專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療冠心病心絞痛的中藥制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療冠心病心絞痛的中藥制劑及其制備方法，屬于中藥制藥的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
冠心病心絞痛是指由于冠狀動(dòng)脈硬化或痙攣導(dǎo)致心肌缺血、缺氧所引起的心絞痛，約占心絞痛患者的90％。它屬于人類(lèi)重大疾病之一，其死亡率一直是重大疾病之首。冠心病心絞痛以前多發(fā)于中老年患者，隨著社會(huì)的發(fā)展，生活水平的提高，其發(fā)病年齡趨于年輕化。因此，冠心病的發(fā)病率趨向提高之勢(shì)，防治任務(wù)十分沉重，已引起國(guó)內(nèi)外關(guān)注。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)冠心病的診斷和防治也取得了一些進(jìn)展，如在檢查方面，由原來(lái)的常規(guī)心電圖、負(fù)荷心電圖檢查，更新到動(dòng)態(tài)心電圖、超聲心動(dòng)檢查術(shù)、冠脈造影、電子束CT機(jī)的應(yīng)用、生化檢查和心功能測(cè)定方法也在不斷改進(jìn)，為早期診斷提供了良好的手段，在防治方面，建立了包括冠脈側(cè)支循環(huán)和冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)等，藥物治療方面，在擴(kuò)張冠脈的基礎(chǔ)上(硝酸酯、亞硝酸酯類(lèi))，出現(xiàn)了鈣離子拮抗劑、β-受體阻滯劑、溶栓藥物的應(yīng)用，為治療冠心病心絞痛提供了多種手段。然而臨床實(shí)踐表明，單純西藥治療只治標(biāo)不治本，尤其是藥物的副作用，使患者難以接受和長(zhǎng)期服用。當(dāng)代人類(lèi)回歸大自然的愿望日益強(qiáng)烈，普遍希望接受天然無(wú)公害的中藥治療，從而為中醫(yī)藥的發(fā)展提供了良好的契機(jī)。冠心病心絞痛在中醫(yī)中稱(chēng)之為胸痹心痛，開(kāi)發(fā)一種高效、低毒、質(zhì)量穩(wěn)定、劑型先進(jìn)的治療冠心病心絞痛的純中藥制劑是本發(fā)明的目的。冠心病心絞痛病情來(lái)勢(shì)兇猛，對(duì)病人身心造成極大的傷害，因此，臨床上常常需要一種能夠迅速緩解癥狀、解除病人痛苦、起效迅速、效果明顯的藥物。
中國(guó)專(zhuān)利02128066.5報(bào)道了葒草1-50、燈盞細(xì)辛50-0制作而成的一種中藥制劑，該制劑的制備采用以下工藝將葒草、燈盞細(xì)辛加水煎煮、濾過(guò)，濾液減壓濃縮成浸膏，用乙醇沉淀處理，減壓回收乙醇，調(diào)PH值至中性，放置，取上清液用乙酸乙酯提取，水層液調(diào)PH值酸性，用正丁醇提取，減壓回收正丁醇，殘留物用乙醇溶解，聚酞胺柱分離，用50-95％的乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥得提取物。由于上述工藝中將葒草和燈盞細(xì)辛共同提取，燈盞細(xì)辛在其中也采用乙酸乙酯提取和正丁醇提取，造成該藥物有效成分的損失，本發(fā)明對(duì)此進(jìn)行了工藝改進(jìn)，將葒草和燈盞細(xì)辛分別提取，采用不同的步驟進(jìn)行，分別得到提取物，再將它們合并，進(jìn)一步制成新的藥物制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種治療冠心病心絞痛的中藥制劑及其制備方法，該制劑以軟注射液劑為主本發(fā)明在民間驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，對(duì)本方的臨床應(yīng)用、組方及藥材資源進(jìn)行了調(diào)查研究，在大量的藥學(xué)和藥理試驗(yàn)研究基礎(chǔ)上，利用現(xiàn)代技術(shù)對(duì)制劑中藥材的質(zhì)量、藥理學(xué)、毒理學(xué)、天然藥物化學(xué)、制劑工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等進(jìn)行了研究，具有組方精簡(jiǎn)，工藝先進(jìn)，劑型新穎，臨床應(yīng)用安全有效，質(zhì)量可控，崩解快，吸收、顯效快，生物利用度高，療效確切，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的中藥制劑是這樣構(gòu)成的按照重量組份計(jì)算它由葒草1～10份和燈盞細(xì)辛1～10份制備而成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸、液體制劑、粉末劑、丸劑、軟膠囊劑、懸浮劑、噴霧劑、氣霧劑、水針劑、粉針劑、輸液劑及其它藥劑學(xué)上可以接受的劑型。
具體的說(shuō)，按照重量組份計(jì)算它由葒草5份和燈盞細(xì)辛1份制備而成注射液劑。
本發(fā)明的中藥制劑，是經(jīng)過(guò)對(duì)葒草和燈盞細(xì)辛分別提取的步驟制備的，所述步驟進(jìn)一步包括將分別提取后得到的提取物合并，以該合并的提取物為藥物活性成分，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成制劑。
所述分別提取，步驟如下步驟1)葒草水煮，醇沉，調(diào)PH值，上清液用醋酸乙酯萃取，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH，用正丁醇萃取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上層析柱，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；步驟2)燈盞細(xì)辛水煮，醇沉，調(diào)PH，棄上清液，沉淀用水洗，干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。
所述上層析柱可為單獨(dú)的聚酰胺、單獨(dú)的大孔樹(shù)脂柱或兩者同時(shí)使用。
以上步驟進(jìn)一步包括將葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物合并，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)，制成所述中藥制劑的步驟。
本發(fā)明的中藥制劑，制備方法為步驟1)葒草加水煎煮，濾液濃縮，醇沉，靜置，濾液回收乙醇并濃縮，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值，充分?jǐn)嚢?，靜置，取上清液濾過(guò)，濾液先用醋酸乙酯萃取，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，再用鹽酸調(diào)PH，最后用水飽和的正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；步驟2)燈盞細(xì)辛加水煎煮濾液濃縮，醇沉攪拌，靜置，濾液回收乙醇并濃縮，用鹽酸調(diào)PH，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗，干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。上述兩種提取物，加注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水，混勻，用微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，滅菌，即得注射液。
