專利名稱：：替加環(huán)素組合物及制備方法替加環(huán)素組合物及制備方法本申請(qǐng)要求于2005年3月14日提交的待審的臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)60/661030的優(yōu)先權(quán)，該臨時(shí)專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。本發(fā)明涉及改進(jìn)的替加環(huán)素(tigecycline)組合物及制備這些組合物的方法。本發(fā)明的組合物在固體狀態(tài)和液體狀態(tài)下的穩(wěn)定性都得到提高。本發(fā)明的組合物包含替加環(huán)素、適當(dāng)?shù)奶妓衔镆约八峄蚓彌_劑。如下面所說(shuō)明，適當(dāng)?shù)奶妓衔锛八峄蚓彌_劑的組合物可以減少替加環(huán)素的降解。本發(fā)明提供穩(wěn)定的替加環(huán)素組合物和制備這些對(duì)于氧化降解和抗差向異構(gòu)化穩(wěn)定的組合物的方法，從而其優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。因此，這些組合物與不是根據(jù)本發(fā)明的方法制備的替加環(huán)素組合物相比，在溶解、凍干、重構(gòu)和/或稀釋時(shí)更加穩(wěn)定。替加環(huán)素是一種眾所周知的四環(huán)素類抗生素，并且為米諾環(huán)素的類似物。該物質(zhì)可用于對(duì)抗耐藥菌，并已發(fā)現(xiàn)它在其它抗生素治療失敗時(shí)仍然有效。例如，它對(duì)以下微生物有活性，包括甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌(5^flp/u;/ococci/sa"^MS)、青霉素耐藥的肺炎鏈球菌CS汁e/^ococcMS、萬(wàn)古霉素耐藥的腸球菌(D.J.Beidenbach等人，診斷微生物學(xué)和感染性疾病(DiagnosticMicrobiologyandInfectiousDisease)40:173-177(2001);H.W.Boucher等人，抗孩t生物劑和化學(xué)治療(AntimicrobialAgentsandChemotherapy)44:2225-2229(2000);P.A.Bradford臨床微生物時(shí)事快報(bào)(Clin.Microbiol.Newslett.)26:163-168(2004);D.Milatovic等人，抗微生物劑和化學(xué)治療47:400-404(2003);R.Patel等人，診斷微生物學(xué)和感染性疾病38:177-179(2000);P.J.Petersen等人，抗微生物劑和化學(xué)治療46:2595-2601(2002);P.J.Petersen等人，抗微生物劑和化學(xué)治療43:738-744(1999))，以及帶有兩種四環(huán)素主要耐藥機(jī)制(排出和核糖體保護(hù))之一的微生物(C.Betriu等人，抗微生物劑和化學(xué)治療48:323-325(2004);T.Hirata等人，抗微生物劑和化學(xué)治療48:2179-2184(2004);和P丄Petersen等人，抗微生物劑和化學(xué)治療43:738-744(1999))。因?yàn)槠湓诳诜o藥時(shí)生物利用度通常較差，所以替加環(huán)素以前為靜脈給藥。靜脈給藥的溶液主要在使用(例如對(duì)患者給藥)前由凍干粉立即制備，因?yàn)樘婕迎h(huán)素在溶液中主要通過氧化而降解。最好有而且需要有不用立即使用，并能夠在溶液中保持穩(wěn)定高達(dá)24小時(shí)的替加環(huán)素靜脈制劑。替加環(huán)素目前作為凍干粉生產(chǎn)。由于替加環(huán)素有降解傾向，所以這些凍干粉在低氧和低溫條件下生產(chǎn)，以使降解減到最少。因?yàn)槠湫枰厥庋b置和操作，所以該方法是昂貴的。制備這些粉末組合物的經(jīng)典方法包括將替加環(huán)素溶解到水中(混合)和將溶液凍干(冷凍干燥)以形成無(wú)定形替加環(huán)素固體塊狀物。然后在氮?dú)猸h(huán)境下將這些塊狀物裝入帶塞玻璃管形瓶中，并運(yùn)送到如醫(yī)院藥房的終端用戶。在對(duì)病人給藥前，這些塊狀物被重構(gòu)(通常用0.9。/。鹽水)到如約10mg/mL的濃度。在該濃度下，替加環(huán)素在溶液中快速降解，因此必須立即使用。這樣，立即用鹽水或其它藥學(xué)上可接受稀釋劑將這些重構(gòu)溶液稀釋(也可認(rèn)為是混合)到患者給藥用靜脈袋中，并稀釋至約lmg/mL。在此稀釋狀態(tài)下，替加環(huán)素易于靜脈給藥至患者。然而，在lmg/mL濃度下，替加環(huán)素應(yīng)當(dāng)在稀釋后的6小時(shí)內(nèi)使用。因?yàn)殪o脈輸液可能花費(fèi)幾小時(shí)時(shí)間，醫(yī)護(hù)人員必須動(dòng)作迅速，以使從混合開始到已經(jīng)將替加環(huán)素制劑給予患者的時(shí)間不超過6小時(shí)。應(yīng)當(dāng)更優(yōu)選給醫(yī)護(hù)人員提供由更長(zhǎng)的混合和重構(gòu)時(shí)間帶來(lái)的靈活性和益處，從而例如醫(yī)院藥師可以在需要對(duì)患者給藥的前一天將溶液制備好。