專(zhuān)利名稱(chēng)：一種垂盆草及其制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及垂盆草及其制劑的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法是針對(duì)垂盆草成份而制定的含量測(cè)定方法，適用于垂盆草藥材的質(zhì)量控制，也適用于由單味垂盆草制成的顆粒劑、片劑、膠囊劑和注射劑等劑型的質(zhì)量控制，還可用于含垂盆草藥材的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肝炎是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病，尤其是病毒性肝炎在我國(guó)流行較為廣泛。乙型肝炎病毒攜帶率為9.75％，其中約1.2億人長(zhǎng)期攜帶乙型肝炎病毒。每年死于乙型肝炎相關(guān)的肝病人數(shù)約28萬(wàn)例。根據(jù)20世紀(jì)90年代調(diào)查結(jié)果顯示，丙型肝炎病毒感染人數(shù)達(dá)3800萬(wàn)例。肝炎正日益威脅著大眾的健康。
現(xiàn)代臨床常采用聯(lián)苯雙酯和齊墩果酸等藥物治療，前者降酶效果較明顯，但對(duì)肝細(xì)胞膜的保護(hù)作用差，且停藥易反跳并對(duì)肝細(xì)胞有損害作用。急慢性肝炎患者通常均有濕熱，特別是慢性肝炎，更是濕熱久蘊(yùn)，垂盆草清熱利濕，可抑制炎性滲出，修復(fù)損傷的肝細(xì)胞，具有降酶護(hù)肝的作用。因此在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，發(fā)揚(yáng)中醫(yī)藥傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)，研究制劑穩(wěn)定、用藥安全、質(zhì)量可控、療效可靠、價(jià)格低廉的保肝藥具有重要的意義。
中藥垂盆草為景天科植物垂盆草Sedum sarmentosum Bunge的新鮮或干燥全草。其制劑如顆粒劑、膠囊劑等具有清利濕熱的功效，用于急性肝炎，遷移肝炎及慢性肝炎活動(dòng)期的治療?，F(xiàn)代研究表明，垂盆草的化學(xué)成分主要為黃酮及其苷、三萜、甾醇、生物堿、氰苷等成分等(任風(fēng)霞，趙毅民．垂盆草化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展．現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2003，17(1)58～60)。對(duì)于垂盆草藥材及其制劑，至今沒(méi)有很好的質(zhì)量控制方法，其質(zhì)量不可控，療效不穩(wěn)定。因此需要通過(guò)建立含量測(cè)定方法及其定性鑒別方法，使垂盆草從藥材到制劑的質(zhì)量得到控制，從而保證用藥原料及制劑的均一性與有效性，確保制劑的藥效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種垂盆草及其制劑的質(zhì)量控制方法，用于檢測(cè)其臨床用原料藥材以及由垂盆草原料制成的垂盆草顆粒、垂盆草片、垂盆草膠囊和注射劑等劑型的質(zhì)量控制，該方法也可用于其復(fù)方制劑中垂盆草成分的質(zhì)量控制。
本發(fā)明方法的特點(diǎn)是針對(duì)樣品含有以槲皮素為苷元的黃酮苷類(lèi)成分可水解生成苷元槲皮素的原理，將樣品水解后用HPLC法測(cè)定槲皮素的含量。
與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在，本發(fā)明提供了垂盆草藥材及其制劑的含量測(cè)定方法，提高了藥物的質(zhì)量控制水平，確保了制劑質(zhì)量的均一性和療效的穩(wěn)定性。
具體的垂盆草藥材及其制劑的質(zhì)量控制方法可以通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)將樣品中黃酮苷水解成苷元槲皮素，再用HPLC法測(cè)定槲皮素含量，其方法為a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測(cè)波長(zhǎng)370±2nm；柱溫20～35℃；流動(dòng)相為甲醇-酸水、乙腈-酸水和甲醇-乙腈-酸水中的任一種；理論塔板數(shù)以槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；b.對(duì)照品溶液的制備取干燥至恒重的槲皮素適量，精密稱(chēng)定，加溶劑制成1ml含6～60μg的對(duì)照品溶液；c.供試品溶液的制備取樣品1～6重量份，精密稱(chēng)定，加入提取溶劑50重量份，稱(chēng)重，回流或超聲提取，冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，取續(xù)濾液25重量份，加入酸水2～18重量份，加熱回流水解，冷卻，水解溶液用堿溶液調(diào)整PH值至3～7，提取溶劑定容至50重量份，搖勻，取樣，過(guò)膜，即得；d.測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液5～10μL，注入液相色譜儀測(cè)定；上述色譜條件流動(dòng)相的數(shù)值范圍可選取甲醇-酸水(36～50∶64～50)、乙腈-酸水(20～35∶80～65)和甲醇-乙腈-酸水(15～35∶15～5∶70～60)中的任一種、優(yōu)選甲醇-酸水(45∶55)、乙腈-酸水(28∶72)和甲醇-乙腈-酸水(27∶10∶63)中的任一種；酸水可以是濃度為0.02-0.2％的冰醋酸水溶液、三氟乙酸水溶液和磷酸水溶液中的任一種；對(duì)照品溶液的制備中槲皮素對(duì)照品可選用甲醇、乙腈和流動(dòng)相中的任一種制成每1ml含6～60μg的溶液；供試品制備，樣品可取1～6g，40～90％的甲醇或乙醇50ml提取，提取時(shí)間在0.2～2小時(shí)，酸水解時(shí)，酸用量可以為2～18ml，酸水可以為濃度為5～35％的鹽酸、硫酸及磷酸水溶液中的任一種，水解時(shí)間30～80分鐘；分別密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶5～10μl，注入液相色譜儀測(cè)定。


圖1 槲皮素對(duì)照品色譜圖，圖中流動(dòng)相為甲醇∶0.1％三氟乙酸水(55∶45)。
圖2 垂盆草藥材中槲皮素含測(cè)圖，流動(dòng)相為甲醇∶0.1％三氟乙酸水(45∶55)。
圖3 垂盆草膠囊中槲皮素含測(cè)圖，流動(dòng)相為甲醇∶0.1％三氟乙酸水(45∶55)。