優(yōu)選的步驟1)為葒草加4～20倍水煎煮1～5次，每次0.5～5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)20～95％，攪拌均勻，靜置6～48小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04～1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至4.7～10，充分?jǐn)嚢?，靜置1～12小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/4～1倍量的醋酸乙酯萃取1～5次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH1～4.5，用1/4～1倍量水飽和的正丁醇提取2-6次，合并正丁醇液，用1/16～1/2倍量水洗1～3次，減壓回收正丁醇，殘留物加45～98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(10～1000g，Φ4～10cm，徑高比1∶2～10，吸附流速0.5～4.0BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；優(yōu)選的步驟2)為燈盞細(xì)辛加4～20倍水煎煮1～5次，每次0.2～1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)20～90％，不斷攪拌，靜置6～48小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH1～4.5，55℃保溫2～10小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH2～5，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。
進(jìn)一步包括步驟3)，步驟3)為將葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物合并，加注射用水，攪拌使溶，再加入甘油，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水，混勻，用微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，滅菌，即得注射液。
更優(yōu)選的步驟1)為葒草加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05-1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)65％，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04-1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至7，充分?jǐn)嚢瑁o置3小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH3，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，徑高比1∶6，吸附流速1.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；更優(yōu)選的步驟2)為燈盞細(xì)辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)55％，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH2，55℃保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物；步驟3)為，將葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物合并，加1800毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
以上步驟中，所述的干燥可以采用微波真空干燥、減壓真空干燥、噴霧干燥或冷凍干燥，優(yōu)選為微波真空干燥。
所用的附加劑可以是甘油、土溫、司盤(pán)、磷脂一種或幾種。優(yōu)選為甘油。
本發(fā)明的功能主治具有活血化瘀、通脈止痛功能。用于冠心病心絞痛心血瘀阻證，癥見(jiàn)胸悶、胸部刺痛，固定不移，心悸不寧，唇舌暗紫，脈細(xì)澀等冠心病心絞痛見(jiàn)上述證候者。
本發(fā)明的方解冠心病心絞痛屬于中醫(yī)的“胸痹心痛”范疇。中醫(yī)認(rèn)為，其主要病機(jī)為心脈痹阻，病位以心為主。心主血脈，為氣血運(yùn)行的動(dòng)力。心脈痹阻，血瘀氣滯，故出現(xiàn)胸悶、心痛等癥，《素問(wèn).痹論》說(shuō)“心痹者，脈不通?！奔葱拿}運(yùn)化失常，氣血運(yùn)行受阻，致使氣結(jié)血凝而發(fā)生胸痛。因此，瘀阻心脈是冠心病心絞痛的基本病機(jī)，治宜活血化瘀，通脈止痛。方以葒草活血、散血、止痛為主藥，燈盞細(xì)辛增強(qiáng)主藥通絡(luò)止痛之功為輔。二藥為伍，共奏活血化瘀，通脈止痛之功，與適應(yīng)病癥病機(jī)吻合。組方有用藥精簡(jiǎn)力專(zhuān)，作用途徑直接之長(zhǎng)，無(wú)偏溫偏涼之弊，特色較為明顯辛散溫通，甘補(bǔ)苦瀉，散瘀和血，針對(duì)“胸痹心痛”之實(shí)邪遣方用藥，無(wú)偏溫偏涼之弊，符合中醫(yī)組方理論，效果顯著。
本發(fā)明的應(yīng)用范圍本藥劑用于冠心病心絞痛心血瘀阻證，癥見(jiàn)胸部刺痛、胸悶，固定不移，心悸不寧，唇舌暗紫，脈細(xì)澀等冠心病心絞痛見(jiàn)上述證候者。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明注射液制劑具有活血化瘀、通脈止痛之功效，能夠迅速緩解心血瘀阻等心絞痛的癥狀，起效迅速，效果明顯；其組方精簡(jiǎn)，工藝先進(jìn)，劑型新穎，臨床應(yīng)用安全有效，質(zhì)量可控并具有崩解快，吸收、顯效快，生物利用度高，療效確切，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明注射液具有方精力專(zhuān)、藥源豐富、藥用成分及藥理作用基本清楚、臨床應(yīng)用安全有效、質(zhì)量迅速等特點(diǎn)。
本申請(qǐng)人進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)研究，以篩選本發(fā)明的制備工藝并證明藥效作用。
一、本發(fā)明工藝的選擇1.對(duì)于本制劑工藝中的葒草化學(xué)成分主要是極性較大的黃酮類(lèi)和酚酸類(lèi)，可溶于水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯等極性較大的溶劑。經(jīng)過(guò)水和不同濃度的乙醇進(jìn)行提取試驗(yàn)比較，以異葒草素和葒草素的提取率為考察指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果以提取率最高的70％乙醇為100％計(jì)，水煎煮提取的相對(duì)提取率為95.13％，說(shuō)明水和醇提取沒(méi)有顯著性差異，所以，本發(fā)明選擇廉價(jià)的水為提取溶媒，并利用該類(lèi)化合物在不同的的PH條件下正丁醇和乙酸乙酯溶解度的差異下進(jìn)行純化。
2.對(duì)于本制劑工藝中的燈盞細(xì)辛為藥用全草，含有黃酮、內(nèi)酯、揮發(fā)油、氨基酸等，主要成份為4′-羥基黃芩素、4′-羥基黃芩素-7-β葡萄糖醛酸甲酯甙等黃酮類(lèi)化合物，該類(lèi)化合物為多元酚類(lèi)，可溶于水和乙醇等極性溶劑。本申請(qǐng)人分別用水和不同濃度的乙醇進(jìn)行提取試驗(yàn)比較，以野黃芩甙的提取率為考察指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果以提取率最高的50％乙醇為100％計(jì)，水煎煮提取的相對(duì)提取率為95.36％，說(shuō)明水和醇提取沒(méi)有顯著性差異，所以，本發(fā)明選擇廉價(jià)的水為提取溶媒，并利用黃酮類(lèi)化合物在酸性條件下析出沉淀，不溶于水，在中性和弱堿性條件下溶解的性質(zhì)純化精制。
