專利名稱：一種治療急慢性咽喉炎、抗腫瘤藥物及冬凌草提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療急慢性咽喉炎、抗腫瘤藥物及冬凌草提取方法。
背景技術(shù)：
冬凌草，又名冰凌草，本品為唇形科植物碎米亞RabdosiaRubescens(Hemsl.)的干燥地上部分，主產(chǎn)于河南，山西，河北，貴州，四川等地，收錄于中國藥典1977年版一部，后又收載于1992年中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥材第一冊。
冬凌草1973年首次在濟(jì)源發(fā)現(xiàn)，河南省相關(guān)研究部門協(xié)作攻關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)冬凌草有廣泛的抗菌消炎作用和顯著的抗癌活性，主要用于治療急慢性咽喉炎、咽喉腫痛、扁桃體炎，對食管癌、賁門癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌等有顯著的治療作用。
我河南省濟(jì)源市濟(jì)世藥業(yè)有限公司相繼開發(fā)了冬凌草片、冬凌草含片、冬凌草糖漿、冬凌草膠囊等相關(guān)劑型，已形成從原料種植，原產(chǎn)地保護(hù)，產(chǎn)品開發(fā)一條成熟的產(chǎn)業(yè)鏈，已形成當(dāng)?shù)匾豁椫饕a(chǎn)業(yè)。
經(jīng)檢索，發(fā)現(xiàn)研究冬凌草的成分、藥理及臨床的一些文章摘錄如下抗癌藥物冬凌草甲素的分子構(gòu)型研究，《化學(xué)學(xué)報》，1992，50(5)冬凌草甲素的晶體結(jié)構(gòu)，《結(jié)構(gòu)化學(xué)》。1992，11(6)冬凌草甲素對家兔血流動力學(xué)的影響及其機(jī)理研究-白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報1994，20(2)冬凌草治療食管癌胃底賁門癌287例-中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志-1997，3(6)
冬凌草抗腫瘤作用研究進(jìn)展-河南醫(yī)藥信息，1998，6(9)冬凌草的研究進(jìn)展-中國藥學(xué)雜志-1998，33(10)冬凌草乙素的電子結(jié)構(gòu)與抗癌活性《河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》。1998，33(3)。
冬凌草甲素衍生物及其制備方法，中國專利，申請?zhí)枺?9101179，申請人，鄭州大學(xué)。該專利公開了在不破壞冬凌草甲素活性前提下，改變冬凌草甲素結(jié)構(gòu)為冬凌草甲素衍生物這種冬凌草甲素衍生物具有更高的抗腫瘤細(xì)胞活性。該發(fā)明提供了上述化合物的制備方法。
冬凌草甲素抗突變性研究-癌變?；儭Ｍ蛔?001，13(1)冬凌草葉提取工藝研究《時珍國醫(yī)國藥》.2001，12(4)，其摘要為探討以95％乙醇對冬凌草葉進(jìn)行提取的最佳條件(提取時間4h，兩次，加95％乙醇比10∶1，提取溫度70℃)。
中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素的新工藝《黑龍江醫(yī)藥》.2001，14(1)，該文獻(xiàn)公開了采用中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素，具有洗脫速度快，分離效率高，溶劑無毒無污染，安全、價廉、易得等優(yōu)點。經(jīng)重結(jié)晶后用薄層掃描法測定含量達(dá)99.28％，是一種簡便易行得方法。
