專利名稱：對于加速性骨再吸收的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療或預(yù)防加速性骨丟失的治療方法。
現(xiàn)有技術(shù)下列是現(xiàn)有技術(shù)清單，它們適于描述本發(fā)明領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)。
(1)Olah M.E.and Stiles G.L.The role of receptor structurein determining adenosine receptor activity，Pharmacol.There.，8555-75(2000)；(2)Poulsen S.A.and Quinn R.J.，Adenosine receptorsnewopportunities for future drugs.Bioorg.Med.Chem.，6619-641(1998)；(3)Fang X.et al.Phosphorylation and inactivation ofglycogen synthase kinase 3 by protein kinase A.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，9711960-11965(2000)；(4)Fishman，P.，et al.，Involvement of Wnt SignalingPathway in IB-MECA Mediated Suppression of Melanoma Cells，Oncogene 214060-4064(2002)；(5)Ferkey，D.M.，and Kimelman，D.GSK-3New Thoughts onan Old Enzyme，Dev.Biol，225471-479(2000)；(6)Bonvini，R，et al.Nuclear beta-catenin displaysGSK-3beta-and APC-independent proteasome sensitivity inmelanoma cells，Biochim.Biophys.Acta.，1495308-318(2000)；(7)Olah，M.E.and Stiles，G.L，The role of receptorstructure in determining adenosine receptor activity，Pharmacol.Ther，8555-75(2000)；(8)Szabo C，et al.Suppression of macrophage inflammatoryprotein(MQP)-1αproducing and collagen induced arthritis byadenosine receptor agonists.，British Journal of Pharmacology，125379-387(1998)；(9)U.S.5,773,423；(10)Nicole C.Walsh and Ellen M.Gravallese.Bone loss ininflammatory arthritisMechanism and trea tment strategies.Current Opinion in Rheumatology，16419-427(2004)；(11)Zang Hee Lee and Hong-Hee Kim.Signal transduction byreceptor activator of nuclear factor kappa B in osteoclasts.，Biochemical and Biophysical Research Communication 305211-214(2003)；發(fā)明背景人類及其它哺乳動物的多種疾病包括或與加速性骨再吸收相關(guān)。這些疾病包括但不限于骨質(zhì)疏松癥、變形性骨炎、修復(fù)性骨損失或骨質(zhì)溶解和惡性高鈣血癥。最常見的疾病是骨質(zhì)疏松癥，其最常發(fā)生于絕經(jīng)后婦女。因為與骨損失相關(guān)的疾病是慢性癥狀，因此相信適當(dāng)?shù)闹委熗ǔＪ锹灾委煛?br> 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種與骨損失相關(guān)的慢性炎癥自身免疫性疾病。1％的成年人患有RA，其特征是基質(zhì)細(xì)胞的超常增生以及造血細(xì)胞在關(guān)節(jié)內(nèi)的大量浸潤，導(dǎo)致慢性滑膜炎以及軟骨、骨胳、腱和韌帶的損害。RA患者的骨骼體積有所減少并且降低了骨周轉(zhuǎn)，其進(jìn)一步加劇了骨質(zhì)疏松癥[Perez-Edo L，et al.J.Scand J Rheumatol.，31285-290(2002)]。累積的關(guān)節(jié)損傷造成機(jī)能衰落和殘疾[Harris ED.N.Eng.1 J.Med.，3221277-1289(1990)]。大約80％的患者在開始發(fā)病的20年內(nèi)變成了殘疾人[Paulos CM，et al.Adv.Drug.Deliv.Rev.，561205-1217(2004)]。
已證明RA以及與加速性骨再吸收相關(guān)的其它疾病中的骨組織破壞主要是由破骨細(xì)胞介導(dǎo)的，也證明了由于破骨細(xì)胞從其前體細(xì)胞中分化，骨胳斷裂劑在炎癥位點激活并促進(jìn)了破骨細(xì)胞活化及存活，因此需要TNF族物質(zhì)--NF-κB配體(RANKL)的受體激動劑[Hsu H，et al.Proc.Natl.Acad.ScL U.S.A.，963540-3545(1999)]。RANKL在關(guān)節(jié)炎性關(guān)節(jié)的成骨細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、滑液成纖維細(xì)胞和T細(xì)胞的細(xì)胞外膜上有高度表達(dá)[Kwan Tat S，et al.Cytokine Growth.FactorRev.，549-60(2004)；Kotake S，et al.Arthritis.Rheum.，441003-1012(2001)]。RANKL與其受體RANK結(jié)合，RANK存在于破骨細(xì)胞原始細(xì)胞上，引起下游區(qū)PI3 K-PKB信號通道，造成轉(zhuǎn)錄因子NF-KB的激活[Udagawa N，et al.Arthritis.Res.，4281-289.(2002)；Gingery A，et al.J.Cell.Biochem.，89165-179(2003)]。
