專利名稱：抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，其可應(yīng)用于流行性感冒的預(yù)防及治療。
背景技術(shù)：
流行性感冒是一種由濾過性病毒所引起的傳染病，該濾過性病毒為一種以核糖核酸為遺傳物質(zhì)的病毒，在病毒分類上屬于正黏液病毒科(Orthomyxoviridae)，依其引起的血清免疫反應(yīng)的不同，可分為流行性感冒病毒A、B或C型(Influenza virusA，B or C)。流行性感冒最常在冬天或早春發(fā)生，病毒通常經(jīng)由口、鼻入侵肺部，病毒種類每年不同，在人口擁擠的地區(qū)或公共場所最易受到感染。追溯歷史上的記載，可以知道此病毒每隔3-4年就引起一次發(fā)燒性呼吸道疾病的流行，至于世界性的大流行，大約每隔10年左右發(fā)生一次，1918年流行性感冒病毒的大流行至少造成二千二百萬人死亡，目前估計此病毒已造成全世界約六千萬人死亡。除了死亡以外，流行性感冒病毒也使兒童或老年人因而容易感染嚴重的并發(fā)癥，經(jīng)濟損失也大，因此，流行性感冒病毒是全世界研究的重點之一。
藍藻早在幾十億年前就存在于地球，經(jīng)過如此久的生存競爭粹煉，其中所含的精華，諸如藻藍蛋白、藍藻精、含硫多糖體，都能有效對抗微生物。美國哈佛大學醫(yī)學院、伊利諾大學、日本富山醫(yī)科藥科大學、以及德國、俄羅斯、墨西哥等國分別研究證實，藍藻萃取液，除了對微小病毒科(Picornaviridae)有明顯抑制效果外，對副黏液病毒科(Paramyxoviridae)的麻疹病毒及腮腺炎病毒、人類皰疹病毒、以及HIV均有極佳的抑制效果。
美國專利第6,346,408號公開，及其他相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)(長庚大學基礎(chǔ)醫(yī)學研究所蔡昆男碩士論文)藻類中特有的一群水溶性蛋白-藻藍蛋白，具有抑制腸病毒及流行性感冒病毒復(fù)制造成細胞病變的能力，其機轉(zhuǎn)主要有二1.預(yù)防感染；2.使受感染細胞中的病毒復(fù)制延后。藻藍蛋白濃度在0.3uM以上即可全面防止病毒的感染。由細胞實驗可清楚觀察到，此一濃度對細胞沒有任何毒性，但能有效保護細胞不受病毒侵犯及病變。藻藍蛋白也可防止流行性感冒病毒感染，有效濃度為0.04uM以上。在病毒與細胞作用前先加入藻藍蛋白，其保護細胞的效果更佳。
病毒感染會導(dǎo)致細胞病變，目前采用的預(yù)防及治療方法為疫苗及抗病毒劑。其中疫苗預(yù)防雖有成效，但并非全面適用；而在抗病毒劑方面，至今仍未見任何顯著突破。因此如何發(fā)展一種可有效抑制流行性感冒病毒復(fù)制的醫(yī)藥組合物是刻不容緩的工作。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供萃取前述醫(yī)藥組合物的方法。本發(fā)明的萃取方法可以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，其組成包含有效量的C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白、藍藻精或其混合物。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述的混合物包括C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白或藍藻精的任二組成混合。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述的混合物包括C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白及藍藻精三種組成混合而成。
所述的醫(yī)藥組合物，可進一步包含醫(yī)藥可接受的載體、佐藥、賦形劑或添加物。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀存在。
所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括食品、飲品、藥品、試劑或營養(yǎng)補充品的形式提供。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括經(jīng)由口服，洼射、吸入、皮下埋植或皮膚貼片方式施用于對象物。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于抑制各類流行性感冒病毒的感染與復(fù)制。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于抑制A型流行性感冒病毒的感染與復(fù)制。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療各類流行性感冒。
所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防各類流行性感冒。
所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療A型流行性感冒。
本發(fā)明提供的萃取上述醫(yī)藥組合物的方法，包括下列步驟(a)有機藍藻粉加入低張緩沖液，充分攪拌均勻；(b)室溫以下溫度靜置過夜；(c)分離機分離純化；(d)收集上層液測光譜，確定成分含量；以及(e)噴霧干燥；利用0-18℃的低溫萃取以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。
所述的方法，其中前述低溫萃取的步驟是于4℃下進行。
具體實施例方式
