專利名稱：納米銀生物仿生敷料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療器械中的敷料，是利用納米技術(shù)及自組裝技術(shù)構(gòu)造的納米銀生物仿生敷料，具體說是臨床治療中傷口及燒、燙傷、創(chuàng)傷創(chuàng)面的治療覆蓋用生物敷料，進(jìn)一步說，是一種納米銀生物仿生敷料及其制備方法。
背景技術(shù)：
皮膚是維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和阻止微生物入侵的屏障。重建或恢復(fù)皮膚屏障是燒傷治療的最終目標(biāo)，在達(dá)到這個(gè)目標(biāo)之前，一個(gè)性能優(yōu)良的創(chuàng)面覆蓋物可暫時(shí)起到皮膚屏障功能的作用，提供一個(gè)有利于創(chuàng)面愈合的環(huán)境。一種理想的創(chuàng)面覆蓋物應(yīng)具有①良好的黏附性、通透性，又能控制水分蒸發(fā)，具有類似正常皮膚的水分蒸發(fā)率；②減少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)創(chuàng)面丟失，阻止細(xì)菌入侵和限制細(xì)菌在創(chuàng)面上定殖；③減輕疼痛；④良好的順應(yīng)性，具有良好的彈性和柔韌性，可隨體形覆蓋創(chuàng)面，適合于人體不同解剖部位；⑤不干擾創(chuàng)面愈合過程。不阻礙上皮化，不促使暫時(shí)的新的基質(zhì)(肉芽組織)過渡沉積。無占位性；⑥儲(chǔ)存、應(yīng)用方便；⑦對(duì)組織無刺激性、無毒性、無抗原性、無致癌性；⑧能耐受高壓或其他常用消毒方法處理，能在室溫內(nèi)長(zhǎng)期保存，并能大量生產(chǎn)。
目前創(chuàng)面覆蓋物可分為三類生物敷料、合成敷料和生物合成敷料。傳統(tǒng)的生物性敷料如異體皮膚、異種豬皮對(duì)于II度燒傷創(chuàng)面的治療起到了很好的作用，但也存在如來源緊張、抗原性高、粘附性差、創(chuàng)面易感染、換藥次數(shù)頻繁，保存和運(yùn)輸條件高，又具有交叉感染的危險(xiǎn)性等缺點(diǎn)。而各種合成敷料價(jià)格均較貴，而且各種產(chǎn)品均存在著不足，如不具有吸收滲液、通透水蒸氣性能差；通透水蒸氣太高，不能控制創(chuàng)面水分丟失，而且合成敷料是通過為創(chuàng)面提供一個(gè)微濕、微酸的環(huán)境，有利于中性粒細(xì)胞發(fā)揮作用，增強(qiáng)局部殺菌能力，但本身不具有殺菌的能力。而生物合成敷料外層為高分子材料，內(nèi)層為生物性材料構(gòu)成的組合型敷料。但因其價(jià)格昂貴，不易在臨床推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有促進(jìn)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)，良好抗菌功能，加速創(chuàng)面愈合，縮短愈合周期的納米銀生物仿生敷料及其制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種納米銀生物仿生敷料，其特征是通過納米技術(shù)及自組裝技術(shù)，在殼聚糖膜上組裝納米銀粒子層。
本發(fā)明中所述的納米銀粒子是通過自組裝技術(shù)與殼聚糖分子上的-NH2形成Ag-N鍵，使納米銀粒子均勻牢固地組裝在殼聚糖膜上。組裝在殼聚糖膜上的納米銀的粒徑大小為10～100nm。
一種納米銀生物仿生敷料的制備方法，其特征是包括納米銀粒子的制備、殼聚糖膜的制備及最終納米銀生物仿生敷料的制備
(1)納米銀粒子的制備配制AgNO3溶液后置于容器中，攪拌并加熱，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)一定時(shí)間后，脫離熱源，自然冷卻，即得到納米銀粒子溶液；(2)殼聚糖膜的制備用醋酸溶液溶解殼聚糖，然后將殼聚糖溶液抽濾，抽濾后倒入培養(yǎng)皿中，放烘箱中烘干成膜。接下來用NaOH中和殼聚糖膜中的醋酸，最后用自來水清洗即得到殼聚糖膜；(3)納米銀生物仿生敷料的制備將殼聚糖膜放在納米銀粒子溶液中，通過自組裝技術(shù)即得到納米銀生物仿生敷料。
本發(fā)明中所述的(一)納米銀粒子的制備(1)將AgNO3置于容器中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移定容，過濾后加到容器中；(2)將Na3C6H5O7·2H2O置于容器中溶解，轉(zhuǎn)移定容后過濾；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)一定時(shí)間后，脫離熱源，自然冷卻，即得到納米銀粒子溶液。
(二)殼聚糖膜的制備(1)將殼聚糖加入醋酸溶液中，攪拌至全部溶解；(2)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，再倒入培養(yǎng)皿中；(3)將培養(yǎng)皿放到烘箱中烘干成膜；