已有的證據(jù)指出腺苷在限制炎癥方面具有重要作用，主要是預(yù)防促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子產(chǎn)生例如TNF-α、IL-1和IL-6[Cronstein，B.N.J.Appl.Physiol.765-13(1994)；Eigler，A.，et al.Scand.J.Immunol，45132-139(1997)；Mabley，J.，et al.Eur.J.Pharmacol.466323-329(2003)]。從活化的或代謝性興奮細(xì)胞中釋放至細(xì)胞外環(huán)境中的腺苷與選擇性G-蛋白相關(guān)的膜受體相結(jié)合，膜受體命名為A1、A2A、A2B和A3[Stiles，G.L.，Clin.Re s.3810-18(1990)]。已發(fā)現(xiàn)腺苷的抗炎作用是由A3AR介導(dǎo)的[Szabo，C，et al.Br.J.Pharmacol.125379-387(1998)]。特別是，高選擇性A3AR激動劑IB-MECA在不同的試驗?zāi)Ｐ椭心軌蛴行У仡A(yù)防關(guān)節(jié)炎的臨床和病理學(xué)表征，包括佐劑誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(AJA)、膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)和thropomyosine誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎。作用機(jī)理是NF-kB、TNF-α和MIP-1α的減量調(diào)節(jié)[Baharav E.，et al.J.Rhematol.Accepted(2004)]。
發(fā)明概要本發(fā)明令人驚訝地發(fā)現(xiàn)了高選擇性A3AR激動劑IB-MECA能夠預(yù)防佐劑誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(AIA)小鼠模型的骨損失。如下文舉例說明，選擇性激動劑減量調(diào)節(jié)性主要信號蛋白例如NF-kB和RANKL引起了TNF-α的減量調(diào)節(jié)，以預(yù)防骨損失。
因此，根據(jù)一個方面，本發(fā)明提供了一種治療哺乳動物患者加速性骨再吸收的方法，包括對所述有治療需要的患者使用一定量的A3腺苷受體激動劑(A3AR激動劑)，所述劑量可有效地抑制骨再吸收。
本文中使用的術(shù)語“治療”表示治療以及預(yù)防療法。特別地，治療包括加速性骨再吸收和溶骨性病變發(fā)展的抑制。非限制性地，骨再吸收的治療包括與骨再吸收相關(guān)的不期望癥狀的改善(例如疼痛、骨折、骨髓受壓和高鈣血癥)，在這些癥狀發(fā)生前預(yù)防它們表現(xiàn)出來，慢化或預(yù)防由與骨損失相關(guān)性疾病的慢性階段所造成的不可逆性損傷(例如預(yù)防溶骨性病變及各部分的發(fā)展)，減輕骨再吸收相關(guān)性疾病的嚴(yán)重程度，改善骨骼復(fù)原，預(yù)防骨再吸收的發(fā)展，預(yù)防骨組織壞死，以及對于患者健康狀況的任何改善。例如，可以由下述一項或多項來證明這種改善骨量增加、與骨再吸收相關(guān)的疼痛的減輕、骨骼流分的減少等等。根據(jù)本發(fā)明，治療還可以包括上述兩種或多種的組合。
本發(fā)明說明書中的術(shù)語“加速性骨再吸收”或者與其相當(dāng)?shù)男g(shù)語“加速性骨損失”、“加速性骨組織破壞”和“破骨”指的是包括骨骼破壞在內(nèi)的任何疾病、病癥或病理狀態(tài)，可以是由炎癥介導(dǎo)的加速代謝過程引起的代謝性骨病的結(jié)果或者是任何其他病理狀態(tài)。骨再吸收相關(guān)性疾病的非限制性例子包括骨質(zhì)疏松癥、變形性骨炎、修復(fù)性骨損失、骨壞死(由外傷、失血或疾病引起的骨組織死亡或損害)，骨髓瘤、骨質(zhì)溶解和惡性高鈣血癥。
本發(fā)明說明書中的術(shù)語“A3腺苷受體激動劑”(A3AR激動劑)指的是能夠與A3腺苷受體(“A3AR”)特異性結(jié)合的任何化合物，其能夠完全或部分地激活所述受體。A3AR激動劑是通過與A3AR結(jié)合并將其激活而發(fā)揮主要作用的化合物。A3AR激動劑的優(yōu)選例子是如下文所述。
本發(fā)明說明書中A3AR激動劑的“劑量”(在本文中也稱作“有效劑量”)指的是能夠有效地使哺乳動物免于骨再吸收以及骨再吸收相關(guān)性疾病的劑量。根據(jù)本發(fā)明，對大多數(shù)受試者使用不同劑量的A3AR激動劑，然后記錄其生理學(xué)反應(yīng)作為劑量函數(shù)(例如集合了數(shù)個治療有益效果的整合“SS索引”)，可以很容易地測定能夠有效地達(dá)到預(yù)期作用的劑量。擇一地，有效劑量有時也可以在適當(dāng)?shù)膭游锬Ｐ椭羞M(jìn)行試驗操作，然后使用一種轉(zhuǎn)變方法推斷至人類從而加以測定；或者通過測定血漿濃度或測定血漿濃度時間曲線(AUC)下面積并計算有效劑量以得到可比較的血漿濃度或AUC。眾所周知，有效劑量依賴于多種因素例如給藥模式(例如口服給藥比靜脈注射需要更高的劑量，以達(dá)到所需血漿水平或AUC)；年齡、體重、體表面積、性別、健康狀況和個體的遺傳因素；使用的其他藥物等等。
在下文中，除非特別說明，劑量的表示方式是重量/Kg，是指在每次給藥時受治療患者每千克體重所使用的A3AR激動劑的重量。例如，mg/Kg和微克/Kg分別是指受治療患者每千克體重接受藥物的毫克數(shù)和微克數(shù)。
對于小鼠而言，有效劑量通常小于約1000微克/Kg，優(yōu)選小于約500微克/Kg。代表性的劑量為約1微克/Kg至約200微克/Kg，優(yōu)選劑量為約5微克/Kg至約150微克/Kg。人類相應(yīng)的有效劑量是小鼠劑量的人等效量，其可以采用下文所述的方法進(jìn)行測定。
術(shù)語“人等效量”指的是能夠在人類身上產(chǎn)生與對小鼠或大鼠使用0.001-1mg/Kg的A3AR激動劑具有相同效果的劑量。如已知，這一劑量取決于并可根據(jù)多種參數(shù)測定，例如體重、體表面積、活性試劑的吸收率、藥物清除率和代謝速率等等。
人等效量可以根據(jù)下文所述的多種轉(zhuǎn)化標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計算；或者人等效量是能夠與接受上述特定劑量的小鼠具有相似血漿水平的劑量；或者是能夠產(chǎn)生與接受特定劑量范圍的小鼠相似總曝光量值(稱作曲線下面積，‘AUC’，是所述藥物的血漿水平對于時間的函數(shù))的劑量。