3.本發(fā)明在制劑中所使用的注射劑附加劑可以是甘油、土溫、司盤(pán)、磷脂一種或幾種。但通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，如果采用其他附加劑有以下弊端由于個(gè)體差異，土溫容易產(chǎn)生溶血性反應(yīng)，司盤(pán)和磷脂容易降低制劑的澄明度，引起渾濁。而甘油沒(méi)有以上不足，因此，本發(fā)明優(yōu)選甘油為附加劑。
4.本發(fā)明在制劑中所使用的所用的層析柱可為單獨(dú)的聚酰胺、單獨(dú)的大孔樹(shù)脂柱或兩者同時(shí)使用，優(yōu)選為聚酰胺柱，所用聚酰胺粉80～100目，用量10-1000g。由于聚酰胺的目數(shù)對(duì)結(jié)果影響較大，商品聚酰胺的目數(shù)和實(shí)際目數(shù)有時(shí)相差較大，必要時(shí)應(yīng)過(guò)篩。
所述的干燥可以采用微波真空干燥、減壓真空干燥、噴霧干燥或冷凍干燥，優(yōu)選為微波真空干燥。
5、藥效學(xué)試驗(yàn)研究根據(jù)本發(fā)明的臨床用途，選用抗實(shí)驗(yàn)性心肌缺血作用試驗(yàn)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)該方的工藝路線進(jìn)行篩選。
5.1提取溶劑和提取方法的選擇5.1.1樣品制備 按處方比例分別稱(chēng)取葒草和燈盞細(xì)辛藥材，采用系統(tǒng)溶劑法，分別用醋酸乙酯、正丁醇、乙醇和水依次提取，分段制樣，得樣品1(A)、1(B)、1(C)、1(D)、2(A)、2(B)、2(C)、2(D)、3(A)、3(B)、3(C)、3(D)、4(A)、4(B)、4(C)、4(D)提取物，上述樣品，于水浴上進(jìn)一步除去殘留溶劑，加適量水微熱溶解，調(diào)PH值至6，充分?jǐn)嚢瑁渭?％明膠溶液至沉淀產(chǎn)生，再加乙醇使含醇量為75％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮近干，加水稀釋至相應(yīng)濃度，調(diào)PH值至7.5，濾過(guò)，冷藏24小時(shí)，取上清液用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，分裝，滅菌，備用(樣品1每1ml含2g生藥，樣品2每1ml含0.4g生藥，樣品3每1ml含2.5g生藥，樣品4每1ml含2.5g生藥)。對(duì)上述樣品進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)比較，考察該方法基本提取方法、提取溶媒，兩味藥材是分煎還是合煎等，結(jié)果見(jiàn)表1、表2。
5.1.2實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果取SD雄性大鼠，隨機(jī)分為18組，按照表1劑量分租給藥。試驗(yàn)前動(dòng)物麻醉、固定，記錄正常心電圖。打開(kāi)胸腔前接上人工呼吸機(jī)，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈降支后，迅速關(guān)閉胸腔，恢復(fù)呼吸，記錄心電圖，有明顯ST段抬高者為手術(shù)成功征象(剔除未出現(xiàn)明顯心肌梗死心電圖波形者)。各組分別股靜脈給藥3.0ml/kg，生理鹽水對(duì)照組給同體積生理鹽水。記錄結(jié)扎喉10、30、120min各時(shí)間點(diǎn)心電圖，計(jì)算各時(shí)間ST段上下偏移總mv數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，結(jié)果見(jiàn)表2。試驗(yàn)結(jié)束后，立即取出心臟，用生理鹽水洗余血，剪心房及各大血管、筋膜、心耳，稱(chēng)取心室重量，然后將心肌切成等厚度的5片，置于37℃0.5％N-BT染色體液中染色10min，取出剪去被染色的非梗塞心肌，稱(chēng)重未染色的梗塞心肌，按式子心肌缺血百分比＝缺血區(qū)重量÷心室重量×100％，計(jì)算心肌缺血區(qū)百分率，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，結(jié)果見(jiàn)表2。
表1對(duì)大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支后ECG的影響(X±SD)

表2對(duì)大鼠急性心肌梗塞范圍的影響(X±SD)


與N.S對(duì)照組比較*P＜0.05**P＜0.01注樣品1為葒草藥材單獨(dú)提取，樣品2為燈盞細(xì)辛藥材單獨(dú)提取。樣品3為兩味藥材混合提取。樣品4為分別單獨(dú)提取后，提取物混合制樣。A-醋酸乙酯，B-為正丁醇提取，C-為乙醇，D為水煮提取，陽(yáng)性對(duì)照藥復(fù)方丹參注射液，批號(hào)0410418援生醫(yī)藥集團(tuán)生產(chǎn)。
試驗(yàn)結(jié)果表明，除樣品1(A)、2(D)、3(A)、3(D)外，各給藥組均能不同程度改善缺血性心及心電圖，使心肌缺血區(qū)的百分率降低，對(duì)急性心肌梗死具有保護(hù)作用，其中正丁醇和乙醇水提取液作用比較明顯，與N.S對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)，而醋酸乙酯和水提液的作用較差。試驗(yàn)結(jié)果提示第一，該方中有效成分主要為極性較大的物質(zhì)，同時(shí)說(shuō)明有機(jī)溶劑提取后，水提液中仍有活性成分，為排除溶劑使用先后對(duì)藥理作用的影響，葒草藥材應(yīng)選擇水、乙醇、正丁醇分別進(jìn)行比較。燈盞細(xì)辛藥草應(yīng)應(yīng)選擇乙醇、正丁醇、醋酸乙酯分別進(jìn)行比較第二，樣品4的作用明顯比樣品3強(qiáng)，說(shuō)明兩藥分開(kāi)提取比合并提取效果好，理化性質(zhì)研究的結(jié)果也表明，兩藥合并提取，由于提取液PH值較低，有效成分提取率不高。
5.2葒草提取工藝的選擇根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，分別選用正丁醇、乙醇和水進(jìn)行提取，并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)比較。
5.2.1樣品制備 取葒草加正丁醇回流提取，回收正丁醇，濃縮，于水浴上進(jìn)一步除去殘留溶劑，加適量水微熱溶解，調(diào)PH值至6，滴加5％明膠溶液至沉淀產(chǎn)生，再加乙醇使含醇量為75％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮近干，加水稀釋至相應(yīng)濃度，調(diào)PH值至7.5，濾過(guò)，冷藏24小時(shí)，取上清液用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，分裝，滅菌，備用(每1ml含2g生藥)。
乙醇提取樣品制備 取葒草加60％乙醇回流提取，回收乙醇，同法制備樣品。
水煮煎液制備 取葒草加水煎煮，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度1.06(50℃)，加2倍乙醇處理，回收乙醇，同法制備樣品。
5.2.2試驗(yàn)方法及結(jié)果試驗(yàn)方法同前，結(jié)果見(jiàn)表3、表4。
表3對(duì)大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支后ECG的影響(X±SD)


與空白對(duì)照組比較*P＜0.05**P＜0.01表4對(duì)大鼠急性心肌梗塞范圍的影響(X±SD)

與N.S對(duì)照組比較*P＜0.05陽(yáng)性對(duì)照香丹注射液 批號(hào)040706 華西醫(yī)科大學(xué)制藥廠試驗(yàn)結(jié)果表明，各給藥組均能改善缺血性心及心電圖，使心肌缺血區(qū)的百分率降低，對(duì)急性心肌梗死有明顯保護(hù)作用，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)，組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。制備工藝研究的結(jié)果表明，有機(jī)溶劑提取的樣品在后續(xù)工藝處理中有效成分的損失較大，制劑的色澤在加熱滅菌時(shí)變深，水煮提取制備的樣品制劑中有效成分得提取率高，制劑質(zhì)量易于控制，故本品以廉價(jià)的水為溶劑煎煮提取。
