專利名稱：抗原蟲劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗原蟲劑。
背景技術(shù)：
對于采用化學(xué)療法的方式治療由原蟲引起的傳染性疾病而言，存在的最嚴(yán)重的問題是原蟲會產(chǎn)生耐藥性。例如，一個典型的例子就是惡性瘧的耐藥性。迄今為止，雖然研制了一些治療藥物，但是對這些藥物產(chǎn)生了耐藥性的原蟲也出現(xiàn)了。因此，原蟲傳染性疾病在世界范圍內(nèi)蔓延。這種原蟲傳染疾病之一為利什曼病。
利什曼病是一種由利什曼原蟲所引起、在包括南美洲在內(nèi)的熱帶地區(qū)特有的寄生蟲疾病。這種疾病是世界衛(wèi)生組織WHO所指定的六種熱帶疾病之一。在非洲、中東、中南美以及亞洲總計有大約12,000,000的患者。此外，每年有400,000人感染這種疾病。吸血昆蟲白蛉是疾病的傳播途徑。當(dāng)白蛉吸血時，吸血白蛉體內(nèi)的利什曼原蟲會通過傷口侵入，造成感染。原蟲寄生在巨噬細(xì)胞上，導(dǎo)致內(nèi)臟、皮膚以及粘膜皮膚的利什曼病的病理狀況。內(nèi)臟利什曼病的病理狀況尤其危險，嚴(yán)重的會導(dǎo)致死亡。
利什曼原蟲分為以下四類(種團(tuán)(complex))杜氏利什曼原蟲、熱帶利什曼原蟲、墨西哥利什曼原蟲和巴西利什曼原蟲。每一類引起不同的病理狀況。基本上來說，這些狀況都是由于原蟲寄生在特定器官和局部巨噬細(xì)胞上所產(chǎn)生的。內(nèi)臟利什曼病是由杜氏利什曼原蟲寄生在肝、脾臟、骨髓等的巨噬細(xì)胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞上所產(chǎn)生的，它的主要癥狀包括肝脾腫大、貧血、白細(xì)胞減少、發(fā)燒和淋巴結(jié)病。皮膚利什曼病分為以下兩類舊大陸型利什曼病和新大陸型利什曼病。舊大陸型皮膚利什曼病是由熱帶利什曼原蟲引起的，而新大陸型皮膚利什曼病是由墨西哥利什曼原蟲引起的，每種原蟲都寄生在皮膚巨噬細(xì)胞上而造成皮膚潰瘍。巴西利什曼原蟲會引起粘膜皮膚利什曼病，這種病造成粘膜和皮膚的損傷，然而它偶而也引起皮膚利什曼病。
如上所述，利什曼原蟲的類型非常多。而且，從免疫學(xué)的觀點(diǎn)來看，即便在類似的病理狀況下，在抗原性上還是存在著地域差別，這使得疫苗的研發(fā)較為困難。因此，非常需要化學(xué)療法來解決這方面的問題。
近來，五價銻(商品名Pantostam和Glucantime)已經(jīng)作為治療利什曼病的一線用藥。在上述藥物無效時，就會使用噴他脒及兩性霉素B等。然而，這些藥物可能會引起強(qiáng)烈的副作用，因此，醫(yī)生在使用它們的時候必須十分小心。另外，銻高昂的成本也是問題。
作為其它治療劑，專利文獻(xiàn)1公開了吉瑪烷內(nèi)酯型或者愈創(chuàng)內(nèi)酯型倍半萜類化合物以及包含它們的藥物。專利文獻(xiàn)2公開了一個對治療利什曼病有效的三唑衍生物。
然而，研發(fā)廉價、副作用小的治療藥物是十分值得期待的。
“紫云膏”是一種漢方軟膏劑，它是由江戶時代的外科醫(yī)生華岡青洲研制的。已知該軟膏劑具有抗炎、止痛、止血、抗菌、生肌以及其它作用。它對一些外科疾病，如燒傷、切傷、擦傷、痔瘡(包括由痔瘡引起的疼痛、肛裂、出血以及脫肛)、褥瘡、瘭疽等是有效的。該軟膏劑有效的皮膚病包括濕疹、主婦濕疹、異位性皮炎、牛皮癬、角皮病、皮膚皸裂以及干燥(嘴唇、手、腳、腳跟和肘)、腳癬、雞眼、胼胝、疣、痱子、皮膚刺激、丘疹、斑、膿皰、癤、色素斑、水皰、凍瘡、糜爛、潰瘍以及蟲咬。由于這種軟膏用于防止水皰的形成，已證明這種軟膏劑在治療燒傷方面特別有效。但是，到目前為止還沒有關(guān)于紫云膏治療熱帶傳染性皮膚病的報道。