具體而言，本發(fā)明的抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，其成分除了包含有效量的C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白、藍藻精或其混合物的外，可進一步選擇性地包含醫(yī)藥可接受的載體、佐藥、賦型劑或添加物。
前述混合物可由C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白或藍藻精的任二組成混合，也可由C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白及藍藻精三種組成混合而成。
前述載體可能包含惰性成分，該惰性成分不會與本發(fā)明的醫(yī)藥組合物內(nèi)的其他成分發(fā)生實質(zhì)反應(yīng)?？衫脴藴仕幬飫┬图夹g(shù)，如描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA.中的方法。合適的藥物載體包含，例如，但不限于無菌水、生理食鹽水、抑菌食鹽水(包含約0.9％mg/ml苯基醇的食鹽水)、磷酸緩沖液食鹽水，漢克溶液、林格式乳糖液或其他制藥技術(shù)常用的載體。
前述賦型劑可以有多種功能及目的，例如在口服劑型的錠劑制造時，加入崩散劑以使錠劑能在胃腸道中崩散成小顆粒，以利吸收；又如加入著色劑以增加美觀等；至于其他非口服制劑，例如針劑、懸浮劑、軟膏、栓劑、噴霧等，各有其合適的賦型劑和作用目的。合適的賦型劑應(yīng)可包括，例如，但不限于乳糖、甘露醇、卜聚糖、葡萄糖、麩胺酸、明膠、山梨糖醇、海澡糖、蔗糖、木蜜醇、淀粉、微晶纖維素、甲基纖維素、阿拉伯膠或其各種不同組合等。賦型劑的使用已是本技術(shù)領(lǐng)域的通常知識。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物并不限于單獨使用C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白與藍藻精混合物，也可搭配其他公知預(yù)防感冒或舒緩感冒癥狀的補充劑或藥物作為佐藥合并使用，前述補充劑或藥物包括，例如，但不限于阿斯匹林、對乙酰氨基酚、雙氟芬酸鈉、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿、撲爾敏、苯海拉明、氫溴酸右美沙芬、氯哌斯丁、金剛烷胺、人工牛黃、板藍根及維生素C等。
前述有效量是指該化合物劑量在提供給一對象后能獲得有益的結(jié)果，或者，該化合物的劑量能在體內(nèi)或體外獲得預(yù)期的活性。以流行性感冒為例，相對于未接受治療的對象而言，有益的臨床結(jié)果包含癥狀的減輕、不適感的舒緩、病程縮減以及加速痊愈等。提供給對象的精確劑量必須依疾病的種類、程度或癥狀及對象個體體質(zhì)來決定，例如對象的當時健康狀況、年齡、性別、體重及對藥物的忍受度。劑量也與疾病的程度、嚴重性及種類有關(guān)。熟悉此領(lǐng)域的人士能依據(jù)前述或其他因素來決定適當?shù)膭┝俊?br> 本發(fā)明的醫(yī)藥組合物依其使用需要，可依照公知工藝，將其制成粉末狀、噴霧狀、顆粒狀，液狀，膠狀或膏狀。提供的藥物劑型依所選擇的施藥路徑及不同的目標病癥或癥狀而改變。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物能由適當?shù)穆窂椒?，例如，但不限于口服膠囊、懸浮液或藥片，或以非經(jīng)腸方式服用。非經(jīng)腸方式服用包含，例如，系統(tǒng)性服用如由肌肉，靜脈、皮下或腹腔注射。該化合物的服用方式也可以經(jīng)由口服(如飲食內(nèi)含物)，局部注射、吸入(例如支氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、口部吸入或鼻內(nèi)滴入)或經(jīng)直腸提供，提供的方式依欲治療的疾病、病癥或癥狀的類型決定。
用于口服投藥的醫(yī)藥組合物可包括固體劑量的形式，例如，但不限于膠囊、錠劑、糖衣錠、藥丸、粉末以及顆粒。也可根據(jù)在此技術(shù)中所熟知的方法，而與膜衣(例如，腸衣)一起制備，或者可將其調(diào)配以提供活性成份的控制釋放，例如，持續(xù)或延長釋放。用于口服投藥的液體劑量形式包括溶液、乳液、懸浮液、糖漿以及酏劑(elixir)。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以食品、飲品、藥品、試劑或營養(yǎng)補充品的形式提供。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適用于抑制各類流行性感冒病毒的感染與復(fù)制，尤其適用但不限于抑制流行性感冒病毒A的感染與復(fù)制。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療各類流行性感冒，尤其適用預(yù)防各類流行性感冒。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療各類流行性成冒，尤其適用但不限于預(yù)防及/或治療A型流行性感冒。
