專利名稱：制劑的制作方法
專利說明制劑 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及抗微生物劑，以及某些化合物組合作為抗菌劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
例如過氧化苯甲酰的過氧化物已知用于治療皮膚感染的局部制劑，最值得注意的是用于治療痤瘡。過氧化苯甲酰尤其是由于其角質(zhì)溶解(消除粉刺(comedolytic))作用而為公眾所知。
然而過氧化物已知還可用作皮膚刺激劑和漂白劑以及氧化劑。這些副作用限制了過氧化物可用于局部皮膚制劑中的濃度，并且容易令患者不愉快。
現(xiàn)在已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)特定種類的過氧化物與特定種類的醌組合時(shí)，在其抗微生物活性的組合水平上可以觀察到協(xié)同效應(yīng)。因此可制備新的抗微生物制劑，特別是局部施用的制劑，與早期這種制劑相比具有改善的效力和/或含有較低水平的過氧化物活性物。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明第一個(gè)方面提供了含有以下組分的抗微生物制劑(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌。
該制劑優(yōu)選適于局部施用到皮膚和/或與皮膚特別是人體皮膚接觸。過氧化物和苯醌/氫醌由此優(yōu)選包含在藥學(xué)上可接受的賦形劑中，使其可以安全地施加到皮膚和/或其它上皮組織和/或與其接觸。理想地，制劑適于局部施加到例如鼻孔、眼睛、頭皮和/或陰道的區(qū)域，和/或耳朵內(nèi)和/或口腔內(nèi)的組織區(qū)域。最優(yōu)選施加到皮膚、鼻孔和耳朵內(nèi)組織，特別優(yōu)選施加到皮膚和鼻孔。
“適于”局部施用的制劑還可為局部施用改變。
合適的賦形劑為制備局部皮膚護(hù)理或藥物制劑領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。賦形劑通常將為流體，該術(shù)語包括霜?jiǎng)?、糊劑、凝膠、洗劑、膏劑、泡沫或其它粘性或半粘性流體，以及較少粘性的液體，例如可用于噴霧(例如鼻部應(yīng)用)。過氧化物和苯醌/氫醌可各自獨(dú)立地以溶液或懸浮液的形式存在，術(shù)語“懸浮液”包括制劑以及其它多相分散體。
過氧化物和苯醌/氫醌之一或兩者可以分別或共同負(fù)載在遞送賦形劑中或之上，該賦形劑適于靶向或控制其在預(yù)定給藥位置的釋放。這種賦形劑包括脂質(zhì)體及其他封裝實(shí)體，例如類脂質(zhì)體(niosome)、aspasomes、微型海綿、微乳劑、水凝膠和固體脂質(zhì)納米微粒。
過氧化物可為含有O22-基的化合物。其可為無機(jī)或有機(jī)化合物，不過其通常不會(huì)是過氧化氫(H2O2)。根據(jù)本發(fā)明，過氧化物選自二酰基過氧化物(例如過氧化二乙酰、過氧化二癸酰、過氧化二月桂?；蜻^氧化二苯甲酰)、烷基氫過氧化物(例如叔丁基氫過氧化物)和金屬過氧化物。一般而言，優(yōu)選二?；^氧化物。
合適的金屬過氧化物包括過氧化鋅、過氧化鈣、過氧化鋰、過氧化鈉、過氧化鋇、過氧化鎂、和過氧化銅。最優(yōu)選I族或II族金屬過氧化物，特別優(yōu)選II族金屬過氧化物——實(shí)例包括過氧化鈉、過氧化鎂和過氧化鈣，其中優(yōu)選過氧化鈣和過氧化鎂，尤其優(yōu)選過氧化鈣。
二?；^氧化物具有通式R1-C(O)-OO-C(O)-R2，其中R1和R2每個(gè)獨(dú)立地選自烷基、環(huán)烷基和芳基，優(yōu)選芳基。合適的烷基可選自C1-C20基，優(yōu)選C1-C16基，更優(yōu)選C1-C12基，最優(yōu)選C1-C8或C1-C6或C1-C4基(例如甲基、乙基、丙基(優(yōu)選異丙基)或丁基(優(yōu)選叔丁基))。合適的芳基為苯基。
二?；^氧化物特別可來源于脂肪酸來源；例如其可為二月桂基、二戊基或二枯基過氧化物。烷基、環(huán)烷基或芳基可被一個(gè)或多個(gè)其它基團(tuán)取代，然而優(yōu)選未取代。
R1和R2各自合適地獨(dú)立地選自C1-C12烷基和C1-C8芳基，特別是苯基。
中鏈(C6-C12)脂肪酸的某些合適的二酰基過氧化物例如公開在US-4,479,939中。更優(yōu)選R1和R2中至少一個(gè)(優(yōu)選全部)為苯基。
烷基氫過氧化物具有通式R3-OO-H，其中R3選自烷基、環(huán)烷基和芳基，優(yōu)選烷基，優(yōu)選C1-C8或C1-C6或C1-C4基。通常R3可如上述R1和R2定義。最優(yōu)選R3為叔丁基。
過氧化物可優(yōu)選選自二酰基過氧化物和金屬過氧化物。
在制劑用于對抗葡萄球菌的情形，特別優(yōu)選過氧化物為二?；^氧化物，優(yōu)選過氧化苯甲酰(又名過氧化二苯甲?；虮郊柞＿^氧化物)，其具有通式Ph-C(O)-O-O-C(O)-Ph。
在制劑用于對抗丙酸菌屬(propionibacteria)的情形，特別優(yōu)選過氧化物選自二酰基過氧化物(優(yōu)選過氧化苯甲酰)、烷基氫過氧化物(優(yōu)選叔丁基氫過氧化物)和金屬過氧化物(優(yōu)選過氧化鈣、過氧化鎂或過氧化鈉，更優(yōu)選過氧化鈣或過氧化鎂)。
過氧化物特別可為過氧化苯甲酰。
根據(jù)本發(fā)明的制劑可含有一種以上過氧化物。
苯醌為在不飽和六元環(huán)中含有兩個(gè)C＝O基的環(huán)己二烯二酮。其余四個(gè)碳原子可帶有一個(gè)或多個(gè)取代基，換句話說，苯醌可被任選取代。然而，術(shù)語“苯醌”并不意圖包括雙或多環(huán)醌。
氫醌(有時(shí)稱為羥基醌)為其中一個(gè)或多個(gè)(通常兩個(gè))C＝O基被C-OH基取代存在的苯醌；換句話說，其通常為二羥基苯，任選被一個(gè)或多個(gè)其它基團(tuán)取代。
苯醌至少部分以相應(yīng)氫醌的形式存在，或者相反，或者至少部分以其中一個(gè)或多個(gè)C＝O或C-OH基以C-O*存在的基團(tuán)存在。部分根據(jù)其局部環(huán)境(例如pH)，這些化合物可以兩種或多種這些物質(zhì)的平衡混合物的形式存在，例如苯醌及其相應(yīng)的氫醌。例如在堿性pH時(shí)，化合物更可能以苯醌的形式存在，然而在酸性pH時(shí)其更可能以氫醌的形式存在。氧化劑例如過氧化物的存在還可能導(dǎo)致氫醌到相應(yīng)苯醌的至少部分轉(zhuǎn)化。本發(fā)明因此包括苯醌、氫醌、相應(yīng)基團(tuán)或兩種或多種所述物質(zhì)任意混合物的應(yīng)用。
苯醌/氫醌的兩個(gè)C＝O基或C-OH基可彼此以鄰位、間位或?qū)ξ淮嬖?。在彼此以鄰位存在時(shí)，這已知為環(huán)己二烯-1，2-二酮或鄰苯醌，或者在相應(yīng)氫醌的情形，為兒茶酚。在彼此以間位存在時(shí)，這已知為環(huán)己二烯-1，3-二酮或間苯醌，或者在相應(yīng)氫醌的情形，已知為間苯二酚。在彼此以對位存在時(shí)，這已知為環(huán)己二烯-1，4-二酮或?qū)Ρ锦蛘咴趯ξ蝗〈鶫O-Ph-OH的情形，已知為對氫醌。
兩個(gè)C＝O基或C-OH基優(yōu)選彼此鄰位或?qū)ξ唬顑?yōu)選對位。
本發(fā)明使用的苯醌/氫醌可為，并且在一些情況中優(yōu)選被一個(gè)或多個(gè)其它基團(tuán)取代，例如選自烷基、烷氧基、鹵素、羥基、硝基(-NO2)和胺(-NR2，其中每個(gè)R獨(dú)立地選自氫或烴基)基的基團(tuán)。這些基團(tuán)將連接到醌中環(huán)己二烯環(huán)中的碳原子。
烷基取代基通常為直鏈或支鏈烷基。其可為環(huán)烷基或含有環(huán)烷基部分。例如其可含有1-12個(gè)碳原子，優(yōu)選1-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選1-8個(gè)碳原子。烷基取代基優(yōu)選為C1-C6烷基，更優(yōu)選C1-C5或C1-C4烷基?？蓛?yōu)選仲烷基和叔烷基(例如異丙基和叔丁基)。因此合適的烷基可選自甲基、乙基、異丙基和叔丁基。
烷氧基取代基優(yōu)選為C1-C6烷氧基，更優(yōu)選C1-C5或C1-C4或C1-C2烷氧基，最優(yōu)選甲氧基。鹵素取代基可選自氟、氯和溴，優(yōu)選氟或氯，最優(yōu)選氯。胺取代基優(yōu)選為NH2。
苯醌/氫醌優(yōu)選被至少一個(gè)這種取代基取代，其優(yōu)選在2位(至少在間位或?qū)ξ蝗〈谋锦?氫醌的情況下)或3位(在鄰位取代化合物的情況下)。有時(shí)苯醌/氫醌可被兩個(gè)這種取代基取代，在其它情況下具有三個(gè)乃至四個(gè)取代基。苯醌/氫醌可優(yōu)選具有一個(gè)或兩個(gè)這種取代基，在某些情況下僅僅一個(gè)取代基。
特別優(yōu)選的取代基選自烷基、烷氧基、鹵素和硝基，或烷基、烷氧基和鹵素，或烷基和鹵素，或者烷基和烷氧基。最優(yōu)選的取代基為烷基，特別是C1-C4烷基。
苯醌/氫醌可被多至四個(gè)烷基取代，特別可為單或二烷基苯醌/氫醌。
苯醌/氫醌例如可被一個(gè)丁基取代，其優(yōu)選在2-位存在；然而其可被一個(gè)以上例如兩個(gè)丁基取代。丁基優(yōu)選為叔丁基。
苯醌/氫醌可被兩個(gè)丁基取代。這些例如可占據(jù)2和5位，特別是苯醌/氫醌為對苯醌/氫醌?；蛘咂淇烧紦?jù)3和5位，特別是苯醌/氫醌為鄰苯醌/氫醌。丁基再次優(yōu)選為叔丁基。
相反或此外，苯醌/氫醌可被一個(gè)甲基取代，其優(yōu)選在2或5位；然而其可被一個(gè)以上甲基取代，例如兩個(gè)或三個(gè)乃至四個(gè)。例如其可被兩個(gè)甲基取代，其優(yōu)選在2和3位。其可被三個(gè)甲基取代，其優(yōu)選在2、3和5位。
相反或此外，苯醌/氫醌可被一個(gè)丙基取代，其優(yōu)選在2位。苯醌/氫醌可被一個(gè)以上例如兩個(gè)丙基取代。丙基優(yōu)選為異丙基。
相反或此外，苯醌/氫醌可被一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)乃至四個(gè)，優(yōu)選一個(gè)或兩個(gè)，更優(yōu)選一個(gè)乙基取代，并且更優(yōu)選至少其中一個(gè)占據(jù)2位。
雖然在很多情況下并非優(yōu)選，氫醌可相反或另外帶有一個(gè)或兩個(gè)(優(yōu)選一個(gè))取代基，所述取代基直接連接到其C-OH基上的氧原子(由此替換環(huán)己基環(huán)上羥基的氫原子)。例如，可使用烷基在一個(gè)氧原子上取代，優(yōu)選的實(shí)例如上所述。如1-鄰己基-2，3，5-三甲基氫醌(HTHQ)中所示，烷基可為己基。
苯醌/氫醌特別選自以下實(shí)施例1和6中列出的那些。例如其可為叔丁基氫醌(TBHQ)，其為在2位上用叔丁基取代的對氫醌，或?yàn)榘倮秕?，其為?位上用異丙基取代并且在5位上用甲基取代的對苯醌，或其相應(yīng)的氫醌、百里氫醌。其可選自TBHQ、對-氫醌、2，3-二甲基-對-氫醌和2-乙基-對-氫醌，更優(yōu)選選自TBHQ、2，3-二甲基-對-氫醌和2-乙基-對-氫醌。
苯醌/氫醌通常優(yōu)選為未取代苯醌或未取代氫醌。
本發(fā)明中使用的苯醌/氫醌，特別是百里醌、二百里醌(dithymoquinone)或百里氫醌(thymohydroquinone)理論上以分離醌(無論是天然來源還是合成來源，優(yōu)選合成來源)的形式使用，而非作為含有多種不同材料的植物提取物的一部分。