紫云膏由紫草、當(dāng)歸、芝麻油、豬油和蜂蠟組成，紫草是紫草或新藏假紫草(新疆紫草)的根，這兩種植物都是紫草科植物。由前者得來的產(chǎn)品稱為″硬紫草″，由后者得來的產(chǎn)品稱為″軟紫草″。據(jù)文獻(xiàn)報道，其成分是萘醌染料，如紫草寧、β，β-二甲基丙烯?；喜輰?、乙?；喜輰?、異丁酰基紫草寧、異戊?；喜輰?、三丙烯酰基紫草寧、去氧紫草寧和脫水紫草素。這里用到的當(dāng)歸是東當(dāng)歸或北海當(dāng)歸。文獻(xiàn)報道它的成分是亞丁基苯并呋喃酮、黃樟素、瑟丹酮酸、鄰戊酰苯甲酸、鐮葉芹二醇(falcarindiol)、鐮葉芹醇(falcarinol)和鐮葉芹酮(falcarinolone)等。
日本特開2001-226369號公報[專利文獻(xiàn)2]日本特開2003-146877號公報發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一個廉價、副反應(yīng)少的抗原蟲劑，它是一個非常有效的抗利什曼病藥。
本發(fā)明包含以下內(nèi)容(1)一種抗原蟲劑，其含有式(I)所示的化合物、其鹽或它們的溶劑合物作為活性成分 式中，R表示-H或?；?。
(2)如(1)所述的抗原蟲劑，其中式(I)所示化合物是式(II)或式(III)所示的化合物 式中，R1表示-H、-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH(CH3)2、-C(＝O)CH2C(CH3)2OH、-C(＝O)CH2CH(CH3)2、-C(＝O)CH(CH3)CH2CH3或-C(＝O)CH＝C(CH3)2，
(3)一種抗原蟲劑，其含有來自紫草的、顯示抗原蟲活性的物質(zhì)作為有效成分。
(4)一種抗原蟲劑，其含有紫草提取物或其處理物作為有效成分。
(5)如(3)或(4)所述的抗原蟲劑，其含有當(dāng)歸的提取物或其處理物作為有效成分。
(6)一種抗原蟲劑，其含有紫云膏作為有效成分。
(7)如(1)～(6)任一項(xiàng)所述的抗原蟲劑，該抗原蟲劑是抗利什曼病藥。
(8)權(quán)利要求7所述的抗原蟲劑，該抗原蟲劑用于治療利什曼病。
本發(fā)明提供一種抗原蟲劑，這種抗原蟲劑對治療利什曼病特別有效。
本發(fā)明提供的抗原蟲劑含有天然物質(zhì)作為活性成分，副作用的問題很少。
本說明書包括作為本申請優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)的日本特許申請2004-223485號說明書和/或附圖
中記載的內(nèi)容。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)式(I) 式中，R表示-H或?；?，
所示的化合物具有很強(qiáng)的抗原蟲作用。式(I)所示的化合物具有不對稱碳原子。本化合物可以是旋光性物質(zhì)或外消旋體。式(I)所示的化合物還可以是鹽的形式。另外，式(I)所示的化合物或其鹽還可以是溶劑合物的形態(tài)。當(dāng)作為抗原蟲劑使用時，上述鹽或溶劑化物必須可藥用。
當(dāng)式(I)中的R是?；鶗r，可以是脂族?；蛘叻甲艴；?。?；奶荚訑?shù)通常為2-24個。