眾所周知，利用本領(lǐng)域一種已知的可行性轉(zhuǎn)換公式就可以將對大鼠的X mg/Kg劑量轉(zhuǎn)化為對于其他物種(特別是人類)的等效量。轉(zhuǎn)換公式的例子如下文所述轉(zhuǎn)換公式I
體表面積相關(guān)性劑量轉(zhuǎn)換大鼠(150g)和人(70Kg)的比例是1/7大鼠劑量。這就是說，例如，大鼠的0.001-1mg/Kg相當(dāng)于人的約0.14-140微克/Kg。假設(shè)人的平均體重為70Kg，那么轉(zhuǎn)換為人的絕對劑量值就是約0.01-10mg。
轉(zhuǎn)換公式II下述轉(zhuǎn)換因子小鼠＝3，大鼠＝67。動物體重乘以轉(zhuǎn)換因子將由mg/kg變?yōu)閙g/m2人類劑量等效量。
根據(jù)這一公式，與大鼠0.001-1mg/Kg相當(dāng)?shù)娜祟悇┝繛?.16-64μg/Kg；也就是說，體重為約70Kg的人類的絕對劑量為約0.011至約11mg，與轉(zhuǎn)換公式I所示的范圍相似。
轉(zhuǎn)換公式III另一種任選的轉(zhuǎn)換是能夠產(chǎn)生與對動物用藥具有相同的血漿水平或AUC的劑量。例如，對小鼠口服使用IB-MECA后測量結(jié)果，在臨床研究中對健康的男性志愿者使用IB-MECA后進(jìn)行相同的測量，在兩個測量結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上可以計算出小鼠1微克/Kg-1,000微克/KG的劑量相當(dāng)于人類約0.14-140微克/Kg的劑量，也就是說體重為70Kg的人的總劑量為0.01-10mg。
根據(jù)上述轉(zhuǎn)換方法，對于兩種特定的A3AR激動劑例如IB-MECA和C1-IB-MECA而言，其優(yōu)選劑量為小于4mg，通常為約0.01至約2mg(分別為約0.14-28微克/Kg)，優(yōu)選約0.1-1.5mg(分別約1.4-21微克/Kg)。這一劑量可以在一天內(nèi)給藥一次、兩次或有時給藥、給藥數(shù)次。人類研究(本文中未列舉數(shù)據(jù))表明IB-MECA在人類血漿中的半衰期為約8-10小時，而其在小鼠中的半衰期僅為1.5小時。如果在一天內(nèi)多次給藥的話，考慮到累積效果，有時需要校正給藥劑量(在首次給藥衰變前進(jìn)行第二次給藥，其相較于單次給藥會產(chǎn)生累積的血漿水平)。在上述人體試驗的基礎(chǔ)上，每天給藥一次或兩次是優(yōu)選的給藥模式，然而這并不排除其它的給藥模式。
需要注意的是，除了所述治療方法以外，本發(fā)明還包括用于治療加速性骨再吸收的藥物組合物，該組合物包括一定量的活性成分A3AR激動劑及藥物可接受載體，所述劑量可有效地抑制需要此治療的患者骨再吸收。
本發(fā)明說明書中，術(shù)語“藥物可接受的載體”是指任何一種惰性、無毒的材料，其不與A3AR激動劑反應(yīng)，可添加到制劑中作為稀釋劑、載體，或者使制劑形成或堅固制劑。
載體還包括使制劑具有穩(wěn)定性、無菌和等滲性的物質(zhì)(例如抗菌性防腐劑、抗氧劑、螯合劑和緩沖液)，以預(yù)防微生物活性(例如抗微生物和抗真菌劑，如對羥苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等等)，以及使制劑具有可食用性味道或者顏色等等。
有時載體還能夠改善A3AR激動劑對于靶組織的運輸或穿透性，用于提高A3AR激動劑的穩(wěn)定性、降低清除率、具有緩釋性、減少不期望的副作用等等。
另外，本發(fā)明包括A3AR激動劑在制備用于治療加速性骨再吸收的藥物組合物中的用途。
附圖簡介為了更好地理解本發(fā)明以及明白其在實際中到底是怎樣工作的，現(xiàn)在將通過非限制性的例子以及作為參考的附圖來描述優(yōu)選的具體實施方式
，其中

圖1A-1C包括臨床分?jǐn)?shù)曲線(圖1A)、使用IB-MECA進(jìn)行治療后的AIA大鼠足厚度(圖1B)，以及圖1C為證明對照組整個足出現(xiàn)嚴(yán)重發(fā)紅和腫脹的圖(左圖)，相對應(yīng)的是IB-MECA治療組中的代表性足，其表現(xiàn)為完全正常(右圖)。
圖2A-2C包括炎癥分?jǐn)?shù)的條形圖(圖2A)，以及顯示IB-MECA治療大鼠和對照大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥變化對比的組織學(xué)橫切面(x20和x40)(圖2B)。
圖3A-3B包括纖維化分?jǐn)?shù)條形圖(圖3A)，以及顯示IB-MECA治療大鼠和對照大鼠滑膜變化對比的組織學(xué)橫切面(圖3B)。
圖4A-4B包括血管翳分?jǐn)?shù)條形圖(圖4A)，以及顯示IB-MECA治療大鼠和對照大鼠關(guān)節(jié)間隙血管翳組織變化對比的組織學(xué)橫切面(圖4B)。
圖5A-5B包括軟骨損壞分?jǐn)?shù)條形圖(圖5A)，以及顯示IB-MECA治療大鼠和對照大鼠軟骨變化對比的組織學(xué)橫切面(圖5B)。
圖6A-6B包括破骨細(xì)胞分?jǐn)?shù)條形圖(圖6A)，以及顯示IB-MECA治療大鼠和對照大鼠破骨細(xì)胞變化對比的組織學(xué)橫切面(圖6B)。
圖7A-7B包括骨組織破壞分?jǐn)?shù)條形圖(圖7A)，以及顯示IB-MECA治療大鼠和對照大鼠骨量變化對比的組織學(xué)橫切面(圖7B)。
圖8A-8B包括成骨細(xì)胞分?jǐn)?shù)條形圖(圖8A)，以及顯示IB-MECA治療大鼠和對照大鼠成骨細(xì)胞群變化對比的組織學(xué)橫切面(圖8B)。
圖9A-9B包括新骨生成分?jǐn)?shù)條形圖(圖9A)，以及顯示IB-MECA治療大鼠和未處理大鼠新骨生成對比的組織學(xué)橫切面(圖9B)。
圖10A-10D顯示了IB-MECA治療對于A3AR表達(dá)(圖10A)，足提取物中的其他關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，包括RANKL(圖10B)，PI3K；PKB/Akt；IKKα，β；NF-κB和TNF-α(圖10C)的作用，以及細(xì)胞凋亡酶半胱天冬酶-3的白細(xì)胞(WB)分析(圖10D)。