苯醌/氫醌可為作為抗氧化劑具有活性的類型。
在這些情況下醌優(yōu)選為氫醌，更優(yōu)選為烷基取代的氫醌。其中特別優(yōu)選TBHQ。
根據(jù)本發(fā)明的制劑可含有一種以上苯醌/氫醌。
在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，制劑用于對抗葡萄球菌特別是金黃色葡萄球菌。在這個(gè)實(shí)施方案中，苯醌/氫醌優(yōu)選 a)對位取代的苯醌/氫醌；和/或 b)氫醌，或者至少為氫醌及其相應(yīng)苯醌的混合物，其中含有50％以上，更優(yōu)選60或70或80或90％w/w以上的氫醌；和/或 c)具有一種或多種例如一種或兩種選自烷基和鹵素更優(yōu)選選自烷基的取代基(這些基團(tuán)的優(yōu)選實(shí)例如上所述)；和/或 d)至少在2位取代，更優(yōu)選被選自烷基和鹵素的取代基，更優(yōu)選被烷基(這些基團(tuán)的優(yōu)選實(shí)例如上所述)取代；和/或 e)沒有被兩個(gè)以上例如鹵素或硝基的吸電子基取代，并且更優(yōu)選沒有被任何吸電子基取代；和/或 f)在與C-OH或C＝O基相鄰的位置不具有空間位阻取代基(特別是叔丁基并且還可能為異丙基)；和/或 g)在與其C-OH或C＝O基中至少一個(gè)(優(yōu)選兩個(gè))相鄰的兩個(gè)位置的至少一個(gè)未取代(換句話說，C-OH或C＝O基中至少一個(gè)并且優(yōu)選全部兩個(gè)基團(tuán)在其至少一個(gè)相鄰碳原子上未取代)；和/或； h)特別在其為苯醌的情形，被至少一個(gè)優(yōu)選兩個(gè)給電子基團(tuán)取代，例如烷基(特別是叔丁基或異丙基，優(yōu)選前者)或烷氧基(特別是甲氧基或乙氧基，優(yōu)選前者)；和/或 i)選自對-苯醌、對-氫醌、TBHQ、2-甲基-對-氫醌、2，3-二甲基-對-氫醌、2-乙基-對-氫醌和百里氫醌(2-異丙基-5-甲基-對-氫醌)；和/或 j)選自TBHQ、2-甲基-對-氫醌、2，3-二甲基-對-氫醌、2-乙基-對-氫醌和百里氫醌。
例如當(dāng)該制劑用于對抗葡萄球菌之外的微生物時(shí)，上述優(yōu)選還可更加廣泛的使用。
在本發(fā)明另一實(shí)施方案中，制劑用于對抗丙酸菌屬特別是痤瘡丙酸桿菌(P.acnes)，并且特別用于痤瘡的治療，在這種情況下苯醌/氫醌優(yōu)選 a)對取代的苯醌/氫醌；和/或 b)氫醌，或者至少為氫醌及其相應(yīng)苯醌的混合物，其中含有50％以上，更優(yōu)選60或70或80或90％w/w以上的氫醌；和/或 c)具有一種或多種例如一種或兩種烷基取代基，這些基團(tuán)的優(yōu)選實(shí)例如上所述；和/或 d)至少在2位取代，更優(yōu)選被例如甲基、乙基、異丙基和叔丁基的烷基取代，更優(yōu)選被甲基、乙基或異丙基取代，并且最優(yōu)選被甲基或乙基取代；和/或 e)沒有被例如鹵素或硝基的任何吸電子基取代；和/或 f)在與C-OH或C＝O基相鄰的位置不具有空間位阻取代基(特別是叔丁基并且還可為異丙基)；和/或 g)在與其C-OH或C＝O基中至少一個(gè)(優(yōu)選兩個(gè))相鄰的兩個(gè)位置的至少一個(gè)未取代(換句話說，C-OH或C＝O基中至少一個(gè)并且優(yōu)選全部兩個(gè)基團(tuán)在其至少一個(gè)相鄰碳原子上未取代)；和/或； h)如果其為對苯醌/氫醌，其尤其在5位未取代，或者在5位被甲基取代，更優(yōu)選前者；和/或 i)選自對-苯醌、對-氫醌、TBHQ、百里醌(2-異丙基-5-甲基-對-苯醌)、2-乙基-對-氫醌和2，3-二甲基-對-氫醌；和/或 j)選自TBHQ、百里醌、2-乙基-對-氫醌和2，3-二甲基-對-氫醌。
例如當(dāng)制劑用于對抗丙酸菌屬之外的微生物時(shí)，上述優(yōu)選還可更加廣泛的使用。
雖然不希望受理論所限制，人們相信在根據(jù)本發(fā)明的制劑中，過氧化物和苯醌/氫醌之間的相互作用可包括含有一個(gè)或多個(gè)C-O*基的醌基的形成。至少部分負(fù)責(zé)本發(fā)明制劑的抗微生物活性的這些基團(tuán)可能通過例如烷基的取代基(特別是仲或叔烷基，例如異丙基或優(yōu)選叔丁基)和給電子基團(tuán)的共振穩(wěn)定化。這些取代基由此優(yōu)選處于本發(fā)明使用的苯醌/氫醌。出于類似理由，由于其傾向于使醌基不穩(wěn)定，吸電子取代基不太優(yōu)選。
為了這些基團(tuán)的輔助形成，例如氫醌的質(zhì)子損失，還可優(yōu)選苯醌/氫醌的C＝O或C-OH基中至少一個(gè)并且優(yōu)選全部兩個(gè)沒有被大取代基空間位阻，例如沒有被相鄰的叔丁基或異丙基空間位阻。
在上述全部情形中，除了在每種情況下明確指出的那些以外，優(yōu)選苯醌/氫醌不帶有任何取代基。
在根據(jù)本發(fā)明制劑中，過氧化物和苯醌/氫醌作為活性(即，抗菌活性)劑存在。特別意外的是，兩種化合物可以一起協(xié)同作用以抑制并且經(jīng)常是預(yù)防微生物活性。過氧化物已知用作氧化劑，然而多種醌特別是氫醌已知用作抗氧劑。因此當(dāng)組合時(shí)預(yù)期它們降低彼此的活性。實(shí)際上以往抗氧劑已經(jīng)與過氧化物組合用于皮膚護(hù)理制劑以及其它領(lǐng)域，明確目的是為了降低過氧化物的活性，例如作為氧化劑或催化劑的活性。
相反如以下實(shí)施例所示，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與兩種化合物單獨(dú)活性的加合相比，這兩種類型的化合物以協(xié)同方式增加了彼此的活性。在組合的活性僅僅為兩種單獨(dú)化合物活性的線性加合的情形，其仍然具有有益效果，例如在局部皮膚處理制劑中，其能夠在沒有不當(dāng)損失抗微生物活性的前提下容許使用較低水平的可能刺激的過氧化物。考慮到兩種類型的化合物表面上相反的作用模式，這些優(yōu)點(diǎn)將更加明顯。
當(dāng)苯醌/氫醌與過氧化物組合時(shí)，觀察到協(xié)同作用可能是由于具有大于單個(gè)反應(yīng)物的抗微生物活性的產(chǎn)應(yīng)產(chǎn)物(例如，如上所述的醌基)的形成。本發(fā)明由此包括含有苯醌/氫醌與選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物，特別是苯醌/氫醌與二酰基過氧化物例如過氧化苯甲酰的反應(yīng)產(chǎn)物的抗微生物制劑；該反應(yīng)產(chǎn)物可在使用之前或者在使用時(shí)即刻原位形成。
在根據(jù)本發(fā)明的制劑中，過氧化物和苯醌/氫醌以及其相對比例優(yōu)選至少使得抗微生物活性與各個(gè)化合物單獨(dú)的活性相比有所增加(這有時(shí)被認(rèn)為是化合物之間“不同”的相互作用)。更優(yōu)選的是，化合物及其相對比例達(dá)到產(chǎn)生抗微生物活性協(xié)同作用的程度，這指的是這兩種化合物組合的抗微生物活性大于單獨(dú)使用的相同量的單個(gè)抗微生物活性的加合，或者在某些情況下(根據(jù)使用的實(shí)驗(yàn)方法)組合的抗微生物活性超過其兩種組分中活性更強(qiáng)的組分的抗微生物活性。此處活性水平的增加可以表現(xiàn)為抑制和/或殺死相關(guān)生物體所需的更低濃度的活性物質(zhì)，和/或在圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)中更大的抑制區(qū)域，和/或更快的微生物抑制或殺死速率。
抗微生物活性包括對抗微生物的活性，微生物通常包括細(xì)菌(革蘭氏陽性和革蘭氏陰性)、病毒、真菌、原生動(dòng)物和藻類。其可為生長抑制活性或更優(yōu)選為殺滅活性(即為殺死相關(guān)的生物體)。根據(jù)本發(fā)明的制劑優(yōu)選至少作為殺菌劑和/或殺真菌劑(優(yōu)選至少前者)具有活性，更優(yōu)選對抗與皮膚或由皮膚引起的(skin-borne)感染有關(guān)的細(xì)菌，更優(yōu)選對抗葡萄球菌(以及其它革蘭氏陽性球菌)和/或丙酸菌屬，和/或合適的對抗其它能夠產(chǎn)生、惡化或傳播皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)疾病的細(xì)菌。更優(yōu)選該制劑對金黃色葡萄球菌和/或痤瘡丙酸桿菌(propionibacterium acnes)的菌株具有活性。
在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，該制劑對與痤瘡有關(guān)的細(xì)菌，例如痤瘡丙酸桿菌并且在某種情況下顆粒丙酸桿菌(P.granulosum)具有活性。其相反或此外可對格蘭氏陽性球菌，例如葡萄球菌(例如以下實(shí)施例中列出的那些，特別是金黃色葡萄球菌)和腸道球菌(例如糞腸球菌和/或尿腸球菌，特別是前者)具有活性。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，對微生物特定物種的活性可以取對至少一種，優(yōu)選兩種或多種該物種的平均活性。
該制劑優(yōu)選對細(xì)菌特別是葡萄球菌和/或丙酸菌屬(并且有時(shí)為其它革蘭氏陽性球菌，例如腸道球菌)具有活性，所述細(xì)菌全部或部分對一種或多種抗生素，例如普通臨床應(yīng)用的那些具有抗性。更特別地，該制劑優(yōu)選對一種或多種紅霉素抗性、氯潔霉素抗性和/或四環(huán)素抗性的痤瘡丙酸桿菌菌株，和/或?qū)σ环N或多種甲氧西林抗性的金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株，和/或?qū)σ环N或多種萬古霉素中間體金黃色葡萄球菌(VISA)菌株具有活性。其優(yōu)選至少對一種或多種紅霉素抗性、氯潔霉素抗性和/或四環(huán)素抗性的痤瘡丙酸桿菌菌株具有活性。
抗菌活性可通過常規(guī)方法測量，例如使用以下實(shí)施例中所述的測試。通常的活性測試包括使用試驗(yàn)抗微生物化合物處理相關(guān)微生物培養(yǎng)液，在通常支持微生物生長的條件下培養(yǎng)該處理的培養(yǎng)液，如果生長的情況下，評(píng)價(jià)其在試驗(yàn)化合物存在下的生長水平。
本發(fā)明中使用的過氧化物優(yōu)選至少對葡萄球菌和/或丙酸菌屬具有500微克/毫升或更低，例如0.5-500微克/毫升的最小抑菌濃度(MIC)。其相應(yīng)的最小殺菌濃度(MBC)優(yōu)選4000微克/毫升或更低，更優(yōu)選2000微克/毫升或更低，還優(yōu)選1000或500微克/毫升或更低。其MIC與MBC的比例合適地為0.125-1，理想地為0.5-1。
MIC和MBC值可使用常規(guī)測試工藝測量，例如如以下實(shí)施例所述。
過氧化物優(yōu)選在血清、脂質(zhì)和鹽(氯化鈉)中至少一種，優(yōu)選兩種或多種的存在下保持抗微生物活性，例如如以下實(shí)施例中測試——這些為可存在于皮膚表面的物質(zhì)，由此這方面的性能可以表現(xiàn)出用于局部皮膚處理制劑的適用性。在脂質(zhì)和氯化鈉存在下的活性在痤瘡治療中尤為重要；在血清和氯化鈉存在下的活性在葡萄球菌所致感染的治療和預(yù)防中尤為重要。