圖4 復(fù)方矮地茶垂盆草顆粒中槲皮素含測(cè)圖，流動(dòng)相為甲醇∶0.1％三氟乙酸水(45∶55)具體實(shí)施方式
實(shí)施例1垂盆草顆粒(泡騰、無(wú)糖型)的制備取鮮垂盆草加水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，減壓濃縮至相對(duì)密度1.24(60～65℃)的清膏。加一倍量92％乙醇，攪勻，靜置8～12小時(shí)。吸取上清液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.36～1.38(60～65℃)的浸膏。取浸膏一份、聚乳糖1.2份、水適量，混勻，噴霧干燥，噴干粉與碳酸氫鈉0.3份、碳酸鈉0.6份、檸檬酸粉0.9份、聚乳糖1.0份、阿斯巴甜適量，干式制粒，整粒，分裝，即得。
實(shí)施例2垂盆草膠囊的制備取鮮垂盆草，清洗，加4倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.24(60～65℃)的清膏。加一倍量92％乙醇，攪勻，靜置8～12小時(shí)。吸取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度1.10～1.12(55～60℃)的清膏，噴霧干燥(進(jìn)風(fēng)口溫度160℃，出風(fēng)口溫度90℃，得噴干粉，加入1％硬脂酸鎂，混勻，干法制粒，整粒，裝入膠囊，制成1000粒，即得。
實(shí)施例3垂盆草片的制備取鮮垂盆草，清洗，加4倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.24(60～65℃)的清膏。加一倍量92％乙醇，攪勻，靜置8～12小時(shí)。吸取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度1.10～1.12(55～60℃)的清膏，噴霧干燥(進(jìn)風(fēng)口溫度160℃，出風(fēng)口溫度90℃)，得噴干粉，加入1％硬脂酸鎂，加入5％交聯(lián)羧甲基淀粉鈉，攪勻，制粒，干燥(60℃)，壓片，即得。
實(shí)施例4、垂盆草注射液的制備取鮮垂盆草，清洗，加4倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.12(60～65℃)的清膏，用乙醇醇沉2次，含醇量分別為65％、85％，每次均濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，加水稀釋至每1ml相當(dāng)于干浸膏粉0.5克，調(diào)節(jié)PH值至7，冷藏，濾取上清液，加活性炭煮沸，濾過(guò)，灌封，滅菌，即得。
實(shí)施例5垂盆草的鑒別薄層鑒別取藥材粉末4.0g，用乙醚振搖提取4次，每次25ml，棄去乙醚液，待乙醚揮干，加80％乙醇50ml，加熱回流60分鐘，濾過(guò)，濾液置圓底燒瓶中，加25％的鹽酸(g/ml)4ml加熱回流40分鐘，濾過(guò)，濾液80℃水浴蒸至約10ml，加水20ml，以25％的氫氧化鈉調(diào)pH9.0，用25ml乙醚振搖提取一次，棄去乙醚液，以25％鹽酸調(diào)pH2.0，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，揮干，殘?jiān)?ml甲醇使溶解，作為供試品液。另取垂盆草對(duì)照藥材粉末4.0g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(2005年版《中國(guó)藥典》一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3％的三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
實(shí)施例6垂盆草中槲皮素的含量測(cè)定含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇∶0.1％三氟乙酸水溶液(45∶55)(v/v)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為371nm。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取于60℃減壓干燥至恒重的槲皮素適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉約4.0g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，精密加入60％的甲醇50ml，稱(chēng)重，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用60％的甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸(g/ml)4 ml加熱回流40分鐘，快速冷卻，加入25％氫氧化鈉2ml，冷卻，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用60％甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取濾液，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品按干燥品計(jì)算，含槲皮素(C15H10O7)不得少于0.06％。
實(shí)施例7藥材樣品液制備方法的優(yōu)選為了盡可能的提出垂盆草中以槲皮素為苷元的黃酮苷類(lèi)成分，對(duì)樣品的提取方法進(jìn)行了考察，此外還對(duì)提取液的酸水解方法進(jìn)行了優(yōu)選。在此之前已將鮮垂盆草烘干，并測(cè)定了水分。
①提取方式的選擇垂盆草藥材中主要含有黃酮苷類(lèi)化合物，該類(lèi)成分具有中等的極性，能被一定濃度的醇溶液很好的提取出來(lái)，分別選擇了60％甲醇溶液進(jìn)行回流提取和超聲提取，以提取液水解后的槲皮素的峰面積和樣品稱(chēng)重的比值(A/W)作為考察指標(biāo)，優(yōu)選較佳的提取方式。
取粉碎后的垂盆草(干品)藥材兩份，每份4.0g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，各加入50ml60％的甲醇，分別稱(chēng)重，如下表，提取時(shí)間均為30分鐘，快速冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6ml水浴回流水解40分鐘，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，用60％的甲醇定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1表1 樣品提取方式的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，乙醇回流提取的提取液酸水解后槲皮素的含量較高，故選用回流作為藥材的提取方式。
