專利名稱：一種四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
磷灰石是骨和牙齒的主要無機(jī)成分，具有良好的生物活性和生物相容性，已在臨床上得到廣泛應(yīng)用。由于納米材料的獨(dú)特性能，磷灰石納米粒子也成為研究的重點(diǎn)，特別是磷灰石納米粒子作為藥物或基因載體材料以及它本身與細(xì)胞的相互作用已引起人們廣泛關(guān)注。但是，不論是作為藥物或基因載體材料，還是與細(xì)胞的相互作用，都需要對磷灰石納米粒子本身進(jìn)行檢測和研究，使其帶上熒光信號(hào)利用熒光顯微鏡進(jìn)行檢測是一種簡便的方法，這樣可以研究磷灰石納米粒子與細(xì)胞的結(jié)合狀態(tài)、在細(xì)胞內(nèi)的分布情況以及在體內(nèi)的代謝情況。目前，已有采用熒光蛋白或摻雜稀土元素使磷灰石納米粒子帶上熒光信號(hào)，但是熒光蛋白的高價(jià)格以及獲得稀土摻雜磷灰石納米粒子的復(fù)雜工藝勢必會(huì)影響它們的應(yīng)用。因此，有必要探尋一種價(jià)格低廉、制備工藝簡單的方法來對磷灰石納米粒子進(jìn)行熒光標(biāo)記。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子及其制備方法和應(yīng)用。所述四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子具有成本低廉，其作為一種熒光探針可以應(yīng)用于研究磷灰石納米粒子與細(xì)胞的結(jié)合狀態(tài)、在細(xì)胞內(nèi)的分布情況和在體內(nèi)的代謝情況以及細(xì)胞檢測。所述四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子的制備方法工藝簡單，易于推廣。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用以下的技術(shù)方案本發(fā)明提供的四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，四環(huán)素濃度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之間，當(dāng)四環(huán)素濃度在上述區(qū)間變化時(shí)其粒徑分布在22.9～307.9nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑在78.6nm至84.9nm之間變化，在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在484nm至531nm之間，在熒光顯微鏡下可看到明顯的黃綠色熒光。
上述的四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，其制備方法是采用超聲波輔助沉淀法，并添加熒光試劑四環(huán)素及穩(wěn)定劑，然后采用冷凍干燥法干燥獲得粉體，保存?zhèn)溆谩?br> 上述的四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，其在研究磷灰石納米粒子與細(xì)胞的結(jié)合狀態(tài)、在細(xì)胞內(nèi)的分布情況和在體內(nèi)的代謝情況中的應(yīng)用，以及作為一種熒光探針在細(xì)胞檢測中的應(yīng)用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下的主要優(yōu)點(diǎn)其一.采用超聲波輔助沉淀法，可以使磷灰石納米粒子達(dá)到均勻分散，防止團(tuán)聚；穩(wěn)定劑可以使磷灰石納米粒子表面電位值增加處于穩(wěn)定狀態(tài)。兩者結(jié)合可以保證獲得穩(wěn)定的熒光標(biāo)記磷灰石納米粒子體系，四環(huán)素結(jié)合到磷灰石納米粒子表面使其具有熒光信號(hào)。
其二.冷凍干燥法是在真空條件下，使水升華，達(dá)到干燥目的，可以防止粒子團(tuán)聚。
其三.本標(biāo)記方法，其過程簡單易控，安全無污染，原材料價(jià)格低廉、易得。
其四.本方法所制得的熒光標(biāo)記磷灰石納米粒子，四環(huán)素濃度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之間，當(dāng)四環(huán)素濃度在上述區(qū)間變化時(shí)其粒徑分布在22.9～307.9nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑在78.6nm至84.9nm之間變化，在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在484nm至531nm之間，在熒光顯微鏡下可看到明顯的黃綠色熒光。
其五.應(yīng)用廣作為一種熒光探針，可以應(yīng)用于研究磷灰石納米粒子與細(xì)胞的結(jié)合狀態(tài)、在細(xì)胞內(nèi)的分布情況和在體內(nèi)的代謝情況以及細(xì)胞檢測。
總之，本發(fā)明制備工藝簡單，成本低廉，應(yīng)用廣，易于推廣。