冬凌草片治療急性咽炎一例-中國與臨床-2002，2(3)冬凌草多糖的抗腫瘤及其免疫增強(qiáng)作用-中國病理生理雜志-2002，18(11)冬凌草腔內(nèi)熱化療原發(fā)性膀胱癌遠(yuǎn)期療效觀察-中國基層醫(yī)藥-2004，11(1)14.Rapid Communications---Journal of Natural Products，2004，Vol.67，No.1Novel Mechanism of Inhibition of Nuclear Factor-KbDNA-Binding Activity by Diterpenoids Isolated from Isodonrubescens---MOLECULAR PHARMACOLOGY(68286---297，2005)---Printed in U.S.A冬凌草抗癌藥理與臨床應(yīng)用《抗癌中藥藥理與應(yīng)用》，黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社。主編，季宇彬。
中藥冬凌草有效部位抗腫瘤藥物提取物及其制備方法。中國專利，申請?zhí)枺?3125250.8，申請人，北海國發(fā)海洋生物產(chǎn)業(yè)股份有限公司。該發(fā)明屬于一種中藥制劑，特別是中藥冬凌草有效部位組合物及其制備方法，它是將冬凌草原料粉碎后經(jīng)醇提，濃縮、萃取，得冬凌草總萜粗提物，再溶解、洗脫，冷凍或噴霧干燥成粉，得冬凌草總萜，然后按藥物生產(chǎn)得針劑和口服劑。本發(fā)明藥物可用于治療包括肝癌、食管癌、胃癌、腸癌、乳腺癌、肺癌和黑色素瘤，療效顯著，無毒，無副作用，產(chǎn)品質(zhì)量可控。
從上述結(jié)果可以看出，醫(yī)療單位和科研單位對冬凌草的研究基本上只是冬凌草的臨床觀察、藥理；冬凌草甲素的結(jié)構(gòu)、藥理、藥代動力學(xué)研究、提取分離研究以及衍生物制備；冬凌草乙素的結(jié)構(gòu)與抗癌活性；冬凌草制劑傳統(tǒng)工藝研究，冬凌草二萜和三萜混合成分的提取和制備。
但上述文獻(xiàn)上未全部公開冬凌草二萜類有效部位，也未公開其提取純化分離的具體方法即超臨界萃取(或微波)提取，超濾(分子過濾)，柱層析，微波干燥，與適宜藥用輔料加工制成一定的藥物制劑，這些二萜類化合物用于治療急慢性咽喉炎及食管癌、賁門癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌等各種惡性腫瘤，獲得較好效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題就在于提供一種中藥冬凌草有效部位治療急慢性咽喉炎、抗腫瘤藥物及冬凌草提取方法。
為解決上述問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案本發(fā)明一種治療急慢性咽喉炎、抗腫瘤藥物，所述藥物活性成分為中藥冬凌草有效部位提取物，它包括冬凌草甲素、冬凌草乙素等二萜類化合物，該提取物中冬凌草二萜類化合物含量在55％以上。
本發(fā)明藥物可以為將提取物加入藥劑學(xué)可接受的藥物輔料組分，做成針劑、口服劑、外用制劑，其中口服劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、微囊、滴丸、分散片、顆粒劑、緩控釋劑、靶向制劑、口服液和噴霧劑；針劑包括水針劑和粉針劑；外用制劑包括栓劑和膏劑。
本發(fā)明同時提供了一種冬凌草的提取方法，所述提取方法為超臨界萃取或微波提取。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述冬凌草的提取方法中，所述超臨界萃取所采用的萃取溶劑可以為CO2或N2，微波提取法所采用的提取溶劑可以為乙醇、丙酮或它們的混合物。
本發(fā)明所述冬凌草提取方法中，所述超臨界萃取包括下列步驟A用液態(tài)CO2或N2或混合溶劑超臨界萃取粉碎后的冬凌草，溶劑用量為原料的6-10倍，獲得冬凌草粗提物；B冬凌草粗提物用甲醇或乙醇溶解，溶劑用量為提取物的2-5倍量，室溫放置過夜，上清液加5-10量的甲醇或乙醇，粗濾，濾液再用分子量小于10萬的超濾膜超濾，減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.03-1.10；C柱層析分離純化所述柱層析分離純化采用大孔樹脂柱層析分離，將上述濃縮后的提取物用3-5倍量中性或弱堿性的大孔樹脂吸附，30-50℃下低溫烘干，裝柱，用梯度混合溶劑為流動相進(jìn)行洗脫；D合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，40-55℃溫度下微波真空干燥，粉碎，得冬凌草二萜化合物，或者再加入丙酮溶液重結(jié)晶，得到較純的冬凌草甲素、乙素等單體化合物。