②提取溶劑的選擇取粉碎后的垂盆草(干品)藥材三份，每份4.0g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，按下表加入不同濃度的乙醇50ml，分別稱(chēng)重，回流提取30分鐘，快速冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6ml水浴回流水解40分鐘，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2
表2 樣品提取溶劑的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，用60％乙醇提取的提取液酸水解后槲皮素的含量較高，故選用60％乙醇溶液作為提取溶劑。
③提取體積的優(yōu)選取粉碎后的垂盆草(干品)藥材三份，每份4.0g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，分別加入600％的乙醇30ml、50ml、70ml，分別稱(chēng)重，回流提取30分鐘，快速冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6.0ml水浴回流水解40分鐘，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4.0ml，冷卻，定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表3表3 樣品提取體積的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，提取體積為30ml時(shí)提取液水解后槲皮素的含量較低，而提取體積為≥50ml時(shí)，提取液水解后槲皮素的含量較高且趨于穩(wěn)定，提示50ml的提取體積已能將以槲皮素為苷元的苷類(lèi)成分提取完全，故提取體積選用50ml。
④回流提取時(shí)間的選擇取粉碎后的垂盆草(干品)藥材三份，每份4.0g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，分別加入60％的乙醇50ml，稱(chēng)重，分別回流提取0.5小時(shí)、1.0小時(shí)、1.5小時(shí)，快速冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6ml水浴回流水解40分鐘，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液HPLC分析計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表4表4 樣品回流提取時(shí)間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表4可知，提取時(shí)間≥1小時(shí)，提取液水解后槲皮素的含量非常接近，因此，可認(rèn)為回流提取1小時(shí)已能將藥材中以槲皮素為苷元的苷類(lèi)成分較為完全地提取，故提取時(shí)間選用1小時(shí)。
小結(jié)以上結(jié)果顯示，4.0g的垂盆草(干品)藥材加60％乙醇50ml，回流提取1.0小時(shí)即能將藥材中以槲皮素為苷元的黃酮苷類(lèi)成分提取完全。
⑤酸水解中酸用量的優(yōu)選取粉碎后的垂盆草(干品)藥材五份，每份4.0g精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，分別加入60％的乙醇50ml，稱(chēng)重，回流提取1.0小時(shí)，快速冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液五份，每份25ml，分別加入25％鹽酸1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml水浴回流水解40分鐘，快速冷卻，其中加酸4、6、8ml的再分別加25％的氫氧化鈉溶液2、4、6ml，冷卻，定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表5表5 酸用量的選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表5所測(cè)峰面積可知，在25ml續(xù)濾液中加酸量＜4.0ml，并未能使以槲皮素為苷元的黃酮苷水解完全，而加酸量≥4.0.0ml時(shí)，所測(cè)的水解液中槲皮素的峰面積趨于逐漸下降，說(shuō)明加酸量≥4.0ml即能使水解的槲皮素部分地被破壞，因此，選擇了加酸量為4.0ml進(jìn)行酸水解。
⑥酸水解時(shí)間的選擇取粉碎后的垂盆草(干品)藥材三份，每份4.0g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，分別加入60％的乙醇50ml，稱(chēng)重，回流提取1.0小時(shí)，快速冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸4.0ml，分別水浴回流水解20分鐘、40分鐘、60分鐘，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉2.0ml，冷卻，定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表6表6 酸水解時(shí)間選擇的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表6可知，水浴回流酸水解40分鐘，即能使以槲皮素為苷元的黃酮苷水解完全，故選擇水解時(shí)間為40分鐘。
小結(jié)以上結(jié)果顯示，用25ml提取液加入4ml 25％鹽酸水浴回流水解40分鐘能使垂盆草中以槲皮素為苷元的黃酮苷水解完全。
供試品溶液的制備 取粉碎后的垂盆草藥材4.0g，[同時(shí)另取粉碎后的垂盆草藥材測(cè)定水分(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄IX H第二法)]，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，加入60％的甲醇50ml，稱(chēng)重，回流提取1小時(shí)，快速冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸(g/ml)4.0ml水浴回流水解40分鐘，快速冷卻，加25％氫氧化鈉2ml，冷卻，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用60％甲醇定容至刻度，取樣，過(guò)膜，即得。
