菌屬和烏肯壺菌屬中選取的。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述粗制藻類提取物是從綠色藻類中提取的。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的化合物，其中所述綠色藻類是從微綠球藻屬和擬孩i球藻屬中選取的。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述粗制藻類提取物是從金藻類中提取的。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的化合物，其中所述金藻類是等鞭金藻屬。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述粗制藻類提取物是從硅藻類中提取的。13.#_據(jù)權(quán)利要求12所述的化合物，其中所述硅藻類是從小環(huán)藻屬、舟形藻屬、扁藻屬和柱嚢藻屬中選取的。14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述粗制藻類提取物是從褐藻類中提取的。15.#4居權(quán)利要求14所述的化合物，其中所述褐藻類是從海帶屬和石莼屬中選耳又的。16.—種化合物，包括藻類提取物和卵磷脂。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中所述卵磷脂的量的范圍為藻類提取物重量的約4%到約5%。18.4艮據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中所述藻類提取物從是從發(fā)酵生長的藻類中提取的。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述的藻類是溝鞭藻類。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的化合物，其中所述溝鞭藻類是隱曱藻屬。21.才艮據(jù)權(quán)利要求18所述的化合物，其中所述的藻類是壺菌。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的化合物，其中所述壺菌是從裂殖壺菌屬、破嚢壺菌屬和烏肯壺菌屬中選取的。23.根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中所述藻類提取物是從綠色藻類中提取的。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的化合物，其中所述綠色藻類是從微綠球藻屬和擬孩U求藻屬中選取的。25.根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中所述藻類提取物是從金藻類中提取的。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的化合物，其中所述金藻類是等鞭金藻屬。27.4艮據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中所述藻類提取物是從硅藻類中提取的。28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的化合物，其中所述硅藻類是從小環(huán)藻屬、舟形藻屬、扁藻屬和柱嚢藻屬中選取的。29.根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中所述藻類提取物是從褐藻類中提取的。30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的化合物，其中所述褐藻類是從海帶屬和石莼屬中選^^的。31.—種化合物，包括生物粉和卵磷脂。32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的化合物，其中所述卵磷脂的量的范圍為生物4分重量的約4%到約5%。33.#4居權(quán)利要求31所述的化合物，其中所述生物粉是從發(fā)酵生長的藻類中提取的。34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的化合物，其中所述藻類是溝鞭藻類。35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的化合物，其中所述溝鞭藻類是隱曱藻屬。36.根據(jù)權(quán)利要求33所述的化合物，其中所述藻類是壺菌。37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的化合物，其中所述壺菌是從裂殖壺菌屬、破嚢壺菌屬和烏肯壺菌屬中選取的。38.根據(jù)權(quán)利要求31所述的化合物，其中所述生物粉是從綠色藻類中提取的。39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的化合物，其中所述綠色藻類是從微綠球藻屬和擬孩"求藻屬中選取的。40.根據(jù)權(quán)利要求31所述的化合物，其中所述生物粉是從金藻類中提取的。41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的化合物，其中所述金藻類是等鞭金藻屬。42.根據(jù)權(quán)利要求31所述的化合物，其中所述生物粉是從硅藻類中提取的。43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的化合物，其中所述硅藻類是從小環(huán)藻屬、舟形藻屬、扁藻屬和柱嚢藻屬中選取的。44.根據(jù)權(quán)利要求31所述的化合物，其中所述生物粉是從褐藻類中提取的。45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的化合物，其中所述褐藻類是從海帶屬和石莼屬中選取的。46.—種食物產(chǎn)品的生產(chǎn)方法，包括將權(quán)利要求1~45中的任一所述化合物的添加到食物產(chǎn)品中。47.才艮據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述食物產(chǎn)品用于由人類消費。48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述食物產(chǎn)品用于由非人類的動物消費。49.一種通過添加權(quán)利要求1~15中的任一所述粗制藻類提取物的藻類生物穩(wěn)定方法。50.—種穩(wěn)定藻類生物的方法，包括將權(quán)利要求16~30中的任一所述藻類提取物添加到藻類生物中。51.—種穩(wěn)定藻類生物的方法，包括將權(quán)利要求31~45中的任一所述生物粉添加到藻類生物中。全文摘要本發(fā)明涉及一種極其穩(wěn)定的魚油混合物的化合物和生產(chǎn)方法，及所述混合物的使用方法。本發(fā)明為混合物中的魚油或其它長鏈多不飽和脂肪酸提供了磷脂添加劑，該混合物能增強最終產(chǎn)品的穩(wěn)定性。最佳地，所述化合物利用了一種具有長鏈多不飽和酸的藻類生產(chǎn)者的粗提物，該長鏈多不飽和酸含有脂肪酸鹽和磷脂，并加入到魚油或其它純化的長鏈多不飽和脂肪酸中，以提供一種出乎意料穩(wěn)定的產(chǎn)品。文檔編號A61K31/20GK101227900SQ200680025149公開日2008年7月23日申請日期2006年5月11日優(yōu)先權(quán)日2005年5月11日發(fā)明者大衛(wèi)·J·凱爾,約翰·皮喬基申請人:高級生物營養(yǎng)公司