替加環(huán)素混合時(shí)間如此短，并且重構(gòu)時(shí)間基本上為零，是由于在溶液中替加環(huán)素的氧化比較快。在當(dāng)前的生產(chǎn)、貯存和給藥條件下，最主要的降解形式是氧化。在以前的制劑中為最主要降解形式的氧化的原因與替加環(huán)素的化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)。替加環(huán)素含有酚基團(tuán)，酚特別易于氧化在有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域中是眾所周知的。當(dāng)凍干前將替加環(huán)素溶于水中時(shí)，pH為弱堿性(約7.8)。這高于替加環(huán)素上的酚基團(tuán)的pKa。因此，在水和鹽水溶液中，酚基團(tuán)脫去質(zhì)子并更加易于與氧反應(yīng)，這是替加環(huán)素在混合和凍干要在氮?dú)猸h(huán)境下進(jìn)行的原因。因此，在重構(gòu)和稀釋過程中，醫(yī)護(hù)人員必須注意避免不必要的與氧的接觸。如果替加環(huán)素溶液的pH低于替加環(huán)素上酚基團(tuán)的pKa，則氧化會(huì)發(fā)生，但是其降到較低程度。實(shí)際上，已經(jīng)觀察到當(dāng)pH較低時(shí)替加環(huán)素的氧化降解確實(shí)減少。然而，在低pH值時(shí)，另一降解過程發(fā)生，即差向異構(gòu)化。在較低pH值時(shí)，差向異構(gòu)化作為最主要的降解途徑出現(xiàn)。替加環(huán)素與其差向異構(gòu)體在結(jié)構(gòu)上僅有一點(diǎn)不同。在替加環(huán)素中，4位碳上的N-二甲基基團(tuán)與相鄰的氫是順式的，如上面式I所示，而在其差向異構(gòu)體(式II)中，它們相互為反式，如式II中所示的方式。盡管替加環(huán)素差向異構(gòu)體被認(rèn)為是無(wú)毒性的，但是它缺乏替加環(huán)素的抗菌效用，因此，它是不合需要的降解產(chǎn)物。在凍干狀態(tài)，替加環(huán)素遵循與,溶液中相同的降解途徑，但是降解速度相對(duì)較慢。如此，當(dāng)替加環(huán)素在pH約為7.8的水中凍干時(shí)，得到的凍干塊狀物發(fā)生氧化降解，雖然，其速度慢于溶液中的。類似的，當(dāng)替加環(huán)素在酸性溶液凍千時(shí)，主要的降解途徑為差向異構(gòu)化，并且其差向異構(gòu)化速度也慢于溶液中的。差向異構(gòu)化是四環(huán)素公知的普遍降解途徑，盡管降解速度可以根據(jù)不同四環(huán)素而變化。比較而言，替加環(huán)素的差向異構(gòu)化速度特別快。四環(huán)素相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道了幾種科學(xué)家用以嘗試并使四環(huán)素差向異構(gòu)體生成減到最少的方法。在一些方法中，四環(huán)素的鈣、鎂、鋅或鋁金屬鹽的生成限制了在堿性pH的無(wú)水溶液中發(fā)生的差向異構(gòu)體生成(Gordon，P.N.，StephensJr，C.R.,Noseworthy，M.M"Teare，F(xiàn).W.,U.K.專利901107)。在其它方法中(Tobkes，U.S.專利4038315)，在酸性pH下生成金屬?gòu)?fù)合物，接著穩(wěn)定的固體形式藥物得以制備。用于減少差向異構(gòu)化的其它方法包括在整個(gè)過程中保持pH約大于6.0;避免與如甲酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽或硼酸鹽的弱酸共軛物接觸；并且避免與包括水性溶液的濕氣接觸。對(duì)于保護(hù)免受濕氣影響，Noseworthy和Spiegel(U.S.專利3026248)及Nash和Haeger(U.S.專利3219529)已提出四環(huán)素類似物的非水溶媒制劑，以提高藥物的穩(wěn)定性。然而，這些發(fā)明中包含的大多數(shù)溶媒與腸胃外使用相比更適用于局部使用。四環(huán)素差向異構(gòu)化為溫度依賴性的也是公知的，因此在低溫下生產(chǎn)和貯存四環(huán)素也可以降4氐差向異構(gòu)體的生成速度(Yuen，P.H.，Sokoloski，T.D.，藥物科學(xué)雜志(J.Pharm.Sci.)66:1648-1650，1977;Pawelczyk，E.，Matlak,B，Pol.藥理學(xué)和藥學(xué)雜志(J.Pharmacol.Pharm.)34:409-421，1982)。已用這些方法中的幾種對(duì)替加環(huán)素進(jìn)行了嘗試，但是沒有方法能減少差向異構(gòu)體生成和氧化降解，同時(shí)又不引入另外的降解物。金屬?gòu)?fù)合物，例如，發(fā)現(xiàn)在堿性pH下其對(duì)差向異構(gòu)體生成或降解通常幾乎沒有影響。盡管磷酸鹽、乙酸鹽和檸檬酸鹽緩沖劑的使用提高了溶液狀態(tài)的穩(wěn)定性，但是它們好像加速了凍干狀態(tài)替加環(huán)素的降解。