脂族?；牡湫屠涌梢耘e出碳原子數(shù)為1～23、優(yōu)選1～10、更優(yōu)選1～8、進(jìn)一步優(yōu)選1～6、最優(yōu)選1～4的直鏈或支鏈烷基，碳原子數(shù)為2～23、優(yōu)選2～10、更優(yōu)選2～8、進(jìn)一步優(yōu)選2～6、最優(yōu)選2～4的直鏈或支鏈烯基，或者末端上結(jié)合有羰基的碳原子數(shù)為2～23、優(yōu)選2～10、更優(yōu)選2～8、進(jìn)一步優(yōu)選2～6、最優(yōu)選2～4的直鏈或支鏈炔基。上述的脂族?；€可以被適當(dāng)?shù)娜〈〈?，例如羥基、碳原子數(shù)1～6的烷氧基、巰基、或者碳原子數(shù)1～6的烷硫基等。脂族酰基特別優(yōu)選為-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH(CH3)2、-C(＝O)CH2C(CH3)2OH、-C(＝O)CH2CH(CH3)2、-C(＝O)CH(CH3)CH2CH3或-C(＝O)CH＝C(CH3)2。
芳族?；牡湫屠涌梢耘e出末端上結(jié)合有羰基或者通過從上述脂族?；谐?個氫原子而衍生的基團(tuán)、并且可被羥基、碳原子數(shù)1～6的烷氧基、巰基、碳原子數(shù)1～6的烷硫基等適當(dāng)取代基取代的碳原子數(shù)5～12的芳基，例如苯甲?；?-萘基羰基、2-萘基羰基等。
在上述化合物中，特別優(yōu)選的化合物是下述已知化合物，即式(II)或式(III)所示的化合物 式中，R1表示-H(紫草寧)、-C(＝O)CH3(乙酰基紫草寧)、-C(＝O)CH(CH3)2(異丁?；喜輰?、-C(＝O)CH2C(CH3)2OH(β-羥基異戊?；喜輰?、-C(＝O)CH2CH(CH3)2(異戊?；喜輰?、-C(＝O)CH(CH3)CH2CH3(α-甲基正丁?；喜輰?或-C(＝O)CH＝C(CH3)2(β，β-二甲基丙烯?；喜輰?] (紫草素)也可以優(yōu)選使用兩種或多種上述化合物的混合物。
這些已知化合物可以是化學(xué)合成的，也可以是從天然產(chǎn)物中分離得到的。另外，還可以使用市售的產(chǎn)品。例如，基于式(II)的7種化合物可以從紫草中分離后使用。式(III)所示的化合物可以使用從歐紫草(Alkanna tinctoria)、昭蘇滇紫草(Onosma echoides)、田紫草等中(Lithospermum arvense)分離后使用。另外，式(I)的化合物可以由天然物質(zhì)衍生獲得。例如，該化合物可以根據(jù)Bioorganic & MedicinalChemistry Letters(生物有機(jī)及藥物化學(xué)快報)，12(10)，1375-1378，2002和日本特開昭61-151151號公報(
公開日1986年7月9日)中記載的方法從紫草寧中獲得。
本發(fā)明還涉及一種抗原蟲劑，該抗原蟲劑含有來源于紫草、顯示抗原蟲活性的物質(zhì)作為有效成分。本發(fā)明的抗原蟲劑優(yōu)選還含有當(dāng)歸的提取物或其處理物作為有效成分。
對本發(fā)明中使用的紫草或當(dāng)歸的產(chǎn)地及品種沒有特別限定。紫草或當(dāng)歸可以通過破碎、粉碎等制成粉末后使用。優(yōu)選作為提取物或其處理物使用。
提取溶劑優(yōu)選己烷。還可以使用甲醇、乙醇、丁醇、異丙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯、環(huán)己烷、氯仿、二氯甲烷等。通常，每1kg紫草或當(dāng)歸使用3～10L提取溶劑。
對于提取溫度沒有特別限定。提取溫度處于溶劑的熔點(diǎn)和沸點(diǎn)之間。還可以實(shí)施超臨界提取。另外，提取通常在大氣壓力下進(jìn)行，也可以在加壓或減壓下進(jìn)行。提取時間根據(jù)提取溫度等而不同。通常為6～24小時。