(4)將殼聚糖膜放入NaOH溶液中，加熱至沸騰以中和醋酸；(5)將用NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(6)將殼聚糖膜取出，用酒精浸泡后，紫外燈照射即得到無菌的殼聚糖膜。
(三)納米銀生物仿生敷料的制備(1)殼聚糖膜完全浸泡在過濾的納米銀粒子溶液中，低溫保存。
(2)將殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
納米銀粒子的制備(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液準(zhǔn)確稱取0.085gAgNO3置于容器中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)后加到用亞沸水潤(rùn)洗過的容器中；(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液準(zhǔn)確稱取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于容器中并用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)30min左右后，脫離熱源，自然冷卻，即得到10～100nm的納米銀粒子溶液。
殼聚糖膜的制備(1)0.5～10％醋酸溶液取0.5～10mL冰醋酸于容器中，加90～99.5mL亞沸水，混勻；
(2)1～8％殼聚糖溶液稱1～8g殼聚糖至容器中，加0.5～10％醋酸溶液100mL，攪拌至全部溶解；(3)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中，每皿10～50mL；(4)將培養(yǎng)皿平放在烘箱中烘干成膜，控制溫度在30～50℃；(5)1～10％NaOH溶液稱取5～50gNaOH于容器中，加亞沸水溶解；(6)將殼聚糖膜放入1～10％NaOH溶液中，加熱至沸騰后計(jì)時(shí)0.5～3h；(7)將NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(8)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，置于無菌的容器中，75％酒精浸泡0.5～3d后，取出，紫外燈照射1～5h，即得到無菌的殼聚糖膜。
納米銀生物仿生敷料的制備(1)在超凈工作臺(tái)中過濾納米銀粒子溶液；(2)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜完全浸泡在納米銀粒子溶液中，4℃冰箱保存0.5～4d；(3)在超凈工作臺(tái)中把殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
本發(fā)明的有益效果為以殼聚糖和納米銀為原料構(gòu)成的納米銀生物仿生敷料具有良好的促進(jìn)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)，加速創(chuàng)面愈合的功能，而且組裝在殼聚糖膜上的納米銀粒子能不斷地作用于再生細(xì)菌，具有持續(xù)、高效的殺菌特點(diǎn)，無耐藥性和過敏現(xiàn)象發(fā)生。納米銀粒子體積小，具有極大的接觸面積，在能有效地控制創(chuàng)面細(xì)菌的前提下，減少了貴金屬銀的用量。此外，雖然納米銀生物仿生敷料覆蓋傷口，早期須加以包扎、固定，但是當(dāng)滲出物變干，該敷料便與創(chuàng)面牢固粘附，可以不包扎。半透明的納米銀生物仿生敷料可方便地觀察傷口，而且創(chuàng)面愈合后，該敷料可自行與創(chuàng)面分離。使用該敷料換藥次數(shù)少，減少了換藥時(shí)的痛苦。納米銀生物仿生敷料不會(huì)產(chǎn)生耐藥性、無過敏現(xiàn)象發(fā)生。該生物仿生敷料的促進(jìn)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)、加速創(chuàng)面愈合的功能、持久抗感染能力以及良好的生物相容性，在生命科學(xué)領(lǐng)域，尤其是在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，將具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明具體實(shí)施方式
實(shí)施例一制備過程§1.納米銀粒子的制備(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液準(zhǔn)確稱取0085gAgNO3置于燒杯中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)后加到用亞沸水潤(rùn)洗過的容器中；(2)10mg/mLNa3C6H5O7·2H2O溶液準(zhǔn)確稱取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于燒杯中并用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)30min左右后，脫離熱源，自然冷卻，即得到10～100nm的納米銀粒子溶液。