公知的有機藍藻萃取方式是利用熱水抽出，然而有機藍藻所含的蛋白質(zhì)類營養(yǎng)成分容易因為溫度過高而降解或變質(zhì)導(dǎo)致活性喪失，為克服比一問題，本發(fā)明的另一目的在于提供一萃取前述前述醫(yī)藥組合物的方法，包括下列步驟a.有機藍藻粉加入低張緩沖液，充分攪拌均勻；b.室溫以下溫度靜置過夜；c.分離機分離純化；d.收集上層液測光譜，確定成分含量；以及e.噴霧干燥；其特征在于利用低溫萃取以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。前述低張緩沖液的體積較佳為有機藍藻粉的十倍，本發(fā)明方法全程較佳在0-18℃下，最佳在4℃下進行，而且以低張溶液造成滲透壓差來使細胞壁和膜通透以幫助有效成分的釋出，相較于公知的萃取技術(shù)，其優(yōu)點在于1.可維持有效成分的生物活性；2.不需利用珠摩破藻可以避免玻璃碎屑污染及產(chǎn)熱造成的活性失效。
本發(fā)明的詳細實施態(tài)樣描述于實施例中。本發(fā)明的其他實施態(tài)樣，目的與優(yōu)點由下列描述與申請專利范圍可明確了解。
實施例以下提供一利用本發(fā)明的醫(yī)藥組合物于抑制流行性成冒病毒戒染及復(fù)制的實施例，然本實施例并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當可作各種的更動與潤飾，因此，本發(fā)明的保護范圍，當視申請的專利范圍所界定為準。
實施例一實驗材料藥品1.低溫萃取的C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白與藍藻精混合物；2.麻醉藥物Ketamine；3.A型流行性感冒病毒(Influenza WSN virus，1500pfu、150pfu、15pfu三種濃度。
小鼠自國家實驗動物中心引進親代ICR小鼠，自行繁殖至四周齡大雌性小鼠，每籠飼養(yǎng)8只為1組，室溫控制于16-18℃，光循環(huán)時間為12小時。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可抑制小鼠體內(nèi)A型流行性感冒病毒的復(fù)制。
實驗步驟小鼠(female ICR mice)養(yǎng)至五周大時，將其分為七組進行之后的實驗，分別為第I組灌食A型流行性感冒病毒1500pfu以及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
第II組灌食A型流行性感冒病毒150pfu以及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
第III組灌食A型流行性感冒病毒15pfu以及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
對照組A無灌食病毒，灌食本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
對照組B灌食A型流行性感冒病毒1500pfu以及磷酸鹽緩沖溶液。
對照組C灌食A型流行性感冒病毒150pfu以及磷酸鹽緩沖溶液。
對照組D灌食A型流行性感冒病毒15pfu以及磷酸鹽緩沖溶液。
將小鼠施以Ketamine(1mg per mouse)麻醉，立即灌食A型流行性感冒病毒(Influenza WSN virus.1500pfu、150pfu、15pfu三種濃度)。對照組同樣操作，但不灌食病毒，僅施予PBS。
為了解本發(fā)明的醫(yī)藥組合物抑制病毒的能力，在小鼠接受病毒后的6小時后開始，每天一次以灌食方式施予本發(fā)明的醫(yī)藥組合物，持續(xù)施以6天。施于劑量以18mg/kg來計算。小鼠飼養(yǎng)8天，期間每天觀察體重變化或是否死亡。
結(jié)果如表一及表二所示單獨只以病毒處理的對照組B、C和D的小鼠，分別在病毒感染后的第四天(1500pfu)、第五天(150pfu)及第七天(15pfu)死亡。但是同時給予病毒及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的實驗組別的小鼠都存活下來，初期雖然有發(fā)病的輕微癥狀，伴隨著體重減輕的現(xiàn)象，但是漸漸地都恢復(fù)健康，體重也都回升。僅施予本發(fā)明的醫(yī)藥組合物而未施予病毒的對照組，其體重則逐漸增加。
由上述實驗結(jié)果可知，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物能完全避免A型流行性成冒病毒引起的小鼠死亡。所以可作為抑制A型流行性感冒病毒用。
表一、對照組小鼠體重變化或死亡紀錄

表二、實驗組小鼠體重變化或死亡紀錄


結(jié)果顯示，事先服用本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的實驗動物，全部都能從病毒引起的癥狀中康復(fù)，然而對照組實驗動物卻會死亡，顯示本發(fā)明的醫(yī)藥組合物能有效抑制A型流行性感冒病毒的復(fù)制，達到預(yù)防病毒感染的功效。
再者，比較本發(fā)明的醫(yī)藥組合物與現(xiàn)有市售治療感冒藥物Tamiflu的作用，發(fā)現(xiàn)兩者作用相似，對流行性感冒都有早期預(yù)防及減輕癥狀的功效。進一步實驗顯示本發(fā)明的醫(yī)藥組合物與Tamiflu的IC50藥物濃度相近，但本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的細胞毒性較低，即引起副作用的機率較低。