實(shí)施例八 HPLC法測(cè)定垂盆草中槲皮素的色譜條件優(yōu)選①儀器和試劑Waters Dlta 600高壓輸液泵，Waters 2487檢測(cè)器，Waters 600控制器，甲醇、乙腈均為色譜純(淮陰漢邦科技有限公司)，三氟乙酸為色譜純(Tedia company)，水為亞沸蒸餾水，其余試劑均為分析純。
槲皮素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(供含量測(cè)定用，批號(hào)為0081-9304)。
色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，淮陰漢邦科技有限公司，C18柱Lichrospher C18(4.6×250mm，5μm)；中科院大連化學(xué)物理所，反相C18柱Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)。結(jié)果顯示，兩根不同廠家的色譜柱均能達(dá)到良好分離，但以Kromasil色譜柱更好。測(cè)定波長(zhǎng)根據(jù)紫外光譜，槲皮素在甲醇中的最大吸收波長(zhǎng)為371nm，故測(cè)定波長(zhǎng)確定為371nm。
②流動(dòng)相條件的選擇對(duì)HPLC法測(cè)定垂盆草中山柰素的流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了選擇，選擇了以(1)甲醇∶酸水、(2)乙腈∶酸水、(3)甲醇∶乙腈∶酸水系統(tǒng)，進(jìn)行試驗(yàn)。
在(1)甲醇∶酸水系統(tǒng)中，甲醇∶酸水的比例為36∶50至64∶60之間時(shí)能將樣品中槲皮素峰能夠得到分離，但甲醇∶酸水(45∶55)時(shí)出峰時(shí)間為20分鐘左右，峰分離較好。
在(2)乙腈∶酸水系統(tǒng)中，乙腈∶酸水比例為20∶35至80∶65之間時(shí)能將樣品中槲皮素峰能夠得到分離，但乙腈∶酸水(28∶72)時(shí)出峰時(shí)間為20分鐘左右，峰分離較好。
在(3)甲醇∶乙腈∶酸水系統(tǒng)中，甲醇∶乙腈∶酸水的比例為(27∶10∶63)時(shí)，槲皮素峰能夠得到較好分離。
對(duì)不同的酸進(jìn)行比較，選用了三氟乙酸、冰醋酸、磷酸及磷酸、磷酸二氫鈉緩沖液進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果表明，流動(dòng)相控制其酸性pH值為2-5，如0.1％三氟乙酸水溶液、0.2％冰醋酸水溶液、0.06％磷酸水溶液以及0.05％磷酸加0.02％磷酸二氫鈉水溶液均可將槲皮素峰很好地分離。故酸可選用三氟乙酸、冰醋酸及其它有機(jī)酸或弱無(wú)機(jī)酸如磷酸及其緩沖溶液。
實(shí)施例九 藥材樣品檢測(cè)色譜方法學(xué)研究①線性關(guān)系的考察槲皮素的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱(chēng)取于60℃干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品5.05mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成槲皮素標(biāo)準(zhǔn)貯備液(0.101mg/ml)。再分別精密移取0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配制成系列對(duì)照品液，分別吸取上述溶液5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)照品濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝94131 X-23497(R2＝0.9998)槲皮素濃度在5.05-60.6μg/ml之間呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表7及圖1表7 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線

②重復(fù)性試驗(yàn)同一批藥材，按供試品溶液制備方法制備樣品3份，依法測(cè)定，重復(fù)性結(jié)果槲皮素的平均含量為0.070％，RSD＝1.14％，見(jiàn)表8表8 藥材中槲皮素的重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

③加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取已測(cè)定含量的藥材各4.0g共6份，2份一組，各組分別加入了槲皮素對(duì)照液(1.01mg/ml)2.56ml，3.20ml，3.84ml。依法測(cè)定，并計(jì)算槲皮素平均回收率為101.2％，RSD＝0.87％。結(jié)果見(jiàn)表9表9 藥材中的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

④藥材含量測(cè)定取三批藥材，如法測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表10表10 垂盆草藥材中槲皮素的含量測(cè)定結(jié)果

含量限度本品按干燥品計(jì)算，含槲皮素(C15H10O6)計(jì)不得少于0.06％。
實(shí)施例十 垂盆草顆粒的定性鑒別鑒別供試品溶液的制備取本品粉末6g，加水50ml，超聲處理20min，濾過(guò)，濾液置分液漏斗中，加乙醚振搖提取4次，每次25ml，棄去乙醚液，水液加25％的鹽酸(g/ml)10ml加熱回流40分鐘，濾過(guò)，加25％的氫氧化鈉調(diào)pH9.0，置分液漏斗中，加25ml的乙醚振搖提取一次，棄去乙醚液，水液再用25％的鹽酸調(diào)pH2.0，以乙酸乙酯振搖提取三次，每次30ml，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。