§2.殼聚糖膜的制備(1)0.5％醋酸溶液取0.5mL冰醋酸于容器中，加99.5mL亞沸水，混勻；(2)1％殼聚糖溶液稱1g殼聚糖至容器中，加0.5％醋酸溶液100mL，攪拌至全部溶解；(3)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中，每皿10mL；(4)將培養(yǎng)皿平放在烘箱中烘干成膜，控制溫度在30℃；(5)1％NaOH溶液稱取5gNaOH于容器中，加亞沸水溶解；(6)將殼聚糖膜放入1％NaOH溶液中，加熱至沸騰后計(jì)時(shí)0.5h；(7)將NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(8)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，置于無菌的容器中，用75％酒精浸泡0.5d后，取出，紫外燈照射1h，即得到無菌的殼聚糖膜。
§3.納米銀生物仿生敷料的制備(1)在超凈工作臺(tái)中過濾納米銀粒子溶液；(2)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜完全浸泡在納米銀粒子溶液中，4℃冰箱保存0.5d；(3)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
實(shí)施例二§1.納米銀粒子的制備(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液準(zhǔn)確稱取0.085gAgNO3置于燒杯中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)后加到用亞沸水潤(rùn)洗過的容器中；(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液準(zhǔn)確稱取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于燒杯中并用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)30min左右后，脫離熱源，自然冷卻，即得到10～100nm的納米銀粒子溶液。
§2.殼聚糖膜的制備(1)1％醋酸溶液取1mL冰醋酸于容器中，加99mL亞沸水，混勻；(2)1.5％殼聚糖溶液稱1.5g殼聚糖至容器中，加1％醋酸溶液100mL，攪拌至全部溶解；(3)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中，每皿20mL；(4)將培養(yǎng)皿平放在烘箱中烘干成膜，控制溫度在37℃；
(5)5％NaOH溶液稱取25gNaOH于容器中，加亞沸水溶解；(6)將殼聚糖膜放入5％NaOH溶液中，加熱至沸騰后計(jì)時(shí)1h；(7)將NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(8)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，置于無菌的容器中，用75％酒精浸泡1d后，取出，紫外燈照射2h，即得到無菌的殼聚糖膜。
§3.納米銀生物仿生敷料的制備(1)在超凈工作臺(tái)中過濾納米銀粒子溶液；(2)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜完全浸泡在納米銀粒子溶液中，4℃冰箱保存1d；(3)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
實(shí)施例三§1.納米銀粒子的制備(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液準(zhǔn)確稱取0.085gAgNO3置于燒杯中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)后加到用亞沸水潤(rùn)洗過的容器中；(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液準(zhǔn)確稱取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于燒杯中并用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)30min左右后，脫離熱源，自然冷卻，即得到10～100nm的納米銀粒子溶液。