圖1四環(huán)素濃度為5×10-5mol/L時(shí)四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子的粒度分布曲線。
圖2四環(huán)素濃度為5×10-5mol/L時(shí)四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子的熒光顯微鏡照片。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供的四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，四環(huán)素濃度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之間，當(dāng)四環(huán)素濃度在上述區(qū)間變化時(shí)其粒徑分布在22.9～307.9nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑在78.6nm至84.9nm之間變化，在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在484nm至531nm之間，在熒光顯微鏡下可看到明顯的黃綠色熒光。
本發(fā)明提供的上述四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，其制備方法是通過超聲波輔助沉淀法，并添加熒光試劑四環(huán)素及穩(wěn)定劑，然后采用冷凍干燥法干燥獲得，保存?zhèn)溆谩?br> 本發(fā)明提供的上述四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，其在研究磷灰石納米粒子與細(xì)胞的結(jié)合狀態(tài)、在細(xì)胞內(nèi)的分布情況和在體內(nèi)的代謝情況中的應(yīng)用，以及作為一種熒光探針在細(xì)胞檢測中的應(yīng)用。
下面結(jié)合具體實(shí)例和附圖對本發(fā)明的制備方法作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1按Ca/P摩爾比為1.67將Ca(OH)2飽和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下攪拌反應(yīng)15min，然后常溫?cái)嚢?0min得白色膠狀沉淀，將該沉淀陳化1h后，向該體系中加入四環(huán)素，四環(huán)素濃度為0.15625×10-5mol/L，攪拌1h，加入穩(wěn)定劑粘多糖(濃度為3～5mg/ml)后超聲波分散30min，形成穩(wěn)定的納米粒子分散體系，再經(jīng)冷凍干燥得到四環(huán)素標(biāo)記的磷灰石納米粒子，保存?zhèn)溆?。其粒徑分布?2.9nm-295.0nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑為78.6nm；在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在484nm，在熒光顯微鏡下發(fā)出黃綠色熒光。
實(shí)施例2按Ca/P摩爾比為1.67將Ca(OH)2飽和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下攪拌反應(yīng)15min，然后常溫?cái)嚢?0min得白色膠狀沉淀，將該沉淀陳化1h后，向該體系中加入四環(huán)素，四環(huán)素濃度為1.25×10-5mol/L，攪拌1h，加入穩(wěn)定劑粘多糖(濃度為3～5mg/ml)后超聲波分散30min，形成穩(wěn)定的納米粒子分散體系，再經(jīng)冷凍干燥得到四環(huán)素標(biāo)記的磷灰石納米粒子，保存?zhèn)溆?。其粒徑分布?3.8nm-307.9nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑為81.9nm；在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在516nm，在熒光顯微鏡下發(fā)出黃綠色熒光。
實(shí)施例3按Ca/P摩爾比為1.67將Ca(OH)2飽和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下攪拌反應(yīng)15min，然后常溫?cái)嚢?0min得白色膠狀沉淀，將該沉淀陳化1h后，向該體系中加入四環(huán)素，四環(huán)素濃度為5×10-5mol/L，攪拌1h，加入穩(wěn)定劑粘多糖(濃度為3～5mg/ml)后超聲波分散30min，形成穩(wěn)定的納米粒子分散體系，再經(jīng)冷凍干燥得到四環(huán)素標(biāo)記的磷灰石納米粒子，保存?zhèn)溆?。其粒徑分布?5.2nm-304.6nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑為83.9nm，粒度分布曲線如圖1所示；在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在530nm，在熒光顯微鏡下發(fā)出黃綠色熒光，熒光顯微鏡照片如圖3所示。