然而，即使在無(wú)緩沖劑存在時(shí)，與其它四環(huán)素如米諾環(huán)素相比，對(duì)于替加環(huán)素差向異構(gòu)化是更為嚴(yán)重的問題。這些方法中的其它方法也不能同時(shí)減少差向異構(gòu)化和氧化降解。盡管如上所述，已發(fā)現(xiàn)保持約大于6.0的pH可助于減少差向異構(gòu)體生成，但是這種條件導(dǎo)致更高的氧敏感性。對(duì)于非水溶媒，盡管認(rèn)為水加速替加環(huán)素的降解，但用上述非水溶媒制備靜脈藥物將是不現(xiàn)實(shí)的。盡管已經(jīng)確定在低于室溫(如約低于IO'C)的溫度下進(jìn)行加工可降低替加環(huán)素的降解速度，然而這種加工方法是昂貴的，使用在加工過程中不需要進(jìn)行高花費(fèi)的冷凍的組合物將是有益的。中國(guó)專利申請(qǐng)CN1390550A揭示米諾環(huán)素可以與酸組合以提高對(duì)氧化降解的穩(wěn)定性，并且進(jìn)一步提出如甘露醇的凝結(jié)劑的應(yīng)用。但是，該參考文獻(xiàn)既沒有提及替加環(huán)素，也沒有提出在降低的pH環(huán)境中碳水化合物可以用于減少米諾環(huán)素的氧化或差向異構(gòu)化。實(shí)際上，可以將米諾環(huán)素以其鹽酸鹽制成靜脈產(chǎn)品制劑，而沒有顯著的差向異構(gòu)化。然而，在替加環(huán)素的鹽酸鹽中，會(huì)發(fā)生顯著的差向異構(gòu)化。因此，米諾環(huán)素和替加環(huán)素?fù)碛胁煌牟钕虍悩?gòu)化特性。在另一實(shí)驗(yàn)中，將米諾環(huán)素在pH約5.0下進(jìn)行凍千，凍干塊在40"C和75%相對(duì)濕度下存放20天。在20天末，用HPLC對(duì)凍;塊進(jìn)行分析。對(duì)米諾環(huán)素的差向異構(gòu)體進(jìn)行測(cè)定，按質(zhì)量計(jì)算為2.65%。比較而言，將替加環(huán)素在pH約5.0下進(jìn)行凍千，樣品在相同的條件下存放，但只存放4天接著進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定出替加環(huán)素差向異構(gòu)體為5.40%,多于米諾環(huán)素中的兩倍量，盡管替加環(huán)素只存放了米諾環(huán)素存放的1/5長(zhǎng)時(shí)間。因此，替加環(huán)素比米諾環(huán)素更容易差向異構(gòu)化，相比其對(duì)于米諾環(huán)素，差向異構(gòu)化對(duì)于替加環(huán)素是更為重要的問題。本發(fā)明通過提供穩(wěn)定的固體和液體形式的替加環(huán)素組合物解決了現(xiàn)有技術(shù)的各種問題和缺點(diǎn)。通過在酸性pH下凍干含有替加環(huán)素和適當(dāng)?shù)奶妓衔锏乃芤海暾?qǐng)人制得了與已有組合物相比對(duì)氧化降解和差向異構(gòu)化更加穩(wěn)定的替加環(huán)素組合物。因?yàn)閜H是酸性的，氧化降解已被減至最少程度。此外，已經(jīng)確定在酸性pH下適當(dāng)?shù)奶妓衔锟煞€(wěn)定替加環(huán)素，避免差向異構(gòu)體生成。本發(fā)明的組合物在凍干狀態(tài)比現(xiàn)有組合物更加穩(wěn)定，并且不需要低溫或低含氧的加工條件。同時(shí)還預(yù)期這些組合物有比現(xiàn)"組合物更長(zhǎng)的重構(gòu)和混合穩(wěn)定時(shí)間。例如，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案在重構(gòu)后可穩(wěn)定6小時(shí)，并且混合后另外可再穩(wěn)定18小時(shí)。這些延長(zhǎng)的穩(wěn)定時(shí)間使替加環(huán)素非常易于在醫(yī)院環(huán)境中使用，這是通過當(dāng)治療患者時(shí)給醫(yī)護(hù)人員提供所需的靈活性實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明的固體狀態(tài)組合物包含替加環(huán)素、適當(dāng)?shù)奶妓衔?、以及酸或緩沖劑。適當(dāng)?shù)奶妓衔锸蔷哂腥缦滦再|(zhì)的碳水化合物，即該碳水化合物能夠在至少一種pH環(huán)境下制備的至少一種固體形式中減少差向異構(gòu)體的生成，以上減少是與在缺少適當(dāng)?shù)奶妓衔飼r(shí)在相同的pH環(huán)境下制備的替加環(huán)素的固體形式相比而言的。在一個(gè)實(shí)施方案中，pH環(huán)境范圍為約3.0-7.0，例如約4.0-5.0或約4.2-4.8的pH范圍。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種固體形式選自替加環(huán)素的粉未和凍干塊。適當(dāng)?shù)奶妓衔锏氖纠o(wú)水、水合和溶劑化形式的化合物，例如乳糖、甘露糖、蔗糖和葡萄糖。適當(dāng)?shù)奶妓衔锇▎翁腔蚨?，例如醛糖的單糖和二糖，?yōu)選如乳糖和蔗糖的二糖。乳糖是最優(yōu)選的。相應(yīng)地，適當(dāng)?shù)奶妓衔锟梢园ú煌墓腆w形式。