通過使用布、不銹鋼過濾器、濾紙等過濾如上獲得的提取液，以將雜質(zhì)等除去，因此可以獲得所需提取液。另外，過濾后的提取液還可以實(shí)施噴霧干燥處理、冷凍干燥處理、超臨界處理等。
如上獲得的提取物可以直接作為本發(fā)明抗原蟲劑的有效成分使用。另外，通過離子交換色譜、凝膠過濾色譜、透析等各種純化方法處理該提取物，還可以作為活性提高的處理物使用。
另外，本發(fā)明的抗原蟲劑可以通過將上述化合物或其鹽或它們的溶劑合物、紫草或當(dāng)歸的提取物或處理物與公知的藥用載體組合，制成制劑。給藥形式?jīng)]有特別的限制，可以根據(jù)需要進(jìn)行選擇。通常來說，作為片劑、膠囊劑、顆粒劑、微粒劑、散劑、液體劑、糖漿劑、混懸劑、乳劑、酏劑等口服制劑；注射劑、點(diǎn)滴劑、栓劑、吸入劑、經(jīng)皮吸收劑、經(jīng)粘膜吸收劑、貼敷劑、軟膏劑等非口服劑使用。
本發(fā)明的抗原蟲劑的給藥劑量因患者的年齡和體重、病情的嚴(yán)重程度以及給藥途徑的不同而不同。以口服給藥時，作為紫草的己烷提取物干燥粉末，給藥劑量通常是每天10～3000mg；給藥次數(shù)通常為每天1～3次。
本發(fā)明的口服制劑是使用淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、羧甲基纖維素、玉米淀粉和無機(jī)鹽等賦形劑根據(jù)常規(guī)方法制造的。
在這種制劑中，除了上述的賦形劑之外，還可以使用粘合劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、助流劑、矯味劑、著色劑、香料等。
作為粘合劑的具體例子，可以舉出微晶纖維素、微晶纖維素羧甲纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素琥珀酸醋酸酯、羧甲纖維素鈉、乙基纖維素、羧甲基乙基纖維素、羥乙基纖維素、小麥淀粉、米淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、糊精、預(yù)膠化淀粉、部分預(yù)膠化淀粉、羥丙基淀粉、支鏈淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物E、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物RS、甲基丙烯酸酯共聚物L(fēng)、甲基丙烯酸酯共聚物、聚乙烯縮醛二乙氨基醋酸酯、聚乙烯醇、阿拉伯膠、阿拉伯膠粉末、瓊脂、明膠、白色蟲膠、胺黃樹膠、精制白糖和聚乙二醇。
作為崩解劑的具體例子，可以舉出微晶纖維素、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羧甲纖維素、羧甲纖維素鈣、羧甲纖維素鈉、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、小麥淀粉、米淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、部分預(yù)膠化淀粉、羥丙基淀粉、羧甲基淀粉鈉和胺黃樹膠。
作為表面活性劑的具體例子，可以舉出大豆卵磷脂、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、倍半油酸山梨坦、三油酸山梨坦、單硬脂山梨坦、單棕櫚山梨坦、單月桂山梨坦、聚山梨酯、單硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸鈉和聚桂醇。