對(duì)照品溶液的制備取對(duì)照藥材粉末4.0g，用乙醚振搖提取4次，每次25ml，棄去乙醚液，待乙醚揮干，加80％乙醇50ml，加熱回流60分鐘，濾過(guò)，濾液置圓底燒瓶中，加25％的鹽酸(g/ml)4ml加熱回流40分鐘，濾過(guò)，濾液80℃水浴蒸至約10ml，加水20ml，以25％的氫氧化鈉調(diào)pH9.0，用25ml乙醚振搖提取一次，棄去乙醚液，用25％鹽酸調(diào)pH2.0，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，揮干，殘?jiān)?ml甲醇使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。
測(cè)定法照薄層色譜法(2005年版《中國(guó)藥典》一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3％的三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
實(shí)施例十一 垂盆草顆粒中槲皮素的含量測(cè)定含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇∶0.1％三氟乙酸水溶液(45∶55)(v/v)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為371nm。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取于60℃減壓干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品顆粒，研細(xì)，取粉末5.0g，精密稱(chēng)定，置100ml具塞錐形瓶中，加入60％甲醇50ml，稱(chēng)重，超聲提取30min(超聲功率為250w，頻率為50KHz)，放冷，補(bǔ)足失重，搖勻后過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6ml水浴回流水解60min，快速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加入25％氫氧化鈉4ml，60％甲醇定容至刻度，搖勻，取樣過(guò)膜，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算，即得。
本品每袋含垂盆草以槲皮素(C15H10O7)計(jì)，不得少于1.56mg。
實(shí)施例十二 垂盆草膠囊的定性鑒別鑒別供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物2g，加水50ml，超聲處理20min，濾過(guò)，濾液置分液漏斗中，加乙醚振搖提取4次，每次25ml，棄去乙醚液，水液加25％的鹽酸(g/ml)10ml加熱回流40分鐘，濾過(guò)，加25％的氫氧化鈉調(diào)pH9.0，置分液漏斗中，加25ml的乙醚振搖提取一次，棄去乙醚液，水液再用25％的鹽酸調(diào)pH2.0，以乙酸乙酯振搖提取三次，每次30ml，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。
對(duì)照品溶液的制備取對(duì)照藥材粉末4.0g，用乙醚振搖提取4次，每次25ml，棄去乙醚液，待乙醚揮干，加80％乙醇50ml，加熱回流60分鐘，濾過(guò)，濾液置圓底燒瓶中，加25％的鹽酸(g/ml)4ml加熱回流40分鐘，濾過(guò)，濾液80℃水浴蒸至約10ml，加水20ml，以25％的氫氧化鈉調(diào)pH9.0，用25ml乙醚振搖提取一次，棄去乙醚液，用25％鹽酸調(diào)pH2.0，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，揮干，殘?jiān)?ml甲醇使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。
測(cè)定法照薄層色譜法(2005年版《中國(guó)藥典》一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3％的三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
實(shí)施例十三 垂盆草膠囊中槲皮素的含量測(cè)定含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇∶0.1％三氟乙酸水溶液(45∶55)(v/v)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為371nm。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取于60℃減壓干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約1.5g，精密稱(chēng)定，置100ml具塞錐形瓶中，加入60％的甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(超聲功率為250w，頻率為50KHz)30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用60％的甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml置圓底燒瓶中，加入25％鹽酸(g/ml)6ml搖勻，置水浴中加熱回流60分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加入25％氫氧化鈉4ml，冷卻至室溫，用60％甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取濾液，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算，即得。
本品每粒含垂盆草以槲皮素(C15H10O7)計(jì)，不得少于0.39mg。
實(shí)施例十四 垂盆草膠囊樣品制備方法的優(yōu)選為了盡可能的提出制劑中的以槲皮素為苷元的苷類(lèi)成分，對(duì)樣品的提取方法進(jìn)行了考察，此外還對(duì)提取液的酸水解方法進(jìn)行了優(yōu)選。
①提取方式的選擇本制劑主要含有黃酮苷類(lèi)化合物，該類(lèi)成分具有中等的極性，能被一定濃度的醇溶液很好的提取出來(lái)，分別選擇了60％甲醇溶液進(jìn)行回流提取和超聲提取，以提取液水解后的槲皮素的峰面積和樣品稱(chēng)重的比值(A/W)作為考察指標(biāo)，優(yōu)選較佳的提取方式。