例如對(duì)于乳糖，包括不同固體形式的乳糖，例如無(wú)水乳糖、乳糖單水合物或任何其它水合物或溶劑化形式的乳糖。乳糖和蔗糖是二糖。因此，根據(jù)本發(fā)明預(yù)期二糖作為一類化合物將起作用。本發(fā)明的組合物包括溶液，例如在凍干前制備的溶液，其中包含替加環(huán)素、適當(dāng)?shù)奶妓衔镆约八峄蚓彌_劑。本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，凍干前溶液可以被存放幾小時(shí)，以提供更大的制備靈活性。本發(fā)明的組合物此外還包括含有替加環(huán)素、適當(dāng)?shù)奶妓衔镆约八峄蚓彌_劑的凍干粉或凍干塊。本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所用的適當(dāng)?shù)奶妓衔锸侨樘菃嗡衔?，在凍干粉或凍干塊中的替加環(huán)素和乳糖單7jC合物的摩爾比在約1:0.2至約1:5之間。一些實(shí)施方案中，替加環(huán)素與乳糖單7jC合物的摩爾比在約1:1.6至約1:3.3之間。本發(fā)明的組合物也包括溶液，其通過例如用鹽水或其它藥學(xué)上可接受稀釋劑重構(gòu)凍干粉或凍干塊制得。本發(fā)明的組合物另外還包括溶液，該溶液用可用于靜脈袋中的藥學(xué)上可接受稀釋劑稀釋上述重構(gòu)溶液制得。任何能夠在本發(fā)明中減少差向異構(gòu)體生成的碳水化合物均是適當(dāng)?shù)奶?jc化合物，本發(fā)明不限于使用特別指定的碳7JC化合物的組合物。根據(jù)本發(fā)明，預(yù)期糖的^f生物例如可以起到減少差向異構(gòu)體生成的作用。因此，根據(jù)本發(fā)明，只要糖的衍生物，例如糖醇、葡萄糖胺和烷基酯單獨(dú)或組合能夠減少差向異構(gòu)體的生成，它們都是適當(dāng)?shù)奶?JC化合物。類似，其它適當(dāng)?shù)奶?jc化合物可以包括高,，例如多糖；碳水化合物復(fù)合物，例如羥乙基淀粉、葡聚糖；和纖維素，如羥丙甲纖維素和羥丙基纖維素。另外根據(jù)本發(fā)明，可以預(yù)期包括單糖和三糖的碳7jc化合物的組合物也是適當(dāng)?shù)奶妓衔?，并可起到減少差向異構(gòu)體生成的作用。本發(fā)明的酸和緩沖劑包括任何能將替加環(huán)素/適當(dāng)?shù)奶妓衔锶芤旱膒H調(diào)至約3.0-7.0、約4.0-5.0或約4.2-4.8的藥學(xué)上可接受的酸或緩沖劑。這些酸的示例包括但不限于鹽酸(包括l.ONHC1)、2，5-二羥基苯甲酸、乳酸、檸檬酸、乙酸和磷酸。適當(dāng)?shù)木彌_劑的示例包括琥珀酸鹽。本發(fā)明的化合物可以經(jīng)過許多可接受的方法制備。下面所述的方法是示例性的，不意味著對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。在本發(fā)明的一個(gè)方法中，將替加環(huán)素溶解在水中制成溶液。接著通過加入酸或緩沖劑調(diào)低溶液的pH。然后將適當(dāng)?shù)奶妓衔锶茉谌芤褐?，將溶液凍干，以生成凍干粉或凍干塊。替加環(huán)素可以與適當(dāng)?shù)奶妓衔锘旌?，并溶于水中。在溶液的pH調(diào)至酸性后，將溶液凍干，以生成凍干粉或凍干塊。本發(fā)明的溶液的凍干可以用任何藥學(xué)上可接受的方法完成。一經(jīng)凍干，本發(fā)明的組合物可以在如氮?dú)獾亩栊詺怏w環(huán)境下存放，以進(jìn)一步減慢降解過程，但是不同于當(dāng)前替加環(huán)素組合物，對(duì)于本發(fā)明上述低氧環(huán)境不是必須的。當(dāng)替加環(huán)素與適當(dāng)?shù)奶妓衔锘旌蠒r(shí)，可以使用充分溶解在水中的任何固體狀態(tài)形式的替加環(huán)素。上述固體狀態(tài)形式包括晶狀替加環(huán)素多晶型物、無(wú)定形形式和鹽。另外，當(dāng)制備用于凍干的本發(fā)明的替加環(huán)素溶液時(shí)，向含有替加環(huán)素的水溶液中加入足量的酸或緩沖劑，以獲得約3.0-7.0的pH,優(yōu)選約4.0-5.0,更優(yōu)選約4.2-4.8?？梢詫⒈景l(fā)明的組合物制成單劑量給藥的形式。在這一實(shí)施方案中，本發(fā)明的溶液凍干在單獨(dú)的管形瓶中，例如20ml管形瓶。一經(jīng)凍干，用任何藥學(xué)上可接受的塞子將管形瓶塞住。然后將塞口的管形皿送以使用。當(dāng)需要時(shí)，可向管形^入足量的稀釋劑進(jìn)行重構(gòu)，以得到所需濃度的替加環(huán)素。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易地確定重構(gòu)溶液的濃度?？梢允褂萌魏嗡帉W(xué)上可接受稀釋劑。這些稀釋劑的示例包括水、鹽水(例如0.9%鹽水)、乳酸鈉糾備(LactatedRinger，s)注射液和包含5%葡萄糖溶液(D5W)的葡萄糖溶液。然后，在混合前，本發(fā)明的重構(gòu)溶液可以以重構(gòu)狀態(tài)存放，這不同于當(dāng)前的組合物。可以在如靜脈袋中進(jìn)行混合。為制備混合液，將足量的重構(gòu)溶液在含有藥學(xué)上可接受稀釋劑(如鹽水溶液或如D5W的葡萄糖溶液)的靜脈袋中混合。