實(shí)施例4按Ca/P摩爾比為1.67將Ca(OH)2飽和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下攪拌反應(yīng)15min，然后常溫?cái)嚢?0min得白色膠狀沉淀，將該沉淀陳化1h后，向該體系中加入四環(huán)素，四環(huán)素濃度為10.0×10-5mol/L，攪拌1h，加入穩(wěn)定劑粘多糖(濃度為3～5mg/ml)后超聲波分散30min，形成穩(wěn)定的納米粒子分散體系，再經(jīng)冷凍干燥得到四環(huán)素標(biāo)記的磷灰石納米粒子，保存?zhèn)溆谩Ｆ淞椒植荚?7nm-284.1nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑為84.2nm；在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在530nm，在熒光顯微鏡下發(fā)出黃綠色熒光。
實(shí)施例5按Ca/P摩爾比為1.67將Ca(OH)2飽和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下攪拌反應(yīng)15min，然后常溫?cái)嚢?0min得白色膠狀沉淀，將該沉淀陳化1h后，向該體系中加入四環(huán)素，四環(huán)素濃度為20.0×10-5mol/L，攪拌1h，加入穩(wěn)定劑粘多糖(濃度為3～5mg/ml)后超聲波分散30min，形成穩(wěn)定的納米粒子分散體系，再經(jīng)冷凍干燥得到四環(huán)素標(biāo)記的磷灰石納米粒子，保存?zhèn)溆?。其粒徑分布?8.3nm-275nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑為84.9nm；在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在531nm，在熒光顯微鏡下發(fā)出黃綠色熒光。
權(quán)利要求
1.一種四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，其特征在于所述四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，四環(huán)素濃度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之間，當(dāng)四環(huán)素濃度在上述區(qū)間變化時(shí)其粒徑分布在22.9～307.9nm之間，光強(qiáng)度平均粒徑在78.6nm至84.9nm之間變化，在385nm處激發(fā)時(shí)，最大發(fā)射峰在484nm至531nm之間，在熒光顯微鏡下可看到明顯的黃綠色熒光。
2.一種四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子的制備方法，其特征在于采用超聲波輔助沉淀法，并添加熒光試劑四環(huán)素及穩(wěn)定劑，然后采用冷凍干燥法干燥，獲得權(quán)利要求1所述的熒光標(biāo)記的磷灰石納米粒子，保存?zhèn)溆谩?br> 3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子的方法，其特征在于按Ca/P摩爾比為1.67將Ca(OH)2飽和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下攪拌反應(yīng)15min，然后常溫?cái)嚢?0min得白色膠狀沉淀，將該沉淀陳化1h后，向該體系中加入四環(huán)素，四環(huán)素濃度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之間，攪拌1h，加入穩(wěn)定劑粘多糖后超聲波分散30min，形成穩(wěn)定的納米粒子分散體系，再經(jīng)冷凍干燥得到四環(huán)素標(biāo)記的磷灰石納米粒子，保存?zhèn)溆谩?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子的方法，其特征在于穩(wěn)定劑粘多糖的濃度為3～5mg/ml。
5.權(quán)利要求1所述的四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子，其在研究磷灰石納米粒子與細(xì)胞的結(jié)合狀態(tài)、在細(xì)胞內(nèi)的分布情況和在體內(nèi)的代謝情況中的應(yīng)用，以及作為一種熒光探針在細(xì)胞檢測中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及四環(huán)素標(biāo)記磷灰石納米粒子及其制備方法和應(yīng)用。這種四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記的磷灰石納米粒子，四環(huán)素濃度為0.15625×10
文檔編號(hào)A61L27/50GK1927412SQ200610124640
公開日2007年3月14日 申請日期2006年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月28日
發(fā)明者韓穎超, 馬雄華, 李世普, 劉靜霆, 王欣宇, 戴紅蓮, 陳曉明, 袁琳 申請人:武漢理工大學(xué)