5.3燈盞細(xì)辛提取工藝的選擇根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，分別選用醋酸乙酯、正丁醇、乙醇和水進(jìn)行提取，并根據(jù)燈盞細(xì)辛所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，為提高制劑中有效成分的含量，同時(shí)制備酸化精制樣品進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)比較。
5.3.1樣品制備有機(jī)溶劑提取 取燈盞細(xì)辛，分別用醋酸乙酯、正丁醇、60％乙醇回流提取，回收溶劑，得提取物。
水為煎煮提取 取燈盞細(xì)辛加水煎煮，合并濾液，濃縮至每ml含生藥2g，加乙醇沉淀處理，回收乙醇，得提取物。
酸化精制樣品的制備 取燈盞細(xì)辛加水煎煮，合并濾液，濃縮至每ml含生藥2g，加乙醇沉淀處理，回收乙醇并并濃縮至每ml含生藥1g，用鹽酸調(diào)PH值至2，55℃保溫8h傾棄上清液，抽濾，沉淀真空干燥，得提取物。
上述提取物，加適量水微熱熔解，調(diào)PH值至7，再加水稀釋至相對(duì)的濃度，冷藏24小時(shí)，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，分裝，滅菌，每支2ml含0.4g生藥/ml)。
5.3.2試驗(yàn)方法及結(jié)果試驗(yàn)方法同前，結(jié)果見(jiàn)表5、表6。
表5對(duì)大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支后ECG的影響(X±SD)

與空白對(duì)照組比較*P＜0.05**P＜0.01表6對(duì)大鼠急性心肌梗塞范圍的影響(X±SD)

與N.S對(duì)照組比較*P＜0.05陽(yáng)性對(duì)照香丹注射液 批號(hào)040706 華西醫(yī)科大學(xué)制藥廠試驗(yàn)結(jié)果表明，各給藥組均有不同程度改善缺血性心及心電圖，使心肌缺血區(qū)的百分率降低，對(duì)急性心肌梗死有明顯保護(hù)作用。極性較大的溶劑水、乙醇提取的樣品和酸化精制樣品作用較明顯，與生理鹽水組比較均有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)，各組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。制備工藝研究的結(jié)果表明，有機(jī)溶劑提取的樣品，色素較重，后續(xù)工藝處理中測(cè)定有效成分的損失率較大，水煮提取制備的樣品制劑中有效成分得提取率高，制劑質(zhì)量易于控制，酸化精致工藝可將燈盞細(xì)辛中主要有效成分野黃芩甙有效提取，半成品中野黃芩甙轉(zhuǎn)移率達(dá)55％，純度達(dá)60％以上，工藝具有生產(chǎn)成本低，安全等優(yōu)點(diǎn)，故燈盞細(xì)辛采用水煎煮，乙醇沉淀除雜，酸化精致的工藝提取較合理。
5.4藥材單獨(dú)提取或合并提取工藝選擇為進(jìn)一步確定本發(fā)明方中的提取工藝，通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)，對(duì)方中兩味藥材單獨(dú)提取或合并提取工藝進(jìn)行試驗(yàn)。
5.4.1樣品制備樣品1(單獨(dú)水煎煮提取)取葒草加水煎煮，合并濾液，濃縮，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，濃縮，滴加5％明膠溶液至沉淀產(chǎn)生，再加乙醇使含醇量為80％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮近干，得葒草提取物。取燈盞細(xì)辛加水煎煮，合并濾液，濃縮，加乙醇使含醇量為50％，攪拌，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濃縮，再加乙醇使含醇量為80％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮近干，得燈盞細(xì)辛提取物；取葒草和燈盞細(xì)辛提取物加注射用水420ml微熱溶解，調(diào)PH值至7.5，補(bǔ)加注射用水至450ml濾過(guò)，置冰箱中靜置24小時(shí)，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，分裝(每支21ml，每1ml含2g生藥)滅菌，即得。
樣品2(混合水煎煮提取)取葒草、燈盞細(xì)辛加水煎煮，合并濾液，濃縮，加乙醇使含醇量為60％，攪拌，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，濃縮，濾液回收乙醇，滴加5％明膠溶液至沉淀產(chǎn)生，再加乙醇使含醇量為80％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濃縮近干，得提取物。取提取物，加適量水微熱熔解，調(diào)PH值至7，再加水稀釋至相對(duì)的濃度，冷藏24小時(shí)，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，分裝，滅菌，每支2ml含0.4g生藥/ml)。
5.4.2試驗(yàn)方法及結(jié)果試驗(yàn)方法同前，結(jié)果見(jiàn)表7、表8。
表7對(duì)大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支后ECG的影響(X±SD)


與空白對(duì)照組比較*P＜0.05**P＜0.01表8對(duì)大鼠急性心肌梗塞范圍的影響(X±SD)

與N.S對(duì)照組比較*P＜0.05**P＜0.01陽(yáng)性對(duì)照香丹注射液 批號(hào)040706 華西醫(yī)科大學(xué)制藥廠試驗(yàn)結(jié)果表明，各給藥組均能改善缺血性心及心電圖，使心肌缺血區(qū)的百分率降低，對(duì)急性心肌梗死有明顯保護(hù)作用。與生理鹽水組比較均有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)，盡管組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。但單獨(dú)提取樣品的作用趨勢(shì)優(yōu)于合并提取樣品，結(jié)合理化性質(zhì)研究的結(jié)果，本發(fā)明中兩味藥材不宜混合提取，故采用單獨(dú)提取工藝路線。
鑒于葒草提取涉及吸附分離，增加對(duì)聚酰胺和大孔樹(shù)脂樹(shù)脂的選擇。
5.5吸附分離技術(shù)的應(yīng)用根據(jù)葒草所含化學(xué)成分的性質(zhì)，我們應(yīng)用聚酰胺和大孔樹(shù)脂D101進(jìn)行分離純化，對(duì)樣品進(jìn)行抗試驗(yàn)性心肌缺血和耐缺氧試驗(yàn)，以考察吸附分離工藝是否可行。
5.5.1樣品制備葒草依法加水煎煮，醇沉處理，合并濾液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.03(50℃)，置冰箱放置24h，濾過(guò)，濾液上聚酰胺柱(25g，4×50cm)，先用水洗，繼用85％乙醇洗脫，收集乙醇液，得樣品A。流穿液和水洗液上D101樹(shù)脂柱(250g，5×70cm)，用250ml水洗，繼用500ml85％乙醇洗脫，收集乙醇液，得樣品B。水洗液為得樣品C。上聚酰胺柱和大孔樹(shù)脂柱的乙醇洗脫液合并，得樣品D。
上述樣品A、B、D回收乙醇，水浴上進(jìn)一步除去殘留溶劑，加水微熱熔解，調(diào)PH值至7.5，濾過(guò)，濾液冷藏24小時(shí)，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，分裝(每1ml含2g生藥)滅菌。樣品C適當(dāng)濃縮、加乙醇使含醇量達(dá)60％，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液回收乙醇，濃縮，滴加5％明膠溶液至淀產(chǎn)生，再加乙醇使含醇量為80％，靜置24小時(shí)，濾液回收乙醇，濃縮近干，以下同上操作。