本發(fā)明領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以很容易地確定混合液的濃度。本發(fā)明的組合物的混合時(shí)間可以大大長(zhǎng)于現(xiàn)有組合物的混合時(shí)間。一經(jīng)混合，該替加環(huán)素溶液可以用于患者給藥?；旌弦嚎梢詥为?dú)給藥或與另外的藥物制劑或組合物一起給藥。下面的六個(gè)實(shí)施例舉例說(shuō)明本發(fā)明的不同實(shí)施方案，M本發(fā)明沒有任何限制。每個(gè)實(shí)施例中都詳述了幾個(gè)實(shí)驗(yàn)，其包括將替加環(huán)素和碳水化合物一起溶于酸性7JC溶液中、凍干、用HPLC分析降解產(chǎn)物。每個(gè)實(shí)施例中的HPLCM基本上是相同的。伴隨實(shí)施例的表格反映了HPLC數(shù)據(jù)結(jié)果，其顯示氧化降解產(chǎn)物(表中標(biāo)識(shí)為相對(duì)保留時(shí)間(RRT)0.5/MW601和0.55/MW583)、差向異構(gòu)體(RRT0.74/MW585)和各種條件下的替加環(huán)素的總量(表中標(biāo)識(shí)為"替加環(huán)素")。在許多情況下，在將溶液凍干后，將它們放置在40'C和75%相對(duì)濕度的加速穩(wěn)定性條件下。這些M是用于模擬在常規(guī)貨架條件下的長(zhǎng)期存放影響的工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。在實(shí)施例1中，將替加環(huán)素、乳糖和l.ON鹽酸的溶液凍干，得到的凍干塊在40"C和75%相對(duì)濕度的穩(wěn)定性室中放置25天。在25天末，用HPLC對(duì)凍干塊進(jìn)行分析以鑒定降解產(chǎn)物。在實(shí)施例2a中對(duì)一類似的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了詳述。其中，在40"和75%相對(duì)濕度下存放39天后，用HPLC對(duì)凍干塊進(jìn)行分析。將兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中的樣品塊重構(gòu)至D5W(5。/。葡萄糖溶液)中，在HPLC分析前，將由剩余的凍干塊得來(lái)的樣品立即重構(gòu)至鹽水中。在實(shí)施例2b中，在將凍千塊強(qiáng)置于實(shí)施例2a的條件后，將幾塊凍干塊重構(gòu)至0.9%鹽水中，并在溶液中保存6小時(shí)。其它凍干塊重構(gòu)至葡萄糖溶液中。在6小時(shí)末，用HPLC對(duì)如表2b中所標(biāo)識(shí)的一些上述溶液樣品進(jìn)行觀'J試。實(shí)施例2c顯示了對(duì)混合溶液的穩(wěn)定性測(cè)試。在這些溶液中，實(shí)施例2b中的重構(gòu)溶液在約10mg/mL濃度下保存6小時(shí)，然后稀釋至約lmg/mL(替加環(huán)素的典型靜脈使用濃度)，在用HPLC進(jìn)行分析前保持18小時(shí)(表2c)。在實(shí)施例3中，用2，5-二羥基苯甲酸而不是鹽酸降低替加環(huán)素凍干前溶液的pH。一經(jīng)凍干，將凍干塊在45t:和75。/。相對(duì)濕度下強(qiáng)置(stressed)48小時(shí)，然后用HPLC進(jìn)行分析。實(shí)施例4的樣品顯示乳糖變?yōu)槠渌妓衔飼r(shí)對(duì)差向異構(gòu)體生成的影響和制備凍干前的替加環(huán)素溶液時(shí)的替加環(huán)素回收率。在實(shí)施例4a、4b和4c的每一實(shí)施例中，制備并凍干經(jīng)標(biāo)明的溶液。根據(jù)在實(shí)施例4a-4c中提供的M并考慮溶液，將每一凍干塊進(jìn)行強(qiáng)置并用HPLC分析。在實(shí)施例5中，將保持時(shí)間(混合和凍干之間的時(shí)間)及替加環(huán)素和乳糖的加料順序作為差向異構(gòu)體生成和替加環(huán)素回收率的影響因素進(jìn)行研究。一旦將塊凍干后，在進(jìn)行HPLC分析前，將它們?cè)?0匸和75%相對(duì)濕度下強(qiáng)置48天。HPLC數(shù)據(jù)的總結(jié)顯示在表5中。在實(shí)施例6的實(shí)驗(yàn)中，乳糖與替加環(huán)素的比例是變化的。當(dāng)制備待凍干的溶液時(shí)，改變?nèi)樘桥c替加環(huán)素的比例。在表6的第一列中報(bào)告了質(zhì)量比。接著將溶液(其中每一溶液的pH約為5.0)凍千，得到的塊在40"C和75。/。相對(duì)濕度下強(qiáng)置20天，并用HPLC分析。實(shí)施例1將替加環(huán)素(1880mg)溶于75mlMilli-Q水中制成本體溶液。將一份含有約100mg替加環(huán)素的上述本體溶液溶解到含有200mg的乳糖單水合物的20ml管形瓶中。將另一份含有藥100mg替加環(huán)素的本體溶液置于空的20ml樣品瓶中。這兩種溶液都沒有進(jìn)行pH調(diào)節(jié)。接著將上述溶液凍干。加入1.0NHC1將余下的本體溶液的pH降低至約6.0。