另外，于臺灣第08911092號專利申請“藻膽色素抑制腸病毒及流行感冒病毒復(fù)制造成細胞病變的方法”顯示在A型流行性感冒病毒感染當時及之后處理以異藻藍蛋白可以達到50％抑制病毒濃度(InhibitoryConcentration 50％、IC50)。顯示本發(fā)明的醫(yī)藥組合物組成亦有治療A型流行性感冒的功效。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物在小鼠的動物試驗中所使用的劑量為18mg/kg，并對于不同濃度的A型流行性感冒病毒感染的小鼠產(chǎn)生不同程度的改善效果。正如本技術(shù)領(lǐng)域的人士所熟知，醫(yī)藥組合物的長期使用可能會產(chǎn)生劑量依賴(dose-dependent)的現(xiàn)象，即所使用的劑量愈高，其改善的效果愈明顯，因此本醫(yī)藥組合物的用量可隨時程、癥狀改善程度而有所調(diào)整。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物也適用于小鼠以外的所有哺乳類動物，其適用劑量的換算為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。例如以小鼠劑量與人類劑量的換算而言，可以依照肝表面積換算法；或是于小鼠與人體之間給予1至100的系數(shù)，將小鼠劑量除以該系數(shù)，則得到人體的劑量。然而正如熟悉此領(lǐng)域的人士所公知，提供給對象的精確劑量必須依病毒感染的程度、嚴重性、種類及對象個體體質(zhì)，例如一般的健康狀況、年齡、性別、體重及對藥物的忍受度等來決定。
其他實施態(tài)樣所有本說明書所描述的特征皆可以任何形式與其他方法合并使用。本說明書中所描述的特征可以具有相同、相等或相似目的的特征所取代。因此，除了明確強調(diào)的部分外，所有本說明書中描述的特征僅為眾多相等或相似特征中的一個實施例。
依據(jù)本說明書描述的內(nèi)容，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易依據(jù)本發(fā)明的基本特征，在不脫離本發(fā)明的精神與范圍內(nèi)，針對不同使用方法與情況作適當改變與修飾。因此，其他實施態(tài)樣也包含在申請專利范圍中。
權(quán)利要求
1.一種抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，其組成包含有效量的C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白、藍藻精或其混合物。
2.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述的混合物包括C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白或藍藻精的任二組成混合。
3.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述的混合物包括C-藻藍蛋白、異藻藍蛋白及藍藻精三種組成混合而成。
4.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，可進一步包含醫(yī)藥可接受的載體、佐藥、賦形劑或添加物。
5.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀存在。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括食品、飲品、藥品、試劑或營養(yǎng)補充品的形式提供。
7.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括經(jīng)由口服，洼射、吸入、皮下埋植或皮膚貼片方式施用于對象物。
8.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于抑制各類流行性感冒病毒的感染與復(fù)制。
9.如權(quán)利要求8所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于抑制A型流行性感冒病毒的感染與復(fù)制。
10.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療各類流行性感冒。
11.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防各類流行性感冒。
12.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療A型流行性感冒。
13.一種萃取權(quán)利要求1的醫(yī)藥組合物的方法，包括下列步驟(a)有機藍藻粉加入低張緩沖液，充分攪拌均勻；(b)室溫以下溫度靜置過夜；(c)分離機分離純化；(d)收集上層液測光譜，確定成分含量；以及(e)噴霧干燥；其特征在于利用0-18℃的低溫萃取以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中前述低溫萃取的步驟是于4℃下進行。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，包含有效量的C－藻藍蛋白(C－Phycocyanin；C－PC)、異藻藍蛋白(Allophycocyanin；APC)、藍藻精(Spirulina Growth Factor；SGF)或其混合物。本發(fā)明還提供一種萃取前述醫(yī)藥組合物的方法，其步驟系包括a.有機藍藻粉加入低張緩沖液，充分攪拌均勻；b.室溫以下溫度靜置過夜；c.分離機分離純化；d.收集上層液測光譜，確定成分含量；以及e.噴霧干燥；其特征在于利用低溫萃取以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。
文檔編號A61P31/00GK1861189SQ20051007123
公開日2006年11月15日 申請日期2005年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月13日
發(fā)明者闕壯群, 施信如 申請人:闕壯群