§2.殼聚糖膜的制備(1)5％醋酸溶液取5mL冰醋酸于容器中，加95mL亞沸水，混勻；(2)5％殼聚糖溶液稱5g殼聚糖至容器中，加5％醋酸溶液100mL，攪拌至全部溶解；(3)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中，每皿30mL；(4)將培養(yǎng)皿平放在烘箱中烘干成膜，控制溫度在45℃；(5)8％NaOH溶液稱取40gNaOH，于容器中，加亞沸水溶解；(6)將殼聚糖膜放入8％NaOH溶液中，加熱至沸騰后計(jì)時(shí)2h；(7)將NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(8)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，置于無菌的容器中，用75％酒精浸泡2d后，取出，紫外燈照射3h，即得到無菌的殼聚糖膜。
§3.納米銀生物仿生敷料的制備(1)在超凈工作臺(tái)中過濾納米銀粒子溶液；(2)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜完全浸泡在納米銀粒子溶液中，4℃冰箱保存2d；(3)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
實(shí)施例四§1.納米銀粒子的制備(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液準(zhǔn)確稱取0.085gAgNO3置于燒杯中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)后加入到用亞沸水潤(rùn)洗過的容器中；(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O準(zhǔn)確稱取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于燒杯中并用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)30min左右后，脫離熱源，自然冷卻，即得到10～100nm的納米銀粒子溶液。
§2.殼聚糖膜的制備(1)10％醋酸溶液取10mL冰醋酸于容器中，加90mL亞沸水，混勻；(2)8％殼聚糖溶液稱8g殼聚糖至容器中，加10％醋酸溶液100mL，攪拌至全部溶解；(3)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中，每皿50mL；(4)將培養(yǎng)皿平放在烘箱中烘干成膜，控制溫度在50℃；(5)10％NaOH溶液稱取50gNaOH于容器中，加亞沸水溶解；(6)將殼聚糖膜放入10％NaOH溶液中，加熱至沸騰后計(jì)時(shí)3h；
(7)將NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(8)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，置于無菌的容器中，用75％酒精浸泡3d后，取出，紫外燈照射5h，即得到無菌的殼聚糖膜。
§3.納米銀生物仿生敷料的制備(1)在超凈工作臺(tái)中過濾納米銀粒子溶液；(2)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜完全浸泡在納米銀粒子溶液中，4℃冰箱保存4d；(3)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
實(shí)施例五§1.納米銀粒子的制備(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液準(zhǔn)確稱取0.085gAgNO3置于燒杯中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)后加到用亞沸水潤(rùn)洗過的容器中；(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液準(zhǔn)確稱取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于燒杯中并用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)30min左右后，脫離熱源，自然冷卻，即得到10～100nm的納米銀粒子溶液。
§2.殼聚糖膜的制備(1)3％醋酸溶液取3mL冰醋酸于容器中，加97mL亞沸水，混勻；(2)3％殼聚糖溶液稱3g殼聚糖至容器中，加3％醋酸溶液100mL，攪拌至全部溶解；(3)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中，每皿15mL；(4)將培養(yǎng)皿平放在烘箱中烘干成膜，控制溫度在33℃；(5)3％NaOH溶液稱取15gNaOH，于容器中，加亞沸水溶解；(6)將殼聚糖膜放入3％NaOH溶液中，加熱至沸騰后計(jì)時(shí)1.5h；(7)將NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(8)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，置于無菌的容器中，用75％酒精浸泡1.5d后，取出，紫外燈照射4h，即得到無菌的殼聚糖膜。