取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物兩份，每份1.5g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，各加入50ml60％的甲醇，分別稱(chēng)重，如下表，提取時(shí)間均為30分鐘，快速冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6ml水浴回流水解40min，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，用60％的甲醇定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液經(jīng)HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表11表11 樣品提取方式的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表11可知，60％乙醇超聲提取的提取液酸水解后槲皮素的含量較高，故選用超聲作為制劑的提取方式。
②提取溶劑的選擇本制劑中主要含有黃酮類(lèi)化合物的苷和苷元，該類(lèi)成分具有中等的極性，能被一定濃度的醇溶液很好的提取出來(lái)，分別選擇了40％、60％、80％甲醇進(jìn)行超聲提取，以提取液水解后的槲皮素的峰面積和樣品稱(chēng)重的比值(A/W)作為考察指標(biāo)，優(yōu)選較佳的提取溶劑。
取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物三份，每份1.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，按下表加入不同濃度的甲醇50ml，分別稱(chēng)重，超聲30分鐘(超聲功率為250w，頻率為50KHz)，放冷，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6ml水浴回流水解40min，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，用60％的甲醇定容至50ml取樣過(guò)膜，即得。樣品液經(jīng)HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表12表12 樣品提取溶劑的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表12可知，用60％甲醇提取的提取液酸水解后槲皮素的含量較高，故選用60％甲醇溶液作為提取溶劑。
③提取體積的優(yōu)選取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物三份，每份1.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別加入60％的甲醇30ml、50ml、70ml，分別稱(chēng)重，超聲30分鐘(超聲功率為250w，頻率為50KHz)，放冷，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，分別精密移取續(xù)濾液15ml、25ml、35ml，加入25％鹽酸6ml水浴回流水解40min，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液經(jīng)HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表13表13 樣品提取體積的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表13可知，提取體積為30ml時(shí)提取液水解后槲皮素的含量較低，而提取體積為50ml和70ml時(shí)，槲皮素的含量較高，且含量非常接近。說(shuō)明50ml的提取體積已能將成分提取完全，故提取體積選用50ml。
④超聲提取時(shí)間的選擇取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物三份，每份1.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別加入60％的甲醇50ml，超聲20分鐘、30分鐘、40分鐘(超聲功率為250w，頻率為50KHz)，放冷，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6ml水浴回流水解40min，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液經(jīng)HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表14表14 樣品提取時(shí)間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表14可知，提取時(shí)間≥30分鐘時(shí)，提取液水解后槲皮素的含量非常接近，因此，可認(rèn)為已將制劑中以槲皮素為苷元的苷類(lèi)成分較為完全地提取，故提取時(shí)間選用30分鐘。
小結(jié)以上結(jié)果顯示，1.5g的制劑加60％甲醇50ml，超聲提取30分鐘，即能將制劑中以槲皮素為苷元的黃酮苷類(lèi)成分提取完全。
⑤酸水解中酸用量的優(yōu)選由于制劑中含有的成分是以槲皮素為苷元的苷類(lèi)成分，因此，提取液需水解后，進(jìn)行HPLC測(cè)定。參考了銀杏葉片的含量測(cè)定方法[3]，選用了酸水解的方法，對(duì)酸用量及酸水解時(shí)間進(jìn)行了考察。
取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物五份，每份1.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別加入60％的甲醇50ml，超聲30分鐘(超聲功率為250w，頻率為50KHz)，放冷，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液五份，每份25ml，分別加入25％鹽酸2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml水浴回流水解40min，快速冷卻，除加酸2.0ml的樣品外其余依次加25％的氫氧化鈉2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，冷卻，60％甲醇定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液經(jīng)HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表15表15 酸用量的選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表15所測(cè)峰面積可知，在25ml續(xù)濾液中加酸量＜6.0ml，并未能使以槲皮素為苷元的黃酮苷水解完全，而加酸量≥6.0ml時(shí)，所測(cè)的水解液中槲皮素的峰面積逐漸減少，提示已有部分被破壞說(shuō)明加酸量6.0ml即能使槲皮素為苷元的黃酮苷水解完全，因此，選擇了加酸量為6.0ml進(jìn)行酸水解。