理想地過氧化物在血清、脂質(zhì)和鹽中至少一種優(yōu)選兩種或多種的存在下對葡萄球菌和/或丙酸菌屬至少保持一定的活性，優(yōu)選至少50或60或70或80乃至90％的抗微生物活性。然而過氧化物至少對葡萄球菌和/或丙酸菌屬的抗微生物活性更優(yōu)選通過血清、脂質(zhì)和鹽中的至少一種加強(qiáng)。過氧化物的抗微生物活性最優(yōu)選通過脂質(zhì)加強(qiáng)。
本發(fā)明中使用的苯醌/氫醌優(yōu)選至少對葡萄球菌和/或丙酸菌屬具有150微克/毫升或更低，更優(yōu)選125或100微克/毫升或更低，還優(yōu)選70或50或40或30或20或1 0微克/毫升或更低，例如0.5-100或50微克/毫升的最小抑菌濃度(MIC)。其相應(yīng)的最小殺菌濃度(MBC)優(yōu)選300微克/毫升或更低，更優(yōu)選150微克/毫升或更低，還優(yōu)選100或70或50或40或30乃至20或10微克/毫升或更低。其MIC與MBC的比例合適地為0.125-1，理想地為0.5-1。
苯醌/氫醌優(yōu)選在血清、脂質(zhì)和鹽(氯化鈉)中至少一種優(yōu)選兩種或多種的存在下保持抗微生物活性，例如如以下實(shí)施例中測試。理想地苯醌/氫醌在血清、脂質(zhì)和鹽中至少一種優(yōu)選兩種或多種的存在下至少對葡萄球菌和/或丙酸菌屬保持一定的活性，優(yōu)選至少50或60或70或80乃至90％的抗微生物活性。然而過氧化物至少對葡萄球菌和/或丙酸菌屬的抗微生物活性更優(yōu)選通過血清、脂質(zhì)和鹽中的至少一種加強(qiáng)。過氧化物的抗微生物活性最優(yōu)選通過脂質(zhì)加強(qiáng)。
過氧化物在根據(jù)本發(fā)明的制劑中的濃度合適地可為0.05％w/v或更高，優(yōu)選0.1％w/v或更高。其濃度可高達(dá)10％w/v，優(yōu)選低于或等于2.5％w/v。
苯醌/氫醌在制劑中的濃度合適地可為0.05％w/v或更高，優(yōu)選0.1％w/v或更高。其濃度可高達(dá)5％w/v，優(yōu)選高達(dá)2.5％w/v。
當(dāng)制劑體內(nèi)施用時(shí)，由于苯醌/氫醌的存在，例如在制劑體內(nèi)施加的作用點(diǎn)，過氧化物的濃度可能小于過氧化物本身的MBC，乃至小于MIC。過氧化物在這一點(diǎn)上的濃度優(yōu)選為其MBC或MIC的0.5或更少倍，更優(yōu)選0.25或更少倍。相同的說明應(yīng)用于苯醌/氫醌，其在該作用點(diǎn)可能為本身MBC或MIC的0.5或0.25或更少倍。
制劑中過氧化物的濃度與苯醌/氫醌濃度的比優(yōu)選為1∶1000-1000∶1，更優(yōu)選為1∶10-100∶1，還更優(yōu)選為1∶4-100∶1或10∶1。
根據(jù)本發(fā)明的制劑優(yōu)選適用于，并且更優(yōu)選適宜于局部給藥到人或動(dòng)物特別是人的皮膚。它還可適用于或適宜于局部給藥到例如鼻孔、頭皮、耳朵、眼睛、陰道和口腔，特別是鼻孔和耳朵的其它上皮組織。其可為洗劑、霜?jiǎng)⒏鄤?、泡沫、糊劑或凝膠劑的形式，或者局部給藥的任何其它已知形式，包括例如施加到例如海綿、藥簽、刷子、織物、皮膚貼片、服飾或牙齒纖維的制劑以利于其局部給藥。其可為鼻噴霧劑或滴眼劑或滴耳劑的形式。其可設(shè)計(jì)用于藥物應(yīng)用(其包括獸醫(yī)應(yīng)用)，例如治療皮膚感染或作為對抗例如MRSA的感染的預(yù)防藥物，和/或用于美容或其它非醫(yī)療護(hù)理目的(例如一般保健和清潔)。
包含過氧化物和苯醌/氫醌的賦形劑可為適于局部施用的任何賦形劑或賦形劑混合物；種類選擇將取決于指定施用方式和位置。許多這些賦形劑為本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所公知并且商業(yè)上容易得到。實(shí)例例如參見Williams，“Transdermal and Topical Drug Delivery”，PharmaceuticalPress，2003，以及其它類似的參考書籍。作為痤瘡治療局部給藥策略的評(píng)論的實(shí)例，還參見Date，A.A.等人，Skin Pharmacol.Physiol，2006，19(1)2-16。
如上所述，賦形劑可以靶向制劑的所需給藥位置和時(shí)間。例如，其可以例如將制劑靶向到皮膚或毛囊或前鼻孔(當(dāng)制劑用作MRSA或其它葡萄球菌的預(yù)防性治療時(shí)，后者特別合適)。其可在特定時(shí)間周期內(nèi)延緩或者控制制劑的釋放。過氧化物和苯醌/氫醌的一種或全部兩種可以微囊密封，例如封裝在脂質(zhì)體，特別是用于局部施用的合適的脂質(zhì)體中，其由角質(zhì)層脂質(zhì)制成，所述角質(zhì)層脂質(zhì)例如神經(jīng)酰胺、脂肪酸或膽固醇。
在某些情況下可優(yōu)選極性賦形劑。當(dāng)該制劑意圖在皮膚上使用時(shí)，特別是治療皮膚和皮膚結(jié)構(gòu)感染時(shí)，賦形劑可基本上無水，不過在抗痤瘡治療的情況下可使用含水賦形劑。尤其是當(dāng)其意圖用于處理表面，例如清潔器械或工作區(qū)域，特別是抗葡萄球菌時(shí)，賦形劑可為表面活性的。在這些情況下，賦形劑可為醇基或硅基。
該制劑可含有標(biāo)準(zhǔn)賦形劑以及在藥物或獸藥，特別是局部皮膚護(hù)理制劑中已知使用的其它任何添加劑。實(shí)例包括潤膚劑、芳香劑、抗氧劑、防腐劑和穩(wěn)定劑；其它可以發(fā)現(xiàn)于上述Williams，“Transdermal andTopical Drug Delivery”中。其中可另外含有其它活性劑例如抗微生物劑。其中該制劑設(shè)計(jì)用于局部給藥到皮膚，特別是治療皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)感染和/或治療例如痤瘡或特應(yīng)性皮炎的疾病，其可另外含有一種或多種選自抗痤瘡藥、角質(zhì)溶解藥、消除粉刺藥物(comedolytics)、消炎藥、抗增生藥、抗生素、抗雄激素、sebostatic agents、抗瘙癢藥、免疫調(diào)節(jié)劑、促進(jìn)傷口愈合的藥劑以及其混合物；其可以代替或另外含有一種或多種選自遮光劑、保濕劑、潤膚劑及其混合物的作用劑。一般而言，根據(jù)本發(fā)明使用的制劑可以含有一種或多種增強(qiáng)制劑中存在的另一活性劑活性，或者減少這種活性的副作用，或改善制劑給藥時(shí)患者順應(yīng)性的作用劑。
其它抗微生物劑可選自例如生物殺傷劑、消毒劑、抗菌劑、抗生素、抗微生物活性抗氧化劑以及其混合物；其優(yōu)選作為殺菌劑，特別是抗丙酸菌屬和/或葡萄球菌起作用。其還可作為抗真菌劑起作用。
然而，優(yōu)選過氧化物和苯醌/氫醌作為制劑中唯一的活性劑，或者至少作為唯一的抗微生物或抗菌活性劑。
根據(jù)本發(fā)明的制劑可適用于，更優(yōu)選適宜用于除活體組織以外的表面，例如處理地板或墻壁(內(nèi)墻或外墻)、工作面或器械、消毒隱形眼鏡或清潔毛發(fā)或牙齒或指甲，以降低微生物水平。其可以適于施加到正在生長或收獲的作物、食品、非活體組織(例如用作防腐劑)、被褥或衣服(例如生物凈化劑)上。在這些情況下，與過氧化物和苯醌/氫醌一起的賦形劑、賦形劑和/或其它添加劑可以與局部皮膚護(hù)理制劑中的那些不同，卻又可以是這些上下文中已知常用的那些。
制劑可以加入到另一產(chǎn)品并且由此以另一產(chǎn)品的形式施用，另一產(chǎn)品例如化妝品、皮膚或毛發(fā)護(hù)理制劑、藥物(包括獸藥)制劑、盥洗用品(例如沐浴或淋浴添加劑或清潔制劑)、洗衣或其它織物處理產(chǎn)品或農(nóng)業(yè)或園藝產(chǎn)品。
該制劑可適于作為防腐劑加入到其它產(chǎn)品；例如其可加入到食物或飲料、藥物制劑、化妝或盥洗用品、或組織、血清或其它身體樣品中，以在產(chǎn)品中抑制或預(yù)防微生物作用。
本發(fā)明第二方面提供了一種產(chǎn)品，其中加入了根據(jù)第一方面的抗微生物制劑。
根據(jù)本發(fā)明的制劑有時(shí)優(yōu)選不含有例如US-6,069,208中公開的任何可交聯(lián)熱塑性或彈性聚合物，和/或不含有該文件中所公開的任何硫化促進(jìn)劑。
根據(jù)本發(fā)明的制劑有時(shí)優(yōu)選不含有GB-1 089 428中公開的類型的聚合物，特別是通過有機(jī)錫化合物與二羧酸的二醇單丙烯酸單酯反應(yīng)制備的化合物。
根據(jù)本發(fā)明的制劑有時(shí)優(yōu)選不含有過氧化苯甲酰和選自叔丁基兒茶酚、氫醌、鹿蹄草素(toluhydroquinone)、對-苯醌、TBHQ、2，5-二叔丁基氫醌和氫醌單甲醚的苯醌/氫醌。
根據(jù)本發(fā)明的制劑有時(shí)優(yōu)選不含有增塑劑和/或表面活性劑和/或碳酸鈣，特別是該制劑不含有增塑劑。該制劑優(yōu)選不是如WO 97/32845中具體公開的類型的含有過氧化苯甲酰的制劑。
根據(jù)本發(fā)明的制劑可以在其例如皮膚或其它表面的施加部位原位制備，或者在其施加前立即制備。因此根據(jù)本發(fā)明的第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于制備抗菌制劑優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明第一個(gè)方面的制劑的試劑盒，該試劑盒包括(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物來源和(b)苯醌或氫醌來源，以及將兩種化合物組合以在指定施加點(diǎn)或者在指定施加點(diǎn)之前制備該制劑，和/或用于將兩種化合物共同給藥到例如皮膚的表面的說明書。過氧化物和苯醌/氫醌每個(gè)可存在于各自合適的賦形劑中。
根據(jù)一個(gè)方面，本發(fā)明的制劑或試劑盒可以含有規(guī)定類型的過氧化物和苯醌/氫醌，每個(gè)封裝(例如微囊包封)在單獨(dú)的遞送賦形劑中；例如其可容許其釋放，由此僅僅在指定給藥部位互相接觸。
本發(fā)明第四方面提供了制備抗菌制劑的方法，所述方法包括將(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌混合，優(yōu)選與如上所述藥學(xué)上可接受的賦形劑一起混合。
本發(fā)明第五方面提供了含有(a)選自二酰基過氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌的制劑(優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明第一方面的制劑)，用于治療(優(yōu)選局部治療)由微生物活性，特別是細(xì)菌或真菌活性，更特別是細(xì)菌活性，最特別是葡萄球菌和/或丙酸菌屬活性引發(fā)、惡化或傳播的疾病。所述疾病優(yōu)選為皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)疾病，例如痤瘡。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，疾病的治療包括在人或動(dòng)物特別是在皮膚中治療和預(yù)防性治療傳染性或非傳染性疾病。其由此包括使用該制劑作為殺微生物劑，優(yōu)選作為殺菌劑，最優(yōu)選對抗葡萄球菌和/或丙酸菌屬和/或腸道球菌。
可以根據(jù)本發(fā)明治療的皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)疾病包括痤瘡、感染的特應(yīng)性濕疹、表面感染的外傷性損害、創(chuàng)口、燒傷、潰瘍、毛囊炎、真菌病，以及其它表面原發(fā)性和繼發(fā)性(primary and secondary)皮膚以及皮膚結(jié)構(gòu)感染。特別地，該制劑可用于治療痤瘡或痤瘡損傷(例如降低與痤瘡相關(guān)的瘢疤形成)。