§3.納米銀生物仿生敷料的制備(1)在超凈工作臺(tái)中過濾納米銀粒子溶液；(2)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜完全浸泡在納米銀粒子溶液中，4℃冰箱保存1.5d；(3)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
實(shí)施例六
§1.納米銀粒子的制備(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液準(zhǔn)確稱取0.085gAgNO3置于燒杯中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)后加入到用亞沸水潤(rùn)洗過的容器中；(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O準(zhǔn)確稱取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于燒杯中并用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)30min左右后，脫離熱源，自然冷卻，即得到10～100nm的納米銀粒子溶液。
§2.殼聚糖膜的制備(1)8％醋酸溶液取8mL冰醋酸于容器中，加92mL亞沸水，混勻；(2)7％殼聚糖溶液稱7g殼聚糖至容器中，加8％醋酸溶液100mL，攪拌至全部溶解；(3)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中，每皿40mL；(4)將培養(yǎng)皿平放在烘箱中烘干成膜，控制溫度在41℃；(5)9％NaOH溶液稱取45gNaOH于容器中，加亞沸水溶解；(6)將殼聚糖膜放入9％NaOH溶液中，加熱至沸騰后計(jì)時(shí)2.5h；(7)將NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；
(8)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，置于無菌的容器中，用75％酒精浸泡2.5d后，取出，紫外燈照射2.5h，即得到無菌的殼聚糖膜。
§3.納米銀生物仿生敷料的制備(1)在超凈工作臺(tái)中過濾納米銀粒子溶液；(2)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜完全浸泡在納米銀粒子溶液中，4℃冰箱保存3d；(3)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
下面用本發(fā)明治療SD大鼠深I(lǐng)I度切割傷的實(shí)驗(yàn)來說明本發(fā)明的技術(shù)效果。
1、材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物清潔級(jí)SD大鼠15只，每只體重200g左右，由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
1.2 實(shí)驗(yàn)器材 取皮刀，持針器，鑷子，剪刀，紗布，手術(shù)針，手術(shù)線，金屬網(wǎng)罩，1％聚維酮碘，0.05％洗必泰，8％硫化鈉溶液，3％戊巴比妥鈉1.3 實(shí)驗(yàn)步驟1.3.1 實(shí)驗(yàn)前一天，用3％戊巴比妥鈉麻醉SD大鼠，剪刀剪去背部毛發(fā)，再用8％的硫化鈉溶液脫毛。
1.3.2 手術(shù)當(dāng)天3％戊巴比妥鈉麻醉SD大鼠，常規(guī)消毒、鋪巾，用取皮刀在背部削到深I(lǐng)I度，面積在36.2±1.8cm2。生理鹽水沖洗3遍，待用。
1.3.3將SD大鼠隨機(jī)分成三組實(shí)驗(yàn)組------納米銀生物仿生敷料組將納米銀/殼聚糖膜覆蓋創(chuàng)面，周緣縫合數(shù)針，用消毒紗布覆蓋，外用金屬網(wǎng)罩固定縫合；對(duì)照I組---磺胺嘧啶銀暴露保痂組外用磺胺嘧啶銀粉，暴露保痂治療；對(duì)照II組---殼聚糖膜組將殼聚糖膜覆蓋創(chuàng)面，周緣縫合數(shù)針，用消毒紗布覆蓋，外用金屬網(wǎng)罩固定縫合。
2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)第九天揭開膜后的對(duì)比情況(見表.1)實(shí)驗(yàn)組------納米銀生物仿生敷料組，該組SD大鼠術(shù)后9天除⑤號(hào)有輕微感染尚未全愈外，其它大鼠創(chuàng)面基本愈合，愈合率分別為99.4％，98.7％，97.2％，94.6％。
對(duì)照I組---磺胺嘧啶銀暴露保痂組，該組SD大鼠術(shù)后9天有3只感染未愈，其它未感染的2只術(shù)后創(chuàng)面愈合率也僅有44.4％和28.6％。