發(fā)明詳述骨頭形成(骨發(fā)生)的過程包括三個主要步驟產(chǎn)生細(xì)胞外有機(jī)基質(zhì)產(chǎn)物(類骨質(zhì))，礦化基質(zhì)以形成骨頭，和通過再吸收和再形成作用完成骨的再建。成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的細(xì)胞活性對于這一過程是必要的。成骨細(xì)胞合成了骨基質(zhì)的膠原前體，還調(diào)節(jié)其礦化作用。在骨形成發(fā)展的過程中，成骨細(xì)胞位于很小的空間(腔隙)中，周圍包圍著礦化的基質(zhì)，然后被稱為骨細(xì)胞。為了達(dá)到骨骼生長和機(jī)械性能的需要，骨骼經(jīng)歷了動態(tài)骨再塑過程，為破骨細(xì)胞引起的骨再吸收作用和成骨細(xì)胞引起的骨再形成。
一些代謝性骨疾病(例如甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥、變性性骨炎等等)的特征是成型性以及骨破壞活性有所增加。另外，破骨細(xì)胞和類破骨細(xì)胞被認(rèn)為是在介導(dǎo)炎癥誘導(dǎo)的骨損失中具有重要作用，例如炎癥關(guān)節(jié)炎(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和銀屑病關(guān)節(jié)炎)。
本發(fā)明的目標(biāo)是提供一種抑制加速性骨再吸收作用的方法，以此治療或預(yù)防異常性骨損失的后果。因此，根據(jù)第一個方面，本發(fā)明提供了一種治療哺乳動物患者加速性骨再吸收的方法，該方法包括對有此治療需要的患者使用一定劑量的A3腺苷受體激動劑(A3AR激動劑)，所述劑量能夠有效地抑制骨再吸收。
如本文所述，A3AR激動劑優(yōu)選是通過與A3AR結(jié)合并活化A3AR而發(fā)揮其主要作用的化合物。在一個具體實施方式
中，A3AR激動劑在小于100nM的范圍內(nèi)對于人類腺苷A3受體具有結(jié)合親合力(Ki)，通常是小于50nM，優(yōu)選小于20nM，優(yōu)選小于10nM，以及理想的是小于5nM。根據(jù)此具體實施方式
，優(yōu)選A3RAgs對于人類A3R的Ki小于2nM，期望小于1nM。
需要注意的是，某些A3AR激動劑會以較低的親和力(也就是說較高的Ki)和其他受體發(fā)生相互作用并使其活化。在本申請說明書中，如果一個化合物對于A3AR的親合力是它對其他腺苷受體(例如A1、A2a和A2b)親合力的至少3倍(例如其對于A3AR的Ki至少低3倍)時，那么認(rèn)為這個化合物是A3AR激動劑(也就是說一種化合物通過和A3AR結(jié)合并使其活化發(fā)揮主要作用)，優(yōu)選10倍，期望是20倍，最優(yōu)選是至少50倍。
A3AR激動劑對于人類A3AR的親和力以及其對于其他人類腺苷受體(A1、A2a和A2b)的相對親和力可以通過多種分析方法進(jìn)行測定，例如結(jié)合測定。結(jié)合測定的例子包括提供包含受體的膜并測定A3AR激動劑在置換相結(jié)合的放射性激動劑方面的能力，在功能性測定中利用能夠顯示各種人類腺苷受體的細(xì)胞并測定A3AR激動劑活化或滅活(如條件所定)的能力，例如發(fā)出下游區(qū)信號如通過cAMP增加或減少測量對于腺苷酸環(huán)化酶的作用，等等。很清楚地，如果給與的A3AR激動劑水平有所上升，那么當(dāng)其血漿水平接近A1、A2a和A2b腺苷受體的Ki值時，可能會在給藥后發(fā)生除了A3AR激活以外的這些受體的激活。因此，優(yōu)選A3AR激動劑以這樣的一個劑量使用，即在該劑量下只有A3AR能夠被激活。
某些A3AR激動劑的性質(zhì)以及它們的制備方法在下述文獻(xiàn)中有所記載，尤其是，US5,688,774、US5,773,423、US5,573,772、US5,443,836、US6,048,865、WO95/02604、WO99/20284、WO99/06053、WO97/27173以及本申請人的同系列申請09/700,751(WO01/19360)，上述所有文獻(xiàn)在此全文引用作為參考。
根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方式
，A3AR激動劑是一種通過與A3AR結(jié)合并將其活化而發(fā)揮主要作用的化合物，是具有通式(I)結(jié)構(gòu)的嘌呤衍生物及其生理學(xué)可接受的鹽 其中-R1是烷基、羥基烷基、羧基烷基或氰基烷基或者是下述通式(II)基團(tuán)
其中-Y代表氧、硫或CH2；-X1代表H、烷基，RaRbNC(＝O)-或HORc-，其中-Ra和Rb可以相同或不同，選自氫、烷基、氨基、鹵烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基，或者結(jié)合形成包含2-5個碳原子的雜環(huán)；和-Rc選自烷基、氨基、鹵烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基；-X2是H、羥基、烷基氨基、烷基酰氨基或羥基烷基；-X3和X4分別代表氫、羥基、氨基、酰氨基、疊氮基、鹵、烷基、烷氧基、羧基、次氨基、硝基、三氟醚、芳基、烷芳基、硫、硫酯、硫醚、-OCOPh、-OC(＝S)OPh或者X3和X4都是和＞C＝S相連接的氧以形成一個5元環(huán)，或者X2和X3形成式(III)環(huán) 其中R′和R″分別代表烷基基團(tuán)；-R2選自氫、鹵、烷基醚、氨基、酰肼基(hydrazido)、烷基氨基、烷氧基、硫烷氧基、吡啶基硫、烯基；炔基、硫和烷基硫；和-R3是式-NR4R5基團(tuán)，其中-R4是氫原子或選自烷基、取代烷基或芳基-NH-C(Z)-，其中Z是O、S、或NRa，其中Ra含義同上；其中當(dāng)R4是氫時-R5選自R-和S-1-苯乙基、芐基、苯乙基或苯胺基團(tuán)，在其中一個或多個位置被下述取代基取代或不取代，所述取代基選自烷基、氨基、鹵、鹵烷基、硝基、羥基、乙酰氨基、烷氧基和磺酸或其鹽；苯并二烷甲基、fururyl、L-丙基丙氨酰-氨基芐基、β-丙氨酰氨基-芐基、T-BOC-β-丙氨酰氨基芐基、苯基氨基、氨甲酰、苯氧基或環(huán)烷基；或者R5是下式基團(tuán)
或者當(dāng)R4是烷基或芳基-NH-C(Z)-時，那么R5則選自雜芳基-NRa-C(Z)-、雜芳基-C(Z)-、烷芳基-NRa-C(Z)-、烷芳基-C(Z)-、芳基-NR-C(Z)-和芳基-C(Z)-；Z代表氧、硫或胺；或上述化合物生理上可接受的鹽。
根據(jù)一種優(yōu)選的具體實施方式
，A3RAg是通式(IV)所示的核苷衍生物 其中X1、R2和R4如上文所述，及所述化合物生理上可接受的鹽。