痤瘡的治療包括治療和/或預(yù)防與痤瘡有關(guān)的損傷和/或瘢疤。痤瘡為臉部和上部軀干毛囊皮脂腺囊的多因子疾病，特征在于多種炎性或非炎性損傷，例如丘疹、膿皰、小結(jié)，以及打開或關(guān)閉的粉刺。因此其治療包括所有這些癥狀的治療。
通常，根據(jù)本發(fā)明的制劑將用于直接由痤瘡引起的癥狀，而非使用例如抗生素的其它活性劑治療痤瘡的影響所產(chǎn)生的感染。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，“皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)疾病”在某些情況下可包括感染其它上皮組織的疾病，例如鼻孔、頭皮、陰道、眼睛、耳朵或口腔。然而在大多數(shù)情況下，皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)疾病將為直接影響皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)的疾病。
根據(jù)本發(fā)明的制劑還可用于身體任何區(qū)域-特別是皮膚和鼻孔-對抗葡萄球菌的治療或預(yù)防性治療，否則所述葡萄球菌可引起例如MRSA相關(guān)的感染，或在先前存在的損傷中存在的感染，例如濕疹損傷。
可根據(jù)本發(fā)明第五個(gè)方面治療的疾病的其它實(shí)例包括口腔、眼睛、耳朵、鼻子和陰道疾病。同樣，這種疾病的治療包括人或動(dòng)物并且特別是人的傳染性或非傳染性疾病的治療和預(yù)防性治療。特別地，其包括身體任意區(qū)域(特別是皮膚或鼻孔)對抗微生物并且尤其是細(xì)菌感染的預(yù)防性治療。
疾病的治療包括疾病的完全或部分根除、相關(guān)癥狀的除去或改善、阻止疾病的隨后發(fā)展、和/或疾病隨后發(fā)病的預(yù)防或發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的降低。
根據(jù)本發(fā)明的第五個(gè)方面，過氧化物和苯醌/氫醌的制劑可以在給藥時(shí)原位制備，或者在給藥之前立即制備。本發(fā)明這個(gè)方面由此涉及在通過微生物作用引起、惡化或傳播的疾病的治療中(優(yōu)選局部治療)特定類型過氧化物和苯醌/氫醌的任何應(yīng)用、聯(lián)合使用，兩種化合物可以同時(shí)給藥或者順序給藥。同樣，疾病優(yōu)選皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)疾病，和/或與皮膚上存在的微生物有關(guān)的疾病。
根據(jù)第六個(gè)方面，本發(fā)明提供了(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌在制備用于治療通過微生物(尤其是細(xì)菌或真菌，更尤其是細(xì)菌)作用，特別是葡萄球菌和/或丙酸菌屬作用引發(fā)、惡化或傳播的疾病的藥物中的應(yīng)用。所述疾病通常為皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)疾病，更通常為痤瘡。其可為葡萄球菌所致感染，特別是與皮膚有關(guān)的感染。藥物適于局部應(yīng)用。
根據(jù)第七個(gè)方面，本發(fā)明此外提供了特定類型的過氧化物和苯醌/氫醌一起作為抗微生物劑，特別是作為殺菌劑或殺真菌劑的應(yīng)用，或在制備抗微生物劑或特別是殺菌劑或殺真菌劑中的應(yīng)用。
第八方面提供了控制微生物，特別是細(xì)菌或真菌微生物，更特別是細(xì)菌微生物，并且最特別是葡萄球菌或丙酸菌屬生長的方法，所述方法包括向感染區(qū)域或懷疑感染區(qū)域或能夠被微生物感染的區(qū)域施加(a)選自二酰基過氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌。同樣，兩種化合物可以同時(shí)或順序施加。
此處微生物的“控制生長”包括完全或部分抑制或阻止其生長，以及完全或部分殺死生物體的培養(yǎng)。其還包括在治療區(qū)域降低生物體隨后生長的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明方法由此可用于治療生物體的現(xiàn)有存在或預(yù)防可能的隨后發(fā)生。
本發(fā)明第八方面的方法優(yōu)選不是控制水生微生物生長，特別是與US-2003/0012804中相應(yīng)的水生生物的生長。
同樣，過氧化物和苯醌/氫醌施加的區(qū)域通常將為例如人或動(dòng)物組織的表面，特別是皮膚或鼻孔，通常為活體人或動(dòng)物。在這種情況下，兩種化合物可以治療目的或非治療(例如單純的化妝品)目的施加?；蛘?，其還可為非生命表面，例如醫(yī)院或食品制備區(qū)域。例如，本發(fā)明第八方面的方法可用于處理工作表面、外科或其它儀器、外科植入或修補(bǔ)、隱形眼鏡、食品、作物、工業(yè)設(shè)備、地板和墻面(內(nèi)墻或外墻)、被褥、家具、衣服和多種其他表面。
本發(fā)明第八方面的方法包括在人或動(dòng)物患者中控制微生物生長的方法，微生物通常為葡萄球菌和/或丙酸菌屬，并且生長通常在皮膚或者例如鼻孔的其他上皮組織上控制。
第八方面的方法優(yōu)選包括施加根據(jù)本發(fā)明第一方面的制劑。
根據(jù)第九方面，本發(fā)明提供了在含有或懷疑含有或能夠含有微生物的產(chǎn)品中控制微生物，特別是細(xì)菌或真菌微生物，最特別是細(xì)菌微生物生長的方法，所述方法包括向產(chǎn)品中加入(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌的組合。所述產(chǎn)品例如可為食品或飲料、藥物(其包括獸藥)制劑、美容或盥洗用品，或農(nóng)業(yè)或園藝產(chǎn)品。
因此本發(fā)明第九方面的方法可用于保存各種產(chǎn)品，或者其可用于食品或水供應(yīng)品的衛(wèi)生，或者農(nóng)場區(qū)域的消毒。
本發(fā)明第十方面提供了苯醌或氫醌在抗微生物制劑中與上述過氧化物結(jié)合增加制劑的抗微生物(特別是抗菌和/或抗真菌，更特別是抗葡萄球菌和/或丙酸菌屬)活性，和/或在沒有過分損失抗微生物活性的前提下減少制劑中過氧化物量的應(yīng)用。
與單獨(dú)使用過氧化物相比，當(dāng)與苯醌/氫醌組合使用時(shí)在相同濃度下抗微生物活性增加。與過氧化物和苯醌/氫醌單獨(dú)活性的加和相比，當(dāng)兩者以各自相同濃度混合使用時(shí)理想地再次提高。
與為了實(shí)現(xiàn)所需活性水平在制劑中已經(jīng)使用的量相比，特別是為了在其預(yù)期應(yīng)用中具有可接受的效力，制劑中過氧化物的量降低。這種降低可通過減少的副作用證明，這已經(jīng)在制劑的使用期間觀察到，特別是減少的皮膚刺激。根據(jù)本發(fā)明，苯醌/氫醌因此可用于降低制劑皮膚刺激或其它不希望性質(zhì)的雙重目的，而沒有抗微生物活性的過分損失。
與加入醌之前制劑所表現(xiàn)出的水平相比，苯醌/氫醌優(yōu)選沒有降低任何抗微生物活性。更優(yōu)選其用于產(chǎn)生抗微生物活性的增加。然而其可用于減少過氧化物的存在量，和/或其相關(guān)副作用，同時(shí)保持所得制劑的抗微生物活性，即便是活性低于其另外已經(jīng)表現(xiàn)出的活性，其仍然在其預(yù)期應(yīng)用中可以接受。
本發(fā)明第十一方面提供了上述類型過氧化物與苯醌或氫醌一起在抗微生物制劑中提高制劑抗微生物活性和/或減少制劑中苯醌/氫醌存在量的應(yīng)用，而沒有抗微生物活性的過分損失。適合于本發(fā)明這個(gè)方面的類似說明如第十方面，反之亦然。
本發(fā)明第二和隨后方面的優(yōu)選特征可如任何其它方面所述。
本發(fā)明的其它特征將由以下實(shí)施例顯而易見。一般而言，本發(fā)明擴(kuò)展到說明書(包括權(quán)利要求和附圖)公開特點(diǎn)的任何新的方面，或任何新的組合。并且除非另有說明，此處公開的任何特點(diǎn)可替換為具有相同或相似目的的可供選擇的方面。
本發(fā)明現(xiàn)在將僅僅通過實(shí)施例并且參考附圖進(jìn)行說明。
附圖簡介

圖1為表示如以下實(shí)施例2所測量的過氧化苯甲酰(BP)和叔丁基氫醌(TBHQ)的混合物對抗葡萄球菌菌株的FIC(分級(jí)抑制濃度)值的等效應(yīng)圖。
圖2為表示如以下實(shí)施例7測量的BP與TBHQ的混合物對抗丙酸菌屬菌株的FIC值的等效應(yīng)圖。
詳細(xì)說明 試驗(yàn)旨在確定根據(jù)本發(fā)明制劑的抗微生物活性。作為比較，還測量了單獨(dú)含有苯醌/氫醌或過氧化物的制劑的抗微生物活性。
試驗(yàn)微生物 使用以下試驗(yàn)微生物，代表本發(fā)明制劑可以應(yīng)用的生物體的抗菌譜。
1.金黃色葡萄球菌——這些研究中使用的主要葡萄球菌試驗(yàn)微生物為金黃色葡萄球菌ATCC 29213。該菌株為在最小抑菌濃度(MIC)測試中出于QC/QA目的由美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(huì)(前身為NCCLS)推薦的菌株，該學(xué)會(huì)為美國食品與藥品管理局(FDA)承認(rèn)的團(tuán)體。金黃色葡萄球菌ATCC 29213對例如甲氧西林的β-內(nèi)酰胺抗生素以及世界范圍內(nèi)當(dāng)前臨床使用的其它抗生素敏感。
如以下實(shí)施例5所述，還測試了其它葡萄球菌菌株。這些包括某些對抗生素具有抗性的葡萄球菌，例如對甲氧西林具有抗性的金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株EMRSA-15和EMRSA-16，全部得自Central PublicHealth Laboratory(CPHL)，Colindale，UK。這些菌株不僅對全部β-內(nèi)酰胺具有抗性，還對臨床應(yīng)用的多種其它抗生素具有抗性，使其成為人體健康的嚴(yán)重威脅。其還與英國大多數(shù)(＞95％)醫(yī)院所致MRSA感染有關(guān)。
金黃色葡萄球菌和其它葡萄球菌為多種皮膚、皮膚結(jié)構(gòu)和創(chuàng)傷感染的共同原因。金黃色葡萄球菌本身已知還能夠惡化濕疹。
2.丙酸菌屬spp.——在這些研究中使用的主要丙酸菌屬菌株為痤瘡丙酸桿菌NCTC 737。其為該屬的典型菌株；其完全對抗生素敏感。
由于其與痤瘡有關(guān)，丙酸菌屬在臨床上顯著。痤瘡為非常普遍、復(fù)雜和多因子的皮膚疾病，其中痤瘡丙酸桿菌以及其他丙酸菌屬spp.(例如顆粒丙酸桿菌)起關(guān)鍵作用。其在損傷主體中還為機(jī)會(huì)病原體。
對于實(shí)施例7的FIC(分級(jí)抑制濃度-參見以下說明)測試，NCTC 737被其近支顆粒丙酸桿菌(P.granulosum)(稱為PRP-055的自有的菌株)代替。
如以下實(shí)施例8所示，還測試了其它丙酸菌屬菌株。這些包括對抗生素具有抗性的丙酸菌屬，例如兩種痤瘡丙酸桿菌PRP-010和PRP-039，其分別對大環(huán)內(nèi)酯-林可胺類-鏈霉殺陽菌素-酮內(nèi)酯類(MLSK)和大環(huán)內(nèi)酯-林可胺類-鏈霉殺陽菌素(MLS)和四環(huán)素具有抗性——換句話說，PRP-010對紅霉素和氯潔霉素具有抗性，PRP-039對紅霉素、氯潔霉素和四環(huán)素具有抗性。