一旦pH到約6.0，將一份含有約100mg替加環(huán)素的本體溶液加入到含有約200mg的乳糖單水合物的20ml樣品瓶中，將得到的溶液凍干。剩余的本體溶液用1.0NHC1處理，直到pH約為5.5，在此pH下將來(lái)自本體溶液的約100mg替加環(huán)素轉(zhuǎn)移至含有200mg的乳糖單水合物的20ml管形瓶中。溶解后，將溶液凍干。類似地，在約5.0和約4.5pH下，將含有約IOOmg替加環(huán)素和約200mg乳糖的溶液的20ml樣品瓶準(zhǔn)備好。在約4.5pH下制備不含乳糖的另一溶液樣品。在每種情況下，接著將溶液凍干。所有的凍干是對(duì)用干冰和丙酮在-70。C冷凍的溶液進(jìn)行的。將凍干樣品在40'C/75。/。/RH的室中放置25天。然后，用HPLC分析樣品，結(jié)果的總結(jié)在下面表l中顯示，其反映了每個(gè)測(cè)試的凍干塊的主要降解產(chǎn)物。表中所列的全部6個(gè)主要降解產(chǎn)物的總和并不等于100%,因?yàn)椴皇撬械慕到猱a(chǎn)物都列在此表中。在實(shí)施例1和實(shí)施例5中測(cè)試的凍干塊中的7個(gè)是本發(fā)明的組合物，前兩個(gè)(沒有調(diào)節(jié)pH的替加環(huán)素自身和沒有調(diào)節(jié)pH的替加環(huán)素和乳糖)是對(duì)照。從這些實(shí)施例中可知，本發(fā)明的組合物的優(yōu)點(diǎn)是顯而易見的。例如，在約4.5pH下制備的不含乳糖的組合物中，測(cè)定到替加環(huán)素只有74.10%，巧其差向異構(gòu)體所占量為23.51%。比較而言，含有乳糖的pH4.5'樣品只含有2.53%的差向異構(gòu)體，并且含有97.17%的替加環(huán)素。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>ND-沒有測(cè)定;MW為分子量；RRT指相對(duì)替加環(huán)素的相又、^留時(shí)間。實(shí)施例22a.替加環(huán)素(1700mg)溶于85mlMilli-Q水中制成本體溶液。在約5.2、5.0、4.8和3.0pH值下制4^有約100mg替加環(huán)素和約200mg乳糖單水合物的溶液，其制備方法與實(shí)施例1中制備替加環(huán)素/乳糖/HCl溶液的方法相同。pH約4.5的替加環(huán)素和乳糖、溶液得以制備，其制備方法包括向pH3.0的本體溶液中加入1.0NNaOH，接著將一份含有約100mg替加環(huán)素的本體溶液溶解到含有約200mg乳糖單水合物的20ml管形瓶中。將所有樣品凍干(用Virtis公司的Advantage凍干機(jī)冷凍至-50。C)。將凍千樣品在40。C/75。/。RH的室中放置39天，分成小份并用HPLC分析。數(shù)據(jù)在表2a中顯示。2b.在39天末，用0.9%NaCl將實(shí)施例2a中的凍干塊重構(gòu)至替加環(huán)素濃度為10mg/ml，在室溫下保持6小時(shí)。pH約5.0和約4.5的等分溶液用5%葡萄糖溶液而不是用鹽水重構(gòu)至約10mg/ml濃度，并在室溫下保持6小時(shí)。然后，對(duì)每一樣品用HPLC分析，結(jié)果顯示在表2b中。數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的組合物在6小時(shí)中阻緩了重構(gòu)溶液中差向異構(gòu)體生成。實(shí)際上，這些樣品中的任一樣品的差向異構(gòu)體最大含量?jī)H為2.45%，而替加環(huán)素的最小含量為97.1%。在一個(gè)pH約為4.5并且稀釋劑為鹽水的實(shí)施方案中，在6小時(shí)重構(gòu)期末，僅有1.60%的差向異構(gòu)體存在。在此實(shí)施方案中，測(cè)定的替加環(huán)素的量為98.15%，在某些應(yīng)用中，這對(duì)于醫(yī)院4吏用U夠純的。2c.替加環(huán)素的混合溶液(lmg/ml)是用0.9%NaCl或5。/。葡萄糖溶液(根據(jù)重構(gòu)所用稀釋劑選用)稀釋重構(gòu)溶液而制得。然后，將溶液在室溫下保持18小時(shí)，并用HPLC進(jìn)行分析。結(jié)果總結(jié)在表2c中。從重構(gòu)到混合，含有乳糖而不含葡萄糖的pH約為4.5的樣品的差向異構(gòu)體濃度從1.60%只增加到1.80%,而該樣品的替加環(huán)素的總含量從98.15%僅略微減少到97.97%。上述pH4.5的樣品的結(jié)果說(shuō)明凍干塊在加速穩(wěn)定性條件下存放39天，接著重構(gòu)6小時(shí)并混合18小時(shí)后仍是足夠穩(wěn)定的。表2a<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表2C<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)施例3替加環(huán)素(700mg)溶于28mlMiUi-Q水中制成本體溶液。將一份含有約100mg替加環(huán)素的本體溶液裝入20ml管形瓶中作為對(duì)照樣品。除了使用2,5-二羥基苯甲酸而不是1.0N鹽酸降低本體溶液的pH外，根據(jù)實(shí)施例1的方法，在pH約5.8、5.1和4.5下制備替加環(huán)素、乳糖和酸的溶液樣品。