⑥酸水解時(shí)間的選擇取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物三份，每份1.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別加入60％的甲醇50ml，超聲30min(超聲功率為250w，頻率為50KHz)，放冷，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液三份，每份25ml，各加入25％鹽酸6.0ml，水浴回流水解40分鐘、60分鐘、80分鐘，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，定容至50ml，取樣過(guò)膜，即得。樣品液HPLC分析，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表16表16 酸水解時(shí)間選擇的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表16所測(cè)峰面積可知，水浴回流酸水解60分鐘，即能使以槲皮素為苷元的黃酮苷水解完全。故水解時(shí)間選擇60分鐘。
小結(jié)以上結(jié)果顯示，用25ml提取液加入6.0ml 25％的鹽酸水浴回流水解60分鐘能使制劑中以槲皮素為苷元的黃酮苷類(lèi)成分水解完全。
結(jié)論樣品液的制備方法經(jīng)優(yōu)選后確定為取本品裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物1.5g，精密稱(chēng)定，置100ml具塞錐形瓶中，加60％甲醇50ml，稱(chēng)重，超聲處理30分鐘(超聲功率為250w，頻率為50KHz)，放冷，補(bǔ)足失重，搖勻后過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸6.0ml水浴回流水解60分鐘，快速冷卻，加25％的氫氧化鈉4ml，冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用60％甲醇定容至刻度，搖勻，取樣過(guò)膜，即得。
實(shí)施例十五 垂盆草片的定性鑒別薄層鑒別 供試品溶液的制備取本品10片，研細(xì)，取約3g，加水50ml，超聲處理20min，濾過(guò)，濾液置分液漏斗中，加乙醚振搖提取4次，每次25ml，棄去乙醚液，水液加25％的鹽酸(g/ml)10ml加熱回流40分鐘，濾過(guò)，加25％的氫氧化鈉調(diào)pH9.0，置分液漏斗中，加25ml的乙醚振搖提取一次，棄去乙醚液，水液再用25％的鹽酸調(diào)pH2.0，以乙酸乙酯振搖提取三次，每次30ml，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。
對(duì)照品溶液的制備取對(duì)照藥材粉末4.0g，用乙醚振搖提取4次，每次25ml，棄去乙醚液，待乙醚揮干，加80％乙醇50ml，加熱回流60分鐘，濾過(guò)，濾液置圓底燒瓶中，加25％的鹽酸(g/ml)4ml加熱回流40分鐘，濾過(guò)，濾液80℃水浴蒸至約10ml，加水20ml，以25％的氫氧化鈉調(diào)pH9.0，用25ml乙醚振搖提取一次，棄去乙醚液，用25％鹽酸調(diào)pH2.0，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，揮干，殘?jiān)?ml甲醇使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。
測(cè)定法照薄層色譜法(2005年版《中國(guó)藥典》一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3％的三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
實(shí)施例十六 垂盆草片中槲皮素的含量測(cè)定含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液(45∶55)(v/v)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為371nm。理論塔板數(shù)以槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取于60℃減壓干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品10片，研細(xì)，取約2.0g，精密稱(chēng)定，置100ml具塞錐形瓶中，加入60％的甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(超聲功率為250w，頻率為50KHz)30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用60％的甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml置圓底燒瓶中，加入25％鹽酸(g/ml)6ml搖勻，置水浴中加熱回流60分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加入25％氫氧化鈉4ml，冷卻至室溫，用60％甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取濾液，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每片含垂盆草以槲皮素(C15H10O7)計(jì)，不得少于0.39mg。