此外，還在實(shí)施例8中測試了某些顆粒丙酸桿菌菌株和卵白丙酸桿菌(P.Avidum)菌株、均為其它在痤瘡中涉及的細(xì)菌。
3.糞腸球菌(Enterococcus faecalis)ATCC 29212——這是屬于腸球菌的革蘭氏陽性細(xì)菌。腸球菌具有與鏈球菌類似的性質(zhì)，只是差別在于其在含有膽鹽的介質(zhì)例如麥康基氏瓊脂上生長的能力。其主要生長環(huán)境為哺乳動(dòng)物的胃腸道。其產(chǎn)生多種重要的感染，包括心內(nèi)膜炎、尿路感染和膿腫。在皮膚范圍內(nèi)，其經(jīng)常被從創(chuàng)傷感染中分離。與鏈球菌不同，腸球菌對青霉素具有更廣泛的抗性。近年來，糞腸球菌和尿腸球菌(E.Faecium)菌株還對例如萬古霉素的糖肽抗生素具有廣泛的抗性。對萬古霉素具有抗性的腸球菌(VRE)，主要為尿腸球菌的vanA菌株，現(xiàn)在在美國、日本和西歐各國成為嚴(yán)重?fù)p害健康的感染危險(xiǎn)。
對這些微生物觀察到的活性預(yù)期為抗微生物活性的合理定性預(yù)測，特別為對皮膚和皮膚結(jié)構(gòu)感染有關(guān)的微生物的活性的合理定性預(yù)測。
葡萄球菌和腸球菌在Mueller-Hinton介質(zhì)(瓊脂和肉湯)中在pH 7.2培養(yǎng)和維持；它們在37℃有氧培養(yǎng)24小時(shí)。
丙酸菌屬spp生物體在Wilkins-Chalgren厭氧菌介質(zhì)(瓊脂和肉湯)中在pH 6.0培養(yǎng)和維持；培養(yǎng)物在37℃厭氧培養(yǎng)72小時(shí)。
進(jìn)行以下試驗(yàn)以評(píng)價(jià)對這些生物體的抗微生物活性。
(a)最小抑菌濃度(MIC)測試 其為定性評(píng)價(jià)化合物在液體介質(zhì)中抗微生物活性的標(biāo)準(zhǔn)國際方法。所述方法使用96孔微滴定板，每個(gè)孔中能夠容納約200微升液體?？字泻幸后w培養(yǎng)介質(zhì)和以二倍稀釋的濃度降低幅度(例如1000、500、250、125...微克/毫升，等等，直到下降到1.95微克/毫升)的相應(yīng)測試化合物。相應(yīng)測試生物體的培養(yǎng)介質(zhì)如上所述。
向孔中接種新生長的微生物的液體懸浮液并且在上述條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)后視覺檢驗(yàn)微滴定板每個(gè)孔的混濁度(借助于光箱)，這將指示微生物的生長。以抑制微生物生長所需的測試化合物的最低濃度記錄MIC值，亦即孔中液體保持透明所需的最低濃度。
測試進(jìn)行一式兩份，并且包括陰性(僅僅培養(yǎng)介質(zhì))和陽性(培養(yǎng)介質(zhì)、稀釋溶劑和培養(yǎng)液)對照。
由于抑制無須指示微生物細(xì)胞的殺死，僅僅抑制肉眼可見的生長，需要進(jìn)行其它試驗(yàn)(如下所述MBC測試)來確定殺死測試生物體所需的測試化合物的濃度。
(b)最小殺菌濃度(MBC)測試 該試驗(yàn)通常在MIC試驗(yàn)之后進(jìn)行，確定對測試微生物致命的化合物的最小濃度。
MIC測試之后，5微升樣品從顯示陽性生長的第一微滴定孔和所有沒有顯示生長的全部隨后的孔提取。然后這些樣品分別在在上述培養(yǎng)條件下在非選擇性瓊脂培養(yǎng)介質(zhì)上次-培養(yǎng)。培養(yǎng)后視覺檢查細(xì)菌繁殖。MBC取培養(yǎng)樣品沒有顯示生長的最低測試化合物濃度。
MIC與MBC的比理論上將盡可能接近1。這利于以降低選擇次致死濃度的風(fēng)險(xiǎn)選擇受試化合物的最低可能有效濃度，所述次致死濃度會(huì)提高抗性或被天然(即，固有)抗微生物劑抗性克服。
(c)圓盤擴(kuò)散測試(DDA) 其為定性評(píng)價(jià)化合物抗微生物活性的國際上承認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法。
無菌紙圓盤用測試化合物浸透并且最少30分鐘盡可能蒸發(fā)溶劑。然后將圓盤放置在已經(jīng)培養(yǎng)測試微生物的瓊脂平板上。然后平板在上述條件下培養(yǎng)，接著視覺評(píng)價(jià)細(xì)胞繁殖跡象。如果測試化合物具有抗微生物活性，在圓盤周圍將會(huì)得到?jīng)]有生長的圓形區(qū)域。使用ProtoCOLTM自動(dòng)區(qū)域分選機(jī)(Synbiosis，Cambridge，UK)測量該“抑制”區(qū)域的直徑。抑制區(qū)域的直徑和/或面積越大，通常表明相關(guān)測試化合物更大的抗微生物活性，不過例如測試化合物通過瓊脂凝膠的流動(dòng)性的其它因素也可能影響結(jié)果。
抑制區(qū)域的面積使用公式π(D/2)2由測量的區(qū)域直徑(D)計(jì)算。
(d)協(xié)同圓盤擴(kuò)散測試(SDDA) 其為DDA方法的變種，其中兩個(gè)化合物一起測試其組合抗微生物活性。其提供化合物是否協(xié)同相互作用的定性指標(biāo)。
兩種測試化合物置于單獨(dú)紙盤并且重復(fù)上述DDA過程。與兩個(gè)化合物單獨(dú)使用中的較大區(qū)域直徑相比，抑制區(qū)域直徑的增加表示可能的抗菌協(xié)同作用。實(shí)際上，大于5毫米的提高被認(rèn)為非常明顯。抑制區(qū)域尺寸增加越大，則兩種測試化合物之間的協(xié)同相互作用可能性更大。
(e)添加物圓盤擴(kuò)散測試 DDA或SDDA測試可使用添加有血液、脂質(zhì)和/或鹽的瓊脂凝膠進(jìn)行以模擬人體皮膚中存在的某些主要成分，并且評(píng)價(jià)這些物質(zhì)是否能夠降低觀察到的測試化合物的抗微生物活性。這些條件下的性能可對局部施用提供更加可靠的活性指示。對于使用金黃色葡萄球菌菌株的測試，添加物可為例如脫纖維蛋白的馬血(5％v/v)和氯化鈉(100mM)。對于使用丙酸菌屬spp.菌株的測試，添加物可為脂質(zhì)(1％v/v的TweenTM80)和氯化鈉(100mM)。
(f)分級(jí)抑制濃度(FIC)測試 該測試用于確定兩種抗微生物化合物A和B之間的相互作用模式。其與MIC測試類似，使用96孔微滴定板和液體培養(yǎng)介質(zhì)。測試化合物以其各自MIC值開始并且如MIC測試所示兩倍稀釋濃度范圍一起加入到每個(gè)孔中。通常8×8的孔用于組合8種不同濃度的化合物A(從其MIC濃度往下，包括0)和8種不同濃度的化合物B(同上)。
孔中培養(yǎng)有剛剛生長的微生物并且在上述條件下培養(yǎng)。
對于MIC測試，結(jié)果通過肉眼讀出。對于每個(gè)A和B的組合分別記錄最小抑菌濃度。然后計(jì)算混合物中每個(gè)化合物的組分FIC指數(shù)(FICI)，并且這兩個(gè)指數(shù)加在一起以得到相互作用模式的總體FICI指示。
因此對于每個(gè)測試的混合物，化合物A的FIC(FICA)＝(A+B)的MIC/A的MIC。類似地對于化合物B的FIC(FICB)＝(A+B)的MIC/B的MIC。
0.5或更低的FICI表示協(xié)同作用，0.5-4.0的值表示惰性作用，并且大于4.0的值表示對抗作用(即，兩個(gè)化合物抵消互相的活性，導(dǎo)致總體降低的抗微生物活性)(參見Odds F C，“Synergy，antagonism，andwhat the chequerboard puts between them”，J Antimicrob.Chemother.，2003；521)。這些結(jié)果可以視覺描述在測試混合物的FICA/FICB圖(等效應(yīng)圖)中。
(g)殺死時(shí)間(TTK)測試 其為評(píng)價(jià)測試化合物殺死測試微生物所需時(shí)間的定量測試。
以一定時(shí)間間隔從含有相關(guān)測試化合物和微生物的液體培養(yǎng)物中取樣并且接種在瓊脂板上。然后將該板如上所述培養(yǎng)并且隨后視覺檢查生長情況。計(jì)數(shù)能在該板上生存的微生物菌落數(shù)目并且使用合適的稀釋因子轉(zhuǎn)化為菌落形成單位/毫升(cfu/ml)。例如，得自帶有100微升培養(yǎng)液(其已經(jīng)連續(xù)稀釋到10-6)的瓊脂板的25菌落的菌落數(shù)將得到25×10(精確到1毫升)×106的可存活細(xì)胞計(jì)數(shù)，其將相應(yīng)于2.5×108cfu/ml。這些cfu值然后轉(zhuǎn)化為log10值并且根據(jù)樣品除去時(shí)間繪圖。
在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品評(píng)價(jià)一式三份；最終cfu/ml值將為三次讀數(shù)的平均值。
此次測試中使用的測試化合物合適的濃度將根據(jù)先前進(jìn)行的MIC/FIC測試確定。
由于化合物的組合可以相互影響以致與單個(gè)化合物相比更快地殺死測試微生物，TTK測試可提供協(xié)同作用的另一量度。這將通過與單個(gè)化合物時(shí)觀察到的相比能夠存活的細(xì)菌細(xì)胞計(jì)數(shù)更陡峭的下降表示。
(h)矩陣殺死時(shí)間(TTK)測試 該試驗(yàn)提供兩個(gè)測試化合物X和Y之間抗微生物協(xié)同作用的其它指示，表示在相同濃度使用時(shí)兩個(gè)的組合能夠比單獨(dú)使用一種化合物更有效地殺死微生物。
將兩個(gè)測試化合物中的每個(gè)以所需起始濃度的80倍溶解在合適的溶劑中。每個(gè)化合物的濃度范圍為2×MBC至0.125×MBC，其中間濃度通過一系列二倍稀釋得到。
96孔微滴定板用于產(chǎn)生兩種測試化合物不同濃度組合的6×6樣品矩陣。測試孔的合適布局如下所示此處測試化合物X(MBC 125微克/毫升)的濃度以正常字體表示，并且化合物Y(MBC 16微克/毫升)的濃度以黑體字表示。

測試化合物以其相關(guān)稀釋度以5微升劑量加入到合適的孔中。向測試化合物濃度為0的孔中單獨(dú)加入5微升溶劑。每個(gè)孔中還提供有190微升合適的發(fā)酵液(取決于測試微生物-對金黃色葡萄球菌為Mueller-Hinton發(fā)酵液)，組分充分混合并除去100微升體積。
然后向每個(gè)孔中加入100微升在相同發(fā)酵液中含有相應(yīng)測試化合物的培養(yǎng)液。將培養(yǎng)液稀釋以得到約1×107cfu/ml。
全部36個(gè)樣品在如上所述適于測試微生物的條件下培養(yǎng)。在t＝0、t＝5小時(shí)和t＝24小時(shí)的時(shí)間從每個(gè)孔除去10微升樣品。這些樣品中的每一個(gè)加入到90微升合適的發(fā)酵液中，并且一系列七個(gè)樣品另外進(jìn)行十倍稀釋以得到稀釋度為10-1至10-8的8個(gè)樣品。從其中每個(gè)中取出三個(gè)10微升子樣品然后放置于單獨(dú)的瓊脂板上，其在合適的條件下培養(yǎng)(仍如上所述)。
培養(yǎng)后，使用菌落計(jì)數(shù)器(StuartTM菌落計(jì)數(shù)器SC6，BarloworldScientific Ltd，Stone，UK)以合適的連續(xù)稀釋(5-50獨(dú)立菌落可見)計(jì)數(shù)菌落。然后使用下式將這些測定轉(zhuǎn)化為菌落形成單元數(shù)(cfu)cfu/ml＝菌落數(shù)×連續(xù)稀釋因子×100(在僅僅使用10微升樣品時(shí))。對于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的測試組合，最終cfu/ml為三次測試的平均值。