制備了另外兩個(gè)不含乳糖的替加環(huán)素溶液樣品，一個(gè)pH約為5.1，另一個(gè)pH約為4.5。所有樣品在-70'C下冷凍(用干水和丙酮)，并凍干。凍干的樣品在40°C/75%RH的室中放置48天，并用HPLC進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)總結(jié)在表3中，并且其表明該組合物根據(jù)本發(fā)明起到減少降解的作用。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實(shí)施例44a.替加環(huán)素(1600mg)溶于64mlMilli-Q水中制成本體溶液，將由該溶液制得的樣品(每個(gè)樣品含有約100mg替加環(huán)素)分別^到各自含有160mg乳糖單水合物和160mg甘露醇的兩個(gè)20ml樣品瓶中。將含有約100mg替加環(huán)素的由本體溶液制得的另一樣品裝入空的20ml管形瓶中。接著用1.0NHC1通過實(shí)施例1中所述方法將剩余的本體溶液的pH調(diào)至約7.0、6.5和6.0。在每個(gè)pH下，將每個(gè)含有約IOOmg替加環(huán)素的樣品溶液裝入含有160mg的乳糖單7jc合物、160mg甘露醇或不含兩者的20ml管形瓶中。將得到的溶液凍干(用干水和丙酮冷凍至-70'C)。凍干樣品在4(TC的烘箱中放置70小時(shí)，然后用HPLC進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)總結(jié)在表4a中。4b,替加環(huán)素(1800mg)溶于72mlMilli-Q水中制成本體溶液。將一份含有約100mg替加環(huán)素的本體溶液^JV分別含有約200mg乳糖單水合物、200mg果糖和200mg蔗糖的三個(gè)分開的20ml管形瓶中。接著用1.0NHC1通過實(shí)施例1中所述方法將本體溶液的pH調(diào)至約6.0和5.4。在每個(gè)pH值下，將含有約100mg替加環(huán)素的等分溶液^含有200mg下面碳7jc化合物之一的20ml管形瓶中并溶解，碳水化合物包括乳糖單水合物、果糖或蔗糖。也制備了每個(gè)pH下的無(wú)碳7JC化合物的溶液。將上述溶液凍干(用干水和丙酮在-70'C下冷凍)。凍干的樣品在40'C烘箱中放置89小時(shí)，并用HPLC進(jìn)行分析。結(jié)果總結(jié)在表4b中。4c.替加環(huán)素(IOOOmg)溶于50mlMilli-Q水中制成本體溶液。用1.0NHC1將本體溶液的pH調(diào)至約5.0。將每份含有約100mg替加環(huán)素的四份本體溶g入分別含有約200mg葡萄糖、甘露糖、核糖和木糖的20ml管形瓶中并加以溶解。將含有約100mg替加環(huán)素的另一份本體溶液^A含有約125mg蘇糖的20ml管形瓶中并溶解。將全部五個(gè)溶液凍干(用Virtis公司的Advantage凍千WE-50。C冷凍)。凍干的樣品在25。C/60°/。RH室中放置42天，并用HPLC進(jìn)行分析。結(jié)果總結(jié)在表4c中。表4a-4c中的數(shù)據(jù)用以舉例說(shuō)明如乳糖的適當(dāng)碳7jc化合物對(duì)本發(fā)明的影響。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表4b<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實(shí)施例55a.將替加環(huán)素(1000mg)溶于40mlMHU-Q水中制成本體溶液。用1.0NHC1將本體溶液的pH調(diào)至約5.0。在此pH下，將每份含有約100mg替加環(huán)素的兩份本體溶液分別^/v每瓶含有約200mg乳糖單水合物的兩個(gè)20ml管形瓶中。立即將一個(gè)樣品冷凍至-70。C(用干冰和丙酮)，另一個(gè)樣品在冷凍前在室溫下放置5小時(shí)。接著將冷凍的樣品凍千。凍干的樣品在40。C/75%RH室中放置48天，并用HPLC進(jìn)行分析。結(jié)果總結(jié)在表5中，表示為"A"樣品。5b.將乳糖單7jc合物(750mg)溶于15mlMilli-Q水中。將替加環(huán)素(375mg)加入到該溶液中，用1.0NHCl調(diào)節(jié)pH至約5.0。在此pH下，將每份含有約100mg和約200mg乳糖單水合物的兩份得自上述溶液的溶液分別裝入兩個(gè)20ml管形瓶中。立即將一個(gè)樣品瓶中的溶液在-70'C下冷凍(用干冰和丙酮)。另一個(gè)樣品瓶中的溶液冷凍前在室溫下放置5小時(shí)。將冷凍的樣品凍千。凍干的樣品在40。C/75。/。RH室中放置48天，并用HPLC進(jìn)行分析。結(jié)果總結(jié)在表5中，表示為"B"樣品。"A"數(shù)據(jù)和"B"數(shù)據(jù)舉例說(shuō)明本發(fā)明的組合物可減少降解產(chǎn)物。表5差向樣品！