形成本發(fā)明化合物取代基部分的非環(huán)碳水化合物(例如烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳烷基、烷芳基、烷基胺等等)是支鏈或非支鏈結(jié)構(gòu)，優(yōu)選包含一個或二至十二個碳原子。
本文中，術(shù)語“烷基”指的是任何飽和的碳水化合物，無論是直鏈或支鏈。本文中，術(shù)語“低級烷基”指的是主鏈包含1-10個碳原子的飽和碳水化合物(直鏈或支鏈)。
本文中，術(shù)語“烯基”和“炔基”指的是直鏈或支鏈碳水化合物，其中至少兩個相鄰碳原子分別通過一個二鍵或三鍵相連接。相應(yīng)地，術(shù)語“低級烯基”和“低級炔基”指的是主鏈包含2-10個碳原子的直鏈或支鏈碳水化合物。
當(dāng)在本發(fā)明中提及A3AR激動劑“生理上可接受的鹽”時，其指在醫(yī)藥工業(yè)中通常應(yīng)用的任何無毒堿金屬、堿土金屬和銨鹽，包括鈉、鉀、鋰、鈣、鎂、鋇銨和精蛋白鋅鹽，可根據(jù)本領(lǐng)域已知方法制備。該術(shù)語還包括無毒酸加成鹽，其通常由本發(fā)明化合物與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)或無機(jī)酸反應(yīng)制備而成。制得的酸加成鹽保留了生物有效性及游離堿的性質(zhì)，并且不具有毒性或者其他不期望的性質(zhì)。特別是，例子包括由無機(jī)酸得到的酸衍生物，鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等等。有機(jī)酸包括，特別是，酒石酸、乙酸、丙酸、檸檬酸、蘋果酸、丙二酸、乳酸、反丁烯二酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、羥乙酸、葡萄酸、丙酮酸、丁二酸、水楊酸和芳基磺酸，例如p-甲苯磺酸。
本發(fā)明所述通式(IV)的A3AR激動劑的特定例子包括但不限于，N6-2-(4-氨基苯基)乙基腺苷(APNEA)、N6-(4-氨基-3-碘代芐基)腺苷-5′-(N-甲基糖醛酰胺)(AB-MECA)、N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(IB-MECA)和2-氯-N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(Cl-IB-MECA)。
本發(fā)明優(yōu)選的A3AR激動劑是IB-MECA。
然而，根據(jù)另一種具體實施方式
，A3AR激動劑可以是腺苷氧化物，例如N6-芐基腺苷-5′-N-烷基糖醛酰胺-N1氧化物或N6-芐基腺苷-5′-N-二烷基糖醛酰胺-N1-氧化物，其中2-嘌呤位被烷氧基、氨基、烯基、炔基或鹵素取代。
加速性骨損失可能是由骨疾病結(jié)果的加速性代謝過程造成的，或者是由炎癥誘導(dǎo)產(chǎn)生的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，長期性炎癥能夠移除骨骼中的鈣質(zhì)，使其消弱并萎縮。炎癥介導(dǎo)的骨損失產(chǎn)生于各種疾病中，例如牙周病、骨性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及骨質(zhì)疏松癥的某些形式。
因此，根據(jù)一種具體實施方式
，本發(fā)明涉及治療由炎癥誘發(fā)的加速性骨再吸收。根據(jù)一種優(yōu)選的具體實施方式
，本發(fā)明的方法用于治療由炎癥性關(guān)節(jié)炎引起的加速性骨再吸收。
本發(fā)明還涉及用于治療本文中所述加速性骨再吸收的藥物組合物，該組合物包括一定量的A3AR激動劑作為活性成分，以及藥物可接受載體，所述劑量可有效地抑制有此治療需要的患者的骨再吸收。
根據(jù)良好的醫(yī)療經(jīng)驗可以確定本發(fā)明組合物的給藥及給藥劑量，依據(jù)個體患者的臨床狀況、給藥位置及方法、給藥日程、患者年齡、性別、體重和職業(yè)醫(yī)師已知的其他因素。載體的選擇在一定程度上取決于特定的活性成分，以及使用組合物的特定方法。相應(yīng)地，本發(fā)明適當(dāng)?shù)乃幬锝M合物有很多種。
根據(jù)優(yōu)選的具體實施方式
，藥物組合物是口服給藥的適當(dāng)形式。適于口服給藥的載體的代表性例子包括(a)溶液，其中將有效量的A3AR激動劑溶于稀釋劑例如水、鹽水、天然汁、乙醇、糖漿劑等中；(b)膠囊(如普通的硬或軟明膠膠囊，例如包含表面活性劑、潤滑劑和惰性填料)、片劑、錠劑(其中A3AR激動劑和甜味劑例如蔗糖混合，或者A3AR激動劑和惰性基質(zhì)例如明膠和甘油混合)和糖錠，每一種劑型都包含固體或顆粒狀態(tài)的預(yù)定量A3AR激動劑；(c)粉末；(d)適當(dāng)液體中的混懸劑；(e)適當(dāng)?shù)娜閯?f)脂質(zhì)體制劑；等等。
另外，本發(fā)明還涉及A3AR激動劑在制備用于治療加速性骨再吸收的藥物組合物中的應(yīng)用。
下面，本發(fā)明將通過具體的例子進(jìn)行舉例說明。可以理解的是，這些事實例是為了說明而非限制本發(fā)明。顯然，在上文的教導(dǎo)下，有可能對這些事實例進(jìn)行很多修飾和變形。因此可以理解的是，本發(fā)明可以在下述權(quán)利要求的范圍內(nèi)按照無數(shù)種可能的其他方式實施，而不局限于下文描述的特定方式。
特定實施例詳述材料和方法藥物A3AR激動劑，為GMP級化合物，通常命名為1-脫氧-1-[6-[[(3-碘代苯基)甲基]氨基]-9H-嘌呤-9-基]-N-甲基-D-核呋喃糖醛酰胺或者N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(IB-MECA)，可以根據(jù)Can-Fite生物制藥方法合成，Albany Molecular Research Inc，Albany，NY，USA。在DMSO中制備10mM的母液，然后以培養(yǎng)基或PBS稀釋以達(dá)到理想的濃度。
從Sigma購得不完全弗氏佐劑，從Difco(Detroit，USA)購得無熱力結(jié)核分支桿菌H37Ra。
拮抗大鼠A3AR的兔子多克隆抗體以及信號蛋白IKK、TNF-α、GSK-3β、細(xì)胞凋亡酶半胱天冬酶-3和磷酸特定性PKB/Akt、RANKL均從Santa Cruz Biotechnology Inc.，Ca，USA購得。NF-κB抗體從cell signaling購得。
動物模型根據(jù)Can-Fite BioPharma，Kiryat-Matalon，Petach Tikva，Israel動物保護(hù)和使用委員會已制定的指南開展試驗。動物任意地接受標(biāo)準(zhǔn)飲食和自來水。