對于t＝24小時(shí)取樣時(shí)間點(diǎn)，這些測試結(jié)果作為基礎(chǔ)繪圖，顯示微生物生長怎樣受到測試化合物X和Y的每個(gè)組合的影響。如果在24小時(shí)后在組合(X+Y)與其最大活性組分之間存在≥2Log10的cfu/ml降低，只要存活生物體的數(shù)目在該組合的存在下低于起始培養(yǎng)液數(shù)目以下≥2Log10，則化合物被認(rèn)為表現(xiàn)出抗菌協(xié)同效果。
實(shí)施例1——對抗金黃色葡萄球菌的活性-MIC、MBC&(S)DDA測試 以下試驗(yàn)全部使用金黃色葡萄球菌ATCC 29213作為試驗(yàn)生物體。
如上所述的MIC、MBC和DDA測試使用測試化合物過氧化苯甲酰和不同苯醌和氫醌進(jìn)行。還在鹽、脂質(zhì)和血的存在下進(jìn)行了添加物DDA測試。
然后每種醌與BP一起進(jìn)行如上所述的SDDA測試。在每種情況下，區(qū)域直徑(毫米)和面積(％)增加根據(jù)在前面單個(gè)化合物的圓盤擴(kuò)散測試期間顯示較大區(qū)域直徑的化合物所觀察到的那些測量。對于大多數(shù)(S)DDA測試，200微克各化合物裝載在各個(gè)圓盤上。例外為百里醌的測試，其中僅僅使用50微克的苯醌。使用的溶劑為DMSO(對于過氧化苯甲酰、2-甲基-對-氫醌、2，3-二甲基-對-氫醌和2-乙基-對-氫醌)和乙醇(對于TBHQ、百里醌、對-氫醌、對-苯醌和百里氫醌)。
MIC、MBC和DDA結(jié)果如下表1所示，SDDA結(jié)果如表2所示。全部結(jié)果由多個(gè)試驗(yàn)中核對。
表1 *數(shù)據(jù)可變在某些測試中觀察到協(xié)同作用而在其它測試中沒有觀察到協(xié)同作用 表2 表1和表2中的數(shù)據(jù)表明，如MIC/MBC結(jié)果所知，每種苯醌/氫醌單獨(dú)對金黃色葡萄球菌ATCC 29213具有活性，某些如此之強(qiáng)，特別是取代苯醌/氫醌似乎比其未取代對應(yīng)物更加具有活性。活性在鹽、脂質(zhì)和血的存在下至少在某種程度上保持。即便不是全部，BP單獨(dú)對生物體具有低得多的活性。
然而當(dāng)BP與苯醌/氫醌組合時(shí)，SDDA數(shù)據(jù)顯示了在兩者之間可能的協(xié)同抗菌作用，在每種情況下具有比每個(gè)化合物單獨(dú)顯示的抑制區(qū)域直徑顯著增加的直徑。
如上所述在鹽和血液的存在下重復(fù)BP/TBHQ SDDA測試?？雌饋砜咕鷧f(xié)同作用在這些添加物條件下得到保持，區(qū)域直徑增加為12.34毫米并且面積增加186.0％。
因此在合適的苯醌/氫醌的存在下，相對惰性的過氧化物可對金黃色葡萄球菌產(chǎn)生非常的活性。此外這種協(xié)同作用還可能在局部施加到皮膚時(shí)得到保持。
實(shí)施例2——對金黃色葡萄球菌的活性-FIC測試 然后，含有兩種活性物質(zhì)各種相對比例的BP和烷基取代氫醌TBHQ的混合物進(jìn)行如上所述的對抗金黃色葡萄球菌ATCC 29213的FIC測試，并且所得結(jié)果用于制備FIC等效應(yīng)圖。丙酮用作BP的溶劑，并且乙醇用作TBHQ的溶劑。
混合物得到的最低FICI范圍為0.38-0.5，再次表明協(xié)同相互作用。代表性的等效應(yīng)圖如圖1所示，虛線表示總體FICI(即，F(xiàn)ICBP+FICTBHQ)等于1，其可能表示單純的相加效應(yīng)。圖1清楚地表明BP和TBHQ組合的協(xié)同作用。
實(shí)施例3——對金黃色葡萄球菌的活性-TTK測試 然后使用金黃色葡萄球菌ATCC 29213作為測試生物體在樣品BP、TBHQ和BP/TBHQ混合物上如上所述進(jìn)行TTK測試。BP使用的溶劑為DMSO，TBHQ使用的溶劑為乙醇。所得結(jié)果如表3所示。cfu值在時(shí)間0、0.5小時(shí)和1小時(shí)測量。
表3 這些數(shù)據(jù)表明，與混合物中使用的相同濃度的單個(gè)化合物相比，過氧化物和氫醌的組合能夠更快地殺死金黃色葡萄球菌。這提供了在兩個(gè)化合物之間存在協(xié)同作用的又一證據(jù)。
實(shí)施例4——對金黃色葡萄球菌的活性-MTTK測試 含有BP、TBHQ和BP/TBHQ混合物的樣品還如上所述使用金黃色葡萄球菌ATCC 29213作為測試生物體進(jìn)行MTTK測試。BP溶于DMSO并且TBHQ溶于乙醇。
24小時(shí)后的結(jié)果如下表4所示。(初始培養(yǎng)液含有3.25×107cfu/ml；1×103cfu/ml表示較低檢測極限。) 表4 過氧化苯甲酰
如在暗灰色背景中的黑體突出所示，表4確定三種BP和TBHQ協(xié)同混合物。暗灰單元格表示單獨(dú)足以殺死生物體的每個(gè)個(gè)體活性的最低濃度(即，MBC)。對于協(xié)同混合物，與單獨(dú)使用與混合物相同濃度的BP或TBHQ相比，得到的微生物活性降低更大(24小時(shí)后)。
三種協(xié)同BP/TBHQ組合為含有以下的那些 a)0.25×MBC的BP(31.25微克/毫升)+0.5×MBC的TBHQ(3.9微克/毫升) b)0.5×MBC的BP(62.5微克/毫升)+0.25×MBC的TBHQ(1.95微克/毫升) c)0.5×MBC的BP(62.5微克/毫升)+0.5×MBC的TBHQ(3.9微克/毫升) 這另外證實(shí)了過氧化物和氫醌可以分別以低于其本身MBC的濃度一起使用來對抗葡萄球菌。
這另外證實(shí)了過氧化物和氫醌可以分別以低于其本身MBC的濃度一起使用來對抗葡萄球菌?？赡芎懈邼舛葴y試化合物的混合物還將協(xié)同對抗金黃色葡萄球菌ATCC 29213。
實(shí)施例5——對其它葡萄球菌的活性-MIC、MBC&(S)DDA測試 測試了BP、TBHQ及其兩者組合對其它葡萄球菌菌株的活性，包括具有已知抗生素抗性的那些。如上所述對于每個(gè)菌株進(jìn)行MIC、MBC和(S)DDA測試。
對于全部(S)DDA測試，200微克TBHQ負(fù)載在各個(gè)圓盤上。對于BP使用的溶劑為DMSO，對于TBHQ使用的溶劑為乙醇。
MIC和MBC結(jié)果列于以下表5并且(S)DDA結(jié)果列于表6。全部結(jié)果由多個(gè)試驗(yàn)中比較。表5表明了各個(gè)試驗(yàn)菌株的抗性類型，其中部分對多種普遍使用的抗生素具有抗性。
表5 [縮寫美國標(biāo)準(zhǔn)菌庫(ATCC)，英國中央公共衛(wèi)生檢驗(yàn)室(CPHL)，National Collection of Type Cultures(NCTC)，甲氧西林(Met)，萬古霉素(Van)，Teicoplanin(Tec)，未檢出(ND)，流行性甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(EMRSA)，萬古霉素介質(zhì)金黃色葡萄球菌(VISA)，糖肽抗性金黃色葡萄球菌(GISA)] *可存在其它未表征的抗生素抗性 表6 大于5毫米的區(qū)域尺寸增加作為可能的協(xié)同作用的指標(biāo)，過氧化物和氫醌對于大多數(shù)被測試的葡萄球菌菌株，顯示出潛在的協(xié)同抗菌作用。即便是如果SDDA區(qū)域增加小于5毫米，協(xié)同作用看起來中性而不是強(qiáng)烈對抗，因此提供了使用較低量的可能刺激性的過氧化物來制備抗菌制劑而不過分損失抗微生物活性的可能。這些結(jié)果對于抗生素抗性的測試菌株具有特別的臨床價(jià)值。
實(shí)施例6——對痤瘡丙酸桿菌的活性-MIC、MBC&(S)DDA測試 以下實(shí)驗(yàn)全部使用痤瘡丙酸桿菌NCTC 737作為試驗(yàn)生物體。
如上所述的MIC、MBC和DDA測試使用BP和不同苯醌和氫醌進(jìn)行。還在鹽和脂質(zhì)的存在下進(jìn)行了添加物DDA測試。
然后每種醌與BP組合進(jìn)行如上所述的SDDA測試。在每種情況下，區(qū)域直徑(毫米)和面積(％)增加根據(jù)在前面單個(gè)化合物的圓盤擴(kuò)散測試期間顯示較大區(qū)域直徑的化合物所觀察到的那些測量。
對于所有(S)DDA測試，200微克各種化合物裝載在各個(gè)圓盤上。使用的溶劑為DMSO(對于BP、2，3-二甲基-對-氫醌和2-乙基-對-氫醌)和乙醇(對于THBQ、百里醌、對-氫醌和對-苯醌)。
MIC、MBC和DDA結(jié)果如下表7所示，并且SDDA結(jié)果如表8所示。全部結(jié)果由多個(gè)試驗(yàn)中核對。
表7 表8 表7和表8中的數(shù)據(jù)表明，每種醌單獨(dú)對痤瘡丙酸桿菌NCTC 737具有活性，某些醌很強(qiáng)(特別是TBHQ、2，3-二甲基-對-氫醌和2-乙基-對-氫醌)。BP也對生物體具有活性，不過活性不如更具有活性的醌。在大多數(shù)情況下，該活性在鹽和脂質(zhì)的存在下至少在某種程度上得到保持，鹽和脂質(zhì)為人體皮膚環(huán)境中的重要組分。在某些情況下醌的活性似乎被一種或全部添加物增強(qiáng)。
再次，當(dāng)BP與苯醌/氫醌組合時(shí)，SDDA數(shù)據(jù)顯示了在兩者之間可能的協(xié)同抗菌作用，在每種情況下具有比每個(gè)化合物單獨(dú)顯示的抑制區(qū)域直徑明顯增加的直徑。
如上所述在鹽和脂質(zhì)的存在下重復(fù)BP/TBHQ SDDA測試。看起來抗菌協(xié)同作用在這些添加物條件下得以保持，區(qū)域直徑增加為18.34毫米并且面積增加419.8％。
實(shí)施例7——對抗丙酸菌屬的活性-FIC測試 含有不同相對比例的兩種活性物的BP和TBHQ的混合物然后進(jìn)行如上所述的FIC測試。使用的測試生物體為如上所述自有顆粒丙酸桿菌菌株P(guān)RP-055。對于BP使用的溶劑為DMSO，對于TBHQ使用的溶劑為乙醇。
由于過氧化物與氫醌混合的結(jié)果，觀察到增強(qiáng)的抗微生物活性(最低FICI值為0.53)。代表性等效應(yīng)圖如圖2所示。
實(shí)施例8——對抗其它丙酸菌屬的活性-MIC、MBC&(S)DDA測試 測試了BP、TBHQ及其兩者組合對其它丙酸菌屬spp菌株的活性，包括具有已知抗生素抗性的那些。如上所述對于每個(gè)菌株進(jìn)行MIC、MBC和(S)DDA測試。
對于全部(S)DDA測試，200微克TBHQ負(fù)載在各個(gè)圓盤上。對于BP使用的溶劑為DMSO，對于TBHQ使用的溶劑為乙醇。
MIC和MBC結(jié)果列于以下表9并且(S)DDA結(jié)果列于表10。全部結(jié)果由多個(gè)試驗(yàn)中比較。表9表明了各個(gè)試驗(yàn)菌株的抗性表現(xiàn)型。
表9 [縮寫美國標(biāo)準(zhǔn)菌庫(ATCC)，National Collection ofType Cultures(NCTC)，丙酸菌屬面板編號(hào)(PRP)，四環(huán)素(Tet)，紅霉素(Ery)，氯潔霉素(Clin)，大環(huán)內(nèi)酯-林可胺類-鏈霉殺陽菌素(MLS)、大環(huán)內(nèi)酯-林可胺類-鏈霉殺陽菌素-酮內(nèi)酯類(MLSK)] 表10 大于5毫米的區(qū)域尺寸增加作為可能的協(xié)同作用的指標(biāo)，過氧化物和氫醌對于大多數(shù)被測試的丙酸菌屬菌株顯示出潛在的協(xié)同抗菌作用。在某些情況下僅僅在SDDA測試中觀察到較小的區(qū)域直徑增加，在兩個(gè)測試化合物之間中性相互作用的表現(xiàn)——這仍然可提供使用較低量的可能刺激性的過氧化物來制備抗菌制劑而不過分損失抗微生物活性的可能。