DRRT0.50.55異構(gòu)體0.741.251.67替加環(huán)素MW601583585528556585A(乳糖溶解至0.010.023.180.010.0296.57替加環(huán)素中)B(替加環(huán)素0.000.023.32ND0.0196.43溶解至乳糖中)冷凍前將A在室溫下放置5小時(shí)0.010.035.670.020.0294.03冷凍前將B在室溫下放置5小時(shí)0.010.023.82ND0.0295.86實(shí)施例66a.將替加環(huán)素(1700mg)溶于85mlMiUi-Q水中制成本體溶液。用1.0NHC1將本體溶液的pH調(diào)至約5.0。將每份含約100mg替加環(huán)素的四份本體溶液分別裝入分別含有約50mg、100mg、200mg和300mg乳糖單水合物的四個(gè)20ml管形瓶中。一旦乳糖完全溶解，立即將樣品凍干(用Virtis公司的Advantage凍干機(jī)在-50'C冷凍)。凍干的樣品在40。C/75%RH室中放置4天，并用HPLC進(jìn)行分析。結(jié)果總結(jié)在表6a中，并給出本發(fā)明組合物的實(shí)例。6b.將替加環(huán)素(400mg)溶于20mlMilli-Q水中制成本體溶液。用1.0NHC1將本體溶液的pH調(diào)至約5.0。將每份含約100mg替加環(huán)素的三份本體溶液分別^V分別含有約15mg、31mg和62m乳糖單水合物的三個(gè)20ml管形瓶中。一經(jīng)溶解，立即將樣品凍干(用Virtis公司的Advantage凍干機(jī)在-50。C冷凍)。凍干的樣品在40°C/75%RH室中放置20天，并用HPLC進(jìn)行分析。結(jié)果總結(jié)在表6a中，并展示了本發(fā)明的組合物。表6a<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>權(quán)利要求1.組合物，該組合物包含替加環(huán)素、至少一種適當(dāng)?shù)奶妓衔镆约八峄蚓彌_劑。2.權(quán)利要求l的組合物，其中適當(dāng)?shù)奶妓衔镞x自乳糖、甘露糖、蔗糖和葡萄糖。3.權(quán)利要求2的組合物，其中適當(dāng)?shù)奶妓衔餅槿樘恰?.根據(jù)權(quán)利要求1-3中的任何一項(xiàng)的組合物，其中組合物是凍干的。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中的任何一項(xiàng)的組合物，該組合物還包括藥學(xué)上可接受稀釋劑。6.權(quán)利要求5的組合物，其中藥學(xué)上可接受稀釋劑為鹽水、乳酸鈉林格注射液或葡萄糖溶液。7.權(quán)利要求5的組合物，其中組合物的pH為約3.0至約7.0。8.權(quán)利要求7的組合物，其中組合物的pH為約4.0至約5.0。9.權(quán)利要求8的組合物，其中組合物的pH為約4,2至約4.8。10.權(quán)利要求1-9中的任何一項(xiàng)的組合物，其中酸為1.0NHC1。11.權(quán)利要求l-9中的任何一項(xiàng)的組合物，其中酸為2，5-二羥基笨甲酸。12.制備替加環(huán)素組合物的方法，該方法包括將至少一種適當(dāng)?shù)挠糜跍p少差向異構(gòu)化的碳水化合物與替加環(huán)素和水混合以形成溶液；用酸或緩沖劑降低溶液的pH以減少氧化降解；并凍干溶液至干燥。13.權(quán)利要求12的方法，其中適當(dāng)?shù)挠糜跍p少差向異構(gòu)化的碳水化合物選自乳糖、甘露糖、蔗糖和葡萄糖。14.權(quán)利要求13的方法，其中適當(dāng)?shù)挠糜跍p少差向異構(gòu)化的碳水化合物為乳糖。15.權(quán)利要求13的方法，該方法還包括將由凍干溶液至干燥得到的組合物與鹽水、乳酸鈉休格注射液或葡萄糖溶液混合。16.權(quán)利要求12-15中的任何一項(xiàng)的方法，其中用酸或緩沖劑將溶液pH降低到約3.0至約7.0。17.權(quán)利要求16的方法，其中將溶液pH降低到約4.0至約5.0。18.權(quán)利要求17的方法，其中將溶液11降低到約4.2至約4.8。19.如權(quán)利要求12-18的任何一項(xiàng)中要求保護(hù)的方法，其中酸是1.0NHC1。20.如權(quán)利要求12-18的任何一項(xiàng)中要求保護(hù)的方法，其中^A2，5-二羥基苯甲酸。21.藥物組合物，該藥物組合物包含替加環(huán)素、適當(dāng)?shù)奶妓衔镆约八峄蚓彌_劑。22.權(quán)利要求21的組合物，其中適當(dāng)?shù)奶妓衔餅槎腔蛉┨菃翁恰?3.制備替加環(huán)素藥物組合物的方法，該方法包括將適當(dāng)?shù)奶妓衔锱c替加環(huán)素和水混合以形成溶液；用酸或緩沖劑降低溶液的pH;并凍干-溶液至干燥。24.權(quán)利要求23的方法，其中適當(dāng)?shù)奶妓衔餅槎腔蛉┨菃翁?。全文摘要本發(fā)明涉及固體狀態(tài)和液態(tài)狀態(tài)下穩(wěn)定性提高的新的替加環(huán)素組合物和制備這些組合物的方法。這些組合物包含替加環(huán)素、適當(dāng)?shù)奶妓衔镆约八峄蚓彌_劑。文檔編號(hào)A61K31/65GK101132775SQ200680006447公開日2008年2月27日申請(qǐng)日期2006年3月13日優(yōu)先權(quán)日2005年3月14日發(fā)明者M(jìn)·B·法沃茲,S·M·夏,朱天民申請(qǐng)人:惠氏公司