本發(fā)明冬凌草提取方法中，所述微波提取法為A加5-10倍量提取溶劑，微波提取兩次，收集溶劑，減壓回收溶劑，得冬凌草粗提物；
B冬凌草粗提物用甲醇或乙醇溶解，溶劑用量為提取物的2-5倍量，室溫放置過夜，上清液加5-10量的甲醇或乙醇，粗濾，濾液再用分子量小于10萬的超濾膜超濾，超濾液減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10；C柱層析分離純化所述柱層析分離純化采用大孔樹脂柱層析分離，將上述濃縮后的提取物用3-5倍量中性或弱堿性的大孔樹脂吸附，30-50℃下低溫烘干，裝柱，用梯度混合溶劑為流動相進(jìn)行洗脫；D合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，40-55℃溫度下微波真空干燥，粉碎，得冬凌草二萜化合物，或者再加入丙酮溶液重結(jié)晶，得到較純的冬凌草甲素、乙素等單體化合物。
上述方法中，所述微波真空干燥的微波頻率可以為915-2450兆赫，真空度可以為0.04-0.09Mp。
上述方法中，所述柱層析分離純化步驟可以采用硅膠或中性氧化鋁柱層析分離純化。
上述方法中，所述步驟C中的洗脫液可以為乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、石油醚或它們的混合物及水溶液。
本發(fā)明提取方法得到的二萜類化合物雜質(zhì)少、有效成分含量高，工藝節(jié)能、環(huán)保，有獨到之處。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較，具有以下顯著特點1、超臨界萃取或微波提取法環(huán)保；提取不需燃料，節(jié)能。
2、超濾過濾不需活性炭或其它過濾材料，有效成分損失少，濾材可重復(fù)使用，環(huán)保，無毒；過濾屬于分子水平，雜質(zhì)少，大大提高有效成分含量。
3、大孔樹脂分離可進(jìn)一步去除雜質(zhì)，提高有效部位的含量，達(dá)到去粗取精的目的。
4、微波干燥是一種先進(jìn)的干燥方法，利用高頻微波作用使極性分子極化作用高速振蕩激劇磨擦產(chǎn)生“熱效應(yīng)”，因此微波干燥，既可節(jié)能省時，又由于低溫可保證二萜類有效成分不被破壞，保證了藥品質(zhì)量。
具體實施例方式
請仔細(xì)核實各實施例中的數(shù)值是否為權(quán)利要求書的范圍實施例1 冬凌草超臨界萃取將凈化處理后的冬凌草原料粉碎為40目的粗粉，經(jīng)CO2超臨界萃取，萃取壓力30Mp，萃取液用量為冬凌草的6倍，分離CO2，得冬凌草粗提物，冬凌草粗提物用甲醇溶解，溶劑用量為提取物的2倍量，室溫放置過夜。上清液加5量的甲醇，粗濾，濾液再用分子量小于10萬的濾膜超濾，超濾液減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10；將上述濃縮后的提取物用3倍量中性大孔樹脂吸附，30低溫烘干，裝柱，用梯度混合溶劑為流動相進(jìn)行洗脫，洗脫液為乙醇，合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，微波真空干燥，40℃，微波頻率為915兆赫，真空度0.5Mp，物料粉碎，得冬凌草二萜化合物，或者再加入丙酮溶液重結(jié)晶，得到較純的冬凌草甲素、乙素等單體化合物。
實施例2 冬凌草超臨界萃取將凈化處理后的冬凌草原料粉碎為80目的粗粉，經(jīng)N2超臨界萃取，萃取壓力35Mp，萃取液用量為冬凌草的10倍，分離N2，得冬凌草粗提物，冬凌草粗提物用乙醇溶解，溶劑用量為提取物的5倍量，室溫放置過夜。上清液加10量的乙醇，粗濾，濾液再用分子量小于10萬的濾膜超濾，超濾液減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10；將上述濃縮后的提取物用5倍量硅膠吸附，低溫烘干50℃，裝柱，用梯度混合溶劑為流動相進(jìn)行洗脫，洗脫液為甲醇，合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，微波真空干燥55℃，微波頻率為2450兆赫，真空度0.9Mp，物料粉碎，得冬凌草二萜化合物。