這些結(jié)果對于抗生素抗性的測試菌株具有特別的臨床價(jià)值。
實(shí)施例9——對痤瘡丙酸桿菌的活性-其它過氧化物 四種其它過氧化物進(jìn)行對抗痤瘡丙酸桿菌NCTC 737的DDA測試，包括與TBHQ組合。所得結(jié)果列于以下表11，每個(gè)為三次重復(fù)試驗(yàn)的平均值。
對于全部(S)DDA測試，200微克各個(gè)化合物負(fù)載在各個(gè)圓盤上。對于金屬過氧化物使用的溶劑為dH2O，對于TBHQ和叔丁基氫過氧化物使用的溶劑為乙醇。
表11 表11中的數(shù)據(jù)表明，過氧化苯甲酰以外的過氧化物在與例如TBHQ的苯醌/氫醌組合時(shí)也可表現(xiàn)出協(xié)同抗菌作用。在各種情況下，對抗痤瘡丙酸桿菌NCTC 737的組合活性明顯高于每個(gè)測試化合物單獨(dú)的情況。
三種金屬過氧化物對抗痤瘡丙酸桿菌NCTC 737的單個(gè)MIC和MBC全部大于250微克/毫升。因此可能將這些過氧化物與合適的苯醌/氫醌組合，與另外確保抗菌活性所需相比可以顯著降低過氧化物濃度。
實(shí)施例10——對糞腸球菌的活性 BP、TBHQ以及兩者組合對抗糞腸球菌ATCC 29212的活性使用如上所述MIC、MBC和(S)DDA測試進(jìn)行。
對于(S)DDA測試，200微克各個(gè)化合物負(fù)載在各個(gè)圓盤上。對于BP使用的溶劑為DMSO，對于TBHQ使用的溶劑為乙醇。
MIC和MBC結(jié)果列于下表12，并且(S)DDA結(jié)果列于表13。全部結(jié)果由多個(gè)試驗(yàn)核對。
表12 表13 表12和13表明根據(jù)本發(fā)明制劑對糞腸球菌具有與實(shí)施例5和8中所述多種不同葡萄球菌和丙酸菌屬一樣的活性。此外，雖然過氧化物對這些生物體單獨(dú)具有相對較低的活性，當(dāng)與氫醌組合時(shí)，觀察到顯著的協(xié)同抗菌作用。
BP/TBHQ組合還對鮑曼不動(dòng)桿菌(Acimetobacter baumanni)ATCC19606、大腸桿菌ATCC 25922、流感嗜血桿菌ATCC 49247、克雷白氏桿菌ATCC 700603、綠膿假單胞菌ATCC 27853和化膿性鏈球菌ATCC12344進(jìn)行了DDA和SDDA測試。全部測試化合物以200微克/圓盤使用，BP溶于DMSO并且TBHQ溶于乙醇。在這種情況下，SDDA數(shù)據(jù)沒有產(chǎn)生協(xié)同作用的明顯指示。
實(shí)施例11——局部抗痤瘡制劑 實(shí)施例1-10的結(jié)果表明過氧化物和苯醌或氫醌的組合可為有效抗菌劑，特別是對抗與皮膚感染有關(guān)的細(xì)菌的有效抗菌劑，在多種情況下與單獨(dú)使用各個(gè)化合物時(shí)相比具有抗微生物活性的協(xié)同作用。這可用于制備抗菌制劑，特別是用于局部施用到皮膚，在這些細(xì)菌被認(rèn)為是可能的感染源的任何情形中用作預(yù)防劑或治療劑。
即便是與單個(gè)化合物相比抗微生物活性在組合中具有加和(中性)、與協(xié)同作用相反的情形，在制備局部應(yīng)用的制劑時(shí)仍然具有益處。苯醌/氫醌可用于代替部分過氧化物，例如過氧化苯甲酰，由此在沒有過分損失抗微生物活性的前提下降低組合物的刺激作用。這種抗微生物活性的保持或在某種情況下的改善不能從過氧化物和苯醌/氫醌的各自已知活性和應(yīng)用預(yù)見到。
用于治療痤瘡的局部制劑例如可通過將例如過氧化苯甲酰的過氧化物(或?qū)嵤├?中測試的任何過氧化物)與合適的苯醌或氫醌特別是烷基取代的苯醌/氫醌(例如TBHQ)任選與常規(guī)添加劑一起配制在適當(dāng)?shù)牧黧w賦形劑中制備。這種賦形劑和添加劑例如公開在Williams′“Transdermal and Topical Drug Delivery”，Pharmaceutical Press，2003以及其它類似參考文獻(xiàn)中，和/或在Rolland A等人，“Site-specific drugdelivery to pilosebaceous structures using polymeric microspheres”，Pharm.Res.1993；101738-44；Mordon S等人，“Site-specific methylene bluedelivery to pilosebaceous structures using highly porous nylonmicrospheresan experimental evaluation”，Lasers Surg.Med.2003；33119-25；和Alvarez-Roman R等人，“Skin penetration and distribution ofpolymeric nanoparticles”，J.Controlled Release 2004；9953-62。
該制劑可使用已知技術(shù)制備和給藥。例如其可為霜?jiǎng)⑾磩┖湍z劑的形式。其可施加到皮膚的感染部位，和/或?qū)硪资芨腥镜牟课?，施加頻率取決于疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及過氧化物、醌和其它活性劑在制劑中的濃度，例如每天一次或每天兩次。
苯醌/氫醌的濃度可在上述范圍之內(nèi)，并且將根據(jù)制劑的預(yù)期應(yīng)用、預(yù)期給藥模式以及特定選擇的活性劑的活性確定。
實(shí)施例12——用于對抗葡萄球菌感染的局部制劑 用于對抗金黃色葡萄球菌或其它葡萄球菌的制劑可如抗痤瘡制劑中所述類似的方式通過將例如過氧化苯甲酰的過氧化物與例如TBHQ的苯醌/氫醌混合制備。在這種情況下組分可以配制成噴霧劑，例如施加在手術(shù)器械的工作表面；配制成清潔凝膠劑或洗劑，例如用于手工洗滌；配制成鼻部噴劑，用于施加到前鼻孔，或配制成多種其他合適的形式。這種制劑特別可以預(yù)防性使用，例如降低MRSA或類似感染發(fā)作的風(fēng)險(xiǎn)。
權(quán)利要求
1.含有(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌的抗菌制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，適于局部施用到皮膚上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的制劑，適于局部施用到鼻孔。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其為霜?jiǎng)⒑齽?、凝膠、膏劑、泡沫、洗劑或其它粘性或半粘性流體的形式。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的制劑，其為能夠作為滴劑和/或作為噴霧劑施用的液體形式。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中過氧化物和苯醌/氫醌單獨(dú)或一起在適于將其在指定給藥位置和/或時(shí)間靶向或控制釋放的遞送賦形劑中或之上遞送。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中過氧化物為二?；^氧化物、烷基氫過氧化物或金屬過氧化物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的制劑，其中過氧化物為選自過氧化鎂或過氧化鈣的金屬過氧化物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的制劑，其中過氧化物為式R3-C(O)-OO-C(O)-R4的二?；^氧化物，其中R3和R4每個(gè)獨(dú)立地選自C1-C12烷基和C1-C8芳基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的制劑，其中二?；^氧化物為過氧化苯甲酰。
11.根據(jù)權(quán)利要求7的制劑，其中過氧化物為式R5-OO-H的烷基氫過氧化物，其中R5選自C1-C8烷基。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌的兩個(gè)C＝O基或C-OH基彼此位于鄰位或?qū)ξ弧?br> 13.根據(jù)權(quán)利要求12的制劑，其中苯醌/氫醌的兩個(gè)C＝O基或C-OH基彼此位于對位。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌被一個(gè)或多個(gè)選自下組的取代基取代烷基、烷氧基、鹵素、羥基、硝基(-NO2)和胺基(-NR2，其中每個(gè)R獨(dú)立地為氫或烴基)。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的制劑，其中苯醌/氫醌被單或二取代。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或權(quán)利要求15的制劑，其中苯醌/氫醌至少在2位被取代。
17.根據(jù)權(quán)利要求14-16中任意一項(xiàng)的制劑，其中取代基選自烷基、烷氧基和鹵基。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的制劑，其中取代基選自烷基。
19.根據(jù)權(quán)利要求14-18中任意一項(xiàng)的制劑，其中烷基選自甲基、乙基、異丙基和叔丁基。
20.根據(jù)權(quán)利要求14-17或19中任意一項(xiàng)的制劑，其中烷氧基為甲氧基。
21.根據(jù)權(quán)利要求14-17、19或20中任意一項(xiàng)的制劑，其中鹵素為氯。
22.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌沒有被一個(gè)以上吸電子基團(tuán)取代。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的制劑，其中苯醌/氫醌沒有被任何吸電子基團(tuán)取代。
24.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌在與其C-OH或C＝O基兩者相鄰位置都沒有空間位阻取代基。
25.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中在苯醌/氫醌中，C-OH或C＝O基的至少一個(gè)并且優(yōu)選全部兩個(gè)在其至少一個(gè)相鄰碳原子上未取代。
26.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌被至少一個(gè)給電子基團(tuán)取代。
27.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌選自TBHQ、2-甲基-對-氫醌、2，3-二甲基-對-氫醌、2-乙基-對-氫醌、百里醌和百里氫醌。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的制劑，其中苯醌/氫醌選自TBHQ、百里醌和百里氫醌。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的制劑，其中苯醌/氫醌為TBHQ。
30.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌選自TBHQ、2-甲基-對-氫醌、2，3-二甲基-對-氫醌、2-乙基-對-氫醌和百里氫醌。