雌性路易斯大鼠，8-10周齡，從Harlan實驗室(耶路撒冷，以色列)，在尾巴根部皮下注射(SC)100μl不完全弗氏佐劑的混懸劑，其中無熱力結(jié)核分支桿菌的濃度為10mg/ml。每組有10只動物，并且每次試驗至少進(jìn)行三次。
處理記錄以強(qiáng)飼法每天兩次對動物口服給藥。陽性對照組只接受載體(與藥物組相對應(yīng)的，僅有DMSO)，而治療組接受10μg/kg的IB-MECA。接種后第14天開始處理。
臨床疾病分?jǐn)?shù)每隔一天檢查動物的臨床關(guān)節(jié)炎。四肢的評分系統(tǒng)范圍為0-40-無關(guān)節(jié)炎；1-一個腳趾/手指關(guān)節(jié)發(fā)紅或腫脹；2-一個以上腳趾/手指關(guān)節(jié)發(fā)紅或腫脹；3-包含踝關(guān)節(jié)和跗骨-跖骨關(guān)節(jié)；4-所有足均發(fā)紅或腫脹。同時對炎癥強(qiáng)度進(jìn)行測量，方法是使用側(cè)徑器(Mitotoyo，Tokyo，Japan)測量大鼠后足直徑的增加。
組織學(xué)分?jǐn)?shù)收集載體組和CF101治療組動物足、膝蓋和髖部區(qū)域，并將其固定在10％福爾馬林緩沖液中，在鹽酸中(快速脫鈣)(PationalDiagnostics，Gr，USA)脫鈣24小時。然后將樣品包埋在石蠟中，制備成4-μm組織學(xué)切，使用蘇木精和伊紅染色。通過不知曉治療方案的病理學(xué)家評價切片，對于每一個關(guān)節(jié)都分別記錄。通過如下方法評價組織學(xué)記錄用于表示炎癥細(xì)胞浸潤范圍的分?jǐn)?shù)0-4含義如下0-正常；1-最小程度炎癥性浸潤；2-輕度浸潤3-中度浸潤；4-顯著浸潤。血管翳結(jié)構(gòu)關(guān)節(jié)組織，滑液襯里細(xì)胞超常增生。分?jǐn)?shù)分為0-4級0-正常；1-少數(shù)部位的骨密質(zhì)最小程度損失；2-外皮松質(zhì)骨輕度損失；3-很多部位中度骨損失；4-很多部位顯著骨損失；5-很多部位顯著骨損失，并且貫穿炎癥性過程或在骨皮質(zhì)的血管翳發(fā)生骨破碎和完全性增厚。上述所有的組織學(xué)參數(shù)分?jǐn)?shù)的含義特指“組織學(xué)分?jǐn)?shù)”。
爪的蛋白質(zhì)提取物切開后足的踝關(guān)節(jié)上部分。將骨組織敲打成碎片，在液氮中冷凍并于-80℃儲存直至使用。將足組織加入(4ml/g組織)RIPA提取物緩沖液中，所述緩沖液包含150mM NaCl、50mM Tris、1％NP40、0.5％脫氧膽酸鹽和0.1％SDS。組織在冰上使用polytron進(jìn)行處理，離心，對上清液進(jìn)行蛋白印跡分析。
蛋白印跡分析根據(jù)下述方法進(jìn)行足提取物的蛋白印跡分析(WB)。使用冰預(yù)冷的PBS清洗樣品，然后轉(zhuǎn)移到冰預(yù)冷的溶解緩沖液中(TNN緩沖液，50mM氨基三丁醇pH＝7.5，150mM NaCl，NP40)。7500xg離心10分鐘去除細(xì)胞碎片。利用Bio-Rad蛋白質(zhì)分析染色劑測定蛋白質(zhì)濃度。利用12％聚丙烯酰胺凝膠通過SDS-PAGE分離相當(dāng)量的樣品(50μg)。然后將解析的蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)染至硝基纖維素膜(Schleicher&Schuell，Keene，NH，USA)上。使用1％BSA對膜進(jìn)行阻斷，然后利用理想的主要抗體(稀釋1∶1000)在4℃孵化24小時。然后洗去污點，利用第二抗體在室溫下孵化1小時。使用BCIP/NBT顏色發(fā)展試劑盒(Promega，Madison，W1，USA)記錄結(jié)合。不同圖形中的數(shù)據(jù)是至少四個不同試驗的代表。
結(jié)論IB-MECA對AIA模型中關(guān)節(jié)炎分?jǐn)?shù)發(fā)展的作用關(guān)節(jié)炎的臨床表征在第14天出現(xiàn)。對照組中，臨床關(guān)節(jié)炎的最高紀(jì)錄達(dá)到了8.7±0.76，而IB-MECA治療組的臨床關(guān)節(jié)炎最高紀(jì)錄為較低的4.8±0.95(圖1A)。IB-MECA治療組顯著地降低了足水腫。同樣，IB-MECA治療組在足厚度方面產(chǎn)生了35％±1.2的抑制(圖1B)。圖1C表示的是對照組整個足部的嚴(yán)重發(fā)紅和腫脹，與其相對應(yīng)的是IB-MECA治療組中的代表性爪，其表現(xiàn)為完全正常(右)。
IB-MECA對于AIA組織學(xué)特征的作用在疾病誘導(dǎo)后的第23天，劃破動物皮膚，取出每個動物兩個后足的關(guān)節(jié)，并進(jìn)行組織學(xué)結(jié)構(gòu)檢查。在炎癥細(xì)胞浸潤、滑液超常增生、軟骨和骨組織損壞的基礎(chǔ)上，進(jìn)行組織學(xué)分析。在足的趾骨間區(qū)域發(fā)現(xiàn)了大多數(shù)的組織學(xué)變化。對照組中在膝蓋區(qū)域也發(fā)現(xiàn)了相似的變化，而IB-MECA治療組的膝蓋部分則保持完整，這就證明了未治療組中疾病的嚴(yán)重程度。綜上所述，關(guān)節(jié)組織病理學(xué)的嚴(yán)重度與臨床嚴(yán)重性指數(shù)相關(guān)聯(lián)。
與對照組大鼠中大范圍的炎癥面積相比，在經(jīng)治療大鼠的關(guān)節(jié)中觀察到了統(tǒng)計學(xué)上顯著的炎癥減少(指的是總分?jǐn)?shù)分別為0.4±0.034和3.2±0.14)(圖2A-2B)。其他滑膜細(xì)胞增生造成了滑膜增厚、纖維化、增生和肥大，在對照組中觀察到了單核粒細(xì)胞的浸潤(圖3A-3B)。相反，在IB-MECA治療組中幾乎沒有觀察到纖維化和滑膜的輕微增生。
對照組關(guān)節(jié)間隙中代替正常組織的損壞區(qū)域中存在大量的血管翳組織，而IB-MECA治療組中僅有輕微的血管翳組織產(chǎn)生(圖4A-4B)。對照組中出現(xiàn)了嚴(yán)重性軟骨損傷，其接下來會引起軟骨損失，而IB-MECA治療組動物中的軟骨結(jié)構(gòu)是正常的(圖5A-5B)。
與對照組相比，IB-MECA治療組中的破骨細(xì)胞減少了73％(圖6A-6B)。隨后對照組出現(xiàn)高水平的骨破壞(destraction)(圖7A-7B)。其結(jié)果是，在IB-MECA治療的動物中觀察到了少量的成骨細(xì)胞(圖8A-8B)以及少量的新骨生成(圖9A-9B)。