作為潤滑劑的具體例子，可以舉出小麥淀粉、米淀粉、玉米淀粉、硬脂酸、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、含水二氧化硅、輕質(zhì)硅酸酐、合成硅酸鋁、干燥氫氧化鋁凝膠、滑石、硅酸鋁鎂、磷酸氫鈣、無水磷酸氫鈣、蔗糖脂肪酸酯、蠟、氫化植物油和聚乙二醇。
作為助流劑的具體例子，可以舉出含水二氧化硅、輕質(zhì)硅酸酐、干燥氫氧化鋁凝膠、合成硅酸鋁和硅酸鎂。
另外，本發(fā)明中使用的抗原蟲劑在以液體劑、糖漿劑、混懸劑、乳劑和酏劑給藥時，可以含有矯味劑和著色劑。
本發(fā)明的抗原蟲劑在添加到食品、口香糖、飲料等中時，可作為所謂的特殊保健食品(如抗利什曼病食品)等。
含有來自于紫草和當(dāng)歸的成分的現(xiàn)有漢方藥紫云膏作為本發(fā)明的抗原蟲劑也優(yōu)選。由于已知紫云膏是對皮膚外傷非常有效的軟膏劑，因此其可用于治療利什曼病相關(guān)的疾病，特別是皮膚型或粘膜皮膚型利什曼病。紫云膏可以使用由Tsumura&Co、MaruishiPharmaceutical Co.，Ltd、KaneboPharmaceutical Co.，Ltd和MatsuuraKanpo Co.，Ltd提供的市售品。另外，紫云膏還可以根據(jù)如下敘述的方法制作。首先，加熱芝麻油，加入蜂蠟使之融化。之后，加入豬油使得所有的成分充分地融化。再在其中加入當(dāng)歸，當(dāng)當(dāng)歸的表面顏色變成焦糖色時，實(shí)現(xiàn)了充分的提取后取出當(dāng)歸，然后加入紫草。充分提取后取出紫草。過濾除去剩余的殘渣，放置一段時間使其凝固。采用軟膏板將凝固的產(chǎn)物充分地混煉以使得它們可以使用。
以下根據(jù)實(shí)施例更加具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍并不限定于實(shí)施例。
實(shí)施例[實(shí)施例1]測定紫草的己烷提取物(采用參考例1的方法得到)、紫草·當(dāng)歸混合物的己烷提取物(采用參考例2方法得到)、紫草寧(NagaraScience)、乙?；喜輰?Nagara Science)、β，β-二甲基丙烯?；喜輰?Nagara Science)、異丁?；喜輰?Nagara Science)、α-甲基正丁?；喜輰?Nagara Science)、異戊?；喜輰?Nagara Science)、β-羥基異戊?；喜輰?Nagara Science)和紫草素(Wako PureChemical Industries，Ltd.)的抗利什曼原蟲活性。
首先，將1～5mg各樣品溶解在二甲基亞砜(DMSO)中，制作DMSO溶液(10mg/ml)。然后，利用Medium 199培養(yǎng)基稀釋該溶液(800μg/ml)，并使其通過濾膜。將樣品溶液調(diào)整為9個濃度，在微量滴定板中接種50μl的各濃度樣品溶液和50μl最終濃度調(diào)制為2×105/ml的利什曼原蟲培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液的總量為100μl。在27℃、5％CO2下培養(yǎng)48小時后，添加10μl Tetracolor ONE試劑，培養(yǎng)6小時后，通過微量培養(yǎng)板讀數(shù)器測定OD值(450～630nm)。測定是對各樣品的各濃度(3個孔)進(jìn)行的。求出平均值制圖，求出IC50值。結(jié)果示于表1中。


如表1所示，紫草的己烷提取物、紫草·當(dāng)歸混合物的己烷提取物和紫草寧相關(guān)化合物均顯示很強(qiáng)的抗利什曼原蟲活性。