5.5.2試驗(yàn)方法及結(jié)果5.5.2.1對(duì)大鼠急性心肌梗塞范圍的影響 試驗(yàn)方法同前，結(jié)果見(jiàn)表9、表10。
表9對(duì)大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支后ECG的影響(X±SD)

與對(duì)照組比較*P＜0.05**P＜0.01表10注射液對(duì)大鼠急性心肌梗塞重量的影響(X±SD)

與N.S對(duì)照組比較*P＜0.05陽(yáng)性對(duì)照香丹注射液 批號(hào)040706 華西醫(yī)科大學(xué)制藥廠試驗(yàn)結(jié)果表明，除大孔樹(shù)脂吸附組分樣品B外，各給藥組對(duì)大鼠急性心肌梗塞均有明顯保護(hù)作用，與生理鹽水組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。
5.5.2.2對(duì)小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 取小鼠按表11分組及劑量給藥，各給藥組給藥0.1ml/只，對(duì)照組給等量N.S，10min后，放入預(yù)先放15g鈉石灰的廣口瓶?jī)?nèi)，記錄小鼠死亡時(shí)間，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見(jiàn)表11。
表11對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響(X±SD)

與N.S對(duì)照組比較*P＜0.05**P＜0.01試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品B和樣品B有明顯耐缺氧作用，與生理鹽水組比較均有顯著性差異(P＜0.05、**P＜0.01)，其余各給藥組與生理鹽水組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，各給藥組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
試驗(yàn)結(jié)果表明，葒草經(jīng)聚酰胺吸附分離部分具有一定的生理活性，能明顯改善缺血性心肌心電圖，對(duì)大鼠急性心肌梗塞有明顯保護(hù)作用。同時(shí)提示經(jīng)經(jīng)聚酰胺吸附處理后的大孔樹(shù)脂D101吸附部分和水洗液仍然具有一定的活性，尤其是對(duì)小鼠常壓耐缺氧作用較為明顯。
實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明工藝得到的產(chǎn)品比現(xiàn)有技術(shù)療效好，穩(wěn)定性高，副作用少，成本低，產(chǎn)量高，相互協(xié)同作用強(qiáng)，產(chǎn)生了良好的效果。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1葒草5份和燈盞細(xì)辛1份(份為重量份，以下實(shí)施例均為重量份)以上二味，葒草加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05-1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)65％，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04-1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至7，充分?jǐn)嚢?，靜置3小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH3，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，徑高比1∶6，吸附流速1.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物燈盞細(xì)辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)55％，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH2，55℃保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加1800毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例2葒草1份和燈盞細(xì)辛1份以上二味，葒草加4倍水煎煮1次，煎煮0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)20％，攪拌均勻，靜置6小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至4.7，充分?jǐn)嚢?，靜置1小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/4倍量的醋酸乙酯萃取1次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH1，用1/4倍量水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用1/16倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(10g，Φ4cm，徑高比1∶2，吸附流速0.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加4倍水煎煮1次，每次0.2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)20％，不斷攪拌，靜置6小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10(50℃)，用鹽酸調(diào)PH1，55℃保溫2小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH2，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加1500毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例3葒草10份和燈盞細(xì)辛10份以上二味，葒草加20倍水煎煮5次，每次5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)95％，攪拌均勻，靜置48小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至10，充分?jǐn)嚢瑁o置12小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1倍量的醋酸乙酯萃取5次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH4.5，用1倍量水飽和的正丁醇提取6次，合并正丁醇液，用1/2倍量水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(1000g，Φ10cm，徑高比1∶10，吸附流速4.0BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加20倍水煎煮5次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)90％，不斷攪拌，靜置48小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH4.5，55℃保溫10小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH5，