IB-MECA對從AIA鼠獲得的爪提取物中主要信號蛋白表達(dá)下游A3AR活化水平的作用切除對照組和IB-MECA治療組中動物的后足，提取蛋白質(zhì)后將樣品用于WB分析。IB-MECA治療組中觀察到了A3AR自身的調(diào)整，這證明了受體的激活及其后來發(fā)生了降解(圖10A)。A3AR的激活引起RANKL蛋白質(zhì)表達(dá)水平降低40％，所述蛋白質(zhì)在從IB-MECA治療的AIA大鼠獲得的爪提取物中。如圖10C所述，另一個信號通道是PI3K-PKB/AKT，其可以向下調(diào)節(jié)IB-MECA治療。與對照組相比，IB-MECA治療組中PI3K和PKB/AKT的蛋白表達(dá)水平有所減少，接下來是向下調(diào)節(jié)PKB/AKT下流激酶IKK的水平。作為IKK和RANKL水平降低的結(jié)果，在IB-MECA治療動物中觀察到了水平減少的NF-κB。IB-MECA治療中，這些事件使TNF-α的表達(dá)水平降低了50％。
權(quán)利要求
1.一種治療哺乳動物患者加速性骨再吸收的方法，該方法包括對所述有此治療需要的患者使用一定量的A3腺苷受體激動劑(A3AR激動劑)，所述劑量可有效地抑制骨再吸收。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述哺乳動物是人類。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，用于治療炎癥誘導(dǎo)性骨再吸收。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，用于治療炎癥性關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)的骨再吸收。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述治療包括對所述有此需要的患者口服使用A3AR激動劑。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述治療包括每天對所述患者使用A3AR激動劑一次或兩次。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述A3AR激動劑是通式(I)化合物 其中-R1是烷基、羥基烷基、羧基烷基或氰基烷基或者是下述通式(II)基團(tuán) 其中-Y代表氧、硫或CH2；-X1代表H、烷基，RaRbNC(＝O)-或HORc-，其中-Ra和Rb可以相同或不同，選自氫、烷基、氨基、鹵烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基，或者結(jié)合形成包含2-5個碳原子的雜環(huán)；和-Rc選自烷基、氨基、鹵烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基；-X2是H、羥基、烷基氨基、烷基酰氨基或羥基烷基；-X3和X4分別代表氫、羥基、氨基、酰氨基、疊氮基、鹵、烷基、烷氧基、羧基、次氨基、硝基、三氟醚、芳基、烷芳基、硫、硫酯、硫醚、-OCOPh、-OC(＝S)OPh或者X3和X4都是和＞C＝S相連接的氧以形成一個5元環(huán)，或者X2和X3形成式(III)環(huán) 其中R′和R″分別代表烷基基團(tuán)；-R2選自氫、鹵、烷基醚、氨基、酰肼基、烷基氨基、烷氧基、硫烷氧基、吡啶基硫、烯基；炔基、硫和烷基硫；和-R3是式-NR4R5基團(tuán)，其中-R4是氫原子或選自烷基、取代烷基或芳基-NH-C(Z)-，其中Z是O、S、或NRa，其中Ra含義同上；其中當(dāng)R4是氫時-R5選自R-和S-1-苯乙基、芐基、苯乙基或苯胺基團(tuán)，在其中一個或多個位置被下述取代基取代或不取代，所述取代基選自烷基、氨基、鹵、鹵烷基、硝基、羥基、乙酰氨基、烷氧基和磺酸或其鹽；苯并二烷甲基、fururyl、L-丙基丙氨酰-氨基芐基、β-丙氨酰氨基-芐基、T-BOC-β-丙氨酰氨基芐基、苯基氨基、氨甲酰、苯氧基或環(huán)烷基；或者R5是下式基團(tuán) 或者當(dāng)R4是烷基或芳基-NH-C(Z)-時，那么R5則選自雜芳基-NRa-C(Z)-、雜芳基-C(Z)-、烷芳基-NRa-C(Z)-、烷芳基-C(Z)-、芳基-NR-C(Z)-和芳基-C(Z)-；Z代表氧、硫或胺；或上述化合物生理上可接受的鹽。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述A3AR激動劑是通式(IV)所示的核苷衍生物 其中X1、R2和R4如權(quán)利要求3所述，及所述化合物生理上可接受的鹽。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述A3AR激動劑選自N6-2-(4-氨基苯基)乙基腺苷(APNEA)、N6-(4-氨基-3-碘代芐基)腺苷-5′-(N-甲基糖醛酰胺)(AB-MECA)、N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(IB-MECA)和2-氯-N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(C1-IB-MECA)。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述A3AR激動劑是IB-MECA。
11.一種用于治療加速性骨再吸收的藥物組合物，該組合物包括一定量的A3AR激動劑，所述劑量可有效地抑制哺乳動物患者骨再吸收。
12.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其劑型適于口服給藥。
13.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物，用于治療炎癥誘導(dǎo)性骨再吸收。
14.如權(quán)利要求13所述的藥物組合物，用于治療炎癥性關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)的骨再吸收。