實施例3 冬凌草微波提取將凈化處理后的冬凌草原料粉碎為60目的粗粉，加乙醇5倍量，微波提取兩次，收集溶劑，減壓回收溶劑，得冬凌草粗提物。冬凌草粗提物用甲醇溶解，溶劑用量為提取物的3倍量，室溫放置過夜。上清液加6量的甲醇，粗濾，濾液再用分子量小于10萬的超濾膜超濾，超濾液減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10；將上述濃縮后的提取物用4倍量中性氧化鋁吸附，40℃低溫烘干，裝柱，用梯度混合溶劑為流動相進(jìn)行洗脫，所述洗脫液為乙醇、甲醇、氯仿、丙酮和石油醚的混合物，合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，微波真空干燥，50℃，微波頻率為1500兆赫，真空度0.06Mp，物料粉碎，得冬凌草二萜化合物。
實施例4 冬凌草微波提取將凈化處理后的冬凌草原料粉碎為70目的粗粉，加10倍量的乙醇和丙酮的混合物，微波提取兩次，收集溶劑，減壓回收溶劑，得冬凌草粗提物。冬凌草粗提物用乙醇溶解，溶劑用量為提取物的4倍量，室溫放置過夜。上清液加8量的乙醇，粗濾，濾液再用分子量小于10萬的超濾膜超濾，超濾液減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10；將上述濃縮后的提取物用4倍量中性大孔樹脂吸附，50℃低溫烘干，裝柱，用梯度混合溶劑為流動相進(jìn)行洗脫，所述洗脫液為乙醇、甲醇、氯仿、丙酮和石油醚的混合水溶液，合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，微波真空干燥，50℃，微波頻率為2000兆赫，真空度0.08Mp，物料粉碎，得冬凌草二萜化合物，或者再加入丙酮溶液重結(jié)晶，得到較純的冬凌草甲素、乙素等單體化合物。
實施例5 膠囊劑的制備稱取150g二萜化合物，加淀粉45g、微分硅膠5g混勻，裝1000粒膠囊，0.2g/粒。
實施例6 分散片的制備稱取150g二萜化合物，加羧甲基淀粉鈉100g、低取代羥丙基纖維素40g、月桂醇硫酸鈉5g、微分硅膠5g混勻后壓1000片。
實施例7 水針劑的制備稱取冬凌草二萜類化合物100g，加海藻酸鈉、焦亞硫酸鈉混合均勻，加注射用水超濾，灌裝，滅菌。
實施例8 冬凌草二萜化合物對急慢性咽炎的治療二萜化合物分散片治療用于風(fēng)熱外侵、肺胃實熱、風(fēng)寒外襲等證型的咽炎，臨床觀察療效較好，總有效率98.8％，且未發(fā)現(xiàn)有何不良反應(yīng)。
實施例9 治療例冬凌草二萜化合物對人體食管癌109細(xì)胞珠、人體肝癌BEL-7402細(xì)胞珠、艾氏腹水癌和S180等具有明顯的抗腫瘤作用。
冬凌草二萜化合物對人體食管癌109細(xì)胞珠、人體肝癌BEL-7402細(xì)胞珠、艾氏腹水癌和S180有明顯的殺傷作用，有效濃度為6ug/ml該細(xì)胞珠的細(xì)胞生長抑制率分別為60％、90％、81％、86％。冬凌草二萜化合物可明顯減少S期細(xì)胞，延緩或阻斷G2期細(xì)胞進(jìn)入M期，對M期及對G0期細(xì)胞均有殺傷作用。
實施例10上述實施例采用以下標(biāo)準(zhǔn)1.鑒別薄層層析法(TLC)冬凌草對照藥材甲醇超聲波提取濃縮液與藥物用甲醇溶解后，用薄層展開，展開劑氯仿-異丙醇(20∶2)，碘蒸汽熏蒸顯色。
2.含量測定高效液相法(HPLC)測定冬凌草二萜化合物中冬凌草甲素含量，計不低于10％(提取物中二萜總量)，傳統(tǒng)提取冬凌草甲素占二萜含量的3.8％。
色譜柱C18；流動相MeOH-H2O(50∶50)；檢測波長240nm(冬凌草甲素)；239nm(冬凌草乙素)。
本發(fā)明不局限于上述最佳實施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下得出的其他任何與本發(fā)明相同或相近似的產(chǎn)品，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種治療急慢性咽喉炎、抗腫瘤藥物，其特征在于所述藥物活性成分為中藥冬凌草有效部位提取物，它包括冬凌草甲素、冬凌草乙素等二萜類化合物，該提取物中冬凌草二萜類化合物含量在55％以上。