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加2500毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例4葒革6份和燈盞細(xì)辛1.2份以上二味，葒草加12倍水煎煮3次，每次1.2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)78％，攪拌均勻，靜置14小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04～1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至8.4，充分?jǐn)嚢瑁o置3.6小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用0.6倍量的醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH3.6，用0.6倍量水飽和的正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用1/3倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加95％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(600g，Φ9.6cm，徑高比1∶5，吸附流速1.6BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加12倍水煎煮3次，每次0.6小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)65％，不斷攪拌，靜置16小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH2.2，55℃保溫7小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH3.5，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加2160毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油和司盤(pán)適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例5葒草7份和燈盞細(xì)辛1.4份以上二味，葒草加14倍水煎煮4次，每次1.4小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)90％，攪拌均勻，靜置16小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04～1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至4.9，充分?jǐn)嚢?，靜置4小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用0.7倍量的醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH4.2，用0.7倍量水飽和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用1/6倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加96％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(700g，Φ10cm，徑高比1∶5，吸附流速1.7BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加14倍水煎煮4次，每次0.7小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)75％，不斷攪拌，靜置20小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH2.4，55℃保溫7小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH4，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加2500毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油和土溫適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例6葒草8份和燈盞細(xì)辛1.6份以上二味，葒草加16倍水煎煮4次，每次4.8小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)95％，攪拌均勻，靜置20小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04～1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至10，充分?jǐn)嚢?，靜置4.4小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用4/5倍量的醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH4.4，用4/5倍量水飽和的正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用1/5倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(800g，Φ10cm，徑高比1∶4，吸附流速1.8BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加16倍水煎煮4次，每次0.8小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)85％，不斷攪拌，靜置24小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH2.6，55℃保溫8小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH5，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加2500毫升注射用水，攪拌使溶，再加入磷脂適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例7葒草9份和燈盞細(xì)辛1.8份以上二味，葒草加18倍水煎煮5次，每次1.8小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)20～95％，攪拌均勻，靜置6～48小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04～1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至10，充分?jǐn)嚢瑁o置5.4小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用0.9倍量的醋酸乙酯萃取5次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH4.5，用0.9倍量水飽和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用1/5倍量水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(900g，Φ10cm，徑高比1∶3，吸附流速1.9BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加18倍水煎煮3次，每次0.9小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)90％，不斷攪拌，靜置28小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH3，55℃保溫8小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH4.5，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加2500毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例8葒草10份和燈盞細(xì)辛2份以上二味，葒草加20倍水煎煮5次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)95％，攪拌均勻，靜置24小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04～1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至10，充分?jǐn)嚢瑁o置6小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1倍量的醋酸乙酯萃取5次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH4.5，用1倍量水飽和的正丁醇提取6次，合并正丁醇液，用1/4倍量水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(1000g，Φ10cm，徑高比1∶3，吸附流速2.0BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加20倍水煎煮5次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)90％，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH4.5，55℃保溫4小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH5，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加2500毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例9葒草4份和燈盞細(xì)辛1份以上二味，葒草加8倍水煎煮2次，每次2.4小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)55％，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04～1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至6，充分?jǐn)嚢?，靜置6小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用2/5倍量的醋酸乙酯萃取1～5次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH2.4，用2/5倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/10倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加70％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(400g，Φ6.4cm，徑高比1∶7，吸附流速0.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加8倍水煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)55％，不斷攪拌，靜置24小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH3.5，55℃保溫8小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH3，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加1500毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
實(shí)施例10葒草5份和燈盞細(xì)辛1份以上二味，葒草加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05-1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)65％，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04-1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至7，充分?jǐn)嚢瑁o置3小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH3，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，徑高比1∶6，吸附流速1.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)55％，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH2，55℃保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，再加入甘露醇及阿司帕坦，混勻，制成顆粒，干燥，即得顆粒劑。
實(shí)施例11葒草5份和燈盞細(xì)辛1份以上二味，葒草加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05-1.07(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)65％，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04-1.06(50℃)，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至7，充分?jǐn)嚢瑁o置3小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH3，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱(500g，Φ8cm，徑高比1∶6，吸附流速1.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09-1.11(50℃)，加乙醇使含醇量達(dá)55％，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.12(50℃)，用鹽酸調(diào)PH2，55℃保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。取上述兩種提取物，加入淀粉適量混勻，制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，即得膠囊劑。
權(quán)利要求
1.一種治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于按照重量組份計(jì)算它由葒草1～10份和燈盞細(xì)辛1～10份制備而成。
2.如權(quán)利要求1所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于按照重量組份計(jì)算它由葒草5份和燈盞細(xì)辛1份制備而成。
3.如權(quán)利要求1或2所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于是經(jīng)過(guò)對(duì)葒草和燈盞細(xì)辛分別提取的步驟制備的，所述步驟進(jìn)一步包括將分別提取后得到的葒草和燈盞細(xì)辛提取物合并，以該合并的提取物為藥物活性成分，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成制劑。