31.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌選自TBHQ、百里醌、2-乙基-對-氫醌和2，3-二甲基-對-氫醌。
32.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中過氧化物和苯醌/氫醌以及其相對比例達(dá)到至少使得抗微生物活性的加和量可以比得上各個(gè)化合物單獨(dú)的活性的程度。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的制劑，其中過氧化物和苯醌/氫醌以及其相對比例達(dá)到產(chǎn)生抗微生物活性協(xié)同作用的程度。
34.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其具有作為殺菌劑的活性。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的制劑，其對一種或多種與皮膚或由皮膚引起的感染有關(guān)的細(xì)菌具有活性。
36.根據(jù)權(quán)利要求34或權(quán)利要求35的制劑，其對一種或多種選自丙酸菌屬和革蘭氏陽性球菌的細(xì)菌具有活性。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的制劑，其對葡萄球菌和/或丙酸菌屬具有活性。
38.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中過氧化物至少對葡萄球菌和/或丙酸菌屬具有500微克/毫升或更低的最小殺菌濃度(MBC)。
39.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌至少對葡萄球菌和/或丙酸菌屬具有50微克/毫升或更低的最小殺菌濃度(MBC)。
40.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中過氧化物的濃度為0.05-10％w/v。
41.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中苯醌/氫醌的濃度為0.05-5％w/v。
42.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中過氧化物與苯醌/氫醌的重量比為1∶10-100∶1。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的制劑，其中過氧化物與苯醌/氫醌的重量比為1∶4-10∶1。
44.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中當(dāng)該制劑體內(nèi)施用時(shí)過氧化物在作用點(diǎn)的濃度小于過氧化物單獨(dú)的最小殺菌濃度(MBC)，優(yōu)選小于最小抑菌濃度(MIC)。
45.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中當(dāng)該制劑體內(nèi)施用時(shí)苯醌/氫醌在作用點(diǎn)的濃度小于苯醌/氫醌單獨(dú)的最小殺菌濃度(MBC)，優(yōu)選小于最小抑菌濃度(MIC)。
46.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中含有一種或多種選自下組的另外的活性劑抗菌劑、抗痤瘡劑、角質(zhì)溶解藥、消除粉刺藥物、消炎藥、抗增生藥、抗生素、抗雄激素、sebostatic agents、抗瘙癢藥、免疫調(diào)節(jié)劑、促進(jìn)傷口愈合的藥劑、增強(qiáng)制劑中存在的其它活性劑的活性或降低這種活性劑副作用的藥劑，或者在制劑給藥時(shí)改善患者順應(yīng)性的藥劑，以及其混合物。
47.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的制劑，其中過氧化物和苯醌/氫醌每個(gè)封裝在單獨(dú)的遞送賦形劑中。
48.基本上如此處所述的抗微生物制劑。
49.含有根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項(xiàng)的抗微生物制劑的產(chǎn)品。
50.根據(jù)權(quán)利要求49的產(chǎn)品，其為化妝品、皮膚或毛發(fā)護(hù)理制劑、藥物(包括獸藥)制劑、盥洗用品、洗衣或其它織物處理產(chǎn)品或農(nóng)業(yè)或園藝產(chǎn)品。
51.用于制備抗微生物制劑的試劑盒，所述試劑盒包括(a)選自二酰基過氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物來源和(b)苯醌或氫醌來源，以及將兩種化合物組合以在打算施用時(shí)或者在打算施用之前制備該制劑，和/或用于將兩種化合物共同給藥到表面的說明書。
52.一種制備抗微生物制劑的方法，所述方法包括將(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌混合在一起。
53.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中所述方法的產(chǎn)品為根據(jù)權(quán)利要求1-48中任意一項(xiàng)的制劑。
54.含有(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌的制劑在影響人或動(dòng)物體的病癥的治療中的應(yīng)用，該病癥通過微生物特別是細(xì)菌作用引起、惡化或傳播。
55.根據(jù)權(quán)利要求54應(yīng)用的制劑，其中所述病癥為皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)病癥。
56.根據(jù)權(quán)利要求55應(yīng)用的制劑，其中所述病癥選自痤瘡、感染的特應(yīng)性濕疹、表面感染的外傷性損害、創(chuàng)口、燒傷、潰瘍、毛囊炎和真菌病。
57.根據(jù)權(quán)利要求56應(yīng)用的制劑，其中所述病癥為痤瘡。
58.根據(jù)權(quán)利要求54-56中任意一項(xiàng)應(yīng)用的制劑，其中所述病癥為葡萄球菌所致感染。
59.根據(jù)權(quán)利要求54-58中任意一項(xiàng)應(yīng)用的制劑，其中所述制劑為根據(jù)權(quán)利要求1-48中任意一項(xiàng)的制劑。
60.根據(jù)權(quán)利要求54-59中任意一項(xiàng)應(yīng)用的制劑，其中所述制劑在給藥點(diǎn)原位制備或者在給藥點(diǎn)之前立即制備，和/或其中過氧化物和苯醌/氫醌順序給藥。
61.(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌在制備用于治療由微生物特別是細(xì)菌作用引發(fā)、惡化或傳播的疾病的藥物中的應(yīng)用。
62.根據(jù)權(quán)利要求61的應(yīng)用，其中所述病癥為皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)病癥。
63.根據(jù)權(quán)利要求62的應(yīng)用，其中所述病癥為痤瘡。
64.根據(jù)權(quán)利要求61或62的應(yīng)用，其中所述病癥為葡萄球菌所致感染。
65.控制微生物生長的方法，所述方法包括向感染區(qū)域或懷疑將要感染的區(qū)域或能夠被微生物感染的區(qū)域施加(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌。
66.根據(jù)權(quán)利要求65的方法，其中所述微生物為細(xì)菌。
67.根據(jù)權(quán)利要求65或權(quán)利要求66的方法，其中過氧化物和苯醌/氫醌施加的區(qū)域?yàn)槿嘶騽?dòng)物組織。
68.根據(jù)權(quán)利要求65或權(quán)利要求66的方法，其中過氧化物和苯醌/氫醌施加的區(qū)域?yàn)榉巧砻妗?br> 69.根據(jù)權(quán)利要求65-68中任意一項(xiàng)所述的方法，其中過氧化物和苯醌/氫醌以根據(jù)權(quán)利要求1-48中任意一項(xiàng)的制劑的形式施加。
70.一種用于控制微生物生長的方法，所述方法基本上如此處所述。
71.一種用于在含有或懷疑含有或能夠含有微生物的產(chǎn)品中控制微生物生長的方法，所述方法包括向產(chǎn)品中加入(a)選自二酰基過氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌的組合。
72.苯醌或氫醌為了提高制劑抗微生物活性和/或在沒有過分損失抗微生物活性的前提下減少制劑中過氧化物量，與選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物相結(jié)合在抗菌制劑中的應(yīng)用。
73.根據(jù)權(quán)利要求72的應(yīng)用，其目的為在沒有過分損失抗微生物活性的前提下降低皮膚刺激或制劑其它不希望的性質(zhì)。
74.選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物為了提高制劑抗微生物活性和/或在沒有過分損失抗微生物活性的前提下減少制劑中苯醌或氫醌量，在含有苯醌或氫醌的抗菌制劑中的應(yīng)用。
75.根據(jù)權(quán)利要求72-74中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述制劑為根據(jù)權(quán)利要求1-48中任意一項(xiàng)的制劑。
76.在人或動(dòng)物患者中治療微生物作用所引發(fā)、惡化或傳播的疾病的方法，所述方法包括向患者給藥藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上有效量的(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌。
77.根據(jù)權(quán)利要求76的方法，其中所述疾病通過葡萄球菌和/或丙酸菌屬作用引發(fā)、惡化或傳播。
78.根據(jù)權(quán)利要求76或權(quán)利要求77的方法，其中所述病癥為皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)病癥。
79.根據(jù)權(quán)利要求78的方法，其中所述病癥為痤瘡。
80.根據(jù)權(quán)利要求76-78中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述病癥為葡萄球菌所致感染。
全文摘要
含有(a)選自二?；^氧化物、烷基氫過氧化物和金屬過氧化物的過氧化物和(b)苯醌或氫醌的抗菌制劑。該制劑特別可用于對抗葡萄球菌或丙酸菌屬，更特別用于治療皮膚或皮膚結(jié)構(gòu)疾病，例如痤瘡。
文檔編號(hào)A61K8/30GK101203205SQ200680017940
公開日2008年6月18日 申請日期2006年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月23日
發(fā)明者E·A·伊迪, J·H·科夫, D·J·費(fèi)茨格拉爾德, S·塞維爾 申請人:辛托皮克斯有限公司