2.如權(quán)利要求1所述的治療急慢性咽喉炎、抗腫瘤藥物，其特征在于將提取物加入藥劑學(xué)可接受的藥物輔料組分，做成針劑、口服劑、外用制劑，其中口服劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、微囊、滴丸、分散片、顆粒劑、緩控釋劑、靶向制劑、口服液和噴霧劑；針劑包括水針劑和粉針劑；外用制劑包括栓劑和膏劑。
3.一種冬凌草的提取方法，其特征在于所述提取方法為超臨界萃取或微波提取。
4.如權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于所述超臨界萃取所采用的萃取溶劑為CO2或N2，微波提取法所采用的提取溶劑為乙醇、丙酮或它們的混合物。
5.如權(quán)利要求4所述的提取方法，其特征在于所述超臨界萃取包括下列步驟A用液態(tài)CO2或N2或混合溶劑超臨界萃取粉碎后的冬凌草，溶劑用量為原料的6-10倍，獲得冬凌草粗提物；B冬凌草粗提物用甲醇或乙醇溶解，溶劑用量為提取物的2-5倍量，室溫放置過夜，上清液加5-10量的甲醇或乙醇，粗濾，濾液再用分子量小于10萬的超濾膜超濾，減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.03-1.10；C柱層析分離純化所述柱層析分離純化采用大孔樹脂柱層析分離，將上述濃縮后的提取物用3-5倍量中性或弱堿性的大孔樹脂吸附，30-50℃下低溫烘干，裝柱，用梯度混合溶劑為流動相進(jìn)行洗脫；D合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，40-55℃溫度下微波真空干燥，粉碎，得冬凌草二萜化合物，或者再加入丙酮溶液重結(jié)晶，得到較純的冬凌草甲素、乙素等單體化合物。
6.如權(quán)利要求4所述的提取方法，其特征在于所述微波提取法為A加5-10倍量的提取溶劑，微波提取兩次，收集溶劑，減壓回收溶劑，得冬凌草粗提物；B冬凌草粗提物用甲醇或乙醇溶解，溶劑用量為提取物的2-5倍量，室溫放置過夜，上清液加5-10量的甲醇或乙醇，粗濾，濾液再用分子量小于10萬的超濾膜超濾，超濾液減壓濃縮回收溶劑，濃縮至相對密度1.05-1.10；C柱層析分離純化所述柱層析分離純化采用大孔樹脂柱層析分離，將上述濃縮后的提取物用3-5倍量中性或弱極性的大孔樹脂吸附，30-50℃下低溫烘干，裝柱，用梯度混合溶劑為流動相進(jìn)行洗脫；D合并洗脫液，減壓濃縮去除溶劑，40-55℃溫度下微波真空干燥，粉碎，得冬凌草二萜化合物，或者再加入丙酮溶液重結(jié)晶，得到較純的冬凌草甲素、乙素等單體化合物。
7.如權(quán)利要求5或6所述的提取方法，其特征在于所述微波真空干燥的微波頻率為915-2450兆赫，真空度0.04-0.09Mp。
8.如權(quán)利要求5或6所述的提取方法，其特征在于所述柱層析分離純化步驟采用硅膠或中性氧化鋁柱層析分離純化。
9.如權(quán)利要求5或6所述的提取方法，其特征在于所述步驟C中的洗脫液為乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、石油醚或它們的混合物及水溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療急慢性咽喉炎、抗腫瘤藥物，所述藥物活性成分為中藥冬凌草有效部位提取物，它包括冬凌草甲素、冬凌草乙素等二萜類化合物，該提取物中冬凌草二萜類化合物含量在55％以上。本發(fā)明用于治療急慢性咽喉炎及各種惡性腫瘤，療效顯著，無毒副作用。本發(fā)明同時提供了一種冬凌草的提取方法，所述提取方法為超臨界萃取或微波提取。所述超臨界萃取所采用的萃取溶劑可以為CO
文檔編號A61K9/12GK1839926SQ20061000171
公開日2006年10月4日 申請日期2006年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月23日
發(fā)明者張海 申請人:張海