實(shí)施例十七 垂盆草注射中槲皮素的含量測(cè)定含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇∶0.1％三氟乙酸水溶液(47∶53)(v/v)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為371nm。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取于60℃減壓干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密量取垂盆草注射液10ml，置圓底燒瓶中，加入25％鹽酸(g/ml)4ml搖勻，置水浴中加熱回流40分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加入25％氫氧化鈉2ml，冷卻至室溫，用60％甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取濾液，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每10ml含垂盆草以槲皮素(C15H10O7)計(jì)，不得少于0.8mg。
實(shí)施例十八 復(fù)方矮地茶垂盆草顆粒中槲皮素的含量測(cè)定含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇∶0.1％三氟乙酸水溶液(45∶55)(v/v)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為371nm。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取于60℃減壓干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品顆粒，研細(xì)，取粉末5.0g，精密稱(chēng)定，置100ml具塞錐形瓶中，加入60％甲醇50ml，稱(chēng)重，超聲提取40min(超聲功率為250w，頻率為50KHz)，放冷，補(bǔ)足失重，搖勻后過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液25ml，加入25％鹽酸8ml水浴回流水解60min，快速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加入25％氫氧化鈉6ml，60％甲醇定容至刻度，搖勻，取樣過(guò)膜，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算，即得。本品每袋含垂盆草以槲皮素(C15H10O7)計(jì)，不得少于1.56mg圖2所示為垂盆草藥材中槲皮素含測(cè)圖，流動(dòng)相為甲醇∶0.1％三氟乙酸水(45∶55)。
圖3所示為垂盆草膠囊中槲皮素含測(cè)圖，流動(dòng)相為甲醇∶0.1％三氟乙酸水(45∶55)。
圖4所示為復(fù)方矮地茶垂盆草顆粒中槲皮素含測(cè)圖，流動(dòng)相為甲醇∶0.1％三氟乙酸水(45∶55)。
權(quán)利要求
1.一種垂盆草及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于將樣品中黃酮苷水解成苷元槲皮素，再用HPLC法測(cè)定槲皮素含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括下列步驟a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；柱溫20～35℃；流動(dòng)相體積比為36～50∶64～50的甲醇-酸水、體積比為20～35∶80～65的乙腈-酸水和體積比為15～35∶15～5∶70～60的甲醇-乙腈-酸水中的任一種；檢測(cè)波長(zhǎng)370±2nm；b.對(duì)照品溶液的制備取干燥至恒重的槲皮素適量，精密稱(chēng)定，加溶劑制成每1ml含6～60μg的溶液，即得；c.供試品溶液的制備取樣品1～6重量份，精密稱(chēng)定，加入提取溶媒40～90％的甲醇或乙醇50重量份，稱(chēng)重，回流或超聲提取0.2～2小時(shí)，冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，取續(xù)濾液25重量份，加入酸水2～18重量份，加熱回流水解30～80分鐘，冷卻，水解溶液用堿溶液調(diào)整pH值至3～7，提取溶劑定容至50重量份，搖勻，取樣，過(guò)膜，即得；d.測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～10μL，注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括下列步驟a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；柱溫30℃；流動(dòng)相體積比為45∶55的甲醇-酸水、體積比為28∶72的乙腈-酸水和體積比為27∶10∶63的甲醇-乙腈-酸水中的任一種；檢測(cè)波長(zhǎng)371nm；b.對(duì)照品溶液的制備取干燥至恒重的槲皮素適量，精密稱(chēng)定，加溶劑制成每1ml含30μg的溶液，即得；c.供試品溶液的制備取樣品1.5重量份，精密稱(chēng)定，加入60％的甲醇或乙醇50重量份，稱(chēng)重，回流或超聲提取0.5小時(shí)，冷卻，補(bǔ)足失重，過(guò)濾，取續(xù)濾液25重量份，加入酸水6重量份，加熱回流水解60分鐘，冷卻，水解溶液用堿溶液調(diào)整PH值至4，提取溶劑定容至50重量份，搖勻，取樣，過(guò)膜，即得；d.測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的質(zhì)量控制方法，其特征是所述色譜條件流動(dòng)相中所用的酸水是濃度為0.02-0.2％的冰醋酸水溶液、三氟乙酸水溶液和磷酸水溶液中任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的質(zhì)量控制方法，其特征是所述酸水解，其酸水是濃度為5～35％的鹽酸、硫酸和磷酸水溶液中的任一種。
6.權(quán)利要求1所述的垂盆草制劑，是由垂盆草原料制成的中藥制劑及其復(fù)方制劑，包括垂盆草顆粒、垂盆草片、垂盆草膠囊、垂盆草注射劑。
全文摘要
一種垂盆草及其制劑的質(zhì)量控制方法，包括將樣品中黃酮苷酸水解成苷元槲皮素進(jìn)而用HPLC法測(cè)定槲皮素含量的方法。本發(fā)明方法不僅用于垂盆草藥材，還適用于由單味垂盆草原料制成的中藥制劑，包括垂盆草顆粒、垂盆草片、垂盆草膠囊及垂盆草注射劑等劑型，也可以是含垂盆草的中藥復(fù)方制劑。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1895325SQ20061008597
公開(kāi)日2007年1月17日 申請(qǐng)日期2006年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月10日
發(fā)明者李家春, 婁貫平, 張日武, 蔣小云 申請(qǐng)人:上海海虹實(shí)業(yè)(集團(tuán))巢湖中辰藥業(yè)有限公司