4.如權(quán)利要求3所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于所述分別提取，步驟如下步驟一、葒草水煮，醇沉，調(diào)PH值，上清液用醋酸乙酯萃取，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH，用正丁醇萃取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上層析柱，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物步驟二、燈盞細(xì)辛水煮，醇沉，調(diào)PH，棄上清液，沉淀用水洗，干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。
5.如權(quán)利要求4所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于進(jìn)一步包括將葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物合并，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)，制成所述中藥制劑的步驟。
6.如權(quán)利要求4所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于其中所述步驟一為葒草加4～20倍水煎煮1～5次，每次0.5～5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度為1.05～1.07，加乙醇使含醇量達(dá)20～95％，攪拌均勻，靜置6～48小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度1.04～1.06，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至4.7～10，充分?jǐn)嚢?，靜置1～12小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/4～1倍量的醋酸乙酯萃取1～5次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH1～4.5，用1/4～1倍量水飽和的正丁醇提取2-6次，合并正丁醇液，用1/16～1/2倍量水洗1～3次，減壓回收正丁醇，殘留物加45～98％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，設(shè)定聚酰胺柱參數(shù)為10～1000g，Φ4～10cm，徑高比1∶2～10，吸附流速0.5～4.0BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；其中所述步驟二為燈盞細(xì)辛加4～20倍水煎煮1～5次，每次0.2～1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度為1.09-1.11，加乙醇使含醇量達(dá)20～90％，不斷攪拌，靜置6～48小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度1.10-1.12，用鹽酸調(diào)PH1～4.5，55℃保溫2～10小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH2～5，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。
7.如權(quán)利要求6所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于進(jìn)一步包括步驟三為將葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物合并，加注射用水，攪拌使溶，再加入甘油，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水，混勻，用微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，滅菌，即得注射液。
8.如權(quán)利要求6所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于其中所述步驟一為葒草加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)65％，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度1.04-1.06，用飽和碳酸鈉調(diào)PH值至7，充分?jǐn)嚢?，靜置3小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/2倍量的醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)PH3，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加80％乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，設(shè)定聚酰胺柱參數(shù)為500g，Φ8cm，徑高比1∶6，吸附流速1.5BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；其中所述步驟二為燈盞細(xì)辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度為1.09-1.11，加乙醇使含醇量達(dá)55％，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度1.10-1.12，用鹽酸調(diào)PH2，55℃保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH3-4，微波真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物。
9.如權(quán)利要求7所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于其中所述步驟三為，將葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物合并，加1800毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105℃下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。
10.按照權(quán)利要求4所述治療冠心病心絞痛的中藥制劑，其特征在于所用上層析柱可為單獨(dú)的聚酰胺、單獨(dú)的大孔樹(shù)脂柱或兩者同時(shí)使用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療冠心病心絞痛的中藥制劑及其制備方法，按照重量組份計(jì)算它是由葒草1～10份和燈盞細(xì)辛1～10份制備而成的；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明組方精簡(jiǎn)，工藝先進(jìn)，劑型新穎，效果明顯；本發(fā)明還在于從提取工藝上逐步就驗(yàn)證了其的藥效，依照本發(fā)明提取工藝所得的水針劑能夠明顯增加心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量，改善心肌缺血、減少心肌梗塞，具有抗心肌缺血和改善缺血性心肌心電圖作用，明顯增加冠脈流量，降低心肌耗氧量。本發(fā)明水針劑具有活血化瘀、通脈止痛之功效，能迅速緩解心血瘀阻等心絞痛的癥狀，，其臨床應(yīng)用安全有效，質(zhì)量可控。
文檔編號(hào)A61K9/08GK1895367SQ200610051009
公開(kāi)日2007年1月17日 申請(qǐng)日期2006年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月18日
發(fā)明者王澤坤 申請(qǐng)人:貴州益佰制藥股份有限公司