15.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其中所述A3AR激動劑是通式(I)化合物 其中-R1是烷基、羥基烷基、羧基烷基或氰基烷基或者是下述通式(II)基團(tuán) 其中-Y代表氧、硫或CH2；-X1代表H、烷基，RaRbNC(＝O)-或HORc-，其中-Ra和Rb可以相同或不同，選自氫、烷基、氨基、鹵烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基，或者結(jié)合形成包含2-5個碳原子的雜環(huán)；和-Rc選自烷基、氨基、鹵烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基；-X2是H、羥基、烷基氨基、烷基酰氨基或羥基烷基；-X3和X4分別代表氫、羥基、氨基、酰氨基、疊氮基、鹵、烷基、烷氧基、羧基、次氨基、硝基、三氟醚、芳基、烷芳基、硫、硫酯、硫醚、-OCOPh、-OC(＝S)OPh或者X3和X4都是和＞C＝S相連接的氧以形成一個5元環(huán)，或者X2和X3形成式(III)環(huán) 其中R′和R″分別代表烷基基團(tuán)；-R2選自氫、鹵、烷基醚、氨基、酰肼基、烷基氨基、烷氧基、硫烷氧基、吡啶基硫、烯基；炔基、硫和烷基硫；和-R3是式-NR4R5基團(tuán)，其中-R4是氫原子或選自烷基、取代烷基或芳基-NH-C(Z)-，其中Z是O、S、或NRa，其中Ra含義同上；其中當(dāng)R4是氫時-R5選自R-和S-1-苯乙基、芐基、苯乙基或苯胺基團(tuán)，在其中一個或多個位置被下述取代基取代或不取代，所述取代基選自烷基、氨基、鹵、鹵烷基、硝基、羥基、乙酰氨基、烷氧基和磺酸或其鹽；苯并二烷甲基、氟芳基、L-丙基丙氨酰-氨基芐基、β-丙氨酰氨基-芐基、T-BOC-β-丙氨酰氨基芐基、苯基氨基、氨甲酰、苯氧基或環(huán)烷基；或者R5是下式基團(tuán) 或者當(dāng)R4是烷基或芳基-NH-C(Z)-時，那么R5則選自雜芳基-NRa-C(Z)-、雜芳基-C(Z)-、烷芳基-NRa-C(Z)-、烷芳基-C(Z)-、芳基-NR-C(Z)-和芳基-C(Z)-；Z代表氧、硫或胺；或上述化合物生理上可接受的鹽。
16.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其中所述A3AR激動劑是通式(IV)所示的核苷衍生物 其中X1、R2和R4如權(quán)利要求3所述，及所述化合物生理上可接受的鹽。
17.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其中所述A3AR激動劑選自N6-2-(4-氨基苯基)乙基腺苷(APNEA)、N6-(4-氨基-3-碘代芐基)腺苷-5′-(N-甲基糖醛酰胺)(AB-MECA)、N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(IB-MECA)和2-氯-N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(Cl-IB-MECA)。
18.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其中所述A3AR激動劑是IB-MECA。
19.A3AR激動劑在制備治療加速性骨再吸收的藥物組合物中的用途。
20.如權(quán)利要求19所述的用途，用于制備適于口服給藥的組合物。
21.如權(quán)利要求20所述的用途，用于制備治療炎癥誘導(dǎo)性骨再吸收的組合物。
22.如權(quán)利要求21所述的用途，用于制備治療炎癥性關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)的骨再吸收的組合物。
23.如權(quán)利要求19所述的用途，其中所述A3AR激動劑是通式(I)化合物 其中-R1是烷基、羥基烷基、羧基烷基或氰基烷基或者是下述通式(II)基團(tuán) 其中-Y代表氧、硫或CH2；-X1代表H、烷基，RaRbNC(＝O)-或HORc-，其中-Ra和Rb可以相同或不同，選自氫、烷基、氨基、鹵烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基，或者結(jié)合形成包含2-5個碳原子的雜環(huán)；和-Rc選自烷基、氨基、鹵烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和環(huán)烷基；-X2是H、羥基、烷基氨基、烷基酰氨基或羥基烷基；-X3和X4分別代表氫、羥基、氨基、酰氨基、疊氮基、鹵、烷基、烷氧基、羧基、次氨基、硝基、三氟醚、芳基、烷芳基、硫、硫酯、硫醚、-OCOPh、-OC(＝S)OPh或者X3和X4都是和＞C＝S相連接的氧以形成一個5元環(huán)，或者X2和X3形成式(III)環(huán) 其中R′和R″分別代表烷基基團(tuán)；-R2選自氫、鹵、烷基醚、氨基、酰肼基、烷基氨基、烷氧基、硫烷氧基、吡啶基硫、烯基；炔基、硫和烷基硫；和-R3是式-NR4R5基團(tuán)，其中-R4是氫原子或選自烷基、取代烷基或芳基-NH-C(Z)-，其中Z是O、S、或NRa，其中Ra含義同上；其中當(dāng)R4是氫時-R5選自R-和S-1-苯乙基、芐基、苯乙基或苯胺基團(tuán)，在其中一個或多個位置被下述取代基取代或不取代，所述取代基選自烷基、氨基、鹵、鹵烷基、硝基、羥基、乙酰氨基、烷氧基和磺酸或其鹽；苯并二烷甲基、氟芳基、L-丙基丙氨酰-氨基芐基、β-丙氨酰氨基-芐基、T-BOC-β-丙氨酰氨基芐基、苯基氨基、氨甲酰、苯氧基或環(huán)烷基；或者R5是下式基團(tuán) 或者當(dāng)R4是烷基或芳基-NH-C(Z)-時，那么R5則選自雜芳基-NRa-C(Z)-、雜芳基-C(Z)-、烷芳基-NRa-C(Z)-、烷芳基-C(Z)-、芳基-NR-C(Z)-和芳基-C(Z)-；Z代表氧、硫或胺；或上述化合物生理上可接受的鹽。
24.如權(quán)利要求19所述的用途，其中所述A3AR激動劑是通式(IV)所示的核苷衍生物 其中X1、R2和R4如權(quán)利要求3所述，及所述化合物生理上可接受的鹽。
25.如權(quán)利要求19所述的用途，其中所述A3AR激動劑選自N6-2-(4-氨基苯基)乙基腺苷(APNEA)、N6-(4-氨基-3-碘代芐基)腺苷-5′-(N-甲基糖醛酰胺)(AB-MECA)、N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(IB-MECA)和2-氯-N6-(3-碘代芐基)-腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(Cl-IB-MECA)。
26.如權(quán)利要求19所述的用途，其中所述A3AR激動劑是IB-MECA。
全文摘要
本發(fā)明涉及A
文檔編號A61P19/10GK101072554SQ200580038001
公開日2007年11月14日 申請日期2005年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月8日
發(fā)明者P·菲什曼, S·巴爾耶胡達(dá), L·麥迪 申請人:坎-菲特生物藥物有限公司