對(duì)照II組---殼聚糖膜組，該組SD大鼠術(shù)后9天有3只感染未愈，其它未感染的2只術(shù)后9天創(chuàng)面愈合率也不高，分別為79.7％和90.9％。
2.2組織學(xué)觀察(見表.2)實(shí)驗(yàn)組-------納米銀生物仿生敷料組，由術(shù)后6天取材病理切片，可見該組SD大鼠創(chuàng)面已形成連續(xù)的上皮層，表皮各層基本形成，皮下有豐富的皮脂腺。
對(duì)照I組---磺胺嘧啶銀暴露保痂組，由術(shù)后6天取材病理切片，可見該組SD大鼠創(chuàng)面基本沒形成上皮層，皮下炎性細(xì)胞多。
對(duì)照II組---殼聚糖膜組，由術(shù)后6天取材病理切片，可見部分SD大鼠創(chuàng)面形成不連續(xù)的上皮層，皮下有少量皮脂腺，未形成上皮層的皮下有少量炎性細(xì)胞。
2.3動(dòng)物創(chuàng)面感染及愈合情況(見表.3)3、討論從本實(shí)驗(yàn)的術(shù)后9天愈合情況照片、術(shù)后6天取材病理切片可知，納米銀生物仿生敷料的促進(jìn)深I(lǐng)I度削皮創(chuàng)面愈合作用明顯好于磺胺嘧啶銀和殼聚糖膜，大大縮短了愈合周期。從表3可知，納米銀生物仿生敷料組感染少，感染面積小，程度輕；未感染SD大鼠的術(shù)后9天創(chuàng)面愈合率明顯高于其它兩組，與愈合情況照片和病理切片照片結(jié)果一致。此外，使用納米銀生物仿生敷料無皮膚紅腫等過敏現(xiàn)象發(fā)生，愈合過程中無需換藥，減少了換藥時(shí)的痛苦。而且從本實(shí)驗(yàn)觀察到，創(chuàng)面愈合后，納米銀生物仿生敷料可自行與創(chuàng)面分離，無需另外處理。
經(jīng)納米技術(shù)處理后的銀粒子其抗菌性能大大提高，將其組裝到殼聚糖膜上后，通過一定的緩釋作用，可持續(xù)不斷地作用于再生細(xì)菌，因而本敷料具有強(qiáng)烈且持久的抗感染能力。本敷料生物相容性好，無毒，加速創(chuàng)面愈合，縮短愈合周期。在創(chuàng)面覆蓋該敷料后既有隔離細(xì)菌，保護(hù)創(chuàng)面的作用，又有合適的透濕、透氣性，防止創(chuàng)面積液。此外，雖然納米銀生物仿生敷料覆蓋傷口，早期須加以包扎、固定，但是當(dāng)滲出物變干，該敷料便與創(chuàng)面牢固粘附，可以不包扎。半透明的納米銀生物仿生敷料可方便地觀察傷口。使用該敷料換藥次數(shù)少，減少了換藥時(shí)的痛苦。另外納米銀生物仿生敷料不會(huì)產(chǎn)生耐藥性、無過敏現(xiàn)象發(fā)生。
關(guān)于納米銀抗菌機(jī)理的探討納米級(jí)材料比表面積大，且與粒徑大小成反比，由于粒徑的減少，使處于表面層的原子數(shù)迅速增高，導(dǎo)致原配位不足，不飽和鍵增多，原子的表面能增高，使納米級(jí)的超微粒子的化學(xué)活性增強(qiáng)。當(dāng)納米銀生物仿生敷料覆蓋到創(chuàng)面后，納米銀粒子與含-SH的酶結(jié)合，使酶喪失活性而導(dǎo)致病菌死亡，從而達(dá)到殺菌的目的。
本產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝不復(fù)雜，成膜迅速，使用方便，可于臨床推廣應(yīng)用。
表.1實(shí)驗(yàn)第九天揭膜后情況

表.2術(shù)后六天取材病理切片情況

表.3動(dòng)物創(chuàng)面感染及愈合情況

權(quán)利要求
1.一種納米銀生物仿生敷料，其特征是通過納米技術(shù)及自組裝技術(shù)，在殼聚糖膜上組裝納米銀粒子層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米銀生物仿生敷料，其特征是納米銀粒子是通過自組裝技術(shù)與殼聚糖分子上的氨基形成銀-氮鍵，使納米銀粒子均勻牢固地組裝在殼聚糖膜上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米銀生物仿生敷料，其特征是組裝在殼聚糖膜上的納米銀粒徑大小為10～100nm。
4.一種權(quán)利要求1所述的納米銀生物仿生敷料的制備方法，其特征是包括納米銀粒子的制備、殼聚糖膜的制備及最終納米銀生物仿生敷料的制備(1)納米銀粒子的制備配制AgNO3溶液后置于容器中，攪拌并加熱，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)一定時(shí)間后，脫離熱源，自然冷卻，即得到納米銀粒子溶液；(2)殼聚糖膜的制備抽濾用醋酸溶液溶解的殼聚糖，然后倒入培養(yǎng)皿中，放烘箱中烘干成膜。最后將膜用NaOH處理，用自來水清洗即得到殼聚糖膜；(3)納米銀生物仿生敷料的制備將殼聚糖膜放在納米銀粒子溶液中，通過自組裝技術(shù)即得到納米銀生物仿生敷料。