(參考例1)紫草的己烷提取物的制備將利用研磨機(jī)粉碎的干燥紫草放入茄形燒瓶內(nèi)，加入30倍量的己烷，在45℃下提取5小時。之后，進(jìn)行過濾將濾液濃縮干燥，得到提取物。
(參考例2)紫草·當(dāng)歸混合物的己烷提取物的制備分別稱取等量的利用研磨機(jī)粉碎的干燥紫草和干燥當(dāng)歸，放入茄形燒瓶內(nèi)，加入紫草和當(dāng)歸混合物30倍量的己烷，在45℃下提取5小時。之后，進(jìn)行過濾將濾液濃縮干燥，得到提取物。
實(shí)施例2對患有皮膚利什曼病的患者給與紫云膏，確認(rèn)在活體內(nèi)的治療效果。
所用紫云膏是Matsuura Kanpo Co.，Ltd.生產(chǎn)的紫云膏。1g該紫云膏的制劑如下得到將0.08g當(dāng)歸、0.30g蜂蠟、0.12g紫草、0.03g豬油、1.0g芝麻油作為原料混合，使生藥(當(dāng)歸、紫草)的有效成分轉(zhuǎn)移到油相(即進(jìn)行萃取)中，除去生藥的殘存物(提取殘渣)，從而得到。
作為受試者的皮膚利什曼病患者為26名，年齡、性別的構(gòu)成如下所示。
表2受試者的年齡性別構(gòu)成

指導(dǎo)上述26名受試者每日兩次適量涂膜紫云膏，共計4周，每周由臨床試驗(yàn)的處置醫(yī)生診斷。
在開始處置前、處置期間、處置完成后，進(jìn)行病變部位大小(mm)和狀態(tài)(干燥或濕潤)的臨床外觀觀察，將對處置的反應(yīng)分為4級進(jìn)行評價。
26名受試者中14名(53.48％)可以得到最終的追蹤調(diào)查結(jié)果。結(jié)果示于表3中。確認(rèn)紫云膏對于皮膚利什曼病的治療有效。
表3

本說明書中引用的所有出版物、專利和專利申請完整地作為參考引入到本說明書中。
權(quán)利要求
1.一種抗原蟲劑，其含有式(I)所示的化合物、其鹽或它們的溶劑合物作為活性成分 式中，R表示-H或?；?。
2.權(quán)利要求1所述的抗原蟲劑，其中式(I)所示的化合物是式(II)或式(III)所示的化合物 式中，R1表示-H、-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH(CH3)2、-C(＝O)CH2C(CH3)2OH、-C(＝O)CH2CH(CH3)2、-C(＝O)CH(CH3)CH2CH3或-C(＝O)CH＝C(CH3)2，
3.一種抗原蟲劑，其含有來自紫草(Lithospermi Radix)的、顯示抗原蟲活性的物質(zhì)作為有效成分。
4.一種抗原蟲劑，其含有紫草提取物或其處理物作為有效成分。
5.權(quán)利要求3或4所述的抗原蟲劑，其含有當(dāng)歸(Angelicae Radix)的提取物或其處理物作為有效成分。
6.一種抗原蟲劑，其含有紫云膏作為有效成分。
7.權(quán)利要求1、2、3、4或6所述的抗原蟲劑，該抗原蟲劑是抗利什曼病藥。
8.權(quán)利要求7所述的抗原蟲劑，該抗原蟲劑用于治療利什曼病。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供作為抗利什曼病藥特別有效的抗原蟲劑。所述抗原蟲劑含有式[I]所示的化合物或其鹽或者它們的溶劑合物作為有效成分。上式中，R表示－H或?；?br> 文檔編號A61K36/30GK101048154SQ20058003266
公開日2007年10月3日 申請日期2005年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月30日
發(fā)明者渕野裕之, 關(guān)田節(jié)子, 高橋真理衣, 佐竹元吉 申請人:財團(tuán)法人日本健康科學(xué)振興財團(tuán)