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的納米銀生物仿生敷料的制備方法，其特征是納米銀粒子的制備(1)將AgNO3置于容器中，用亞沸水溶解定容，過濾后加到容器中；(2)將Na3C6H5O7·2H2O置于容器中溶解，轉(zhuǎn)移定容后過濾；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器，沸騰后，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)一定時(shí)間后，脫離熱源，自然冷卻，即得到納米銀粒子溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的納米銀生物仿生敷料的制備方法，其特征是殼聚糖膜的制備(1)將殼聚糖加入醋酸溶液中，攪拌至全部溶解；(2)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置進(jìn)行抽濾，抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中；(3)將培養(yǎng)皿放到烘箱中烘干成膜；(4)將殼聚糖膜放入NaOH溶液中，加熱至沸騰以中和醋酸；(5)取出用NaOH處理過的殼聚糖膜，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(6)將殼聚糖膜取出經(jīng)酒精浸泡、紫外燈照射后，即得到無菌的殼聚糖膜。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的納米銀生物仿生敷料的制備方法，其特征是納米銀生物仿生敷料的制備(1)將殼聚糖膜完全浸泡在過濾的納米銀粒子溶液中，低溫保存。(2)取出殼聚糖膜，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的納米銀生物仿生敷料的制備方法，其特征是納米銀粒子的制備(1)1×10-3mol/LAgNO3溶液準(zhǔn)確稱取0.085gAgNO3置于容器中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)后加到用亞沸水潤(rùn)洗過的容器中；(2)10mg/mL Na3C6H5O7·2H2O溶液準(zhǔn)確稱取0.1gNa3C6H5O7·2H2O置于容器中，用亞沸水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容。過濾除去雜質(zhì)；(3)加熱并攪拌盛有AgNO3溶液的容器至沸騰，滴加Na3C6H5O7·2H2O溶液，反應(yīng)30min左右后，脫離熱源，自然冷卻，即得到10～100nm的納米銀粒子溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的納米銀生物仿生敷料的制備方法，其特征是殼聚糖膜的制備(1)0.5～10％醋酸溶液取0.5～10mL冰醋酸于容器中，加90～99.5mL亞沸水，混勻；(2)1～8％殼聚糖溶液稱1～8g殼聚糖至容器中，加0.5～10％醋酸溶液100mL，攪拌至全部溶解；(3)將殼聚糖溶液倒入負(fù)壓抽濾裝置抽濾。抽濾完畢，靜置除氣泡后，倒入培養(yǎng)皿中，每皿10～50mL；(4)將培養(yǎng)皿平放在烘箱中烘干成膜，控制溫度在30～50℃；(5)1～10％NaOH溶液稱取5～50gNaOH于容器中，加亞沸水溶解；(6)將殼聚糖膜放入1～10％NaOH溶液中，加熱至沸騰后計(jì)時(shí)0.5～3h；(7)將NaOH處理過的殼聚糖膜取出，用自來水清洗至中性，再用去離子水浸泡過夜；(8)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，置于無菌的容器中，用75％的酒精浸泡0.5～3d后，取出，紫外燈照射1～5h即得到無菌的殼聚糖膜。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的納米銀生物仿生敷料的制備方法，其特征是納米銀生物仿生敷料的制備(1)在超凈工作臺(tái)中過濾納米銀粒子溶液；(2)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜完全浸泡在納米銀粒子溶液中，4℃冰箱保存0.5～4d；(3)在超凈工作臺(tái)中將殼聚糖膜取出，用生理鹽水沖洗并浸泡，即得到無菌的納米銀生物仿生敷料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種納米銀生物仿生敷料及其制備方法，敷料特征通過納米技術(shù)及自組裝技術(shù)，在殼聚糖膜上組裝納米銀粒子層。方法特征(1)納米銀粒子的制備配制硝酸銀(AgNO
文檔編號(hào)A61F13/00GK1775300SQ20051009453
公開日2006年5月24日 申請(qǐng)日期2005年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月22日
發(fā)明者顧海鷹, 張逸, 魯雙云, 高文娟, 黃劍飛, 朱惠君, 姜啟玉, 于春梅, 丁斐, 何紅 申請(qǐng)人:南通大學(xué)